Morphological and molecular characterization of Contracaecum australe (Nematoda: Anisakidae) parasitizing Phalacrocorax brasilianus (Aves: Phalacrocoracidae) on the north coast of Brazil / Caracterização morfológica e molecular de Contracaecum australe (Nematoda: Anisakidae) parasitando Phalacrocorax brasilianus (Aves: Phalacrocoracidae) no litoral norte do Brasil

Abstract For the first time in Brazil, Contracaecum australe is recorded parasitizing Phalacrocorax brasilianus (Aves, Suliformes, Phalacrocoracidae) from the Marine Extractive Reserve of Soure on Marajó Island, Brazilian Amazon. Its morphology revealed a body with a transversally striated cuticle, smooth or slightly cleft interlabia, lips with auricles, labial papillae, and conspicuous amphids. In males, the presence of the median papilla on the upper lip of the cloaca and spicules that reach almost half of the body of the parasite. These morphological characters, added to the number and distribution of the pre- and postcloacal papillae of the male specimens, and supported by the molecular phylogeny from the analysis of the ITS-1, 5.8S and ITS-2 genes, allowed the identification of these parasites.

Resumo Pela primeira vez no Brasil, Contracaecum australe é registrado parasitando Phalacrocorax brasilianus (Aves, Suliformes, Phalacrocoracidae) da Reserva Extrativista Marinha de Soure na Ilha de Marajó, Amazônia brasileira. Sua morfologia revelou corpo com cutícula estriada transversalmente, interlábios lisos ou levemente fendidos, lábios com aurículas, papilas labiais e anfídeos conspícuos. Nos machos, observa-se a presença da papila mediana no lábio superior da cloaca e espículos que atingem quase a metade do corpo do parasito. Esses caracteres morfológicos, somados ao número e distribuição das papilas pré e pós-cloacais dos espécimes machos, e apoiados pela filogenia molecular a partir da análise dos genes ITS-1, 5.8S e ITS-2, permitiram a identificação desses parasitos.

Filtrates from cultures of endophytic fungi isolated from leaves of Copaifera oblongifolia (Fabaceae) affect germination and seedling development differently

Abstract Interactions between endophytic fungi (EFs) and their host plants range from positive to neutral to negative. The results of such interactions can vary depending on the organ of the infected host plant. EFs isolated from the leaves of some species of plants have potential for use as agents to inhibit seed germination and control invasive plants. The objectives of this study were to identify EFs present in the leaves of Copaifera oblongifolia and to evaluate the role of these fungi in seed germination and seedling development. A total of 11 species of EFs were isolated, which were identified using the internal transcribed spacers (ITS) sequence of the nuclear ribosomal DNA. The isolated species of EFs are generalists and probably are transmitted horizontally. Laboratory tests revealed that filtrates of these fungal isolates differently affect seed germination and seedling development of C. oblongifolia. The species Curvularia intermedia, Neofusicoccum parvum, Pseudofusicoccum stromaticum and Phomopsis sp. negatively affected seed germination, with N. parvum standing out for its negative effects, inhibiting seedling germination and survival in 89 and 222%, respectively. In addition, Cochliobolus intermedius negatively affected seedling development. Thus, the combined use of N. parvum and C. intermedius, or products from the metabolism of these microorganisms, in the control of invasive plants deserves attention from future studies.

Resumo As interações entre fungos endofíticos (FEs) e suas plantas hospedeiras variam de positivas, neutras a negativas. Os resultados destas interações podem variar dependendo do órgão da planta hospedeira infectada. FEs isolados de folhas de algumas espécies de plantas têm potencial para serem usados como agentes inibidores da germinação de sementes e no controle de plantas invasoras. Os objetivos deste estudo foram identificar os FEs presentes nas folhas de Copaifera oblongifolia e avaliar o papel destes fungos na germinação das sementes e no desenvolvimento das plântulas. Um total de 11 espécies de FEs foi isolado das folhas de C. oblongifolia e identificado através da sequência dos espaçadores internos transcritos do DNA ribossomal nuclear. As espécies de FEs isoladas são generalistas e provavelmente devem ser transmitidas horizontalmente. Os resultados dos testes de germinação mostraram que filtrados destes isolados fúngicos podem afetar diferentemente a germinação das sementes e o desenvolvimento das plântulas de C. oblongifolia. As espécies Curvularia intermedia, Neofusicoccum parvum, Pseudofusicoccum stromaticum e Phomopsis sp. afetaram negativamente a germinação das sementes de C. oblongifolia. Dentre estas espécies devemos destacar que N. parvum reduziu a germinação e a sobrevivência das plântulas em 89 e 222%, respectivamente. Além disso, Cochiliobolus intermedius afetou negativamente o desenvolvimento das plântulas. Assim, o uso combinado de N. parvum e C. intermedius, ou de produtos do metabolismo destas espécies de fungos, têm potencial para serem usados no manejo de plantas invasoras.

Morphological and molecular characterization of Contracaecum australe (Nematoda: Anisakidae) parasitizing Phalacrocorax brasilianus (Aves: Phalacrocoracidae) on the north coast of Brazil / Caracterização morfológica e molecular de Contracaecum australe (Nematoda: Anisakidae) parasitando Phalacrocorax brasilianus (Aves: Phalacrocoracidae) no litoral norte do Brasil

For the first time in Brazil, Contracaecum australe is recorded parasitizing Phalacrocorax brasilianus (Aves, Suliformes, Phalacrocoracidae) from the Marine Extractive Reserve of Soure on Marajó Island, Brazilian Amazon. Its morphology revealed a body with a transversally striated cuticle, smooth or slightly cleft interlabia, lips with auricles, labial papillae, and conspicuous amphids. In males, the presence of the median papilla on the upper lip of the cloaca and spicules that reach almost half of the body of the parasite. These morphological characters, added to the number and distribution of the pre- and postcloacal papillae of the male specimens, and supported by the molecular phylogeny from the analysis of the ITS-1, 5.8S and ITS-2 genes, allowed the identification of these parasites.(AU)

Pela primeira vez no Brasil, Contracaecum australe é registrado parasitando Phalacrocorax brasilianus (Aves, Suliformes, Phalacrocoracidae) da Reserva Extrativista Marinha de Soure na Ilha de Marajó, Amazônia brasileira. Sua morfologia revelou corpo com cutícula estriada transversalmente, interlábios lisos ou levemente fendidos, lábios com aurículas, papilas labiais e anfídeos conspícuos. Nos machos, observa-se a presença da papila mediana no lábio superior da cloaca e espículos que atingem quase a metade do corpo do parasito. Esses caracteres morfológicos, somados ao número e distribuição das papilas pré e pós-cloacais dos espécimes machos, e apoiados pela filogenia molecular a partir da análise dos genes ITS-1, 5.8S e ITS-2, permitiram a identificação desses parasitos.(AU)

Filtrates from cultures of endophytic fungi isolated from leaves of Copaifera oblongifolia (Fabaceae) affect germination and seedling development differently / Fungos endofíticos isolados de folhas de Copaifera oblongifolia (Fabaceae) afetam diferentemente a germinação e o desenvolvimento das plântulas

