Método espectrofotométrico na região UV a 205 nm para determinação de íon nitrato em água: validação / Spectrophotometric method in UV region at 205 nm for determination of nitrate ion in water: validation

Este estudo teve por objetivo validar o método espectrofotométrico na região ultravioleta(205 nm) para determinação de nitrato em água para consumo humano e de diálise, bemcomo calcular sua incerteza associada. A linearidade, seletividade, precisão, exatidão, limitede detecção (LD) e limite de quantificação (LQ) foram avaliados de acordo com o documentode orientação INMETRO DOQ-CGCRE-008. Os resultados obtidos utilizando água deabastecimento indicaram que a matriz não tem efeito significativo sobre a seletividade dométodo. A exatidão e a repetitividade foram avaliadas com três níveis de concentração doanalito na água de abastecimento, na água de diálise e em material de referência certificado,apresentando resultados satisfatórios para todas as matrizes utilizadas. Os limites de detecção equantificação foram de 0,074 e 0,248 mg/L de nitrato, respectivamente. O método mostrou-seadequado para determinação de nitrato em água de abastecimento e em água de diálise.

This study validated the spectrophotometric method in ultraviolet region (205 nm) fordetermining nitrate in water used for human consumption and dialysis procedure and tocalculate its associated uncertainty. The linearity, selectivity, precision, accuracy, limit ofdetection (LD) and limit of quantification (LQ) were evaluated according to the INMETRODOQ-CGCRE-008. The results obtained using water supply indicated that the matrix has nosignificant effect on the selectivity of the method. Accuracy and repeatability were evaluatedusing three different levels of analyte concentration in the supply water, in the dialysis waterand in the certified reference material, showing satisfactory results at all matrices used.The limits of detection and of quantification were 0.074 and 0.248 mg/L of nitrate, respectively.The method proved to be adequate for determining nitrate in water supply and dialysis water.

Método espectrofotométrico na região UV a 205 nm para determinação de íon nitrato em água: validação / Spectrophotometric method in UV region at 205 nm for determination of nitrate ion in water: validation

Este estudo teve por objetivo validar o método espectrofotométrico na região ultravioleta(205 nm) para determinação de nitrato em água para consumo humano e de diálise, bemcomo calcular sua incerteza associada. A linearidade, seletividade, precisão, exatidão, limitede detecção (LD) e limite de quantificação (LQ) foram avaliados de acordo com o documentode orientação INMETRO DOQ-CGCRE-008. Os resultados obtidos utilizando água deabastecimento indicaram que a matriz não tem efeito significativo sobre a seletividade dométodo. A exatidão e a repetitividade foram avaliadas com três níveis de concentração doanalito na água de abastecimento, na água de diálise e em material de referência certificado,apresentando resultados satisfatórios para todas as matrizes utilizadas. Os limites de detecção equantificação foram de 0,074 e 0,248 mg/L de nitrato, respectivamente. O método mostrou-seadequado para determinação de nitrato em água de abastecimento e em água de diálise.(AU)

This study validated the spectrophotometric method in ultraviolet region (205 nm) fordetermining nitrate in water used for human consumption and dialysis procedure and tocalculate its associated uncertainty. The linearity, selectivity, precision, accuracy, limit ofdetection (LD) and limit of quantification (LQ) were evaluated according to the INMETRODOQ-CGCRE-008. The results obtained using water supply indicated that the matrix has nosignificant effect on the selectivity of the method. Accuracy and repeatability were evaluatedusing three different levels of analyte concentration in the supply water, in the dialysis waterand in the certified reference material, showing satisfactory results at all matrices used.The limits of detection and of quantification were 0.074 and 0.248 mg/L of nitrate, respectively.The method proved to be adequate for determining nitrate in water supply and dialysis water.(AU)

Evaluation of a fungal collection as certified reference material producer and as a biological resource center

