Characterization of coccidiosis and evaluation of suggestive cases of subclinical necrotic enteritis in broilers / Caracterização de coccidiose e avaliação de casos sugestivos de enterite necrótica subclínica em frangos de corte

This study performed the characterization of coccidiosis in broilers and evaluated the occurrence of suggestive cases of necrotic enteritis (NE), seeking if there is an association between the diseases in Brazilian flocks. Two hundred and fifty-six birds from 32 flocks were evaluated. Macroscopic and histopathological lesions were graduated for coccidiosis and NE. Intestinal content was investigated by polymerase chain reaction (PCR) for seven species of Eimeria and by selective anaerobic culture for Clostridium perfringens and identification of the NetB gene. Flocks positive for coccidiosis represented 93.8%. Macroscopic lesions of coccidiosis were Grade 1 for E. acervulina (27%); E. tenella (9.7%) and E. maxima (8.9%). Histopathological evaluation showed Grade 1 in duodenum (38.2%); jejunum (21.4%); cecum (9.3%) and ileum (5%). PCR demonstrated positivity for E. tenella (21.9%), E. maxima (18.8%), and E. acervulina (3.1%). Suggestive macroscopic lesions of necrotic enteritis ranged from Grade 1 (16%), 2 (23%) and 3 (10,9%). Histopathology indicated the absence of necrosis, showing only hemorrhage in the mucosa and submucosa, with the presence of Eimeria spp. Clostridium perfringens type A netB+ was not isolated, demonstrating that macroscopic lesions found mostly in the jejunum did not characterize NE, based on histopathology and negativity of the NetB gene. The study suggests that, due to the high occurrence of coccidiosis, many macroscopic findings suggestive of NE are, in fact, attributed to atypical lesions caused by the reproduction of Eimeria spp.

Este estudo realizou a caracterização de coccidiose em frangos de corte e avaliou a ocorrência de casos sugestivos de enterite necrótica (EN), buscando se há alguma associação entre estas duas enfermidades em lotes de frango de corte no Brasil. Foram avaliadas 256 aves de 32 lotes. Lesões macroscópicas e histopatológicas foram graduadas para coccidiose e EN. O conteúdo intestinal foi investigado por reação em cadeia da polimerase (PCR) para sete espécies de Eimeria e por cultura anaeróbia seletiva para Clostridium perfringens e identificação do gene NetB. Os lotes positivos para coccidiose representaram 93,8%. Lesões macroscópicas de coccidiose foram de Grau 1 para E. acervulina (27%); E. tenella (9,7%) e E. maxima (8,9%). A avaliação histopatológica mostrou Grau 1 no duodeno (38,2%); jejuno (21,4%); ceco (9,3%) e íleo (5%). A PCR demonstrou positividade para E. tenella (21,9%), E. maxima (18,8%) e E. acervulina (3,1%). Lesões macroscópicas sugestivas de enterite necrótica variaram de grau 1 (16%), 2 (23%) e 3 (10,9%). A histopatologia indicou ausência de necrose, apresentando apenas hemorragia em mucosa e submucosa, com presença de Eimeria spp. Clostridium perfringens tipo A netB + não foi isolado, demonstrando que lesões macroscópicas encontradas principalmente no jejuno não caracterizaram NE, com base na histopatologia e negatividade do gene NetB. O estudo sugere que, em virtude da alta ocorrência de coccidiose nos lotes, muitos achados macroscópicos sugestivos de EN são, na verdade, atribuídos a lesões atípicas provocadas pela reprodução de Eimeria spp.

Necrohemorrhagic enteritis outbreak in a cattle feedlot in Nova Crixás, Goiás, Brazil / Surto de enterite necro-hemorrágica em um confinamento de bovinos no município de Nova Crixás, Goiás, Brasil

This study described an outbreak of necrohemorrhagic enteritis in a beef cattle feedlot in Nova Crixás, State of Goiás, Brazil, with emphasis on epidemiological, lesional, and laboratory aspects. Visits to the property were carried out and a necroscopic examination was performed on the bovine cadavers (N=57), which presented similar macroscopic alterations. Epidemiological data were collected, mainly referring to the feeding management of animals, and tissue samples were submitted to histopathological examination. Samples of feces and intestinal contents were also collected for bacterial isolation and PCR genotyping to detect the etiological agent, being confirmed Clostridium perfringens type A strains in 100% of the samples. Furthermore, 33.3% of strains isolated from intestinal contents and 40% of those isolated from feces were positive for beta-2 encoding gene. Considering the history, macroscopic and microscopic findings, as well as bacterial isolation and PCR, the diagnosis of bovine necrohemorrhagic enteritis was determined.(AU)

Descreve-se um surto de enterite necro-hemorrágica em um confinamento de bovinos de corte no município de Nova Crixás, Estado de Goiás, Brasil, com ênfase nos aspectos epidemiológicos, lesionais e laboratoriais. Foram realizadas visitas à propriedade e todos os cadáveres bovinos (N=57) foram submetidos ao exame necroscópico, os quais apresentaram alterações macroscópicas semelhantes. Foram compilados dados epidemiológicos, sobretudo referentes ao manejo alimentar dos animais e amostras de tecido foram submetidas a exame histopatológico. Foram colhidas, também, amostras de fezes e conteúdo intestinal para isolamento bacteriano e genotipagem por PCR para detecção do agente etiológico, sendo confirmadas estirpes de Clostridium perfringens tipo A em 100% das amostras. Ainda, 33,3% das cepas de Clostridium perfringens isoladas no conteúdo intestinal e 40% daquelas isoladas nas fezes foram positivas para o gene codificador da toxina beta-2. Considerando o histórico, os achados macroscópicos e microscópicos, o isolamento bacteriano e o PCR, foi estabelecido o diagnóstico de enterite necro-hemorrágica por C. perfringens tipo A.(AU)

Necrohemorrhagic enteritis outbreak in a cattle feedlot in Nova Crixás, Goiás, Brazil / Surto de enterite necro-hemorrágica em um confinamento de bovinos no município de Nova Crixás, Goiás, Brasil

This study described an outbreak of necrohemorrhagic enteritis in a beef cattle feedlot in Nova Crixás, State of Goiás, Brazil, with emphasis on epidemiological, lesional, and laboratory aspects. Visits to the property were carried out and a necroscopic examination was performed on the bovine cadavers (N=57), which presented similar macroscopic alterations. Epidemiological data were collected, mainly referring to the feeding management of animals, and tissue samples were submitted to histopathological examination. Samples of feces and intestinal contents were also collected for bacterial isolation and PCR genotyping to detect the etiological agent, being confirmed Clostridium perfringens type A strains in 100% of the samples. Furthermore, 33.3% of strains isolated from intestinal contents and 40% of those isolated from feces were positive for beta-2 encoding gene. Considering the history, macroscopic and microscopic findings, as well as bacterial isolation and PCR, the diagnosis of bovine necrohemorrhagic enteritis was determined.(AU)

