Acute-phase protein concentration in bronchoalveolar lavage fluid from healthy horses / Proteínas de fase aguda do lavado broncoalveolar de equinos hígidos

Bronchoalveolar lavage fluid (BALF) was analyzed to obtain information on leakage of acute-phase proteins from the blood into the respiratory lumen and about local synthesis. Ceruloplasmin, transferrin, albumin, α1-antitripsin, immunoglobulin G heavy, immunoglobulin G light, immunoglobulin A, haptoglobin, acidic glycoprotein, and P23 were measured in BALF from 30 horses without inflammatory disease by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). In serum, the same proteins were identified except for α1-antitrypsin. In conclusion, this study demonstrated that polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) can be used for the determination of acute-phase proteins in BALF samples from horses. In healthy horses, the values are very low, but they can be compared with reference values to assist in the diagnosis of animals with respiratory diseases.(AU)

O líquido obtido através da lavagem broncoalveolar (LBA) foi analisado para obter informações sobre as proteínas da fase aguda. Ceruloplasmina, transferrina, albumina, α1-antitripsina, imunoglobulina G pesada, imunoglobulina G leve, imunoglobulina A, haptoglobina, glicoproteína ácida e P23 foram medidas nos LBA de 30 cavalos sem doença inflamatória por eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecilsulfato de sódio (SDS-PAGE). No soro, as mesmas proteínas foram identificadas, exceto a α1-antitripsina. Em conclusão, este estudo demonstra que a eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) pode ser usada para a determinação de proteínas de fase aguda em amostras de LBA em cavalos. Em cavalos saudáveis, os valores são muito baixos, no entanto, podem ser comparados e auxiliar no diagnóstico de animais com doenças respiratórias.(AU)

Acute-phase protein concentration in bronchoalveolar lavage fluid from healthy horses / Proteínas de fase aguda do lavado broncoalveolar de equinos hígidos

Bronchoalveolar lavage fluid (BALF) was analyzed to obtain information on leakage of acute-phase proteins from the blood into the respiratory lumen and about local synthesis. Ceruloplasmin, transferrin, albumin, α1-antitripsin, immunoglobulin G heavy, immunoglobulin G light, immunoglobulin A, haptoglobin, acidic glycoprotein, and P23 were measured in BALF from 30 horses without inflammatory disease by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). In serum, the same proteins were identified except for α1-antitrypsin. In conclusion, this study demonstrated that polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) can be used for the determination of acute-phase proteins in BALF samples from horses. In healthy horses, the values are very low, but they can be compared with reference values to assist in the diagnosis of animals with respiratory diseases.(AU)

O líquido obtido através da lavagem broncoalveolar (LBA) foi analisado para obter informações sobre as proteínas da fase aguda. Ceruloplasmina, transferrina, albumina, α1-antitripsina, imunoglobulina G pesada, imunoglobulina G leve, imunoglobulina A, haptoglobina, glicoproteína ácida e P23 foram medidas nos LBA de 30 cavalos sem doença inflamatória por eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecilsulfato de sódio (SDS-PAGE). No soro, as mesmas proteínas foram identificadas, exceto a α1-antitripsina. Em conclusão, este estudo demonstra que a eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) pode ser usada para a determinação de proteínas de fase aguda em amostras de LBA em cavalos. Em cavalos saudáveis, os valores são muito baixos, no entanto, podem ser comparados e auxiliar no diagnóstico de animais com doenças respiratórias.(AU)

Proteinograma sérico de éguas com placentite ascendente e seus respectivos neonatos: dados preliminares / Serum protein concentrationin mares with ascending placentitis and their newborns: preliminary data

Este estudo teve por objetivo estabelecer o proteinograma sérico em éguas com placentite induzida e em seus respectivos neonatos. Foram coletadas amostras de sangue das éguas em oito momentos diferentes e dos potros em quatro momentos. Para obtenção da concentração das frações proteicas, utilizou-se eletroforese em gel de acrilaminada contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). No método utilizado, foram observadas 23 bandas proteicas, cujos pesos moleculares variaram de 16KDa a 245KDa, sendo possível a identificação das seguintes frações: 175KDa, 102KDa, 83KDa, 63KDa, 50KDa, 41KDa, 39KDa e 28KDa. De todas as bandas proteicas encontradas, somente as de 39KDa e 41KDa apresentaram alteração na cinética nos momentos avaliados. De acordo com a solução marcadora, pode-se sugerir que essas proteínas seriam alfa1-glicoproteína ácida (39KDa) e haptoglobina (41KDa). A concentração de imunoglobulinas nos potros apresentou aumento significativo a partir das 12 horas de nascimento. Não está elucidado se estes níveis refletem a persistência do processo inflamatório placentário ou se são alterações fisiológicas do periparto. Não foram observadas alterações na cinética das proteínas nos potros nas primeiras 48 horas.(AU)

The aim of this paper was to identify the serum acute phase protein concentration in mares with induced placentitis and their neonates. Blood samples were collected from the mares in 8 different moments, and from the foals, in 4 moments. To obtain the concentration of protein fractions acrilaminada gel electrophoresis in sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE) was used. In the used method 23 protein bands whose molecular weights ranged from 16kDa to 245kDa were observed, it is possible to identify the following fractions: 175kDa, 102kDa, 83kDa, 63kDa, 50kDa, 41kDa, 39kDa and 28kDa. Of all the protein bands found only the 39KDa and 41KDa have changes in the kinetics in the evaluated times. According to the marker solution, we would suggest that these proteins are alfa1-acid glycoprotein (39kDa) and haptoglobin (41kDa). The concentration of immunoglobulins in foals increased significantly from 12 hours of birth.(AU)

Proteinograma sérico de éguas com placentite ascendente e seus respectivos neonatos: dados preliminares / Serum protein concentrationin mares with ascending placentitis and their newborns: preliminary data

