Fowl Aviadenovirus E associated with hepatitis-hydropericardium syndrome in broiler breeders / Síndrome da hepatite-hidropericárdio por Aviadenovirus e em reprodutores de corte

ABSTRACT: Fowl aviadenovirus (FAdV) is an important pathogen in the global poultry industry and the etiology of inclusion body hepatitis-hydropericardium syndrome (HHS) in chickens. Since the 1990s, several outbreaks of HHS have occurred in poultry producing areas, including South America. The coinfection of FAdV and chicken anemia virus (CAV) may markedly impact the incidence of HHS. This study describes an outbreak of HHS in coinfection with CAV in industrial broiler breeders and characterizes the FAdV isolate. The three-week-old male broiler breeders had pale bone marrow, enlarged and yellowish liver, splenomegaly, and atrophied thymus; one chicken was also found with hydropericardium. Virus isolation was performed in SPF chicken embryos of liver and thymus. Tissues of the naturally infected chickens and the inoculated embryos were evaluated by PCR and histopathology. All affected chickens and inoculated embryos were positive for FAdV and CAV. The inoculated embryos had enlarged, greenish and hemorrhagic livers, and 30% died within 7 days of inoculation. Phylogenetic analysis of the FAdV isolate hexon gene partial sequence enabled grouping with E species. The E species has recently become a relevant species in several countries. The association of FAdV with CAV in breeders is of further concern due to both being capable of vertical transmission. Within the last decade, a worldwide upsurge of HHS in broiler breeders owing to failed biosecurity has occurred. In this episode, the failure on biosecurity may have enabled challenge with both FAdV and CAV, with pathological synergism. The CAV-impaired adaptive immunity may have benefited the FAdV infection.

RESUMO: Adenovírus aviário (FAdV) é um importante patógeno na indústria avícola global e a etiologia da síndrome da hepatite por corpúsculo de inclusão-hidropericárdio (SHH) em galinhas. Desde a década de 1990, vários surtos de SHH foram descritos em todas as áreas de produção de aves, incluindo na América do Sul, e a coinfecção entre FAdV e vírus da anemia das galinhas (CAV) pode ser agravante para todos os aspectos da SHH. Objetiva-se descrever um surto de SHH em matrizes de frangos corte, caracterizar a estirpe de FAdV envolvida e destacar a coinfecção com CAV. Foram avaliados machos reprodutores de corte com três semanas de idade, com medula óssea pálida, fígado aumentado e amarelado e esplenomegalia, timo atrofiado e um com hidropericárdio. Fígado e timo foram coletados para isolamento do vírus em embriões de galinhas SPF, PCR e histopatologia. Todas as aves acometidas e embriões inoculados foram positivos para FAdV e CAV. Os embriões inoculados tiveram óbito de 30% em até sete dias após a inoculação e alterações hepáticas por fígados esverdeados e aumentados. A análise filogenética de FAdV com base em parte da sequência do gene que codifica a proteína hexon revelou identidade com a espécie E, que se tornou disseminada em vários países. A coinfecção de FAdV e CAV resulta em maior intensidade de lesões, maior morbidade e mortalidade e em reprodutores tem alta relevância epidemiológica, em razão da transmissão vertical de ambos e da ampla distribuição geográfica das progênies infectadas. Na última década, ocorreu um aumento mundial na ocorrência de SHH em frangos de corte relacionado a falhas em biosseguridade, especialmente em reprodutores, condição que pode ter ocorrido neste episódio. A presença de FAdV e CAV em reprodutores é motivo para preocupação por reflexos negativos à imunidade e viabilidade das progênies.

Fowl Aviadenovirus E associated with hepatitis-hydropericardium syndrome in broiler breeders / Síndrome da hepatite-hidropericárdio por Aviadenovirus e em reprodutores de corte

Fowl aviadenovirus (FAdV) is an important pathogen in the global poultry industry and the etiology of inclusion body hepatitis-hydropericardium syndrome (HHS) in chickens. Since the 1990s, several outbreaks of HHS have occurred in poultry producing areas, including South America. The coinfection of FAdV and chicken anemia virus (CAV) may markedly impact the incidence of HHS. This study describes an outbreak of HHS in coinfection with CAV in industrial broiler breeders and characterizes the FAdV isolate. The three-week-old male broiler breeders had pale bone marrow, enlarged and yellowish liver, splenomegaly, and atrophied thymus; one chicken was also found with hydropericardium. Virus isolation was performed in SPF chicken embryos of liver and thymus. Tissues of the naturally infected chickens and the inoculated embryos were evaluated by PCR and histopathology. All affected chickens and inoculated embryos were positive for FAdV and CAV. The inoculated embryos had enlarged, greenish and hemorrhagic livers, and 30% died within 7 days of inoculation. Phylogenetic analysis of the FAdV isolate hexon gene partial sequence enabled grouping with E species. The E species has recently become a relevant species in several countries. The association of FAdV with CAV in breeders is of further concern due to both being capable of vertical transmission. Within the last decade, a worldwide upsurge of HHS in broiler breeders owing to failed biosecurity has occurred. In this episode, the failure on biosecurity may have enabled challenge with both FAdV and CAV, with pathological synergism. The CAV-impaired adaptive immunity may have benefited the FAdV infection.

