Productive and reproductive performance of crossbred dairy heifers with induced lactation and efficacy of antimicrobial therapy associated with internal teat sealants / Desempenho produtivo e reprodutivo de novilhas com lactação induzida e eficácia da terapia antimicrobiana associada com selante interno de tetos

This study evaluated (a) the efficacy of an association between injectable antibiotic therapy and sealant (ATBS) on milk yield (MY), somatic cell count (SCC), and prevalence of intramammary infections (IMI); and (b) the efficacy of gonadotropin-releasing hormone (GnRH) on follicular cyst (FCs) resolution (cyclicity at the 45th day in milk; DIM) and cumulative pregnancy rate (CPR) in heifers submitted to a lactation induction protocol (LIP). A total of 114 crossbred (Holstein × Jersey) heifers, with 34.7 ± 4.8 months and 439 ± 56.35 kg were submitted to LIP. On the 5th day of the LIP, the heifers were assigned to (i) ATBS (n = 57) with 7 mg/kg of norfloxacin associated with sealant and (ii) Control 1 (n = 57; CONT1) with no treatments. Lactation began on the 21st day of LIP and the 15th DIM, FCs were diagnosed and 106 heifers were randomized into two treatment groups with 53 heifers each: (i) GnRH (5 mL injectable GnRH) and (ii) Control 2 (CONT2; no treatment). Of the 114 heifers initially induced, 83.33% (n = 95) responded to LIP with an average MY of 15.19 kg/milk/day during 22 weeks of lactation. In the first 14 DIM, the IMI prevalence was 18% and 28% for heifers ATBS and CONT1 treated, respectively. Additionally, coagulase-negative Staphylococcus was the most frequently isolated group of pathogens. Mammary quarters that received ATBS treatment had a lower risk of IMI and SCC than CONT1. The cyclicity at 45 DIM was 68% (ATBS) and 35% (CONT1), and 57% and 46% for animals in the GnRH and CONT2. CPR was 60% in the ATBS group and 89% in CONT1, but GnRH treatment did not affect the CPR. In conclusion, LIP was effective in stimulating MY in heifers, and the IMI prevalence decreased with ATBS treatment. Also, the use of GnRH did not affect the FC regression, cyclicity at 45 DIM, and CPR.(AU)

Este estudo avaliou a (i) eficácia da associação entre antibioticoterapia injetável e selante interno de tetos (ATBS) na produção de leite (PL), contagem de células somáticas (CCS), e prevalência de infecções intramamárias (IIM); e (ii) eficácia do hormônio liberador de gonadotrofina (GnRH) na resolução de cistos foliculares (CFs), ciclicidade ao 45º dia em lactação (DEL) e taxa de prenhez cumulativa (TPC) em novilhas submetidas a um protocolo de indução de lactação (PIL). Um total de 114 novilhas mestiças (Holandês × Jersey), com 34,7 ± 4,8 meses e 439 ± 56,35 kg foram submetidas ao PIL. No 5º dia do PIL, as novilhas receberam: (i) ATBS (n = 57) com 7 mg/kg de norfloxacina associada ao selante interno de tetos e (ii) Controle 1 (n = 57; CONT1) sem tratamento. A lactação teve início no 21º dia do PIL e no 15º DEL, foram diagnosticados CFs e 106 novilhas foram agrupadas em dois grupos de tratamento com 53 novilhas em cada: (i) GnRH (5 mL de GnRH injetável) e (ii) Controle 2 (CONT2; sem tratamento). Das 114 novilhas inicialmente induzidas, 83,33% (n = 95) responderam ao PIL com PL média de 15,19 kg/leite/d durante 22 semanas de lactação. Nos primeiros 14 DEL a prevalência de IIM foi de 18% e 28% para as novilhas tratadas com ATBS e CONT1, respectivamente. Além disso, estafilococos coagulase negativa foram o grupo de patógenos mais frequentemente isolados. Quartos mamários tratados com ATBS tiveram menor risco (0,56) de IIM e menor CCS do que CONT1. A ciclicidade a 45 DEL foi de 68% (ATBS) e 35% (CONT1), e 57% e 46% para os animais no GnRH e CONT2. A TPC foi de 60% no grupo ATBS e 89% no CONT1, porém o tratamento com GnRH não afetou a TPC. Em conclusão, o PIL foi eficaz em estimular a PL em novilhas tardias e a prevalência de IIM diminiuiu com o tratamento ATBS. Além disso, o uso de GnRH não afetou a regressão de CF, ciclicidade em 45 DEL e a TPC.(AU)

