Uso do extrato de Aloe vera na criopreservação do sêmen suíno / Use of Aloe vera extract in swine semen criopreservation

A gema de ovo é utilizada como agente crioprotetor em diluentes de congelação de sêmen visando à proteção contra o choque térmico, apesar de apresentar uma possibilidade de contaminação microbiológica. Autores buscam no Aloe vera, um meio alternativo para a conservação do sêmen. O objetivo foi avaliar o uso do crioprotetor Aloe vera na criopreservação do sêmen de suíno. Foram utilizados 25 ejaculados, coletados através da técnica da mão enluvada. As amostras foram diluídas no diluente de refrigeração (gema de ovo 10,0%, Aloe vera 10, 20 e 30%) a 17 °C, diluente de congelação (diluente de refrigeração + glicerol 6,0%) 5 °C e armazenados em palhetas. As palhetas foram avaliadas quanto ao vigor, motilidade, funcionalidade da membrana, vitalidade, integridade de acrossoma e na análise de sêmen assistida (CASA). Os dados foram avaliados quanto à normalidade, em seguida analisados utilizando ANOVA e comparações múltiplas, as análises foram realizadas com nível significância de 5,0%, utilizando o programa R3.4.0. Utilizou-se estatística descritiva para dados de vigor, motilidade e CASA. Na avaliação do sêmen descongelado para a funcionalidade da membrana, vitalidade e integridade de acrossoma, os maiores valores foram encontrados para as amostras com a gema de ovo (p0,05). Os dados de vigor, motilidade e CASA, das amostras utilizando o Aloe vera, apresentaram valores de 0,0. Os resultados mostraram que as diferentes concentrações de Aloe vera não exerceram o efeito crioprotetor desejado sobre a célula espermática, sendo assim, entende-se que são necessários maiores estudos sobre a sua ação na conservação de sêmen, bem como uma possível interação com os espermatozoides suínos...

Egg yolk is used as a cryoprotective agent in semen freezing diluents for protection against thermal shock, despite the possibility of microbiological contamination. Authors search for Aloe vera, an alternative medium for the conservation of semen. The objective was to evaluate the use of the cryoprotectant Aloe vera in the cryopreservation of swine semen. We used 25 ejaculates, collected through the gloved hand technique. The samples were diluted in the coolant diluent (10.0% egg yolk, Aloe vera 10, 20 and 30%) at 17 °C, freezing diluent (refrigerant diluent + glycerol 6.0%) at 5 °C and stored in vales. The vanes were evaluated for vigor, motility, membrane functionality, vitality, acrosome integrity and assisted semen analysis (CASA). The data were evaluated for normality, then analyzed using ANOVA and multiple comparisons, the analyzes were performed with a significance level of 5.0%, using the program R3.4.0. Descriptive statistics were used for data on vigor, motility and CASA. In the evaluation of thawed semen for membrane functionality, acrosome integrity and vitality, the highest values were found for the egg yolk samples (p0.05). The data of vigor, motility and CASA, of the samples using Aloe vera presented values of 0.0. The results showed that the different concentrations of Aloe vera did not exert the desired cryoprotective effect on the sperm cell, so it is understood that further studies are needed on its action on semen conservation, as well as a possible interaction with swine spermatozoa. On the other hand, it is believed that additional studies on the cooling curve of the porcine semen are still necessary, aiming at its cryopreservation.

Uso do extrato de Aloe vera na criopreservação do sêmen suíno / Use of Aloe vera extract in swine semen criopreservation

A gema de ovo é utilizada como agente crioprotetor em diluentes de congelação de sêmen visando à proteção contra o choque térmico, apesar de apresentar uma possibilidade de contaminação microbiológica. Autores buscam no Aloe vera, um meio alternativo para a conservação do sêmen. O objetivo foi avaliar o uso do crioprotetor Aloe vera na criopreservação do sêmen de suíno. Foram utilizados 25 ejaculados, coletados através da técnica da mão enluvada. As amostras foram diluídas no diluente de refrigeração (gema de ovo 10,0%, Aloe vera 10, 20 e 30%) a 17 °C, diluente de congelação (diluente de refrigeração + glicerol 6,0%) 5 °C e armazenados em palhetas. As palhetas foram avaliadas quanto ao vigor, motilidade, funcionalidade da membrana, vitalidade, integridade de acrossoma e na análise de sêmen assistida (CASA). Os dados foram avaliados quanto à normalidade, em seguida analisados utilizando ANOVA e comparações múltiplas, as análises foram realizadas com nível significância de 5,0%, utilizando o programa R3.4.0. Utilizou-se estatística descritiva para dados de vigor, motilidade e CASA. Na avaliação do sêmen descongelado para a funcionalidade da membrana, vitalidade e integridade de acrossoma, os maiores valores foram encontrados para as amostras com a gema de ovo (p<0,05), e entre as amostras que utilizaram o Aloe vera, não foram encontradas diferenças significativas entre as diferentes concentrações testadas (p>0,05). Os dados de vigor, motilidade e CASA, das amostras utilizando o Aloe vera, apresentaram valores de 0,0. Os resultados mostraram que as diferentes concentrações de Aloe vera não exerceram o efeito crioprotetor desejado sobre a célula espermática, sendo assim, entende-se que são necessários maiores estudos sobre a sua ação na conservação de sêmen, bem como uma possível interação com os espermatozoides suínos...(AU)

Egg yolk is used as a cryoprotective agent in semen freezing diluents for protection against thermal shock, despite the possibility of microbiological contamination. Authors search for Aloe vera, an alternative medium for the conservation of semen. The objective was to evaluate the use of the cryoprotectant Aloe vera in the cryopreservation of swine semen. We used 25 ejaculates, collected through the gloved hand technique. The samples were diluted in the coolant diluent (10.0% egg yolk, Aloe vera 10, 20 and 30%) at 17 °C, freezing diluent (refrigerant diluent + glycerol 6.0%) at 5 °C and stored in vales. The vanes were evaluated for vigor, motility, membrane functionality, vitality, acrosome integrity and assisted semen analysis (CASA). The data were evaluated for normality, then analyzed using ANOVA and multiple comparisons, the analyzes were performed with a significance level of 5.0%, using the program R3.4.0. Descriptive statistics were used for data on vigor, motility and CASA. In the evaluation of thawed semen for membrane functionality, acrosome integrity and vitality, the highest values were found for the egg yolk samples (p<0.05), and among the samples that used Aloe vera, found significant differences between the different concentrations tested (p>0.05). The data of vigor, motility and CASA, of the samples using Aloe vera presented values of 0.0. The results showed that the different concentrations of Aloe vera did not exert the desired cryoprotective effect on the sperm cell, so it is understood that further studies are needed on its action on semen conservation, as well as a possible interaction with swine spermatozoa. On the other hand, it is believed that additional studies on the cooling curve of the porcine semen are still necessary, aiming at its cryopreservation.(AU)

Use of alternative extender added of fructose aiming the cryopreservation of boar semen / Utilização de diluente alternativo acrescido de frutose visando à criopreservação de sêmen suíno

