Resumo
This study aimed to evaluate the anthelmintic and ultrastructural effects of Calotropis procera latex on Haemonchus contortus. C. procera latex was twice centrifuged at 10,000×g and dialyzed to obtain a fraction rich in proteins, named LP (latex protein), and at 3,000 rpm to obtain a fraction rich in secondary metabolites, named LNP (latex non-protein). Specimens of H. contortus exposed to LNP, LP and PBS in the Adult Worm Motility Test (AWMT) were submitted to scanning (SEM) and transmission (TEM) electron microscopy to verify changes in their ultrastructure. Phytochemical tests in the LNP indicated the presence of phenols, steroids, alkaloids and cardenolides. High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) characterized the presence of the compounds gallic acid and quercetin in the LNP. The protein content in the LP was 43.1 ± 1.1 mg/mL and 7.7 ± 0.3 mg/mL in LNP. In AWMT, LNP and LP inhibited the motility of 100% of the nematodes, with LNP being more effective than LP and ivermectin more effective than both (p <0.05). Cuticle changes were observed by SEM and TEM in nematodes treated with LP and LNP. Calotropis procera latex has anthelmintic effects against H. contortus, causing damage to its cuticle and other alterations in its ultrastructure.(AU)
Este estudo objetivou avaliar os efeitos anti-helmínticos e ultraestruturais do látex de Calotropis procera sobre Haemonchus contortus. Látex de C. procera foi centrifugado duas vezes à a 10.000xg e dialisado para obter uma fração rica em proteínas, denominada proteínas do látex (LP). E centrifugado e centrifugado a 3.000 rpm, para obter uma fração rica em metabólitos secundários, denominada LNP (látex não proteico). Espécimes de H. contortus expostos à LNP, LP e PBS no Teste de Motilidade dos Nematoides Adultos (TMNA) foram submetidos a microscopia eletrônica de varredura (MEV) e de transmissão (MET), para verificar alterações em sua ultraestrutura. Testes fitoquímicos em LNP indicaram a presença de fenóis, esteroides, alcaloides e cardenolídeos. A presença dos compostos ácido gálico e quercetina em LNP foi caracterizada por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). O conteúdo de proteínas em LP foi de 43,1 ± 1,1 mg/mL e de 7,7 ± 0,3 mg/mL em LNP. No TMNA, LNP e LP inibiram a motilidade de 100% dos nematoides, sendo LNP mais eficaz que LP, e a ivermectina mais eficaz que ambos (p <0,05). Alterações na cutícula de nematoides tratados com LP e LNP foram observadas por MEV e MET. O látex de C. procera apresenta efeito anti-helmíntico sobre H. contortus, causando danos à sua cutícula e outras alterações em sua ultraestrutura.(AU)
Assuntos
Animais , Calotropis/química , Haemonchus/química , Haemonchus/parasitologia , Anti-HelmínticosResumo
Nerium oleander is an ornamental cardiotoxic plant found in tropical and subtropical areas of the World. Its toxicity is related to the content of cardioactive glycosides, mainly oleandrin, found throughout the plant. The present study aimed to describe a new and improved method for oleandrin detection in tissue samples. The determination of oleandrin was made after extraction with a modified QuEChERS technique and measurement by UFLC-MS/MS. A total of 36 guinea pigs (Cavia porcellus) were distributed into 3 groups (n=12): control group that received only water orally (CON), and two treated groups that received hydroalcoholic oleander extract at doses of 150mg.kg-1 (OLE 150) and 300mg.kg-1 (OLE 300) in single oral dose. After three hours, fragments of heart, kidneys, liver and brain were collected for determination of oleandrin levels. The extraction and chromatographic procedures were effective for oleandrin detection and quantification in tissues, with retention time of 1.2 min and detection limit of 0.001μg g-1. The chromatographic analysis of treated guinea pigs indicated that oleandrin is distributed equally among the analyzed tissues. The developed methodology is a reliable, effective and rapid form of diagnosis of N. oleander poisoning based on necropsy tissue samples.(AU)
Nerium oleander é uma planta cardiotóxica ornamental encontrada em áreas tropicais e subtropicais do mundo. Sua toxicidade é relacionada á presença de glicosídeos cardioativos, principalmente a oleandrina, encontrada em toda a planta. O presente estudo objetiva descrever um novo e aprimorado método para detecção da oleandrina em amostras de tecido. A determinação da oleandrina foi feita após extração utilizando técnica modificada de QuEChERS e mensuração por UFLC-MS/MS. Um total de 36 cobaios (Cavia porcellus) foi distribuído em três grupos (n=12): grupo controle que recebeu apenas água por via oral (CON), e dois grupos tratados que receberam extrato hidroalcóolico de oleander nas doses de 150mg.kg-1 (OLE 150) e 300mg.kg-1 (OLE 300) em uma única dose oral. Após três horas, fragmentos do coração, rins, fígado e cérebro foram coletados para determinação dos níveis de oleandrina. A extração e procedimentos cromatográficos foram eficientes na detecção e quantificação da oleandrina nos tecidos, com tempo de retenção de 1,2min e limite de detecção de 0,001μg g-1. A análise cromatográfica dos animais tratados indicou que a oleandrina é distribuída de forma equalizada pelos tecidos analisados. A metodologia desenvolvida representa uma forma de diagnóstica segura, efetiva e rápida da intoxicação por N. oleander a partir de amostras de tecidos de necropsia.(AU)