Interactions between endophytic fungi (EFs) and their host plants range from positive to neutral to negative. The results of such interactions can vary depending on the organ of the infected host plant. EFs isolated from the leaves of some species of plants have potential for use as agents to inhibit seed germination and control invasive plants. The objectives of this study were to identify EFs present in the leaves of Copaifera oblongifolia and to evaluate the role of these fungi in seed germination and seedling development. A total of 11 species of EFs were isolated, which were identified using the internal transcribed spacers (ITS) sequence of the nuclear ribosomal DNA. The isolated species of EFs are generalists and probably are transmitted horizontally. Laboratory tests revealed that filtrates of these fungal isolates differently affect seed germination and seedling development of C. oblongifolia. The species Curvularia intermedia, Neofusicoccum parvum, Pseudofusicoccum stromaticum and Phomopsis sp. negatively affected seed germination, with N. parvum standing out for its negative effects, inhibiting seedling germination and survival in 89 and 222%, respectively. In addition, Cochliobolus intermedius negatively affected seedling development. Thus, the combined use of N. parvum and C. intermedius, or products from the metabolism of these microorganisms, in the control of invasive plants deserves attention from future studies.

As interações entre fungos endofíticos (FEs) e suas plantas hospedeiras variam de positivas, neutras a negativas. Os resultados destas interações podem variar dependendo do órgão da planta hospedeira infectada. FEs isolados de folhas de algumas espécies de plantas têm potencial para serem usados como agentes inibidores da germinação de sementes e no controle de plantas invasoras. Os objetivos deste estudo foram identificar os FEs presentes nas folhas de Copaifera oblongifolia e avaliar o papel destes fungos na germinação das sementes e no desenvolvimento das plântulas. Um total de 11 espécies de FEs foi isolado das folhas de C. oblongifolia e identificado através da sequência dos espaçadores internos transcritos do DNA ribossomal nuclear. As espécies de FEs isoladas são generalistas e provavelmente devem ser transmitidas horizontalmente. Os resultados dos testes de germinação mostraram que filtrados destes isolados fúngicos podem afetar diferentemente a germinação das sementes e o desenvolvimento das plântulas de C. oblongifolia. As espécies Curvularia intermedia, Neofusicoccum parvum, Pseudofusicoccum stromaticum e Phomopsis sp. afetaram negativamente a germinação das sementes de C. oblongifolia. Dentre estas espécies devemos destacar que N. parvum reduziu a germinação e a sobrevivência das plântulas em 89 e 222%, respectivamente. Além disso, Cochiliobolus intermedius afetou negativamente o desenvolvimento das plântulas. Assim, o uso combinado de N. parvum e C. intermedius, ou de produtos do metabolismo destas espécies de fungos, têm potencial para serem usados no manejo de plantas invasoras.

Filtrates from cultures of endophytic fungi isolated from leaves of Copaifera oblongifolia (Fabaceae) affect germination and seedling development differently / Fungos endofíticos isolados de folhas de Copaifera oblongifolia (Fabaceae) afetam diferentemente a germinação e o desenvolvimento das plântulas

Interactions between endophytic fungi (EFs) and their host plants range from positive to neutral to negative. The results of such interactions can vary depending on the organ of the infected host plant. EFs isolated from the leaves of some species of plants have potential for use as agents to inhibit seed germination and control invasive plants. The objectives of this study were to identify EFs present in the leaves of Copaifera oblongifolia and to evaluate the role of these fungi in seed germination and seedling development. A total of 11 species of EFs were isolated, which were identified using the internal transcribed spacers (ITS) sequence of the nuclear ribosomal DNA. The isolated species of EFs are generalists and probably are transmitted horizontally. Laboratory tests revealed that filtrates of these fungal isolates differently affect seed germination and seedling development of C. oblongifolia. The species Curvularia intermedia, Neofusicoccum parvum, Pseudofusicoccum stromaticum and Phomopsis sp. negatively affected seed germination, with N. parvum standing out for its negative effects, inhibiting seedling germination and survival in 89 and 222%, respectively. In addition, Cochliobolus intermedius negatively affected seedling development. Thus, the combined use of N. parvum and C. intermedius, or products from the metabolism of these microorganisms, in the control of invasive plants deserves attention from future studies.(AU)

As interações entre fungos endofíticos (FEs) e suas plantas hospedeiras variam de positivas, neutras a negativas. Os resultados destas interações podem variar dependendo do órgão da planta hospedeira infectada. FEs isolados de folhas de algumas espécies de plantas têm potencial para serem usados como agentes inibidores da germinação de sementes e no controle de plantas invasoras. Os objetivos deste estudo foram identificar os FEs presentes nas folhas de Copaifera oblongifolia e avaliar o papel destes fungos na germinação das sementes e no desenvolvimento das plântulas. Um total de 11 espécies de FEs foi isolado das folhas de C. oblongifolia e identificado através da sequência dos espaçadores internos transcritos do DNA ribossomal nuclear. As espécies de FEs isoladas são generalistas e provavelmente devem ser transmitidas horizontalmente. Os resultados dos testes de germinação mostraram que filtrados destes isolados fúngicos podem afetar diferentemente a germinação das sementes e o desenvolvimento das plântulas de C. oblongifolia. As espécies Curvularia intermedia, Neofusicoccum parvum, Pseudofusicoccum stromaticum e Phomopsis sp. afetaram negativamente a germinação das sementes de C. oblongifolia. Dentre estas espécies devemos destacar que N. parvum reduziu a germinação e a sobrevivência das plântulas em 89 e 222%, respectivamente. Além disso, Cochiliobolus intermedius afetou negativamente o desenvolvimento das plântulas. Assim, o uso combinado de N. parvum e C. intermedius, ou de produtos do metabolismo destas espécies de fungos, têm potencial para serem usados no manejo de plantas invasoras.(AU)

Ribosomal, mitochondrial and bacterial (Wolbachia) reference sequences for Dipetalonema gracile obtained from a wild pied tamarin (Saguinus bicolor) host in Manaus, Brazil / Sequências ribossômicas, mitocondriais e bacterianas (Wolbachia) de referência para Dipetalonema gracile obtidas de um hospedeiro sauim-de-coleira (Saguinus bicolor) em Manaus, Brasil

The primates that inhabit the rainforest surrounding the city of Manaus (Amazonas, Brazil) have long been recognised as potentially important reservoirs of emerging and re-emerging infectious diseases (ERIDs). PCR amplification of filarial sequences from wild-caught Simulium oyapockense has been used to incriminate potentially important Amazon-region ERID bridge vectors by showing they had previously fed on non-human primates. The broader use of filarial parasite sequences for the incrimination of biting insects as potentially important zoonotic disease vectors is limited by a paucity of primate-derived filarial parasite reference sequences which can be matched to the PCR amplified sequences obtained from insect-vector vectors. Here we have used shotgun sequencing to obtain reference data from an adult Dipetalonema gracile parasite which was found infecting a wild pied tamarin (Saguinus bicolor) in a peripheral region of Manaus. We report the parasite´s complete mitochondrial genome (which is 13,647 base pairs in length), 894,846 base pairs of its Wolbachia genome and 6,426 base pairs of its ribosomal DNA locus (spanning from the start of its 18S subunit to the end of its 28S subunit). Despite being critically endangered, S. bicolor is commonly encountered around the periphery of Manaus and in urban forest fragments. The reported sequences may be a useful reference tool for identifying ERID bridge vectors and potentially provide some insights into the amount and the nature of contact between primate pathogen reservoirs and the residents of Manaus.(AU)