Considering the absence of standards for culture collections and more specifically for biological resource centers in the world, in addition to the absence of certified biological material in Brazil, this study aimed to evaluate a Fungal Collection from Fiocruz, as a producer of certified reference material and as Biological Resource Center (BRC). For this evaluation, a checklist based on the requirements of ABNT ISO GUIA34:2012 correlated with the ABNT NBR ISO/IEC17025:2005, was designed and applied. Complementing the implementation of the checklist, an internal audit was performed. An evaluation of this Collection as a BRC was also conducted following the requirements of the NIT-DICLA-061, the Brazilian internal standard from Inmetro, based on ABNT NBR ISO/IEC 17025:2005, ABNT ISO GUIA 34:2012 and OECD Best Practice Guidelines for BRCs. This was the first time that the NIT DICLA-061 was applied in a culture collection during an internal audit. The assessments enabled the proposal for the adequacy of this Collection to assure the implementation of the management system for their future accreditation by Inmetro as a certified reference material producer as well as its future accreditation as a Biological Resource Center according to the NIT-DICLA-061.(AU)

Validation and application of chromatographic methods for determination of vitamins in supplements / Validação e aplicação de métodos cromatográficos para determinação de vitaminas em suplementos

Two methodologies were proposed for determining vitamins in supplements by means of high performance liquid chromatography (HPLC): one for simultaneous determination of fat soluble vitamins (retinyl acetate, retinyl palmitate, -tocopheryl acetate and -carotene), and the other for the simultaneous determination of water soluble vitamins (B1, C, nicotinamide, nicotinic acid, B6 and pantothenic acid). The methodologies were validated using certified reference material SRM 3280 from NIST and vitamins standards. The limits of detection (LODs) and the limits of quantification (LOQs) ranged from 0.3 to 4.3 µg/mL and from 0.5 to 14.0 µg/mL, respectively. The recoveries of spiked vitamin standards in supplements ranged from 92 % to 109 %, and from 86 % to 108 % in the reference material. The repeatability was calculated by the relative standard deviation (RSD), with values from 0.2 % to 9.6 %. The validated methods were applied for determining vitamins A, E, B1, C, niacin, B6 and pantothenic acid in 10 multivitamin supplements samples. Both methods are suitable for determining vitamins in multivitamin supplements, and their applications will be essential, considering the urgent need for monitoring and for surveying these products.

Foram propostas duas metodologias para realizar a determinação de vitaminas em suplementos por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE): uma para a determinação simultânea de vitaminas lipossolúveis (acetato de retinol, palmitato de retinol, acetato de -tocoferol e -caroteno) e outra para a determinação simultânea de vitaminas hidrossolúveis (B1, vitamina C, nicotinamida, ácido nicotínico, B6 e ácido pantotênico). A validação das metodologias foi realizada utilizando-se material de referência certificado SRM 3280 do NIST e padrões de vitaminas. Os limites de detecção (LDs) e de quantificação (LQs) variaram entre 0,3 e 4,3 µg/mL e entre 0,5 e 14,0 µg/mL, respectivamente. Os percentuais de recuperação dos padrões adicionados nas matrizes variaram entre 92 % e 109 % e entre 86 % e 108 % no material de referência. A repetitividade foi calculada utilizando-se o desvio padrão relativo (RSD); e foram detectados valores entre 0,2 % e 9,6 %. Os métodos validados foram aplicados para a determinação de vitaminas A, E, B1, C, niacina, B6 e ácido pantotênico em 10 amostras de suplementos vitamínicos. Ambos os métodos são adequados para a análise de vitaminas em suplementos e suas aplicações serão imprescindíveis, visto a necessidade urgente de efetuar monitoramento e fiscalização destes produtos.