Adenovírus aviário (FAdV) é um importante patógeno na indústria avícola global e a etiologia da síndrome da hepatite por corpúsculo de inclusão-hidropericárdio (SHH) em galinhas. Desde a década de 1990, vários surtos de SHH foram descritos em todas as áreas de produção de aves, incluindo na América do Sul, e a coinfecção entre FAdV e vírus da anemia das galinhas (CAV) pode ser agravante para todos os aspectos da SHH. Objetiva-se descrever um surto de SHH em matrizes de frangos corte, caracterizar a estirpe de FAdV envolvida e destacar a coinfecção com CAV. Foram avaliados machos reprodutores de corte com três semanas de idade, com medula óssea pálida, fígado aumentado e amarelado e esplenomegalia, timo atrofiado e um com hidropericárdio. Fígado e timo foram coletados para isolamento do vírus em embriões de galinhas SPF, PCR e histopatologia. Todas as aves acometidas e embriões inoculados foram positivos para FAdV e CAV. Os embriões inoculados tiveram óbito de 30% em até sete dias após a inoculação e alterações hepáticas por fígados esverdeados e aumentados. A análise filogenética de FAdV com base em parte da sequência do gene que codifica a proteína hexon revelou identidade com a espécie E, que se tornou disseminada em vários países. A coinfecção de FAdV e CAV resulta em maior intensidade de lesões, maior morbidade e mortalidade e em reprodutores tem alta relevância epidemiológica, em razão da transmissão vertical de ambos e da ampla distribuição geográfica das progênies infectadas. Na última década, ocorreu um aumento mundial na ocorrência de SHH em frangos de corte relacionado a falhas em biosseguridade, especialmente em reprodutores, condição que pode ter ocorrido neste episódio. A presença de FAdV e CAV em reprodutores é motivo para preocupação por reflexos negativos à imunidade e viabilidade das progênies.

Rate of Transfer of Infectious Anaemia Maternal Antibodies from Broiler Breeders To the Progeny: a Field Evaluation

Clinical manifestation of the disease caused by the chicken anaemia virus (CAV) occurs when chicken chicks are vertically contaminated or before the second week of life. CAV control is based on the vaccination of broiler breeders in order to promote progeny protection through maternal antibodies. This work aims to evaluate, under field conditions, the antibody title in commercial broiler breeders at 28, 48, and 68 weeks of age, the rate of transference to the progeny, as well as the duration of antibodies in the progeny up to 21 days of age. Thus, a total of 92 sera samples from 93,000 broiler breeders vaccinated with a live vaccine for CAV at 14 weeks of age and 366 sera samples from their respective progeny were analyzed using ELISA. Breeders' antibody title for CAV ranged between 5051 and 8660, and these titles may provide sufficient protection for their progeny. On average, 63% of the maternal antibodies were transferred to the progeny and lasted up to the second week of chick's life. It is possible to conclude that the vaccine and the vaccination procedure used by this company for breeders against CAV seems to be effective in inducing high antibody levels in the breeders and transfering protective maternal antibodies to the progeny.(AU)

Full-Length Genomic Characterization of Chicken Anemia Virus in Turkey

Chicken infectious anemia (CIA) is an immune-suppressive disease caused by chicken anemia virus (CAV). It is characterized by lymphoid atrophy, aplastic anemia, especially in chicks. In this study, full-length genomic characterization of CAV DNA from the broiler flocks in Turkey and phylogenetic analysis were aimed. In the study, CAV DNA were found positive for 37 (53%) flocks with PCR studies from thymus tissues of each 70 broiler flocks. And 17 purified CAV DNA PCR products from these 37 CAV isolates were full length sequenced with the NGS method (Illumina MiSeq). Also with the phylogenetic analyses, full length PCR products of 17 purified CAV isolates have been determined as 2298bp genome size and 99% similarity with each other. The highest similarity (99%) has been detected with the isolates from China and Taiwan. Furthermore, a 97-98% similarity has been detected with vaccine strains (Cux-1, 26P4 and Del Ros) and also 88-90 % similarity has been detected with GyV4 and GyV3 isolates. As a result, in the study full length genomic characterization of CAV DNA from the 7 regions of Turkey were determined. And also all Turkish CAV isolates and vaccine strains were in group 2 according to the phylogenetic tree were obtained. But these isolates and vaccine strains were not found in the same group with GyV3 and GyV4 strains. Besides, these CAV isolates were showed more similarity to the isolates reported from Taiwan and China than the vaccine strains.(AU)

Full-Length Genomic Characterization of Chicken Anemia Virus in Turkey

Chicken infectious anemia (CIA) is an immune-suppressive disease caused by chicken anemia virus (CAV). It is characterized by lymphoid atrophy, aplastic anemia, especially in chicks. In this study, full-length genomic characterization of CAV DNA from the broiler flocks in Turkey and phylogenetic analysis were aimed. In the study, CAV DNA were found positive for 37 (53%) flocks with PCR studies from thymus tissues of each 70 broiler flocks. And 17 purified CAV DNA PCR products from these 37 CAV isolates were full length sequenced with the NGS method (Illumina MiSeq). Also with the phylogenetic analyses, full length PCR products of 17 purified CAV isolates have been determined as 2298bp genome size and 99% similarity with each other. The highest similarity (99%) has been detected with the isolates from China and Taiwan. Furthermore, a 97-98% similarity has been detected with vaccine strains (Cux-1, 26P4 and Del Ros) and also 88-90 % similarity has been detected with GyV4 and GyV3 isolates. As a result, in the study full length genomic characterization of CAV DNA from the 7 regions of Turkey were determined. And also all Turkish CAV isolates and vaccine strains were in group 2 according to the phylogenetic tree were obtained. But these isolates and vaccine strains were not found in the same group with GyV3 and GyV4 strains. Besides, these CAV isolates were showed more similarity to the isolates reported from Taiwan and China than the vaccine strains.

