Questing ticks in Atlantic rainforest (Mata Atlantica) fragments in the municipality of Divino, Minas Gerais state, Brazil / Carrapatos na fase de vida livre em fragmentos de Mata Atlântica do município de Divino, Minas Gerais, Brasil

The tick species and tick-borne pathogens present in a group of questing ticks collected from forest fragments in a rural area in the municipality of Divino, Minas Gerais state, Brazil were evaluated. The collected ticks were divided into two groups those collected from around the edges of the fragments and those collected from the interior of the forest. In all the fragments, the ticks were collected using a dragging and flagging technique and by harvesting them from white fabric gaiters. The larvae, nymphs, and adults were all morphologically identified using specific taxonomic keys. The larvae were identified to the genus level. DNA was extracted from the ticks and tested for the presence of Rickettsia spp., Borrelia spp., Ehrlichia spp., Anaplasma spp., Babesia spp., and Theileria spp. using a conventional polymerase chain reaction (PCR). In total, 1,122 questing ticks (750 larvae, 367 nymphs, and five adults) and 18 larval clusters were evaluated. The main species found in the collected tick population were Amblyomma sculptum, A. auricularium, A. aureolatum, and A. pseudoconcolor, along with the larvae of Amblyomma spp. and Dermacentor spp. None of the tick samples gave a positive result when tested by PCR for the presence of DNA from Rickettsia spp., Borrelia spp., Ehrlichia spp., Anaplasma spp., Babesia spp., or Theileria spp.(AU)

Neste estudo avaliou-se a presença de espécies de carrapatos e a detecção de agentes patogênicos a eles associados. Os carrapatos de vida livre foram coletados em fragmentos florestais da área rural do Município de Divino, Minas Gerais, Brasil. Os carrapatos coletados foram divididos em dois grupos, aqueles que foram coletados na área da margem do fragmento (Borda) e os coletados no interior da floresta (Mata). Em todos os fragmentos, os carrapatos foram coletados de acordo com a técnica de arraste aéreo ou no chão e com o uso de perneiras e de flanela. Tanto, as larvas, quanto as ninfas e os adultos foram morfologicamente identificados usando chaves taxonômicas específicas. No caso das larvas, estas foram identificadas até o nível de gênero. Foi realizada extração de DNA dos carrapatos e o DNA extraído foi testado para a presença de Rickettsia spp., Borrelia spp., Ehrlichia spp., Anaplasma spp., Babesia spp., e Theileria spp. por meio de uma estratégia de reação em cadeia da polimerase convencional. No total, 1.122 carrapatos em fase de vida livre (750 larvas, 367 ninfas e 5 adultos) e 18 clusters de larvas foram usados no estudo. As principais espécies identificadas na população de carrapatos coletada foram: Amblyomma sculptum, Amblyomma auricularium, Amblyomma aureolatum e Amblyomma pseudoconcolor e larvas de Amblyomma spp. e Dermacentor spp. Como resultado da detecção de patógenos não foi possível achar DNA de nenhum dos agentes analisados, assim todas as amostras de DNA dos carrapatos testados foram negativas tanto para Rickettsia spp. quanto para Borrelia spp., Ehrlichia spp., Anaplasma spp., Babesia spp. e Theileria spp.(AU)

Hemoparasites in Didelphis aurita from Seropédica, Rio de Janeiro state, Brazil / Hemoparasitos em Didelphis aurita capturados em Seropédica, estado do Rio de Janeiro, Brasi

The present study aimed to use polymerase chain reaction (PCR) to detect species of the order Piroplasmida, such as Anaplasma spp., Borrelia spp., and Ehrlichia spp., circulating in the blood of Didelphis aurita in a peridomiciliary environment. Blood samples collected from big-eared opossum (Didelphis aurita) were screened for hemoparasites using PCR. The extracted DNA was tested for tick-borne hemoparasites. We were unable to detect hemoparasites, such as Ehrlichia spp., Babesia spp., Anaplasma spp., and Borrelia spp. Theileria DNA was detected in only one sample screened using PCR for an approximately 650-base pair fragment of the 18S rRNA gene. Sequencing and BLAST analysis of a subset of the PCR amplicons revealed 97% (535/553 bp) identity with Theileria bicornis. The detection of Theileria sp. in D. aurita challenges us to pursue more in-depth studies of marsupial piroplasmosids and to evaluate the morphological aspects of the findings and their possible involvement in zoonoses.

O objetivo do presente estudo foi utilizar a reação em cadeia da polimerase (PCR) para detectar espécies da ordem Piroplasmida, como Anaplasma spp., Borrelia spp. e Ehrlichia spp., circulando no sangue de Didelphis aurita em ambiente peridomiciliar. Amostras de sangue coletadas de gambá da orelha preta (Didelphis aurita) foram triadas para hemoparasitas por meio da PCR. O DNA extraído foi testado para alguns hemoparasitas transmitidos por carrapatos. Não conseguimos detectar hemoparasitos, como Ehrlichia spp., Babesia spp., Anaplasma spp. e Borrelia spp. O DNA de Theileria foi detectado apenas em uma amostra. Um fragmento de ~650 pares de bases do gene 18S rRNA foi sequenciado. e a análise pelo BLAST (um subconjunto de amplicons de PCR) revelou uma identidade de 97% (535/553 pb) com Theileria bicornis. A detecção de Theileria sp. in D. aurita nos desafia a aprofundar estudos sobre piroplasmosídeos marsupiais e avaliar os aspectos morfológicos dos achados e seu possível envolvimento com zoonoses.

First serological detection of Borrelia spp. in dogs in western Cuba / Primeira detecção sorológica de Borrelia spp. em cães na região oeste de Cuba

This study aimed to verify the presence of IgG antibodies against Borrelia burgdorferi sensu lato (s.l) in domestic dogs in western Cuba. Serum samples were analyzed by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), using crude antigens of a B. burgdorferi strain of North American origin. To verify the presence of Borrelia spp., deoxyribonucleic acid (DNA) extracted from individual blood samples was analyzed by nested-PCR, with markers targeted for amplification of portions of the flagellin B gene (flaB) present in Borrelia spirochetes. Ticks were also collected through inspection of the animals. Sera from 93 of 176 (52.84%) dogs were reactive to the indirect ELISA. Geographic prevalence varied from 54.35% (25/46) in Boyeros, 44.44% (20/45) in Cotorro, 66.67% (22/33) in Habana del Este, and 50% (26/52) in San José de las Lajas. There was no statistical difference between these tested variables. No blood samples analyzed were positive for the Borrelia flaB gene.(AU)

Este estudo teve como objetivo confirmar a presença de anticorpos IgG contra Borrelia burgdorferi sensu lato (s.l) em cães na região oeste de Cuba. As amostras de soro foram analisadas por ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) indireto, usando-se antígenos brutos de uma cepa de B. burgdorferi de origem norte-americana. Para confirmar a presença de Borrelia spp., o ácido desoxirribonucleico (DNA), extraído de amostras individuais de sangue, foi analisado por PCR, utilizando-se marcadores direcionados para a amplificação de porções do gene da flagelina B (flaB) presente nas espiroquetas de Borrelia. Os carrapatos também foram coletados através da inspeção dos animais. Os soros de 93 de 176 (52,84%) cães foram reativos ao ELISA indireto. A prevalência geográfica variou de 54,35% (25/46) em Boyeros, 44,44% (20/45) em Cotorro, 66,67% (22/33) em Habana del Este e 50% (26/52) em San José de las Lajas. Não houve diferença estatística entre essas variáveis testadas. Nenhuma amostra de sangue analisada foi positiva para o gene Borrelia flaB.(AU)

Rodents as potential reservoirs for Borrelia spp. in northern Chile / Roedores como potenciais reservatórios de Borrelia spp. no norte do Chile

Small mammals play an essential role in the transmission and maintenance cycles of Borrelia spirochetes. In Chile, recent studies have characterized novel Borrelia genotypes in ticks collected from small mammals, a fact that suggests these vertebrates are hosts for spirochetes from this genus. Considering this evidence, the goal of this study was to determine the presence of Borrelia DNA in small mammals inhabiting northern Chile. In winter of 2018, 58 small mammals were captured in five localities. Blood samples were collected from rodents and DNA was extracted to determine the presence of Borrelia DNA by PCR targeting the flaB gene and rrs–rrlA intergenic spacer (IGS). From three individuals (5%), belonging to two rodent species of Cricetidae family (Phyllotis xanthopygus and Oligoryzomys longicaudatus), we retrieved three flaB and two IGS Borrelia genotypes. Phylogenetic analyses performed with both Maximum Likelihood and Bayesian inferences showed that our sequences grouped with homologous genotypes from the relapsing fever and Lyme borreliosis groups. Our findings suggest that P. xanthopygus and O. longicaudatus rodents may play a role as reservoirs for borrelial spirochetes in Chile.(AU)

