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1.
Vet. Foco ; 16(2): 37-45, jan.-jun. 2019. graf
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-24104

Resumo

A Insuficiência Renal Crônica (IRC) em gatos geriátricos pode provocar alterações sistêmicas importantes no animal, levando desde o agravamento do quadro clínico até a evolução para o óbito, caso não seja diagnosticada e tratada adequadamente. A avaliação clínica e laboratorial da IRC pode auxiliar na melhor indicação de terapia de prevenção e manutenção, com o intuito de diminuir a velocidade de progressão da doença e alcançar uma melhor qualidade de vida. As lesões renais desencadeiam alterações orgânicas importantes, podendo ser manifestada nas mais diversas formas, como é o caso da anemia. Muitos gatos com lesão renal apresentam uma diminuição significativa nos parâmetros eritrocitários em decorrência da baixa ou parada na produção do hormônio eritropoietina sintetizado pelo rim. Quando uma falha na eritropoese é desencadeada pela doença renal, indica-se a reposição hormonal com eritropoietina recombinante humana para corrigir o processo da anemia. Portanto, o objetivo deste relato é mostrar os resultados obtidos com o uso da eritropoietina sintética na correção do processo de anemia arregenerativa, normocítica e normocrômica em gata geriátrica diagnóstica com IRC. Com o uso da eritropoetina, espera-se uma restauração dos valores normais nos parâmetros hematológicos (eritrócitos, hematócrito e hemoglobina) e consequentemente uma melhora no estado geral do animal.(AU)


Chronic Kidney Disease (CKD) in geriatric cats can cause important systemic changesin the animal, leading from worsening of the clinical condition to the evolution to death, if not diagnosed and treated properly. The clinical and laboratory evaluation of CKD can help to better indicate prevention and maintenance therapy, in order to reduce the rate of progression of the disease and achieve a better quality of life. Renal lesions trigger important organic changes, and canbe manifested in the most diverse forms, such as anemia. Many cats with renal damage present a significant decrease in erythrocyte parameters due to the low or stopped production of the hormone erythropoietin synthesized by the kidney. When a failure in erythropoiesis is triggered by renal disease, hormone replacement with recombinant human erythropoietin is indicated to correct the anemia process. Therefore, the objective of this report is to show the results obtained with the use of synthetic erythropoietin in the correction of the arregenerative, normocytic and normochromic anemia in a geriatric diagnostic cat with CKD. With the use of erythropoietin, normal values are expected to be restored in hematological parameters (erythrocytes, hematocrit and hemoglobin) and consequently an improvement in the general state of the animal.(AU)


Assuntos
Animais , Idoso , Gatos , Eritropoetina/uso terapêutico , Anemia/terapia , Anemia/veterinária , Insuficiência Renal Crônica/veterinária , Insuficiência Renal Crônica/complicações
2.
Vet. foco ; 16(2): 37-45, jan.-jun. 2019. graf
Artigo em Português | VETINDEX | ID: biblio-1502705

Resumo

A Insuficiência Renal Crônica (IRC) em gatos geriátricos pode provocar alterações sistêmicas importantes no animal, levando desde o agravamento do quadro clínico até a evolução para o óbito, caso não seja diagnosticada e tratada adequadamente. A avaliação clínica e laboratorial da IRC pode auxiliar na melhor indicação de terapia de prevenção e manutenção, com o intuito de diminuir a velocidade de progressão da doença e alcançar uma melhor qualidade de vida. As lesões renais desencadeiam alterações orgânicas importantes, podendo ser manifestada nas mais diversas formas, como é o caso da anemia. Muitos gatos com lesão renal apresentam uma diminuição significativa nos parâmetros eritrocitários em decorrência da baixa ou parada na produção do hormônio eritropoietina sintetizado pelo rim. Quando uma falha na eritropoese é desencadeada pela doença renal, indica-se a reposição hormonal com eritropoietina recombinante humana para corrigir o processo da anemia. Portanto, o objetivo deste relato é mostrar os resultados obtidos com o uso da eritropoietina sintética na correção do processo de anemia arregenerativa, normocítica e normocrômica em gata geriátrica diagnóstica com IRC. Com o uso da eritropoetina, espera-se uma restauração dos valores normais nos parâmetros hematológicos (eritrócitos, hematócrito e hemoglobina) e consequentemente uma melhora no estado geral do animal.


