Spectrophotometric method for determination of Colossoma macropomum (tambaqui) sperm concentration / Determinação da concentração espermática de tambaqui (Colossoma macropomum) por espectrofotometria

To assist the reproductive management of tambaqui (Colossoma macropomum) males in laboratory and commercial fish farming, a linear regression model was obtained from concentration curves using the spectrophotometric method. Twenty-two tambaqui males with an average age of three years old were selected and divided into two groups containing 11 animals each. Both groups alternately received a single dose of carp pituitary extract (CPE; 2.0 mg/kg body weight, intracoelomic). Sperm was collected 14 h after hormonal treatment and diluted (1:4000; sperm:formaldehyde saline). The concentration was estimated by counting spermatozoa in a Neubauer chamber and by using a spectrophotometer (λ=540 nm). Individual sperm concentration ranged from 11.40 to 71.13 × 109 sperm/mL. The degree of transmittance ranged from 62.1% to 95.0%. There was a significant correlation (r2 = 0.966; p < 0.0001) between sperm concentration analyzed in a Neubauer chamber and transmittance at 540 nm. Analysis by spectrophotometry and the prediction provided by the equation Y=100.293 - 0.509X proved to be an efficient and fast method for estimating sperm concentration in tambaqui and can be used in routine procedures in artificial fish reproduction laboratories.

Visando auxiliar o manejo reprodutivo de machos de tambaqui (Colossoma macropomum) em piscicultura de laboratório e comercial, obteve-se um modelo de regressão linear a partir de curvas de concentração por método espectrofotométrico. Foram selecionados 22 machos de tambaqui com idade média de três anos. Eles foram divididos em dois grupos contendo 11 animais cada. Ambos os grupos receberam alternadamente uma única dose de extrato de hipófise de carpa (EHC; 2,0 mg/kg de peso corporal, intracelomático). O esperma foi coletado 14 horas após o tratamento hormonal e diluído (1:4000; esperma: solução salina formaldeído). A concentração foi estimada por contagem de espermatozoides em câmara de Neubauer e por espectrofotômetro (λ=540 nm). A concentração espermática individual variou de 11,40 a 71,13 × 109 espermatozoides/mL. O grau de transmitância variou de 62,1 a 95,0%. Houve correlação significativa (r2 = 0,966; p < 0,0001) entre a concentração espermática analisada em câmara de Neubauer e a transmitância em 540 nm. A análise por espectrofotometria e a predição pela equação Y=100,293 - 0,509X mostrou ser um método eficiente e rápido para estimar a concentração espermática de tambaqui, podendo ser utilizado em procedimentos de rotina em laboratórios de reprodução artificial de peixes.

Refrigeração de sêmen canino em meio diluente à base de água de coco (Cocos nucifera) natural / Canine semen refrigeration in a natural coconut water (Cocos nucifera)-based extender / Refrigeración de semen canino en un medio diluyente natural a base de agua de coco (Cocos nucifera)

A inseminação artificial em cadelas contribui para o melhoramento genético da espécie, previne algumas doenças sexualmente transmissíveis a partir da cópula e possibilita a reprodução de animais que não poderiam copular de forma natural, seja por motivos anatômicos, geográficos ou comportamentais. Todavia, nem sempre é possível utilizar o sêmen fresco, sendo assim necessário um diluente para resfriar e mantê-lo viável por determinado período. Diante disso, o objetivo com este trabalho foi analisar o sêmen canino diluído em água de coco e refrigerado, à 5 ºC em diferentes tempos. Foram utilizados cinco cães da raça Hounds do Brasil, realizando três colheitas de sêmen de cada animal, com intervalos de sete dias. Os ejaculados foram mantidos a temperatura de 37ºC e realizado análises macroscópicas (volume, cor, aspecto e odor) e microscópicas (motilidade, vigor, concentração e morfologia espermática). Em seguida, os ejaculados foram diluídos em água de coco natural a uma concentração de 200 milhões de espermatozoides/mL, e mantidos à temperatura de 5 °C, por até 72 horas. Nos intervalos de seis, doze, vinte e quatro, trinta e seis, quarenta e oito, e setenta e duas horas, as amostras foram avaliadas quanto a motilidade e vigor espermático. Os ejaculados frescos apresentaram em média volume de 6,2 mL, cor branca, aspecto aquoso a leitoso, odor "sui generis", motilidade espermática de 89,5 %, vigor espermático 4,3, concentração média de 418 x106espermatozoides/mL e 7,3% de alterações patológicas. Após o início do resfriamento à 5 ºC, os valores de motilidade e vigor diminuíram com o passar do tempo, sendo os menores valores encontrados após 48 e 72 horas. O diluente a água de coco in natura mostrou-se eficiente para refrigeração de sêmen canino, à 5 ºC, conservando-o por um período de até 36h após a colheita, conforme preconizado pelo Colégio Brasileiro de Reprodução Animal.(AU)

improvement of the species, prevents some sexually transmitted diseases through copulation and allows the reproduction of animals that could not copulate naturally, either for anatomical, geographic or behavioral reasons. However, it is not always possible to use fresh semen, thus requiring a diluent to cool and keep it viable for a certain period. Therefore, the objective of this work was to analyze canine semen diluted in coconut water and refrigerated at 5 ºC at different times. Five Brazilian Hounds were used, performing three semen collections from each animal, with intervals of seven days. The ejaculates were kept at a temperature of 37 ºC and macroscopic (volume, color, appearance and odor) and microscopic (motility, vigor, concentration and sperm morphology) analyzes were performed. Then, the ejaculates were diluted in natural coconut water at a concentration of 200 million sperm/mL, and kept at a temperature of 5 °C for up to 72 hours. At intervals of six, twelve, twenty-four, thirty-six, forty-eight, and seventy-two hours, samples were evaluated for sperm motility and vigor. Fresh ejaculates had an average volume of 6.2 mL, white color, watery to milky appearance, "sui generis" odor, 89.5% sperm motility, 4.3 sperm vigor, average concentration of 418 x106 spermatozoa/mL and 7.3%pathological changes. After the beginning of cooling at 5 °C, the values of motility and vigor decreased over time, with the lowest values found after 48 and 72 hours. The in natura coconut water extender proved to be efficient for cooling canine semen at5 ºC, keeping it for a period of up to 36 hours after harvest, as recommended by the Brazilian College of Animal Reproduction.(AU)

Artificial insemination in bitches contributes to the genetic La inseminación artificial en perras contribuye a la mejora genética de la especie, previene algunas enfermedades de transmisión sexual a través de la cópula y permite la reproducción de animales que no podrían copular de forma natural, ya sea por razones anatómicas, geográficas o de comportamiento. Sin embargo, no siempre es posible utilizar semen fresco, por lo que se requiere un diluyente para enfriarlo y mantenerlo viable durante un cierto período. Por tanto, el objetivo de este trabajo fue analizar semen canino diluido en agua de coco y refrigerado a 5 ºC en diferentes tiempos. Se utilizaron cinco sabuesos brasileños, realizándose tres colectas de semen de cada animal, con intervalos de siete días. Los eyaculados se mantuvieron a una temperatura de 37 ºC y se realizaron análisis macroscópicos (volumen, color, apariencia y olor) y microscópicos (motilidad, vigor, concentración y morfología espermática). Luego, los eyaculados se diluyeron en agua de coco natural a una concentración de 200 millones de espermatozoides/mL y se mantuvieron a una temperatura de 5 °C hasta por 72 horas. A intervalos de seis, doce, veinticuatro, treinta y seis, cuarenta y ocho y setenta y dos horas, se evaluó la motilidad y el vigor de los espermatozoides en las muestras. Los eyaculados frescos tuvieron un volumen promedio de 6,2 mL, color blanco, apariencia acuosa a lechosa, olor "sui generis", motilidad espermática de 89,5%, vigor espermático de 4,3, concentración promedio de 418 x106 espermatozoides/mL y cambios patológicos de 7,3%. Después del inicio del enfriamiento a 5 °C, los valores de motilidad y vigor disminuyeron con el tiempo, encontrándose los valores más bajos a las 48 y 72 horas. El diluyente de agua de coco in natura demostró ser eficaz para enfriar el semen canino a5 ºC, manteniéndolo por un período de hasta 36 horas después de la cosecha, según lo recomendado por el Colegio Brasileño de Reproducción Animal.(AU)