Experimental coinfection of chicken anemia virus and Mycoplasma gallisepticum vaccine strains in broiler chicks

This study aimed at determining the clinical and pathological effects of the coinfection of young SPF chickens with chicken anemia virus (CAV) and Mycoplasma gallisepticum (MG) vaccine strains. The clinical signs, gross and microscopic lesions were determined after the experimental coinfection broilers with a CAV genotype 1 vaccine strain given intraperitoneally on the first day of age and a MG F-strain vaccine given intranasally on the 8th day of age. The experimental groups included the negative control (group 1), a group infected with the MG F-strain vaccine (group 2), and a group coinfected with CAV and MG vaccines (group 3). Chicks were examined clinically and post mortem at 23 days of age, and gross and microscopic lesions of the trachea, thymus, and air sacs were compared among treatments (Kruskal-Wallis test). Infections were confirmed by PCR for specific genetic fragments of each agent in the target tissues. Mortality was only observed in chicks on group 3, with two deaths and more severe lesions in the trachea, thymus and air sacs compared with groups 1 and 2 (p < 0.01). Dead chicks presented reduced thymus and spleen size, hemorrhagic trachea with catarrhal exudate and partial obstruction, pericarditis, catarrhal airsacculitis, lungs with liquid and ascites. The surviving chicks in group 3 showed more severe respiratory changes than those in group 2, in addition to thymus and spleen size reduction. Results indicate the adverse effects of the coinfection of young chickens with MG F-strain and CAV genotype 1 vaccines.

Experimental coinfection of chicken anemia virus and Mycoplasma gallisepticum vaccine strains in broiler chicks

This study aimed at determining the clinical and pathological effects of the coinfection of young SPF chickens with chicken anemia virus (CAV) and Mycoplasma gallisepticum (MG) vaccine strains. The clinical signs, gross and microscopic lesions were determined after the experimental coinfection broilers with a CAV genotype 1 vaccine strain given intraperitoneally on the first day of age and a MG F-strain vaccine given intranasally on the 8th day of age. The experimental groups included the negative control (group 1), a group infected with the MG F-strain vaccine (group 2), and a group coinfected with CAV and MG vaccines (group 3). Chicks were examined clinically and post mortem at 23 days of age, and gross and microscopic lesions of the trachea, thymus, and air sacs were compared among treatments (Kruskal-Wallis test). Infections were confirmed by PCR for specific genetic fragments of each agent in the target tissues. Mortality was only observed in chicks on group 3, with two deaths and more severe lesions in the trachea, thymus and air sacs compared with groups 1 and 2 (p < 0.01). Dead chicks presented reduced thymus and spleen size, hemorrhagic trachea with catarrhal exudate and partial obstruction, pericarditis, catarrhal airsacculitis, lungs with liquid and ascites. The surviving chicks in group 3 showed more severe respiratory changes than those in group 2, in addition to thymus and spleen size reduction. Results indicate the adverse effects of the coinfection of young chickens with MG F-strain and CAV genotype 1 vaccines.(AU)

ptas

A anemia infecciosa das galinhas(AIG) é uma das mais importantes doenças do sistema imune de galinhas domésticas.Por muito tempo, as doenças anêmico-hemorrágicas foram pouco entendidas,com confusões nas descrições das patogenias da anemia infecciosa,da doença infecciosa bursal e das adenoviroses,possivelmente em razão de as infecções naturais serem comumente combinadas [11]. Outras doenças hemorrágicas e que afetam o sistema imune e a medula óssea, como as micotoxicoses,muitas vezes associadas às infecções virais, agravam o quadro patológico.Em 1979, no Japão, entretanto,com a descrição do vírus da anemia infecciosa das galinhas (CAV), inicia-se o esclarecimento da importante doença[14]. O CAV pode ter estado envolvidona maioria dos episódios de doença anêmico-hemorrágica de etiologia infecciosa descrita antes de sua descoberta.

Detecção e caracterização molecular do vírus da Anemia Infecciosa das Galinhas em frangos de corte de criação de subsistência e industrial no Estado do Rio de Janeiro

A Anemia Infecciosa das Galinhas é uma enfermidade aguda e contagiosa que leva a imunossupressão em aves jovens. Sendo uma doença de grande impacto no setor avícola afetando a taxa de crescimento proporcionando uma grande desuniformidade do lote, além da capacidade de associação do agente etiológico com outras doenças imunossupressoras. O vírus da Anemia Infecciosa das Galinhas (vAIG), apresenta um material genético de natureza DNA, constituído por 3 moléculas proteicas que são componentes cruciais para o entendimento do comportamento do vírus. O objetivo deste estudo foi realizar detecção a caracterização molecular do gene VP1 do vAIG a partir de amostras de frangos de corte em granjas industriais e de subsistência do estado do Rio de Janeiro, Brasil. O vAIG foi detectado através da PCR (Polymerase Chain Reaction) convencional, em diferentes órgãos, como: timo, baço, fígado, tonsila cecal e Bursa de fabrícius. A partir de 60 aves amostradas (30 de granja industrial e 30 de subsistência) foi possível detectar a presença do vAIG em 21,6% (n=13/60). Nas granjas de criação de subsistência observou-se uma frequência de 20% (n=6/30), enquanto nas granjas de criação industrial a frequência foi de 23,33% (n=7/30) (p>0,05). O vírus foi mais frequentemente detectado no timo e no baço (21,6%, n=13/60), tanto em granjas de criação industrial como nas de criação de subsistência. Vale ressaltar que em nenhuma das granjas avaliadas as aves foram vacinadas contra o vAIG. Subsequentemente, duas amostras positivas do sistema de criação de subsistência e duas do sistema industrial foram sequenciadas e comparadas com outras sequências disponíveis no GenBank para o estudo da diversidade genética de estirpes virais. A análise filogenética demonstrou que as amostras 12 e 13 - Criação de Subsistência e as amostras 31 e 36 - Criação de Industrial foram agrupadas em um único clado, o que revela que as cepas são filogeneticamente relacionadas. Os resultados apresentados neste estudo nos permitem concluir que o vAIG circula em granjas de criação industrial e de subsistência no estado do Rio de Janeiro. Contudo, não se pode afirmar que as aves criações de subsistência são fontes de infecção para as granjas industriais. O monitoramento utilizando ferramentas moleculares para detecção do vAIG em granjas industriais é de extrema relevância para a avaliar se os métodos de prevenção estão sendo eficientes para evitar a introdução do vírus.