This study aimed to analyze skimmed milk powder (SMP) and fructose in a new cooling curve to freeze boar semen. A total of 49 semen samples from seven boars were cryopreserved using the new curve with addition of glucose and fructose to the refrigerating diluents: Beltsville Thawing Solution (BTS + G; BTS + F) and Skimmed milk powder (SMP + G; SMP + F), totaling four experimental groups for analysis. To finish the curve, aliquots of semen were packaged in 0.5 ml straws and kept in liquid nitrogen. During the cooling curve, SMP mean spermatic vigor and motility were greater than the BTS (p < 0.05). After thawing, a decrease of spermatic force and motility in both extenders was observed, where the BTS presented spermatic vigor (2.1 ± 0.55) and motility (38 ± 21.8), presenting better results (p < 0.05). There was no statistical difference between sugars added to the BTS and SMP in spermatic force and motility (p > 0.05), although the use of fructose allowed an equalization of motility between the SMP and BTS (p > 0.05). Functionality of membrane was better preserved with the addition of fructose, in both extenders. The rate of sperm viability was significantly higher in extender containing glucose and SMP (71.8 ± 12.5). The percentage of intact acrosome was higher on the treatment containing glucose, independent of the extender (BTS + G: 81.8 ± 7.2, SMP + G: 81.4 ± 14.2). To conclude, the results suggest that the BTS is still the best option to cryopreserve and fructose could be used in boar semen cryopreservation in new cooling curve.(AU)

O presente trabalho analisou o emprego do leite em pó desnatado (LPD) adicionado de frutose em uma nova curva de resfriamento para criopreservação de sêmen suíno. Um total de 49 ejaculados, de sete varrões foram criopreservados utilizando a nova curva de resfriamento com glicose e frutose adicionada aos diluentes Beltsville Thawing Solution (BTS + D; BTS + F) e Leite em pó desnatado (LPD + D; LPD + F), totalizando quatro grupos experimentais para análises. Ao final da curva, as alíquotas de sêmen foram envasadas em palhetas de 0,5 mL e mantidas em nitrogênio líquido. Durante a curva de resfriamento, a média de vigor e motilidade espermática do LPD foi maior do que do BTS (p < 0.05). Após descongelação, observou-se queda do vigor e motilidade em ambos diluentes, com o BTS apresentando melhores resultados de vigor (2,1 ± 0,55) e de motilidade (38 ± 21,8) (p < 0,05). Entretanto, o uso da frutose permitiu equiparação dos valores da motilidade entre LPD e BTS (p > 0,05). A funcionalidade de membrana foi melhor preservada com adição da frutose, em ambos os diluentes. Os dados de vitalidade espermática foram significativamente maiores no diluente contendo glicose e LPD (71,8 ± 12,5). A porcentagem de acrossomas intactos foi maior no tratamento que continha glicose, independentemente do diluente utilizado (BTS + G: 81,8 ± 7,2, SMP + G: 81,4 ± 14,2). Os resultados obtidos indicaram que o BTS, ainda é a melhor opção de criopreservação e que a frutose pode ser utilizada para criopreservação de sêmen de varrão na nova curva de resfriamento.(AU)

Use of alternative extender added of fructose aiming the cryopreservation of boar semen / Utilização de diluente alternativo acrescido de frutose visando à criopreservação de sêmen suíno

This study aimed to analyze skimmed milk powder (SMP) and fructose in a new cooling curve to freeze boar semen. A total of 49 semen samples from seven boars were cryopreserved using the new curve with addition of glucose and fructose to the refrigerating diluents: Beltsville Thawing Solution (BTS + G; BTS + F) and Skimmed milk powder (SMP + G; SMP + F), totaling four experimental groups for analysis. To finish the curve, aliquots of semen were packaged in 0.5 ml straws and kept in liquid nitrogen. During the cooling curve, SMP mean spermatic vigor and motility were greater than the BTS (p < 0.05). After thawing, a decrease of spermatic force and motility in both extenders was observed, where the BTS presented spermatic vigor (2.1 ± 0.55) and motility (38 ± 21.8), presenting better results (p < 0.05). There was no statistical difference between sugars added to the BTS and SMP in spermatic force and motility (p > 0.05), although the use of fructose allowed an equalization of motility between the SMP and BTS (p > 0.05). Functionality of membrane was better preserved with the addition of fructose, in both extenders. The rate of sperm viability was significantly higher in extender containing glucose and SMP (71.8 ± 12.5). The percentage of intact acrosome was higher on the treatment containing glucose, independent of the extender (BTS + G: 81.8 ± 7.2, SMP + G: 81.4 ± 14.2). To conclude, the results suggest that the BTS is still the best option to cryopreserve and fructose could be used in boar semen cryopreservation in new cooling curve.(AU)

O presente trabalho analisou o emprego do leite em pó desnatado (LPD) adicionado de frutose em uma nova curva de resfriamento para criopreservação de sêmen suíno. Um total de 49 ejaculados, de sete varrões foram criopreservados utilizando a nova curva de resfriamento com glicose e frutose adicionada aos diluentes Beltsville Thawing Solution (BTS + D; BTS + F) e Leite em pó desnatado (LPD + D; LPD + F), totalizando quatro grupos experimentais para análises. Ao final da curva, as alíquotas de sêmen foram envasadas em palhetas de 0,5 mL e mantidas em nitrogênio líquido. Durante a curva de resfriamento, a média de vigor e motilidade espermática do LPD foi maior do que do BTS (p < 0.05). Após descongelação, observou-se queda do vigor e motilidade em ambos diluentes, com o BTS apresentando melhores resultados de vigor (2,1 ± 0,55) e de motilidade (38 ± 21,8) (p < 0,05). Entretanto, o uso da frutose permitiu equiparação dos valores da motilidade entre LPD e BTS (p > 0,05). A funcionalidade de membrana foi melhor preservada com adição da frutose, em ambos os diluentes. Os dados de vitalidade espermática foram significativamente maiores no diluente contendo glicose e LPD (71,8 ± 12,5). A porcentagem de acrossomas intactos foi maior no tratamento que continha glicose, independentemente do diluente utilizado (BTS + G: 81,8 ± 7,2, SMP + G: 81,4 ± 14,2). Os resultados obtidos indicaram que o BTS, ainda é a melhor opção de criopreservação e que a frutose pode ser utilizada para criopreservação de sêmen de varrão na nova curva de resfriamento.(AU)

SEXAGEM E CRIOPRESERVAÇÃO ESPERMÁTICA DE PEQUENOS RUMINANTES UTILIZANDO ANTICORPO MONOCLONAL SEXO-ESPECÍFICO ASSOCIADO AO SISTEMA COMPLEMENTO E DILUENTE DE ORIGEM VEGETAL