Cooling of porcine semen in an extender supplemented with isoespintanol / Resfriamento de sêmen suíno em um diluente suplementado com isoespintanol

ABSTRACT: Spermatozoa experience oxidative, osmotic, chemical, and thermal stresses when cooled, which degrade the quality and fertilizing capacity of the cells. Adding antioxidants to the sperm extender mitigates these alterations. This study evaluated the effect of isoespintanol (ISO) on boar semen subjected to cooling. Fifteen ejaculates from five boars (Susscrofadomestica) were extended in Beltsville thawing solution (BTS) supplemented with 0 µM (control), 5 µM (ISO5), 10 µM (ISO10), 15 µM (ISO15), 20 µM (ISO20), 25 µM (ISO25), and 30 µM (ISO30) of ISO, which were then cooled for five days at 16 °C. Sperm kinetics, total motility (TM), and progressive motility (PM) were evaluated every 24 h using an IVOS computer-assisted sperm analysis (CASA) system. On day 1 and day 5 of cooling, a hypoosmotic test, spectrofluorometry, and flow cytometry were performed to evaluate the following: membrane functionality, measured as a function of hypoosmotic swelling (HOS); total antioxidant capacity (TAC); reactive oxygen species (ROS); and mitochondrial membrane potential (Δ¥M). Regression analysis and comparison of means using the Duncan test were performed. The ISO added had a slight impact on sperm motility, as evidenced by a reduction in TM at 24 h of cooling (but not prior) with the addition of 20 µM of ISO. Similarly, no effect of the ISO on the kinetics and functional integrity of the sperm membrane was observed at 96 h of cooling; however, the regression coefficients indicated that the ISO lowered the rate of decrease in sperm motility and the proportion of rapid spermatozoa relative to the concentration of ISO used. The ISO did not affect the TAC of the cooled semen; however, different concentrations of ISO lowered ROS production in the semen after 96 h of cooling. ISO also impacted the Δ¥M of the spermatozoa at 0 h of cooling, increasing the proportion of low Δ¥M cells and decreasing the proportion of high Δ¥M cells. In conclusion, ISO can reduce the loss of quality and oxidative stress occurring in boar semen during cooling and can modulate the mitochondrial activity of sperm.

RESUMO: Durante a refrigeração, os espermatozoides sofrem estresse oxidativo, osmótico, químico e térmico, que diminuem sua qualidade e afetam sua capacidade de fertilização. A adição de antioxidantes ao diluente espermático é uma alternativa para mitigar essas alterações. O objetivo desta pesquisa foi avaliar o efeito do isospintanol (ISO) na refrigeração do sêmen suíno. Quinze ejaculados de cinco varrascos (Sus scrofa domestica) foram diluídos em BTS suplementado com ISO a 0 (controle), 5 (ISO5), 10 (ISO10), 15 (ISO15), 20 (ISO20), 25 (ISO25) e 30 (ISO30) µM e foram refrigerados por cinco dias a 16 °C. A motilidade total (MT), motilidade progressiva (MP) e cinética dos espermatozóides foram avaliadas a cada 24 h com um sistema CASA IVOS. Nos dias um e cinco de refrigeração, foram avaliadas a funcionalidade da membrana, a capacidade antioxidante total (CAT), as espécies reativas de oxigênio (ROS) e o potencial de membrana mitocondrial (Δ¥M), através do teste hiposmótico (HOS), espectrofluorimetría e citometria de fluxo. Foram realizadas análises de regressão e comparação de médias, pelo teste de Duncan. A adição de ISO teve pouca influência na motilidade espermática, apresentando apenas redução na MT em 24 h de refrigeração, devido à adição de 20 µM. Da mesma forma, não foi observada influência de ISO na cinética e integridade funcional da membrana em 96 horas de refrigeração; porém, os coeficientes de regressão mostraram que ISO produziu menor taxa de diminuição da motilidade e proporção de espermatozoides rápidos dependendo da concentração utilizada. ISO não influenciou significativamente na CAT do sêmen refrigerado; entretanto, diferentes concentrações de ISO reduziram a produção de EROs a partir do sêmen após de 96 h de refrigeração. ISO também influenciou o Δ¥M dos espermatozóides em 0 h de refrigeração, com aumento das células de baixo Δ¥M e diminuição das células de alto Δ¥M. Em conclusão, o isospintanol pode reduzir a perda da qualidade e o estresse oxidativo do sêmen suíno durante a refrigeração e pode modular a atividade mitocondrial do esperma.

Addition of orange, pineapple and beet juices as extenders for cryopreservation of ram semen / Adição de sucos de laranja, abacaxi e beterraba em diluidor para criopreservação de sêmen de carneiros

Searching for improvements in semen cryopreservation, natural substances are commonly studied focusing to improve the sperm quality. The aim of this study were evaluated the effect of adding orange, pineapple, and beet juices in different concentrations and combinations to the ram semen cryopreservation extender. Five ejaculates from five adult rams were used. The semen pool was diluted in egg yolk-based extender and mixed with the following 15 treatments (at a final concentration of 400.106 sptz/mL): orange 10% (O10) and 15% (O15); pineapple 10% (P10) and 15% (P15); beet 10% (B10) and 15% (B15); pineapple + orange 10% (PO10) and 15% (PO15); pineapple + beet 10% (PB10) and 15% (PB15); beet + orange 10% (BO10) and 15% (BO15); pineapple + beet + orange 10% (PBO10) and 15% (PBO15); and the control group (CON). Post-thaw in 0.25 mL straws semen quality analysis of cryopreserved semen was performed by CASA and flow cytometry. Analysis of variance (PROC GLM) was carried out and the averages were compared using the SNK test. Pearson's correlation test was also performed. No effect was noted in the addition of juices to the semen extender prior to cryopreservation. Post-thawed, although, statistically similar to the control group, the total motility of the B10 group reached acceptable standards of total motility. In addition, B10 group showed the highest values (p< 0.05) of progressive motility than control group or other treatments. The addition of 10% beet juice to the ram semen extender can improve the cryopreservation of sperm motility.

Em busca de melhorias na criopreservação do sêmen, substâncias naturais são comumente estudadas com o objetivo de melhorar a qualidade do sêmen. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da adição de sucos de laranja, abacaxi e beterraba em diferentes concentrações e combinações ao diluidor de criopreservação de sêmen ovino. Foram utilizados cinco ejaculados de cinco carneiros adultos. O pool de sêmen foi diluído em diluente à base de gema de ovo e misturado com os seguintes 15 tratamentos (na concentração final de 400x106 sptz/ml): laranja 10% (O10) e 15% (O15); abacaxi 10% (P10) e 15% (P15); beterraba 10% (B10) e 15% (B15); abacaxi + laranja 10% (PO10) e 15% (PO15); abacaxi + beterraba 10% (PB10) e 15% (PB15); beterraba + laranja 10% (BO10) e 15% (BO15); abacaxi + beterraba + laranja 10% (PBO10) e 15% (PBO15); e o grupo controle (CON). Pós-descongelação em palhetas de 0,25 ml a análise da qualidade do sêmen criopreservado foi realizada pelo CASA e citometria de fluxo. A análise de variância foi realizada e as médias comparadas pelo teste SNK. O teste de correlação de Pearson também foi realizado. Nenhum efeito foi observado na adição de sucos ao diluidor de sêmen antes da criopreservação. Após o descongelamento, embora estatisticamente semelhante ao grupo controle, a motilidade total do grupo B10 atingiu padrões aceitáveis de motilidade total. Além disso, o grupo B10 apresentou os maiores valores (p<0,05) de motilidade progressiva que o grupo controle ou os outros tratamentos. A adição de 10% de suco de beterraba ao diluente de sêmen ovino pode melhorar a criopreservação da motilidade espermática.