Descreve-se um surto de enterite necro-hemorrágica em um confinamento de bovinos de corte no município de Nova Crixás, Estado de Goiás, Brasil, com ênfase nos aspectos epidemiológicos, lesionais e laboratoriais. Foram realizadas visitas à propriedade e todos os cadáveres bovinos (N=57) foram submetidos ao exame necroscópico, os quais apresentaram alterações macroscópicas semelhantes. Foram compilados dados epidemiológicos, sobretudo referentes ao manejo alimentar dos animais e amostras de tecido foram submetidas a exame histopatológico. Foram colhidas, também, amostras de fezes e conteúdo intestinal para isolamento bacteriano e genotipagem por PCR para detecção do agente etiológico, sendo confirmadas estirpes de Clostridium perfringens tipo A em 100% das amostras. Ainda, 33,3% das cepas de Clostridium perfringens isoladas no conteúdo intestinal e 40% daquelas isoladas nas fezes foram positivas para o gene codificador da toxina beta-2. Considerando o histórico, os achados macroscópicos e microscópicos, o isolamento bacteriano e o PCR, foi estabelecido o diagnóstico de enterite necro-hemorrágica por C. perfringens tipo A.(AU)

Necrohemorrhagic enteritis outbreak in a cattle feedlot in Nova Crixás, Goiás, Brazil

ABSTRACT: This study described an outbreak of necrohemorrhagic enteritis in a beef cattle feedlot in Nova Crixás, State of Goiás, Brazil, with emphasis on epidemiological, lesional, and laboratory aspects. Visits to the property were carried out and a necroscopic examination was performed on the bovine cadavers (N=57), which presented similar macroscopic alterations. Epidemiological data were collected, mainly referring to the feeding management of animals, and tissue samples were submitted to histopathological examination. Samples of feces and intestinal contents were also collected for bacterial isolation and PCR genotyping to detect the etiological agent, being confirmed Clostridium perfringens type A strains in 100% of the samples. Furthermore, 33.3% of strains isolated from intestinal contents and 40% of those isolated from feces were positive for beta-2 encoding gene. Considering the history, macroscopic and microscopic findings, as well as bacterial isolation and PCR, the diagnosis of bovine necrohemorrhagic enteritis was determined.

RESUMO: Descreve-se um surto de enterite necro-hemorrágica em um confinamento de bovinos de corte no município de Nova Crixás, Estado de Goiás, Brasil, com ênfase nos aspectos epidemiológicos, lesionais e laboratoriais. Foram realizadas visitas à propriedade e todos os cadáveres bovinos (N=57) foram submetidos ao exame necroscópico, os quais apresentaram alterações macroscópicas semelhantes. Foram compilados dados epidemiológicos, sobretudo referentes ao manejo alimentar dos animais e amostras de tecido foram submetidas a exame histopatológico. Foram colhidas, também, amostras de fezes e conteúdo intestinal para isolamento bacteriano e genotipagem por PCR para detecção do agente etiológico, sendo confirmadas estirpes de Clostridium perfringens tipo A em 100% das amostras. Ainda, 33,3% das cepas de Clostridium perfringens isoladas no conteúdo intestinal e 40% daquelas isoladas nas fezes foram positivas para o gene codificador da toxina beta-2. Considerando o histórico, os achados macroscópicos e microscópicos, o isolamento bacteriano e o PCR, foi estabelecido o diagnóstico de enterite necro-hemorrágica por C. perfringens tipo A.

Outbreak of Clostridium perfringens type D enterotoxemia in sheep / Surto de enterotoxemia por Clostridium perfringens tipo D em ovinos

This work describes the first Brazilian laboratory-confirmed outbreak of enterotoxemia caused by Clostridium perfringens type D in sheep, which occurred in the state of Paraná. We address the epidemiological aspects involved, the diagnostic modalities employed, and the clinical signs and pathological findings observed. Eight healthy pregnant female sheep with no history of vaccination for clostridiosis presented with a history of abrupt feeding changes and neurological manifestations that quickly evolved to illness, coma and death. Four other females with clinical neurological signs were referred to the Veterinary Hospital of the Universidade Federal do Paraná, Palotina Sector. These animals presented with lethargy, motor incoordination, opisthotonus, pedal movements, muscle tremors, spastic paralysis, bruxism, mandibular trismus, sialorrhea, hyperexcitability and the inability to stand. They were examined and euthanized due to the seriousness of the clinical picture with an unfavorable prognosis. We performed gross anatomical and microscopic analyses of the organs and intestinal contents. We also performed bacterial isolation with molecular typing. From the intestinal contents, we detected toxins by means of the seroneutralization technique in mice. At necropsy, we noted pulmonary edema (2/4), necrotizing enteritis (4/4) and hyperemia of the leptomeninges (1/4). Microscopically, we observed lymphohistiocytic interstitial pneumonia, necrotic enteritis associated with the presence of rods, and nephrosis with interstitial lymphohistiocytic nephritis. No significant brain lesions were observed. Using serum neutralization, we identified epsilon toxin in the intestinal contents of all four animals. C. perfringens type D was identified. Based on the history, clinical signs, postmortem findings, and laboratory confirmation of the presence of epsilon toxin, we concluded that C. perfringens type D enterotoxemia caused this outbreak of sheep deaths.

Este trabalho descreve o primeiro surto brasileiro com confirmação laboratorial de enterotoxemia em ovinos por Clostridium perfringens tipo D, ocorrido no estado do Paraná, abordando os aspectos epidemiológicos envolvidos, sinais clínicos observados, achados patológicos e diagnóstico empregado. Oito fêmeas ovina, gestantes, em bom estado corporal e com histórico de mudanças bruscas na alimentação, sem histórico de vacinação para clostridioses, apresentaram manifestações clínicas neurológicas que logo evoluíram para decúbito, coma e morte. Outras quatro fêmeas apresentaram os sinais clínicos neurológicos e foram encaminhadas ao Hospital Veterinário da Universidade Federal do Paraná, setor Palotina. Os animais foram examinados e submetidos à eutanásia devido à gravidade do quadro clínico e prognóstico desfavorável. Destes quatro animais foram coletados fragmentos de órgãos e do conteúdo intestinal. Foi realizada análise macroscópica e microscópica dos órgãos, bem como isolamento bacteriano, tipificação molecular do agente e a detecção das toxinas por meio da técnica de soroneutralização em camundongos a partir do conteúdo intestinal. Os quatro ovinos examinados apresentaram letargia, incoordenação motora, opistótono, movimentos de pedalagem, tremores musculares, paralisia espástica, bruxismo, trismo mandibular, sialorréia, hiperexcitabilidade e decúbito. Na necropsia, constatou-se edema pulmonar (2/4), enterite necrohemorrágica (4/4) e hiperemia de leptomeninges (1/4). Microscopicamente havia pneumonia intersticial linfohistiocitária, enterite necrótica associada com a presença de bastonetes e nefrose com nefrite intersticial linfohistiocitária. Não foram observadas lesões encefálicas dignas de nota em função do quadro agudo da doença. Por meio da soroneutralização foi possível identificar a presença da toxina épsilon no conteúdo intestinal dos quatro...