Assuntos
Cromatografia Líquida/instrumentação , Cromatografia Líquida , Nerium/toxicidade , Cardenolídeos/análiseResumo
Nerium oleander is an ornamental cardiotoxic plant found in tropical and subtropical areas of the World. Its toxicity is related to the content of cardioactive glycosides, mainly oleandrin, found throughout the plant. The present study aimed to describe a new and improved method for oleandrin detection in tissue samples. The determination of oleandrin was made after extraction with a modified QuEChERS technique and measurement by UFLC-MS/MS. A total of 36 guinea pigs (Cavia porcellus) were distributed into 3 groups (n=12): control group that received only water orally (CON), and two treated groups that received hydroalcoholic oleander extract at doses of 150mg.kg-1 (OLE 150) and 300mg.kg-1 (OLE 300) in single oral dose. After three hours, fragments of heart, kidneys, liver and brain were collected for determination of oleandrin levels. The extraction and chromatographic procedures were effective for oleandrin detection and quantification in tissues, with retention time of 1.2 min and detection limit of 0.001μg g-1. The chromatographic analysis of treated guinea pigs indicated that oleandrin is distributed equally among the analyzed tissues. The developed methodology is a reliable, effective and rapid form of diagnosis of N. oleander poisoning based on necropsy tissue samples.(AU)
Nerium oleander é uma planta cardiotóxica ornamental encontrada em áreas tropicais e subtropicais do mundo. Sua toxicidade é relacionada á presença de glicosídeos cardioativos, principalmente a oleandrina, encontrada em toda a planta. O presente estudo objetiva descrever um novo e aprimorado método para detecção da oleandrina em amostras de tecido. A determinação da oleandrina foi feita após extração utilizando técnica modificada de QuEChERS e mensuração por UFLC-MS/MS. Um total de 36 cobaios (Cavia porcellus) foi distribuído em três grupos (n=12): grupo controle que recebeu apenas água por via oral (CON), e dois grupos tratados que receberam extrato hidroalcóolico de oleander nas doses de 150mg.kg-1 (OLE 150) e 300mg.kg-1 (OLE 300) em uma única dose oral. Após três horas, fragmentos do coração, rins, fígado e cérebro foram coletados para determinação dos níveis de oleandrina. A extração e procedimentos cromatográficos foram eficientes na detecção e quantificação da oleandrina nos tecidos, com tempo de retenção de 1,2min e limite de detecção de 0,001μg g-1. A análise cromatográfica dos animais tratados indicou que a oleandrina é distribuída de forma equalizada pelos tecidos analisados. A metodologia desenvolvida representa uma forma de diagnóstica segura, efetiva e rápida da intoxicação por N. oleander a partir de amostras de tecidos de necropsia.(AU)
Assuntos
Cromatografia Líquida/instrumentação , Cromatografia Líquida/estatística & dados numéricos , Nerium/toxicidade , Cardenolídeos/análiseResumo
ABSTRACT: Nerium oleander is an ornamental cardiotoxic plant found in tropical and subtropical areas of the World. Its toxicity is related to the content of cardioactive glycosides, mainly oleandrin, found throughout the plant. The present study aimed to describe a new and improved method for oleandrin detection in tissue samples. The determination of oleandrin was made after extraction with a modified QuEChERS technique and measurement by UFLC-MS/MS. A total of 36 guinea pigs (Cavia porcellus) were distributed into 3 groups (n=12): control group that received only water orally (CON), and two treated groups that received hydroalcoholic oleander extract at doses of 150mg.kg-1 (OLE 150) and 300mg.kg-1 (OLE 300) in single oral dose. After three hours, fragments of heart, kidneys, liver and brain were collected for determination of oleandrin levels. The extraction and chromatographic procedures were effective for oleandrin detection and quantification in tissues, with retention time of 1.2 min and detection limit of 0.001g g-1. The chromatographic analysis of treated guinea pigs indicated that oleandrin is distributed equally among the analyzed tissues. The developed methodology is a reliable, effective and rapid form of diagnosis of N. oleander poisoning based on necropsy tissue samples.