Os primatas que habitam a floresta tropical ao redor da cidade de Manaus (Amazonas, Brasil) há muito são reconhecidos como reservatórios potencialmente importantes de doenças infecciosas emergentes e reemergentes. Sequências de DNA de parasitas filariais detectadas por PCR em amostras de Simulium oyapockense foram usadas para demonstrar que eles haviam se alimentado anteriormente de primatas não humanos e, dessa maneira, incriminar vetores-ponte da região amazônica. O uso mais amplo de detecção de parasitas filariais para a incriminação de vetores-ponte é limitado por uma escassez de sequências referência de parasitas filarias obtidas de hospedeiros. Aqui nós usamos o sequenciamento tipo shotgun para obter dados de referência de um parasita adulto Dipetalonema gracile encontrado infectando um sauim-de-coleira, Saguinus bicolor no entorno de Manaus. Relatamos o genoma mitocondrial completo do parasita (que tem 13.647 pares de bases de comprimento), 894.846 pares de bases de seu genoma de Wolbachia e 6.426 pares de bases de seu locus de DNA ribossômico (desde o início de sua subunidade 18S até o final de sua subunidade 28S). Apesar de criticamente ameaçado, S. bicolor é comumente encontrado no entorno de Manaus e em fragmentos florestais urbanos. As sequências relatadas podem ser uma ferramenta de referência útil para identificar vetores ponte e potencialmente fornecer algumas informações sobre o contato entre reservatórios de patógenos de primatas e os moradores de Manaus.(AU)

Filtrates from cultures of endophytic fungi isolated from leaves of Copaifera oblongifolia (Fabaceae) affect germination and seedling development differently / Fungos endofíticos isolados de folhas de Copaifera oblongifolia (Fabaceae) afetam diferentemente a germinação e o desenvolvimento das plântulas

Abstract Interactions between endophytic fungi (EFs) and their host plants range from positive to neutral to negative. The results of such interactions can vary depending on the organ of the infected host plant. EFs isolated from the leaves of some species of plants have potential for use as agents to inhibit seed germination and control invasive plants. The objectives of this study were to identify EFs present in the leaves of Copaifera oblongifolia and to evaluate the role of these fungi in seed germination and seedling development. A total of 11 species of EFs were isolated, which were identified using the internal transcribed spacers (ITS) sequence of the nuclear ribosomal DNA. The isolated species of EFs are generalists and probably are transmitted horizontally. Laboratory tests revealed that filtrates of these fungal isolates differently affect seed germination and seedling development of C. oblongifolia. The species Curvularia intermedia, Neofusicoccum parvum, Pseudofusicoccum stromaticum and Phomopsis sp. negatively affected seed germination, with N. parvum standing out for its negative effects, inhibiting seedling germination and survival in 89 and 222%, respectively. In addition, Cochliobolus intermedius negatively affected seedling development. Thus, the combined use of N. parvum and C. intermedius, or products from the metabolism of these microorganisms, in the control of invasive plants deserves attention from future studies.

Resumo As interações entre fungos endofíticos (FEs) e suas plantas hospedeiras variam de positivas, neutras a negativas. Os resultados destas interações podem variar dependendo do órgão da planta hospedeira infectada. FEs isolados de folhas de algumas espécies de plantas têm potencial para serem usados como agentes inibidores da germinação de sementes e no controle de plantas invasoras. Os objetivos deste estudo foram identificar os FEs presentes nas folhas de Copaifera oblongifolia e avaliar o papel destes fungos na germinação das sementes e no desenvolvimento das plântulas. Um total de 11 espécies de FEs foi isolado das folhas de C. oblongifolia e identificado através da sequência dos espaçadores internos transcritos do DNA ribossomal nuclear. As espécies de FEs isoladas são generalistas e provavelmente devem ser transmitidas horizontalmente. Os resultados dos testes de germinação mostraram que filtrados destes isolados fúngicos podem afetar diferentemente a germinação das sementes e o desenvolvimento das plântulas de C. oblongifolia. As espécies Curvularia intermedia, Neofusicoccum parvum, Pseudofusicoccum stromaticum e Phomopsis sp. afetaram negativamente a germinação das sementes de C. oblongifolia. Dentre estas espécies devemos destacar que N. parvum reduziu a germinação e a sobrevivência das plântulas em 89 e 222%, respectivamente. Além disso, Cochiliobolus intermedius afetou negativamente o desenvolvimento das plântulas. Assim, o uso combinado de N. parvum e C. intermedius, ou de produtos do metabolismo destas espécies de fungos, têm potencial para serem usados no manejo de plantas invasoras.

PCR-RLFP characterization of Leishmania spp. in domestic animals from the south-western border of Brazil / Caracterização de Leishmania spp. pela técnica de PCR-RFLP em animais domésticos da fronteira Oeste do Brasil

The aim of this study was to characterize Leishmania spp. from canine and feline samples using Polymerase Chain Reaction (PCR)- Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP). It was conducted in the southern region of Brazil, located at border crossings to Argentina and Uruguay. Samples were collected from 116 dogs (Canis lupus familiaris) and 89 cats (Felis catus). The PCR was performed to screen for an LT1 fragment from kinetoplast DNA (kDNA) target gene, and positive samples were subjected to a second PCR for an internal transcribed spacers (ITS1) region from ribosomal DNA (rDNA) target. RFLP was performed using the Haemophilus aegyptius (HAE III) restriction endonuclease (Fermentas ®). Positive samples by PCR ITS1 were sequenced and deposited in NCBI GenBank, and a phylogenetic analysis was developed. We found that 12.9% (15/116) of the samples from dogs were positive. All the 89 cat samples were negative. Positive samples were tested against Leishmania reference strains presenting different patterns in PCR-RFLP, and these samples showed bands denoting similarity to the standard species of Leishmania infantum, proven through sequencing and phylogenetic analysis. The RFLP technique, alone, was shown to be feasible for practical application and confirmation of the involved Leishmania spp.(AU)