Outbreak of Clostridium perfringens type D enterotoxemia in sheep / Surto de enterotoxemia por Clostridium perfringens tipo D em ovinos

This work describes the first Brazilian laboratory-confirmed outbreak of enterotoxemia caused by Clostridium perfringens type D in sheep, which occurred in the state of Paraná. We address the epidemiological aspects involved, the diagnostic modalities employed, and the clinical signs and pathological findings observed. Eight healthy pregnant female sheep with no history of vaccination for clostridiosis presented with a history of abrupt feeding changes and neurological manifestations that quickly evolved to illness, coma and death. Four other females with clinical neurological signs were referred to the Veterinary Hospital of the Universidade Federal do Paraná, Palotina Sector. These animals presented with lethargy, motor incoordination, opisthotonus, pedal movements, muscle tremors, spastic paralysis, bruxism, mandibular trismus, sialorrhea, hyperexcitability and the inability to stand. They were examined and euthanized due to the seriousness of the clinical picture with an unfavorable prognosis. We performed gross anatomical and microscopic analyses of the organs and intestinal contents. We also performed bacterial isolation with molecular typing. From the intestinal contents, we detected toxins by means of the seroneutralization technique in mice. At necropsy, we noted pulmonary edema (2/4), necrotizing enteritis (4/4) and hyperemia of the leptomeninges (1/4). Microscopically, we observed lymphohistiocytic interstitial pneumonia, necrotic enteritis associated with the presence of rods, and nephrosis with interstitial lymphohistiocytic nephritis. No significant brain lesions were observed. Using serum neutralization, we identified epsilon toxin in the intestinal contents of all four animals. C. perfringens type D was identified. Based on the history, clinical signs, postmortem findings, and laboratory confirmation of the presence of epsilon toxin, we concluded that C. perfringens type D enterotoxemia caused this outbreak of sheep deaths.(AU)

Este trabalho descreve o primeiro surto brasileiro com confirmação laboratorial de enterotoxemia em ovinos por Clostridium perfringens tipo D, ocorrido no estado do Paraná, abordando os aspectos epidemiológicos envolvidos, sinais clínicos observados, achados patológicos e diagnóstico empregado. Oito fêmeas ovina, gestantes, em bom estado corporal e com histórico de mudanças bruscas na alimentação, sem histórico de vacinação para clostridioses, apresentaram manifestações clínicas neurológicas que logo evoluíram para decúbito, coma e morte. Outras quatro fêmeas apresentaram os sinais clínicos neurológicos e foram encaminhadas ao Hospital Veterinário da Universidade Federal do Paraná, setor Palotina. Os animais foram examinados e submetidos à eutanásia devido à gravidade do quadro clínico e prognóstico desfavorável. Destes quatro animais foram coletados fragmentos de órgãos e do conteúdo intestinal. Foi realizada análise macroscópica e microscópica dos órgãos, bem como isolamento bacteriano, tipificação molecular do agente e a detecção das toxinas por meio da técnica de soroneutralização em camundongos a partir do conteúdo intestinal. Os quatro ovinos examinados apresentaram letargia, incoordenação motora, opistótono, movimentos de pedalagem, tremores musculares, paralisia espástica, bruxismo, trismo mandibular, sialorréia, hiperexcitabilidade e decúbito. Na necropsia, constatou-se edema pulmonar (2/4), enterite necrohemorrágica (4/4) e hiperemia de leptomeninges (1/4). Microscopicamente havia pneumonia intersticial linfohistiocitária, enterite necrótica associada com a presença de bastonetes e nefrose com nefrite intersticial linfohistiocitária. Não foram observadas lesões encefálicas dignas de nota em função do quadro agudo da doença. Por meio da soroneutralização foi possível identificar a presença da toxina épsilon no conteúdo intestinal dos quatro...(AU)

Isolation and genotyping of Clostridium perfringens from goats in Minas Gerais, Brazil / Isolamento e genotipagem de Clostridium perfringens isolados de cabras em Minas Gerais, Brasil

Despite the known importance of Clostridium perfringens as an enteropathogen in small ruminants, little is known about the role of its additional virulence factors or the frequency of the various C. perfringens genotypes in healthy goats; this complicates the laboratory diagnosis of the infections caused by this microorganism. In light of this, the aim of the present study was to isolate and genotype C. perfringens from stool samples from healthy goats in Brazil. Stool samples from 250 apparently healthy adult goats from 17 different herds in Minas Gerais, Brazil were collected, and isolation and genotyping of C. perfringens was performed. C. perfringens type A was isolated from 189 (75.6%) goats, whereas C. perfringens types C and D were each detected in one goat (0.4%). All isolates were negative for enterotoxin-, NetB-, NetE-, and NetF-encoding genes. These results confirmed C. perfringens type A as part of the microbiota in these animals, and they suggested that C. perfringens type C and D are rarely isolated from healthy goats.(AU)

Apesar da reconhecida importância de Clostridium perfringens como enteropatógeno de pequenos ruminantes, pouco se sabe sobre a frequência dos genótipos ou do papel de fatores de virulência adicionais de C. perfringens em cabras saudáveis, dificultando o diagnóstico laboratorial da infecção causada por esse micro-organismo. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo caracterizar C. perfringens de amostras de fezes de cabras adultas saudáveis. Amostras de fezes de 250 cabras saudáveis de 17 rebanhos diferentes em Minas Gerais, Brasil, foram submetidas ao isolamento e genotipagem de C. perfringens. C. perfringens tipo A foi isolado de 189 (75,6%) cabras, enquanto C. perfringens tipos C e D foram detectados em um animal (0.4%) cada. Todos os isolados foram negativos para os genes codificadores das toxinas NetB, NetE, NetF e enterotoxina. Os resultados apresentados confirmam C. perfringens tipo A como parte da microbiota de cabras saudáveis e sugere que C. perfringens tipos C e D são raramente encontrados em caprinos saudáveis.(AU)

Isolation of Clostridium perfringens and C. difficile in crab-eating fox ( Cerdocyon thous - Linnaeus 1776) from Northeastern Brazil / Isolamento de Clostridium perfringens e C. difficile em cachorro-do-mato (Cerdocyon thous - Linnaeus 1776) da região Nordeste do Brasil

The aim of the present study was to isolate Clostridium perfringens and C. difficile in crab-eating fox (Cerdocyon thous) from Northeastern Brazil. Stool samples of 18 captive crab-eating foxes from four states of Northeastern Brazil (Alagoas, Bahia, Paraíba e Pernambuco) were collected and subjected to C. perfringens and C. difficile isolation. Suggestive colonies of C. perfringens were then analyzed for genes encoding the major C. perfringens toxins (alpha, beta, epsilon and iota), beta-2 toxin (cpb2), enterotoxin (cpe), and NetB- (netB) and NetF- (netF) encoding genes. C. difficile strains were analyzed by multiplex-PCR for a housekeeping gene (tpi), toxins A (tcdA) and B (tcdB) and a binary toxin gene (cdtB). Unthawed aliquots of stool samples positive for toxigenic C. difficile were subjected to a commercial ELISA to evaluate the presence of A/B toxins. Clostridium perfringens (type A) was isolated from five (27%) samples, and only one sample was positive for beta-2 enconding gene (cpb2). Two (11%) stool samples were positive for C. difficile, but negative for A/B toxins. These two wild canids were also positive for C. perfringens type A. This is the first report of C. difficile in crab-eating fox.(AU)