RESUMO: Nerium oleander é uma planta cardiotóxica ornamental encontrada em áreas tropicais e subtropicais do mundo. Sua toxicidade é relacionada á presença de glicosídeos cardioativos, principalmente a oleandrina, encontrada em toda a planta. O presente estudo objetiva descrever um novo e aprimorado método para detecção da oleandrina em amostras de tecido. A determinação da oleandrina foi feita após extração utilizando técnica modificada de QuEChERS e mensuração por UFLC-MS/MS. Um total de 36 cobaios (Cavia porcellus) foi distribuído em três grupos (n=12): grupo controle que recebeu apenas água por via oral (CON), e dois grupos tratados que receberam extrato hidroalcóolico de oleander nas doses de 150mg.kg-1 (OLE 150) e 300mg.kg-1 (OLE 300) em uma única dose oral. Após três horas, fragmentos do coração, rins, fígado e cérebro foram coletados para determinação dos níveis de oleandrina. A extração e procedimentos cromatográficos foram eficientes na detecção e quantificação da oleandrina nos tecidos, com tempo de retenção de 1,2min e limite de detecção de 0,001g g-1. A análise cromatográfica dos animais tratados indicou que a oleandrina é distribuída de forma equalizada pelos tecidos analisados. A metodologia desenvolvida representa uma forma de diagnóstica segura, efetiva e rápida da intoxicação por N. oleander a partir de amostras de tecidos de necropsia.
Resumo
A insuficiência cardíaca congestiva atinge milhões de pessoas em todo o mundo e também é uma realidade na medicina veterinária de pequenos animais. Novas modalidades terapêuticas são importantes para melhorar a qualidade de vida dos portadores dessa síndrome. Para avaliar o potencial terapêutico dos glicosídeos cardioativos oleandrina e ouabaína e compará-los à digoxina, glicosídeo cardioativo com uso bem estabelecido, foram usados 20 ratos Wistar, distribuídos em quatro grupos, com cinco animais em cada grupo. Os animais foram desafiados com uma única aplicação intraperitoneal de doxorrubicina, na dose de 12mg/kg, e tratados com solução salina e com os glicosídeos oleandrina, ouabaína e digoxina, na dose de 50g/kg, durante sete dias. Foram submetidos a exames de ecocardiografia, eletrocardiografia, hematológicos e bioquímicos séricos. Todos os animais apresentaram insuficiência cardíaca congestiva, constatada por redução da fração de ejeção. Oleandrina e digoxina foram capazes de reduzir significativamente (p<0,05) o remodelamento excêntrico causado pela doxorrubicina, porém foram significativamente inferiores (p<0,05) ao grupo controle na manutenção do volume sistólico e do volume do ventrículo esquerdo na diástole. Demais parâmetros cardíacos avaliados não apresentaram diferenças significativas. Todos os animais apresentaram aumento do número de eritrócitos, aumento da duração do complexo QRS no ECG e, necrose miocárdica na análise histopatológica. Conclui-se que os glicosídeos oleandrina, ouabaína e digoxina, na posologia empregada, não apresentaram potencial terapêutico para tratamento de insuficiência cardíaca congestiva causada pela doxorrubicina
Congestive heart failure affects millions of people worldwide and is also a reality in small animal veterinary medicine. New therapeutic modalities are important to improve the quality of life of patients with this syndrome. In order to evaluate the therapeutic potential of cardioactive glycosides oleandrin and ouabain, and compare them to digoxin, glycoside with well-established use, 20 Wistar rats were used in the study, distributed into four groups with five animals in each group. The animals were challenged with a single intraperitoneal application of doxorubicin, at a dose of 12mg / kg, and treated with saline solution and the glycosides oleandrin, ouabain and digoxin, at a dose of 50g/kg for seven days. They underwent echocardiography, electrocardiography, hematological and biochemical tests. All animals presented congestive heart failure, which was verified by a reduction in the ejection fraction. Oleandrin and digoxin were able to significantly reduce (p <0.05) the eccentric remodeling caused by doxorubicin. Oleandrin and digoxin were significantly lower (p <0.05) than control group in maintaining systolic volume and left ventricular volume in diastole. Other cardiac parameters evaluated did not show significant statistical differences. All animals showed an increase in erythrocyte count, an increase in the duration of the QRS complex on the ECG and myocardial necrosis in the histopathological analysis. It is concluded that the glycosides oleandrin, ouabain and digoxin in the used dosage, do not present therapeutic potential for the treatment of congestive heart failure caused by doxorubicin