Pequenos mamíferos possuem um papel essencial na transmissão e manutenção de espiroquetas do gênero Borrelia. No Chile, estudos recentes têm descrito novos genótipos de Borrelia em carrapatos, parasitando pequenos mamíferos. Isso sugere que esses vertebrados podem atuar como possíveis reservatórios dessas espiroquetas. Considerando-se essa evidência, o objetivo deste estudo foi determinar a presença de DNA de Borrelia em pequenos mamíferos da região norte do Chile. Durante o inverno de 2018, 58 pequenos mamíferos foram capturados em cinco localidades. Amostras de sangue obtidas a partir dos indivíduos capturados foram submetidas à extração de DNA e ensaios de PCR, para a detecção de Borrelia spp. baseados no gene flaB e espaçador intergênico rrs–rrlA (IGS). A partir de três espécimes (5%) pertencentes a duas espécies de roedores da família Cricetidae (Phyllotis xanthopygus e Oligoryzomys longicaudatus) obtiveram-se três genótipos de Borrelia para o gene flaB e dois para IGS. Análises filogenéticas inferidas, usando-se os métodos Bayesiano e de Máxima Verossimilhança, indicaram que as sequências geradas neste estudo agrupam-se com borrelias do grupo da Febre Recorrente e Borreliose de Lyme. Os achados deste estudo sugerem que roedores P. xanthopygus e O. longicaudatus poderiam atuar como possíveis reservatórios para Borrelia spp. no Chile.(AU)

Negative results for Borrelia burdgorferi in cows and ticks from a border region between Brazil and Paraguay: a case report / Resultados negativos para Borrelia burgdorferi em vacas e carrapatos de região fronteiriça entre Brasil e Paraguai: relato de Caso

Lyme borreliosis is an infectious disease caused by bacteria of the genus Borrelia. In ruminants, most infections are asymptomatic, but the animals can present myalgia, lameness, laminitis, arthritis, synovitis, neurological symptoms, and also decreased production and abortion. The objective was to investigate Borrelia burgdorferi DNA in cows and cattle ticks on a small dairy farm in a border region. Blood samples and ticks were collected from Holstein cows with a history of decreased milk production and abortions. Borrelia burgdorferi DNA was extracted from blood samples using a commercial extraction kit, and from ticks using an alkaline hydrolysis solution for subsequent nested-PCR. Serum and tick samples did not present Borrelia burgdorferi DNA, and 100% of the ticks were identified as Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Although this study shows negative results it contributes to understanding the epidemiology of this etiological agent in Paraná and in Brazil, since there are few studies on bovine species. The negative results of this work demonstrate that the animals and ticks researched were not exposed to Borrelia burgdorferi, however, as it isa property located in a border region, the sanitary monitoring of the herd must be performed constantly since this is a region. vulnerable to the entry of potential threats to human, animal and environmental health from vectors and pathogenic microorganisms, given the large extension of the land border with the neighboring country and which also has different health status.

A borreliose de Lyme é uma doença infecciosa causada por bactérias do gênero Borrelia. Nos ruminantes, a infecção é assintomática, mas os animais podem apresentar mialgia, claudicação, laminite, artrite, sinovite, sintomas neurológicos e também diminuição da produção e do aborto. O objetivo foi investigar o DNA de Borrelia burgdorferi em vacas e carrapatos de uma pequena propriedade rural de gado leiteiro em uma região de fronteira. Amostras de sangue e carrapatos foram coletados de vacas da raça Holandesa com histórico de diminuição da produção de leite e abortos. O DNA de Borrelia burgdorferi foi extraído de amostras de sangue usando um kit de extração comercial e de carrapatos usando uma solução de hidrólise alcalina para subsequente nested-PCR. Amostras de soro e carrapato não apresentaram DNA de Borrelia burgdorferi, e 100% dos carrapatos foram identificados como Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Embora este estudo apresente resultados negativos o mesmo contribui para o entendimento da epidemiologia desse agente etiológico no Paraná e no Brasil, uma vez que existem poucos estudos sobre espécies bovinas. Os resultados negativos deste trabalho demonstram que os animais e carrapatos pesquisados não foram expostos a Borrelia burgdorferi, no entanto, por se tratar de uma propriedade localizada em uma região de fronteira, o monitoramento sanitário do rebanho deve ser realizado constantemente, pois é uma região vulnerável à entrada de ameaças potenciais à saúde humana, animal e ambiental por vetores e microrganismos patogênicos, dada a grande extensão da fronteira terrestre com o país vizinho e que também apresenta diferentes condições de saúde.

Negative results for Borrelia burdgorferi in cows and ticks from a border region between Brazil and Paraguay: a case report / Resultados negativos para Borrelia burgdorferi em vacas e carrapatos de região fronteiriça entre Brasil e Paraguai: relato de Caso

Lyme borreliosis is an infectious disease caused by bacteria of the genus Borrelia. In ruminants, most infections are asymptomatic, but the animals can present myalgia, lameness, laminitis, arthritis, synovitis, neurological symptoms, and also decreased production and abortion. The objective was to investigate Borrelia burgdorferi DNA in cows and cattle ticks on a small dairy farm in a border region. Blood samples and ticks were collected from Holstein cows with a history of decreased milk production and abortions. Borrelia burgdorferi DNA was extracted from blood samples using a commercial extraction kit, and from ticks using an alkaline hydrolysis solution for subsequent nested-PCR. Serum and tick samples did not present Borrelia burgdorferi DNA, and 100% of the ticks were identified as Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Although this study shows negative results it contributes to understanding the epidemiology of this etiological agent in Paraná and in Brazil, since there are few studies on bovine species. The negative results of this work demonstrate that the animals and ticks researched were not exposed to Borrelia burgdorferi, however, as it isa property located in a border region, the sanitary monitoring of the herd must be performed constantly since this is a region. vulnerable to the entry of potential threats to human, animal and environmental health from vectors and pathogenic microorganisms, given the large extension of the land border with the neighboring country and which also has different health status.(AU)

A borreliose de Lyme é uma doença infecciosa causada por bactérias do gênero Borrelia. Nos ruminantes, a infecção é assintomática, mas os animais podem apresentar mialgia, claudicação, laminite, artrite, sinovite, sintomas neurológicos e também diminuição da produção e do aborto. O objetivo foi investigar o DNA de Borrelia burgdorferi em vacas e carrapatos de uma pequena propriedade rural de gado leiteiro em uma região de fronteira. Amostras de sangue e carrapatos foram coletados de vacas da raça Holandesa com histórico de diminuição da produção de leite e abortos. O DNA de Borrelia burgdorferi foi extraído de amostras de sangue usando um kit de extração comercial e de carrapatos usando uma solução de hidrólise alcalina para subsequente nested-PCR. Amostras de soro e carrapato não apresentaram DNA de Borrelia burgdorferi, e 100% dos carrapatos foram identificados como Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Embora este estudo apresente resultados negativos o mesmo contribui para o entendimento da epidemiologia desse agente etiológico no Paraná e no Brasil, uma vez que existem poucos estudos sobre espécies bovinas. Os resultados negativos deste trabalho demonstram que os animais e carrapatos pesquisados não foram expostos a Borrelia burgdorferi, no entanto, por se tratar de uma propriedade localizada em uma região de fronteira, o monitoramento sanitário do rebanho deve ser realizado constantemente, pois é uma região vulnerável à entrada de ameaças potenciais à saúde humana, animal e ambiental por vetores e microrganismos patogênicos, dada a grande extensão da fronteira terrestre com o país vizinho e que também apresenta diferentes condições de saúde.(AU)

Soroprevalência de anticorpos homólogos antiBorrelia burgdorferi em equinos de uso militar no Brasil / Seroprevalence of homologous antiBorrelia burgdorferi antibodies in horses of military use in Brazil