Validation and application of chromatographic methods for determination of vitamins in supplements / Validação e aplicação de métodos cromatográficos para determinação de vitaminas em suplementos

Two methodologies were proposed for determining vitamins in supplements by means of high performance liquid chromatography (HPLC): one for simultaneous determination of fat soluble vitamins (retinyl acetate, retinyl palmitate, -tocopheryl acetate and -carotene), and the other for the simultaneous determination of water soluble vitamins (B1, C, nicotinamide, nicotinic acid, B6 and pantothenic acid). The methodologies were validated using certified reference material SRM 3280 from NIST and vitamins standards. The limits of detection (LODs) and the limits of quantification (LOQs) ranged from 0.3 to 4.3 µg/mL and from 0.5 to 14.0 µg/mL, respectively. The recoveries of spiked vitamin standards in supplements ranged from 92 % to 109 %, and from 86 % to 108 % in the reference material. The repeatability was calculated by the relative standard deviation (RSD), with values from 0.2 % to 9.6 %. The validated methods were applied for determining vitamins A, E, B1, C, niacin, B6 and pantothenic acid in 10 multivitamin supplements samples. Both methods are suitable for determining vitamins in multivitamin supplements, and their applications will be essential, considering the urgent need for monitoring and for surveying these products.(AU)

Foram propostas duas metodologias para realizar a determinação de vitaminas em suplementos por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE): uma para a determinação simultânea de vitaminas lipossolúveis (acetato de retinol, palmitato de retinol, acetato de -tocoferol e -caroteno) e outra para a determinação simultânea de vitaminas hidrossolúveis (B1, vitamina C, nicotinamida, ácido nicotínico, B6 e ácido pantotênico). A validação das metodologias foi realizada utilizando-se material de referência certificado SRM 3280 do NIST e padrões de vitaminas. Os limites de detecção (LDs) e de quantificação (LQs) variaram entre 0,3 e 4,3 µg/mL e entre 0,5 e 14,0 µg/mL, respectivamente. Os percentuais de recuperação dos padrões adicionados nas matrizes variaram entre 92 % e 109 % e entre 86 % e 108 % no material de referência. A repetitividade foi calculada utilizando-se o desvio padrão relativo (RSD); e foram detectados valores entre 0,2 % e 9,6 %. Os métodos validados foram aplicados para a determinação de vitaminas A, E, B1, C, niacina, B6 e ácido pantotênico em 10 amostras de suplementos vitamínicos. Ambos os métodos são adequados para a análise de vitaminas em suplementos e suas aplicações serão imprescindíveis, visto a necessidade urgente de efetuar monitoramento e fiscalização destes produtos.(AU)

PRODUÇÃO E CERTIFICAÇÃO DE MATERIAIS DE REFERÊNCIA BIOLÓGICOS PARA USO VETERINÁRIO: Estirpes de Clostridium botulinum tipos C e D, suas toxinas e antitoxinas