Resumo
O câncer é o principal problema de saúde pública no mundo e embora avanços terapêuticos tenham sido feitos, ainda existem muitas lacunas. Nesse sentido, o objetivo do trabalho foi avaliar o efeito antitumoral de Calotropis procera, uma planta popularmente utilizada para tratar diversas doenças, especialmente relacionadas às desordens gástricas e inflamatórias. Para tal, dividimos a tese em três capítulos, sendo o primeiro uma revisão geral dos principais fitoquímicos e efeitos biológicos descritos para essa espécie vegetal. No segundo capítulo, realizamos a caracterização do extrato etanólico bruto das folhas de C. procera (CE), onde foram encontrados principalmente flavonoides, glicosídeos e cardenolídeos. Também avaliamos o potencial antitumoral de CE e das frações metanólica (MF) e acetato de etila (EAF) em células de tumor canino mamário (CMT) e osteossarcoma canino (OST). Como controle positivo foi utilizado o quimioterápico doxorrubicina. Os resultados demonstraram que o tratamento com os extratos de C. procera reduziram a viabilidade celular e proliferação de CMT e OST, refletindo no aprisionamento das células na fase G0/G1. C. procera também alterou a morfologia das células tumorais, deixando-as mais arredondadas e menores, o que é sugestivo de apoptose. De fato, mediante a análise por citometria de fluxo, foi comprovado que C. procera aumentou caspase-3, reduziu angiogênese, o processo de transição epitélio mesenquimal, e aumentou p53 nas células OST; além de reduzir PCNA nas células CMT. Por fim, no terceiro capítulo avaliamos o potencial antimetastático do extrato fenólico bruto de C. procera (CphE) em células de câncer de mama 4T1 e em tumores mamários de camundongos num modelo xenográfico. A quercetina, um dos flavonoides presentes na C. procera, foi utilizada como controle positivo. Os resultados in vitro demonstraram que CphE reduziu a viabilidade das células 4T1; os níveis de ROS; induziu apoptose; modulou as vias de crescimento celular Akt/mTOR e MAPK; reduziu migração celular; e amenizou a transição epitélio-mesenquimal. In vivo, C. procera reduziu ERK1/2 nos tumores mamários, e reduziu metástase hepática e pulmonar, através da redução de Cenpf e Twist. Todos esses resultados analisados em conjunto sugerem fortemente que C. procera apresenta um grande potencial como agente antitumoral.
Cancer is the main public health problem worldwide and although advances have been made in anticancer therapy, there are still many gaps. In this sense, our goal was to evaluate the antitumor effect of Calotropis procera, a plant popularly used to treat several diseases, especially related to gastric and inflammatory disorders. For this, we divided the thesis into three chapters. First, it was demonstrated a general review of the main phytochemicals and biological effects described for this plant. In the second chapter, it was carried out the characterization of the crude ethanolic extract of C. procera leaves (CE), where mainly flavonoids, glycosides and cardenolides were found. We also evaluated the antitumor effect of CE, methanolic (MF) and ethyl acetate (EAF) fractions of C. procera in canine mammary tumor (CMT) and canine osteosarcoma (OST) cells. As a positive control, it was used the chemotherapy drug-doxorubicin. Results demonstrated that C. procera treatment reduced the cell viability and proliferation of CMT and OST, reflecting the cell arrest in the G0/G1 phase. C. procera also altered the morphology of tumor cells, making them more round and smaller, which is suggestive of apoptosis. In fact, through flow cytometry analysis, we found that C. procera increased caspase-3, reduced angiogenesis and the mesenchymal epithelial transition, and increased p53 in OST cells; in addition to reducing PCNA in CMT cells. Finally, in the third chapter, the antimetastatic effect of crude extract phenolics from C. procera (CphE) was evaluated in 4T1 breast cancer cells and in mammary tumors of nude mice xenograft model. Quercetin - a flavonoids present in C. procera- was used as positive control. The in vitro results demonstrated that CphE reduced 4T1 cells viability and the levels of ROS, induced apoptosis, modulated Akt/mTOR, MAPK pathways, reduced cell migration, and epithelial-mesenchymal transition. In vivo, CphE reduced ERK1/2 in breast tumors, and reduced liver and lung metastasis, by reducing Cenpf and Twist. All of these results analyzed together strongly suggest that C. procera has great potential as an antitumor agent.