Este estudo teve por objetivo estabelecer o proteinograma sérico em éguas com placentite induzida e em seus respectivos neonatos. Foram coletadas amostras de sangue das éguas em oito momentos diferentes e dos potros em quatro momentos. Para obtenção da concentração das frações proteicas, utilizou-se eletroforese em gel de acrilaminada contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). No método utilizado, foram observadas 23 bandas proteicas, cujos pesos moleculares variaram de 16KDa a 245KDa, sendo possível a identificação das seguintes frações: 175KDa, 102KDa, 83KDa, 63KDa, 50KDa, 41KDa, 39KDa e 28KDa. De todas as bandas proteicas encontradas, somente as de 39KDa e 41KDa apresentaram alteração na cinética nos momentos avaliados. De acordo com a solução marcadora, pode-se sugerir que essas proteínas seriam alfa1-glicoproteína ácida (39KDa) e haptoglobina (41KDa). A concentração de imunoglobulinas nos potros apresentou aumento significativo a partir das 12 horas de nascimento. Não está elucidado se estes níveis refletem a persistência do processo inflamatório placentário ou se são alterações fisiológicas do periparto. Não foram observadas alterações na cinética das proteínas nos potros nas primeiras 48 horas.(AU)

The aim of this paper was to identify the serum acute phase protein concentration in mares with induced placentitis and their neonates. Blood samples were collected from the mares in 8 different moments, and from the foals, in 4 moments. To obtain the concentration of protein fractions acrilaminada gel electrophoresis in sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE) was used. In the used method 23 protein bands whose molecular weights ranged from 16kDa to 245kDa were observed, it is possible to identify the following fractions: 175kDa, 102kDa, 83kDa, 63kDa, 50kDa, 41kDa, 39kDa and 28kDa. Of all the protein bands found only the 39KDa and 41KDa have changes in the kinetics in the evaluated times. According to the marker solution, we would suggest that these proteins are alfa1-acid glycoprotein (39kDa) and haptoglobin (41kDa). The concentration of immunoglobulins in foals increased significantly from 12 hours of birth.(AU)

Establishment of peritoneal liquid electrophoretogram from healthy horses and horses submitted to experimentally induced intestinal obstruction / Estabelecimento do eletroforetograma do líquido peritoneal de equinos hígidos e daqueles submetidos à obstrução intestinal experimental

The initial inflammatory stages of the colic syndrome include changes known as acute phase response. The aim of this study was to contribute with the establishment of reference values concerning the electrophoretogram of peritoneal liquid from healthy horses and horses submitted to experimentally induced intestinal obstruction. Twenty-one horses were allotted in four groups: duodenal obstruction (DG), ileum obstruction (IG), left-dorsal colon obstruction (MG), and control group (CG). Peritoneal liquid was sampled before obtruction (T0), with 3 hours of obstruction (T3) and 6, 30, 102 and 174 hours after desobstructing (T6, T30, T102 and T174, respectively). Total protein levels were determined by the biuret method and protein fractions were obtained by SDS-PAGE electrophoresis. The acute phase proteins (APP) identified were Immunoglobulin-A, ceruloplasmin, transferrin, albumin, α1-antitrypsin, heavy and light chains of immunoglobulin-G, haptoglobin, α1-acid glycoprotein and a still unnamed protein, which was called P24. There was no difference (P>0.3) in protein levels among groups, although a significant difference (P>0.05) was observed between distinct experimental moments in each group evidencing a higher response of the APP in the obstructed groups. The APP fractioning of the peritoneal liquid was standardized to establish a standard curve for healthy equines and those submitted to induced intestinal obstruction. Moreover, it was verified that the SDS-PAGE electrophoresis was sensitive and effective to help diagnose abdominal inflammatory processes.(AU)

Na cólica equina, os estágios iniciais da inflamação incluem alterações denominadas resposta de fase aguda. O objetivo deste estudo foi contribuir para o estabelecimento de valores de referência do proteinograma do líquido peritoneal de equinos hígidos e daqueles submetidos à obstrução intestinal experimental. Vinte e um animais foram distribuídos nos grupos: obstrução de duodeno (GD), íleo (GI), cólon dorsal esquerdo (GM) e controle instrumentado (GC). As colheitas das amostras de líquido peritoneal foram realizadas antes (T0), durante as obstruções (T3) e após as desobstruções (T6, T30, T102 e T174 horas). A proteína total foi determinada pelo método do biureto, e as frações proteicas obtidas por eletroforese em SDS-PAGE. Identificaram-se as proteínas de fase aguda (PFA): IgA, ceruloplasmina, transferrina, albumina, α1-antitripsina, cadeias pesada e leve de imunoglobulina-G, haptoglobina, alfa-1-glicoproteína ácida e uma proteína nominalmente não identificada, que foi chamada P24. Não houve diferença (P>0.3) nas concentrações proteicas entre os grupos, somente entre tempos dentro de cada grupo (P>0.05), evidenciando uma resposta maior das PFA dos grupos obstruídos. O fracionamento eletroforético das PFA, presentes no líquido peritoneal, foi padronizado de modo a estabelecer a curva-padrão para equinos hígidos e para aqueles submetidos à obstrução intestinal; ademais, verificou-se que o referido fracionamento proteico mostrou-se sensível e eficaz no auxílio ao diagnóstico de processos inflamatórios abdominais.(AU)