Valvular endocarditis associated with Helcococcus ovis in a cow in Southern Brazil / Endocardite vegetativa associada à Helcococcus ovis em uma vaca no Sul do Brasil

A 4-year-old cow with a history of breathing difficulty, progressive weight loss, and muffled heart sound was treated for a period of two weeks, but died and underwent necropsy examination. Macroscopic examination revealed heart with vegetative proliferative lesion firmly adhered to pulmonary valve, lungs with marked consolidation, and the presence of thrombus in vessels. There were grade II ulcers in abomasal mucosa associated to blood clots. Microscopic examination revealed marked thickening of the pulmonary valve due to the proliferation of fibrous connective tissue, inflammatory neutrophil infiltration, fibrin deposition, and a significant number of coccoid basophilic bacteria. Septic thromboemboli were present in the large and small pulmonary blood vessels suggestive of embolic pneumonia. The bacterial culture of the valve showed growth of small, nonhemolytic colonies that demonstrated satellitism to coagulase-negative staphylococci contaminating colonies, which were subjected to 16S gene sequencing and were compatible with Helcococcus ovis in GenBank. This was the first report of H. ovis endocarditis in cattle in South America.(AU)

Um bovino, fêmea, 4 anos com histórico de dificuldade respiratória, perda de peso progressiva e som cardíaco abafado, foi tratado por um período de duas semanas, porém veio a óbito e foi submetido a exame de necropsia. No exame macroscópico, notou-se coração com lesão proliferativa vegetativa firmemente aderida em valva pulmonar, pulmões com consolidação acentuada, e presença de trombos no interior de vasos. Havia ainda úlcera abomasal grau II em mucosa associada a coágulo sanguíneo. No exame microscópico notou-se acentuado espessamento da valva pulmonar por proliferação de tecido conjuntivo fibroso, infiltrado inflamatório de neutrófilos, deposição de fibrina e acentuado número de miríades bacterianas basofílicas cocoides. Tromboembolia séptica foi vista no interior de vasos pulmonares de pequeno e médio calibre, sugestivo de pneumonia embólica. Em cultivo bacteriano da valva notou-se crescimento de colônias pequenas, não hemolíticas que demonstravam satelitismo a colônias contaminantes de estafilococos coagulase negativa, essas foram submetidas ao sequenciamento do gene 16S e foram compatíveis com Helcococcus ovis no GenBank. Este foi o primeiro relato de endocardite por H. ovis em bovino na América do Sul.(AU)

Detection of the mecA gene in Staphylococcus spp. isolated from the nasal cavity of pigs - Preliminary data / [Detecção do gene mecA em Staphylococcus spp. isolados da cavidade nasal de suínos - dados preliminares]

O objetivo deste estudo foi realizar a caracterização genética de Staphylococcus spp. resistentes a meticilina isolados de suínos. Foram coletadas 30 amostras de swab nasal de suínos, abatidos em um frigorífico com Serviço de Inspeção Federal. Os isolados foram submetidos a análises macro e microscópicas que, em seguida, para detectar a resistência bacteriana, foram submetidos a ensaios fenotípicos da sensibilidade aos antimicrobianos. Posteriormente, as amostras resistentes a oxacilina, foram submetidas à reação em cadeia pela polimerase (PCR) para verificar a presença do gene mecA. Das 30 amostras analisadas, foram isolados 12 (40%) Staphylococcus spp. coagulase positiva, e 18 (60%) coagulase negativa, e, dentre os isolados, 26 (86,66%) foram resistentes a oxacilina sendo possível detectar o gene mecA em seis (23%) amostras. Este estudo evidencia a presença de genes de resistência em microrganismos comuns a microbiota de animais de produção que podem ser transmitidos ao homem. Além de chamar a atenção para a frequência e quantidade de antimicrobianos aos quais estes animais são expostos durante toda sua vida, podendo ser considerado um problema para a saúde única.(AU)