O botulismo é uma doença grave, que acomete o homem e animais, causada pela ação de neurotoxinas botulínicas (BoNT) produzidas pelo Clostridium botulinum. Os tipos C, D e os mosaicos C/D e D/C são os principais causadores da doença nos animais. O botulismo em ruminantes no Brasil passou de uma doença endêmica nas décadas de 80-90, para ocorrência na forma de surtos esporádicos nos últimos anos, principalmente devido ao sucesso da implantação do programa de controle nacional baseado em vacinação sistemática do rebanho, além de práticas adequadas de manejo. Toxinas e antitoxinas botulínicas tipos C e D são insumos essenciais utilizados na produção, controle de qualidade e teste oficial de vacinas contra o botulismo. Esses insumos também têm um importante uso no diagnóstico de casos suspeitos de botulismo, e na validação de novos métodos de diagnóstico, especialmente métodos alternativos ao bioensaio em camundongos. Igualmente importante e necessária é a caracterização de estirpes de Clostridium botulinum, que atualmente pode ser realizada por técnicas moleculares e genômicas, a fim de tipificá-las considerando os tipos mosaicos, sem equívocos advindos de reações cruzadas, possíveis de ocorrer no bioensaio. A exigência de dados mais exatos e confiáveis em áreas científicas e tecnológicas tem demandado materiais de referência de maior qualidade. Entretanto, um grande gargalo enfrentado é a dependência da importação desses materiais, ou mesmo a indisponibilidade no mercado. Acrescentam-se ainda restrições relativas ao bioterrorismo, que impedem a importação de toxinas botulínicas ou estirpes toxigênicas. Os objetivos deste trabalho consistiram em caracterizar e certificar lotes de estirpes de Clostridium botulinum, toxinas e antitoxinas botulínicas dos tipos C e D, como materiais de referência certificados (MRCs). Com a utilização de métodos microbiológicos clássicos, técnicas moleculares e sequenciamento genômico foi possível tipificar e caracterizar amostras de Clostridium botulinum tipos C, D e D/C mantidas atualmente pelo órgão oficial (MAPA) e por indústrias veterinárias, incluindo comparações genômicas com outras sequências disponíveis no GenBank. Lotes de estirpes de Clostridium botulinum tipo C (CBC 02) e tipo D (CBD 09), suficientemente homogêneas e estáveis foram produzidos e certificados como MRCs. Toxinas botulínicas e antitoxinas botulínicas tipos C e D produzidas neste trabalho foram consideradas homogêneas e estáveis, após testes estatísticos baseados em análise de regressão, com exceção da toxina botulínica tipo C (Lote 01/2016), que apresentou instabilidade. A caracterização foi realizada por meio de estudo colaborativo entre sete instituições brasileiras, incluindo fabricantes de vacinas e laboratórios de diagnóstico. Valores de referência foram estimados por modelo de medição com independência estatística, obtendo-se materiais com os seguintes títulos e incertezas: antitoxina botulínica tipo C (Lote 01/2017), (55 ± 13) UI; toxina botulínica tipo D (Lote 01/2017), (950 ± 153) L+; antitoxina botulínica tipo D (Lote 01/2017), (50 ± 13) UI. A temperatura recomendada para armazenamento dos produtos foi -20ºC, e períodos de validade de 10 anos para as estirpes e de um ano para toxinas e antitoxinas, os quais poderão ser ampliados, após estudos complementares de monitoramento dos MRCs. O domínio das metodologias de produção e dos protocolos de certificação, atendendo a requisitos de normas de qualidade internacionalmente reconhecidas para a produção de MRCs, propiciaram a disponibilização de produtos de alta qualidade, indicados para uso em testes para identificação da bactéria, de controle de qualidade de vacinas contra o botulismo, validação de métodos, estabelecimento de rastreabilidade a outros materiais, monitoramento de laboratórios e ensaios de proficiência. Além disso, trouxe vantagem e independência científica ao país, agregando confiabilidade ao controle do botulismo, e minimizando dificuldades alfandegárias e custos envolvidos na obtenção desses insumos.