Chronic Kidney Disease (CKD) in geriatric cats can cause important systemic changesin the animal, leading from worsening of the clinical condition to the evolution to death, if not diagnosed and treated properly. The clinical and laboratory evaluation of CKD can help to better indicate prevention and maintenance therapy, in order to reduce the rate of progression of the disease and achieve a better quality of life. Renal lesions trigger important organic changes, and canbe manifested in the most diverse forms, such as anemia. Many cats with renal damage present a significant decrease in erythrocyte parameters due to the low or stopped production of the hormone erythropoietin synthesized by the kidney. When a failure in erythropoiesis is triggered by renal disease, hormone replacement with recombinant human erythropoietin is indicated to correct the anemia process. Therefore, the objective of this report is to show the results obtained with the use of synthetic erythropoietin in the correction of the arregenerative, normocytic and normochromic anemia in a geriatric diagnostic cat with CKD. With the use of erythropoietin, normal values are expected to be restored in hematological parameters (erythrocytes, hematocrit and hemoglobin) and consequently an improvement in the general state of the animal.


Assuntos
Animais , Idoso , Gatos , Anemia/terapia , Anemia/veterinária , Eritropoetina/uso terapêutico , Insuficiência Renal Crônica/complicações , Insuficiência Renal Crônica/veterinária
3.
R. Inst. Adolfo Lutz ; 74(4): 337-346, 2015. tab, graf
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-338145

Resumo

The recombinant human erythropoietin (rhEPO) is a glycoprotein hormone. In face of the broad range of rhEPO-containing products in the market, the scope of their therapeutic indication and the characteristics of the rhEPO users, the biological activity testing is of high relevance for their batches releasing process. The potency testing is a laboratory evaluation for assessing the effectiveness of the final product, recommended by the European Pharmacopoeia (Ph. Eur.). This paper aimed at evaluating the agreement between the biological activity results obtained when the strain of mice-B6D2F1, recommended by Ph. Eur., was used in comparison to the Swiss Webster (SW). Twenty-two batches were assayed using these two mice strains, and a total of 44 valid assays were obtained with satisfactory results. In none of these analyses, neither repeating assays nor results combination were needed. The inter-strains variation and the accuracy were evaluated, and the following results were detected: Coefficient of Variation (VC) 10 % and Relative Error % (RE) 10 %, respectively. The tested lineage provided homogeneous results, and no statistically significant difference between them was found. The SW strain might be used as an alternative in place of B6D2F1 for performing the biological potency evaluation of rhEPO.(AU)


A eritropoietina humana recombinante (rhEPO) é um hormônio glicoproteico. Diante da gama de produtos contendo rhEPO disponíveis no mercado, da abrangência da indicação terapêutica e das características dos usuários de rhEPO, o ensaio de atividade biológica é de grande importância para o processo de liberação de lotes deste produto. O teste de potência é uma avaliação laboratorial para averiguar a eficácia do produto final, recomendada pela Farmacopeia Europeia (Ph. Eur.). Este trabalho teve como objetivo avaliar a concordância entre os valores de potência biológica obtidos quando a linhagem de camundongos preconizada pela Ph. Eur. (B6D2F1) foi utilizada em comparação com a Swiss Webster (SW). Vinte e dois lotes foram testados usando-se estas duas linhagens, e 44 ensaios válidos foram obtidos com resultados satisfatórios. Em nenhuma das análises houve necessidade de efetuar repetição de ensaios, bem como a combinação de resultados. A variação entre linhagens e a veracidade foram avaliadas, obtendo-se os seguintes resultados: Coeficiente de Variação (CV) 10 %; Erro Relativo % (ER %) 10 %, respectivamente. As linhagens testadas geraram resultados homogêneos sem diferença estatisticamente significativa entre elas. A linhagem SW mostrou características adequadas para ser empregada como alternativa à linhagem B6D2F1 na avaliação da potência biológica de rhEPO.(AU)