Chicken Infectious Anemia is an acute and contagious disease that leads to immunosuppression in young birds. Being a disease of great impact in the poultry sector, affecting the growth rate, providing a great non-uniformity of the flock, besides the capacity of association of the etiologic agent with other immunosuppressive diseases. The Chicken Infectious Anemia virus (CIAV) has a genetic material of ADN nature, consisting of 3 protein molecules that are crucial components for understanding the behavior of the virus. The objective of this study was to detect the molecular characterization of the CIAV VP1 gene from samples of broilers in industrial and subsistence farms in the state of Rio de Janeiro, Brazil. CIAV was detected using conventional PCR (Polymerase Chain Reaction), in different organs, such as: thymus, spleen, liver, cecal tonsil and bursa of Fabricius. From 60 sampled birds (30 from industrial farm and 30 from subsistence) it was possible to detect the presence of CIAV in 21.6% (n = 13/60). In livestock farms, a frequency of 20% (n = 6/30) was observed, while in industrial farms the frequency was 23.33% (n = 7/30) (p> 0.05). The virus was most frequently detected in the thymus and spleen (21.6%, n = 13/60), both in industrial and livestock farms. It is worth mentioning that in none of the evaluated farms the birds were vaccinated against CIAV. Subsequently, two positive samples from the livelihood system and two from the industrial system were sequenced and compared with other sequences available from GenBank to study the genetic diversity of viral strains. Phylogenetic analysis showed that samples 12 and 13 - Subsistence Creation and samples 31 and 36 - Industrial Creation were grouped into a single clade, which reveals that the strains are phylogenetically related. The results presented in this study allow us to conclude that CIAV circulates in farms of industrial creation and subsistence in the state of Rio de Janeiro. However, it cannot be said that livestock livestock are sources of infection for industrial farms. Monitoring using molecular tools for the detection of CIAV in industrial farms is extremely important to assess whether prevention methods are being effective in preventing the introduction of the virus.

Doença infecciosa bursal

A doença infecciosa bursal (DIB),também conhecida como doença de Gumboro, em referência à cidade dos Estados Unidos (no estado de Delaware) onde foi descrita pela primeira vez, é uma das principais doenças a comprometer a imuno competência em aves. A doença atinge principalmente abolsa cloacal (BC), outro nome para a bolsa de Fabricius, destruindo oslinfoblastos B, precursores dos plasmócitos,estes responsáveis pela síntese de anticorpos.A doença é importante pela alta morbidade, alta a moderada mortalidade,imunodepressão por perda na diversidade de linhagens de linfócitos B e redução da viabilidade das aves industriais, com aumento da condenação por oportunismo infeccioso. A DIB está em muitos casos naturais, em infecção associada à anemia infecciosa das galinhas, causada por um circovírus que atinge linfócitos T(timo). As coinfecções,inclusive com outros vírus, como adenovírus e reovírus, e bactérias,como Escherichia coli e Clostridium, resultam em maior comprometimento das funções sistêmicas e do sistema imune, com maior morbidade,maior mortalidade e maior perda da imunocompetência.

Doença infecciosa bursal

A doença infecciosa bursal (DIB),também conhecida como doença de Gumboro, em referência à cidade dos Estados Unidos (no estado de Delaware) onde foi descrita pela primeira vez, é uma das principais doenças a comprometer a imuno competência em aves. A doença atinge principalmente abolsa cloacal (BC), outro nome para a bolsa de Fabricius, destruindo oslinfoblastos B, precursores dos plasmócitos,estes responsáveis pela síntese de anticorpos.A doença é importante pela alta morbidade, alta a moderada mortalidade,imunodepressão por perda na diversidade de linhagens de linfócitos B e redução da viabilidade das aves industriais, com aumento da condenação por oportunismo infeccioso. A DIB está em muitos casos naturais, em infecção associada à anemia infecciosa das galinhas, causada por um circovírus que atinge linfócitos T(timo). As coinfecções,inclusive com outros vírus, como adenovírus e reovírus, e bactérias,como Escherichia coli e Clostridium, resultam em maior comprometimento das funções sistêmicas e do sistema imune, com maior morbidade,maior mortalidade e maior perda da imunocompetência.