Resumo
Nerium oleander é uma planta ornamental responsável por intoxicações em animais e humanos. Todas as partes da planta contém glicosídeos cardiotóxicos, principalmente a oleandrina. Alguns autores apontam que a toxicidade da planta apresentaria variação em função da cor da flor. O objetivo deste trabalho foi determinar se existe variação na concentração de oleandrina nas folhas de N. oleander de exemplares da planta com diferentes cores de inflorescências. Foram coletadas 10 amostras de folhas para cada tipo de flor (branca, rosea e vermelha). Os níveis de oleandrina foram determinados por meio de HPLC-UV após extração com metanol, precipitação com acetato de chumbo e separação em cartucho de C18. A média da concentração obtida em todas as folhas analisadas foi de 4,89mg g-1, sendo 6,20±4,08mg g-1 na variedade de flores brancas, 4,16±3,44mg g-1 na de flores roseas e 4,31±1,99mg g-1 na de flores vermelhas. As concentrações de oleandrina não apresentaram diferença estatisticamente significante entre as variedades de flores.(AU)
Nerium oleander is an ornamental plant responsible for poisoning in animals and humans. All parts of the plant contain cardiotoxic glycosides, mainly oleandrin. Some authors suggest that the toxicity of the plant would present a dependence on flower color. The objective of this study was to determine whether there is variation in the concentration of oleandrin in the leaves of N. oleander specimens of different colors of flowers. Ten samples of leaves from each variety of flower (white, pink and red) were collected. Oleandrin levels were determined by HPLC-UV after extraction with methanol, precipitation with lead acetate and separation with C18 cartridge. The average concentration obtained in all analyzed leaves was 4.89mg g-1, being 6.20±4.08mg g-1 in variety of white flowers, 4.16±3.44mg g-1 in pink flowers, and 4.31±1.99mg g-1 in red flowers. The concentrations of oleandrin did not show statistically significant difference between the varieties of flowers.(AU)
Assuntos
Humanos , Animais , Nerium/toxicidade , Intoxicação , Intoxicação por Plantas/prevenção & controle , Toxicologia , Cardiotoxicidade/complicações , Apocynaceae/efeitos adversosResumo
As infecções por nematoides gastrintestinais (NGI) são um dos principais entraves à ovinocaprinocultura mundial. O controle dessas infecções utilizando anti-helmínticos sintéticos tem colaborado com a seleção de populações de nematoides multirresistentes. Assim, a busca por alternativas de controle torna-se necessária, destacando-se a fitoterapia. Diversas plantas, como a Calotropis procera, são utilizadas tradicionalmente para fins anti-helmínticos, o que estimula a validação científica deste efeito e a investigação de sua segurança toxicológica. Dessa forma, objetivou-se avaliar a composição química, o potencial anti-helmíntico e a segurança toxicológica do látex de C. procera (LCp). Para tanto, foram obtidas três frações distintas de LCp por meio de processos baseados em centrifugação e liofilização (podendo incluir etapa de diálise): fração precipitada denominada LCp-ppt; fração sobrenadante rica em metabólitos secundários, denominada inicialmente como LNP (Látex Não Proteico) e depois como LCp-fs (Fração solúvel de LCp); e fração sobrenadante rica em proteínas, denominada PLCp (proteínas do látex de C. procera). As frações de LCp foram submetidas a análises químicas e/ou bioquímicas como Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), Espectroscopia no Infravermelho por Transformada de Fourier (FTIR), dosagem de proteínas e verificação da atividade enzimática. LCp-fs e PLCp foram submetidos à testes in vitro para verificar seu efeito sobre ovos, larvas e o nematoide adulto de Haemonchus contortus (Teste de Motilidade dos Nematoides Adultos - TMNA). Parasitas coletados no TMNA foram submetidos à microscopia eletrônica de varredura (MEV) e de transmissão (MET) para verificar alterações em sua ultraestrutura. A segurança toxicológica de LCp-fs e PLCp foi verificada em testes de toxicidade aguda. Ensaio de toxicidade subcrônica foi também realizado para LCp-fs. A atividade anti-helmíntica de LCp-fs e PLCp foi avaliada em ovinos, usando o teste de eficácia anti-helmíntica controlado (TEAC) e o teste de redução da contagem de ovos nas fezes (TRECOF), respectivamente. Nematoides obtidos no TEAC foram submetidos à MET. Testes fitoquímicos