Botulism is a serious disease that affects humans and animals, caused by the action of botulinum neurotoxins (BoNT) produced by Clostridium botulinum. Types C, D and mosaics C /D and D/C are the main cause of disease in animals. Botulism in ruminants in Brazil changed from an endemic disease in the 1980s to 1990s, to sporadic outbreaks in recent years, mainly due to the successful implementation of the national control program based on systematic herd vaccination, as well as practices management. Botulinum toxins and botulinum toxins types C and D are essential inputs used in production, quality control and official testing of botulism vaccines. These inputs also have an important use in diagnosis of suspected cases of botulism, and in validation of new diagnostic methods, especially alternative methods to mouse bioassay. Equally important and necessary is the characterization of Clostridium botulinum strains, which can currently be performed by molecular and genomic techniques, in order to typify them considering the mosaic types, without any misunderstandings arising from cross reactions, which may occur in bioassay. The demand for more accurate and reliable data in scientific and technological areas has demanded higher quality reference materials. However, a major bottleneck is the dependence on imports of these materials, or even unavailability in the market. There are also added restrictions on bioterrorism, which prevent import of botulinum toxins or toxigenic strains. The objectives of this work were to characterize and certify batches of Clostridium botulinum strains, toxins and botulinum toxin types C and D, as certified reference materials (CRMs). With the use of classical microbiological methods, molecular techniques and genomic sequencing, it was possible to typify and characterize samples of Clostridium botulinum types C, D and D / C currently maintained by the official agency (MAPA) and veterinary industries, including genomic comparisons with other sequences available on GenBank. Batches of Clostridium botulinum strains type C (CBC 02) and type D (CBD 09), sufficiently homogeneous and stable were produced and certified as CRMs. Botulinum toxins and botulinum antitoxins types C and D produced in this work were considered homogeneous and stable after statistical tests based on regression analysis, except botulinum toxin type C (Batch 01/2016), which presented instability. The characterization was performed through a collaborative study between seven Brazilian institutions, including vaccine manufacturers and diagnostic laboratories. Reference values were estimated by measuring model with statistical independence, obtaining materials with the following titers and uncertainties: Botulinum toxin type C (Batch 01/2017), 55 ± 13 IU; Botulinum toxin type D (Batch 01/2017), 950 ± 153 L+; Botulinum antitoxin type D (Batch 01/2017), 50 ± 13 IU. Recommended temperature for storage of the products was -20ºC, and periods of validity of 10 years for strains and of one year for toxins and antitoxins, which could be extended, after complementary studies of monitoring the CRMs. The domain of production methodologies and certification protocols, meeting the requirements of internationally recognized quality standards for production of CRMs, provided availability of high quality products, indicated for use in tests for bacterial identification, quality control of vaccines against botulism, validation of methods, establishment of traceability to other materials, monitoring of laboratories and proficiency tests. In addition, it brought scientific advantage and independence to the country, adding reliability to the botulism control, and minimizing customs difficulties and costs involved in obtaining these inputs.

Avaliação intralaboratorial do desempenho de analistas na análise de carotenoides utilizando material de referência certificado / Intralaboratory assessment of analysts proficiency for carotenoidanalysis using a certified reference material

Carotenoid analysis is inherently challenging, requiring the analysts expertise and attention to manydetails. To guarantee the reliability of carotenoid data generated in our laboratory, a side from method development, optimization and validation, periodic evaluation of the analysts performance is carried out. This paper reports the results obtained in one of our evaluations, using a certified reference material. Five analysts with varying experience in carotenoid analysis participated. The same liquid chromatograph and standard curves were used, restricting the evaluation to the analysts performance. The HPLC method consisted of extraction with acetone, partition to petroleum ether, saponification with 10 % methanolic KOH, washing with water, concentrating in a rotary evaporator, drying with nitrogen, dissolving in acetone, separation, identification and quantification. The z-score for each carotenoid was calculated.There was very good agreement in terms of the carotenes and b-cryptoxanthin for the five analysts. For lutein and zeaxanthin, the analyst with little experience in carotenoid analysis obtained lower values, but the z-scores were still satisfactory. One analyst who had experience only with carotene analysis alsogot lower concentrations for the xanthophylls. This was due to the fact that ethyl ether was not used in partitioning the carotenoids from the extracting solvent to petroleum ether.(AU)

A análise de carotenoides é um desafio inerente, pois requer experiência e atenção dos analistas para vários detalhes. Para garantir a confiabilidade dos resultados, nosso laboratório faz avaliações periódicas do desempenho do método analítico e dos analistas. Este trabalho apresenta os resultados de uma das avaliações utilizando-se material de referência certificado. Participaram do estudo cinco analistas com diferentes tempos de experiência em análise de carotenoides. Foi utilizado o mesmo cromatógrafo líquido de alta eficiência e a mesma curva analítica para restringir a avaliação apenas ao desempenho do analista. A metodologia consistiu na extração com acetona, partição para éter de petróleo, saponificação com 10 % KOH metanólico, lavagem com água, concentração em roto-evaporador, secagem com nitrogênio, dissolução em acetona, separação, identificação e quantificação. Os z-scores foram calculados para cada carotenoides. Houve boa concordância para carotenos e b-criptoxantina para todos os analistas. Para luteína e zeaxantina, o analista com pouca experiência obteve valores menores, mas os z-scoresainda foram satisfatórios. Um analista com experiência apenas em análise de carotenos também obteve concentrações menores para xantofilas; e esses resultados ocorreram pelo fato de não utilizar éter etílico na partição dos carotenoides do solvente de extração para o éter de petróleo.(AU)