Supplementation of two sources of selenium at different levels in diet of boars and this effect on the seminal quality / Suplementação de duas fontes de selênio em diferentes níveis na dieta de cachaços e seu efeito sobre a qualidade seminal

The spermatic membrane is rich in polyunsaturated fatty acids, which makes it sensitive to the action of reative species of oxygen, which can damage the seminal quality of the scraps. The purpose of this study was to evaluate the effect of the supplementation of two selenium sources at different doses. Third five scraps were allocated in four groups: (INOR30) 0.30 ppm sodium selenite; (COMP30) 0.30 ppm selenium metal-amino acid; (MIXED15+15) 0.15 ppm sodium selenite + 0.15 ppm selenium metal-amino acid and (COMP15) 0.15 ppm selenium metal-amino acid. The ejaculates of the scraps were evaluated over 22 weeks, resulting in 210 samples evaluated for volume, motility, pH, presence of agglutination and morphological changes, and 140 samples for spermatic concentration. The data was analyzed with repeated measures in time in a mixed model with type of selenium supplementation, periods of evaluation (one period of two weeks + five periods of four weeks) and their interactions as fixed effects, and animal and the worker that collected the ejaculates as random effects. Results showed no difference in selenium supplementation with the sources and doses used. In this way, it was possible to verify that the metal amino acid of selenium at the dose of 0.15 ppm promotes the same effect as the diets formulated with 0.30 ppm of sodium selenite.(AU)

A membrana espermática é rica em ácidos graxos poliinsaturados, o que a torna sensível à ação de espécies reativas de oxigênio, que podem prejudicar a qualidade seminal dos cachaços. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da suplementação de duas fontes de selênio em diferentes doses. Trinta e cinco cachaços foram distribuídos em quatro grupos: (INOR30) 0,30 ppm de selenito de sódio; (COMP30) 0,30 ppm de metal-aminoácido de selênio; (MISTO15+15) 0,15 ppm de selenito de sódio + 0,15 ppm de metal-aminoácido de selênio e (COMP15) 0,15 ppm de metal-aminoácido de selênio. Os ejaculados dos cachaços foram avaliados durante 22 semanas, resultando em 210 amostras avaliadas para volume, motilidade, pH, presença de aglutinação e alterações morfológicas, e 140 amostras para concentração espermática. Os dados foram analisados com medidas repetidas no tempo em modelo misto, em que o tipo de suplementação de selênio, os períodos de avaliação (um período de duas semanas + cinco períodos de quatro semanas) e suas interações foram os efeitos fixos, e o animal e o funcionário que coletou os ejaculados foram os efeitos aleatórios. Os resultados obtidos demonstraram não haver diferença na suplementação de selênio com as fontes e doses utilizadas. Com isso, foi possível verificar que o metal-aminoácido de selênio na dose de 0,15 ppm promove o mesmo efeito das dietas formuladas com 0,30 ppm de selenito de sódio.(AU)

In vitro sperm characteristics and in vivo fertility of sex-sorted and conventional semen in suckled Nelore cows at a traditional schedule for timed-AI with estrus detection / Características espermáticas in vitro e fertilidade in vivo de sêmen convencional e sexado em vacas Nelore pósparto submetidas à IATF tradicional com detecção de estro

The aim of this study was to assess in vitro sperm characteristics and pregnancies/AI (P/AI) of conventional and sex-sorted semen at timed-AI of suckled, multiparous Nelore cows. All cows (n=348) were submitted to a traditional estradiol/progesterone (P4)-based protocol. At 48h after P4-device removal, the estrous behavior was recorded, and AI was performed with conventional or sex-sorted semen from two bulls. The following sperm assessments were performed: CASA, Hyposmotic Test, sperm morphometry and chromatin structure by TB staining. P/AI were reduced (P<0.001) for sex-sorted compared to conventional semen in cows expressing estrus (27vs47%) or not (11vs.37%). Membrane integrity (Bull1: 30.3±9.6 vs. 52.3±12.4%, P=0.01; Bull2: 24.5±3.0 vs. 48.7±1.6%, P=0.006) and sperm concentration (Bulll: 23.2±0.6 vs. 43.0±0.8x10 sperm/mL, P<0.001; Bull2: 25.1+2.8 VS. 42.1±0.7x10 sperm/mL; P<0.001) were reduced in sex-sorted compared to conventional semen, for both bulls. Total and progressive motility were reduced in sex-sorted semen for Bull1 (TM: 49.7±15.9 vs. 94.9±1.9%, P=0.007; PM: 16.7±3.4 vs. 44.1±13.2%, P=0.009) and no differences were detected for Bull2 (TM: 45.0±17.5 vs. 68.2±19.1%, P=0.098; PM: 12.8±4.7 vs. 30.0±13.0%, P=0.065). Sperm ellipticity from sex-sorted was lower than conventional semen for Bull2 (0.306±0.01 vs. 0.342±0.02, P=0.02) and no difference was detected for Bull1 (0.332±0.01 vs. 0.330±0.01, P=0.55). Reduced in vivo fertility was observed for sex-sorted semen, regardless of estrous behavior. In vitro sperm quality of sex-sorted semen was compromised for both bulls, but differently affected for each sire.

O estudo teve como objetivo avaliar características espermáticas in vitro e a taxa de concepção (TC) de sêmen convencional e sexado em um programa de IATF tradicional de vacas Nelore pós-parto. Todas as vacas (n=348) foram submetidas ao mesmo protocolo de IATF à base de estradiol e de progesterona. Após 48 horas da retirada do implante, foi determinada a expressão de estro dos animais e a IA foi realizada com sêmen convencional e sexado de dois touros Angus. As seguintes características espermáticas foram avaliadas: análise computadorizada do sêmen, teste hiposmótico, morfometria espermática e estrutura cromatinica por meio da coloração com azul de toluidina. A TC foi menor (P<0,001) para sêmen sexado comparado ao convencional, em vacas que expressaram estro (27 vs. 47%) e que não apresentaram estro (11 vs. 37%). A integridade da membrana plasmática (Touro 1: 30,319,6 vs. 52,3+12,4%, P=0,010; Touro 2: 24,5+3,0 vs. 48,7±1,6%, P=0,006) e a concentração espermática (Touro 1: 23,2±0,6 vs. 43,0±0,8x10 sperm/mL, P<0,001; Touro 2: 25,1+2,8 vs. 42,1 +0,7x10'sperm/mL, P<0,001) foram menores no sêmen sexado comparado ao convencional, para ambos os touros. Motilidades total e progressiva foram menores no sêmen sexado comparado ao convencional para o Touro 1 (MT: 49,7±15,9 vs. 94,9±1,9%, P=0,007; MP: 16,7+3,4 vs. 44,1+13,2%, P=0,009), enquanto diferenças não foram detectadas no Touro 2 (MT: 45,0±17,5 vs. 68,2±19,1%, P=0,098; MP: 12,8±4,7 vs. 30,0±13,0%, P=0,065). Elipticidade espermática do sêmen sexado foi menor do que do sêmen convencional no Touro 2 (0,306±0,01 vs. 0,342±0,02, P=0,020), mas não houve diferença no Touro 1 (0,332±0,01 vs. 0,330±0,01, P=0,552). Reduzida fertilidade in vivo foi observada para o sêmen sexado em relação ao convencional, independentemente da expressão de cio das vacas. A qualidade seminal in vitro do sêmen sexado foi comprometida para ambos os touros, mas diferentemente afetada para cada reprodutor.

Hormonal induction and synchronization in the reproduction of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) / Sincronização e indução hormonal na reprodução de tilápia do nilo (Oreochromis niloticus)

The present study aims to evaluate the sexual synchronization of Nile tilapia (Oreochromisniloticus) breeding herds under different distributions and days. This study was carried out during, a period of 21 experimental days. It was conducted in a randomized block design (DBC), in a factorial scheme 2 × 2 × 3, (male and female, with and without hormone induction, and three times blocks of 7, 14 and 21 days). A total of 324 fish were used, 180 females and 144 males, previously microchipped with approximately 250 ± 12.25 g of body weight.. Each tank contained 36 animals, with every three tanks comprising a block of which were repeated in time. Each of the tanks was composed of only males, another with 12 males and 24 females separated by a glass and a screen on the bottom and the third tank with only females. In each treatment, half of the animals (male and female) were applied the hCG hormone, in a single dose at a concentration of 5 IU / gram fish live weight. The animals were evaluated at 7, 14, and 21 days. After 667 hours-degree after application of the hormone was made extrusion and spermatozoa by celomatic massage. It was observed females that showed ease of extrusion of gametes. For the females, spawning index, absolute and relative fecundity, oocyte weight per 1 g, diameters, and germinal vesicle peripheral position were evaluated; the sperm concentration, volume (ml), motility (%), duration of sperm motility (min) and integrity were evaluated in males. The data were submitted to analysis of variance at the 5% level of significance. For females at 14 days there was greater ease of extrusion when separated from males, with hormone application . The distribution influenced the spawning weight, the larger diameter, and for the diameters smaller the days and induction presented interference. In males, the days interfered in the increase in volume and duration of semen motility independent of induction and environment, and finally, the environment interfered significantly in semen concentration.