Detection of the mecA gene in Staphylococcus spp. isolated from the nasal cavity of pigs - Preliminary data / [Detecção do gene mecA em Staphylococcus spp. isolados da cavidade nasal de suínos - dados preliminares]

O objetivo deste estudo foi realizar a caracterização genética de Staphylococcus spp. resistentes a meticilina isolados de suínos. Foram coletadas 30 amostras de swab nasal de suínos, abatidos em um frigorífico com Serviço de Inspeção Federal. Os isolados foram submetidos a análises macro e microscópicas que, em seguida, para detectar a resistência bacteriana, foram submetidos a ensaios fenotípicos da sensibilidade aos antimicrobianos. Posteriormente, as amostras resistentes a oxacilina, foram submetidas à reação em cadeia pela polimerase (PCR) para verificar a presença do gene mecA. Das 30 amostras analisadas, foram isolados 12 (40%) Staphylococcus spp. coagulase positiva, e 18 (60%) coagulase negativa, e, dentre os isolados, 26 (86,66%) foram resistentes a oxacilina sendo possível detectar o gene mecA em seis (23%) amostras. Este estudo evidencia a presença de genes de resistência em microrganismos comuns a microbiota de animais de produção que podem ser transmitidos ao homem. Além de chamar a atenção para a frequência e quantidade de antimicrobianos aos quais estes animais são expostos durante toda sua vida, podendo ser considerado um problema para a saúde única.(AU)

Caracterização fenotípica pela técnica de MALDI-TOF de Staphylococcus coagulase negativa isolados de mastite bovina em rebanhos leiteiros do Sul de Minas Gerais / Phenotypic characterization by the MALDI-TOF technique of Staphylococcus coagulase negative isolated from bovine mastitis in dairy herds of the South of Minas Gerais

O objetivo deste trabalho foi identificar espécies de Staphylococcus coagulase negativa em leite de vacas leiteiras com mastite por testes fenotípicos e pela técnica de MALDI-TOF MS. Foram utilizadas 85 isolados de estafilococos provenientes de leite de vacas com mastite. Todos os isolados foram caracterizados fenotipicamente por avaliação da morfologia das colônias, coloração de Gram, testes de oxidase, catalase e coagulase. Posteriormente, foram analisados os espectros de proteínas gerados no MALDI-TOF MS, seguida pela separação e detecção de íons pelo tempo de voo (TOF).Foram identificadas sete espécies, sendo a de maior ocorrência S. chromogenes 65 (76%), seguida por, S. hyicus 5 (6%), S. epidermidis 4 (5%).A técnica de MALDI-TOF demonstrou-se efetiva na caracterização de espécies de Staphylococcus causadores de mastite bovina.(AU)

Caracterização fenotípica pela técnica de MALDI-TOF de Staphylococcus coagulase negativa isolados de mastite bovina em rebanhos leiteiros do Sul de Minas Gerais / Phenotypic characterization by the MALDI-TOF technique of Staphylococcus coagulase negative isolated from bovine mastitis in dairy herds of the South of Minas Gerais

O objetivo deste trabalho foi identificar espécies de Staphylococcus coagulase negativa em leite de vacas leiteiras com mastite por testes fenotípicos e pela técnica de MALDI-TOF MS. Foram utilizadas 85 isolados de estafilococos provenientes de leite de vacas com mastite. Todos os isolados foram caracterizados fenotipicamente por avaliação da morfologia das colônias, coloração de Gram, testes de oxidase, catalase e coagulase. Posteriormente, foram analisados os espectros de proteínas gerados no MALDI-TOF MS, seguida pela separação e detecção de íons pelo tempo de voo (TOF).Foram identificadas sete espécies, sendo a de maior ocorrência S. chromogenes 65 (76%), seguida por, S. hyicus 5 (6%), S. epidermidis 4 (5%).A técnica de MALDI-TOF demonstrou-se efetiva na caracterização de espécies de Staphylococcus causadores de mastite bovina.

