Resumo

A produção de fitoterápicos exige que em seu desenvolvimento haja testes em relação a sua toxicidade. Assim métodos que promovam a redução de animais em pesquisa devem ser aplicados também a estes compostos. A OECD (Guideline for the Testing of Chemicals) recomenda o teste do olho de frango como uma alternativa de triagem, antes de levar os produtos à ensaios in vivo. Os objetivos deste estudo foram determinar a toxicidade do extrato aquoso de Walteria ouradinha através de ensaio ex vivo em globo ocular de frangos, e demonstrar dados que justifiquem a utilização deste como teste de triagem anterior ao ensaio in vivo. Foram utilizados olhos de frangos ex vivo, distribuídos em grupos conforme o produto instilado em sua superfície: grupo extrato aquoso de W. douradinha (WD), salina 0,9% (CN) e ácido acético 10% (CP). A toxicidade foi avaliada para retenção de fluoresceína, opacidade e inchaço de córnea, e critérios histopatológicos, conforme recomendação da OECD. O grupo WD demonstrou resultados macroscópicos com baixo índice de irritabilidade, quando comparados com os olhos CP (P<0,05). Ainda, os olhos WD demonstraram menores alterações histopatológicas que os olhos CP, estando, em todas ocasiões, com índice não irritante. Nas condições deste estudo concluímos que o extrato aquoso de W. douradinha possui baixo grau de toxicidade perante as análises macroscópicas e histopatológicas. Mais que isso, indicamos o teste do olho da galinha como ensaio de triagem para determinação da toxicidade de fitoterápicos, podendo ser usado antes de levar os extratos à teste em animais, reduzindo assim o uso destes.

Requirements for the toxicological assessment of phytotherapies are increasing, as these become more widespread. Methods that reduce the animals used in these toxicology studies should also be applied for these compounds. The enucleated chicken eye test is recommended by OECD as an early screening method, used prior to the in vivo assays. The objectives of this study were to assess the toxicity of the aqueous extract of Walteria douradinha through the enucleated chicken eye test, as recommended by the OECD, and demonstrate evidence supporting it as a valid screening assay. The eyes of commercially slaughtered chicken were used in this study, these were divided into groups according to the product instilled: aqueous extract of W. douradinha (WD); 0.9% saline (CN); and 10% acetic acid (CP). Toxicity was evaluated by predetermined criteria for fluorescein retention, corneal opacity, and swelling, in five time points. Histopathological criteria for corneal lesions were also assessed. Throughout the study the WD group showed low rates of irritability compared with CP eyes (P <0.05) in the macroscopic criteria. Moreover, WD eyes showed lower histopathological changes than CP eyes, and were characterized as non irritant. In this study we conclude that the aqueous extract of W. douradinha has a low degree of toxicity, as shown by both macroscopic and histopathological parameters. Furthermore, we recommend the enucleated chicken eye test as a screening assay to determine the toxicity of herbal extracts, and should be used before in vivo testing, thus reducing the number of animals used.

Resumo

O presente estudo analisou o potencial preditivo de dois modelos que utilizam a membrana cório-alantoidede ovo embrionado de galinha (i.e. o HET-CAM e sua versão modificada, o CAM-TBS, que quantifica os danos à membrana por meio da absorção do corante azul trypan), como estratégia para a implementação de alternativas aos testes in vivo de avaliação de toxicidade ocular. Vinte colírios foram avaliados in vivo por meio do teste de irritação ocular de Draize e por ensaios in vitro utilizando-se testes HET-CAM eCAM-TBS. Todos os colírios foram classificados como não irritantes pelo teste in vivo. No ensaio HETCAM, foram observados 4 resultados falso-positivos, e o teste apresentou especificidade e precisão de 80%. O CAM-TBS demonstrou melhor desempenho, pois a especificidade e a precisão foram de 100%. O ponto de corte adotado (cut-off = 0,9) no HET-CAM é discutido, uma vez que os resultados falso-positivos observados no presente estudo poderiam ter sido contornados caso a categoria “não irritante” englobasse produtos “não irritantes” e “irritantes leves”, à semelhança do critério preconizado para o CAM-TBS (cutoff= 7,0).