A busca pelo melhoramento genético na ovinocaprinocultura através da utilização de biotecnologias reprodutivas como a inseminação artificial associada ao uso de sêmen sexado são de grande valia, uma vez que permite um melhor direcionamento de acordo com os sistemas de produção. Desta forma, o trabalho teve como objetivo avaliar a técnica de imunossexagem por meio do anticorpo monoclonal contra proteína sexo-específica associada à via clássica do complemento e a conservação em diluente de origem vegetal a base de água de coco em pó (ACP101/102c) na criopreservação do sêmen ovino e caprino. O experimento foi realizado no Laboratório de Tecnologia do Sêmen Caprino e Ovino em parceria com as propriedades: Chácara Vetcampo, Complexo HCG e fazenda Guaiúba. O experimento foi realizado em três etapas: (1) Avaliação da influência do ACP101/102c na manutenção da atividade mitocondrial de espermatozoides ovinos criopreservado; (2) Criopreservação de sêmen caprino utilizando ACP101/102c associado ao óleo de coco extra virgem; (3) Criopreservação de espermatozoides ovinos e caprinos imunossexados e diluídos em meio ACP101/102c. As amostras espermáticas foram avaliadas quanto à cinética espermática e quanto as integridades de membranas, morfologia e atividade mitocondrial. Na etapa 1, o meio de conservação ACP- 102c se mostrou eficiente na manutenção da qualidade dos espermatozoiodes ovinos criopreservado. Na etapa 2, em relação à avaliação da motilidade, das integridades de membranas (IMP e IA), da funcionalidade de membrana (HOST) e da atividade mitocondrial (AM) avaliadas após a descongelação não foram observadas diferenças estatísticas significativas entre o controle e as concentrações de óleo de coco 2,5% e 5,0% (P > 0.05). Na etapa 3, na avaliação do sêmen ovino sexado quanto a motilidade espermática e a IMP não foram observadas diferenças estatísticas significativas entre os tratamentos após a sexagem na avaliação dos dados absolutos/brutos (P > 0.05), sendo observada a diferença apenas entre o não sexado (T1) e os sexados (T2 e T3) (P < 0.05). Em relação ao percentual relativo e a morfologia espermática, não foram observadas diferenças estatísticas significativas (P > 0.05). Quanto a avaliação das amostras de sêmen caprino sexado, os parâmetros de motilidade apresentaram-se condizentes com a técnica submetida, entretanto, os dados de IMP não se apresentaram conforme esperado, sendo necessário outras avaliações para melhor avaliação da técnica para esta espécie. Concluindo-se que a utilização do diluente a base de água de coco em pó (ACP101/102c) é eficaz na manutenção da qualidade espermática de ovinos e caprinos criopreservado, bem como a adição do óleo de coco como crioprotetor na espécie caprina, apresentando-se como um diluente alternativo para programas internacionais de inseminação artificial e transferências de embriões. Concluiu-se também que o processo de imunossexagem por meio do anticorpo monoclonal contra proteína sexo-específica (HY) associada à via clássica do sistema complemento e ao uso do diluente à base de água de coco em pó (ACP10/102c) na criopreservação do sêmen mostrou-se eficiente na avaliação in vitro para a espécie ovina.

The search for genetic improvement in ram and goats through the use of reproductive biotechnologies such as artificial insemination associated with the use of sexed semen is of great value, as it allows for better direction according to production systems. Thus, the objective of this work was to evaluate the immunosexing technique using monoclonal antibody against sex-specific protein associated with the classical pathway of complement and preservation in a diluent of vegetable origin based on powdered coconut water (ACP101/102c) in the cryopreservation of the ram and goat semen. The experiment was conducted in Goat and Ram Semen Technology Laboratory in partnership with the properties: Vetcampo Farmhouse, HCG Complex and farm Guaiúba. The experiment was conducted in three stages: (1) Evaluation of the influence of ACP101/102c in the maintenance of the mitochondrial activity of cryopreserved sheep sperm; (2) Cryopreservation of goat semen using ACP101/102c associated with extra virgin coconut oil; (3) Cryopreservation of immunosexed ovine and caprine sperm and diluted in ACP101/102c extender. Sperm samples were evaluated for sperm kinetics and for membrane integrity, morphology and mitochondrial activity. In step 1, the ACP-102c conservation medium proved to be efficient in maintaining the quality of cryopreserved ram sperm. In step 2, regarding the evaluation of the motility of membrane integrity (IMP and IA), the membrane functionality (HOST) and the mitochondrial activity (AM) evaluated after thawing was not observed statistically significant differences between the control and concentrations of coconut oil 2.5% and 5.0% (P> 0.05). In step 3, In the evaluation of sexed ram semen regarding sperm motility and IMP, no statistically significant differences were observed between treatments after sexing in the evaluation of absolute data (P > 0.05), with the difference being observed only between the non-sex (T1) and the sexed (T2 and T3) (P <0.05). Regarding the relative percentage and sperm morphology, no statistically significant differences were observed (P > 0.05). As for the evaluation of sexed goat semen samples, the motility parameters were consistent with the technique submitted, however, the IMP data were not as expected, requiring further evaluations for a better evaluation of the technique for this species. In conclusion, the use of powdered coconut water diluent (ACP101/102c) is effective in maintaining the sperm quality of cryopreserved ram and goats, as well as the addition of coconut oil as a cryoprotectant in goats, as an alternative diluent for international programs of artificial insemination and embryo transfers. It was also concluded that the immunosexing process through monoclonal antibody against sex-specific protein (HY) associated with the classic pathway of the complement system and the use of powdered coconut water diluent (ACP101/102c) in the cryopreservation of semen proved to be efficient in the in vitro evaluation for the ovine species.

Efeito dos óleos essenciais de Thymus vulgaris, Origanum vulgare e dos terpenos timol e carvacrol, sobre adultos e massas ovígeras de Pseudosuccinea columella

A fasciolose é uma doença de distribuição mundial que pode levar a grandes prejuízos econômicos na criação de ruminantes e possui como hospedeiro intermediário moluscos aquáticos, sendo Pseudossucinea columella uma das espécies mais frequentes. Os moluscicidas sintéticos são indicados para o controle dos moluscos, entretanto, são tóxicos para diversas espécies de plantas e animais, sendo prejudiciais ao meio ambiente. Devido a necessidade da busca de novas substâncias naturais, menos nocivas ao meio ambiente e que possam atuar no controle de moluscos, o objetivo do estudo foi avaliar o efeito dos óleos essenciais de Thymus vulgaris, Origanum vulgare edos terpenos timol e carvacrol, sobre adultos e massas ovígeras de P. columella. Os óleos de T. vulgaris, O. vulgare e os majoritários, timol e carvacrol, foram diluídos nas concentrações de 10, 20, 40, 60, 80 e 100 ppm, como controle positivo se utilizou o sulfato de cobre (CuSo4) e como controle negativo se utilizou a água potável (H2O) e o Dimetilsulfóxido (DMSO) 1% (diluente das soluções). Os moluscos foram divididos em grupos de 10 espécimes para cada solução, foram expostas as diferentes soluções teste pelo período de 24 horas e avaliados durante esse período nos tempos de 30 minutos, duas, seis, 12 e 24 horas. A mesma metodologia foi utilizada com as massas ovígeras, entretanto, as massas foram expostas as substâncias por 24 horas, passaram pelo processo de lavagem e foram avaliadas por 18 dias após exposição. Durante o estudo biológico dos moluscos adultos se observou que os óleos essenciais de orégano nas concentrações de 60, 80 e 100 ppm e tomilho na concentração de 100 ppm levaram a morte de 100% dos e se mostraram dentro das normas estabelecidas pela Organização Mundial da Saúde para uma mistura complexa de substâncias. Os óleos essenciais e componentes majoritários se mostraram efetivos na inibição do crescimento e da eclosão das massas. Somente as massas expostas ao majoritário timol, nas concentrações de 10, 20 e 40 ppm, eclodiram. Em relação a histologia, foi possível observar vacuolizações e fragmentação nos tecidos de glândula digestiva, ovotestis e manto nos moluscos tratados com os óleos essenciais e os componentes majoritários. Notou-se ainda na histologia, áreas de autólise em moluscos tratados com timol na concentração de 80 ppm. Na Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) encontraram-se alteraçõesteciduais em glândula digestiva e manto nas concentrações de 100 ppm dos óleos essenciais e seus componentes majoritários. Assim, pode-se concluir que os óleos essências de O. vulgare e T. vulgaris se comportaram como substâncias moluscicidas em P. columella. Além disso, notou-se efeitos inibitórios no crescimento e eclosão das massas ovígeras tratadas com os componentes majoritários e os óleos essenciais estudados.