O objetivo deste trabalho foi caracterizar espécies de Leishmania em amostras de caninos e felinos, utilizando-se a reação em cadeia da polimerase (PCR)- polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição (RFLP). O estudo foi realizado na região de fronteira no sul do Brasil, divisa com Argentina e Uruguai. Amostras foram coletadas de 116 cães (Canis lupus familiaris) e 89 gatos (Felis catus). A PCR foi realizada com o gene alvo do fragmento LT1 do DNA do cinetoplasto (kDNA) para triagem e, as amostras positivas foram submetidas a uma segunda PCR com alvo ITS1 no DNA ribossomal (rDNA). O RFLP foi realizado com a endonuclease de restrição Haemophilus aegyptius (HAE III) (Fermentas ®). As sequências positivas no PCR-ITS1 foram depositadas no NCBI GenBank, além disso, a análise filogenética foi realizada. Foram detectadas 12,9% (15/116) amostras positivas em cães. Das 89 amostras de gatos todas foram negativas. Cepas de referência de Leishmania, com padrões diferentes na PCR-RFLP, e amostras positivas apresentaram similaridade das bandas com as espécies padrão de Leishmania infantum, o que foi comprovado no sequenciamento e análise filogenética. A técnica de RFLP, sozinha, demonstrou viabilidade para a aplicação prática e a confirmação das espécies de Leishmania spp. envolvidas.(AU)

Sarcocystidae in wild birds of southeastern Brazil / Sarcocystidae em aves silvestres do sudeste do Brasil

This study aimed to identify members of the Sarcocystidae family in naturally infected wild birds at a rescue center in the state of Minas Gerais, southeastern Brazil. The heart and brain of 44 wild birds were evaluated by bioassay in mice to detect T. gondii, and extracted DNA was used for nested PCR of the 18S ribosomal DNA gene to detect members of the Sarcocystidae family. The positive samples were sequenced, assembled, edited and compared with sequences deposited in GenBank. Toxoplasma gondii was isolated from six (13.6%) out of 44 birds. Toxoplasma gondii DNA was identified in 10/44 (22.7%) of the birds. The amplified sequences exhibited 100% similarity with the DNA of the ME49 strain of T. gondii. Sarcocystis DNA (99% similarity) was identified in 5/44 (11.4%) of the birds. T. gondii and Sarcocystis spp. are common in wild birds in Minas Gerais, Brazil.(AU)

O objetivo deste estudo foi identificar membros da família Sarcocystidae em aves silvestres de vida livre naturalmente infectadas e resgatadas no estado de Minas Gerais, Brasil. Coração e cérebro de 44 aves silvestres foram avaliados por bioensaio em camundongos para detecção de T. gondii e extração de DNA para Nested-PCR do gene 18S do DNA ribossomal de membros da família Sarcocystidae. As amostras positivas foram sequenciadas, analisadas, editadas e comparadas com sequências depositadas no GenBank. Toxoplasma gondii foi isolado de seis (13,6%) das 44 aves. DNA de T. gondii foi identificado em 10/44 (22,7%) das 44 aves. As sequências amplificadas exibiram 100% de similaridade com o DNA da cepa ME49 de T. gondii. DNA de Sarcocystis (99% de similaridade) foi identificado em 5/44 (11,4%) das 44 aves. T. gondii e Sarcocystis spp. são encontrados, comumente, em aves silvestres no estado de Minas Gerais, Brasil.(AU)

Integrative taxonomy: combining molecular and morphological characteristics to identify Lymnaea (Galba) cubensis, intermediate host of Fasciola hepatica / Taxonomia integrativa: combinando características moleculares e morfológicas para identificar Lymnaea (Galba) cubensis, hospedeiro intermediário de Fasciola hepatica

Abstract Despite the epidemiological importance of the Lymnaeidae family regarding transmission of Fasciola hepatica, knowledge about the diversity and distribution of these molluscs and the role of each species in the expansion of fasciolosis remains sparse. Classical morphological (n=10) identification was performed in lymneids from Lagoa Santa, a municipality in the state of Minas Gerais, Brazil, along with molecular and phylogenetic analysis (n=05) based on the partial nucleotide sequences of the mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I gene (COI mtDNA) and ribosomal internal transcribed spacer II (ITS-2 rDNA). The shell morphology made it possible to distinguish the lymneids of Lagoa Santa from Pseudosuccinea columella. Differences found in the penile complex and prostate shape allowed this species to be distinguished from Galba truncatula. However, the homogeneity of reproductive tract characteristics among Lymnaea (Galba) cubensis, L. viator and L. neotropica confirmed that these characteristics show low taxonomic reliability for identifying cryptic species. Genetic divergence analysis for the COI mtDNA gene and ITS-2 region of rDNA revealed greater similarity to Lymnaea (Galba) cubensis. Thus, correct species differentiation is important for monitoring the epidemiological risk of fasciolosis in the state of Minas Gerais, where cases of the disease have increased over recent years.

Resumo Apesar da importância epidemiológica da família Lymnaeidae na transmissão de Fasciola hepatica, o conhecimento sobre a diversidade e a distribuição desses moluscos e o papel de cada espécie, na expansão da fasciolose, ainda é escasso. Realizou-se a identificação morfológica clássica (n=10) em limneídeos de Lagoa Santa, município do estado de Minas Gerais, Brasil, juntamente com a análise molecular e filogenética (n=05), baseada nas sequências parciais de nucleotídeos do gene mitocondrial da subunidade I do citocromo c oxidase (COI mtDNA) e espaçador interno, transcrito do DNA ribossomal II (ITS-2 rDNA). A morfologia da concha possibilitou distinguir os limneídeos de Lagoa Santa de Pseudosuccinea columella. As diferenças encontradas no complexo peniano e na forma da próstata permitiram que essa espécie fosse distinta de Galba truncatula. No entanto, a homogeneidade das características do trato reprodutivo entre Lymnaea (Galba) cubensis, L. viator e L. neotropica confirmou que essas características apresentam baixa confiabilidade taxonômica para a identificação de espécies crípticas. A análise da divergência genética para o gene COI mtDNA e região ITS-2 do rDNA revelou maior similaridade entre os limneídeos de Lagoa Santa com Lymnaea (Galba) cubensis.

Applications of polymerase chain reaction for the detection of equine Leishmania sp. infection / Aplicação da reação em cadeia da polimerase na detecção da infecção por Leishmania sp. em equinos

Leishmaniasis is a neglected zoonotic disease caused by a variety of pathogenic Leishmania species. In the New World, especially in Brazil, visceral leishmaniasis (VL) is caused by Leishmania infantum. The pathogen can infect several animal species including dogs, foxes, rodents, primates, felines, equines and humans. Dogs act as the primary domestic reservoirs. This study aimed to use polymerase chain reaction (PCR) for detecting Leishmania infection in horses living in a canine visceral leishmaniasis (CVL) endemic region. DNA samples from horse peripheral blood were used to perform PCR. Templates were amplified using primers for the kinetoplast DNA (kDNA) minicircles, which were able to detect different species of Leishmania. In addition, primers for internal transcribed spacer (ITS) of ribosomal DNA were used for detection of Trypanosomatidae sp. Amongst the 75 (39%) positive PCR samples from total 192 samples, 21 samples were positive for kDNA and 63 samples were positive for either ITS, ITS1, or ITS2 gene markers. The kDNA PCR and sequencing allowed the detection of L. infantum in horse blood samples. To our knowledge, this is the first report of equine infection with L. infantum in Southern Brazil. These results proved that L. infantum could also infect horses in addition to humans and dogs, as well as in European countries. This conclusion emphasizes the urgent need to follow up investigation of the infection in these animals.