O objetivo deste estudo foi isolar Clostridium perfringens e C. difficile em cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) da região Nordeste do Brasil. Amostras de fezes de 18 cachorros-do-mato mantidos em cativeiro e oriundos de quatro estados da região Nordeste do Brasil (Alagoas, Bahia, Paraíba e Pernambuco) foram coletadas e submetidas a isolamento de C. perfringens e C. difficile. As colônias sugestivas de C. perfringens foram analisadas para os genes que codificam as principais toxinas de C. perfringens (alfa, beta, épsilon e iota), toxina beta-2 (cpb2), enterotoxina (cpe) e NetB- (netB) e NetF- (netF). As cepas de C. difficile foram analisadas por PCR-multiplex para o gene tpi, toxinas A (tcdA) e B (tcdB) e um gene de toxina binária (cdtB). Alíquotas de amostras de fezes positivas para C. difficile toxigênico foram submetidas a um ELISA comercial para avaliar a presença de toxinas A/B. Clostridium perfringens (tipo A) foi isolado de cinco (27%) amostras, e apenas uma amostra foi positiva para o gene da toxina beta-2 (cpb2). Duas (11%) amostras de fezes foram positivas para C. difficile, mas negativas para toxinas A/B. Estes dois canídeos silvestres também foram positivos para C. perfringens tipo A. Este é o primeiro relato de C. difficile em cachorro-do-mato.(AU)

Isolation of Clostridium perfringens and C. difficile in crab-eating fox ( Cerdocyon thous - Linnaeus 1776) from Northeastern Brazil / Isolamento de Clostridium perfringens e C. difficile em cachorro-do-mato (Cerdocyon thous - Linnaeus 1776) da região Nordeste do Brasil

The aim of the present study was to isolate Clostridium perfringens and C. difficile in crab-eating fox (Cerdocyon thous) from Northeastern Brazil. Stool samples of 18 captive crab-eating foxes from four states of Northeastern Brazil (Alagoas, Bahia, Paraíba e Pernambuco) were collected and subjected to C. perfringens and C. difficile isolation. Suggestive colonies of C. perfringens were then analyzed for genes encoding the major C. perfringens toxins (alpha, beta, epsilon and iota), beta-2 toxin (cpb2), enterotoxin (cpe), and NetB- (netB) and NetF- (netF) encoding genes. C. difficile strains were analyzed by multiplex-PCR for a housekeeping gene (tpi), toxins A (tcdA) and B (tcdB) and a binary toxin gene (cdtB). Unthawed aliquots of stool samples positive for toxigenic C. difficile were subjected to a commercial ELISA to evaluate the presence of A/B toxins. Clostridium perfringens (type A) was isolated from five (27%) samples, and only one sample was positive for beta-2 enconding gene (cpb2). Two (11%) stool samples were positive for C. difficile, but negative for A/B toxins. These two wild canids were also positive for C. perfringens type A. This is the first report of C. difficile in crab-eating fox.(AU)

O objetivo deste estudo foi isolar Clostridium perfringens e C. difficile em cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) da região Nordeste do Brasil. Amostras de fezes de 18 cachorros-do-mato mantidos em cativeiro e oriundos de quatro estados da região Nordeste do Brasil (Alagoas, Bahia, Paraíba e Pernambuco) foram coletadas e submetidas a isolamento de C. perfringens e C. difficile. As colônias sugestivas de C. perfringens foram analisadas para os genes que codificam as principais toxinas de C. perfringens (alfa, beta, épsilon e iota), toxina beta-2 (cpb2), enterotoxina (cpe) e NetB- (netB) e NetF- (netF). As cepas de C. difficile foram analisadas por PCR-multiplex para o gene tpi, toxinas A (tcdA) e B (tcdB) e um gene de toxina binária (cdtB). Alíquotas de amostras de fezes positivas para C. difficile toxigênico foram submetidas a um ELISA comercial para avaliar a presença de toxinas A/B. Clostridium perfringens (tipo A) foi isolado de cinco (27%) amostras, e apenas uma amostra foi positiva para o gene da toxina beta-2 (cpb2). Duas (11%) amostras de fezes foram positivas para C. difficile, mas negativas para toxinas A/B. Estes dois canídeos silvestres também foram positivos para C. perfringens tipo A. Este é o primeiro relato de C. difficile em cachorro-do-mato.(AU)

A retrospective study on the diagnosis of clostridial myonecrosis in ruminants in Brazil / Estudo retrospectivo sobre o diagnóstico de mionecroses clostridiais em ruminantes no Brasil

A standardized immunochemistry method for the diagnosis of clostridial myonecrosis was applied to 38 formalized tissue samples from ruminants with clinical and post mortem history suggestive of blackleg or gas gangrene. The diagnosis of clostridial myonecrosis was confirmed in 37 out of 38 (97.4%) samples tested. Clostridium chauvoei and Clostridium perfringens type A were the most common agents found alone, being detected in ten (26.3%) and six (15.8%) samples, respectively. The other cases showed an association of two or three clostridia, with C. perfringens type A detected in 11 (29%) cases. Based on the findings of the present study, polyvalent vaccines against clostridial infections of animals incorporating C. perfringens would be more adequate for preventative purposes in the endemic areas.

Imuno-istoquímica padronizada para avaliar o diagnóstico etiológico de mionecrose por agentes do gênero Clostridium foi utilizada em 38 tecidos formalizados de ruminantes com suspeita clínica e macroscópica, além de histopatologia compatível com carbúnculo sintomático ou gangrena gasosa. O diagnóstico de mionecrose foi confirmado em 37 das 38 (97,4%) amostras avaliadas. Clostridium chauvoei e Clostridium perfringens tipo A foram os únicos agentes encontrados sozinhos, sendo detectados em dez (26,3%) e seis (15,8%) amostras, respectivamente. Os outros casos foram causados por combinações de dois ou mais agentes, sendo que C. perfringens type A foi detectado em dez (29,9%) dessas amostras. Baseado nos resultados obtidos, sugere-se que vacinas polivalentes contendo C. perfringens seriam mais adequadas para prevenção de mionecrose causada por clostrídios.

A retrospective study on the diagnosis of clostridial myonecrosis in ruminants in Brazil / Estudo retrospectivo sobre o diagnóstico de mionecroses clostridiais em ruminantes no Brasil

A standardized immunochemistry method for the diagnosis of clostridial myonecrosis was applied to 38 formalized tissue samples from ruminants with clinical and post mortem history suggestive of blackleg or gas gangrene. The diagnosis of clostridial myonecrosis was confirmed in 37 out of 38 (97.4%) samples tested. Clostridium chauvoei and Clostridium perfringens type A were the most common agents found alone, being detected in ten (26.3%) and six (15.8%) samples, respectively. The other cases showed an association of two or three clostridia, with C. perfringens type A detected in 11 (29%) cases. Based on the findings of the present study, polyvalent vaccines against clostridial infections of animals incorporating C. perfringens would be more adequate for preventative purposes in the endemic areas.(AU)

Imuno-istoquímica padronizada para avaliar o diagnóstico etiológico de mionecrose por agentes do gênero Clostridium foi utilizada em 38 tecidos formalizados de ruminantes com suspeita clínica e macroscópica, além de histopatologia compatível com carbúnculo sintomático ou gangrena gasosa. O diagnóstico de mionecrose foi confirmado em 37 das 38 (97,4%) amostras avaliadas. Clostridium chauvoei e Clostridium perfringens tipo A foram os únicos agentes encontrados sozinhos, sendo detectados em dez (26,3%) e seis (15,8%) amostras, respectivamente. Os outros casos foram causados por combinações de dois ou mais agentes, sendo que C. perfringens type A foi detectado em dez (29,9%) dessas amostras. Baseado nos resultados obtidos, sugere-se que vacinas polivalentes contendo C. perfringens seriam mais adequadas para prevenção de mionecrose causada por clostrídios.(AU)