O presente estudo tem como objetivo avaliar a sincronização sexual de reprodutores de tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) em cativeiro sob diferentes distribuições e dias. Este estudo foi realizado por um período de 21 dias experimentais. Foi conduzido num delineamento de blocos casualizados (DBC), num esquema fatorial 2×2×3, (sendo macho e fêmea, com e sem indução hormonal) e três tempos, 7, 14 e 21 dias (blocos). Foram utilizados 324 peixes, sendo 180 fêmeas e 144 machos, com aproximadamente 250 ± 12,25g de peso corporal, previamente microchipados. Cada tanque continha 36 animais, sendo que a cada três tanques compreendia um bloco do qual foram repetidos no tempo. Cada um dos tanques esteve composto por: somente machos, outro com 12 machos e 24 fêmeas separados por um vidro e uma tela na parte de baixo e o terceiro tanque com apenas fêmeas. Em cada tanque, metade dos peixes (macho e fêmeas) recebeu indução hormonal com hCG (CHORULON®), na concentração de 5000UI/grama de peso vivo por peixe. Os animais foram avaliados aos 7, 14, e 21 dias. Passado 667 horas-grau após aplicação do hormônio foi feita extrusão e espermeação mediante massagem celomática. Foram observadas fêmeas que apresentaram facilidade de extrusão de gametas. Para asfêmeas foram avaliadas as seguintes variáveis: índice de desova, fecundidade absoluta e relativa, o peso dos ovócitos por cada 1g, os diâmetros, e posição periférica da vesícula germinativa; nos machos, foram avaliados a concentração espermática, o volume (ml), motilidade (%), tempo de duração de motilidade espermática (min) e integridade. Os dados obtidos foram submetidos a análise de variância ao nível de 5% de significância. Observou-se para fêmeas aos 14 dias, mantidas separada dos machos e com aplicação de hormônios, maior facilidade de extrusão, peso da desova diâmetro dos ovócitos. Nos machos, os dias interferiram no aumento dovolume e na duração de motilidade do sêmen independente da indução e ambiente, e por fim, o ambiente interferiu significativamente na concentração do sêmen.

In vitro and in vivo parameters for identification of landrace pigs with low reproductive performance / Parâmetros in vitro e in vivo para detecção de machos suínos Landrace com baixo desempenho reprodutivo

In pig farming, measurements of production parameters play a fundamental role in the success of the activity. Minimal differences in fertility between breeders can lead to less reproductive efficiency and, less productivity. However, assessing the fertility of each male and the early identification of subfertile males is a difficult task to be performed. Thus, the aim of this study was to evaluate the use of in vitro and in vivo parameters in the identification of subfertile males of the Landrace breed, aiming to collaborate with genetic improvement programs, routine optimization in the Genetic Diffusion Units (GDUs) and the results of performance. In experiment 1, an approach to identify males with subfertility was evaluated based on retrospective data. For this, the results (averages of birth rates, number of total births and average percentages of female and male piglets per litter) were evaluated for a total of 996 matings and 847 parturitions. The inseminations came from ejaculates of 32 males, who had at least 19 females inseminated with homospermic doses in the concentration of 2.5 x 109 total sperm from the same male. As for the birth rate (BR), an average of 85.47% ± 6.05 was observed with a group of median males, seven males that stood out and one individual (M32) with a performance of 58.06% ± 9.0. For the total number of piglets born (PB) the average was 13.41 ± 0.56, with three males with better performance and one (M32) with very poor performance (8.62 ± 0.59). In experiment 2, it was verified whether evaluations of inseminating doses (ID) of semen in vitro (motility and sperm morphology) after 96 hours of storage had correlations with fertility in vivo, which can be used to identify subfertile males. The evaluations were performed on 30 ejaculates regarding the means of BR and PB, considering only those who had at least 7 females inseminated. There were no correlations between the motility assessments and semen morphological changes and the reproductive parameters evaluated. The results obtained in vivo, referring to BR and PB, demonstrated that it was possible to identify differences between males, the individual (M32) had the worst results for the percentages of BR and PB. It is concluded that there are males of high and low fertility and that only the in vitro analyzes carried out in this study are not enough to categorize them, however, the evaluation of retrospective data was efficient for this purpose.(AU)

Na suinocultura moderna, as mensurações de parâmetros de produção têm papel fundamental para o sucesso da atividade. No entanto, a avaliação da fertilidade de cada macho e a identificação precoce de machos subférteis é uma tarefa difícil de ser realizada. O objetivo deste estudo foi avaliar a utilização de parâmetros in vivo e in vitro na identificação de machos subférteis da raça Landrace, visando colaborar com os programas de melhoramento genético, otimização da rotina nas Unidade de Difusão Genética (UDGs) e dos resultados a campo. No experimento 1, foi proposta uma abordagem de identificação dos machos subférteis tendo como base dados retrospectivos. Para isso, foram avaliados os resultados (médias das taxas de parto, número de nascidos totais e média das porcentagens de leitões fêmeas e machos por leitegada) de um total de 996 coberturas e 847 partos. As inseminações foram oriundas de ejaculados de 32 machos, que tiveram ao menos 19 fêmeas cobertas com doses homospérmicas na concentração de 2,5 x 109 de espermatozoides totais e obrigatoriamente do mesmo macho. Quanto a taxa de parto (TP) obtivemos uma média de 85,47% ± 6,05 e observou-se um grupo de machos medianos, sete machos que se destacaram positivamente e um indivíduo (M32) com um desempenho 58,06 ± 9,0. Para número de leitões nascidos totais (NT) obtivemos uma média de 13,41 ± 0,56 e notou-se três machos com melhor desempenho e um (M32) com péssimo desempenho (8,62 ± 0,59). No experimento 2, foi verificado se as avaliações das doses inseminantes (DI) de sêmen in vitro (motilidade e morfologia espermática) após 96 horas de armazenamento apresentaram correlação com a fertilidade in vivo. As avaliações foram realizadas em 30 ejaculados quanto às médias de TP e NT, considerando apenas ejaculados que tiveram ao menos 7 fêmeas inseminadas. Não foram verificadas correlações entre as avaliações de motilidade e alterações morfológicas do sêmen com os parâmetros produtivos avaliados. Os resultados obtidos in vivo, referentes a TP e NT, mostrou que foi possível identificar diferença entre os machos, onde o indivíduo (M32) apresentou os piores resultados para as porcentagens de TP e NT. Desta forma, pode-se concluir que existem machos de alta e baixa fertilidade e que somente as análises in vitro realizadas neste estudo não são suficientes para categorizá-los, no entanto, a avaliação de dados retrospectivos foi eficiente para esta finalidade.(AU)

Atualização sobre o estresse térmico testicular / Updates on testicular heat stress

Os testículos, são mantidos no escroto a uma temperatura ~3-5°C abaixo da corporal. Quando a temperatura das gônadas se eleva, instala-se um quadro de estresse térmico (ET) testicular. O ET afeta a espermatogênese, e observam-se, já na primeira semana pós-ET, impactos na cinética, concentração e morfologia espermática. Classicamente, tais efeitos eram creditados à incapacidade da circulação local de atender ao aumento do metabolismo testicular devido ao aumento da temperatura local. Contudo, estudos recentes demonstraram que a hipóxia não era a causa da degeneração testicular. Atualmente, credita-se os efeitos deletérios do ET ao aumento local das espécies reativas de O2. Nesta situação, apesar da ativação de mecanismos antioxidantes (aumento das HSP e GPX1) e de proteção do DNA (aumento da P53), estes não são suficientes, sendo desencadeada a apoptose. Os efeitos deletérios do ET testicular podem ser mitigados pela melatonina, que pode ser tanto administrada aos animais ou adicionada ao sêmen para que desencadeie seus efeitos protetores.(AU)