MUDANÇAS NO ÚTERO DA ÉGUA APÓS A INFUSÃO DE FRAGMENTOS DE CONCEPTOS

A Comunicação materno embrionária equina ainda tem um pobre entendimento. Mudanças histológicas, vasculares e proteicas na prenhez inicial tem sido reportadas. O objetivo do presente trabalho foi determinar mudanças histológicas, vasculares e proteicas, comparando o endométrio e o liquido endometrial de éguas no sétimo dia após ovulação com éguas nas quais no quinto dia após ovulação foram infundidos fragmentos de conceptos de 13 dias. No presente estudo, foram utilizadas 10 éguas sadias e cíclicas, onde uma vez detectado o estro, as éguas foram examinadas diariamente até detectar a ovulação, sendo classificado como o dia 0. Após a ovulação, as éguas foram examinadas por palpação e ultrassonografia modo B e Doppler até o dia 7. Neste primeiro ciclo, liquido uterino e biopsias intrauterinas foram coletas no dia 7 após a ovulação, conformando o grupo Cíclico (n=10). No segundo ciclo, as mesmas éguas foram examinadas diariamente até detectar novamente a ovulação. Aos 5 dias pós-ovulação, fragmentos de conceptos de dia 13, que haviam sido previamente coletados, foram infundidos no útero de cada égua. Liquido uterino e biopsias endometriais foram coletadas no dia 7 pós-ovulação, compondo o grupo Fragmento (n=10). As éguas foram examinadas diariamente por ultrassonografia Power Doppler e Spectral Doppler desde a ovulação até o dia 7, nos dois ciclos. Biopsias foram divididas e armazenadas em solução de glutaraldeído a 2.5% para microscopia eletrônica de varredura e solução de paraformaldeído tamponado a 4% para estudos histológicos. Liquido uterino foi submetido a 2D-PAGE eletroforese, gerando géis que foram analisados e comparados. Os Spots com diferenças (P < 0.01) foram removidos, tripsinizados, liofilizados e submetidos a espectrometria de massa (LC-MS/MS e MALDI-TOF/TOF) e identificação. Observou-se uma diminuição na porcentagem de células ciliadas e planas no grupo Fragmento em relação ao grupo Cíclico. No entanto, células ingurgitadas, secreção superficial e intraglandular, lúmen e diâmetro glandular, diâmetro dos vasos sanguíneos, vascularização endometrial e células imunes foram maiores no grupo Fragmento do que no grupo Cíclico. Mudanças na abundancia das proteínas do líquido uterino foram identificadas por 2D-PAGE. 13 proteínas foram identificas por espectrometria de massa: Albumina, Apolipoproteina A1, Fator de complemento B, Fibrinogênio B, Fibrinogênio G, Hemopexin, IGL, IGHCp, IGHC1, Lipocalina 2, Serpin B1, Serotransferrin e Serotransferrin-semelhante. Mudanças histológicas e proteicas e suas interações sugerem novos achados para um melhor entendimento da comunicação materno-embrionária.

Equine maternal-embryonic communication still has poor understanding. Histological, vascular and protein changes in early pregnancy have been reported. The aim of the present study was to determine histomorphological, vascular and protein changes, comparing endometrium and uterine fluid of mares at 7 th day after ovulation with mares in which at 5 th day after ovulation were infused conceptus fragments of 13 days. In the present study, ten healthy and cyclic mares were used, where once estrus was detected, the mares were examined daily until ovulation was detected, being classified as day 0. After ovulation the mares were examined by palpation and ultrasonography mode B and Doppler since to day 7. In this first cycle, uterine fluid and intrauterine biopsies were collected on day 7 after ovulation, forming the Cyclic group (n = 10). In the second cycle, the same mares were examined daily until ovulation was detected again. At 5 days after ovulation, fragments of concepts from day 13, which had previously been collected, were infused into the uterus of each mare. Uterine fluid and endometrial biopsies were collected on day 7 postovulation, composing the Fragment group (n = 10). The mares were examined daily by Power Doppler ultrasonography and Spectral Doppler from ovulation to day 7, in both cycles. Biopsies were divided and stored in 2.5% glutaraldehyde solution for scanning electron microscopy and 4% buffered paraformaldehyde solution for histological studies. Uterine fluid was subjected to 2D-PAGE electrophoresis, generating gels that were analyzed and compared. Spots with differences (P <0.01) were removed, trypsinized, lyophilized and subjected to mass spectrometry (LCMS/MS and MALDI-TOF / TOF) and identification. A decrease in the percentage of ciliated and flattened cells was observed in Fragment group in relation to the Cyclic group. Nevertheless, protruded cells, superficial and intraglandular secretion, glandular lumen and diameter, blood vessel diameter, endometrial vascularization and immune cells were higher in Fragment group than in Cyclic group. Changes in uterine fluid protein abundance were identified by 2D-PAGE. 13 proteins were identified by mass spectrometry: Albumin, Apolipoprotein A1, Complement Factor B, Fibrinogen B, Fibrinogen G, Hemopexin, IGL, IGHC1, IGHCp, Lipocalin 2, Serpinb1 and Serotransferrin, Like-Serotransferrin. Histological and protein changes and their interactions suggest new findings for a better understanding of maternal-embryonic communication.

PROTEINOGRAMA SÉRICO DE EQUINOS SADIOS E ACOMETIDOS NATURALMENTE PELA SÍNDROME CÓLICA

A síndrome cólica é uma das maiores causadoras de óbito na espécie equina. A busca por marcadores precoces da inflamação, como as proteínas de fase aguda (PFAs), a fim de auxiliar no diagnóstico e prognóstico é de suma importância. O objetivo desse estudo foi avaliar e comparar o proteinograma sérico, identificando e quantificando as proteínas de fase aguda de equinos sadios e acometidos naturalmente pela síndrome cólica. Foram colhidas amostras de sangue em nove animais hígidos e 17 animais com cólica clínica (G1) ou cirúrgica (G2), no momento da chegada ao Hospital Veterinário (M0) e 24 (M1), 48 (M2) e 72 (M3) horas após o início do tratamento. As PFAs foram separadas por meio da eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e suas concentrações determinadas por densitometria computadorizada. A identificação das PFAs foi feita por meio da espectrometria de massa MALDI-TOF/TOF e os resultados obtidos foram confrontados com o banco de dados de proteínas dos táxons Equidae e Metazoa depositados no UNIPROT, usando o aplicativo MASCOT. Foram identificadas onze proteínas: 2macroglobulina (182 kD), ceruloplasmina (157 kD), transferrina (89 kD), albumina (66 kD), 1-antitripsina (60 kD), IgG de cadeia pesada (54 kD), haptoglobina (45 kD), 1-glicoproteína ácida (42 kD), IgG de cadeia leve (30 kD), apolipoproteína A1 (27 kD) e amilóide sérica A (14 kD), com elevação das concentrações da 2macroglobulina, ceruloplasmina (Cp) e amilóide sérica A (ASA) no grupo dos animais doentes (GD). A Cp apresentou elevação no M0 do G2 em relação ao G1 e grupo controle (GC). A ASA apresentou elevação com diferença estatística no M3 do G1 e G2 quando comparados ao GC. Na comparação feita entre os momentos dentro de cada grupo (G1 e G2), foi evidenciado o aumento da ASA no G2 com diferença estatística nos M1, M2 e M3. Apesar da ASA não apresentar diferença estatística nos momentos analisados dentro de cada grupo (M0-M3), manteve-se mais elevada no G2 em relação ao G1. O comportamento das PFAs encontradas nesse estudo foi variável. A elevação da concentração de algumas proteínas no GD indica que houve ix uma resposta das PFAs induzida pelo processo inflamatório. A Cp e a ASA foram favoráveis na avaliação da resposta de fase aguda em cavalos com cólica. A Cp foi um indicador de cólica com resolução cirúrgica e a ASA apresentou comportamento favorável para sua utilização como biomarcador para estabelecer prognóstico em cavalos com cólica. A mensuração seriada dessas proteínas foi útil na diferenciação do tratamento clínico ou cirúrgico e prognóstico de cavalos com esta enfermidade.