The occurrence of Orthoreovirus, Rotavirus and chicken anemia virus in chickens of the poultry industry in Minas Gerais, Brazil / Ocorrência de Orthoreovirus, Rotavirus e vírus da anemia das galinhas em frangos de corte da indústria avícola de Minas Gerais

Fifty-four fecal samples taken from broiler chickens from 1 to 45 days of age, and of pullets from 10 to 13 weeks of age, original from eight different poultry regions in the state of Minas Gerais, Brazil, were collected from March 2008 to January 2010 for avian Orthoreovirus (ARV) and avian Rotavirus (AvRV) analyses. For the assay of ARV, RNA was immediately extracted (Trizolâ) and transcribed into cDNA for assaying in a nested-PCR with ARV-specific primers. For AvRV, polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) was performed with RNA extracts obtained by phenol-chloroform extraction. CAV was additionally investigated through a nested-PCR of thymus and spleen. Results found 5.55% positive for ARV and 9.25% for AvRV. Also, CAV and ARV genomes were detected in co-infection, in a highly prostrated and claudicating chicken flock. No ARV or AvRV infections were detected in pullets. Material of a clinically affected flock was inoculated into SPF embryos, resulting in embryonic hemorrhage, whitish foci in the chorio-allantoic membrane and death. Sequencing of ARV amplicons and isolate cDNA grouped local strains with the ARV S1133 strain, historically used in live vaccines, suggesting the continued circulation of this vaccine virus strain in intensive poultry regions. Detection rates for ARV and AvRV, as well as the presence of CAV, were additionally indicative of failing biosecurity strategies for the intensive poultry regions examined.(AU)

Avaliou-se a ocorrência de Orthoreovirus (ARV) e Rotavirus (AvRV) aviários na avicultura industrial de Minas Gerais. Foram colhidas cinquenta e quatro amostras de fezes de frangos de corte entre um e 45 dias e de frangas de postura de 10 a 13 semanas de idade. Para análise de ARV, o RNA foi imediatamente extraído (Trizol), transcrito em cDNA e avaliado em uma PCR com oligonucleotídeos iniciadores específicos para ARV. Para a investigação de AvRV, os extratos de RNA foram obtidos por fenol-clorofórmio e submetidos à eletroforese em gel de poliacrilamida. Todas as amostras foram também avaliadas para o DNA do vírus da anemia das galinhas (CAV) em uma nested-PCR específica. Em frangos de corte, a positividade encontrada para ARV foi de 5,55% e para AvRV de 9,25%. CAV foi detectado em coinfecção em um plantel com refugagem, claudicação e prostração. Nenhuma amostra de poedeiras foi positiva para ARV ou AvRV. Material de plantel com sinais clínicos foi purificado e inoculado em ovos SPF embrionados, sendo obtidas lesões hemorrágicas e focos brancos na membrana cório-alantóide. O sequenciamento dos produtos de PCR e de embrião agrupou os isolados de ARV com a estirpe S1133, historicamente usada como vacina viva. Os resultados sugerem a continuada circulação da infecção por estirpes assemelhadas a ARV S1133 nas regiões de avicultura industrial. Os índices de detecção de ARV, AvRV e CAV indicam que a intensificação nas regiões produtoras tem resultado em falhas de biosseguridade.(AU)

Engenharia genética das proteinas VP1 e VP2 do vírus da anemia infecciosa das galinhas em diferentes linhagens de Escherichia Coli em vetor único de expressão.

O Brasil destaca-se como grande produtor de proteína animal, sendo segundo maior produtor mundial de carne de frango. Dentre as doenças imunossupressoras das aves, destaca-se a causada pelo vírus da Anemia Infecciosa das Galinhas (Chicken Anemia Vírus, CAV), a qual estudos demonstram que o CAV acomete criações comerciais e de subsistência em várias partes do mundo. Aumento na mortalidade, redução no ganho de peso, anemia são alguns sinais clínicos encontrados em aves jovens. A predisposição à ocorrência de doenças secundárias, assim como falhas vacinais, pode ocorrer quando o animal é acometido pelo CAV. Diversos trabalhos abordam a produção das proteínas de CAV em Escherichia coli porém pela VP1 ser considerada tóxica para a bactéria, diversas dificuldades tem sido enfrentadas na sua produção. Porém o sucesso na expressão e produção das mesmas é interessante pois atualmente as vacinas disponíveis no mercado contra infecção por CAV, apesar de atenuadas, não são totalmente apatogênicas e podem atuar como fator predisponente de outras infecções. Dessa forma a proposta desse trabalho foi isolar e clonar VP1 e VP2 e posteriormente produzir clones em diferentes linhagens comerciais de Escherichia coli com VP1 e VP2 de CAV para análise de expressão das mesmas e futura utilização do produto de expressão como potencial vacina de componentes em aves de produção. Apenas a linhagem SHUFFLE apresentou uma banda na altura esperada para VP1 indicando a possibilidade de seu uso para expressar as proteínas de CAV. Futuros estudos deverão ser realizados para confirmar o resultado da expressão e sua inoculação in vivo para ensaios imunológicos

Brazil stands out as a major producer of animal protein, being the second largest producer of chicken meat in the world. Among the immunosuppressive diseases of poultry, the Chicken Anemia Virus (CAV) virus attacks commercial and subsistence flocks in several parts of the world. An increase in mortality, reduction in weight gain, anemia are some clinical signs found in young birds. The predisposition to the occurrence of secondary diseases, as well as vaccine failures, can occur when the animal is affected by CAV. Several studies deal with the production of CAV proteins in Escherichia coli, but because VP1 is considered to be toxic to the bacteria, several difficulties have been encountered in its production. However, the success in the expression and production of these vaccines is interesting because currently the vaccines available in the market against CAV infection, although attenuated, are not totally apathogenic and may act as a predisposing factor for other infections. Thus the proposal of this work was to isolate and clone VP1 and VP2 and later to produce clones in different commercial strains of Escherichia coli with VP1 and VP2 of CAV for analysis of their expression and future use of the expression product as a potential component vaccine in birds of production. Only the SHuffle strain presented a band at the expected weight for VP1 indicating the possibility of its use to express the CAV proteins. Future studies should be performed to confirm the outcome of the expression and its in vivo inoculation for immunological assays.