Assuntos
Animais , Camundongos , Eritropoetina/análise , Bioensaio , Testes Laboratoriais , Linhagem , Vigilância Sanitária
4.
Arq. bras. med. vet. zootec ; 65(1): 75-81, 2013. graf, tab
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-9857

Resumo

Neste trabalho foi estudada a correlação entre o perfil proteico do plasma seminal e a motilidade e viabilidade espermática em coelhos submetidos ao tratamento com vetores de expressão contendo o gene da eritropoetina (EPO) e com EPO recombinante humana. Foram identificadas, em coelhos submetidos ao tratamento com vetor de DNA contendo o gene da EPO, duas bandas proteicas associadas a alterações na motilidade espermática - 48kDa à baixa motilidade (P<0,05) e 18kDa à alta motilidade (P<0,05) - e esse fator foi associado a maior viabilidade espermática (P<0,05). Em coelhos submetidos ao tratamento com EPO recombinante, um fator proteico, 63kDa, associou-se à alta motilidade espermática (P<0,05), enquanto dois, 26 e 40kDa, foram associados à alta viabilidade espermática (P<0,05). Esses resultados sugerem que o doping genético pode ocasionar mudanças no perfil proteico do plasma seminal, provocando alterações na motilidade e viabilidade espermática.(AU)


In this study the correlation between seminal plasma protein profile and the sperm motility and sperm viability in rabbits submitted to treatment with an expression vector containing EPO gene and with human recombinant EPO was evaluated. In rabbits submitted to treatment with EPO expression vector, two protein bands were associated to sperm motility - 48kDa associated to low motility (P<0.05) and 18kDa to high motility (P<0.05) - and this protein band was also associated to high sperm viability (P<0.05). In rabbits submitted to treatment with human recombinant EPO, a protein factor, 63kDa, was associated to high sperm motility (P<0.05) while two protein factors, 26 and 40kDa, were associated to high sperm viability (P<0.05). These results suggest that gene doping leads to changes in rabbit seminal plasma protein, altering sperm motility and sperm viability.(AU)


Assuntos
Animais , Coelhos , Análise do Sêmen/veterinária , Eritropoetina/análise , Eritropoetina/fisiologia , Miostatina/análise , Sêmen/imunologia , Sêmen/parasitologia , Coelhos/genética , Reprodução , Medicina Veterinária
5.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-207732

Resumo

O zebrafish representa um importante candidato, apresentando alta homologia genética com seres humanos e respostas, porém, são poucas as informações sobre seus mecanismos eritropoiéticos frente ao e leucopoiéticos. Assim o presente estudo buscou investigar o efeito da administração exógena de eritropoietina e da dexametasona sobre a resposta hematopoiética e leucocitária durante estímulo inflamatório através da indução de aerocistite infecciosa. Para isto, realizou-se indução de aerosciste através de inóculo de A. hydrophila, seguida da aplicação por via subcutânea de dexametasona (DEX) na dose de 25µg por unidade animal e 2UI de eritropoietina recombinante humana (EPO), constituindo os seguintes tratamentos: CC+ = não tratada com EPO e não tratado com DEX (n=10); DEX+= não tratada com EPO e tratada com DEX (n=10); EPO+ = tratada com EPO e não tratada com DEX (n=10); EPO/DEX+= tratada com EPO e tratada com DEX (n=10) e PF= (padrão fisiológico) onde os animais não receberam nenhuma medicação e não foi induzido a aeroscistite (n=10). para posterior coleta sanguínea e do exsudato inflamatório da bexiga natatória no período de 2 e 4 dias após inoculação (2DPI e 4DPI) e contagem eritrocitária total, contagem de reticulócitos, leucocitária total, diferencial leucocitário e contagem total e diferencial celular do exsudato da bexiga natatória. Na análise dos dados obtidos, observou-se um aumento geral dos parâmetros eritrocitários e de reticulócitos nos grupos EPO+ e DEX+, bem como leucocitários no grupo EPO+, o que indica possível resposta eritropoiética e leucopoiética positiva proveniente do uso da EPO. Na análise leucocitária foi possível observar também significante redução de valor total, granulócitos, monócitos e linfócitos nos grupos de tratamento com uso de DEX, indicando um presente efeito imunossupressor derivado do uso do glicocorticoide na espécie, demonstrando efeitos similares à mamíferos da EPO e da DEX.