Colic syndrome is one of the major causes of death in the equine species. The search for early markers of inflammation, such as the acute phase proteins (APPs), in order to support in diagnosis and prognosis is a matter of great importance. The aim of this study was to evaluate and compare the serum proteinogram, identifying and quantifying the acute phase proteins of healthy horses and naturally affected by the colic syndrome. Blood samples were collected in nine healthy animals and 17 animals with clinical (G1) or surgical (G2) colic at moment of arrival at the Veterinary Hospital (M0) and 24 (M1), 48 (M2) and 72 (M3) hours after initiation of treatment. The APPs were separated by polyacrylamide gel electrophoresis (SDSPAGE) and their concentrations determined by computerized densitometry. The APPs were identified using MALDI-TOF / TOF mass spectrometry and the results obtained were compared to the Equidae and Metazoa taxa database deposited at UNIPROT using the MASCOT application. Eleven proteins were identified: 2macroglobulin (182 kD), ceruloplasmin (157 kD), transferrin (89 kD), albumin (66 kD), 1-antitrypsin (60 kD), heavy chain IgG (54 kD), haptoglobin (45 kD), 1-acid glycoprotein (42 kD), light chain IgG (30 kD), apolipoprotein A1 (27 kD) and serum amyloid A (14 kD), with increased concentrations of 2-macroglobulin, ceruloplasmin (Cp) and serum amyloid A (ASA) in the sick animals (GD) group. The Cp increased in M0 of G2 in relation to G1 and GC. The ASA increased with statistical difference in M3 of G1 and G2 when compared with the control (GC). In the comparison made between the moments within each group (G1 and G2), it was verified the increase of ASA in G2 with statistical difference in M1, M2 and M3. Although the ASA did not present statistical difference at the moments it was analyzed within each group (M0-M3), it remained higher in G2 than in G1. The behavior of APPs found in this study was variable. The increase of the concentration of some proteins in the GD indicates that there was a response of the PFAs induced by the inflammatory process. The Cp and ASA were favorable in the evaluation of xi the acute phase response in horses with colic. The Cp was an indicator of colic with surgical resolution and the ASA presented favorable behavior for its use as a biomarker to establish prognosis in horses with colic. The serial measurement of these proteins was useful in differentiating the clinical or surgical treatment and prognosis of horses with this disease.

Frequency of antibodies against Sarcocystis neurona and Neospora caninum in domestic cats in the state of Bahia, Brazil / Frequência de anticorpos contra Sarcocystis neurona e Neospora caninum em gatos domésticos do Estado da Bahia, Brasil

Sarcocystis neurona is the major agent of equine protozoal myeloencephalitis. It infects several mammalian species in the Americas, where the definitive hosts, marsupials of the genus Didelphis (D. virginiana and D. albiventris) are found. Domestic cats are one of the confirmed intermediate hosts of the parasite; however, antibodies against S. neurona had never before been demonstrated in Brazilian cats. The aim of this study was to determine whether cats in Bahia, Brazil, are exposed to the parasite. A total of 272 feline serum samples (134 from feral and 138 from house cats) were subjected to an indirect fluorescent antibody test using cultured merozoites of S. neurona as antigen. Positivity was detected in 4.0% (11/272) of the tested samples, with titers ranging from 25 to 800. The feline sera were also tested for antibodies against the protozoan Neospora caninum, with an observed antibody frequency of 2.9%. To the author's knowledge, this is the first study to report antibodies against S. neurona in Brazilian cats. We conclude that cats are exposed to the parasite in the region of this study. Further investigations are needed to confirm the role of cats in the transmission cycle of S. neurona in Brazil.

Sarcocystis neurona é o principal agente da mieloencefalite protozoária equina. Esse parasito infecta várias espécies de mamíferos nas Américas, onde são encontrados os hospedeiros definitivos, os marsupiais do gênero Didelphis (D. virginiana and D. albiventris). O gato doméstico é um dos hospedeiros intermediários do parasito. Contudo, anticorpos contra S. neurona ainda não tinham sido demonstrados em gatos brasileiros. O objetivo deste trabalho foi determinar se gatos da Bahia, Brasil, são expostos ao parasito. Amostras séricas de 272 felinos (134 de gatos errantes e 138 de gatos domiciliados) foram testadas pelo teste de imunofluorescência indireta, utilizando-se como antígeno, merozoítos produzidos em cultura celular. Entre as amostras testadas, 4,0% (11/272) foram positivas com títulos entre 25 e 800. Os soros dos felinos foram também testados para anticorpos contra o protozoário Neospora caninum, cuja frequência de anticorpos foi de 2,9%. Esse é o primeiro relato de anticorpos contra S. neurona em gatos brasileiros. Conclui-se que os gatos da região estudada são expostos a S. neurona. Estudos futuros são necessários, a fim de se confirmar o papel dos gatos no ciclo de transmissão de S. neurona no Brasil.