Fasciolosis is a disease with worldwide distribution that can lead to great economic losses in ruminant breeding and has aquatic molluscs as an intermediate host, with Pseudosucinea columella being one of the most frequent species. Synthetic molluscicides are indicated for the control of molluscs, however, they are toxic to several species of plants and animals, being harmful to the environment. Due to the need to search for new natural substances, less harmful to the environment and that can act in the control of molluscs, the aim of the study was to evaluate the effect of essential oils from Thymus vulgaris, Origanum vulgare and terpenes thymol and carvacrol, on adults and ovigerous masses of P. columella. The oils of T. vulgaris, O. vulgare and the major ones, thymol and carvacrol, were diluted in concentrations of 10, 20, 40, 60, 80 and 100 ppm, as a positive control using copper sulfate (CuSo4) and as negative control, drinking water (H2O) and 1% Dimethylsulfoxide (DMSO) (solutions diluent) were used. The molluscs were divided into groups of 10 specimens for each solution, the different test solutions were exposed for a period of 24 hours and evaluated during this period at times of 30 minutes, two, six, 12 and 24 hours. The same methodology was used with the ovigerous masses, however, the masses were exposed to substances for 24 hours, went through the washing process and were evaluated for 18 days after exposure. During the biological study of adult molluscs, it was observed that essential oils of oregano at concentrations of 60, 80 and 100 ppm and thyme at a concentration of 100 ppm led to the death of 100% of them and were within the standards established by the World Health Organization for a complex mixture of substances. Essential oils and major components proved to be effective in inhibiting the growth and hatching of doughs. Only the masses exposed to the majority of thymol, at concentrations of 10, 20 and 40 ppm, hatched. Regarding histology, it was possible to observe vacuolization and fragmentation in the tissues of the digestive gland, ovotestis and mantle in molluscs treated with essential oils and major components. It was also noted in histology, areas of autolysis in molluscs treated with thymol at a concentration of 80 ppm. Scanning Electron Microscopy (SEM) showed tissue changes in the digestive gland and mantle at 100 ppm concentrations of essential oils and their major components. Thus, it can be concluded that the essential oils of O. vulgare and T. vulgaris behaved as molluscicide substances in P. columella. In addition, inhibitory effects were noted on the growth and hatching of ovigerous masses treated with the major components and essential oils studied.

The use of skimmed dried milk as an alternative diluent for the cooling step during the boar sêmen freezing procedure / Leite em pó desnatado como diluente alternativo na etapa de resfriamento durante protocolo de congelação do sêmen suíno

One of the critical points in the cryopreservation process is the use of a proper diluent while lowering the temperature following the resuspension and thawing processes. Here, we tested an alternative diluent for the process of freezing boar semen. We used skimmed dried milk (SDM) during the cooling and post-thawed resuspension steps. To do so, we collected semen from 15 Dalland boars using the glovedhand technique, and incubated each ejaculate sample at 30 C. We then removed two semen aliquots from a pre-dilution. We diluted one of the aliquots in Beltsville thawing solution (BTS - control), and the remaining sample was diluted in SDM. Both aliquots were subsequently held at 30º C for 45 min (1st period of stabilization). At the end of this period, we analysed vigor and motility to determine sperm metabolic activity. We then held the diluted semen at 25 C for 30 min (2nd period of stabilization) and at 17 C for 2 h (3rd period stabilization). We centrifuged the semen at 800 × g and 1600 × g at 5º C for 15 min, discarded the supernatant, and resuspended the sperm pellet in 2 mL of the cooling diluent at 5 C for 1h. We again diluted the samples in 2 mL of the freezing diluent, poured them into straws, and cooled and plunged them into liquid N2. The sêmen samples were thawed in a 39º C water bath, and were resuspended in their respective diluents at the same temperature. We determined the following sperm features: vigor, motility, vitality, acrosomal integrity and membrane functionality. During the first phase of temperature cooling (30º C), semen diluted in SDM exhibited a higher vigor (3.4 ± 0.6) and motility (78.6 ± 13.0) than those diluted BTS (vigor: 3.1 ± 0.7; motility: 69.4±14.3).(AU)

Esse estudo objetivou testar um diluente alternativo, a base de leite em pó desnatado, durante as etapas de resfriamento e ressuspensão pós descongelação durante a congelação do sêmen suíno. Para isso o sêmen de 15 varrões da raça Dalland, foi coletado através da técnica da mão enluvada. Visando o início da curva de congelação, cada ejaculado foi incubado a 30 C. Em seguida, foram retiradas duas alíquotas de sêmen para uma pré-diluição. Uma das alíquotas foi diluída no diluente Beltsville Thawing Solution (BTS - Controle) e a outra em leite em pó desnatado (LPD), onde permaneceram a essa temperatura por 45 minutos. O sêmen pré-diluído passou por três tempos de estabilização. Ao final do primeiro tempo (30 C - 45 minutos) foi realizada análise de vigor e motilidade a fim de acompanhar a atividade metabólica espermática. Em seguida o sêmen diluído passou pelas temperaturas: 25C 30 minutos e 17 C - 2 horas. Ao final, o sêmen foi centrifugado (à 5 C - 800g - 1600 rpm - 15 minutos), sendo desprezado o sobrenadante, enquanto que o pellet de espermatozoides foi ressuspenso em 2 mL do diluente de resfriamento e mantido a 5 C por 1 hora. Ao final, foi realizada a 2ª diluição com 2 mL do diluente de congelação, seguida do envaze das amostras, rampa de congelação e submergidas em N2 líquido. O sêmen foi descongelado em banho-maria (39 C), ressuspendido em seus respectivos diluentesà mesma temperatura e só então analisado quanto às características de vigor, motilidade, vitalidade,integridade acrossomal e funcionalidade da membrana. Durante a primeira fase de abaixamento de temperatura (30 °C), observou-se que o sêmen diluído em LPD em comparação ao BTS, apresentou valores superiores de vigor (3,4±0,6 e 3,1±0,7, respectivamente) e motilidade (78,6±13,0 e 69,4±14,3 respectivamente).(AU)

The use of skimmed dried milk as an alternative diluent for the cooling step during the boar sêmen freezing procedure / Leite em pó desnatado como diluente alternativo na etapa de resfriamento durante protocolo de congelação do sêmen suíno

One of the critical points in the cryopreservation process is the use of a proper diluent while lowering the temperature following the resuspension and thawing processes. Here, we tested an alternative diluent for the process of freezing boar semen. We used skimmed dried milk (SDM) during the cooling and post-thawed resuspension steps. To do so, we collected semen from 15 Dalland boars using the glovedhand technique, and incubated each ejaculate sample at 30 C. We then removed two semen aliquots from a pre-dilution. We diluted one of the aliquots in Beltsville thawing solution (BTS - control), and the remaining sample was diluted in SDM. Both aliquots were subsequently held at 30º C for 45 min (1st period of stabilization). At the end of this period, we analysed vigor and motility to determine sperm metabolic activity. We then held the diluted semen at 25 C for 30 min (2nd period of stabilization) and at 17 C for 2 h (3rd period stabilization). We centrifuged the semen at 800 × g and 1600 × g at 5º C for 15 min, discarded the supernatant, and resuspended the sperm pellet in 2 mL of the cooling diluent at 5 C for 1h. We again diluted the samples in 2 mL of the freezing diluent, poured them into straws, and cooled and plunged them into liquid N2. The sêmen samples were thawed in a 39º C water bath, and were resuspended in their respective diluents at the same temperature. We determined the following sperm features: vigor, motility, vitality, acrosomal integrity and membrane functionality. During the first phase of temperature cooling (30º C), semen diluted in SDM exhibited a higher vigor (3.4 ± 0.6) and motility (78.6 ± 13.0) than those diluted BTS (vigor: 3.1 ± 0.7; motility: 69.4±14.3).