ESTRATÉGIAS BIOANALÍTICAS PARA CARACTERIZAÇÃO DE BIOMARCADORES DE EXPOSIÇÃO AO MERCÚRIO EM ARAPAIMA GIGAS E SERRASALMUS RHOMBEUS DO RIO MADEIRA/BACIA AMAZÔNICA

Este trabalho apresenta os resultados de proteínas associadas ao mercúrio em amostras de tecido muscular e hepático de pirarucu (Arapaima gigas) e piranha preta (Serrasalmus rhombeus) oriundos do complexo hidrelétrico de Jirau, na Bacia do Rio Madeira, região amazônica do Brasil. O proteôma do músculo e fígado dessas espécies foi obtido por eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida (2D PAGE). O mercúrio presente nos spots proteicos foi determinado por espectrometria de absorção atômica em forno de grafite (GFAAS) após mineralização ácida assistida por banho de ultrassom. Os spots proteicos que apresentaram mercúrio foram caracterizados por espectrometria de massas por ionização com eletrospray em sequência (ESI- MS/MS) após digestão tríptica. As determinações GFAAS indicaram que a maior parte do mercúrio está ligada a fração proteica com massa molar (Mm) inferior a 90 kDa. As concentrações de mercúrio nos spots apresentaram-se na faixa de 4,07 164,63 µg g-1 no tecido muscular de pirarucu; 0,86 25,34 µg g-1 no tecido hepático de pirarucu; 7,67 156,18 µg g-1 no tecido muscular de piranha preta e 2,17 31,42 µg g-1 no tecido hepático de piranha preta. A análise por ESI-MS/MS permitiu caracterizar em dezenove spots proteicos as seguintes proteínas e/ou enzimas: Triosephosphate isomerase, Fructosebisphosphate aldolase, Ckmb protein,, Cofilin 2 (Muscle), Actin_ alpha_ cardiac muscle 1a, Actin_ alpha 1_ skeletal muscle, Novel protein similar to zebrafish hemoglobin alpha adult 1 (Hbaa1), Hemoglobin subunit alpha, Embryonic 1 beta-globin, Embryonic globin beta e2, Hydroxyacyl-Coenzyme A dehydrogenase, Adenosylhomocysteinase, Glycine N-methyltransferase, Peroxiredoxin 2, Enolase 1_ (Alpha), Fatty acid binding protein 11a, Parvalbumin 3, 3-hydroxyanthranilate 3_4-dioxygenase e Glutathione peroxidase.

This paper presents a simple, fast and sensitive method to determine mercury in muscle and liver tissue samples of fish from the Brazilian Amazon by GFAAS through the direct introduction of sample slurries into the spectrometers graphite tube. The samples of muscle and/or liver tissues were lyophilized and macerated using a mortar and pestle in the presence of liquid nitrogen. After this treatment, it was possible to obtain particles with a diameter of 60 µm. The slurry samples were prepared by mixing 20 mg of tissue (muscle end/or liver) with 1 mL of a solution containing 0.05 % v/v Triton X-100, 0.50 % v/v suprapur HNO3 and 100 mg L-1 zirconium directly in the spectrometers automatic sampling glass. Mercury standard solutions with concentrations ranging between 0.25 and 2.00 g L1 were prepared under the same conditions as the slurry samples and used to generate the analytical curve. After sonicating the slurry samples and/or mercury standard solutions for 20 seconds, 20 L was injected into the graphite tube, whose internal wall was lined with a tungsten carbide film that acted as a permanent chemical modifier. Under these conditions, it was possible to obtain thermal stabilization of the mercury up to an atomization temperature of 1700 °C in the GFAAS assay. The proposed method was validated by mercury determination in slurries of fish protein certified reference material DORM-4 and liver certified reference material DOLT-4. The calculated limits of detection (LOD) and quantification (LOQ) in relation to DORM-4 and DOLT-4 were on the order of 0.014 - 0016 mg kg-1 and 0.045 0.0051 g kg-1, respectively.