A maioria das atividades de treinamento militar transcorre em ambiente de risco para aquisição de doenças de transmissãovetorial, incluindo importantes zoonoses e doenças emergentes/reemergentes. O objetivo deste estudo foi relatar a ocorrênciade anticorpos homólogos da classe IgG anti-Borrelia burgdorferi em equinos de uso militar no Brasil, assim como analisar osfatores de risco associados à soropositividade nos animais. Foram estudados dois plantéis de equinos, sendo um no municípiode Resende, estado do Rio de Janeiro, tendo sido encontrada prevalência de 29,9%, e outro no município de São Borja, estadodo Rio Grande do Sul, com prevalência de 44,7%, totalizando 474 animais e prevalência de 39,24%. Na análise dos fatores derisco associados, observou-se que a infestação por carrapatos constituiu-se no fator de risco para a soropositividade. A evidênciade circulação de Borrelia spp. com soroprevalência nos equinos reforça seu papel como sentinela, sendo fator de alerta parapotencial ocorrência de casos humanos. Os resultados obtidos reforçam a importância da vigilância epidemiológica dos carrapatosvetores e sua associação tanto com agentes infecciosos de risco para a saúde do efetivo militar humano, como nos equinos deuso militar nas regiões avaliadas. Isto também realça a necessidade da adoção de medidas de proteção coletivas e individuaisvisando mitigar o risco de doenças transmitidas por carrapatos em atividades militares.(AU)

Most military training activities take place at risk for the acquisition of vector-borne diseases, including important zoonosis andemerging/reemerging diseases This study aimed to analyze the seroprevalence of homologous antibodies antiBorrelia burgdorferiin horses for military use in Brazil, as well as to analyze the risk factors associated with seropositivity in animals. Two herds ofhorses for military use were studied, one in the city of Resende, state of Rio de Janeiro, having been found prevalence of 29.9%,and in São Borja, state of Rio Grande do Sul, with prevalence 44,7% to 474 animals and prevalence of 39,3%. In the analysis ofrisk factors, it was observed that the tick infestation constituted risk factors for seropositivity. Evidence of Borrelia spp. circulationwith seroprevalence in horses reinforces its role as sentinels, and alert factor for potential occurrence of human cases. Theseresults support the importance of epidemiological surveillance of vector ticks and its association with agents of risk to the health ofhorses for military use, in the evaluated areas. This also highlights the need to adopt collective and individual protection measuresto mitigate the risk of tick-borne diseases in military activities.(AU)

"Pesquisa de Borrelia spp. em cães do município de Belágua, Maranhão - Brasil"

O gênero Borrelia é composto por três grupos filogenéticos: Borrelia spp. do grupo Lyme, Borrelia spp. do grupo Febre Recorrente e Borrelia associada aos répteis. Borrelia spp. são espiroquetas transmitidas por artrópodes que usam uma variedade de hospedeiros vertebrados como reservatórios para completar total ou parcialmente seu ciclo de vida. Desta forma, enfermidades que tem como vetores os carrapatos devem ser pesquisados visando o conhecimento das zoonoses, como por exemplo a Febre Recorrente transmitida por carrapatos e a doença de Lyme. Estudar a frequência de animais positivos, como forma de exercer a vigilância epidemiológica, especialmente em casos de zoonoses, torna-se importante, visto que algumas espécies de animais domésticos como os cães podem atuar como sentinelas para a enfermidade. Assim, objetivou-se encotrar bactérias do gênero Borrelia em amostras de sangue de cães domésticos no município de Belágua pertencente à Mesorregião Leste Maranhense. Foi realizado um estudo transversal composto por cães domiciliados de ambos os sexos preferencialmente com idade a partir de 6 meses. Aplicou-se um questionário semiestruturado com os proprietários dos animais com o intuito de obter informações relacionados ao manejo e comportamento do animal. Coletou-se, em média, 5mL de sangue de 206 cães. Para pesquisa do DNA de Borrelia foi realizada nested-PCR. A primeira reação amplifica um fragmento com 665 pares de bases, e a segunda reação é a nested-PCR, que amplifica um fragmento com 354 pares de bases. Para todas as reações Borrelia anserina cepa PL foi usada como controle positivo. A população total desse estudo foi composta por cães domiciliados na zona urbana. Quanto ao sexo, o número de fêmeas foram 109 (52,9%) e machos 97 (47%). Verificou-se que não há diferenças significativas em relação à proporção macho e fêmea (p>0.05). Quanto à faixa etária, 56 (27,1%) da população canina apresentavam idade igual ou inferior a 12 meses. Animais com idade de um a três anos constituíam 72,8% (150) da população. Quanto as atividades de caça, 86,3% não desempenham essa atividade no município de Belágua. Não se observou amplificação de DNA de Borrelia em nenhuma das amostras de sangue coletadas, e assim entendendo que os cães não estavam ativamente infectados por Borrelia spp. no momento da coleta. Diante dos achados, uma sugestão para futuras pesquisas é necessidade de realizar nas amostras estudadas ensaios sorológicos para detectar anticorpos anti-proteína A imunogênica de Borrelia (BipA) e anti-glicerofosfodiéster fosfodiesterase (GlpQ) para conhecer se os cães na região foram expostos as espiroquetas, podendo ser útil na avaliação do papel do cão como sentinela para Febre Recorrente transmitida por carrapatos.

The genus Borrelia is composed of three phylogenetic groups: Borrelia spp. from the Lyme group, Borrelia spp. from the Recurrent Fever group and Borrelia associated with reptiles. Borrelia spp. are arthropod-borne spirochetes that use a variety of vertebrate hosts as reservoirs to fully or partially complete their life cycle. Thus, diseases that have ticks as vectors should be researched in order to understand zoonoses, such as relapsing fever transmitted by ticks and Lyme borreliosis. Studying the frequency of positive animals, as a way of exercising epidemiological surveillance, especially in cases of zoonoses, is important, since some species of domestic animals such as dogs can act as sentinels for the disease. Thus, the objective was to find bacteria of the genus Borrelia in blood samples from domestic dogs in the municipality of Belágua, belonging to the Mesoregion East Maranhense. A cross-sectional study was carried out with domesticated dogs of both sexes, preferably aged from 6 months. A semi-structured questionnaire was applied to the owners of the animals in order to obtain information related to the handling and behavior of the animal. On average, 5mL of blood were collected from 206 dogs. For Borrelia DNA research, nested-PCR was performed. The first reaction amplifies a fragment with 665 base pairs, and the second reaction is the nested-PCR, which amplifies a fragment with 354 base pairs. For all reactions Borrelia anserina strain PL was used as a positive control. The total population of this study consisted of dogs domiciled in the urban area. As for sex, the number of females was 109 (52.9%) and males 97 (47%). It was found that there are no significant differences regarding the male and female ratio (p>0.05). As for the age group, 56 (27.1%) of the canine population were aged less than or equal to 12 months. Animals aged one to three years constituted 72.8% (150) of the population. As for hunting activities, 86.3% do not carry out this activity in the municipality of Belágua. Borrelia DNA amplification was not detected in any of the collected blood samples, thus understanding that the dogs were not actively infected by Borrelia spp. at the time of collection. In view of the findings, a suggestion for future research is the need to perform serological tests in the studied samples to detect antibodies to Borrelia immunogenic protein A (BipA) and anti-glycerophosphodiester phosphodiesterase (GlpQ) to know if dogs in the region were exposed to relapsing fever group borreliae, which may be useful in evaluating the dog's role as a sentinel for tick-borne recurrent fever. Keywords: Borrelia spp. Dogs. tick-borne relapsing fever. Lyme borreliosis. Maranhão

INVESTIGAÇÃO DE Borrelia spp. E ALTERAÇÕES HEMATOLÓGICAS ASSOCIADAS EM GAMBÁS (Didelphis aurita e Didelphis albiventris) DE VIDA LIVRE NO ESTADO DO RIO JANEIRO