Esse estudo objetivou testar um diluente alternativo, a base de leite em pó desnatado, durante as etapas de resfriamento e ressuspensão pós descongelação durante a congelação do sêmen suíno. Para isso o sêmen de 15 varrões da raça Dalland, foi coletado através da técnica da mão enluvada. Visando o início da curva de congelação, cada ejaculado foi incubado a 30 C. Em seguida, foram retiradas duas alíquotas de sêmen para uma pré-diluição. Uma das alíquotas foi diluída no diluente Beltsville Thawing Solution (BTS - Controle) e a outra em leite em pó desnatado (LPD), onde permaneceram a essa temperatura por 45 minutos. O sêmen pré-diluído passou por três tempos de estabilização. Ao final do primeiro tempo (30 C - 45 minutos) foi realizada análise de vigor e motilidade a fim de acompanhar a atividade metabólica espermática. Em seguida o sêmen diluído passou pelas temperaturas: 25C 30 minutos e 17 C - 2 horas. Ao final, o sêmen foi centrifugado (à 5 C - 800g - 1600 rpm - 15 minutos), sendo desprezado o sobrenadante, enquanto que o pellet de espermatozoides foi ressuspenso em 2 mL do diluente de resfriamento e mantido a 5 C por 1 hora. Ao final, foi realizada a 2ª diluição com 2 mL do diluente de congelação, seguida do envaze das amostras, rampa de congelação e submergidas em N2 líquido. O sêmen foi descongelado em banho-maria (39 C), ressuspendido em seus respectivos diluentesà mesma temperatura e só então analisado quanto às características de vigor, motilidade, vitalidade,integridade acrossomal e funcionalidade da membrana. Durante a primeira fase de abaixamento de temperatura (30 °C), observou-se que o sêmen diluído em LPD em comparação ao BTS, apresentou valores superiores de vigor (3,4±0,6 e 3,1±0,7, respectivamente) e motilidade (78,6±13,0 e 69,4±14,3 respectivamente).

Adição de betaína ao diluente leite em pó desnatado durante a conservação do sêmen do varrão a 10 C

A betaína é um constituinte do plasma seminal humano, onde baixas concentrações têm sido relacionadas à infertilidade, entretanto não há relatos sobre seus efeitos no sêmen suíno.Objetivou-se verificar os efeitos da adição de diferentes concentrações de betaína sobre espermatozoides suínos diluídos e conservados em leite em pó desnatado a 10C. Foram analisados 56 ejaculados, submetidos a 4 tratamentos: 1. LPD; 2. LPD+1g betaína/100mL; 3. LPD+2g betaína/100mL e 4. LPD+3g betaína/100mL. Foram realizadas análises diárias (D0-D4) de vigor e motilidade e no D0 e D4 foi realizado o teste hiposmótico e esfregaço para avaliar a vitalidade e integridade acrossomal. Os resultados de vigor, motilidade e vitalidade espermática diferiram entre os tratamentos, sendo superior no T1(p 0,05). O T1 também manteve o maior percentual de células com membrana íntegra em D0 e em D4, porém, neste último não diferiu estatisticamente de T4. A betaína não exerceu efeito protetor sobre a célula espermática suína diluída e conservada em meio à base de LPD a 10C. A adição de concentrações iguais ou acima de 1g de betaína no diluente influenciaram negativamente a qualidade do sêmen, portanto, não são aplicáveis na conservação do sêmen suíno resfriado a10C em LPD.

ÓLEO DE Cinnamomum zeylanicum NO CONTROLE DE Alphitobius diaperinus E ECOTOXICIDADE DA CAMA DE AVES CONTAMINADA COM INSETICIDAS EM SOLOS DE SANTA CATARINA

Os cascudinhos (Alphitobius diaperinus) apresentam resistência aos princípios ativos presentes nos produtos comerciais e a interação destes com a cama de aves devem ser estudadas, uma vez que o principal destino da cama é o seu uso como adubo orgânico. O objetivo deste estudo foi avaliar se o óleo essencial de Cinnamomum zeylanicum é capaz de reduzir as infestações de A. diaperinus em condições experimentais, sem causar toxicidade para pintainhos expostos à cama tratada com inseticidas e se esta cama apresenta efeito tóxico para organismos indicadores de qualidade do solo. Este trabalho foi dividido em duas etapas, a primeira consistiu na avaliação do potencial como inseticida do óleo essencial de C. zeylanicum, onde o delineamento utilizado foi inteiramente casualizado, com quatro repetições, sendo os tratamentos: controle solvente utilizando o diluente Dimetil Sulfóxido a 5% (diluente do óleo); Controle químico utilizando a Cipermetrina na dose 5 g m-2; Óleo essencial de C. zeylanicum à 5% com apenas uma pulverização; e Óleo essencial de C. zeylanicum à 5% com duas pulverizações. Cada unidade experimental foi infestada com 150 cascudinhos adultos e cinco pintainhos. Aos 15 dias de vida dos pintainhos foi coletado sangue para as análises bioquímicas, assim como fragmentos de fígado para análises histopatológicas. A contagem de cascudinhos ocorreu 40 dias após o tratamento e foi feita através de armadilhas tipo TupeTrap. Para a segunda etapa foram realizados ensaios ecotoxicológicos, em três coletas de cama de aves contaminadas com inseticidas e os testes realizados em dois solos naturais, o Neossolo Quartzarênico órtico típico (Neossolo) e o Latossolo Vermelho distrófico (Latossolo). Foi realizado o teste de reprodução com colêmbolos da espécie Folsomia candida e enquitreídeos da espécie Enchytraeus crypticus. As doses definidas para o Neossolo foram 0; 5; 10; 20; 30; 40; 60 t ha-1 de cama de aves e para o Latossolo foram 0; 10; 20; 40; 60; 80; 100 t ha-1 de cama de aves. Os tratamentos realizados na cama de aves para controle do A. diaperinus não causaram alterações das variáveis bioquímicas e também não causaram lesões histopatológicas. Os tratamentos com óleo essencial de C. zeylanicum a 5% com uma e duas pulverizações foram eficientes na redução da infestação de cascudinhos comparada ao controle solvente. Já o tratamento com cipermetrina não foi eficiente para controlar a infestação pelo A. diaperinus. Nos testes ecotoxicológicos para ambos os organismos avaliados foi observado efeito pelo aumento das doses de cama de aves, sendo os enquitreídeos mais resistentes, apresentando estímulo da reprodução para os ensaios realizados no Latossolo. Os testes realizados no Neossolo apresentaram resultados mais tóxicos para ambos os organismos avaliados. A comparação entre os tempos de coleta da cama de aves apontou maior persistência da cipermetrina aplicada na cama, para ambos os solos. Essas informações podem auxiliar nas pesquisas para encontrar inseticidas alternativos, com moléculas eficazes no controle de pragas e que não apresentem efeito tóxico aos organismos não alvo, contribuindo para uma melhor gestão de resíduos orgânicos.