Desenvolvimento de Método para Determinação de Chumbo e Cádmio em Peixe por Espectrometria de Absorção Atômica em Forno de Grafite Empregando Solubilização Alcalina

Neste trabalho foi desenvolvido um método analítico simples e rápido para determinar o teor total de chumbo (Pb) e cádmio (Cd) em amostras de peixe por espectrometria de absorção atômica em forno de grafite (GFAAS), após solubilização da amostra com hidróxido de tetrametilamônio (TMAH). As condições ótimas para a determinação de Pb foram estabelecidas utilizando planejamento fatorial fracionário (FFD) 2_IV((6-2)), sendo estudadas as variáveis tempo de solubilização (tS), temperatura do banho-maria (TB), massa da amostra (MA), temperatura de pirólise (TP), tempo de pirólise (tP) e temperatura de atomização (TA); sendo posteriormente otimizadas por meio do planejamento composto central (CCD) as variáveis TB e TP, que se mostraram significativas no FFD. Para a determinação de Cd, o CCD foi aplicado para otimizar as variáveis TP e TA, usando as condições de preparo da amostra que foram otimizadas para Pb. No método otimizado, pesou-se com precisão 750,0 mg de amostra de peixe diretamente em tubos cônicos de 50,0 mL. Em seguida, adicionou-se 1,0 mL de solução de TMAH a 25% (v/v) à amostra, incubou-se o sistema a 70 C durante 30 min e o volume final foi completado até 10,0 mL com uma solução de H3PO4 1% (v/v). A solução resultante foi introduzida diretamente no tubo de grafite por meio de amostrador automático. O método foi validado seguindo procedimentos e critérios de aceitabilidade requeridos aos Laboratórios Nacionais de Agricultura e Pecuária (LANAGRO) do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA). O método não apresentou efeito de matriz, sendo utilizada então curva de calibração por padrões externos cuja linearidade foi constatada. O limite de detecção e quantificação foram de 7,8 e 26,0 ?g kg-1 para Pb, 1,2 e 4,1 ?g kg-1 para Cd, respectivamente. A veracidade e a precisão foram avaliadas utilizando Material de Referência Certificado (MRC) de músculo de peixe, com recuperação entre 91,4 e 114,4% (n = 9) e desvios padrão relativos não superiores a 9,8%. O estudo de robustez indicou que o método apresenta restrições relacionadas à etapa de preparo de amostras, desta forma, atenção especial deve ser dada a esta etapa. A estimativa da incerteza padrão combinada foi baseada na incerteza associada à concentração do analito na solução de ensaio, ao volume final da solução de abertura da amostra, à massa bruta da amostra e à recuperação. O método foi utilizado com sucesso nas análises de amostras de peixes coletadas em caráter fiscal no estado de Minas Gerais e oriundas do Laboratório de Aquacultura (LAQUA) da Escola de Veterinária da UFMG, apresentando também resultados satisfatórios frente a comparações interlaboratoriais simuladas. Uma avaliação de todos os parâmetros analíticos demonstrou que o procedimento desenvolvido produz resultados satisfatórios de acordo com requisitos internacionais.