A Síndrome Baggio-Yoshinari (SBY) ou Borreliose brasileira é uma zooonose causada por um grande número de espécies do complexo Borrelia burgdorferi sensu lato. No Brasil, há relatos de soropositividade em seres humanos, animais domésticos e silvestres. Marsupiais do gênero Didelphis (Linnaeus, 1758) são mamíferos com ampla distribuição nas Américas que apresentam hábito peridomiciliar, o que aumenta o risco de introdução e dispersão de agentes patogênicos. Diante disso, o objetivo do estudo foi investigar ocorrência de Borrelia spp. em Didelphis aurita e D. albiventris de vida livre, que habitavam o bioma Mata Atlântica do Rio de Janeiro, e correlacionar os achados hematológicos com a infecção. Foram analisadas 60 amostras sanguíneas de gambás das espécies D. aurita e D. albiventris, independente de sexo, idade e estado clínico, resgatados pelo CRAS UNESA e atendidos na Universidade de Vassouras. A análise hematológica foi realizada por método manual e a análise molecular por nested-PCR, utilizando primers específicos. Das 60 amostras analisadas, 23,33% (14/60) foram positivas para Borrelia spp. Das sequências de DNA obtidas nesse estudo, 85,71% (12/14), apresentaram alta similaridade (94-99%) com as sequências de Borrelia burgodoferi (8/12 66,67%) e Borrelia sp. (4/12 33,33%) disponíveis no GenBank. Não houve diferença significativa nos parâmetros hematológicos entre animais positivos e negativos e não foi encontrado espiroquetas nos esfregaços sanguíneos avaliados. Conclui-se que marsupiais podem participar da epidemiologia da doença de Lyme no Brasil e a detecção de Borrelia spp. em D. aurita e D. albiventri confirma que a bactéria habita a Mata Atlântica do Estado do Rio de Janeiro, indicando a manutenção de um ciclo silvestre desse patógeno. Ainda, a ausência de alterações clínicas e hematológicas entre animais positivos, sugere a atuação desse marsupial como reservatório de Borrelia spp.

Baggio-Yoshinari Syndrome (BYS) or Brazilian Borreliosis is a zoonosis caused by Borrelia burgdorferi sensu lato complex. In Brazil, there are reports of seropositivity in humans, domestic and wild animals. Didelphis (Linnaeus, 1758) are mammals with wide distribution in the Americas that present peridomiciliary habit, which increases the risk of introduction and dispersion of pathogenic agents. Therefore, the aim of this study was to investigate the occurrence of Borrelia spp. in the free-living Didelphis aurita and D. albiventris, who inhabited Atlantic Forest biome of Rio de Janeiro, and to correlate hematological findings with infection. Sixty blood samples from D. aurita and D. albiventris opossums were analyzed, regardless of sex, age and clinical status, rescued by CRAS UNESA and attended at Universidade de Vassouras. Hematological analysis was performed by manual method and molecular analysis by nested-PCR, using specific primers. Of the 60 samples analyzed, 23.33% (14/60) were positive for Borrelia spp. Of the DNA sequences obtained in this study, 85.71% (12/14) showed high similarity (94-99%) with the sequences of Borrelia burgodoferi (8/12 66.67%) and Borrelia sp. (4/12 33.33%) available on GenBank. There was no significant difference in hematological parameters between positive and negative animals and no spirochetes were found in the blood smears evaluated. It is concluded that marsupials can participate in the epidemiology of Lyme disease in Brazil and the detection of Borrelia spp. in D. aurita and D. albiventris confirms that the bacterium inhabits Atlantic Forest of Rio de Janeiro State, indicating the maintenance of a wild cycle of this pathogen. Furthermore, the absence of clinical and hematological alterations among positive animals suggests the role of this marsupial as a reservoir of Borrelia spp.

Serological evidence of exposure to tick-borne agents in opossums (Didelphis spp) in the state of São Paulo, Brazil / Evidência sorológica de exposição a agentes transmitidos por carrapatos em gambás (Didelphis spp) no estado de São Paulo, Brasil

Abstract This work involved a serological investigation of tick-borne pathogens in opossums in eight municipalities of the state of São Paulo, Brazil. Serum samples from 109 opossums (91 Didelphis aurita and 18 Didelphis albiventris) were tested to detect antibodies to Rickettsia rickettsii (Taiaçu strain, 1:64 cut-off) and Ehrlichia canis (São Paulo strain, 1:40 cut-off), by indirect immunofluorescence assay (IFA); and against Borrelia burgdorferi (strain G39/40) by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The presence of antibodies to anti-R. rickettsii, anti-E. canis and anti-B. burgdorferi was detected in 32 (29.35%), 16 (14.67%) and 30 (27.52%) opossums, respectively. Opossum endpoint titers ranged from 64 to 1,024 for R. rickettsii, from 40 to 160 for E. canis, and from 400 to >51,200 for B. burgdorferi. These serological results suggest that opossums have been exposed to Rickettsia spp., Ehrlichia spp., and B. burgdorferi-related agents in the state of São Paulo. Our study underscores the need for further research about these agents in this study area, in view of the occurrence of Spotted Fever and Baggio-Yoshinari Syndrome disease in humans in the state of São Paulo, Brazil.(AU)

Resumo O presente estudo investigou evidência sorológica de agentes transmitidos por carrapatos em gambás em oito municípios do Estado de São Paulo, Brasil. Amostras de soro de 109 gambás (91 Didelphis aurita e 18 Didelphis albiventris) foram testadas para detecção de anticorpos contra Rickettsia rickettsii (cepa Taiaçu, ponto de corte 1:64) Ehrlichia canis (cepa São Paulo, ponto de corte 1:40), pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI); e contra Borrelia burgdorferi (cepa G39/40) pelo teste imunoenzimático (ELISA). A presença de anticorpos anti-R. rickettsii, anti-E. canis e anti-B. burgdorferi foi detectada em 32 (29,35%), 16 (14,67%) e 30 (27,52%) gambás, respectivamente. Os títulos finais variaram de 64 a 1.024 para R. rickettsii, de 40 a 160 para E. canis, e de 400 a >51.200 para B. burgdorferi. Esses resultados sugerem que os gambás foram expostos a agentes relacionados à Rickettsia spp., Ehrlichia spp., e B. burgdorferi no Estado de São Paulo. Neste estudo salienta a necessidade de novas pesquisas sobre esses agentes nessas áreas de trabalho, devido à ocorrência da Febre Maculosa e da Síndrome Baggio-Yoshinari em humanos no Estado de São Paulo, Brasil.(AU)

NOVOS REGISTROS GEOGRÁFICOS DO GÊNERO Ornithodoros (Acari: Argasidae) NO ESTADO DO CEARÁ, REGIÃO SEMIÁRIDA DO BRASIL

Carrapatos argasídeos são ectoparasitos hematófagos que estão associados a vertebrados voadores e terrestres, incluindo morcegos, aves, répteis, anfibios e, em alguns casos, o homem. Esses carrapatos possuem importância médico-veterinária, sendo importantes vetores de patógenos e causadores de toxicoses. A família Argasidae é composta por cinco gêneros: Antricola, Argas, Nothoaspis, Otobius e Ornithodoros, sendo este último aquele com maior número de espécies relatadas no Brasil. Os carrapatos do gênero Ornithodoros possuem importante papel na transmissão de microrganismos patogênicos, como Borrelia spp. Apesar disso, existem poucos estudos sobre a ocorrência desses ectoparasitos na região semiárida brasileira. Dessa forma, esse estudo teve como objetivo investigar a distribuição espacial e a diversidade de argasídeos em diferentes regiões do Ceará, estado localizado na região semiárida do Brasil. Os ectoparasitas foram coletados manualmente em sete municipios principalmente em residências, cavernas e ninhos de pássaros e roedores silvestres de seis regiões do estado: Vale do Jaguaribe (Potiretama), Região Norte (Sobral e Morrinhos), Costa Oeste-Vale do Curu (Jijoca de Jericoacoara), Serra da Ibiapaba (Ubajara), Sertão de Crateús (Crateús) e Sertão dos Inhamuns (Tauá). A identificação dos argasídeos baseou-se em análises morfológicas e moleculares. O gênero Ornithodoros foi o único encontrado: Ornithodoros cavernicolous (n = 176), Ornithodoros fonsecai (n = 81), Ornithodoros mimom (n = 12) e Ornithodoros rietcorreai (n = 4). A espécie O. cavernicolous foi a mais abundantemente encontrada. Embora poucos espécimes de O. rietcorreai tenham sido coletados, a presença dessa espécie deve ser destacada, pois estava parasitando humanos em ambiente domiciliar da zona urbana, evidenciando um potencial problema de saúde pública. As espécies O. fonsecai e O. mimom estavam associadas a cavernas colonizadas por morcegos e a ninhos de aves silvestres, respectivamente. Com relação à distribuição espacial dos argasídeos na região semiárida, novas regiões foram identificadas como ecótopos do gênero Ornithodoros. Além disso, identificamos uma possível nova espécie de carrapato pertencente a esse gênero, ampliando a fauna de argasídeos do Brasil. Novos estudos devem ser realizados para investigar os hospedeiros dos carrapatos argasídeos no bioma Caatinga e verificar seu potencial de transmissão de patógenos para animais domésticos, silvestres e humanos.