A retrospective PCR investigation of avian Orthoreovirus, chicken infectious anemia and fowl Aviadenovirus genomes contamination in commercial poultry vaccines in Brazil / Estudo retrospectivo de vacinas avícolas vivas por PCR para os vírus da anemia das galinhas, Aviadenovirus aviário e Orthoreovirus aviário

Vacinas avícolas vivas comerciais produzidas entre 1991 e 2005 foram examinadas para a presença de genomas dos vírus da anemia infecciosa das galinhas (Gyrovirus CAV), da hepatite por corpúsculo de inclusão (Aviadenovirus FAdV) e da artrite viral/síndrome da má absorção (Orthoreovirus aviário ARV). Vinte e seis partidas de vacinas vivas liofilizadas de oito fabricantes com lacre original foram examinadas. As extrações de DNA e PCR de CAV e FAdV, e de RNA e RT-PCR para ARV, foram descritas previamente. Contaminações triplas de ARV, CAV e FAdV foram detectadas em vacinas de mesmo fabricante, produzidas em 1991 e 1992 contra a doença de Newcastle (DN), e para a encefalomielite aviária, produzida em 1994. ARV e CAV em co-infecção foram encontrados em vacinas contra a doença de Marek liofilizadas produzidas em 1996 por dois fabricantes diferentes. Genoma de ARV foi detectado em vacinas contra a bronquite infecciosa de setembro e dezembro de 1998, doença infecciosa bursal, de dezembro de 1998 e DN de janeiro de 1998. Três dos oito fabricantes apresentaram vacinas com contaminação e cinco nunca apresentaram vacinas contaminadas. Nenhuma vacina produzida a partir de 2001 apresentou contaminação. Cogita-se um papel epidemiológico para vacinas vivas, como fonte de infecção para ARV, CAV e FAdV e, potencialmente determinante da atual alta disseminação destes.(AU)

Detection of chicken anemia virus and infectious bursal disease virus co-infection in broilers / Detecção do virus da anemia das galinhas em coinfecção com o vírus doença infecciosa bursal em frangos

This survey aimed to investigate chicken anemia virus (CAV) in broilers flocks experimenting retarded growth and increasing mortality since the fourth day of age. Clinically, chickens presented depression, paleness, depigmentation and retarded growth. At necropsy, chickens presented CAV-compatible lesions. Samples from liver, spleen and thymus were tested by PCR for a 675-bp fragment of the CAV VP-1 gene, and all tested samples were positive. Serological and molecular techniques did not detect other pathogens, such as adenovirus, reovirus, astrovirus, infectious bursal disease and avian infectious bronchitis virus. These results showed that chicken anemia virus (CAV) may occur since the first few days of life in broilers - a fact not as yet reported -, associated with high pathogenic Infectious Bursal Disease Virus (IBDV) vaccine strain may induce a persistent growth retarded for several weeks in broilers.(AU)

Este estudo investigou a manifestação do vírus da Anemia Infecciosa das Aves (VAIA) em lotes de frangos que apresentavam retardo no crescimento e aumento da mortalidade observado a partir do quarto dia de idade. Clinicamente, as aves apresentavam depresão, palidez, despigmentação e retardo de crescimento. À necropsia, as aves apresentavam lesões compatíveis com a infecção pelo vírus da Anemia infecciosa das aves (VAIA). Amostras de fígado, baço e timo foram examinadas por PCR que amplifica um frangmento de 675 pb do gene VP-1 do VAIA. Todos os órgãos examinados foram positivos para o vírus da Anemia Infecciosa das Aves. Os demais patógenos, como adenovírus, reovírus, astrovírus, vírus da doença infecciosa bursal e coronavírus aviário não foram detectados pelas diferentes técnicas laboratoriais, como sorologia, PCR ou PAGE. Os resultados mostraram que o vírus da Anemia Infecciosa das Aves (VAIA) pode manifestar-se clinicamente nos primeiros dias de vida dos frangos um fato ainda não reportado associado ao vírus vacinal da doença infecciosa bursal (DIB) cepa forte pode induzir um persistente retardo de crescimento, por várias semanas, em frangos.(AU)

DETECÇÃO DE CIRCOVÍRUS E ANÁLISE FILOGENÉTICA DE AGV2 EM FRANGOS DE CORTE

YAMAKAWA, Flavia H. S.Detecção de Circovírus e análise filogenética de AGV2 em frangos de corte. 2015. 60f. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal Área: Sanidade Animal) Universidade do Estado de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal, Lages, 2015. O vírus da anemia das galinhas (CAV) é um importante vírus pertencente a família Circoviridae, gênero Girovirus, conhecido por levar a perdas significativas na avicultura, este vírus pode causar imunossupressão e doença principalmente em aves jovens. O CAV era o único vírus desta família conhecido por infectar galinhas até 2011, após a descoberta de um novo vírus, o Girovírus Aviário tipo 2 (AGV2). Segundo consta na literatura, o AGV2 está estreitamente relacionado ao CAV, além de estar amplamente distribuído em frangos no Brasil e em outros países, mas seu potencial patogênico ainda é desconhecido e trabalhos sobre sua epidemiologia molecular ainda são bastante escassos. Assim, o presente trabalho teve por objetivo realizar a detecção de CAV (Nested-PCR), e AGV2 (PCR) em amostras de DNA extraídas de tecido do timo, de aves alojadas em plantéis de frango de corte de dois estados da região Sul do Brasil. Além disso, realizar a análise filogenética de amostras positivas para AGV2. Os resultados apontaram que das 180 aves testadas 105 (58,33%)foram positivas para CAV e 39 (21,67%) positivas para AGV2. Do material positivo para AGV2 foram selecionados onze amplicons para sequenciamento e análise filogenética, onde foi possível evidenciar que não houve diferenças entre o material analisado. As sequências obtidas foram comparadas com amostras provenientes de outros países, muitas destas detectadas em humanos (HGyV), não tendo sido possível, no presente trabalho, observar correlação entre distribuição geográfica e variabilidade genética entre a maioria das amostras de AGV2 ora estudadas.