The lesser mealworm are resistant to the active principles present in commercial products, and their interaction with the poultry litter should be studied, since the main destination of the litter is its use as an organic fertilizer. The objective of this study was to evaluate if the essential oil of Cinnamomum zeylanicum is able to reduce infestations of A. diaperinus under experimental conditions without causing toxicity to broiler chicks exposed to litter treated with insecticides and if this litter presents toxic effect to organisms indicating quality from soil. This work was divided in two stages, the first consisted of the evaluation of the potential as insecticide of the essential oil of C. zeylanicum, where the design was completely randomized, with four replications, being the treatments: solvent control using the diluent Dimethyl Sulfoxide at 5 % (oil diluent); Chemical control using 5 mg m-2 Cypermethrin; Essential oil of C. zeylanicum at 5% with only one spray; and C. zeylanicum essential oil at 5% with two sprays. Each experimental unit was infested with 150 lesser mealworm adults and five broiler chicks. At 15 days of the broiler chicks life, blood was collected for biochemical analysis, as well as liver fragments for histopathological analysis. Using TupeTrap devices, we counted lesser mealworm 40 days after treatment. For the second stage, ecotoxicological tests were carried out, three collections of poultry litter contaminated with insecticides were carried out and the tests carried out on two natural soils, the Oxisol and the Entisol. The breeding test was carried out with the following soil quality indicator organisms, Folsomia candida and Enchytraeus crypticus. The doses defined for the Oxisol were 0; 5; 10; 20; 30; 40; 60 t ha-1 of poultry litter and for the Entisol were 0; 10; 20; 40; 60; 80; 100 t ha-1 poultry litter. Treatments performed in the poultry litter to control A. diaperinus did not cause changes in biochemical variables and did not cause histopathological lesions. The treatments with 5% C. zeylanicum essential oil with one and two sprays were efficient in the reduction of the infestation of lesser mealworm compared to the solvent control. Cypermethrin treatment was not effective in controlling A. diaperinus infestation. In the ecotoxicological tests for both organisms evaluated was observed an effect by the increase of the doses of poultry litter, being the enchytraeid more resistant, presenting stimulus of the reproduction for the tests realized in the Entisol. The tests performed in the Oxisol presented more toxic results for both evaluated organisms. The comparison between the times of collection of the poultry litter pointed to greater persistence of the cypermethrin applied in the litter, for both soils. This information may aid in research to find alternative insecticides, with effective pest control molecules that do not present toxic effects to non-target organisms, contributing to better management of organic wastes.

USO DO GEL DE Aloe vera NA CONGELAÇÃO DO SÊMEN SUÍNO, COMO CRIOPROTETOR ALTERNATIVO

A gema de ovo é amplamente utilizada com agente crioprotetor nos diluentes de congelação de sêmen para a proteção contra o choque térmico. No entanto, tem potencial de contaminação microbiológica por doenças zoonóticas, assim como o aumento da peroxidação lipídica. Autores buscam um meio alternativo de origem vegetal para a conservação do sêmen, neste sentido, o Aloe vera surge como um substituinte a gema de ovo. O objetivo do estudo foi avaliar o uso do crioprotetor alternativo Aloe vera na criopreservação do sêmen de suíno. Um total de 25 ejaculados foram coletados de 5 suínos através da técnica da mão enluva. Em seguida, as amostras foram diluídas no diluente de refrigeração (gema de ovo 10,0%, Aloe vera em diferentes concentrações 10, 20 e 30%) a 17 ºC. Após 1 hora a 5 ºC foram diluídos em diluente de congelação (diluente de refrigeração + 6,0% de glicerol) e armazenados em palhetas de 0,5 mL (2,5 x108sptz). As palhetas foram descongeladas a 37 ºC por 50 segundos e avaliadas quanto ao vigor, motilidade, funcionalidade da membrana, vitalidade, integridade de acrossoma e no sistema de análise de sêmen assistida por computador (CASA). Os resultados foram expressos em média±desvio padrão. Os dados foram avaliados quanto à normalidade pelo teste de Cramer-Von Mises e pela homocedasticidade pelo teste de Box-Cox. Os dados foram analisados utilizando ANOVA e comparações múltiplas teste Student-Newman-Keuls. Foi considerados estatisticamente significante p<0,05, estas avaliações foram realizadas através do software R 3.4.0. Foram utilizadas estatísticas descritivas para dados de vigor, motilidade e CASA. Ao avaliar o sêmen descongelado para a funcionalidade da membrana, vitalidade e integridade de acrossoma, os maiores valores foram encontrados para as amostras de gema de ovo (p<0,05) e não foram encontradas diferenças estatísticas entre amostras de extrato de Aloe vera em diferentes concentrações (p>0,05). Todos os dados de vigor, motilidade e CASA das amostras descongeladas utilizando o crioprotetor Aloe vera foram 0,00. As amostras de Aloe vera para avaliação CASA raramente precisavam de edição das imagens para a remoção de artefatos. Conclui-se, as diferentes concentrações de Aloe vera utilizadas no presente estudo não demonstram atividade crioprotetora. É necessário realizar estudos sobre o mecanismo de ação de Aloe vera na conservação de espermatozoides.

Egg yolk is widely used as a cryoprotective agent in semen freezing extenders to protect against cold shock. However, has potential to microbiological contamination by zoonotic diseases, as also increasing lipid peroxidation. Authors search for an alternative medium from vegetal origin for semen conservation, in this sense, the Aloe vera appears for this purpose. The aim of this study was to evaluate the use of alternative cryoprotectant Aloe vera for freezing of swine semen. A total of 25 ejaculates were collected from 5 boars with gloved hand technique. Then, samples were diluted in chilling extender (egg yolk 10.0%; Aloe vera in different concentrations 10, 20 and 30%) at 17 ºC. After 1 hour at 5 ºC were diluted in freezing extender (chilling extender + 6.0 % glycerol) and stored in straws of 0.5mL (2.5 x108sptz). The straws were thawed at 37 ºC for 50 seconds and evaluated for vigor, motility, membrane functionality, vitality, acrossomal integrity and computer-assisted sperm assessment (CASA). Results were expressed as mean±standard deviation. The data were examined for normality by Cramer-Von Mises test and for homoscedasticity by the Box-Cox test. Data were analyzed using ANOVA and multiple comparisons Student-Newman-Keuls test. Was considered statistically significant p<0.05, performed using the R 3.4.0 software. Descriptive statistics were used for datas for vigor, motility and CASA. On evaluating the frozen-thawed semen for membrane functionality, vitality, acrossomal integrity, highest values were found for samples of egg yolk (p<0.05) and no statistical differences were found between samples of Aloe vera extract at different concentrations (p>0.05). All datas of vigor, motility and CASA of samples frozen-thawed used cryoprotectant Aloe vera were 0.00. The samples of Aloe vera for CASA evaluation hardly ever needed edition for reading. In conclusion, the different concentrations of Aloe vera in this study have not showed have cryoprotective effect. It is necessary to perform studies about the mechanism of action of Aloe vera in the conservation of spermatozoa.