The testes are kept in the scrotum at a ~3-5°C below body core temperature. When the temperature of the gonads increases, a process called heat stress (HS) takes place. The HS impairs spermatogenesis, and in the first week post-HS, impacts in sperm kinetics, concentration, and morphology are observed. Classically, such effects were credited to the incapacity of the local circulation to sustain the higher testicular metabolism due to the increased temperature. However, recent studies demonstrated that it was not the cause of testicular degeneration. The novel perspective credits the deleterious impacts of the HS to the local increase of the reactive oxygen species. Importantly, although there's an activation of antioxidant defenses (increase in HSP and GPX1) and DNA protection (increase in P53), such mechanisms are not sufficient, unfolding the apoptotic cascade. Lastly, some of the negative effects of HS can be mitigated by melatonin, which can either be given to the animals or added to the sperm to exert its protective effects.(AU)

Use of glycosaminoglycans from Oreochromisniloticus skin as an antioxidant supplement for milt cryopreservation of Brazilian bocachico / Uso de glicosaminoglicanos da pele Oreochromis niloticus como suplemento antioxidante na criopreservação de sêmen de curimatã comum (Prochilodus brevis)

The study aimed to evaluate the in vitro antioxidant action of glycosaminoglycans (GAGs) from the skinof Oreochromis niloticus, and to determine their ideal concentration to supplement the sperm freezing medium of Prochilodus brevis. In experiment 1, the in vitro antioxidant properties of GAGs were verified through the analysis of DPPH, chelating ferrous ability, and total antioxidant capacity. In experiment 2, milt pools were formed, which were frozen in solution supplemented or not with different GAGs concentrations: 0 (control), 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, or 5.0 mg mL-¹ (total of 10 treatments). The samples were evaluated for membrane integrity, DNA integrity, sperm morphology, and sperm kinetics. The results of experiment 1 showed that the GAGs exhibited, with the increase of the concentration, significant antioxidant action, for all the evaluated tests, mainly in the chelating ferrous ability. In experiment 2, it was observed that the increase of GAGs concentration decreased kinetic parameters (P < 0.05), however, the control and 0.5 mg mL-1 GAGs concentration showed similar results. For the other parameters (membrane integrity, DNA integrity, and sperm morphology), there was no decrease in results with the increase of GAGs concentration. In conclusion, GAGs extracted from O. niloticus skin have antioxidant action, and the concentration of 0.5 mg mL-¹ was the most adequate to supplement the P. brevis sperm-freezing medium.

O estudo teve como objetivo avaliar in vitro a ação antioxidante de glicosaminoglicanos (GAGs) da pele de Oreochromis niloticus e determinar sua concentração ideal para suplementar o meio de congelação espermático de Prochilodus brevis. No experimento 1, foram verificadas as propriedades antioxidantes in vitro dos GAGs por meio das análises de DPPH, capacidade quelante do ferro e capacidade antioxidante total. No experimento 2, foram formados pool de sêmen, que foram congelados em solução suplementada, ou não, com diferentes concentrações de GAGs: 0 (controle); 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5 ou5,0 mg mL-¹ (total de 10 tratamentos). As amostras foram avaliadas quanto à integridade da membrana, integridade do DNA, morfologia e cinética espermática. Os resultados do experimento 1, mostraram que os GAGs exibiram, com o aumento da concentração, ação antioxidante significativa, para todos os testes avaliados, principalmente na capacidade quelante do ferro. No experimento 2, observou-se que o aumento da concentração de GAGs diminuiu os parâmetros cinéticos (P < 0,05), porém o controle e a concentração de 0,5 mg mL-1 de GAGs apresentaram resultados semelhantes. Para os demais parâmetros (morfologia, integridade de membrana e de DNA), não houve diminuição dos resultados com o aumento da concentração de GAGs. Em conclusão, os GAGs, extraídos da pele de O. niloticus, possuem ação antioxidante, sendo a concentração de 0,5 mg mL-1 a mais adequada para suplementar o meio de congelação espermático de P. brevis.

Use of glycosaminoglycans from Oreochromisniloticus skin as an antioxidant supplement for milt cryopreservation of Brazilian bocachico / Uso de glicosaminoglicanos da pele Oreochromis niloticus como suplemento antioxidante na criopreservação de sêmen de curimatã comum (Prochilodus brevis)

The study aimed to evaluate the in vitro antioxidant action of glycosaminoglycans (GAGs) from the skinof Oreochromis niloticus, and to determine their ideal concentration to supplement the sperm freezing medium of Prochilodus brevis. In experiment 1, the in vitro antioxidant properties of GAGs were verified through the analysis of DPPH, chelating ferrous ability, and total antioxidant capacity. In experiment 2, milt pools were formed, which were frozen in solution supplemented or not with different GAGs concentrations: 0 (control), 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, or 5.0 mg mL-¹ (total of 10 treatments). The samples were evaluated for membrane integrity, DNA integrity, sperm morphology, and sperm kinetics. The results of experiment 1 showed that the GAGs exhibited, with the increase of the concentration, significant antioxidant action, for all the evaluated tests, mainly in the chelating ferrous ability. In experiment 2, it was observed that the increase of GAGs concentration decreased kinetic parameters (P < 0.05), however, the control and 0.5 mg mL-1 GAGs concentration showed similar results. For the other parameters (membrane integrity, DNA integrity, and sperm morphology), there was no decrease in results with the increase of GAGs concentration. In conclusion, GAGs extracted from O. niloticus skin have antioxidant action, and the concentration of 0.5 mg mL-¹ was the most adequate to supplement the P. brevis sperm-freezing medium.(AU)

O estudo teve como objetivo avaliar in vitro a ação antioxidante de glicosaminoglicanos (GAGs) da pele de Oreochromis niloticus e determinar sua concentração ideal para suplementar o meio de congelação espermático de Prochilodus brevis. No experimento 1, foram verificadas as propriedades antioxidantes in vitro dos GAGs por meio das análises de DPPH, capacidade quelante do ferro e capacidade antioxidante total. No experimento 2, foram formados pool de sêmen, que foram congelados em solução suplementada, ou não, com diferentes concentrações de GAGs: 0 (controle); 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5 ou5,0 mg mL-¹ (total de 10 tratamentos). As amostras foram avaliadas quanto à integridade da membrana, integridade do DNA, morfologia e cinética espermática. Os resultados do experimento 1, mostraram que os GAGs exibiram, com o aumento da concentração, ação antioxidante significativa, para todos os testes avaliados, principalmente na capacidade quelante do ferro. No experimento 2, observou-se que o aumento da concentração de GAGs diminuiu os parâmetros cinéticos (P < 0,05), porém o controle e a concentração de 0,5 mg mL-1 de GAGs apresentaram resultados semelhantes. Para os demais parâmetros (morfologia, integridade de membrana e de DNA), não houve diminuição dos resultados com o aumento da concentração de GAGs. Em conclusão, os GAGs, extraídos da pele de O. niloticus, possuem ação antioxidante, sendo a concentração de 0,5 mg mL-1 a mais adequada para suplementar o meio de congelação espermático de P. brevis.(AU)

Uso de placa aquecedora visando a incubação do espermatozoide ovino após criopreservação / Use of heating plate aiming at the ovine sperm incubation after cryopreservation

Objetivou-se avaliar a utilização da placa aquecedora, em substituição ao banho-maria, no teste de termorresistência (TTR) de espermatozoides de carneiros após a criopreservação. Foram coletados 10 ejaculados de três carneiros adultos (n=30), por meio de vagina artificial para ovinos. Em seguida, foram diluídos em TrisGema de ovo, a uma concentração final de 200 x106 sptz/mL, e submetidos á curva de resfriamento, para posterior criopreservação em palhetas em nitrogênio líquido. Após descongelação, as amostras foram analisadas quanto à integridade de membrana, de acrossoma e atividade mitocondrial. O sêmen então foi dividido em dois tubos e submetido ao TTR, um em banho-maria e outro em placa aquecedora, e, ainda, avaliado a cada 30 minutos, do tempo zero (pós-descongelação) até 90 minutos de incubação, a 37 °C, quanto à motilidade espermática e à motilidade progressiva. As variáveis foram submetidas à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. Após o processo de congelação/descongelação, os espermatozoides apresentaram baixo percentual de integridade de membrana e elevado percentual de atividade mitocondrial e integridade do acrossoma. Não foi observada diferença na motilidade espermática nem na motilidade progressiva ao longo do TTR, quando comparados os espermatozoides que foram incubados em banho-maria aos incubados em placa aquecedora durante o período de 90 minutos. A placa aquecedora pode ser utilizada como meio de incubação dos espermatozoides de carneiros em substituição ao banho-maria.