Argasid ticks are hematophagous ectoparasites that are associated with flying and terrestrial vertebrates, including bats, birds, reptiles, amphibians and, in some cases, humans. These ticks are of medical and veterinary importance, being important vectors of pathogens and causing toxicosis. The Argasidae family is composed of five genera: Antricola, Argas, Nothoaspis, Otobius and Ornithodoros, the latter being the one with the highest number of species reported in Brazil. Ticks of the genus Ornithodoros play an important role in the transmission of pathogenic microorganisms, such as Borrelia spp. Despite this, there are few studies on the occurrence of these ectoparasites in the Brazilian semiarid region. Therefore, this study aimed to investigate the spatial distribution and diversity of argasides in differents regions of Ceará, a state located in the semiarid region of Brazil. The ectoparasites were manually collected in residences, caves and nests of birds and wild rodents in six regions of the state: Vale do Jaguaribe (Potiretama), North Region (Sobral and Morrinhos), West Coast-Vale do Curu (Jijoca de Jericoacoara), Serra da Ibiapaba (Ubajara), Sertão de Crateús (Crateús) and Sertão dos Inhamuns (Tauá). The identification of argasides was based on morphological and molecular analyses. The genus Ornithodoros was the only one found: Ornithodoros cavernicolous (n = 176), Ornithodoros fonsecai (n = 81), Ornithodoros mimom (n = 12) and Ornithodoros rietcorreai (n = 4). The species O. cavernicolous was the most abundantly found. Although few specimens of O. rietcorreai have been collected, the presence of this species must be highlighted, as it was parasitizing humans in an urban household environment, evidencing a potential public health problem. The species O. fonsecai and O. mimom were associated with caves colonized by bats and wild bird nests, respectively. Regarding the spatial distribution of argasides in the semiarid region, new regions were identified as ecotopes of Ornithodoros genus. In addition, a new species belonging to this genus was possibly identified, expanding the argaside fauna of Brazil. New studies must be carried out to investigate the hosts of argasid ticks in the Caatinga biome and verify their potential for transmission of pathogens to domestic, wild and human animals.

Pesquisa dAS infecções naturais por Trypanosoma cruzi, Rickettsia spp. e Borrelia spp. em carnívoros silvestres (Carnivora: Canidae, Felidae e Procyonidae) na Amazônia brasileira

Trypanosoma cruzi, Rickettsia spp. e Borrelia spp. são agentes etiológicos de enfermidades importantes tanto para a saúde pública quanto para a saúde animal, no entanto são poucos os estudos sobre esses agentes em carnívoros silvestres no bioma Amazônia. Portanto, o presente estudo teve como objetivos detectar a infecção natural por Trypanosoma cruzi, Rickettsia spp. e Borrelia spp. em procionídeos, canídeos e felídeos silvestres no bioma Amazônia. Amostras biológicas foram coletadas de carnívoros silvestres de vida livre e cativos na Amazônia brasileira. Para pesquisa de T.cruzi, foi realizada Nested PCR e confeccionados esfregaços sanguíneos. Para pesquisa de DNA de Rickettsia spp. foi realizada Nested PCR, sendo alguns produtos sequenciados e submetidos à análise filogenética. Para pesquisa de DNA de Borrelia spp. foi realizada Nested PCR. DNA de T. cruzi e formas tripomastigotas foram detectados em 38,2% (42/110) e 6,4% (7/110) dos carnívoros silvestres, respectivamente. DNA de Rickettsia spp. foi detectado em 3,7% (4/109) dos animais e não houve detecção de DNA de Borrelia spp. nas amostras analisadas. Conclui-se que T. cruzi e R. felis infectam carnívoros silvestres de vida livre e cativos no bioma Amazônia.

Trypanosoma cruzi, Rickettsia spp. and Borrelia spp. are etiological agents of diseases important for both public and animal health, however there are few studies on these agents in wild carnivores in the Amazon biome. Therefore, the present study aimed to detect the natural infection Trypanosoma cruzi, Rickettsia spp. and Borrelia spp. in procionids, canids and wild felids in the Amazon biome. Biological samples were collected from free-living and captive wild carnivores in the Brazilian Amazon. For the detection of T.cruzi DNA, Nested PCR and blood smears were performed. For the detection of Rickettsia spp. Nested PCR was performed and some products sequenced and submitted to phylogenetic analysis. For the detection of Borrelia spp. Nested PCR was performed. T. cruzi DNA and trypomastigote forms were detected in 38.2% (42/110) and 6.4% (7/110) of wild carnivores, respectively. DNA of Rickettsia spp. was detected in 3.7% (4/109) of the animals and there was no detection of Borrelia spp. in the analyzed samples. It is concluded that T. cruzi and R. felis infect free-living and captive wild carnivores in the Amazon biome.

Pesquisa de carrapatos, pulgas e agentes transmitidos por vetores em áreas florestais da Amazônia Oriental e Mata Atlântica brasileiras

Embora a Floresta Amazônica e a Mata Atlântica estejam entre os mais importantes biomas do Brasil, são regiões que sofre as consequências das ações antrópicas. Isso contribui para o surgimento de doenças provocadas por patógenos, devido ao contato humano com área de circulação de patógenos e seus vetores. Esse estudo objetiva a detecção de hemoparasitos em áreas antropizadas da Floresta Amazônica e de regiões de Mata Atlântica. Foram realizadas coletas de carrapatos em um fragmento florestal no Pará e no Parque Nacional do Iguaçu no Paraná, bem como carrapatos e pulgas em animais selvagens no Rio de Janeiro. Para a obtenção desses ectoparasitos, foram empregadas as técnicas como arraste, perneiras de flanela e armadilha de CO2,e também pela inspeção em animais silvestres. Os ectoparasitos foram identificados usando chaves taxonômicas ou identificação molecular. Foi feita a extração de DNA para avaliar a presença de Rickettsia spp., Ehrlichia spp., Anaplasma spp., Borrelia spp. e Piroplasmida, através da PCR. Foram obtidos 1.508 carrapatos, identificados em 17 espécies: Amblyomma spp., A. cajennense s.s., A. calcaratum, A. geayi, A. goeldii, A. humerale, A. naponense, A. pacae, A. varium, A. sculptum, A. dubitatum, A. longirostre, A. brasiliense, A. ovale, A. incisum, A. parkeri, H. juxtakochi e A. coelebs. Foram obtidas 54 pulgas, todas identificadas como C. f. felis. Rickettsia bellii foi detectada em A. varium, A. goeldii e A. dubitatum; Rickettsia spp. em A. longirostre, A. ovale e A. pacae; Rickettsia felis e Rickettsia sp. apresentando alta similaridade com Candidatus R. senegalensis em C. f. felis; Anaplasma spp. em A. brasiliense e A. coelebs; Wolbachia sp. em C. f. felis; Borrelia sp. com alta similaridade a Borrelia turcica em A. calcaratum, A. coelebs e A. ovale; e Piroplasmida em A. sculptum, A. longirostre e A. coelebs. Todas as amostras testadas foram negativas para Ehrlichia spp. Esse trabalho trás o primeiro registro de R. bellii em A. varium e em A. goeldi; o primeiro registro de Rickettsia sp. com alta similaridade com C. R. senegalensis no Brasil; e aumenta o número de espécie de carrapatos do gênero Amblyomma infectado com Borrelia sp. próxima a B. turcica.