Etioligia de las mastitis: participación de microorganismos de la clase Mollicutes / Etiology of mastitis: participation of mocroorganisms of the class Mollicutes / Etiologia das mastites: pesquisa de micro-organismos da classe Mollicutes

La mastitis es la principal afección del ganado destinado a la producción lechera, que pesa el productor y la industria láctea. En el primer caso por la pérdida en cuanto a la producción, y en el segundo por el menor rendimiento industrial de los derivados lácteos. Es una enfermedad multifactorial, de múltiple etiología, incluyendo microorganismos como bacterias, virus, hongos, levaduras y algas. Entre los microorganismos bacterianos se destacan los estafilococos coagulosa-positivos (SCP) y la negativa (SCN), siendo el principal Staphylococcus aureus y varias especies de SCN, todas caracterizadas como contagiosas, además de Corynebacterium bovis. Con una elevada contagiosidad se tiene Mycoplasma spp., Con destaque para M. bovis importante patógeno en otros países, sin embargo, menos estudiado en Brasil. El objetivo del presente estudio fue evaluar la presencia de bacterias de la clase Mollicutes, en muestras de leche bovina con mastitis clínica, a partir de técnicas moleculares. De las 170 muestras de leche evaluadas, procedentes de cuatro propiedades lecheras de pequeño porte de la región de Botucatu, no fue posible detectar la presencia de Mollicutes.(AU)

Mastitis is the main disease of livestock destined for dairy production, which affects the dairy producer and the dairy industry. In the first case the loss of production, and the second because of the lower industrial yield of dairy products. It is a multifactorial, multiple etiology, including microorganisms such as bacteria, viruses, fungi, yeasts and algae. Staphylococcus aureus and several species of SCN, all characterized as contagious, in addition to Corynebacterium bovis, are prominent among bacterial microorganisms (SCP) and negative (SCN) staphylococci. Mycoplasma spp. Is highly contagious, with M. bovis being an important pathogen in other countries, but less studied in Brazil. The objective of the present study was to evaluate the presence of bacteria of the class Mollicutesin samples of bovine milk with clinical mastitis, based on molecular techniques. Of the 170 milk samples evaluated, from four small dairy farms in the Botucatu region, it was not possible to detect the presence of Mollicutes.(AU)

A mastite é a principal afecção do gado destinado à produção leiteira, que onera o produtor e a indústria de laticínios. No primeiro caso pela perda quanto a produção, e no segundo pelo menor rendimento industrial dos derivados lácteos. É uma enfermidade multifatorial, de múltipla etiologia, incluindo micro-organismos como bactérias, vírus, fungos, leveduras e algas. Entre os micro-organismos bacterianos ganham destaque os estafilococos coagulase-positivas (SCP) e negativa (SCN), sendo o principal Staphylococcus aureus e várias espécies de SCN, todas caracterizadas como contagiosos, além de Corynebacterium bovis. Com elevada contagiosidade tem-se Mycoplasma spp., com destaque para M. bovis importante patógeno em outros países, entretanto, menos estudado no Brasil. O objetivo do presente estudo foi avaliar a presença de bactérias da classe Mollicutes, em amostras de leite bovino com mastite clinica, a partir de técnicas moleculares. Das 170 amostras de leite avaliadas, procedentes de quatro propriedades leiteiras de pequeno porte da região de Botucatu, não foi possível detectar a presença de Mollicutes.(AU)

Etioligia de las mastitis: participación de microorganismos de la clase Mollicutes / Etiology of mastitis: participation of mocroorganisms of the class Mollicutes / Etiologia das mastites: pesquisa de micro-organismos da classe Mollicutes