The objective was to evaluate the use of the hot plate to replace the water bath in the thermo resistance test of ovine sperm after cryopreservation. Ten ejaculates were also collected from three adult sheep (n=30), by means of artificial sheep vagina. The collected samples were diluted in Tris-Egg Yolk, at a final concentration of 200 x106 sptz/mL and subjected to a cooling curve for subsequent cryopreservation in liquid nitrogen straws. Immediately after thawing, the samples were analyzed for membrane and acrosome integrity, and mitochondrial activity. The semen was then divided into two tubes and submitted to TTR, one in a water bath and the other in a hot plate, and evaluated every 30 minutes, from time zero (post-thaw) until 90 minutes of incubation at 37 °C, for sperm motility and progressive motility. The variables were subjected to analysis of variance and the means were compared using the Tukey test at 5% probability. After the freeze/thawing process, sperm showed a low percentage of membrane integrity, high percentage of mitochondrial activity, in addition to maintaining the integrity of acrossome. No difference was observed in sperm motility nor progressive motility, along the TTR, when comparing the sperm that were incubated in a water bath in relation to those incubated in a hot plate during the period of 90 minutes. The heating plate can be used as a means of incubating sheep sperm in replacement of the water bath.

A L-arginina na produção in vitro de embriões bovinos: perspectivas para o futuro / L-arginine in the in vitro production of bovine embryos: perspectives for the future

A L-arginina (L-arg) é o principal precursor da síntese do NO, contudo, é precursora também da síntese de creatina, agmatina, ureia, síntese proteica, L-ornitina, poliaminas, L-prolina e L-glutamato. Nesta breve revisão, vamos falar de alguns resultados que estão sendo obtidos sobre o papel da L-arg na capacitação de espermatozoides bovinos e seu impacto na produção in vitro de embriões. Estudos in vitro mostraram que a adição de L-arg ao meio de capacitação espermática está associada a um aumento na produção de NO, que se correlaciona com aumento da motilidade e vigor, integridade da membrana plasmática e acrossomal, atividade mitocondrial, capacitação espermática, peroxidação lipídica, bem como com a produção de blastocistos. Além disso, a adição da L-arg ao meio de capacitação in vitro, altera o perfil de proteínas importantes ligadas ao processo de capacitação, fertilização e desenvolvimento embrionário inicial. Estes efeitos da L-arg são GMPc dependentes e independentes. Na maturação in vitro, entretanto, embora já tenham sido encontrados bons resultados com o uso do L-arg, mais estudos são necessários para determinar a concentração ideal a ser adicionada ao meio de maturação in vitro e seu impacto na produção de blastocistos. Visto que a pré-capacitação de espermatozoides induzida pela heparina em presença de L-arg foi o método mais eficiente na produção in vitro de embriões, sugerimos sua utilização. Mais pesquisas sobre o metabolismo da L-arg no espermatozoide e CCOs de bovinos durante eventos ligados à fertilização são necessários para se identificar novas vias que atuem nestas etapas in vitro visando o aumento da percentagem e qualidade de embriões bovinos produzidos in vitro.

L-arginine (L-arg) is the main source of NO synthesis; however, it is also a precursor of the synthesis of creatine, agmatine, urea, protein synthesis, L-ornithine, polyamines, L-proline, and Lglutamate. In this brief review, we will discuss some results obtained previously about the role of L-arg in the capacitation of bovine sperm and its impact on in vitro embryo production. In vitro studies have shown that the addition of L-arg to the sperm capacitation medium is associated with an increase in NO production, which in controlled levels is related to an increased motility and vigor, plasma and acrosomal membrane integrity, mitochondrial activity, sperm capacitation, peroxidation lipids, as well as with the blastocyst production. Furthermore, the addition of L-arg to the in vitro capacitation medium alters the profile of important proteins linked to the capacitation process, fertilization, and early embryonic development. These effects of L-arg are cGMP dependent and independent. In in vitro maturation, however, although good results have already been found with the use of L-arg, further studies are needed to determine the ideal concentration to be added to the in vitro maturation medium and its impact on the production of blastocysts. Since heparin-induced pre-capacitation of spermatozoa in the presence of L-arg was the most efficient method for in vitro embryo production, we suggest its use. More research on L-arg metabolism in bovine sperm and OCCs during events related to fertilization is needed to identify new pathways that act in these in vitro steps aiming to increase the percentage and quality of bovine embryos produced in vitro.

Adição de colesterol carregado com ciclodextrina ao sêmen ovino na criopreservação / Addition of cholesterol loaded with cyclodextrin to sheep semen in cryopreservation

Objetivou-se avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações do colesterol carregado por ciclodextrina (CCC) sobre os espermatozoides congelados de ovinos. Foram coletados dois ejaculados de 10 carneiros (n=20) e diluídos em Tris-Gema de ovo até a concentração final de 200 x106 sptz/mL e mantidos em banho maria a 32 °C. O CCC foi adicionado: controle (0,0mg), 1,5mg, 3,0mg e 6,0mg de CCC/120 x106 sptz/mL. Após adição, o sêmen foi resfriado a 5 °C por duas horas, após esse período, envasado em palhetas de 0,5mL e então acondicionado sob vapor de nitrogênio líquido (N2L), a 8 cm da lâmina líquida/15 minutos e depois imersos no N2L. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática e da membrana acrossomal, atividade mitocondrial e teste de ligação. As variáveis foram submetidas à análise de variância e médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. O maior percentual de integridade da membrana plasmática, acrossomal e a maior atividade mitocondrial foram obtidos utilizando 6,0mg de CCC. A adição de3,0mg de CCC manteve o percentual de motilidade espermática após a criopreservação, quando comparado aos demais tratamentos e controle. A adição de 1,5 e 3,0mg de CCC mantiveram o percentual de viabilidade espermática após a criopreservação acima de 65%. O número de espermatozoides com capacidade de ligação a membrana perivitelina da gema de ovo foi maior (p<0,05) no tratamento com 3,0mg de CCC. Concluiu se que a adição de CCC ao sêmen diluído, nas concentrações avaliadas, melhora a qualidade espermática após descongelação.

The objective was to evaluate the effect of adding different concentrations of cholesterol carried by cyclodextrin (CCC) on frozen ovine sperm. Two ejaculates were collected from 10 rams (n=20) and diluted in Tris-Yolk until the final concentration of 200 x 106 sptz/mL was reached and kept in a water bath at 32 °C. The CCC was added: control (0,0mg), 1.5mg, 3.0mg, and 6.0mg of CCC/120 x 106 sptz/mL. After the addition, the semen was cooled at 5 °C for two hours, after that period, filled in 0.5 mL straws, and then conditioned under liquid nitrogen vapor (N2L), at 8 cm of the liquid/15 minutes, and then immersed in N2L. The samples were analyzed for sperm motility, plasma membrane and acrosomal membrane integrity, mitochondrial activity, and binding test. The variables were subjected to analysis of variance and means compared by Tukey's test at 5% probability. The highest percentage of plasma membrane integrity and the highest mitochondrial activity were obtained using 6.0mg of CCC. The addition of 3.0mg of CCC maintained the percentage of sperm motility after cryopreservation, when compared to other treatments and control. The addition of 1.5 and 3.0mg of CCC maintained the percentage of sperm viability after cryopreservation, above 65%. The count of sperm with ability to bind to the egg yolk perivitelline membrane was higher (p<0.05) with 3.0mg of CCC. It is concluded that the addition of CCC to the diluted semen, in the evaluated concentrations, improves the sperm quality after thawing.