Although the Amazon Forest and the Atlantic Forest are among the most important biomes in Brazil, they are regions that suffer the consequences of human actions. This contributes to the emergence of diseases caused by pathogens, due to human contact with the area of circulation of pathogens and their vectors. This study aimed to detect hemoparasites in anthropized areas of the Amazon Forest and regions of the Atlantic Forest. Ticks were collected in a forest fragment in Pará and in the Iguaçu National Park in Paraná, as well as ticks and fleas in wild animals in the state of Rio de Janeiro. In order to obtain these ectoparasites, techniques such as dragging, flannel leggings and CO2 traps were used, as well as for inspection on wild animals. Ectoparasites were identified using taxonomic keys or molecular identification. DNA extraction was performed to assess the presence of Rickettsia spp., Ehrlichia spp., Anaplasma spp., Borrelia spp. and Piroplasmida through PCR. A total of 1,508 ticks were obtained, identified in 17 species: Amblyomma spp., A. cajennense s.s., A. calcaratum, A. geayi, A. goeldii, A. humerale, A. naponense, A. pacae, A. varium, A. sculptum, A. dubitatum, A. longirostre, A. brasiliense, A. ovale, A. incisum, A. parkeri, H. juxtakochi and A. coelebs. A total of 54 fleas were obtained, all identified as C. f. felis. Rickettsia bellii was detected in A. varium, A. goeldii and A. dubitatum; Rickettsia spp. in A. longirostre, A. ovale and A. pacae; Rickettsia felis and Rickettsia sp. showing high similarity with Candidatus R. senegalensis in C. f. felis; Anaplasma spp. em A. brasiliense e A. coelebs; Wolbachia sp. em C. f. felis; Borrelia sp. with high similarity to Borrelia turcica in A. calcaratum, A. coelebs and A. ovale; e Piroplasmida in A. sculptum, A. longirostre and A. coelebs. All samples tested were negative for Ehrlichia spp. This work brings the first record of R. bellii in A. varium and in A. goeldi; the first record of Rickettsia sp. with high similarity to C. R. senegalensis in Brazil; and increases the number of tick species of the genus Amblyomma infected with Borrelia sp. close to B. turcica.

EM CARRAPATOS E EQUINOS NATURALMENTE INFECTADOS NA MICRORREGIÃO DE RIO BRANCO, ESTADO DO ACRE

A borreliose em equinos é uma doença infecciosa causada por bactérias espiroquetas do gênero Borrelia spp. que são transmitidas pela picada de carrapatos. É uma zoonose que acomete animais domésticos e silvestres. No Brasil, os principais carrapatos envolvidos no ciclo epidemiológico da doença são do gênero Amblyomma sp. e Rhipicephalus sp. Esta pesquisa foi realizada com 108 equinos utilizados para trabalho no campo que vivem em fazendas localizadas na microrregião de Rio Branco-Acre, e teve como objetivo determinar a soropositividade destes animais para borreliose, bem como possíveis alterações hematológicas. O ELISA indireto demonstrou uma frequência de 7,4% (8/108) equinos soropositivos e o IDO variou de 37,10 a 290,95. As principais alterações hematológicas dos equinos soropositivos foram anemia, leucocitose e aumento do fibrinogênio sérico. A soropositividade de equinos e a detecção molecular de Borrelia sp. na microrregião de Rio Branco acusa a presença deste agente etiológico no estado.

Borreliosis in horses is an infectious disease caused by spirochete bacteria of the genus Borrelia spp. that are transmitted by tick bites. It is a zoonosis that affects domestic and wild animals. In Brazil, the main ticks involved in the epidemiological cycle of the disease are the genus Amblyomma sp and Rhipicephalus sp. This research was carried out with 108 horses used for work in the field that live on farms located in the micro region of Rio Branco-Acre, and aimed to determine the seropositivity of these animals for borreliosis, as well as possible hematological analyzes. The indirect ELISA showed a frequency of 7.4% (8/108) seropositive horses and the IDO ranged from 37.10 to 290.95. The main hematological changes in seropositive horses were anemia, leukocytosis and increased serum fibrinogen. The seropositivity of horses and the molecular detection of Borrelia sp. in the microregion of Rio Branco, the presence of this etiologic agent is present in the state.

PARASITES OF Didelphis aurita OPOSSUMS CAPTURED IN URBAN ENVIRONMENTS FROM SOUTHEASTERN BRAZIL

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Marsupials of the genus Didelphis consist of six known species with occurrence limited to the American continent. Five of those species belonging to two groups occur in South America: D. marsupialis and D. aurita of the D. marsupialis-group, and D. albiventris, D. pernigra, and D. imperfecta of the D. albiventris-group. A sixth species of this genus is the D. virginiana opossum, which up to date is only reported in North and Central America, from Canada to Costa Rica (Garder, 2008). In Brazil, four species of this genus are described: D. albiventris occurring primarily in the biom Cerrado, D. aurita in the Atlantic forest, and D. imperfecta that along with D. marsupialis inhabits in the Amazon region (Faria and Melo, 2017; Gardner, 2008). These opossums are well adapted to human dwellings, and are frequently found on the roof of houses, hollows of trees and other shelters within the cities and peripheral areas. They have twilight and nocturnal habits, and are considered synanthropic animals due to the adaptive efficiency developed over history (Jansen, 2002). Didelphis spp. co-inhabits with humans and domestic animals in the rural and urban environments, which makes these marsupials potential disseminators of zoonotic pathogens (Melo et al., 2016; Muller et al., 2005). Parasites found in Didelphis spp. are very diverse, consisting of arthropods, helminths and protozoa. Many of these parasites affect the health of their hosts causing disease or even death of the animal. Some of them, are also important for public health, since they may be vectors of zoonotic pathogens (i.e. ticks and fleas), or be the etiological agent of human diseases (i.e., gastrointestinal helminths and protozoa) (Castro et al., 2017; Muller et al., 2005). Among the arthropods found parasitizing these opossums, ticks and fleas are frequently detected, and due the capacity of these ectoparasites to transmit pathogens, they play important role on the dissemination of zoonotic agents among humans, wild and domestic animals (Linardi, 2006; Muller et al., 2005). Arthropod-borne pathogens that occur in Didelphis spp. and are transmitted by ticks and fleas, include Rickettsia spp., Borrelia spp., Ehrlichia spp. and Anaplasma spp., which are epidemiologically important

Acarofauna de répteis e anfíbios do Brasil: estudos morfológicos, moleculares e investigação de patógenos