ALTERNATIVA À GEMA DE OVO NA CRIOPRESERVAÇÃO DE SÊMEN EQUINO

A gema de ovo (EY) é utilizada como agente crioprotetor em diluentes para criopreservação de sêmen, mas seu uso apresenta desvantagens sanitárias e práticas. Assim, há um crescente interesse no desenvolvimento de novos diluentes, livres de componentes de origem animal, para preservação de sêmen. O objetivo deste trabalho foi o de avaliar, em um diluente comercial para sêmen equino, um crioprotetor alternativo, livre de componentes de origem animal, comparado à gema de ovo. O sêmen de cada ejaculado (n=14) foi dividido em três alíquotas: Controle - EquiPlus Freeze® com 2% de EY, T1 - EquiPlus Freeze® com 2% do substituto da EY (UDM®) a 0,01% e T2 - EquiPlus Freeze® com 2% de UDM® a 0,0001%. Ambos os diluentes experimentais foram igualmente eficientes em preservar os parâmetros de motilidade pós-descongelação. T2 foi mais eficiente em preservar a motilidade total (64% versus 53%) (P < 0,05) e a velocidade da trajetória média (VAP) que T1 (25 m/s versus 21 m/s) (P < 0,05), entretanto, não foram observadas diferenças significativas entre os dois diluentes experimentais e o Controle. Não houve diferenças quanto à PMOT, VCL, VSL, BCF e ALH entre o sêmen congelado com o Controle, T1 e T2. O sêmen preservado em T2 e no Controle reagiram similarmente ao teste hiposmótico (HOST), mas houve uma diferença significativa entre a reatividade ao HOST e o sêmen congelado no Controle e T1 (29% versus 24%, respectivamente) (P < 0,05). Não foram observadas diferenças na porcentagem de espermatozoides corados com iodeto de propídio e no acrossoma corado com FITC-PNA entre os diluentes testados e o Controle. O diluente no qual a EY foi substituída por 0,0001% de UDM® (T2) foi mais eficiente em preservar o potencial mitocondrial espermático em comparação ao diluente com 0,01% UDM® (T1) (21% versus 15%) (P < 0,05), entretanto, o Controle apresentou semelhante proteção ao potencial mitocondrial quanto os diluentes experimentais. A utilização do substituto da EY demonstrou resultados satisfatórios, podendo ser perfeitamente utilizado como um crioprotetor alternativo para sêmen equino.

Egg yolk (EY) is normally used as a cryoprotective agent in semen freezing extenders, but its use has sanitary and practical disadvantages, thus there is increasing interest in developing novel extenders free of products from animal origin to store semen. The aim of this study was to assess in an equine commercial extender an alternative cryoprotector, free of products from animal origin, compared to whole EY. Semen of each ejaculate (n=14) was divided into three aliquots: Control - EquiPlus Freeze® supplemented with 2% of EY, T1 - EquiPlus Freeze® supplemented with 2% of egg yolk substitute (UDM®) at 0.01%, and T2 - EquiPlus Freeze® supplemented with 2% of UDM® at 0.0001%. Both experimental extenders were equally efficient in preserving post-thaw motility parameters. T2 was more efficient to preserve total motility (64% versus 53% respectively) (P < 0.05) and average path velocity (VAP) than T1 (25 m/s versus 21 m/s) (P < 0.05), however, no differences was detected between the two experimental extenders and the Control. There was no significant difference for PMOT, VCL, VSL, BCF and ALH between sperm frozen with control extender and experimental extenders (T1, T2). The sperm preserved in T2 and control reacted similarly to the hypoosmotic test, but there was a significant difference between the reactivity to the HOST when the sperm was frozen in Control and T1 (29% versus 24%) (P < 0.05). We did not observe any significant difference in the percentage of sperm stained with propidium iodide and in the acrosome fluoresced of FITC-PNA between the tested extenders and the control. The extender in which EY was replaced by 0.0001% UDM® (T2) was more efficient to preserve the mitochondrial status of spermatozoa than the extender replaced by 0.01% UDM® (T1) (21% versus 15%) (P < 0.05), however, the control extender presented similar protection to the mitochondrial status as the other two groups. The use of substitute of EY showed very satisfactory results, and it can be used perfectly as an alternative cryoprotector for equine semen.

CRIOPRESERVAÇÃO DO SÊMEN SUÍNO: INFLUÊNCIA DO DILUENTE DE RESSUSPENSÃO E DA PROTEÔMICA DO PLASMA SEMINAL NA RESISTÊNCIA ESPERMÁTICA À CONGELAÇÃO

O presente trabalho teve como objetivo testar o leite em pó desnatado (LPD) como diluente alternativo e identificar as proteínas do plasma seminal que estejam relacionadas com a proteção espermática durante a etapa de resfriamento em protocolo de congelação. Para tanto, o sêmen de quatorze reprodutores foi coletado e submetido aos protocolos de congelação e proteômica do plasma seminal. Para a criopreservação, o sêmen foi diluído em Beltsville Thawing Solution (BTS - Controle) e LPD, em seguida, os ejaculados foram submetidos a uma curva de resfriamento lenta. O sêmen descongelado foi resuspenso em seus respectivos diluentes e analisado quanto ao vigor, motilidade, vitalidade, integridade acrossomal e funcionabilidade da membrana. Para o estudo das proteínas do plasma seminal, estes foram submetidos à eletroforese bidimensional, os géis produzidos, foram corados, digitalizados e analisados por meio do aplicativo PDQuest. Para a busca por marcadores de congelabilidade, foi feita uma divisão dos animais em dois grupos: congelabilidade boa (GFEs) e ruim (PFEs), segundo os resultados de vigor e motilidade após a descongelação. Isto possibilitou comparar as proteínas presentes em cada grupo e correlacioná-las com a criopreservação do sêmen. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso. A análise estatística foi diferenciada para cada experimento. Todos os testes foram realizados com um índice de significância de 0,05. Quanto ao protocolo de congelação, observou-se que o LPD comportou-se melhor na etapa de resfriamento para as análises de vigor e motilidade, enquanto que após o descongelamento o BTS teve melhores resultados (p>0,05). Contudo o LPD apresentou maior porcentagem de células vivas após a descongelação. (p<0,05). Quanto a divisão dos grupos, seis animais foram considerados do grupo GFEs e apresentaram uma média para vigor e motilidade espermática de 2,2±0,8 e 41,8±22,9, respectivamente, enquanto que o grupo PFEs foi composto por oito animais que apresentaram uma média de 1,9±0,6 de vigor e 26,8±17,5 de motilidade espermática. Entre os spots diferenciais, foram identificadas a Carbohydrate-binding protein (AWN) no grupo GFEs e a proteína Inibidora da Carbonic Anidrase no grupo PFEs. A AWN tem como função prevenir a capacitação prematura e leva a economia de energia, já a proteína inibidora da Carbonic anidrase, leva a uma redução no volume espermático e plasma seminal. Assim, conclui-se que o BTS ainda é a melhor opção como diluente seminal na etapa de resfriamento durante protocolos de congelação, e a Carbohydrate-binding protein pode ser utilizada como um marcador de boa congelabilidade para a espécie suína.

The objective of this study was to test the skimmed milk powder (SMP) as alternative extender and identify seminal plasma (SP) proteins associated with the sperm protection during the step of cooling protocol of freezing. For both, the semen of fourteen adult boars was collected and subjected to freezing and proteomics protocols. For cryopreservation, the semen was diluted in Beltsville Thawing Solution (BTS - Control) and LPD, then the ejaculates were subjected to slow cooling curve. The thawed semen was resuspended in their respective solvents and analyzed for vigor, motility, vitality, acrosomal integrity and functionality of the membrane. To study of seminal plasma proteins, SP samples were subjected to two-dimensional electrophoresis, the gels produced, were stained, scanned and analyzed using PDQuest application. To search for markers freezability, animals were separated in two groups: good freezability ejaculates (GFEs) and bad (PFEs), according to the post-thawing vigor and motility. Such separation allowed comparison the SP protein profile in each group and correlate them with the cryopreservation of semen. The experimental design was a randomized block design. Statistical analysis was different for each experiment. All tests were performed at a 0.05 significance level. As to the freezing protocol, it was observed that the LPD behaved better in the cooling step for analyzes of vigor and motility after thawing while the BTS had better results (p> 0.05). However LPD had a higher percentage of living cells after thawing. (p <0.05). And the division of the groups, six animals were considered the GFEs and showed average vigor and motility of 2.2 ± 0.8 and 41.8 ± 22.9, respectively, while the PFEs group with eight animals had na average of 1.9 ± 0.6 and 26.8 ± 17.5 for vigor and sperm motility. Among differential spots were identified Carbohydrate-binding protein (AWN) in GFEs group and the Inhibitory Carbonic Anhydrase Protein in PFEs group. The AWN has the function of preventing premature training and leads to energy savings, since the Carbonic anhydrase inhibitor protein, leads to a reduction in sperm volume and seminal plasma. In conclusion, the BTS is still the best choice as seminal extender in the cooling step during freezing protocols, and Carbohydrate-binding protein can be used as a good marker for swine freezability.