In this work a simple and rapid analytical method was developed to determine the total content of lead (Pb) and cadmium (Cd) in fish samples by graphite furnace atomic absorption spectrometry (GFAAS), after solubilization of the sample with tetramethylammonium hydroxide (TMAH). The optimum conditions for the determination of Pb were established using 2_IV <(>(6-2)) fractional factorial design (FFD), being studied the variables solubilization time (tS), water bath temperature (TB), sample mass (MA), pyrolysis temperature (TP), pyrolysis time (tP) and atomization temperature (TA); being later optimized through the central composite design (CCD) the variables TB and TP, which were shown to be significant in the FFD. For the determination of Cd, the CCD was applied to optimize the TP and TA variables, using the sample preparation conditions that were optimized for Pb. In the optimized method, 750.0 mg of fish sample was accurately weighed directly in 50.0 mL conical tubes. Then, 1.0 mL of 25% v/v TMAH solution was added to the sample, the system was incubated at 70°C for 30 min and the final volume was completed to 10.0 mL with a 1% v/v H3PO4 solution. The resulting solution was introduced directly into the graphite tube by means of an autosampler. The method was validated following procedures and criteria of acceptability required by the National Agriculture and Livestock Laboratories (LANAGRO) of the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA). The method did not present matrix effect, and the calibration curve was then used by external standards whose linearity was verified. The limits of detection and quantification were 7.8 and 26.0 ?g kg-1 for Pb, 1.2 and 4.1 ?g kg-1 for Cd, respectively. Trueness and precision were assessed using Fish Muscle Certified Reference Material (MRC), with recovery between 91.4 and 114.4% (n = 9) and relative standard deviations not exceeding 9.8%. The robustness study indicated that the method presents restrictions related to the preparation stage of samples, in this way, special attention should be given to this step. The estimate of the combined standard uncertainty was based on the uncertainty associated with the analyte concentration in the test solution, the final volume of the sample solution, the gross mass of the sample and the recovery. The method was successfully used in the analyzes of fish samples collected in the state of Minas Gerais and from the Aquaculture Laboratory (LAQUA) of the Veterinary School of the Federal University of Minas Gerais (UFMG), and also presented satisfactory results compared to simulated interlaboratory comparisons. An evaluation of all analytical parameters demonstrated that the procedure developed yields satisfactory results in accordance with international requirements.

Validation of methodology for determining As, Pb and Cd in fish by using ICP-MS: Preliminary studies / Validação de método para análise de As, Pb e Cd em peixe por meio de ICP-MS: Estudos preliminares

The progress of industry has led to the increased emission of pollutants into ecosystems, and fish consumption has been a remarkable source of human exposure to toxic metals. Arsenic, cadmium and lead constitute a potentially significant threat to human health because they are associated with several adverse health effects. Therefore, fish biomonitoring has been a crucial tool for assessing the environmental exposure to contaminants. This study aimed at determining arsenic, cadmium and lead contents in fish samples from a Proficiency Testing for Metals conducted by the Nuclear and Energy Research Institute (IPEN), in order to develop a routine analytical methodology using ICP-MS. The methodology was evaluated by using the certified reference oyster tissue material, which indicated good agreement between the certified and the determined concentrations for As, Cd and Pb. The report on the Proficiency Test performance evaluation, based on the z-score index, evidenced satisfactory results in both samples of the analyzed elements.

O progresso das indústrias tem causado aumento da emissão de poluentes em ecossistemas, e o consumo de peixe tem sido importante fonte de exposição dos homens aos metais tóxicos. Arsênio, cádmio e chumbo constituem uma potencial ameaça para a saúde humana, pois estão associados a efeitos adversos à saúde. Portanto, o biomonitoramento em peixe é fundamental ferramenta para realizar a avaliação da exposição aos contaminantes ambientais. O objetivo deste estudo foi de determinar a ocorrência de arsênio, cádmio, e chumbo em amostras de peixe, a fim de iniciar o desenvolvimento de um método analítico de rotina por meio de ICP-MS. Para conduzir este estudo, foram utilizadas as amostras provenientes do Teste de Proficiência em Metais organizado pelo Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN). A metodologia foi avaliada de acordo com os valores obtidos em material de referência certificado de tecido de ostra, que indicaram boa concordância entre as concentrações certificadas e aquelas determinadas para As, Cd e Pb. O relatório de avaliação de desempenho para o Teste de Proficiência, com base no índice z-score, mostrou resultados satisfatórios para as duas amostras dos elementos analisados.