Isolation and genotyping of Clostridium perfringens and Clostridium difficile in Capuchin Monkeys (Sapajus spp) / Isolamento e genotipagem de Clostridium perfringens and Clostridium difficile em macacos-prego (Sapajus spp)

The importance of Clostridium perfringens and C. difficile for most wild animal species remains unclear. This study aimed to isolate and genotype C. perfringens and C. difficile in stool samples from free-living and captive capuchin monkeys (Sapajus flavius and Sapajus libidinosus) in Brazil. Ten free-living S. flavius and 14 captive S. libidinosus were sampled for this study. To isolate C. difficile, stool samples were inoculated on plates containing cycloserine-cefoxitin fructose agar supplemented with horse blood and sodium taurocholate. Two different protocols for C. perfringens isolation were tested: direct plating onto selective agar and enrichment in brain heart infusion (BHI) broth followed by plating onto selective agar. C. difficile was not detected in the present study. The results were identical for both protocols tested for isolation of C. perfringens. Four samples (16.7%) were positive for C. perfringens type A, including one sample from a free-living animal (4.2%) and three from captive animals (12.5%), meaning there was no significant difference between these two groups. C. perfringens isolates were negative for all additional virulence factors evaluated, including enterotoxin encoding-gene (cpe) and beta-2 encoding-gene (cpb2). These results suggested that C. perfringens type A is found in the microbiota of capuchin monkeys, although it is less frequent than previously reported in domestic animals.

A importância de Clostridium perfringens e C. difficile para a maioria das espécies silvestres ainda não está clara. O objetivo do presente estudo foi isolar e genotipar C. perfringens e C. difficile em amostras de fezes de macacos-prego (Sapajus flavius e Sapajus libidinosus) de vida livre e criados em cativeiros no Brasil. Dez S. flavius de vida livre e 14 S. libidinosus de cativeiro foram incluídos no presente estudo. Para isolamento de C. difficile, as amostras de fezes foram inoculadas em agar cicloserina-cefoxitina frutose, suplementado com sangue e taurocolato de sódico. Para isolamento de C. perfringens, foram testados dois protocolos: plaqueamento direto em ágar seletivo e enriquecimento em caldo seguido de plaqueamento em ágar seletivo. C difficile não foi detectado no presente estudo. Os resultados foram idênticos para ambos os protocolos testados para isolamento de C. perfringens, resultando em quatro animais (16,7%) positivos para C. perfringens tipo A. Destes, uma amostra era de um animal de vida livre (4,2%) e três de animais de cativeiro (12,5%), não havendo diferença entre esses dois grupos. Os isolados de C. perfringens foram negativos para todos os fatores de virulência adicionais avaliados, incluindo o gene codificador de enterotoxina (cpe) e o gene codificador beta-2 (cpb2). O presente estudo sugere C. perfringens tipo A como parte da microbiota de macacos-prego, embora esse agente seja menos frequente como comensal, do que relatado anteriormente, em animais domésticos.

Isolation and genotyping of Clostridium perfringens and Clostridium difficile in Capuchin Monkeys (Sapajus spp) / Isolamento e genotipagem de Clostridium perfringens and Clostridium difficile em macacos-prego (Sapajus spp)

The importance of Clostridium perfringens and C. difficile for most wild animal species remains unclear. This study aimed to isolate and genotype C. perfringens and C. difficile in stool samples from free-living and captive capuchin monkeys (Sapajus flavius and Sapajus libidinosus) in Brazil. Ten free-living S. flavius and 14 captive S. libidinosus were sampled for this study. To isolate C. difficile, stool samples were inoculated on plates containing cycloserine-cefoxitin fructose agar supplemented with horse blood and sodium taurocholate. Two different protocols for C. perfringens isolation were tested: direct plating onto selective agar and enrichment in brain heart infusion (BHI) broth followed by plating onto selective agar. C. difficile was not detected in the present study. The results were identical for both protocols tested for isolation of C. perfringens. Four samples (16.7%) were positive for C. perfringens type A, including one sample from a free-living animal (4.2%) and three from captive animals (12.5%), meaning there was no significant difference between these two groups. C. perfringens isolates were negative for all additional virulence factors evaluated, including enterotoxin encoding-gene (cpe) and beta-2 encoding-gene (cpb2). These results suggested that C. perfringens type A is found in the microbiota of capuchin monkeys, although it is less frequent than previously reported in domestic animals.(AU)

A importância de Clostridium perfringens e C. difficile para a maioria das espécies silvestres ainda não está clara. O objetivo do presente estudo foi isolar e genotipar C. perfringens e C. difficile em amostras de fezes de macacos-prego (Sapajus flavius e Sapajus libidinosus) de vida livre e criados em cativeiros no Brasil. Dez S. flavius de vida livre e 14 S. libidinosus de cativeiro foram incluídos no presente estudo. Para isolamento de C. difficile, as amostras de fezes foram inoculadas em agar cicloserina-cefoxitina frutose, suplementado com sangue e taurocolato de sódico. Para isolamento de C. perfringens, foram testados dois protocolos: plaqueamento direto em ágar seletivo e enriquecimento em caldo seguido de plaqueamento em ágar seletivo. C difficile não foi detectado no presente estudo. Os resultados foram idênticos para ambos os protocolos testados para isolamento de C. perfringens, resultando em quatro animais (16,7%) positivos para C. perfringens tipo A. Destes, uma amostra era de um animal de vida livre (4,2%) e três de animais de cativeiro (12,5%), não havendo diferença entre esses dois grupos. Os isolados de C. perfringens foram negativos para todos os fatores de virulência adicionais avaliados, incluindo o gene codificador de enterotoxina (cpe) e o gene codificador beta-2 (cpb2). O presente estudo sugere C. perfringens tipo A como parte da microbiota de macacos-prego, embora esse agente seja menos frequente como comensal, do que relatado anteriormente, em animais domésticos.(AU)

Jejunal hemorrhage syndrome in a Zebu cow in Brazil / Síndrome de jejuno hemorrágico em gado Zebu no Brasil

Clostridium perfringenstype A has been incriminated as the etiologic agent in jejunal hemorrhage syndrome (JHS), which is a disease that affects dairy cattle. Although this microorganism is considered an important enteropathogen the pathogenesis of JHS is still not clear, and there have been no reports of its occurrence in Brazil so far. The aim of this study was to describe the occurrence of JHS by infection with a C. perfringenstype A strain carrying the beta-2 toxin gene in a zebu cow in Brazil, for the first time.(AU)

Clostridium perfringens tipo A tem sido considerado agente etiológico da síndrome do jejuno hemorrágico (SJH), que é uma doença que afeta comumente os rebanhos de gado. Embora este microrganismo seja considerado um importante enteropatógeno, a patogênese da SJH ainda não foi elucidada, e não havia sido reportada no Brasil até então. O alvo deste estudo foi descrever pela primeira vez a ocorrência da SJH causadapor C. perfringenstipo A, carreador do gene da toxina beta-2, em um zebuíno no Brasil.(AU)

Avaliação da eficiência dos toxóides recombinantes e de Clostridium perfringens na imunização de equinos