em LCp-fs indicaram a presença de fenóis, esteroides, alcaloides e cardenolídeos, e a presença dos compostos ácido gálico e quercetina foi caracterizada pela CLAE. O conteúdo de proteínas em PLCp foi de 43,1 ± 1,1 mg/mL e em LCp-fs foi de 7,7 ± 0,3 mg/mL. LCp-fs e PLCp (8 mg/mL) apresentaram média de inibição da eclosão de ovos de 90% e 85%. A inibição média do desenvolvimento larvar foi de 95% e 88% para LCp-sf e PLCp (1 mg/mL). No TMNA, LCp-sf e PLCp inibiram a motilidade de 100% dos nematoides após 6 e 24 h, respectivamente, e foram observadas alterações na ultraestrutura desses nematoides. A administração de dose única de LCp-fs (DL50 = 4031.5 mg/kg) ou PLCp (DL50 > 5000 mg/kg) em camundongos apresentou segurança. Sinais de toxicidade foram observados em ratos tratados por 30 dias com LCp-fs. Ovinos tratados com LCp-fs ou PLCp apresentaram redução de 30% na carga de H. contortus e de 69% de ovos de NGI nas fezes, respectivamente. Conclui-se que as frações do látex de C. procera estudadas, apresentaram segurança toxicológica e potencial anti-helmíntico, entretanto mais investigações são necessárias para sua adoção no controle de NGI em pequenos ruminantes.
Infections with gastrointestinal nematodes (NGI) are one of the main obstacles to sheep and goats worldwide. The control of these infections using synthetic anthelmintics has collaborated with the selection of multiresistant nematode populations. Thus, the search for control alternatives is necessary, especially phytotherapy. Several plants, such as Calotropis procera, are traditionally used for anthelmintic purposes, which stimulates the scientific validation of this effect and the investigation of its toxicological safety. Thus, the objective was to evaluate the chemical composition, the anthelmintic potential and the toxicological safety of the C. procera latex (CpL). For this purpose, three distinct fractions of CpL were obtained through processes based on centrifugation and lyophilization (which may include a dialysis step): precipitated fraction called CpL-ppt; supernatant fraction rich in secondary metabolites, initially called LNP (Latex Non-Protein) and then as CpL-sf (soluble fraction of CpL); and supernatant fraction rich in proteins, called LPCp (latex proteins of C. procera). The CpL fractions were subjected to chemical and/or biochemical analyzes such as High performance liquid chromatography (HPLC), Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR), protein measurement and enzymatic activity verification. CpL-sf and LPCp were subjected to in vitro tests to verify their effect on eggs, larvae and the adult nematode of Haemonchus contortus (Adult word motility test - AWMT). Parasites collected at AWMT were subjected to scanning electron microscopy (SEM) and transmission (TEM) to verify changes in their ultrastructure. The toxicological safety of CpL-sf and LPCp has been verified in acute toxicity tests. Subchronic toxicity assay was also performed for CpL-sf. The anthelmintic activity of CpL-sf and LPCp was evaluated in sheep, using the controlled anthelmintic efficacy test (CAET) and the fecal egg count reduction test (FECRT), respectively. Nematodes obtained from CAET were submitted to TEM. Phytochemical tests in CpL-sf indicated the presence of phenols, steroids, alkaloids and cardenolides, and the presence of the compounds gallic acid and quercetin was characterized by HPLC. The protein content in LPCp was 43.1 ± 1.1 mg / mL and in CpL-sf it was 7.7 ± 0.3 mg/mL. CpL-sf and LPCp (8 mg/mL) showed mean egg hatch inhibition of 90% and 85%. The mean inhibition of larval development was 95% and 88% for CpL-sf and LPCp (1 mg/mL). In AWMT, CpL-sf and LPCp inhibited the motility of 100% of the nematodes after 6 and 24 h, respectively, and changes in the ultrastructure of these nematodes were observed. Administration of a single dose of CpL-sf (LD50 = 4031.5 mg / kg) or LPCp (LD50 > 5000 mg/kg) in mice was safe. Signs of toxicity were observed in rats treated for 30 days with CpL-sf. Sheep treated with CpL-sf or LPCp showed a 30% reduction in the burden of H. contortus and a 69% reduction in NGI eggs in feces, respectively. It is concluded that the fractions of the C. procera latex studied, presented toxicological safety and anthelmintic potential, however more investigations are necessary for its adoption in the control of NGI in small ruminants.