O Brasil é um país megadiverso em herpetofauna, com 796 espécies de répteis e 1.080 de anfíbios. A grande urbanização e o desmatamento acentuado têm ocasionado o aumento de encontros entre a herpetofauna e a população. Esse fato faz com que algumas espécies, antes florestais, sejam atualmente consideradas sinantrópicas. Répteis e anfíbios são amplificadores e reservatórios conhecidos de vários patógenos, mas o papel destes animais no ciclo de doenças e o potencial vetorial dos ectoparasitas desses vertebrados são ainda pouco conhecidos. Répteis e anfíbios são parasitados por mais de 500 espécies de Acari, distribuídas em 61 gêneros de 13 famílias pertencentes às ordens Trombidiformes (Acariformes), Mesostigmata e Ixodida (Parasitiformes). No Brasil, a situação fragmentária dos registros de ácaros dessas ordens, principalmente nas regiões norte e nordeste, além da sua complexidade taxonômica e a escassês de informações sobre sua participação na epidemiologia de doenças, foram os principais motivos que levaram à proposição do presente estudo. Ácaros de répteis e anfíbios, que estão depositados na coleção acarológica de Instituto Butantan (IBSP) foram revisados e, em sua maioria, identificados. Também foram revisadas seis coleções em diferentes localidades (Argentina, Brasil, Estados Unidos, França e Bélgica). Igualmente, foram identificados os ácaros obtidos na recepção de animais do Instituto Butantan e nas coletas em campo de diferentes projetos. Parte do material foi preparada para estudos moleculares e inferência filogenética, usando genes ribossomais e mitrocondriais, e parte foi investigada para a presença de Borrelia spp., Coxiella spp., Hepatozoon spp. e Rickettsia sp. Da classe Acari, seis famílias, 12 gêneros e 32 espécies de ácaros Trombidiformes foram identificados, 23 delas ocorrendo no Brasil, incluindo seis novos registros de espécies para o país. O ácaro oribatídeo Archegozetes longisetosus Aoki, 1965 foi encontrado possivelmente parasitando um sapo, sendo esta uma nova associação parasito-hospedeiro. Foram identificadas seis famílias, 11 gêneros e 17 espécies de ácaros Mesostigmata, com 16 espécies ocorrendo no Brasil, sendo que uma nova espécie foi descrita (Chironobius n. sp.). Duas famílias, quatro gêneros e 19 espécies de carrapatos foram identificadas, 17 ocorrendo no Brasil, com uma espécie de carrapato argasídeo pertencente ao genero Ornithodoros (Alectorobius) sp. O número de Acari da herpetofauna brasileira, após este estudo, é de atualmente em 56 espécies. Muitos hospedeiros são novos registros, bem como algumas localidades são novos registros de distribuição. Um total de 4,515 répteis e anfíbios foram examinados, dos quais 170 estavam infestados com ácaros e carrapatos. A avaliação de esfregaços de sangue permitiu correlacionar a presença de hemoparasitas com a prevalência ectoparasitária, e as lâminas histológicas de anfíbios ajudaram a caracterizar a lesão típica produzida pelos ácaros intradérmicos do gênero Hannemania. Foi proposta uma filogenia utilizando-se o gene 18S V4 rRNA para Acari, que inferiu a polifilia de Acari e a monofilia de Acariformes e Parasitiformes. Espécies do gênero Hepatozoon foram detectadas em carrapatos, ácaros e sangue de hospedeiros, e as sequências geradas foram similares à três espécies depositadas no GenBank (Hepatozoon sp. BT-2016, Hepatozoon sp. CCS-2010 e Hepatozoon ayorgbor) com hospedeiros e distribuição geográfica delimitadas. Três espécies de Rickettsia foram identificadas para o gene gltA, e quatro para o gene OmpA do Grupo da Febre Maculosa. Nenhuma das amostras de tecido dos hospedeiros testadas apresentou resultados positivos. Rickettsia bellii em Amblyomma sculptum é novo registro, e a presença no ácaro Eutrombicula alfreddugesi é um resultado inédito. Rickettsia rhipicephali foi detectada pela primeira vez em ácaros Mesostigmata e Rickettsia amblyommatis foi detectada pela primeira vez em Amblyomma rotundatum. A detecção de Rickettsia aeschlimannii em um ácaro macronissídeo (Ophyonissus natricis) é inédita, assim como Rickettsia rickettsii em ácaros Pterygosomatidae é também um novo relato. A detecção de espécies de Rickettsia do Grupo da Febre Maculosa em ácaros de répteis (Mesostigmata e Pterygosomatidae) destaca a importância de uma avaliação integrativa de ectoparasitos de répteis, principalmente devido à fragmentação do habitat, que, consequentemente, predispõe a um maior número de ocorrências entre humanos, herpetofauna e acarofauna.

Brazil is a megadiverse country in herpetofauna, with 796 species of reptiles, and 1,080 species of amphibians. The high urbanization and the marked deforestation have increased the number of human-herpetofauna encounters. This fact has made some species to be considered currently as synanthropic. Reptiles and amphibians are known amplifiers and reservoirs of several pathogens, yet the role of these animals in the cycle of diseases and the vector potential of the ectoparasitic mites of these vertebrates are poorly known. These hosts are parasitized by more than 500 species of mites, distributed in 61 genera of 13 families that belong to the Trombidiformes (Acariformes), Mesostigmata and Ixodida (Parasitiformes) orders. In the Brazil context, the fragmentary records of species of mites of these orders, especially in the north and northeast regions, their taxonomic complexity and the scarce information regarding their role in the epidemiology of diseases, where the main reasons to pursue the proposition of the present study. Mites of reptiles and amphibians deposited in the Acari collection of the Instituto Butantan (IBSP) were reviewed and identified. Six other collections in various places where also visited (Argentina, Brazil, United States, France and Belgium). Also, mites collected at the animal reception site of the Instituto Butantan, and from field collections were also identified. Part of this material was prepared for molecular studies and phylogenetic inference using ribosomal and mitochondrial genes, and another part of the material was used to assess the presence of Borrelia spp., Coxiella spp., Hepatozoon spp. and Rickettsia spp. Of the subclass Acari, Six families, 12 genera and 32 species of Trombidiformes mites were identified, 23 occurring in Brazil, increasing six new species to the Brazilian territory. The Oribatid mite A. longisetosus was identified apparently parasitizing a frog, which is a new host-parasite association. Six families, 11 genera and 17 species of Mesostigmata mites were identified, wit 16 species occurring in Brazil, with one new species described (Chironobius n. sp.). Two families, four genera and 19 species of ticks were identified, 17 occurring in Brazil, with one new species of argasid tick registered in Brazil, with an argasid tick of the genus Ornithodoros (Alectorobius). The total number of Acari parasites of herpetofauna in Brazil after this study is 56 species. Many hosts are new records, as well as, some of the localities are new records of distribution. 4,515 reptiles and amphibians were examined, of which 170 were infested with mites and ticks. Assessing blood smears allowed to correlate hemoparasitic presence with ectoparasitic prevalence, and the histologic slides of amphibians helped better characterize the typical lesion produced by intradermic mites of the genus Hannemania. A phylogeny inference using the 18S V4 rRNA gene for Acari was proposed that inferred a polyphyletic Acari, with different bootstrap values for the monophyly of Acariformes and Parasitiformes. Hepatozoon was detected in mite ticks and hosts blood. The sequences generated matched three main species with host and geographical delimitations (Hepatozoon sp. BT-2016, Hepatozoon sp. CCS-2010 and Hepatozoon ayorgbor). Three species were identified for the gltA gene for Rickettsia, and four species were identified for the OmpA gene for the Spotted Fever Group Rickettsia from ixodid ticks, trombiculid, pterygosomatid, and Mesostigmata mites. None of the hosts tissue samples tested yielded positive. Rickettsia bellii in A. sculptum is a new report and the presence in a Eutrombicula alfreddugesi mite, is unprecedented. Rhickettisa rhipicephali was detected for the first time on Mesostigmata mites. Rickettisa amblyommatis was detected for the first time in A. rotundatum. The detection of R. aeschlimannii from a macronyssid mite (O. natricis), is unprecedented, and R. rickettsii in Pterygosomatidae mites is also a new report. The detection of SFG Rickettsia species on reptile mites (Mesostigmata and Pterygosomatidae) highlights the importance of an integrative assessment of ectoparasites of reptiles mainly due to the fragmentation of the habitat, which, consequently, prompts to a greater number of occurrences between humans, herpetofauna and acarofauna.

Zoonoses in humans from small rural properties in Jataizinho, Parana, Brazil

The aim of this study was to conduct a serological survey for Lyme diseases, brucellosis, leptospirosis and toxoplasmosis and identify the risk variables related to these zoonoses in humans living in the rural area of Jataizinho, state of Parana, Brazil. A total of 63 rural properties were surveyed. Additionally, 207 serum samples collected from these rural area inhabitants were tested for indirect immunofluorescence (IFI) and western blots (WB) were performed to detect Borrelia burgdorferi (sensu lato); a tamponated acidified antigen test (AAT) and 2-mercaptoethanol (2-ME) were used to detect antibodies of Brucella abortus; the microscopic agglutination test (MAT) was carried out to detect antibodies anti-Leptospira spp. and IFI was used to find antibodies of Toxoplasma gondii. Two of the samples (0.96%) were reactive for Lyme borreliosis, three (1.4%) for brucellosis, 25 (12.1%) for leptospirosis and 143 (69.1%) for toxoplasmosis. Although the town of Jataizinho has a human development index (IDH) that was considered to be average (0.733) in the state of Parana, the low social, economic and cultural conditions of the population from small rural properties have resulted in lack of basic information on animal health and direct or indirect contact with the various species of domestic animals, wildlife and ticks have probably contributed to the prevalence levels found. These results show the need for additional regional studies in order to determine the epidemiological characteristics of these diseases as well as their respective vectors and reservoirs so that effective prophylaxis can be administered in the human population.(AU)

Detection of anti-Borrelia burgdorferi antibodies in buffaloes (Bubalus bubalis) in the state of Pará, Brazil / Detecção de anticorpos anti-Borrelia burgdorferi em búfalos (Bubalus bubalis) no estado do Pará, Brasil

This study aimed to investigate the frequency of homologous antibodies of IgG class against Borrelia burgdorferi in buffaloes in the state of Pará, Brazil. Blood serum samples from 491 buffaloes were analyzed by means of the indirect ELISA test, using crude antigen produced from a cultivar of the North American strain G39/40 of B. burgdorferi. There were 412 positive samples (83.91%), and there was no statistically significant difference in the proportions of positive animals between the 81.69% (232/284) originating from Marajó Island and the 86.96% (180/207) from the continental area of the state of Pará. In all the municipalities studied, the frequency of positive findings of antibodies against B. burgdorferi among the animals ranged from 63.6% to 92.9%. The high numbers of seropositive animals can be explained by the frequent presence of the tick Rhipicephalus (Boophilus)microplus, and by the possible existence of spirochetes of the genus Borrelia infecting buffaloes in the region studied, although specific studies are needed to confirm this relationship. These factors suggest that a cross-reaction exists between the North American strain G39/40 of B. burgdorferi, which is used as an antigenic substrate, and the species of Borrelia spp. that possibly infects buffaloes in the state of Pará.