A leishmaniose é uma doença zoonótica negligenciada, causada por uma diversidade de espécies patogênicas de Leishmania. No Novo Mundo, especialmente no Brasil, a leishmaniose visceral é causada pelo protozoário Leishmania infantum. A infecção acomete várias espécies animais (cães, raposas, roedores, primatas, felinos, equinos) e humanos e o cão é o principal reservatório doméstico. Este estudo teve como objetivo utilizar a reação em cadeia da polimerase (PCR) para detectar a infecção por Leishmania sp. em cavalos que vivem em uma região endêmica para leishmaniose visceral canina (LVC). Amostras de DNA do sangue periférico de equinos foram utilizadas para extração de DNA e PCR. As amplificações foram realizadas utilizando-se marcadores para a região do DNA do cinetoplasto (kDNA), que são capazes de detectar diferentes espécies de Leishmania sp. e a região dos espaçadores internos transcritos (ITS) do DNA ribossomal para detecção da família Trypanosomatidae. Dentre os 192 animais testados, 75 (39%) amostras foram positivas no PCR, 21 amostras foram positivas para PCR kDNA e 63 para os genes ITS, ITS1 e ITS2. O sequenciamento dos amplicons permitiu detectar L. infantum em amostras de sangue periférico de equinos. Este foi o primeiro relato de infecção por L. infantum no sul do Brasil na espécie equina. Os resultados demonstram que, assim como nos países europeus, a infecção foi detectada em equinos após ter sido identificada em seres humanos e cães, o que indica a urgência em acompanhar a investigação da infecção nessa espécie animal.

Applications of polymerase chain reaction for the detection of equine Leishmania sp. infection / Aplicação da reação em cadeia da polimerase na detecção da infecção por Leishmania sp. em equinos

Leishmaniasis is a neglected zoonotic disease caused by a variety of pathogenic Leishmania species. In the New World, especially in Brazil, visceral leishmaniasis (VL) is caused by Leishmania infantum. The pathogen can infect several animal species including dogs, foxes, rodents, primates, felines, equines and humans. Dogs act as the primary domestic reservoirs. This study aimed to use polymerase chain reaction (PCR) for detecting Leishmania infection in horses living in a canine visceral leishmaniasis (CVL) endemic region. DNA samples from horse peripheral blood were used to perform PCR. Templates were amplified using primers for the kinetoplast DNA (kDNA) minicircles, which were able to detect different species of Leishmania. In addition, primers for internal transcribed spacer (ITS) of ribosomal DNA were used for detection of Trypanosomatidae sp. Amongst the 75 (39%) positive PCR samples from total 192 samples, 21 samples were positive for kDNA and 63 samples were positive for either ITS, ITS1, or ITS2 gene markers. The kDNA PCR and sequencing allowed the detection of L. infantum in horse blood samples. To our knowledge, this is the first report of equine infection with L. infantum in Southern Brazil. These results proved that L. infantum could also infect horses in addition to humans and dogs, as well as in European countries. This conclusion emphasizes the urgent need to follow up investigation of the infection in these animals.(AU)

A leishmaniose é uma doença zoonótica negligenciada, causada por uma diversidade de espécies patogênicas de Leishmania. No Novo Mundo, especialmente no Brasil, a leishmaniose visceral é causada pelo protozoário Leishmania infantum. A infecção acomete várias espécies animais (cães, raposas, roedores, primatas, felinos, equinos) e humanos e o cão é o principal reservatório doméstico. Este estudo teve como objetivo utilizar a reação em cadeia da polimerase (PCR) para detectar a infecção por Leishmania sp. em cavalos que vivem em uma região endêmica para leishmaniose visceral canina (LVC). Amostras de DNA do sangue periférico de equinos foram utilizadas para extração de DNA e PCR. As amplificações foram realizadas utilizando-se marcadores para a região do DNA do cinetoplasto (kDNA), que são capazes de detectar diferentes espécies de Leishmania sp. e a região dos espaçadores internos transcritos (ITS) do DNA ribossomal para detecção da família Trypanosomatidae. Dentre os 192 animais testados, 75 (39%) amostras foram positivas no PCR, 21 amostras foram positivas para PCR kDNA e 63 para os genes ITS, ITS1 e ITS2. O sequenciamento dos amplicons permitiu detectar L. infantum em amostras de sangue periférico de equinos. Este foi o primeiro relato de infecção por L. infantum no sul do Brasil na espécie equina. Os resultados demonstram que, assim como nos países europeus, a infecção foi detectada em equinos após ter sido identificada em seres humanos e cães, o que indica a urgência em acompanhar a investigação da infecção nessa espécie animal.(AU)

Molecular survey of Cryptosporidium spp. in calves from the state of Mato Grosso, Brazil / Levantamento molecular de Cryptosporidium spp. em bezerros do estado de Mato Grosso, Brasil

Cryptosporidium spp. is a protozoan that infects a wide range of vertebrate hosts; it has been reported to be the cause of severe illness or death in livestock worldwide, which leads to decreased performance and production losses, especially in young animals. This study investigated the presence of Cryptosporidiumin calves from beef farms in the state of Mato Grosso, midwestern Brazil. For this purpose, fecal samples from 237 animals aged ≤ 45 days, raised in 20 rural properties were subjected to DNA extraction and nested polymerase chain reaction (nPCR) targeting 18S ribosomal RNA (18S rRNA) gene followed by sequencing. Additionally, positive samples, previously identified as Cryptosporidium parvum by sequencing and phylogenetic analyses based on 18S rRNA gene, were subsequently analyzed focusing the amplification and sequencing using nPCR of a fragment of the 60 kDa glycoprotein (gp60) gene. Of the 237 fecal samples analyzed by PCR (18S rRNA), 50 (21.1%) fecal samples were positive for Cryptosporidium spp., while 14 (70%) of the 20 properties had at least one positive animal. The following Cryptosporidium species were detected: C. bovis, C. parvum, and C. ryanae. Thereafter, two potentially zoonotic subtypes (IIaA15G2R1 and IIaA16G3R1) of C. parvum were identified based on gp60 gene sequences. This study resulted in the detection of subtype IIaA16G3R1 for the first time in South America and showed a wide distribution of the protozoan in beef farms in the studied area of the State.