FREQUÊNCIA DE Lawsonia intracellularis E ROTAVÍRUS EM EQUINOS CRIADOS NO OESTE PARANÁ

A diarreia é um sinal clínico comum a diversas doenças, sejam de origem bacteriana, viral, ou parasitária. O diagnóstico correto da causa se torna fundamental para o tratamento adequado de potros. A Lawsonia intracellularis é um patógeno muito estudado em suínos, porém nos equinos os primeiros relatos começaram a surgir na década de 1980, e ainda são poucos os casos relatados na literatura veterinária. O rotavírus vem sendo relatado na literatura como causador de diarreias em diversas espécies animais. Em potros, seu relato é atualmente escasso. Foi pesquisada a frequência de L. intracellularis e de rotavírus em equinos com idades entre um mês e cinco anos criados no oeste do estado do Paraná. Os equinos eram provenientes de 15 propriedades oriundos de cinco cidades da região oeste do Paraná. Dos animais utilizados no experimento, 80 (53,69%) eram fêmeas e 69 (46,31%) eram machos. Foram coletadas amostras de sangue e de fezes de 149 animais No exame sorológico de imunoperoxidase em monocamada de células (IPMC), 4,69% dos animais se apresentaram positivos, provenientes de seis propriedades distintas, dentre as 15 pesquisadas. Esses animais apresentavam idades entre seis meses e cinco anos, e títulos sorológicos de 1:60, 1:240 e 1:480. Para a pesquisa de rotavírus foi utilizada a eletroforese em gel de agarose. Não houveram animais positivos para a eliminação de partículas virais nas fezes.

Diarrhea is a common clinical sign of several diseases, of bacterial, viral, or parasitic origin. Correct diagnosis of the cause is essential for proper treatment of foals. Lawsonia intracellularis is a very well know pathogen in swine, however, in foals the first reports dates on 1980, and since then rare cases were report in the veterinary literature. Rotavirus has been describe in the literature as causing diarrhea in several animals. In foals, rotavirus occurrence is currently scarce. The frequency of L. intracellularis and rotavirus was investigated in horses aged between one month and five years old raised in the western state of Paraná. The horses came from 15 farms from the five cities of western Paraná. Of animals used in this research, 80 (53.69%) were females and 69 (46.31%) were males. In serological test using immunoperoxidase performed on cell monolayers (IPMC), 4.69% of animals were positive totalizing six of fifteen farms analyzed. These animals had between six months and five years, and the serological titers varied of 1:60, 1: 240 and 1: 480. For an investigation of rotavirus agarose gel electrophoresis was perform. No one animal was positive for rotavirus in faeces.

CONFIRMAÇÃO DA EXPOSIÇÃO POR NEOSPORA SPP. EM EQUIDEOS DA MICRORREGIÃO ILHÉUS-ITABUNA PELA TÉCNICA DO WESTERN BLOTTING

Objetivou-se com este estudo confirmar a exposição por Neospora spp através da técnica de western blotting em eqüídeos da microrregião Ilhéus-Itabuna. Das 516 amostras testadas na RIFI, 80 foram selecionadas para a realização do western blotting. Nove amostras foram positivas para Neospora spp., seis apresentaram infecção simultânea a N. caninum e T. gondii, 33 foram positivas apenas para T. gondii e 32 amostras negativas para ambos parasitos. Taquizoítos da cepa Nc-Bahia foram cultivados em monocamadas de células Vero, mantidos com meio RPMI suplementado com soro fetal bovino e com adição de antibiótico e antimicótico. Para cada reação de western blotting utilizou-se um volume de 100 L de solução tampão de amostra e antígeno purificado (4x107 de taquizoítos). As proteínas foram separadas em um gel de poliacrilamida 12%, submetidos a eletroforese vertical por duas horas. Após separadas, as proteínas foram transferidas para uma membrana de PVDF, bloqueadas durante 12 horas com a solução de leite em pó desnatado (5%) e PBS-Tween, cortadas em tiras de 0,25cm de comprimento, incubadas por duas horas com os anticorpos primários e secundário e reveladas. A migração das bandas na membrana foi medida e os dados tabulados em uma planilha do software Excel® Microsoft, onde o peso molecular das proteínas foi calculado com base no RF das amostras e na equação da reta gerada no gráfico. Dezoito amostras foram positivas (3,48% - 18/516), reconhecendo pelo menos um dos antígenos de 17, 35 - 37 e 43 KDa. A proteína de 35KDa foi reconhecida em maior frequência. Com base nos resultados, conclui-se que há exposição dos equideos da microrregião Ilhéus- Itabuna ao Neospora spp., com infecção diagnosticada em maior proporção na espécie equina.

The objective of this study was to confirm the exposure by Neospora spp through Western blotting technique in equids from the Ilhéus-Itabuna microregion. Of the 516 Samples tested in the IFAT, 80 were selected for western Blotting. Nine samples were positive for Neospora spp., Six presented Simultaneous infection with N. caninum and T. gondii, 33 were positive only for T. Gondii and 32 negative samples for both parasites. Tachyzoites of the Nc-Bahia strain were grown in monolayers of Vero cells, maintained with RPMI medium Supplemented with fetal bovine serum and with addition of antibiotic and antimycotic. For Each western blotting reaction was used a volume of 100 l of buffer solution And purified antigen (4x107 tachyzoites). The proteins were Separated on a 12% polyacrylamide gel, submitted to vertical electrophoresis by two hours. After separated, the proteins were transferred to a membrane Of PVDF, blocked for 12 hours with the skimmed milk powder solution (5%) and PBS-Tween, cut into strips of 0.25cm in length, incubated for Two hours with the primary and secondary antibodies and revealed. The migration of Bands were measured and the data tabulated in a software spreadsheet Excel® Microsoft, where the molecular weight of the proteins was calculated based on the RF of the samples and in the equation of the line generated in the graph. Eighteen samples were Positive antigens (3.48% - 18/516), recognizing at least one of the antigens of 17, 35 - 37 and 43 KDa. The 35KDa protein was recognized at higher frequency. Based In the results, it is concluded that there is exposure of the equids of the Ilhéus-Itabuna to Neospora spp., With infection diagnosed to a greater