YAMAKAWA, Flavia H. S.Circovirus detection and AGV2 phylogenetic analysis in broiler chicken. 2015. 60p. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal Área: Sanidade Animal) Universidade do Estado de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal, Lages, 2015. Chicken anemia virus (CAV) is an important virus that belongs to Circoviridae family, Gyrovirus genre, known to lead to significant losses in poultry, the viruses can cause immunosuppression and disease especially in young birds. CAV was the only virus of this family known to infect chickens by 2011, after the discovery of a new virus, the Avian Gyrovirus type 2 (AGV2). According to the literature, AGV2 is closely related to CAV, as well as being widely distributed in chickens in Brazil and other countries, but its pathogenic potential is unknown and studies on molecular epidemiology are still scarce. The present study aimed to detect CAV (Nested-PCR), and AGV2 (PCR) on DNA extracted from samples of thymus tissue of broiler chickens housed on two states of southern Brazil. In addition, perform phylogenetic analysis of AGV2 positive samples. Results showed that of 180 birds tested, 105 (58.33%) were positive for CAV and 39 (21.67%) positive for AGV2. On the positive material for AGV2 were selected eleven amplicons for sequencing and phylogenetic analysis, where it became clear that there were no differences among the samples. The sequences obtained were compared with samples from other countries, many of these detected in humans (HGyV). It was not possible in the present work, observe correlation between geographical distribution and genetic variability among most samples AGV2 now studied.

DETECÇÃO E ANÁLISE GENÔMICA DO VÍRUS DA ANEMIA INFECCIOSA DAS GALINHAS (CAV) E DO GIROVÍRUS AVIÁRIO 2 (AGV2)

O vírus da anemia infecciosa das galinhas (CAV) é um vírus pequeno, não-envelopado, com genoma circular de DNA simples fita. O vírus foi identificado pela primeira vez em 1979 no Japão e, por mais de 30 anos era o único girovírus conhecido por infectar aves. Em 2011, um novo girovírus, denominado girovírus aviário 2 (AGV2) foi identificado em soros de aves apáticas e com perda de peso. Posteriormente, genoma desse novo vírus foi identificado em aves saudáveis, bem como aves com sinais clínicos neurológicos. Especula-se que o AGV2 esteja mundialmente disseminado nos rebanhos avícolas, uma vez que genoma viral tem sido identificado em países geograficamente distantes. Tal identificação de AGV2 tem sido baseada em testes moleculares qualitativos. Dessa forma, no primeiro estudo realizado, foi desenvolvida uma duplex PCR em tempo real (dqPCR) visando detectar e quantificar simultaneamente genomas de CAV e AGV2. O ensaio mostrou ser sensível, específico e reproduzível, permitindo a detecção de no mínimo 5 cópias de genoma de CAV e 50 cópias de AGV2. Além disso, a dqPCR foi mais sensível que a técnica convencional quando aplicada para detecção destes agentes em amostras biológicas. O ensaio foi também utilizado para avaliar a presença de genomas de CAV e AGV2 em vacinas comerciais frequentemente utilizadas na avicultura. Trinta e cinco vacinas comerciais produzidas contra diferentes agentes patogênicos de aves foram analisadas. Os resultados obtidos mostram a presença de genoma de ambos os girovírus nas vacinas e enfatizam a importância da investigação aprofundada destes agentes em imunógenos. Adicionalmente, visando ampliar o conhecimento sobre o AGV2, dois estudos envolvendo análise genômica (parcial ou completa) foram realizados. Em um dos estudos, possíveis variações na sequência que codifica a proteína viral 1 (VP1) foram investigadas em amostras coletadas de aves com distintos status sanitários. Para tanto, penas coletadas de aves saudáveis e fígados provenientes de aves com apatia e baixo ganho de peso foram submetidos à extração de DNA e amplificação da região que codifica a VP1. Os produtos amplificados foram sequenciados e filogeneticamente analisados. Análise filogenética à nível de aminoácido deduzido permitiu a subdivisão das sequências de AGV2 em dois grupos maiores relacionados ao distinto status sanitário. Esses resultados podem estar associados à ocorrência de variantes do vírus, bem como à patogenicidade. Por fim, outro estudo foi realizado com o objetivo de detectar e caracterizar genomas de AGV2 presente em aves na Itália. Cem soros foram coletados de aves comerciais, aparentemente saudáveis, oriundas de 10 propriedades da região do Vêneto. As amostras de soro foram submetidas à extração de DNA e à detecção de AGV2 utilizando PCR. DNA viral foi identificado em 5 das 10 propriedades analisadas. Assim, um DNA extraído de soro representante de cada propriedade foi selecionado e submetido à amplificação do genoma completo de AGV2, sequenciamento e análise filogenética. Foi obtida uma sequência genômica completa e quatro sequências parciais do genoma. Os genomas aqui identificados apresentaram organização genômica igual aos demais girovirus conhecidos, com exceção dos girovírus 4 e 5. Além disso, a análise filogenética realizada mostrou que AGV2 e HGyV são filogeneticamente relacionados e formam um grupo distinto dentro do gênero Gyrovirus.