Cryptosporidium spp. é um protozoário que infecta uma grande variedade de hospedeiros vertebrados, sendo descrito como causa de doenças graves ou morte na pecuária em todo o mundo, o que leva à diminuição do desempenho e à perda de produção, especialmente em animais jovens. Este estudo investigou a presença de Cryptosporidium em bezerros de fazendas de bovinocultura de corte no estado de Mato Grosso, Centro-Oeste do Brasil. Para esse fim, amostras fecais de 237 animais com idade ≤ 45dias, criados em 20 propriedades rurais foram submetidas à extração de DNA e uma "nested" da reação em cadeia pela polimerase (nPCR) direcionada ao gene 18S RNA ribossomal (18S rRNA), seguido do sequenciamento. Adicionalmente, amostras positivas, previamente identificadas como Cryptosporidium parvum pelo sequenciamento e análises filogenéticas baseadas no gene 18S rRNA, foram posteriormente analisadas usando a nPCR buscando a amplificação e sequenciamento de um fragmento do gene de uma glicoproteína de 60 kDa (gp60). Das 237 amostras fecais analisadas pela PCR (18S rRNA), 50 (21,1%)amostras fecais foram positivas para Cryptosporidium spp., enquanto 14 (70%) das 20 propriedades tinham ao menos um animal positivo. As seguintes espécies de Cryptosporidium foram detectadas: C. bovis, C. parvum e C. ryanae. Posteriormente, dois subtipos potencialmente zoonóticos (IIaA15G2R1e IIaA16G3R1) foram identificados. Este estudo resultou na detecção do subtipo IIaA16G3R1 pela primeira vez na América do Sul e mostrou uma ampla distribuição do protozoário em rebanhos de corte na área estudada do Estado.

Molecular survey of Cryptosporidium spp. in calves from the state of Mato Grosso, Brazil / Levantamento molecular de Cryptosporidium spp. em bezerros do estado de Mato Grosso, Brasil

Cryptosporidium spp. is a protozoan that infects a wide range of vertebrate hosts; it has been reported to be the cause of severe illness or death in livestock worldwide, which leads to decreased performance and production losses, especially in young animals. This study investigated the presence of Cryptosporidiumin calves from beef farms in the state of Mato Grosso, midwestern Brazil. For this purpose, fecal samples from 237 animals aged ≤ 45 days, raised in 20 rural properties were subjected to DNA extraction and nested polymerase chain reaction (nPCR) targeting 18S ribosomal RNA (18S rRNA) gene followed by sequencing. Additionally, positive samples, previously identified as Cryptosporidium parvum by sequencing and phylogenetic analyses based on 18S rRNA gene, were subsequently analyzed focusing the amplification and sequencing using nPCR of a fragment of the 60 kDa glycoprotein (gp60) gene. Of the 237 fecal samples analyzed by PCR (18S rRNA), 50 (21.1%) fecal samples were positive for Cryptosporidium spp., while 14 (70%) of the 20 properties had at least one positive animal. The following Cryptosporidium species were detected: C. bovis, C. parvum, and C. ryanae. Thereafter, two potentially zoonotic subtypes (IIaA15G2R1 and IIaA16G3R1) of C. parvum were identified based on gp60 gene sequences. This study resulted in the detection of subtype IIaA16G3R1 for the first time in South America and showed a wide distribution of the protozoan in beef farms in the studied area of the State.(AU)

Cryptosporidium spp. é um protozoário que infecta uma grande variedade de hospedeiros vertebrados, sendo descrito como causa de doenças graves ou morte na pecuária em todo o mundo, o que leva à diminuição do desempenho e à perda de produção, especialmente em animais jovens. Este estudo investigou a presença de Cryptosporidium em bezerros de fazendas de bovinocultura de corte no estado de Mato Grosso, Centro-Oeste do Brasil. Para esse fim, amostras fecais de 237 animais com idade ≤ 45dias, criados em 20 propriedades rurais foram submetidas à extração de DNA e uma "nested" da reação em cadeia pela polimerase (nPCR) direcionada ao gene 18S RNA ribossomal (18S rRNA), seguido do sequenciamento. Adicionalmente, amostras positivas, previamente identificadas como Cryptosporidium parvum pelo sequenciamento e análises filogenéticas baseadas no gene 18S rRNA, foram posteriormente analisadas usando a nPCR buscando a amplificação e sequenciamento de um fragmento do gene de uma glicoproteína de 60 kDa (gp60). Das 237 amostras fecais analisadas pela PCR (18S rRNA), 50 (21,1%)amostras fecais foram positivas para Cryptosporidium spp., enquanto 14 (70%) das 20 propriedades tinham ao menos um animal positivo. As seguintes espécies de Cryptosporidium foram detectadas: C. bovis, C. parvum e C. ryanae. Posteriormente, dois subtipos potencialmente zoonóticos (IIaA15G2R1e IIaA16G3R1) foram identificados. Este estudo resultou na detecção do subtipo IIaA16G3R1 pela primeira vez na América do Sul e mostrou uma ampla distribuição do protozoário em rebanhos de corte na área estudada do Estado.(AU)

Detecção molecular de grupos de bactérias fermentadoras no rúmen de bovinos e bubalinos em Santarém-PA / Molecular detection of groups of fermentative bacteria in the rumen of cattle and buffaloes in Santarém-PA

O objetivo deste trabalho foi detectar grupos de bactérias do conteúdo ruminal de bubalinos e bovinos utilizando técnicas de Biologia Molecular. As coletas foram realizadas no Frigorífico Mararu, na cidade de Santarém-PA. Foram coletadas 10 amostras de líquido ruminal, sendo 5 de bovinos e 5 de bubalinos. A extração de DNA foi realizada segundo o protocolo do Kit Brasílica baseado em sílica. Para a detecção das bactérias, foram utilizados os primers 16S L2 e 1472, AR e BR. Foi utilizado para a PCR, num volume de 25 µl, o kit PCR Mix LGC 2X. As amostras foram corridas em gel de agarose 3% corado com Azul de Bromofenol e GelRed. Após a corrida, o gel foi visualizado em radiação UV. Os primers utilizados na amplificação da região do gene 16S rRNA se mostraram eficientes para os estudos de detecção das bactérias ruminais. Foi observada a diferença entre bovinos e bubalinos, onde os primers L2 e 1472 amplificaram em bovinos o grupo de bactérias fibrolíticas e em bubalinos o grupo de bactérias não fibrolíticas. Enquanto os primers AR e BR amplificaram o grupo de bactérias não fibrolíticas para bovinos e o grupo de bactérias fibrolíticas para bubalinos. Os trabalhos de identificação de bactérias ruminais em bubalinos é escasso, por isso a importância dos resultados encontrados. Houve diferença nos grupos de microrganismos encontrados nos ruminantes entre bubalinos e bovinos, e no tipo de primer utilizado, mostrando a importância do estudo das bactérias presentes no rúmen. O estudo realizado necessita de uma abordagem maior, como o sequenciamento das amostras de DNA para se identificar melhor as espécies presentes dentro dos diferentes grupos detectados. Outras técnicas de Biologia Molecular podem ser utilizadas para uma melhor acurácia dos dados encontrados, como o uso da PCR em tempo real.