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Os papéis para fins sanitários são produtos absorventes compostos de fibras naturais, destinados à fabricação de papel higiênico, lenços, toalhas, guardanapos e lençóis hospitalares. Foram analisados 65 produtos de diferentes marcas de papéis comercializadas em São Paulo para avaliar a toxicidade dérmica utilizando-se ensaios in vivo e in vitro e a qualidade microbiológica. Foram utilizados ensaios recomendados pelas Norma ABNT NBR 15134-30/09/2004, Portaria 1480-31/12/1990 e Farmacopeia Americana. O ensaio in vivo foi realizado utilizando-se técnicas de Draize, Magnusson e Kligman; para o teste in vitro pela difusão em ágar foram empregadas as linhagens celulares NCTC clone 929 (ATCC-CCL1). Os produtos apresentaram resultados satisfatórios nos ensaios in vivo e in vitro. A qualidade microbiológica foi satisfatória em 49 (75,4%) amostras, porém em 16 (24,6%) amostras os resultados foram insatisfatórios pela presença de bactérias mesófilas aeróbias e de Clostridium spp. A técnica de citotoxicidade in vitro poderá ser utilizada como teste de triagem e como ensaio alternativo em substituição aos ensaios in vivo. Apesar da análise microbiológica não constar nas normas vigentes, o seu uso torna-se relevante para avaliar as condições higiênico-sanitárias e atender às normas de Boas Práticas de Fabricação e Controle.

Papers manufactured for sanitary purposes are absorbing products, composed by natural fibers, and usedto produce hygienic paper, handkerchiefs, towels, napkins, and hospital sheets. Sixty-five products fromdifferent manufacturers and marketed in São Paulo, Brazil were investigated by in vivo and in vitro dermal toxicity assays and microbiological quality analysis. The assays were performed following ABNT NBR 15134 Regulation and Ministerial Decree 1480. In vivo assay was carried out by Draize and Magnusson and Kligman techniques, and in vitro testing was performed by agar diffusion NCTC cell strains clone 929(ATCC-CCL1). Microbiological analysis was performed according to Ministerial Decree 1480. The analyzed products showed satisfactory results on both in vivo and in vitro assays. Forty-nine (75.4%) samples showed satisfactory microbiological quality, but unsatisfactory in 16 (24.6%) samples due to the occurrence of aerobicmesophilic bacteria and Clostridium spp. In vitro cytotoxicity assay could be used as screening test, and as an alternative test for replacing the animal-using methodologies. The microbiological analysis is not included in the pertinent guidelines, but the use of analytical marker is crucial for assessing the sanitary-hygienic conditions and also to act in compliance with Good Manufacturing and Control Practices.

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Os xampus infantis são formulações a base de formulações tensoativas mais suaves e contêm detergentes anfóteros que buscam o benefício de não irritar os olhos. O objetivo deste trabalho foi de verificar a qualidade de xampus infantis quanto aos parâmetros físico-químicos, microbiológicos e toxicológicos. Foram avaliadas 15 amostras de diferentes marcas comercializadas na cidade de São Paulo. As amostras apresentaram-se em conformidade com a Legislação vigente quanto à segurança de seu uso. O teor de princípio ativo (entre 3 e 5%), as aminas livres e o pH estavam de acordo com as formulações apresentadas; e no ensaio microbiológico o resultado foi satisfatório. Quanto à irritação ocular, 6,7% das amostras apresentaram índices de moderada irritação; 93,3% foram levemente irritantes quando foi aplicado o produto puro, conforme estabelecido no protocolo de Draize. Quando produto foi diluído a 50%, 20% das amostras apresentaram-se levemente irritantes, enquanto os demais demonstraram resultados satisfatórios. As amostras não apresentaram irritação ocular quando foram aplicadas diluídas a 10%. Os resultados obtidos mostraram que as diferentes marcas de xampus estudados estão dentro da qualidade esperada para o produto. Sugere-se que seja incluída no rótulo a advertência sobre o cuidado para evitar que o produto puro entre em contato com os olhos.