Clostridium perfringens tem sido classificado como principal agente patogênico gastrointestinal em potros com até 10 dias de idade, apesar dos quadros de enterocolites serem mais comuns em neonatos, animais jovens e adultos também podem ser acometidos. O quadro clínico que se manifesta na forma de cólica, diarreia sanguinolenta e evolui rapidamente para choque circulatório, é causado por ação da toxina (CPB) de C. perfringens tipo C. Esse agente bacteriano também está associado a graves quadros de mionecrose, geralmente fatais, por envolvimento da toxina (CPA) de C. perfringens tipo A. Para equinocultura, a importância dessas enfermidades deve-se a elevada mortalidade e a inexistência de vacinas comerciais, que garantam a imunização, principal forma de prevenção. Assim o objetivo deste trabalho foi ser o pioneiro em utilizar e avaliar a longevidade da resposta imune humoral no período de um ano, em equinos imunizados com diferentes concentrações (100, 200 e 400µg) de toxóides recombinantes CPA e CPB de C. perfringens tipos A e C, respectivamente, bem como comparar aos resultados obtidos em animais inoculados com toxóide comercial. Foram utilizados 50 animais da espécie equina, raça Mangalarga Marchador, de ambos os sexos, a partir de um ano de idade, sem histórico vacinal contra clostridioses. Os animais foram divididos aleatoriamente em cinco grupos de dez equinos: Grupo Vacina Recombinante 100µg (G1), Grupo Vacina Recombinante 200µg (G2), Grupo Vacina Recombinante 400µg (G3), Grupo Vacina Comercial (G4) e Grupo Controle Negativo (G5). Os equinos do G1, G2 e G3 foram vacinados com a vacina recombinante contendo diferentes concentrações dos toxóides recombinantes CPA e CPB 100, 200 e 400µg, respectivamente, G4 com vacina comercial e o G5 recebeu solução salina estéril (NaCl 0,9%). Todos os animais receberam duas doses de 2ml, por via intramuscular, na tábua do pescoço, nos dias zero e 28 após a primeira dose. As amostras de soro sanguíneo foram coletadas nos dias zero, 28, 56, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 e 360 após a primeira vacinação. Os soros obtidos, após centrifugação foram submetidos a técnica de soroneutralização em camundongos. O teste de potência realizado no dia 56, demonstrou que as formulações de 200 e 400µg foram capazes de induzir resposta imune em todos os equinos inoculados, de acordo com os níveis exigidos na legislação, assim como, ao avaliar a longevidade (teste de eficiência) da resposta imune vacinal, as mesmas concentrações apresentaram níveis de anticorpos detectáveis até o dia 180, não havendo diferenças significativas entre os resultados obtidos. A vacina recombinante nas concentrações acima de 200µg foi capaz de estimular resposta imune humoral satisfatória em equinos.

Clostridium perfringens has been rated as the main gastrointestinal pathogen in foals up to age 10 days old, although enterocolitis is more common in neonates, young and adult animals may also be affected. The clinical picture which manifests itself in a form of colic, bloody diarrhoea and progresses rapidly towards a circulatory shock, is caused by the action of toxin (CPB) of C. perfringens type C. This bacterial agent is also associated with severe myonecrosis, usually fatal, due to the involvement of toxin (CPA) of C. perfringens type A. For equinoculture, the importance of these diseases is due to the high mortality and the absence of commercial vaccines, which ensure immunization, the main form to prevent. Therefore, the aim of the present work was to be pioneer in using and to analyse the longevity of humoral immune response in the period of one year, in horses immunized with different concentrations (100, 200 and 400µg) of recombinant toxoids CPA and CPB of C. perfringens types A and C, respectively, as well as compare to results acquired from inoculated animals with commercial toxoid. Fifty horses were used, Mangalarga Marchador breed, of both sexes, from the age of one year and up, no vaccine history against clostridiosis. The animals were randomly divided into five groups of ten horses: Recombinant Vaccine Group 100µg (G1), Recombinant Vaccine Group 200µg (G2), Recombinant Vaccine Group 400µg (G3), Commercial Vaccine Group (G4) and Negative Control Group (G5). G1, G2 and G3 horses have been vaccinated with the recombinant vaccine containing different concentrations of recombinant toxoids CPA and CPB 100, 200 and 400µg, respectively, G4 with commercial vaccine and G5 received sterile saline (NaCl 0.9%). All animals received two doses of 2ml, intramuscularly, in the neck, on days zero and 28 after the first dose. Blood serum samples were collected on days zero, 28, 56, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 and 360 after the first vaccination. The serum obtained after centrifugation was submitted to the serum neutralization technique in mice. The potency test held on day 56 has demonstrated that the formulations of 200 and 400µg were able to induce an immune response in all inoculated horses, according to levels required by legislation, as well as, when assessing the longevity (efficiency test) of the immune response, the same concentrations presented levels of detectable antibodies until day 180, without significant differences between the results obtained. The recombinant vaccine in above concentrations 200 µg was able to stimulate a satisfactory humoral immune response in horses.

Genotyping and antimicrobial susceptibility of Clostridium perfringens isolated from Tinamidae, Cracidae and Ramphastidae species in Brazil / Genotipagem e sensibilidade antimicrobiana de estirpes de Clostridium perfringens isolados de espécies de Tinamidae, Cracidae e Ramphastidae no Brasil

The aim of this study was to isolate, genotype and evaluate the antimicrobial susceptibility of Clostridium perfringens found in species Tinamidae, Cracidae and Ramphastidae in Brazil. C. perfringens was isolated in 13 (5%) out of 260 swab samples and five (8.3%) out of 60 stool samples. All strains were classified as C. perfringens type A, and nine (50%) were positive for the beta-2 toxin-encoding gene. No strains were positive for the necrotic enteritis toxin B-like (NetB)-encoding gene. All isolates were susceptible to penicillin, metronidazole and vancomycin, whereas four (22.2%), five (27.8%) and 13 (72.2%) strains were considered resistant to erythromycin, oxytetracycline and lincomycin, respectively.(AU)

O objetivo do presente estudo foi isolar, genotipar e avaliar a sensibilidade antimicrobiana de estirpes de Clostridium perfringens de espécies de Tinamidae, Cracidae e Ramphastidae no Brasil. C. perfringens foi isolado de 13 (5%) dos 260 suabes e de cinco (8,3%) das 60 amostras de fezes. Todos os isolados foram classificados como C. perfringens, tipo A, e nove (50%) foram positivos para o gene cpb2, responsável pela produção da toxina beta-2. Nenhuma estirpe foi positiva para o gene que codifica a produção da toxina NetB. Todos os isolados avaliados foram sensíveis à penincilina, metronidazol e vancomicina, enquanto que quatro (22,2%), cinco (27,8%) e 13 (72,2%) foram considerados resistentes à eritromicina, oxitetraciclina e lincomicina, respectivamente.(AU)

ELISA and modified toxin-binding inhibition test for quality control of the clostridial vaccine processes / ELISA direto e ToBI-test modificado para o controle de qualidade de processos de vacinas clostridiais

This study aimed to assess and standardize the ELISA and modified ToBI test in vitro methods in order to verify the potency of epsilon toxicoid in comparison with the in vivo TCP method. The following epsilon toxoids were used: NIBSC standard from batches 375/07, 532/08, 551/08, 373/07 and 378/07. These were evaluated using a TCP test, ELISA and ToBI tests. The results indicate that the correlation ratio between the dilutions of standard NIBSC toxicoid and absorbance values of 89.44% obtained with the ELISA method support the use of the curve to evaluate epsilon toxoids. However, it was observed that the absorbance values were similar for all toxoids, thus presenting no significant difference between higher and lower concentration toxoids. For the ToBI test, the correlation ratio of 96.76, obtained in the curve pattern, demonstrates the effectiveness of the curve to be used in the epsilon toxoid evaluation. The correlation ratio between the titration degrees of toxoids obtained through TCP and ToBI tests was higher than 90%. It is concluded that the type of ELISA test used does present discriminative power for toxoids with different concentrations, which does not support the use of this technique for such a purpose. The ToBI test can be used as a screening method for it is sensitive and effective to detect epsilon toxicoid produced by C. perfringens type D.(AU)