The objective of this work was to detect groups of bacteria in the rumen content of buffaloes and cattle using molecular biology techniques. The samplings were carried out in the Fridge Mararu, in the city of Santarém-PA. Were collected 10 samples of ruminal fluid, being 5 to buffaloes and 5 of cattle. DNA extraction was performed according to the protocol of the Kit Brasílica based on silica. For the detection of bacteria, we used primers 16S L2 and 1472, AR and BR. It was used for PCR, a volume of 25 µl PCR kit Mix LGC 2X. The samples were run on 3% agarose gel stained with bromophenol blue and GelRed. The gel was visualized on a UV radiation. The primers used in the amplification of the region of the 16S rRNA gene was shown to be effective for the studies of detection of ruminal bacteria. It was observed the difference between cattle and buffalo, where the primers L2 and 1472 amplified in cattle the group of fibrolytic bacteria and in buffaloes the group of not fibrolytic bacteria. While the primers AR and BR amplified the group of not fibrolytic bacteria forcattle and the group of fibrolytic bacteria to Buffalo. The work of identification of ruminal bacteria in buffaloes is scarce, so the importance of the results found. There was a difference in the groups of microorganisms found in ruminants between buffaloes and cattle, and the type of primer used, showing the importance of the study of bacteria in the rumen. The study requires a larger approach, such as the sequencing of the DNA samples to better identify the species present within the different groups were detected. Other Molecular Biologytechniques can be used for better accuracy of data found, such as the use of PCR in real time.

Detecção molecular de grupos de bactérias fermentadoras no rúmen de bovinos e bubalinos em Santarém-PA / Molecular detection of groups of fermentative bacteria in the rumen of cattle and buffaloes in Santarém-PA

O objetivo deste trabalho foi detectar grupos de bactérias do conteúdo ruminal de bubalinos e bovinos utilizando técnicas de Biologia Molecular. As coletas foram realizadas no Frigorífico Mararu, na cidade de Santarém-PA. Foram coletadas 10 amostras de líquido ruminal, sendo 5 de bovinos e 5 de bubalinos. A extração de DNA foi realizada segundo o protocolo do Kit Brasílica baseado em sílica. Para a detecção das bactérias, foram utilizados os primers 16S L2 e 1472, AR e BR. Foi utilizado para a PCR, num volume de 25 µl, o kit PCR Mix LGC 2X. As amostras foram corridas em gel de agarose 3% corado com Azul de Bromofenol e GelRed. Após a corrida, o gel foi visualizado em radiação UV. Os primers utilizados na amplificação da região do gene 16S rRNA se mostraram eficientes para os estudos de detecção das bactérias ruminais. Foi observada a diferença entre bovinos e bubalinos, onde os primers L2 e 1472 amplificaram em bovinos o grupo de bactérias fibrolíticas e em bubalinos o grupo de bactérias não fibrolíticas. Enquanto os primers AR e BR amplificaram o grupo de bactérias não fibrolíticas para bovinos e o grupo de bactérias fibrolíticas para bubalinos. Os trabalhos de identificação de bactérias ruminais em bubalinos é escasso, por isso a importância dos resultados encontrados. Houve diferença nos grupos de microrganismos encontrados nos ruminantes entre bubalinos e bovinos, e no tipo de primer utilizado, mostrando a importância do estudo das bactérias presentes no rúmen. O estudo realizado necessita de uma abordagem maior, como o sequenciamento das amostras de DNA para se identificar melhor as espécies presentes dentro dos diferentes grupos detectados. Outras técnicas de Biologia Molecular podem ser utilizadas para uma melhor acurácia dos dados encontrados, como o uso da PCR em tempo real.(AU)

The objective of this work was to detect groups of bacteria in the rumen content of buffaloes and cattle using molecular biology techniques. The samplings were carried out in the Fridge Mararu, in the city of Santarém-PA. Were collected 10 samples of ruminal fluid, being 5 to buffaloes and 5 of cattle. DNA extraction was performed according to the protocol of the Kit Brasílica based on silica. For the detection of bacteria, we used primers 16S L2 and 1472, AR and BR. It was used for PCR, a volume of 25 µl PCR kit Mix LGC 2X. The samples were run on 3% agarose gel stained with bromophenol blue and GelRed. The gel was visualized on a UV radiation. The primers used in the amplification of the region of the 16S rRNA gene was shown to be effective for the studies of detection of ruminal bacteria. It was observed the difference between cattle and buffalo, where the primers L2 and 1472 amplified in cattle the group of fibrolytic bacteria and in buffaloes the group of not fibrolytic bacteria. While the primers AR and BR amplified the group of not fibrolytic bacteria forcattle and the group of fibrolytic bacteria to Buffalo. The work of identification of ruminal bacteria in buffaloes is scarce, so the importance of the results found. There was a difference in the groups of microorganisms found in ruminants between buffaloes and cattle, and the type of primer used, showing the importance of the study of bacteria in the rumen. The study requires a larger approach, such as the sequencing of the DNA samples to better identify the species present within the different groups were detected. Other Molecular Biologytechniques can be used for better accuracy of data found, such as the use of PCR in real time. (AU)

Abortion in association with transplacental Theileria equi infection in a mare from the State of Espírito Santo, southeast Brazil: case report / Aborto equino associado à infecção transplacentária de Theileria equi, Espírito Santo, Brasil: relato de caso

Equine piroplasmosis is a tick-borne disease caused by the protozoan parasites Babesia caballi and Theileria equi. We report a case of abortion in association with transplacental Theileria equi infection in a mare from the State of Espírito Santo, southeast Brazil. An apparently healthy mare aborted at the tenth month of gestation. At necropsy, the subcutaneous tissue, skeletal muscles, and visible mucosae of the aborted fetus were pale, and there was moderate hydrothorax and marked splenomegaly. Microscopic findings included splenic lymphoid hyperplasia and nephrosis. Merozoite-infected erythrocytes were found within blood vessels of all organs examined and were most numerous in the brain. DNA extracted from the spleen, liver, kidney, and thymus was used as a template for PCR. Generic primers were employed for the detection of piroplasm 18S ribosomal gene. All samples were positive for piroplasm DNA by PCR. Amplicons were purified and then sequenced. Sequencing analysis of these amplicons revealed 98% identity to T. equi sequences. Based on our findings, we suggest that abortion in this case resulted from transplacental Theileria infection.(AU)

A piroplasmose equina é transmitida por carrapatos, sendo causada pelos protozoários Babesia caballi e Theileria equi. O objetivo deste trabalho foi relatar um caso de aborto equino associado à piroplasmose fetal. Uma égua gestante, aparentemente saudável, abortou no 10º mês de gestação. Na necropsia do feto, foi observada palidez de subcutâneo, da musculatura esquelética e das mucosas visíveis, moderado hidrotórax e acentuada esplenomegalia. Histologicamente, havia hiperplasia linfoide esplênica e nefrose. Muitos merozoítos foram observados em eritrócitos nos vasos sanguíneos de todos os órgãos examinados, com maior intensidade no encéfalo. Amostras de DNA do baço, fígado, rim e timo foram utilizadas para PCR com primers genéricos para detecção de sequências do gene 18S ribossomal de piroplasmas, com resultado positivo para todas as amostras. Em seguida, os amplicons das amostras de baço foram purificados, sequenciados e, após análise, mostraram 98% de identidade com a sequência de T. equi. Portanto, as alterações microscópicas, os resultados de PCR e sequenciamento confirmam aborto associado à T. equi por transmissão transplacentária.(AU)