Resumo
A utilização de plantas com fins medicinais, para tratamento, cura e prevenção de doenças, é uma das mais antigas formas de prática medicinal da humanidade. O Brasil, com sua enorme biodiversidade, representada por uma das mais ricas floras do mundo, é um celeiro de possibilidades de se descobrir novos medicamentos baseados em produtos naturais. A busca por cosméticos mais eficientes e capazes de prevenir e amenizar os efeitos do tempo sobre a pele é uma realidade. Os extratos de plantas medicinais com ação antioxidante são insumos cada vez mais procurados para o desenvolvimento de novos cosméticos com ação contra o envelhecimento cutâneo. O presente estudo teve como objetivo analisar 900 extratos vegetais obtidos de plantas amazônicas quanto à capacidade antioxidante e à presença de algumas classes químicas. Usando técnicas de cromatografia de camada delgada, a presença de alcaloides, antraquinonas, cardenolídeos, flavonoides e terpenos, e a avaliação da sua atividade antioxidante foram estudadas, utilizando-se reveladores como beta-caroteno e 2,2-difenil-1-picril-hidrazil (DPPH), reagente de Dragendorff, reagente de Kedde, reagente de Borntraeger, H2SO4, difenilboriloxietildiamina (NP), luz UV 254nm e 366nm. Alcaloides ocorreram em 8,2% dos extratos, antraquinonas ocorreram em 1,78% e cardenolídeos em 8,88%. Apenas 8,56% dos extratos mostraram atividade antioxidante no modelo do beta-caroteno, enquanto 63,3% dos extratos responderam positivamente no modelo do DPPH. O presente estudo demonstrou que uma elevada porcentagem dos extratos vegetais testados pode ser usada como fontes de agentes antioxidantes em cosméticos, provavelmente pela presença de compostos fenólicos, que são agentes antioxidantes. Porém, estudos mais aprofundados ainda são necessários para que a capacidade antioxidante possa ser quantificada e o grau de segurança dos extratos potencialmente aplicáveis em cosméticos seja determinado.
The use of plants as medicines and in disease prevention is one of the oldest practices of mankind. From this point-of-view, Brazil, having the richest biodiversity of the world, maily because of its terrestrial species richness, is a sorce of potencial cosmetic inputs, once studies are still scarce, in this area. The search for efficacy in cosmetic treatments that are able to prevent or even diminish the effects of time over skin is a reality today, particularly aiming the reduction of skin age. The present study aimed the analysis of 900 plant extracts in relation to their antioxidant capacity and were chemically screened aiming the identification of some groups of compounds. Using thin layer chromatography, the presence of alkaloids, anthraquinones, cardenolides, flavonoids, terpenes and the antioxidant activity were accessed. Beta-carotene and 2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl (DPPH), Dragendorff reagent, Kedde reagent, Borntraeger reagent, H2SO4, diphenylboriloxyethyldiamin (NP) and UV 254 nm and 366 nm were used in the chemical classes evaluation and antioxidant activity evaluation Alkaloids occurred in 8,2% of the extracts, anthraquinones occurred in 1,78% of the extracts and cardenolides occurred in 8,88% of the extracts. Only 8,56% of the extracts showed positive results in the beta-carotene model, while 77,56% of the extracts showed positive results in the DPPH radical scavenging model. The present study demonstred that a high percentage of the extracts hás potential to be used in cosmetics as a source of antioxidant compounds, maybe due to the presence of phenolic compounds, yet to be determmined. Also, deep studies are still needed, as the quantification of the antioxidant activity and the evaluation of their toxicity.