PREVALÊNCIA DE Staphylococcus spp. RESISTENTE A METICILINA (MRS) EM EQUINOS NO AMBIENTE HOSPITALAR E HUMANOS CONTACTANTES

- Staphylococcus spp. causam várias enfermidades em humanos e animais. O crescente desenvolvimento de resistência bacteriana aos antimicrobianos convencionais dificulta o tratamento das infecções por esses micro-organismos, e é considerado problema de saúde humana e animal. Foi investigada a frequência e distribuição de clones de Staphylococcus spp. resistentes a meticilina (MRS) em equinos hospitalizados e profissionais da área (médicos veterinários e funcionários), bem como avaliar possível transmissão interespécies. Foram colhidas 131 amostras de suabe nasal de equinos e 35 de humanos, cultivados em ágar de ovo-telurite-glicina-piruvato (BD Baird-Parker Agar®). Os micro-organismos foram submetidos à coloração de Gram, identificação por provas bioquímicas e métodos genotípicos (PCR) e ITS-PCR para caracterização das espécies. A sensibilidade aos antimicrobianos foi determinada pelo método de concentração inibitória mínima (MIC). O perfil clonal e identificação da estirpe dos Staphylococcus spp. foi caracterizado por Eletroforese em Gel de Campo Pulsado (PFGE) e pelo Multilocus sequence Typing (MLST). O gênero Staphylococcus foi isolado em 17,5% (23/131) dos equinos, dos quais, 8,4% (11/131) foram identificados como S. hyicus, 3,8% (5/131) S. aureus, 3,8% (5/131) S. pseudintermedius e 1,5% (2/131) S. schleiferi. Foi detectado o gene mecA em um isolado de S. pseudintermedius. Nos 35 humanos amostrados, foram identificados 40% (14/35) de S. aureus. A tipagem molecular por PFGE possibilitou identificar similaridade clonal (C1) dos isolados de S. aureus, obtido de duas pessoas da área Clínica Cirúrgica de Grandes Animais (CCGA) e uma da área de Reprodução de Grandes Animais (RGA). Foi possível observar similaridade entre os dois isolados de humanos da CCGA (C2), bem como entre as duas estirpes de departamentos distintos (CCGA e RGA C5). Entre os isolados de S. aureus obtidas de equinos, obteve-se similaridade clonal entre os estafilococos provindos da RGA e Clínica de Grandes Animais (CGA) (C3), e de pacientes da CCGA (C4). Em quatro isolados foi identificado ST398, com similaridade clonal de 98,1% entre um estafilococo de equino e o de humano. Foi observado maior frequência de isolados de S. hyicus em equinos e S. aureus em humanos. O gene mecA foi detectado exclusivamente em S. pseudintermedius origem equina. A similaridade clonal foi atribuída entre isolados de S. aureus e S. hyicus de equinos, S. aureus de humanos, bem como entre as duas espécies estudadas, tendo como principais fatores de risco, o tempo de internação e o contato direto entre as espécies.

- Staphylococcus spp. is a primary agent of a wide variety of infections in humans and animals. The increasing of bacterial resistance of this microorganism to conventional antimicrobial difficults the treatment of infections and is considered a problem in human and animal health problem. The aim of this research was to investigate the prevalence and distribution of Staphylococcus spp. resistant (MRS) and clones of staphylococci in hospitalized horses and professionals with some contact of animals (veterinarians and medical staff), and evaluate the possibility of interspecies transmission. One hundred thirty-one samples were taken from nasal swabs of horses and 35 humans, subjected to agar egg-glycine-tellurite-pyruvate (BD Baird-Parker Agar®). The isolates were submitted to Gram staining and conventional biochemical tests (catalase, coagulase, maltose, trehalose and mannitol) to phenotypic characterization of the species. The antimicrobial susceptibility was determined by minimum inhibitory concentration (MIC) method. The profile of clonal and strain characterization of Staphylococcus spp. was realized by Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) and Multilocus sequence Typing (MLST). Staphylococcus genus was isolated in 17.5% (23/131) of horses, of which 8.4% (11/131) were S. hyicus, 3.8% (5/131) S. aureus, 3,8% (5/131) S. pseudintermedius and 1,5% (2/131) of the S. schleiferi. mecA gene was detected in one isolate of S. pseudintermedius (resistant to oxacillin). For the 35 humans sample was identified S. aureus in 40% (14/35). Molecular typing by PFGE identified a cluster (C1) of the S. aureus, obtained from strains of Large Animal Surgery Service (CCGA) and a Large Animal Breeding Service (RGA). It was observed similarity between two human isolates from CCGA (C2), and between two strains of different services (CCGA and RGA - C5). Among the samples of S. aureus obtained from horses, it was similarity between clonal isolates from the RGA and Large Animal Internal Medicine (CGA) (C3), and patients from CCGA (C4). Four strains was identified as ST398, among them, clonal similarity of 98.1% between equine and human strais. Higher frequency of S. hyicus was observed among horses and S. aureus from humans. The mecA gene was identified exclusively in S. pseudintermedius (horses). The clonal similarity was attributed between all samples and species studied, had the same risk factors, the length of stay and direct contact between the species.

Análise biquímica do líquido amniótico e alantoideano do Equus caballus em diferentes fases da gestação