Chicken anemia virus (CAV) is a small, non-enveloped, circular single-stranded DNA virus. The virus was first identified in 1979 in Japan and, for more than 30 years, it was the only gyrovirus known to infect chickens. In 2011, a new gyrovirus, named Avian gyrovirus 2 (AGV2), was identified in sera from chicken displaying apathy and weight loss. Posteriorly, genome of this new gyrovirus was detected in healthy chickens as well as in chickens displaying neurological signs. It was speculated that AGV2 may have a widespread global distribution in poultry flocks, since its viral genome has been identified in geographical distant countries. The AGV2 identification has been based on the qualitative molecular tests. In this sense, in the first study performed, a duplex real-time PCR (dqPCR) was developed in order to detect and quantify, simultaneously, genomes of CAV and AGV2. The assay proved to be sensitive, specific and reproducible, allowing detection of a minimum of 5 copies of CAV and 50 copies of AGV2 genomes. Moreover, the dqPCR was more sensitive than conventional assay when applied for the detection of these agents in biological samples. The assay was also used to evaluate the presence of CAV and AGV2 genomes in commercially vaccines frequently used by poultry farming. Thirty five commercially vaccines produced against several avian pathogens were examined. The results obtained showed the presence of both gyroviruses genomes in vaccines and emphasize the importance of the further investigation about these agents in immunogens. In addition, in order to enhance understanding about AGV2, two other studies involving genomic analysis (partial or complete) were performed. One of the studies was carried out to investigate variations in the gene coding the viral protein 1 (VP1) from chickens samples with distinct healthy status. Thus, feathers collected from apparently healthy chickens and liver tissues collected from chickens displaying signs of apathy and low weight gain were submitted to DNA extraction and amplification of the genomic region that codes VP1. The amplification products were sequenced and phylogenetically analyzed. Phylogenetic analysis at predicted amino acid level allowed subdivision of AGV2 sequences in two major groups associated with healthy status. These findings may reflect to existence of variants of AGV2, as well as may have correlation with pathogenicity of virus. Lastly, an additional study was performed to detect and to characterize AGV2 genomes present in chicken from Italy. One-hundred serum samples were collected from healthy commercial chickens from 10 poultry farms. Serum samples were submitted to DNA extraction and to AGV2 detection by PCR. Viral DNA was identified in 5 out of 10 farms sampled. So, one DNA sample representative of each farm was selected and submitted to AGV2 complete genome amplification, sequencing and phylogenetic analysis. It was recovered one complete genome and four partial AGV2 genomes (about 83%). The genomes here identified have the same genomic organization of others gyroviruses, with exception to gyrovirus 4 and 5. Moreover, phylogenetic analysis revealed that AGV2 and human gyrovirus are phylogenetically related and form a distinct group within the Gyrovirus genus.

Diverse uses of feathers with emphasis on diagnosis of avian viral infections and vaccine virus monitoring

The large amounts of feathers produced by the poultry industry, that is considered as a waste was explored for possible uses in various industries, such as meals for animals, biofuels, biodegradable plastic materials, combating water pollution and more. That review mentions these uses, but concentrate on the utilization of feathers for the diagnosis of viral infections and for monitoring vaccine viruses in chickens after vaccination. The viral diseases in which diagnosis using nucleic acids extracted from the feather shafts was described are, Marek's disease virus, circoviruses, chicken anemia virus, fowlpox virus, avian retroviruses, avian influenza virus and infectious laryngotracheitis virus. In two cases, of Marek's disease virus and of infectious laryngotracheitis virus, the differentiation of vaccine and wild-type viruses from feather shafts was made possible, thus allowing for monitoring the vaccination efficacy. The present review demonstrates also the stability of DNA viruses in feather shafts, and the possible evaluation of environmental dissemination of pathogens. When viruses are transmitted vertically, like in the cases of the retrovirus REV, a teratogenic effect on the development of feathers of the day-old newly hatched chick might occur in the case of avian influenza and the chicken anemia virus, which might indicate on a viral infection.

Diverse uses of feathers with emphasis on diagnosis of avian viral infections and vaccine virus monitoring

The large amounts of feathers produced by the poultry industry, that is considered as a waste was explored for possible uses in various industries, such as meals for animals, biofuels, biodegradable plastic materials, combating water pollution and more. That review mentions these uses, but concentrate on the utilization of feathers for the diagnosis of viral infections and for monitoring vaccine viruses in chickens after vaccination. The viral diseases in which diagnosis using nucleic acids extracted from the feather shafts was described are, Marek's disease virus, circoviruses, chicken anemia virus, fowlpox virus, avian retroviruses, avian influenza virus and infectious laryngotracheitis virus. In two cases, of Marek's disease virus and of infectious laryngotracheitis virus, the differentiation of vaccine and wild-type viruses from feather shafts was made possible, thus allowing for monitoring the vaccination efficacy. The present review demonstrates also the stability of DNA viruses in feather shafts, and the possible evaluation of environmental dissemination of pathogens. When viruses are transmitted vertically, like in the cases of the retrovirus REV, a teratogenic effect on the development of feathers of the day-old newly hatched chick might occur in the case of avian influenza and the chicken anemia virus, which might indicate on a viral infection.

Occurrence of chicken anemia virus in backyard chickens of the metropolitan region of Belo Horizonte, Minas Gerais

The occurrence of CAV in backyard chickens in the metropolitan area of Belo Horizonte, Brazil, was evaluated. The spleen and thymus of chickens from different origins were collected for DNA extraction and nested-PCR. CAV genome was detected in 30% of the flocks (n=20) examined. CAV origin for backyard chickens is speculated, taking into consideration its widespread incidence in the chicken industry, the contamination of live vaccines with CAV prior to its eradication from SPF flocks, and the use of attenuated CAV vaccines.