La mastitis es la principal afección del ganado destinado a la producción lechera, que pesa el productor y la industria láctea. En el primer caso por la pérdida en cuanto a la producción, y en el segundo por el menor rendimiento industrial de los derivados lácteos. Es una enfermedad multifactorial, de múltiple etiología, incluyendo microorganismos como bacterias, virus, hongos, levaduras y algas. Entre los microorganismos bacterianos se destacan los estafilococos coagulosa-positivos (SCP) y la negativa (SCN), siendo el principal Staphylococcus aureus y varias especies de SCN, todas caracterizadas como contagiosas, además de Corynebacterium bovis. Con una elevada contagiosidad se tiene Mycoplasma spp., Con destaque para M. bovis importante patógeno en otros países, sin embargo, menos estudiado en Brasil. El objetivo del presente estudio fue evaluar la presencia de bacterias de la clase Mollicutes, en muestras de leche bovina con mastitis clínica, a partir de técnicas moleculares. De las 170 muestras de leche evaluadas, procedentes de cuatro propiedades lecheras de pequeño porte de la región de Botucatu, no fue posible detectar la presencia de Mollicutes.

Mastitis is the main disease of livestock destined for dairy production, which affects the dairy producer and the dairy industry. In the first case the loss of production, and the second because of the lower industrial yield of dairy products. It is a multifactorial, multiple etiology, including microorganisms such as bacteria, viruses, fungi, yeasts and algae. Staphylococcus aureus and several species of SCN, all characterized as contagious, in addition to Corynebacterium bovis, are prominent among bacterial microorganisms (SCP) and negative (SCN) staphylococci. Mycoplasma spp. Is highly contagious, with M. bovis being an important pathogen in other countries, but less studied in Brazil. The objective of the present study was to evaluate the presence of bacteria of the class Mollicutesin samples of bovine milk with clinical mastitis, based on molecular techniques. Of the 170 milk samples evaluated, from four small dairy farms in the Botucatu region, it was not possible to detect the presence of Mollicutes.

A mastite é a principal afecção do gado destinado à produção leiteira, que onera o produtor e a indústria de laticínios. No primeiro caso pela perda quanto a produção, e no segundo pelo menor rendimento industrial dos derivados lácteos. É uma enfermidade multifatorial, de múltipla etiologia, incluindo micro-organismos como bactérias, vírus, fungos, leveduras e algas. Entre os micro-organismos bacterianos ganham destaque os estafilococos coagulase-positivas (SCP) e negativa (SCN), sendo o principal Staphylococcus aureus e várias espécies de SCN, todas caracterizadas como contagiosos, além de Corynebacterium bovis. Com elevada contagiosidade tem-se Mycoplasma spp., com destaque para M. bovis importante patógeno em outros países, entretanto, menos estudado no Brasil. O objetivo do presente estudo foi avaliar a presença de bactérias da classe Mollicutes, em amostras de leite bovino com mastite clinica, a partir de técnicas moleculares. Das 170 amostras de leite avaliadas, procedentes de quatro propriedades leiteiras de pequeno porte da região de Botucatu, não foi possível detectar a presença de Mollicutes.

Comparison phenotypic and genotypic identification of Staphylococcus species isolated from bovine mastitis / Comparação da identificação fenotípica e genotípica de espécies do gênero Staphylococcus isoladas de mastite bovina