Adição de colesterol carregado com ciclodextrina ao sêmen ovino na criopreservação / Addition of cholesterol loaded with cyclodextrin to sheep semen in cryopreservation

Objetivou-se avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações do colesterol carregado por ciclodextrina (CCC) sobre os espermatozoides congelados de ovinos. Foram coletados dois ejaculados de 10 carneiros (n=20) e diluídos em Tris-Gema de ovo até a concentração final de 200 x106 sptz/mL e mantidos em banho maria a 32 °C. O CCC foi adicionado: controle (0,0mg), 1,5mg, 3,0mg e 6,0mg de CCC/120 x106 sptz/mL. Após adição, o sêmen foi resfriado a 5 °C por duas horas, após esse período, envasado em palhetas de 0,5mL e então acondicionado sob vapor de nitrogênio líquido (N2L), a 8 cm da lâmina líquida/15 minutos e depois imersos no N2L. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática e da membrana acrossomal, atividade mitocondrial e teste de ligação. As variáveis foram submetidas à análise de variância e médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. O maior percentual de integridade da membrana plasmática, acrossomal e a maior atividade mitocondrial foram obtidos utilizando 6,0mg de CCC. A adição de3,0mg de CCC manteve o percentual de motilidade espermática após a criopreservação, quando comparado aos demais tratamentos e controle. A adição de 1,5 e 3,0mg de CCC mantiveram o percentual de viabilidade espermática após a criopreservação acima de 65%. O número de espermatozoides com capacidade de ligação a membrana perivitelina da gema de ovo foi maior (p<0,05) no tratamento com 3,0mg de CCC. Concluiu se que a adição de CCC ao sêmen diluído, nas concentrações avaliadas, melhora a qualidade espermática após descongelação.(AU)

The objective was to evaluate the effect of adding different concentrations of cholesterol carried by cyclodextrin (CCC) on frozen ovine sperm. Two ejaculates were collected from 10 rams (n=20) and diluted in Tris-Yolk until the final concentration of 200 x 106 sptz/mL was reached and kept in a water bath at 32 °C. The CCC was added: control (0,0mg), 1.5mg, 3.0mg, and 6.0mg of CCC/120 x 106 sptz/mL. After the addition, the semen was cooled at 5 °C for two hours, after that period, filled in 0.5 mL straws, and then conditioned under liquid nitrogen vapor (N2L), at 8 cm of the liquid/15 minutes, and then immersed in N2L. The samples were analyzed for sperm motility, plasma membrane and acrosomal membrane integrity, mitochondrial activity, and binding test. The variables were subjected to analysis of variance and means compared by Tukey's test at 5% probability. The highest percentage of plasma membrane integrity and the highest mitochondrial activity were obtained using 6.0mg of CCC. The addition of 3.0mg of CCC maintained the percentage of sperm motility after cryopreservation, when compared to other treatments and control. The addition of 1.5 and 3.0mg of CCC maintained the percentage of sperm viability after cryopreservation, above 65%. The count of sperm with ability to bind to the egg yolk perivitelline membrane was higher (p<0.05) with 3.0mg of CCC. It is concluded that the addition of CCC to the diluted semen, in the evaluated concentrations, improves the sperm quality after thawing.(AU)

Effect of cryoprotectant on the motility, viability, fertilization, and DNA integrity of naleh fish Barbonymus sp. (Cyprinidae) sperm / Efeito do crioprotetor na motilidade, viabilidade, fertilização e integridade do DNA no sêmen de peixes naleh Barbonymus sp. (Cyprinidae)

Naleh fish Barbonymus sp. is a commercial freshwater fish, which is indigenous to Aceh, Indonesia. The population of this species has declined over the years as a result of habitat perturbations and overfishing. Hence, the crucial need to develop a cryopreservation method to support breeding programs. This involved the use of a cryoprotectant as an important component. The objective of this study, therefore, was to explore the best cryoprotectant for naleh fish spermatozoa, and a total of five types were tested. These include the DMSO, Methanol, Ethanol, Glycerol, and Ethylene Glycol at a similar concentration of 10%, which were individually combined with 15% egg yolk, and every treatment was performed in three replications. Conversely, Ringer's solution was adopted as an extender, and the sperm was cryopreserved in liquid nitrogen for 15 days. The results showed significant influence on sperm motility and viability, as well as egg fertility of naleh fish (P <0.05), although the DMSO provided the best outcome, compared to others at 47.17%, 50.13%, and 45.67%, respectively. Furthermore, DNA fragmentation had not occurred in the fresh and cryopreserved sperm samples, indicating the protective effect of tested cryoprotectants. It is concluded that the 10% DMSO and 15% egg yolk is the best cryoprotectant for naleh fish spermatozoa.(AU)

O peixe naleh Barbonymus sp. é um peixe comercial de água doce, originário de Aceh, Indonésia. Durante vários anos, as perturbações provocadas no seu habitat e a pesca predatória determinaram o declínio da sua população, cuja preservação deve apoiar-se em um programa de reprodução controlada, com o emprego de espermatozoides criopreservados. O presente trabalho realizou um estudo comparativo de cinco crioprotetores: dimetilsultóxido, metanol, etanol, glicerol e etileno glicol. Todos os crioprotetores foram testados na concentração de 10%, combinados a 15% de gema de ovo. Cada tratamento foi efetuado em triplicatas. A solução de ringer foi utilizada como extensor e o esperma foi criopreservado em nitrogênio líquido por 15 dias. Os resultados obtidos revelaram a existência de influência significante (P<0,05) na viabilidade e motilidade espermática bem como na fertilidade dos ovos do peixe naleh, em que o dimetilsulfóxido apresentou o melhor resultado com os valores de 47,17%, 50,13% e 45,67%, respectivamente. Por outro lado, a fragmentação do DNA não ocorreu nas amostras de esperma fresco e criopreservado, indicando o efeito protetor dos crioprotetores testados. A conclusão obtida foi que o dimetilsulfóxido e 15% de gema de ovo foram o melhor crioprotetor para os espermatozoides do peixe naleh.(AU)

Spermatozoon head size the main differentiating feature between spermatozoa of blue and white Arctic fox (Vulpes lagopus)

Morfologia e morfometria espermática, este é um importante determinante da capacidade reprodutiva masculina. Dados morfométricos podem fornecer informações relevantes em estudos focados em biologia evolutiva, avaliação da qualidade do esperma, incluindo previsão do potencial de fertilidade, criopreservação de sêmen ou efeito de reprotóxicos. O artigo apresenta a análise morfométrica de espermatozóides de dois morfos coloridos de raposa do Ártico (Vulpes lagopus), e tenta determinar a relação entre indicadores de qualidade selecionados e dimensões e forma dos espermatozóides. O material de pesquisa consistiu em ejaculados coletados uma única vez por estimulação manual de 20 raposas do Ártico de um ano de idade (10 indivíduos do morfo azul e 10 do morfo branco). Ejaculados foram analisados ​​para parâmetros padrão (volume, concentração de esperma, número total de espermatozóides no ejaculado) e utilizado para a preparação de espécimes microscópicos. Verificou-se que as dimensões dos espermatozóides das raposas do Ártico dependem dos morfos da cor masculina. Os espermatozóides das raposas brancas do Ártico foram significativamente mais longos (1,82 µm) e tinham cabeças maiores (0,32 µm mais longas e 0,15 µm mais largas) em comparação com os espermatozóides das raposas azuis do Ártico (P <0,05). As interações entre as dimensões particulares dos espermatozoides indicaram a ocorrência de gametas com formas diferentes. Todos os coeficientes de correlação entre as características morfométricas dos espermatozoides foram estatisticamente significantes. Nossa pesquisa provou que nas raposas azuis do Ártico, as dimensões dos espermatozóides (comprimento da cauda e comprimento total do espermatozóide) podem estar relacionadas com a porcentagem de espermatozóides com alterações primárias (respectivamente: r = -0,68 er = -0,75; em P <0,05).(AU)

Effect of cryoprotectant on the motility, viability, fertilization, and DNA integrity of naleh fish Barbonymus sp. (Cyprinidae) sperm / Efeito do crioprotetor na motilidade, viabilidade, fertilização e integridade do DNA no sêmen de peixes naleh Barbonymus sp. (Cyprinidae)