Zebrafish represents an important candidate, presenting high genetic homology with humans and answers, however, there is little information about its erythropoietic mechanisms against leukopoietic. Thus the present study sought to investigate the effect of exogenous administration of erythropoietin and dexamethasone on the hematopoietic and leukocyte response during inflammatory stimulation through the induction of infectious aerocystitis. For this, an aerosol induction was performed through A. hydrophila inoculum, followed by subcutaneous application of dexamethasone (DEX) at the dose of 25 g per animal and 2UI of recombinant human erythropoietin (EPO), constituting the following treatments: CC + = untreated with EPO and not treated with DEX (n = 10); DEX + = untreated with EPO and treated with DEX (n = 10); EPO + = treated with EPO and not treated with DEX (n = 10); EPO / DEX + treated with EPO and treated with DEX (n = 10) E And PF = (physiological standard) where the animals received no medication and were not induced to aerosctitis (n = 10), for subsequent blood collection and inflammatory exudate of the swimming bladder at 2 and 4 days after inoculation (2DPI and 4DPI) and total erythrocyte count, reticulocyte count , Total leukocytes, differential leukocytes, and total and differential cell count of the swim bladder exudate. In the analysis of the obtained data, a general increase of erythrocyte and reticulocyte parameters in the EPO + and DEX + groups was observed, as well as leukocytes in the EPO + group, indicating a positive erythropoietic and leukopoietic response from EPO use. In the leukocyte analysis, it was also possible to observe a significant reduction of total value, granulocytes, monocytes and lymphocytes in the treatment groups with DEX, indicating a present immunosuppressive effect derived from glucocorticoid use in the species, demonstrating similar effects to the EPO and DEX mammals .

6.
São Paulo; s.n; 24/02/2011.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-5090

Resumo

Para produção de biofármacos protéicos, como a eritropoietina recombinante humana (EPOrh), são necessárias alterações pós-traducionais adequadas que garantam a sua especificidade e atividade biológica. Essas características são obtidas apenas em biorretores baseados em células eucarióticas, como as da glândula mamária. Sistemas baseados nesse tipo celular, tanto in vivo quanto in vitro, já são utilizados para produção estratégica e viável de proteínas recombinantes biologicamente ativas. Assim, tanto o estabelecimento de novas linhagens de células mamárias que apresentem boa expressão protéica quanto o desenvolvimento de sistemas in vivo que utilizem a estrutura da glândula mamária para essa produção de proteínas recombinantes são de grande valia. O presente trabalho teve como objetivo comparar dois métodos de estabelecimento de uma cultura de células de glândula mamárias ovinas, enzimático e não enzimático, e verificar sua capacidade de expressão das proteínas do leite β-lactoglobulina, α-caseína, β-caseína e κ-caseína mediante o tratamento com SFB (soro fetal bovino) ou SOL (soro de ovelha lactante), na presença ou não de Matrigel. Para isso, foi realizado um experimento in vitro, no qual foi estabelecido o cultivo celular até a passagem 12 (P12) de duas linhagens celulares: digerida (LD) e não digerida (LND). Para a LD na P12 foi observado apenas um tipo celular, o qual era positivo para a marcação com vimentina. Essa linhagem apresentou expressão gênica de β-caseína e β-lactoglobulina apenas quando tratada com meio de cultivo acrescido de SFB, sendo a expressão inferior (P=0,001) ao grupo da LND submetido ao mesmo tratamento. Já a LND, quando tratada com meio adicionado com SFB expressou κ-caseína além da β-caseína e β-lactoglobulina. A troca do SFB do meio de cultivo por SOL aumentou a expressão gênica de β-lactoglobulina (P=0,001) para ambas linhagens. Foi realizada a curva de crescimento para LD e LND na P12 com o meio de cultivo acrescido com SFB ou SOL. Para a LND observou-se o efeito do meio na velocidade de crescimento celular, sendo que foi maior para o grupo tratado com SFB (P<0,05). Para a LD, não ocorreu o efeito do meio na velocidade de crescimento celular (P>0,05), não sendo observada diferença com a LND tratada com SOL (P>0,05). A LND apresentou marcação positiva para a presença de vimentina e citoqueratina. Este trabalho visou, ainda, estabelecer um sistema de produção da EPOrh no leite de ovelhas não transgênicas pela técnica de infusão intra-mamária in vivo de dois plasmídeos diferentes e verificar a secreção qualitativa desta proteína por Western-blotting. Assim, foi feito um experimento in vivo no qual glândulas mamárias de ovelhas foram transfectadas com dois plasmídeos diferentes: ALAC (n=2), BGL (n=2) e controle negativo (n=2). Após a infusão dos plasmídeos, foi realizada a eletroporação de cada teto (3 choques de 500 volts com a duração de 15ms cada, sendo realizada a inversão da polaridade). Os animais foram ordenhados durante 20 dias após a transfecção, porém não foi possível detectar a presença de EPOrh nas amostras de leite analisadas. O limiar de detecção do teste utilizado foi de 67,5pg de EPOrh (Eritromax®) em leite controle negativo de ovelha. Concluindo, foi possível estabelecer o cultivo in vitro das LD e LND com capacidade de expressar proteínas do leite, sendo a expressão da β-lactoglobulina aumentada pelo tratamento com SOL. Ambas as linhagens apresentaram marcação positiva para vimentina, mas apenas LND para citoqueratina. Ainda, para o experimento in vivo, não foi possível detectar a expressão de EPOrh no leite das ovelhas transfectadas com os plasmídeos ALAC e BGL