Os líquidos fetais possuem diversas funções que são vitais para o feto. Para a espécie eqüina até o presente momento, não está totalmente definida a composição bioquímica do líquido amniótico no decorrer da gestação. O presente trabalho teve como objetivo verificar a composição bioquímica do liquido amniótico e alantoideano das éguas em diferentes fases da gestação. Para isso analisou-se 60 amostras de fluidos fetais, empregando-se kits comerciais para se determinar a concentração bioquímica da Fosfatase Alcalina, Glicose, Proteínas Totais, Uréia, Creatinina, Cálcio, Cloreto, Sódio e Potássio durante a gestação. A concentração da alfa-fetoproteína foi avaliada empregando-se a eletroforese em gel de poliacrilamida. A concentração da Fosfatase Alcalina no liquido amniótico foi maior quando comparada ao liquido alantoideano nas três fases da gestação (p < 0,05). Para a glicose o valor médio entre os dois fluidos não apresentou variações (p < 0,05). Para a Proteína total o valor médio do liquido amniótico foi maior que o alantoideano (p < 0,05). A Uréia sofreu variações na concentração entre as fases, mas não há diferenças dos valores médios (p > 0,05) entre os fluidos. Para a Creatinina os valores presentes no liquido alantoideano são mais altos que os valores do liquido amniótico (p < 0,05). As concentrações dos íons Cloreto e Sódio apresentaram?se mais elevados (p < 0,05) no liquido amniótico. As concentrações dos íons Cálcio e Potássio foram mais elevadas nos líquidos alantoideanos (p<0,05). A eletroforese identificou duas bandas protéicas que podem ser a alfa-fetoproteína, ela parece aumentar a concentração durante o período gestacional. Porém, faltam estudos na espécie eqüina para a comparação dos resultados do presente trabalho

Fetal fluids play a vital role in the development of the fetus. The biochemical composition of the amniotic fluid along pregnancy in horses had not been described until this present study. Sixty samples of fetal fluids were collected and the concentrations of Alkaline Phosphatase (FA), Glucose, Total Proteins (PT), Urea, Creatinin, Calcium (Ca), Chloride (Cl), Sodium (Na) and Potassium (K) along pregnancy were determined using commercially available kits. The levels of alpha-fetoprotein (AFT) were measured by polyacrylamide gel electrophoresis. During the three stages of pregnancy the concentrations of FA in the amniotic fluid were higher than those determined in the allantoic fluid (p < 0,05). The glucose levels did not differ between the fluids (p < 0,05). The mean values for the concentrations of PT were higher in the amniotic fluid than in the allantoic (p < 0,05). The urea levels differ among the pregnancy stages, but there were no differences in the mean values of urea (p > 0,05) between the two fluids. The concentrations of creatinin obtained in the allantoic fluid were higher than those obtained in the amniotic fluid (p < 0,05). The concentrations of Cl and Na were elevated (p < 0,05) in the amniotic fluid. The levels of the ions Ca e K were higher in the allantoic fluid (p<0,05). Polyacrylamide gel electrophoresis identified two protein bands that could be alpha-fetoprotein, which appears to have its concentration increased during pregnancy. There is a need for more studies in the biochemical composition of fetal fluids in horses to compare the results obtained in this study

Gonadotrofina coriônica eqüina: purificação, caracterização e resposta ovariana em ovinos e suínos

Equine chorionic gonadotrophin (eCG) was purified and characterized with respect to its purity and bionological activity. The purity of four preparations was determined by electrophoresis, and the biological activity by increasing of the ovarian weight ot immature female rats (40-50g) and induction ot ovulation of ewes and gilts. Electrophoretic analysis revealed three polipeptidic bands. The mean biological activity was 313UI/mg of protein. Sixty-five ewes, not in reproductive season, were divided randomly in two groups that received vaginal pessaries impregnated with medroxiprogesterone acetato for 11 to 14 days. In treatment I, ewes (n = 55) were injected (IM) with 500UI of puritied eCG at the moment of pessaries withdraw, while in treatment II, the ewes (n = 10) received 500UI of comercial eCG. The results observed were 2.1 ± 0.3 and 1.8 ± 0.3 ovulations (P > 0.05) for treatments I and II, respectively. One hundred-twenty gilts, with mean weight of 87.2kg, were divided m two treatments. The animals in treatment I (90 gilts) received 500UI of puntied eCG and, 72 hours later, 500UI of hCG (human chorionic gonadotrophin). In treatment II hormones were not injected. The results observed were 25.9 ± 22.2 and 0.0 corpora lutea (P 0.001) for treatments I and II, respectively. These results demonstrated that the eCG purified has purity and biological activity similar to the comercial product used as control, and that it is efficient in inducing ovarian activity in ewes and gilts.

A gonadotrofina coriônica equina (eCG) foi purificada e caracterizada com respeito ao grau de pureza e atividade biológica. A pureza de quatro preparações foi determinada por eletroforese e a atividade biológica pelo incremento do peso ovariano de ratas imaturas (40 - 50g) e pela indução de ovulação em ovelhas e leitoas. A análise eletroforética revelou a presença de três bandas polipeptídicas. A atividade biológica media foi de 313 UI/mg de proteína. Sessenta e cinco (65) ovelhas, fora da estação reprodutiva, foram divididas ao acaso em dois grupos os quais receberam implantes vaginais de esponjas impregnadas com acetato de medroxiprogesterona por um período de l l a 14 dias. No grupo I (55 ovelhas), foram injetadas (IM) 500UI do eCG purificado no momento da retirada das esponjas, enquanto que no grupo II (10 ovelhas) foram injetadas 500UI de eCG comercial. Uma semana após a aplicação do eCG as ovelhas foram submetidas a um exame laparoscópico para avaliar o número de ovulações. Obteve-se uma média de 2,1 ± 0,3 e 1,8 ± 0,3 ovulações (P>0,05) para as ovelhas dos grupos I e II, respectivamente. De 120 leitoas pré-púberes, com peso médio de 87,2 kg, 90 (grupo I) foram injetadas com 500UI do eCG purificado e, às 72 horas, 500UI de hCG (gonadotrofina coriônica humana), e 30 leitoas (grupo II) não receberam injeção hormonal. Observou-se a presença de 25,9 ± 22,2 e 0,0 corpora lutea (P 0,001), nos grupos I e II, respectivamente. Estes resultados demonstraram que o PMSG purificado apresenta pureza e atividade biológica similares ao produto comercial utilizado como controle e que é eficiente para induzir atividade ovariana em ovinos e suínos.