Adição de betaína ao diluente leite em pó desnatado durante a conservação do sêmen do varrão a 10 C

A betaína é um constituinte do plasma seminal humano, onde baixas concentrações têm sido relacionadas à infertilidade, entretanto não há relatos sobre seus efeitos no sêmen suíno.Objetivou-se verificar os efeitos da adição de diferentes concentrações de betaína sobre espermatozoides suínos diluídos e conservados em leite em pó desnatado a 10C. Foram analisados 56 ejaculados, submetidos a 4 tratamentos: 1. LPD; 2. LPD+1g betaína/100mL; 3. LPD+2g betaína/100mL e 4. LPD+3g betaína/100mL. Foram realizadas análises diárias (D0-D4) de vigor e motilidade e no D0 e D4 foi realizado o teste hiposmótico e esfregaço para avaliar a vitalidade e integridade acrossomal. Os resultados de vigor, motilidade e vitalidade espermática diferiram entre os tratamentos, sendo superior no T1(p 0,05). O T1 também manteve o maior percentual de células com membrana íntegra em D0 e em D4, porém, neste último não diferiu estatisticamente de T4. A betaína não exerceu efeito protetor sobre a célula espermática suína diluída e conservada em meio à base de LPD a 10C. A adição de concentrações iguais ou acima de 1g de betaína no diluente influenciaram negativamente a qualidade do sêmen, portanto, não são aplicáveis na conservação do sêmen suíno resfriado a10C em LPD.

Use of alternative extender added of fructose aiming the cryopreservation of boar semen / Utilização de diluente alternativo acrescido de frutose visando a criopreservação de sêmen suíno

This study aimed to analyze skimmed milk powder (SMP) and fructose in a new cooling curve to freeze boar semen. A total of 49 semen samples from seven boars were cryopreserved using the new curve with addition of glucose and fructose to the refrigerating diluents: Beltsville Thawing Solution (BTS + G; BTS + F) and Skimmed milk powder (SMP + G; SMP + F), totaling four experimental groups for analysis. To finish the curve, aliquots of semen were packaged in 0.5 ml straws and kept in liquid nitrogen. During the cooling curve, SMP mean spermatic vigor and motility were greater than the BTS (p 0.05). After thawing, a decrease of spermatic force and motility in both extenders was observed, where the BTS presented spermatic vigor (2.1 ± 0.55) and motility (38 ± 21.8), presenting better results (p 0.05). There was no statistical difference between sugars added to the BTS and SMP in spermatic force and motility (p > 0.05), although the use of fructose allowed an equalization of motility between the SMP and BTS (p > 0.05). Functionality of membrane was better preserved with the addition of fructose, in both extenders. The rate of sperm viability was significantly higher in extender containing glucose and SMP (71.8 ± 12.5). The percentage of intact acrosome was higher on the treatment containing glucose, independent of the extender (BTS + G: 81.8 ± 7.2, SMP

O presente trabalho analisou o emprego do leite em pó desnatado (LPD) adicionado de frutose em uma nova curva de resfriamento para criopreservação de sêmen suíno. Um total de 49 ejaculados, de sete varrões foram criopreservados utilizando a nova curva de resfriamento com glicose e frutose adicionada aos diluentes Beltsville Thawing Solution (BTS + D; BTS + F) e Leite em pó desnatado (LPD + D; LPD + F), totalizando quatro grupos experimentais para análises. Ao final da curva, as alíquotas de sêmen foram envasadas em palhetas de 0,5 mL e mantidas em nitrogênio líquido. Durante a curva de resfriamento, a média de vigor e motilidade espermática do LPD foi maior do que do BTS (p 0.05). Após descongelação, observou-se queda do vigor e motilidade em ambos diluentes, com o BTS apresentando melhores resultados de vigor (2,1 ± 0,55) e de motilidade (38 ± 21,8) (p 0,05). Entretanto, o uso da frutose permitiu equiparação dos valores da motilidade entre LPD e BTS (p > 0,05). A funcionalidade de membrana foi melhor preservada com adição da frutose, em ambos os diluentes. Os dados de vitalidade espermática foram significativamente maiores no diluente contendo glicose e LPD (71,8 ± 12,5). A porcentagem de acrossomas intactos foi maior no tratamento que continha glicose, independentemente do diluente utilizado (BTS + G: 81,8 ± 7,2, SMP + G: 81,4 ± 14,2). Os resultados o

Use of alternative extender added of fructose aiming the cryopreservation of boar semen / Utilização de diluente alternativo acrescido de frutose visando a criopreservação de sêmen suíno

This study aimed to analyze skimmed milk powder (SMP) and fructose in a new cooling curve to freeze boar semen. A total of 49 semen samples from seven boars were cryopreserved using the new curve with addition of glucose and fructose to the refrigerating diluents: Beltsville Thawing Solution (BTS + G; BTS + F) and Skimmed milk powder (SMP + G; SMP + F), totaling four experimental groups for analysis. To finish the curve, aliquots of semen were packaged in 0.5 ml straws and kept in liquid nitrogen. During the cooling curve, SMP mean spermatic vigor and motility were greater than the BTS (p 0.05). After thawing, a decrease of spermatic force and motility in both extenders was observed, where the BTS presented spermatic vigor (2.1 ± 0.55) and motility (38 ± 21.8), presenting better results (p 0.05). There was no statistical difference between sugars added to the BTS and SMP in spermatic force and motility (p > 0.05), although the use of fructose allowed an equalization of motility between the SMP and BTS (p > 0.05). Functionality of membrane was better preserved with the addition of fructose, in both extenders. The rate of sperm viability was significantly higher in extender containing glucose and SMP (71.8 ± 12.5). The percentage of intact acrosome was higher on the treatment containing glucose, independent of the extender (BTS + G: 81.8 ± 7.2, SMP

O presente trabalho analisou o emprego do leite em pó desnatado (LPD) adicionado de frutose em uma nova curva de resfriamento para criopreservação de sêmen suíno. Um total de 49 ejaculados, de sete varrões foram criopreservados utilizando a nova curva de resfriamento com glicose e frutose adicionada aos diluentes Beltsville Thawing Solution (BTS + D; BTS + F) e Leite em pó desnatado (LPD + D; LPD + F), totalizando quatro grupos experimentais para análises. Ao final da curva, as alíquotas de sêmen foram envasadas em palhetas de 0,5 mL e mantidas em nitrogênio líquido. Durante a curva de resfriamento, a média de vigor e motilidade espermática do LPD foi maior do que do BTS (p 0.05). Após descongelação, observou-se queda do vigor e motilidade em ambos diluentes, com o BTS apresentando melhores resultados de vigor (2,1 ± 0,55) e de motilidade (38 ± 21,8) (p 0,05). Entretanto, o uso da frutose permitiu equiparação dos valores da motilidade entre LPD e BTS (p > 0,05). A funcionalidade de membrana foi melhor preservada com adição da frutose, em ambos os diluentes. Os dados de vitalidade espermática foram significativamente maiores no diluente contendo glicose e LPD (71,8 ± 12,5). A porcentagem de acrossomas intactos foi maior no tratamento que continha glicose, independentemente do diluente utilizado (BTS + G: 81,8 ± 7,2, SMP + G: 81,4 ± 14,2). Os resultados o