Some post-translational modifications are necessary for the production of biopharmaceutical proteins, such as recombinant human erythropoietin (rhEPO), with a good specific action and a high biological activity. These modifications are obtained only by bioreactors based on eukaryotic cell as mammary cells. Bioreactors, in vivo or in vitro, with this kind of cell have been used for a viable and strategic production of biologically active recombinant proteins. For this reason, the establishment of a new line of mammary cells with high milk protein expression and the development of systems for production of recombinant proteins by the mammary gland in vivo are essential studies. One of the main objectives of this study was to compare two methods, enzymatic and non-enzymatic, to establish ovine mammary cells culture and verify their gene expression of milk proteins such as β-lactoglobulin, α-casein, β-casein and κ-casein with different treatments: LOS (lactating ovine serum) or FBS (fetal bovine serum) added to the culture medium, in the presence or absence of Matrigel®. In this manner, an in vitro study was performed and the culture of two lines were established, digested (DL) and non-digested (NDL), of ovine mammary cell until the passage 12 (P12). In DL was observed just one cellular type that was positive for staining with vimentin. This cell line expressed β-lactoglobulin and β-casein genes with the FBS treatment and without Matrigel. The gene expression was lower (P=0,001) when compared to the NDL under the same conditions of culture. Then, the NDL expressed β-lactoglobulin, β-casein and κ-casein genes when treated with FBS without Matrigel. The treatment with LOS in the culture medium increased the gene expression of β-lactoglobulin for both cell lines. The growth curve was determined with both cell lines in P12 with FBS or LOS treatment. For the NDL, the type of medium had effect on the cell growth speed and was highest with the FBS treatment (P<0,05). However, the medium did not have effect on growth speed of LD (P>0,05) and no difference was observed at the NDL treated with LOS (P>0,05). The NDL was positive for staining with vimentin and cytokeratin. The second main objective of this study was to establish an in vivo system for the production of rhEPO in milk of non-transgenic ewes by the intra-mammary infusion of two different plasmids and verify the qualitative milk secretion of this protein by western-blotting. In this way, in the in vivo experiment ovine mammary glands were transfected with two different plasmids: ALAC (n=2), BGL (n=2) and negative control (n=2). Each half udder was filled with plasmid solution and three 3 electric pulses of 500 volts were applied for 15ms each, followed by another three pulses with reversed polarity. The three animals were milked for 20 days after transfection, nevertheless it was not possible to identify rhEPO in any milk sample. The test threshold to identify rhEPO (Eritromax®) in milk from a negative control animal was 67,5pg. In conclusion, the in vitro culture of NDL and DL was established up to the P12 with expression of milk protein and the LOS treatment increased the expression of β-lactoglobulin. The two cell lines culture were positive for staining of vimentina but only NDL was positive for cytokeratin. In the in vivo experiment, rhEPO secretion was not detected in the milk from ewes transfected with ALAC and BGL plasmids