Abortion in association with transplacental Theileria equi infection in a mare from the State of Espírito Santo, southeast Brazil: case report / Aborto equino associado à infecção transplacentária de Theileria equi, Espírito Santo, Brasil: relato de caso

Equine piroplasmosis is a tick-borne disease caused by the protozoan parasites Babesia caballi and Theileria equi. We report a case of abortion in association with transplacental Theileria equi infection in a mare from the State of Espírito Santo, southeast Brazil. An apparently healthy mare aborted at the tenth month of gestation. At necropsy, the subcutaneous tissue, skeletal muscles, and visible mucosae of the aborted fetus were pale, and there was moderate hydrothorax and marked splenomegaly. Microscopic findings included splenic lymphoid hyperplasia and nephrosis. Merozoite-infected erythrocytes were found within blood vessels of all organs examined and were most numerous in the brain. DNA extracted from the spleen, liver, kidney, and thymus was used as a template for PCR. Generic primers were employed for the detection of piroplasm 18S ribosomal gene. All samples were positive for piroplasm DNA by PCR. Amplicons were purified and then sequenced. Sequencing analysis of these amplicons revealed 98% identity to T. equi sequences. Based on our findings, we suggest that abortion in this case resulted from transplacental Theileria infection.(AU)

A piroplasmose equina é transmitida por carrapatos, sendo causada pelos protozoários Babesia caballi e Theileria equi. O objetivo deste trabalho foi relatar um caso de aborto equino associado à piroplasmose fetal. Uma égua gestante, aparentemente saudável, abortou no 10º mês de gestação. Na necropsia do feto, foi observada palidez de subcutâneo, da musculatura esquelética e das mucosas visíveis, moderado hidrotórax e acentuada esplenomegalia. Histologicamente, havia hiperplasia linfoide esplênica e nefrose. Muitos merozoítos foram observados em eritrócitos nos vasos sanguíneos de todos os órgãos examinados, com maior intensidade no encéfalo. Amostras de DNA do baço, fígado, rim e timo foram utilizadas para PCR com primers genéricos para detecção de sequências do gene 18S ribossomal de piroplasmas, com resultado positivo para todas as amostras. Em seguida, os amplicons das amostras de baço foram purificados, sequenciados e, após análise, mostraram 98% de identidade com a sequência de T. equi. Portanto, as alterações microscópicas, os resultados de PCR e sequenciamento confirmam aborto associado à T. equi por transmissão transplacentária.(AU)

Karyotype analysis of three species of Corydoras (Siluriformes: Callichthyidae) from southern Brazil: rearranged karyotypes and cytotaxonomy

The genus Corydoras comprises a diversity of species with different diploid numbers. We compared cytogenetic data among Corydoras species from different rivers of the Ponta Grossa Arch region in southern Brazil. Corydoras ehrhardti and C. aff. paleatus have a similar karyotype formula and the same diploid number (2n = 44). Corydoras lacrimostigmata has a higher diploid number, with 2n = 58 chromosomes. Fluorescence in situ hybridization using 5S and 18S ribosomal DNA probes suggests that these ribosomal DNA sequences are involved in chromosomal rearrangements in these Corydoras species. 5S rDNA is a chromosomal marker that is considered to be unique to the species analyzed in this study. Signals of interstitial telomeric sites are seen in a chromosome pair of C. lacrimostigmata, suggesting chromosomal rearrangements via fusions or translocations. This study revealed that C. ehrhardti and C. aff. paleatus have exclusive chromosomal markers associated with chromosome differentiation, which we speculate to prevent genetic introgression.(AU)

Corydoras compreende um gênero diversificado com espécies de diferentes números diploides. Nós comparamos dados citogenéticos de espécies de Corydoras de diferentes rios da região do Arco de Ponta Grossa no sul do Brasil. Corydoras ehrhardti e C. aff. paleatus tem fórmula cariotípica similar e o mesmo número diploide (2n = 44). Corydoras lacrimostigmata tem um número diploide maior, com 2n= 58 cromossomos. A hibridação in situ fluorescente (FISH) com sondas de DNA ribossomal 5S e 18S sugere que estas sequências de DNA ribossomal estão envolvidas em rearranjos cromossômicos nestas espécies de Corydoras. A marcação do DNAr 5S foi considerada espécie-específico para as espécies analisadas neste estudo. Sinais de sítios teloméricos intersticiais foram vistos em um par de cromossomos de C. lacrimostigmata sugerindo a ocorrência de rearranjos cromossômicos como fusões ou translocações. Este estudo revelou que as espécies C. ehrhardti e C. aff. paleatus têm marcadores cromossômicos exclusivos associados à diferenciação cromossômica, os quais, em nossa hipótese, podem prevenir a introgressão gênica.(AU)

Karyotype analysis of three species of Corydoras (Siluriformes: Callichthyidae) from southern Brazil: rearranged karyotypes and cytotaxonomy

The genus Corydoras comprises a diversity of species with different diploid numbers. We compared cytogenetic data among Corydoras species from different rivers of the Ponta Grossa Arch region in southern Brazil. Corydoras ehrhardti and C. aff. paleatus have a similar karyotype formula and the same diploid number (2n = 44). Corydoras lacrimostigmata has a higher diploid number, with 2n = 58 chromosomes. Fluorescence in situ hybridization using 5S and 18S ribosomal DNA probes suggests that these ribosomal DNA sequences are involved in chromosomal rearrangements in these Corydoras species. 5S rDNA is a chromosomal marker that is considered to be unique to the species analyzed in this study. Signals of interstitial telomeric sites are seen in a chromosome pair of C. lacrimostigmata, suggesting chromosomal rearrangements via fusions or translocations. This study revealed that C. ehrhardti and C. aff. paleatus have exclusive chromosomal markers associated with chromosome differentiation, which we speculate to prevent genetic introgression.(AU)

Corydoras compreende um gênero diversificado com espécies de diferentes números diploides. Nós comparamos dados citogenéticos de espécies de Corydoras de diferentes rios da região do Arco de Ponta Grossa no sul do Brasil. Corydoras ehrhardti e C. aff. paleatus tem fórmula cariotípica similar e o mesmo número diploide (2n = 44). Corydoras lacrimostigmata tem um número diploide maior, com 2n= 58 cromossomos. A hibridação in situ fluorescente (FISH) com sondas de DNA ribossomal 5S e 18S sugere que estas sequências de DNA ribossomal estão envolvidas em rearranjos cromossômicos nestas espécies de Corydoras. A marcação do DNAr 5S foi considerada espécie-específico para as espécies analisadas neste estudo. Sinais de sítios teloméricos intersticiais foram vistos em um par de cromossomos de C. lacrimostigmata sugerindo a ocorrência de rearranjos cromossômicos como fusões ou translocações. Este estudo revelou que as espécies C. ehrhardti e C. aff. paleatus têm marcadores cromossômicos exclusivos associados à diferenciação cromossômica, os quais, em nossa hipótese, podem prevenir a introgressão gênica.(AU)