Naleh fish Barbonymus sp. is a commercial freshwater fish, which is indigenous to Aceh, Indonesia. The population of this species has declined over the years as a result of habitat perturbations and overfishing. Hence, the crucial need to develop a cryopreservation method to support breeding programs. This involved the use of a cryoprotectant as an important component. The objective of this study, therefore, was to explore the best cryoprotectant for naleh fish spermatozoa, and a total of five types were tested. These include the DMSO, Methanol, Ethanol, Glycerol, and Ethylene Glycol at a similar concentration of 10%, which were individually combined with 15% egg yolk, and every treatment was performed in three replications. Conversely, Ringer's solution was adopted as an extender, and the sperm was cryopreserved in liquid nitrogen for 15 days. The results showed significant influence on sperm motility and viability, as well as egg fertility of naleh fish (P <0.05), although the DMSO provided the best outcome, compared to others at 47.17%, 50.13%, and 45.67%, respectively. Furthermore, DNA fragmentation had not occurred in the fresh and cryopreserved sperm samples, indicating the protective effect of tested cryoprotectants. It is concluded that the 10% DMSO and 15% egg yolk is the best cryoprotectant for naleh fish spermatozoa.(AU)

O peixe naleh Barbonymus sp. é um peixe comercial de água doce, originário de Aceh, Indonésia. Durante vários anos, as perturbações provocadas no seu habitat e a pesca predatória determinaram o declínio da sua população, cuja preservação deve apoiar-se em um programa de reprodução controlada, com o emprego de espermatozoides criopreservados. O presente trabalho realizou um estudo comparativo de cinco crioprotetores: dimetilsultóxido, metanol, etanol, glicerol e etileno glicol. Todos os crioprotetores foram testados na concentração de 10%, combinados a 15% de gema de ovo. Cada tratamento foi efetuado em triplicatas. A solução de ringer foi utilizada como extensor e o esperma foi criopreservado em nitrogênio líquido por 15 dias. Os resultados obtidos revelaram a existência de influência significante (P<0,05) na viabilidade e motilidade espermática bem como na fertilidade dos ovos do peixe naleh, em que o dimetilsulfóxido apresentou o melhor resultado com os valores de 47,17%, 50,13% e 45,67%, respectivamente. Por outro lado, a fragmentação do DNA não ocorreu nas amostras de esperma fresco e criopreservado, indicando o efeito protetor dos crioprotetores testados. A conclusão obtida foi que o dimetilsulfóxido e 15% de gema de ovo foram o melhor crioprotetor para os espermatozoides do peixe naleh.(AU)

Estresse calórico e reprodução em ovinos: fundamentos e perspectivas tecnológicas / Heat stress on sheep reproduction: fundamentals and technological perspectives

A ovinocultura é uma importante atividade que produz proteínas de alto valor biológico, mas seus ganhos podem ser reduzidos em função do estresse ambiental. Isso reforça a importância de se estudar a relação entre o ambiente térmico e o animal, identificando animais mais adaptados e férteis, e melhores práticas de manejo. O ovino (Ovis aries) é um animal homeotérmico, que mantem sua temperatura corporal em equilíbrio dinâmico. Quando em estresse calórico, os ovinos usam mecanismos sensíveis e latentes para dissipar o calor acumulado, com destaque para o redirecionamento do fluxo sanguíneo, a ofegação e a sudorese. O escroto desempenha importante crucial na termorregulação dos testículos, os quais precisam funcionar sob em até 6,0oC abaixo da temperatura interna corpórea. A hipertermia testicular compromete a espermatogênese, reduz a concentração seminal, a motilidade progressiva e a viabilidade espermática. Ainda, leva a aumento dos defeitos morfológicos espermáticos, na produção de espécies reativas de oxigênio e na fragmentação do DNA espermático, diminuindo a capacidade fecundante. Tecnologias disruptivas para monitoramento do ambiente de produção, da termorregulação e do bem-estar dos animais já são realidade e se encontram em expansão, favorecendo a tomada de decisões em tempo real e o desempenho reprodutivo dos ovinos.

Sheep farming is a relevant activity that provides proteins of high biological value, but its gains can be reduced due to environmental stress. This reinforces the importance of studying the relationship between the thermal environment and the animal, identifying more adapted and fertile animals, and better management practices. Sheep (Ovis aries) are homeothermic animals and thus maintain their body temperature in a state of dynamic balance. Under heat stress, sheep dissipate accumulated heat through sensitive and latent mechanisms, primarily using redirection of blood flow, panting and sweating. The scrotum plays a crucial role in the thermoregulation of the testicles, which need to be maintained up to 6.0oC below the body core temperature. Testicular hyperthermia impairs spermatogenesis, reduces seminal concentration, progressive motility and sperm viability. Furthermore, it leads to an increase in sperm morphological defects, in the production of reactive oxygen species, and in sperm DNA fragmentation, reducing the fertilizing capacity. Disruptive technologies for monitoring the production systems, animal thermoregulation and welfare are already a reality and are expanding, favoring realtime decision making and the reproductive performance of sheep.

Efficiency of the anti-GnRH vaccine for castration of lambs intended for finishing in pastures / Eficiência da vacina anti-GnRH para castração de cordeiros destinados à terminação a pasto

It was aimed to evaluate anti-GnRH vaccine efficiency on productive characteristics, seminal performance, size, and histology of testicles of lambs submitted to immunocastration. Twenty contemporary Texel lambs were evaluated, being 10 animals received two doses of 1 mL of anti-GnRH vaccine and 10 received two doses of 1 mL of saline, with an interval of 30 days. Seminal characteristics, weight and histological cut for the testicles, productive performance, and blood parameters were analyzed. Andrological monitoring was carried out every 30 days. All animals were kept on pasture of Urochloa spp. receiving daily supplementation protein-energetic by 90 days. There was effect of immunocastration on slaughter weight (44.3 vs. 48.3 kg),total gain (9.9 vs. 10.3 kg), daily gain (104.5 vs. 108.9 g/day), and feed conversion (5.83 vs. 5.97) respectivelyto immunocastrated and intact lambs. There was immunocastration effect on testicle weight (0.09 vs. 0.35g), motility (4.5 vs. 61.0%), vigor (0.40 vs. 3.00), volume (0.09 vs. 0.74 mL) and swirling (0.20 vs. 2.70) in the third semen collection. Immunocastration through two doses of 1 mL of anti-GnRH vaccine with a 30-day interval between doses, causes infertility in sheep and can be adopted for lambs.

O objetivo foi avaliar a eficiência da vacina anti-GnRH quanto às características de desempenho produtivo e seminais, tamanho e histologia dos testículos de cordeiros submetidos à imunocastração. Foram avaliados 20 cordeiros contemporâneos cruzados SRD x Texel, dos quais 10 animais receberam duas doses de 1 mL de vacina anti-GnRH e 10 receberam duas doses de 1 mL de soro fisiológico, com intervalo de 30 dias entre doses. As variáveis analisadas foram concentração espermática, motilidade, vigor, turbilhonamento e volume de ejaculado para o sêmen, peso e corte histológico para os testículos, peso ao abate, ganho de peso total, ganho médio diário, consumo médio de suplemento e conversão alimentar para o desempenho produtivo e GGT, AST, albumina, creatinina, proteínas totais e ureia para o sangue. A cada 30 dias foi realizado o acompanhamento andrológico para verificação do efeito da vacina sobre características seminais e testiculares dos animais. Durante os 90 dias de duração do experimento, os animais foram mantidos a pasto de Urochloa spp., com suplementação diária, sendo abatidos ao final deste período. Houve diferença entre animais imunocastrados e inteiros respectivamente, para o peso ao abate (44,3 vs. 48,3 kg), ganho de peso total (9,9 vs 10,3 kg), ganho médio diário (104,5 vs. 108,9 g/dia) e conversão alimentar (5,83 vs. 5,97). Houve efeito significativo para motilidade (4,5 vs. 61,0%), vigor (0,40vs. 3,00), volume (0,09 vs. 0,74 mL) e turbilhonamento (0,20 vs. 2,70) na terceira colheita de sêmen, que foi 30 dias após a segunda dose da vacina. Houve efeito significativo para peso dos testículos (0,09 vs. 0,35g). No perfil bioquímico do sangue dos animais não houve alterações significativas durante o experimento em ambos os tratamentos. A imunocastração através de duas doses de 1 mL de vacina anti-GnRH com 30 dias de intervalo entre as doses, [...].