Gonadotrofina coriônica eqüina: purificação, caracterização e resposta ovariana em ovinos e suínos

Equine chorionic gonadotrophin (eCG) was purified and characterized with respect to its purity and bionological activity. The purity of four preparations was determined by electrophoresis, and the biological activity by increasing of the ovarian weight ot immature female rats (40-50g) and induction ot ovulation of ewes and gilts. Electrophoretic analysis revealed three polipeptidic bands. The mean biological activity was 313UI/mg of protein. Sixty-five ewes, not in reproductive season, were divided randomly in two groups that received vaginal pessaries impregnated with medroxiprogesterone acetato for 11 to 14 days. In treatment I, ewes (n = 55) were injected (IM) with 500UI of puritied eCG at the moment of pessaries withdraw, while in treatment II, the ewes (n = 10) received 500UI of comercial eCG. The results observed were 2.1 ± 0.3 and 1.8 ± 0.3 ovulations (P > 0.05) for treatments I and II, respectively. One hundred-twenty gilts, with mean weight of 87.2kg, were divided m two treatments. The animals in treatment I (90 gilts) received 500UI of puntied eCG and, 72 hours later, 500UI of hCG (human chorionic gonadotrophin). In treatment II hormones were not injected. The results observed were 25.9 ± 22.2 and 0.0 corpora lutea (P 0.001) for treatments I and II, respectively. These results demonstrated that the eCG purified has purity and biological activity similar to the comercial product used as control, and that it is efficient in inducing ovarian activity in ewes and gilts.

A gonadotrofina coriônica equina (eCG) foi purificada e caracterizada com respeito ao grau de pureza e atividade biológica. A pureza de quatro preparações foi determinada por eletroforese e a atividade biológica pelo incremento do peso ovariano de ratas imaturas (40 - 50g) e pela indução de ovulação em ovelhas e leitoas. A análise eletroforética revelou a presença de três bandas polipeptídicas. A atividade biológica media foi de 313 UI/mg de proteína. Sessenta e cinco (65) ovelhas, fora da estação reprodutiva, foram divididas ao acaso em dois grupos os quais receberam implantes vaginais de esponjas impregnadas com acetato de medroxiprogesterona por um período de l l a 14 dias. No grupo I (55 ovelhas), foram injetadas (IM) 500UI do eCG purificado no momento da retirada das esponjas, enquanto que no grupo II (10 ovelhas) foram injetadas 500UI de eCG comercial. Uma semana após a aplicação do eCG as ovelhas foram submetidas a um exame laparoscópico para avaliar o número de ovulações. Obteve-se uma média de 2,1 ± 0,3 e 1,8 ± 0,3 ovulações (P>0,05) para as ovelhas dos grupos I e II, respectivamente. De 120 leitoas pré-púberes, com peso médio de 87,2 kg, 90 (grupo I) foram injetadas com 500UI do eCG purificado e, às 72 horas, 500UI de hCG (gonadotrofina coriônica humana), e 30 leitoas (grupo II) não receberam injeção hormonal. Observou-se a presença de 25,9 ± 22,2 e 0,0 corpora lutea (P 0,001), nos grupos I e II, respectivamente. Estes resultados demonstraram que o PMSG purificado apresenta pureza e atividade biológica similares ao produto comercial utilizado como controle e que é eficiente para induzir atividade ovariana em ovinos e suínos.

Avaliação dos constituintes bioquímicos e protéicos do plasma seminal e do soro sanguíneo e das proteínas de membrana espermática e sua correlação com a qualidade do sêmen congelado em garanhões

O presente trabalho teve por objetivo avaliar os constituintes bioquímicos e protéicos do plasma seminal e séricos de eqüinos, assim como as proteínas da membrana plasmática dos espermatozóides, a fim de estabelecer correlação entre estes dados e a congelabilidade do sêmen na espécie eqüina. Para tanto, foram utilizados 22 animais de sêmen fresco com características normais, dos quais foram feitas colheitas de sêmen para obtenção de amostras de sêmen para congelação, de plasma seminal e de proteínas de membrana e colheitas de sangue para obtenção de soro. Para determinar o perfil bioquímico do plasma seminal e do soro, foram feitas dosagens de glicose, cloretos, sódio, potássio, fósforo, magnésio, colesterol, albumina, proteínas totais, selênio e zinco. O perfil protéico das amostras de plasma seminal, soro sangüíneo e do extrato de proteínas de membranas espermáticas foi determinado por eletroforese unidimensional em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Após a descongelação e avaliação computadorizada de motilidade e da integridade de membrana das amostras de sêmen congelado, os garanhões foram separados em três grupos estatisticamente distintos, de acordo com a motilidade total

The aim of the present study was to evaluate biochemical and proteic components of seminal plasma and blood serum and sperm membrane proteins, in order to correlate these findings and the quality of frozen-thawed semen in horses. For this, 22 animals of normal raw semen quality were submitted to semen and blood collection to obtain semen samples to freeze, samples of seminal plasma, samples of membrane proteins and samples of blood serum. To determine biochemical profile of seminal plasma and serum, dosages of glucose, chlorides, sodium, potassium, phosphorus, magnesium, cholesterol, albumin, total proteins, selenium and zinc were performed. Protein profiles of seminal plasma, blood serum and sperm membrane extracts were determined by one-dimensional electrophoresis in polyacrylamide gels (SDS-PAGE). After thawing and evaluation of computerized motility and membrane integrity of thawed semen samples, the stallions were separated into 3 statistically distinct groups, according to total motility of thawed semen, being so classified: good, medium and poor freezers. Biochemical analysis showed difference among three groups only on phosphorus levels, which was higher on poor freezers and was negatively correlated to semen freezability. Electrophoresis of seminal plasma revealed 29 protein bands, of which two (54,5kDa and 40,2kDa) were present in quantity significantly higher on poor freezers and eight were negatively correlated to semen freezability (170,9kDa, 62,2kDa, 54,5kDa, 40,2kDa, 35,2kDa, 19,5kDa, 16,5kDa and 15kDa). Serum electrophoresis revealed 18 protein bands and only one was different among groups (37,6kDa), being significantly lower in poor freezers. Five serum protein bands (124,2kDa, 92,1kDa, 73,9kDa, 37,6kDa and 34,6kDa) were positively correlated to semen freezability. Sperm membrane proteins electrophoresis showed 43 bands, of which three (28,5kDa, 26,3kDa and 21,1kDa) were positively correlated