In addition to Staphylococcus aureus nowadays other coagulase-positive staphylococci (CoPS) and coagulase-negative staphylococci (CoNS), earlier considered of minor importance, are now accepted as relevant pathogens for humans and animals. The involvement of these microorganisms in bovine mastitis etiology and the possibility their transmission through milk to humans justify the requirement of developing reliable methods for identification of the most frequent species among them. The purpose of this study was to compare the phenotypic techniques with the genotypic method carried out by sequencing of the rpoB gene in identification of several species of the genus Staphylococcus isolated from bovine mastitis. A total of 300 staphylococci isolates of bovine mastitis cases from several Brazilian dairy herds were studied by phenotypic and genotypic techniques, respectively: 150 CoPS and 150 CoNS strains. A total of 18 CoNS different species and 4 CoPS species were identified. Among the CoNS the following species were recognized: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2.7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auricularis, 1(70%) S. saprophyticus subsp. bovis, 1(0.7%) S. capitis. And among the 150 CoPS were identified respectively: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%) S. intermedius e 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considering the 150 CoNS isolates, the identifications performed by phenotypic and genotypic tests presented 96.7% of concordance, kappa coefficient of agreement = 0.933, SE (standard error) of kappa=0.021 (95% confidence interval: 0.893 to 0.974), Pearson's correlation coefficient (r) = 0.9977, (confidence interval 95%: 0.9938 a 0.9992) and in relation to 150 CPS isolates it was detected an agreement of 98.7%, kappa = 0.960, SE of kappa = 0.016, (95% confidence interval: 0.929 to 0.992) Pearson's correlation coefficient (r) = 0.9994 (95% confidence interval: 0.9681 to 1.0000). The verified agreement strength between the identification methods can be considered as excellent. These results assure that according to laboratory resources any of them will be suitable to perform the staphylococci identification.(AU)

Além de Staphylococcus aureus atualmente outros estafilococos coagulase positiva (SCP) e estafilococos coagulase-negativos (SCN), anteriormente considerados de menor relevância, são reconhecidos como importantes patógenos para humanos e animais. O envolvimento desses micro-organismos na etiologia da mastite bovina e a possibilidade da sua transmissão através do leite aos humanos justifica a utilização de métodos confiáveis para a identificação das espécies mais frequentes. O objetivo deste estudo foi comparar as técnicas fenotípicas com o método genotípico realizada por sequenciamento do gene rpoB na identificação de espécies do gênero Staphylococcus spp. isolados de mastite bovina. Um total de 300 estafilococos isolados de casos de mastite bovina em diferentes rebanhos leiteiros brasileiros foram estudados por técnicas fenotípicas e genotípicas, respectivamente: 150 linhagens de SCP e 150 linhagens de SCN. Foram identificados um total de 18 espécies de SCN e 4 espécies SCP. Entre os SCN as seguintes espécies identificadas: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22 (15%) S. epidermidis, 20 (13%) S. hyicus, 10 (7%) S. xylosus, 7 (5%) S. haemolyticus, 6 (4%) S. simulans, 6 (4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6 (4%) S. hominis, 5 (3%) S. pasteuri, 4 (2,7%) S. cohnii, 3 (2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3 (2%) S. chromogenes, 3 (2%) S. sciuri, 2 (1%) S. saccharolyticus, 2 (1%) S. lugdunensi, 1 (0,7%) S. auricularis, 1 (70 %) S. saprophyticus subsp. bovis, 1 (0,7%) S. capitis. E entre as 150 SCP foram identificados, 105 (70%) S. aureus, 21 (14%), S. hyicus, 19 (13%) S. intermedius e 5 (3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considerando-se os 150 SCN isolados, as identificações realizadas por testes fenotípicos e genotípicos apresentaram 96,7% de concordância, coeficiente de concordância kappa = 0,933, SE (erro padrão) de kappa = 0,021 (95% intervalo de confiança: 0,893-0,974), coeficiente de correlação de Pearson (r) = 0,9977, (intervalo de confiança de 95%: 0,9938 a 0,9992) e em relação a 150 SCP isolados foi observado uma concordância de 98,7%, kappa = 0,960, sE de kappa = 0,016, (95% de intervalo de confiança: 0,929 a 0,992) coeficiente de correlação de Pearson (r) = 0,9994 (95% intervalo de confiança: 0,9681-1,0000). A correlação entre os métodos de identificação pode ser considerada como excelente. Esses resultados demonstraram que de acordo com os recursos disponíveis no laboratório, poderia ser utilizada qualquer uma das metodologias.(AU)

Comparison phenotypic and genotypic identification of Staphylococcus species isolated from bovine mastitis / Comparação da identificação fenotípica e genotípica de espécies do gênero Staphylococcus isoladas de mastite bovina