Teve-se por objetivo avaliar e padronizar as metodologias in vitro, ELISA e ToBI-test modificado, para a análise de toxoide épsilon, em comparação com a metodologia in vivo TCP. Foram utilizados os seguintes toxoides épsilon: padrão NIBSC e os lotes 375/07, 532/08, 551/08, 373/07 e 378/07, os quais foram avaliados por métodos in vivo, TCP, e in vitro, ELISA e ToBI-test. A análise do título de toxoide épsilon por meio dos métodos in vitro foi realizada a partir de uma curva-padrão, estabelecida previamente. Os principais resultados mostram que os valores de absorbância foram semelhantes para todos os toxoides, não apresentando diferença significativa entre os toxoides mais concentrados e menos concentrados. No ToBI-test, o coeficiente de correlação de 96,76%, obtido na curva-padrão, demonstra a eficiência da curva para avaliação do toxoide épsilon. O coeficiente de correlação entre os títulos de toxoide obtidos pelo TCP e ToBI-test foi superior a 90%. Conclui-se que o tipo de ELISA utilizado não apresenta poder discriminativo para toxoides com diferentes concentrações, inviabilizando a técnica para esse fim. O ToBI-test pode ser utilizado como um método de triagem sensível e eficaz para a detecção de toxoide épsilon de C. perfringens tipo D.(AU)

In vitro potency test for evaluation of Clostridium perfringens type D epsilon toxoid / Avaliação in vitro da potência de toxoide épsilon de Clostridium perfringens tipo D

The control of enterotoxemia caused by the epsilon toxin, produced by Clostridium perfringens type D, is based on vaccination with epsilon toxoid. The potency test for this immunogen is conducted using seroneutralization in mice. Here, an in vitro test for detection of neutralizing antibodies with Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells was standardized in order to study alternative methodologies for the potency test. Titers observed in the in vivo and in vitro seroneutralization tests had a correlation of 99.73%.

O controle da enterotoxemia causada pela toxina épsilon produzida por Clostridium perfringens tipo D é baseado na vacinação com toxoide. O teste de potência desse imunógeno é realizado utilizando-se a técnica de soroneutralização em camundongos. Objetivando-se estudar metodologias alternativas a essa técnica, padronizou-se um teste in vitro para detecção de anticorpos neutralizantes utilizando-se a linhagem celular Madin-Darby Canine Kidney (MDCK). Os títulos observados nas soroneutralizações in vivo e in vitro apresentaram correlação de 99,73%.

A surveillance of enteropathogens in piglets from birth to seven days of age in Brazil / Levantamento dos enteropatógenos de leitões do nascimento a sete dias de idade no Brasil

The purpose of the study was to evaluate the real importance of anaerobic enteropathogens and rotavirus in contrast to more common agents as cause of diarrhea in piglets within the first week of life. Sixty 1- to 7-day-old piglets, 30 diarrheic and 30 non-diarrheic (control), from 15 different herds were selected, euthanized and necropsied. Samples of the jejunum, ileum, colon, cecum and feces were collected from the piglets and analyzed to determine the presence of the following enteropathogens: enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC), Clostridium perfringens types A and C, Clostridium difficile, rotavirus and Isospora suis. Among diarrheic piglets, 23.3% were positive for C. difficile, 70% for C. perfringens type A cpb2+, 14.3% for rotavirus and 10% for ETEC. Among non-diarrheic control piglets, 10% were positive for C. difficile, 76.7% for C. perfringens type A cpb2+, 0% for rotavirus, 3.3% for ETEC and 3.3% for I. suis. C. perfringens type C was not detected in any of the animals. Histological lesions characteristic of C. difficile, E. coli and rotavirus were observed. However, no C. perfringens type A suggestive lesions were detected. There was a positive correlation between mesocolon edema and the presence of C. difficile toxins. Although C. perfringens type A cpb2+ was the most frequently detected enteropathogen, there was no association between its presence and diarrhea or macro or microscopic changes. C. difficile and Rotavirus were the most relevant pathogens involved with neonatal diarrhea in this study, and histopathology associated with microbiological test proved to be the key to reach a final diagnosis.(AU)

O objetivo do presente estudo foi avaliar a real importância de enteropatógenos anaeróbios e rotavirus em comparação à outros agentes mais comuns como causa de diarreia em leitões até cinco dias de idade. Leitões com 0 a 7 dias de vida, 30 diarreicos e 30 não diarreicos (controles) de 15 granjas diferentes foram eutanasiados e necropsiados. Amostras de jejuno, íleo, colon e ceco foram coletadas e submetidas à detecção dos seguintes enteropatógenos: Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC), Clostridium perfringens, Clostridium difficile, rotavirus e Isospora suis. Entre os animais diarréicos, 23.3% foram positivos para C. difficile, 70% para C. perfringens tipo A cpb2+, 14.3% para rotavirus e 10% para ETEC. Entre os leitões não-diarréicos, 10% foram positivos para C. difficile, 76.7% para C. perfringens tipo A cpb2+, 3.3% para ETEC e 3.3% for I. suis. C. perfringens tipo C não foi detectado em nenhum animal. Lesões histológicas características de C. difficile, E. coli e rotavirus foram observadas. Por outro lado, nenhuma lesão sugestiva de C. perfringens foi detectada. Foi possível observar uma correlação positiva entre edema de mesocolon e presença das toxinas A/B. Apesar de C. perfringens tipo A cpb2+ ter sido o patógeno mais encontrado, nenhuma associação com lesões foi encontrada. C. difficile e Rotavirus foram os agentes mais relevantes associados à diarreia neonatal, e ficou demonstrada a relevância de associação de histopatologia com testes de detecção microbiológica para se firmar um diagnóstico.(AU)

Produção de toxoíde Epsilon e avaliação de formulações vacinais em bovinos e caprinos.