Este estudo teve como objetivo investigar a frequência de anticorpos homólogos da classe IgG contra Borrelia burgdorferi em búfalos do estado do Pará. Amostras de soro de 491 búfalos foram analisadas por meio do teste ELISA indireto, utilizando antígeno bruto produzido a partir do cultivo da cepa norte americana G39/40 de B. burgdorferi. Foram encontrados 412 soros positivos (83,91%), não havendo diferença estatística significativa entre os 81,69% (232/284) animais positivos provenientes da Ilha de Marajó e os 86,96% (180/207) da base continental do estado do Pará. Em todos os municípios estudados os animais apresentaram frequência de anticorpos contra B. burgdorferi, com positividade variando de 63,6% a 92,9%. O alto número de soropositivos pode ser explicado pela frequente presença do carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus e pela possível existência de espiroquetas do gênero Borrelia infectando búfalo na região estudada, embora novos estudos sejam necessários para a confirmação desta relação. Estes fatos sugerem reação cruzada entre a cepa americana G39/40 de B. burgdorferi utilizada como substrato antigênico e a espécie de Borrelia spp. que possivelmente infecta bubalinos no estado do Pará.

Detection of anti-Borrelia burgdorferi antibodies in buffaloes (Bubalus bubalis) in the state of Pará, Brazil / Detecção de anticorpos anti-Borrelia burgdorferi em búfalos (Bubalus bubalis) no estado do Pará, Brasil

This study aimed to investigate the frequency of homologous antibodies of IgG class against Borrelia burgdorferi in buffaloes in the state of Pará, Brazil. Blood serum samples from 491 buffaloes were analyzed by means of the indirect ELISA test, using crude antigen produced from a cultivar of the North American strain G39/40 of B. burgdorferi. There were 412 positive samples (83.91%), and there was no statistically significant difference in the proportions of positive animals between the 81.69% (232/284) originating from Marajó Island and the 86.96% (180/207) from the continental area of the state of Pará. In all the municipalities studied, the frequency of positive findings of antibodies against B. burgdorferi among the animals ranged from 63.6% to 92.9%. The high numbers of seropositive animals can be explained by the frequent presence of the tick Rhipicephalus (Boophilus)microplus, and by the possible existence of spirochetes of the genus Borrelia infecting buffaloes in the region studied, although specific studies are needed to confirm this relationship. These factors suggest that a cross-reaction exists between the North American strain G39/40 of B. burgdorferi, which is used as an antigenic substrate, and the species of Borrelia spp. that possibly infects buffaloes in the state of Pará.

Este estudo teve como objetivo investigar a frequência de anticorpos homólogos da classe IgG contra Borrelia burgdorferi em búfalos do estado do Pará. Amostras de soro de 491 búfalos foram analisadas por meio do teste ELISA indireto, utilizando antígeno bruto produzido a partir do cultivo da cepa norte americana G39/40 de B. burgdorferi. Foram encontrados 412 soros positivos (83,91%), não havendo diferença estatística significativa entre os 81,69% (232/284) animais positivos provenientes da Ilha de Marajó e os 86,96% (180/207) da base continental do estado do Pará. Em todos os municípios estudados os animais apresentaram frequência de anticorpos contra B. burgdorferi, com positividade variando de 63,6% a 92,9%. O alto número de soropositivos pode ser explicado pela frequente presença do carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus e pela possível existência de espiroquetas do gênero Borrelia infectando búfalo na região estudada, embora novos estudos sejam necessários para a confirmação desta relação. Estes fatos sugerem reação cruzada entre a cepa americana G39/40 de B. burgdorferi utilizada como substrato antigênico e a espécie de Borrelia spp. que possivelmente infecta bubalinos no estado do Pará.

Primary embryonic cells of Rhipicephalus microplus and Amblyomma cajennense ticks as a substrate for the development of Borrelia burgdorferi (strain G39/40)

Borrelia burgdorferi, the agent of Lyme borreliosis, is a spirochetes transmitted by ticks to humans and animals. Its cultivation in vitro in tick cells allows studies of its biology and provides methodology for future research in Brazil, and for the isolation of Borrelia spp. We examined in vitro the characteristics of embryonic cells of Rhipicephalus microplus and Amblyomma cajennense in cell culture and investigated the suitability of embryonic cells as a substrate for cultivation of B. burgdorferi. Subcultures were prepared from primary cultures of embrionary cells of R. microplus and A. cajennense maintained in Leibovitz's (L-15) complete medium at 28 ºC and 31 ºC, respectively. When a monolayer had formed, the L-15 was replaced with Barbour-Stoener-Kelly medium for experiments to infect cell cultures with B. burgdorferi. After 72 hours of cultivation, the spirochetes were counted using an inverted phase contrast microscope and dark-field illumination (400×). Survival, multiplication and the adherence of B. burgdorferi for embryonic cells of R. microplus and A. cajennense were observed. B. burgdorferi cultured with embryonic cells of R. microplus grew on average to a density (final count) of 2.4 × 10(7) spirochetes/mL, whereas in cell-free culture, an average of 2.5 × 10(7) spirochetes/mL were counted. When cultivated with A. cajennense cells, the final count of spirochetes was on average 1.7 × 10(7) spirochetes/mL, while spirochetes cultured under cell-free conditions replicated on average of 2.2 × 10(7) spirochetes/mL. Similar results were observed in the final count of Spirochetes cultivated in cells of R. microplus and A. cajennense, when compared with cell-free control. These results demonstrated that cells of R. microplus and A. cajennense have the potential to be used as growth substrate for B. burgdorferi in the study of its interaction with host cells.

Borrelia burgodorferi, o agente da borreliose de Lyme, é uma espiroqueta transmitida por carrapatos aos seres humanos e animais. Seu cultivo in vitro em células de carrapato permite estudos de sua biologia e propicia metodologia para futuras pesquisas no Brasil, para o isolamento de Borrelia spp. Nós examinamos in vitro as características de células embrionárias de Rhipicephalus microplus e Amblyomma cajennense, e a viabilidade de utilização dessas células embrionárias como um substrato para cultivo de B.burgdorferi. Subculturas foram preparadas a partir de culturas primárias de células embrionárias de R. microplus e A. cajennense mantidas em meio Leibovitz's (L-15) completo, a 28 ºC e 31 ºC, respectivamente. Com a formação da monocamada, o L-15 foi substituído pelo meio Barbour-Stoener-Kelly, para o experimento de infecção com B. burgdorferi nas culturas de células. Após 72 horas de cultivo, realizou-se a contagem das espiroquetas, as quais foram avaliadas sob microscópio invertido de contraste de fase e campo escuro (400×). Verificou-se a sobrevivência, a multiplicação e a aderência de B. burgdorferi em células embrionárias de R. microplus e A. cajennense. No estudo da cultura de B. burgdorferi com células embrionárias de R. microplus, observou-se, na contagem final, média de 2,4 × 10(7) espiroquetas/mL; no cultivo livre de células, verificou-se média de 2,5 × 10(7) espiroquetas/mL. No cultivo de A. cajennense, a contagem final de espiroquetas foi, em média, 1,7 × 10(7) espiroquetas/mL, enquanto que, para as cultivadas livres de células, se verificou média de 2,2 × 10(7) espiroquetas/mL. Resultado semelhante foi observado na contagem final de espiroquetas cultivadas em células de R. microplus e A. cajennense, quando comparado com o controle livre de células. Estes resultados demonstraram que células de R. microplus e A. cajennense têm o potencial para serem utilizadas como substrato para o crescimento de B. burgdorferi no estudo da interação com as células do hospedeiro.