7.
São Paulo; s.n; 27/02/2009.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-5055

Resumo

Poteínas recombinantes simples, como a insulina e o hormônio de crescimento humano, podem ser produzidas em microorganismos como bactérias Entretanto, para a produção de proteínas que precisam de modificações pós-traducionais, que não se consegue em microorganismos, torna-se importante o uso de biorreatores com culturas de células eucarióticas. Este sistema de produção é caro e a quantidade de proteína produzida é pequena. Como alternativa surgiu o uso de animais transgênicos para reduzir os custos de produção. A Eritropoietina humana é uma proteina glicosilada e representa um dos maiores gastos para tratamento de doenças humanas. Já foi produzida em camundongos, coelhos e suínos transgênicos, com problemas na glicosilação ou alteração da higidez do animal pela falha da região promotora do vetor de transgene em limitar a expressão para a glâmdula mamária. Este estudo teve como objetivo a produção de (rhEPO) no leite de camundongas transgênicas sob ação de dois diferentes vetores, nunca utilizados na sua produção. Os vetores com os promotores da alfa-lactalbumina e beta-lactoglobulina bovinos tiveram o gene da eritropoietina humana inserido entre as regiões promotora e codificadora do leite, num processo trabalhoso e pouco eficiente. Não foi possível inserir os vetores serão nas células tronco-embrionárias (CTE) de camundongos (USP-1) por eleroporação, mas as condições (390V por 80µs) foram testadas com vetor de fluorescência. Futuramente as CTE transgênicas serão agregadas aos embriões colhidos de camundongas superovuladas e após 24 horas de cultivo in vitro serão transferidos para camundongas pseudo-gestantes. Os animais nascidos (quimeras) serão acasalados e seus descendentes terão o DNA analisado para verificar a presença do gene da eritropoietina humana. Os animais positivos (fundadores) serão acasalados e as fêmeas positivas nascidas serão acompanhadas quanto à produção da eritropoietina humana no leite. Será purificada do leite, quantificada e avaliada quanto a glicosilação por Western Blottin


Recombinant proteins such as insulin and human growth hormone can be produced by microorganisms. Although, to produce proteins that need pos-traductional modifications that can not be done by microorganisms, and a eucariotic cell bioreactor is needed. This production system is expensive and the amount of protein produced is low. As an alternative, the transgenic animal technology came up to reduce production fees. The human eritropoetin is a glicosilated protein and it is one of the most expensive to human treatment. It was already produced in transgenic mice, rabbit and swine but with glicosilation problems or health alterations by transgene vectors promoter region failure that limits the expression on mammary gland. This study aimed to produce recombinant human erythropoetin (rhEPO) in transgenic mice milk by two different vectors, never had been used to produce it before. Vectors with bovine alpha-lactalbumin and beta-lactoglobulin promoters had the human erythropoetin gene inserted between promoter and milk coding regions by a hard working and low efficiency technique. It was not possible to insert our vectors on mice embryonic stem cells (ESC) (USP-1) by electroporation but its conditions (390V, 80µs) were tested with fluorescent vector. In the future, transgenic ESC will be aggregated into mice embryos and after 24 hours of in vitro culture will be transferred to pseudo-pregnant mices. The new borns (chimera) will be mated and its offspring will have their DNA evaluated to verify the human eritropoetin gene occurrence. The founder animals will be also mated and the positive female borned will be evaluated for human erythrpoetin production on milk. It will be purified, quantified and evaluated for glicosilation by western blottin techinique

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