As doenças causadas pelas bactérias pertencentes ao gênero Clostridium estão entre as mais importantes enfermidades que causam efeitos deletérios e prejuízos aos produtores de rebanho de ovinos, caprinos e bovinos. Entre estas se destaca a enterotoxemia, causada pela toxina épsilon de Clostridium perfringens tipo D. Devido ao rápido curso dessa doença é preconizado a vacinação com a toxina épsilon inativada como o método mais indicado para a sua prevenção. Entretanto é reconhecida a baixa capacidade de manutenção dos anticorpos neutralizantes persistentes a partir das vacinas comerciais para a espécie caprina e pouca evidência do comportamento da duração da imunidade em bovinos. Com isso, o presente trabalho objetivou: (a) produzir, concentrar e purificar a toxina épsilon (ETX) de C. perfringens tipo D para a produção do seu respectivo toxoide na forma ultrafiltrada (EToX-U) e ultrafiltrada, dialisada e purificada em cromatografia de troca iônica (EToX-UC); (b) produzir vacinas utilizando os referidos toxoides em formulações do tipo microemulsão (ME), adsorvidos em micropartícula de quitosana (MQ), em nanopartículas de sílica mesosporosa (NSM), em nanopartículas de hidroxiapatita (HANP) e em hidróxido de alumínio (HA); (c)triagem das melhores formulações em imunizações de coelhos observando-se o título de anticorpos neutralizantes obtido pós vacinação segundo diretrizes da normativa oficial do MAPA com leitura da soroneutralização in vitro realizada em monocamada de células Madin Darby Canine Cells (MDCK); (d) avaliar as opções vacinais selecionadas em coelhos nas espécies alvos caprinos e bovinos por meio do acompanhamento da cinética da resposta humoral antitoxina épsilon nestas espécies pelo período de um ano. Além disso, avaliar o comportamento da curva de anticorpos em caprinos após a aplicação de uma terceira dose vacinal na semana 52 pós primovacinação. A produção da toxina épsilon de C. perfringens tipo D permitiu obter antígeno ETX-U e ETX-UC em qualidade e quantidade suficiente para as formulações pretendidas, bem como seus respectivos toxoides oriundos da inativação pelo formaldeído (EToX-U e EToX-UC). As vacinas formuladas à base de HA, MQ, NSM e HANP administradas em duas doses (t=0 e 21 dias) obtiveram títulos sorológicos médios superiores ou igual ao índice mínimo de aprovação de 2UI/mL na triagem inicial em coelhos, tornando-se opções viáveis de proteção imunológica frente à enterotoxemia causada pela toxina épsilon de C. perfringens tipo D. Por outro lado as vacinas à base de MQ, NSM e HANP administradas em dose única (t=0) não obtiveram títulos médios iguais ou acima do índice de aprovação, sugerindo que nas condições formuladas tais vacinas não seriam recomendados em esquema vacinal single shot. De forma similar, as vacinas em ME formuladas neste trabalho não lograram êxito na geração de título detectável nos coelhos, administrando-se tanto duas doses quanto dose única. Frente aos resultados obtidos em coelhos, as vacinas selecionadas para teste em espécie alvo foram: EToX-UC e EToX-U adsorvidos em hidróxido de alumínio e EToX-U adsorvido em micropartícula de quitosana cujos títulos médios de antitoxina épsilon em coelhos foram 10,24 UI/mL, 7,45 UI/mL e 6,03 UI/mL respectivamente. Quando avaliados nas espécies alvo, observou-se que os mais elevados títulos tanto no grupo de caprinos quanto bovinos foram aos 60 dias pós primovacinação, correspondendo a 10,5 UI/mL, 11,5 UI/mL e 6,9 UI/mL para as vacinas EToX-U HA, EToX-UC HA e EToX-UC MQ respectivamente em bovinos e 1,1 UI/mL, 3,9 UI/mL e 2,1 UI/mL para as vacinas EToX-U HA, EToX-UC HA e EToX-UC MQ respectivamente em caprinos. O estudo da concordância entre os títulos obtidos nos grupos animais neste experimento corrobora fortemente o fato do coelho representar um excelente modelo animal para a resposta em bovinos nas formulações à base de hidróxido de alumínio, 22 corroborando a indicação deste nos testes oficiais, porém com fraca concordância com caprinos para formulações com épsilon não purificado. O estudo de duração de imunidade com as formulações avaliadas em caprinos corroborou a necessidade de revacinação de três a quatro meses referendada por outros autores. Em relação aos bovinos, apesar de não existirem trabalhos na literatura que estabeleçam a duração de imunidade para a espécie, o resultado do título de antitoxina épsilon, apesar de limítrofe, conferiu proteção pelo período de um ano em acordo com as recomendações das vacinas comerciais de revacinação anual.

The diseases caused by bacterial belonging to the genus Clostridium are among the most important diseases that cause deleterious and loss effects to sheep, goat and cattle herds producers. Among these stand out the enterotoxemias, caused by Clostridium perfringens type D toxin. Because rapid course of this disease it is recommended vaccination with inactivated epsilon toxin as the most appropriate method for its prevention. However, the low maintenance capacity of persistent neutralizing antibodies from commercial vaccines in goat and the little evidence of the duration of immunity in cattle is recognized. The aim of the present work was to: (a) produce, concentrate and purify epsilon toxin (ETX) of C. perfringens type D for the production of its toxoid in the ultrafiltered form (EToX-U) and ultrafiltered, dialyzed and purified in chromatography (EToX-UC); (b) produce vaccines using toxoids in microemulsion (ME) -type formulations, adsorbed on microparticles of chitosan (MQ), mesosporous silica nanoparticles (NSM), hydroxyapatite nanoparticles (HANP) and aluminum hydroxide ); (c) screening the best formulations in rabbits by observing the titre of neutralizing antibodies obtained after vaccination according to guidelines of the official MAPA standard with in vitro seroneutralization readings performed on a monolayer of Madin Darby Canine Cells (MDCK) cells; (d) evaluate the selected vaccine options in rabbits in the caprine and bovine target species by monitoring the kinetics of the humoral epsilon antitoxin response in these species for a period of one year. In addition, to evaluate the antibody of profile curve in goats after the inoculation of a third vaccine dose at week 52 post-vaccination. The C. perfringens type D epsilon toxin production allowed to obtain ETX-U and ETX-UC antigen in sufficient quality and quantity for the desired formulations and their respective toxoids from inactivation by formalin (EToX-U and EToX-UC). The HA, MQ, NSM and HANP formulated vaccines administered at two doses (t = 0 and 21 days) produced high titers over 2UI/mL at initial screening in rabbits, making them viable options for immunological protection against enterotoxemia caused by the epsilon toxin of C. perfringens type D. On the other hand, MQ, NSM and HANP vaccines administered in a single dose (t = 0) did not obtain high titres suggesting that under formulated conditions such vaccines would not be recommended in a single shot vaccine scheme. Similarly, the ME vaccines formulated in this work did not succeed in generating detectable titer of antibodies in rabbits both when given two doses and a single dose. Based on the results obtained in rabbits, the best vaccines were: EToX-UC and EToX-U adsorbed on aluminum hydroxide and EToX-U adsorbed on microparticles of chitosan whose mean efficacy of epsilon antitoxin in rabbits was 10.24 IU / mL, 7.45 IU / mL and 6.03 IU / mL respectively. When evaluated in the livestock animals it was observed that the highest titers in both the goat and bovine groups were 60 days post-vaccination corresponding to 10.5 IU / mL, 11.5 IU / mL and 6.9 IU / mL for the the EToX-U HA, EToX-UC HA and EToX-UC MQ vaccines respectively in cattle and, 1.1 IU / mL, 3.9 IU / mL and 2.1 IU / mL for the EToX-U HA, EToX-UC HA and EToX-UC MQ respectively in goats. The study of the concordance between the titers obtained in the animal groups in this experiment corroborates strongly with the fact that rabbits represents an excellent animal model for the response bovines immune response in the formulations based on aluminum hydroxide corroborating with the indication of this one in the official tests, but with weak agreement with goats for formulations with unpurified epsilon. The study of duration of immunity with the formulations evaluated in goats showed the need of revaccination of three to four months as recommended by other authors. Regarding cattle, although there are no studies in the 24 literature that establish the duration of immunity for the species, the result of the epsilon antitoxin titer, although borderline, conferred protection for a period of one year