In addition to Staphylococcus aureus nowadays other coagulase-positive staphylococci (CoPS) and coagulase-negative staphylococci (CoNS), earlier considered of minor importance, are now accepted as relevant pathogens for humans and animals. The involvement of these microorganisms in bovine mastitis etiology and the possibility their transmission through milk to humans justify the requirement of developing reliable methods for identification of the most frequent species among them. The purpose of this study was to compare the phenotypic techniques with the genotypic method carried out by sequencing of the rpoB gene in identification of several species of the genus Staphylococcus isolated from bovine mastitis. A total of 300 staphylococci isolates of bovine mastitis cases from several Brazilian dairy herds were studied by phenotypic and genotypic techniques, respectively: 150 CoPS and 150 CoNS strains. A total of 18 CoNS different species and 4 CoPS species were identified. Among the CoNS the following species were recognized: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2.7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auricularis, 1(70%) S. saprophyticus subsp. bovis, 1(0.7%) S. capitis. And among the 150 CoPS were identified respectively: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%) S. intermedius e 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considering the 150 CoNS isolates, the identifications performed by phenotypic and genotypic tests presented 96.7% of concordance, kappa coefficient of agreement = 0.933, SE (standard error) of kappa=0.021 (95% confidence interval: 0.893 to 0.974), Pearsons correlation coefficient (r) = 0.9977, (confidence interval 95%: 0.9938 a 0.9992) and [...](AU)

Além de Staphylococcus aureus atualmente outros estafilococos coagulase positiva (SCP) e estafilococos coagulase-negativos (SCN), anteriormente considerados de menor relevância, são reconhecidos como importantes patógenos para humanos e animais. O envolvimento desses micro-organismos na etiologia da mastite bovina e a possibilidade da sua transmissão através do leite aos humanos justifica a utilização de métodos confiáveis para a identificação das espécies mais frequentes. O objetivo deste estudo foi comparar as técnicas fenotípicas com o método genotípico realizada por sequenciamento do gene rpoB na identificação de espécies do gênero Staphylococcus spp. isolados de mastite bovina. Um total de 300 estafilococos isolados de casos de mastite bovina em diferentes rebanhos leiteiros brasileiros foram estudados por técnicas fenotípicas e genotípicas, respectivamente: 150 linhagens de SCP e 150 linhagens de SCN. Foram identificados um total de 18 espécies de SCN e 4 espécies SCP. Entre os SCN as seguintes espécies identificadas: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22 (15%) S. epidermidis, 20 (13%) S. hyicus, 10 (7%) S. xylosus, 7 (5%) S. haemolyticus, 6 (4%) S. simulans, 6 (4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6 (4%) S. hominis, 5 (3%) S. pasteuri, 4 (2,7%) S. cohnii, 3 (2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3 (2%) S. chromogenes, 3 (2%) S. sciuri, 2 (1%) S. saccharolyticus, 2 (1%) S. lugdunensi, 1 (0,7%) S. auricularis, 1 (70 %) S. saprophyticus subsp. bovis, 1 (0,7%) S. capitis. E entre as 150 SCP foram identificados, 105 (70%) S. aureus, 21 (14%), S. hyicus, 19 (13%) S. intermedius e 5 (3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considerando-se os 150 SCN isolados, as identificações realizadas por testes fenotípicos e genotípicos apresentaram 96,7% de concordância, coeficiente de concordância kappa = 0,933, SE (erro padrão) de [...](AU)

Avaliação da qualidade de carnes embutidas comercializadas no Sertão paraibano

Os produtos cárneos prontos para consumo são bastante consumidos pela população brasileira, com isso pode representar um risco para a saúde dos consumidores caso microrganismos patogênicos estejam presentes, geralmente em virtude de más condições de higiene durante o processamento e manipulação destes produtos. Além disso, estes alimentos podem funcionar como disseminadores de microrganismos com resistência antimicrobiana. Dessa forma, buscou-se analisar a qualidade microbiológica de produtos cárneos (salsicha e mortadela) no varejo, determinar a resistência antimicrobiana fenotípica e genotípica dos isolados, e investigar a presença de genes de enterotoxinas. Para isso, esta tese foi composta por três capítulos. No Capítulo I foi realizada metanálise de dados da literatura com o objetivo de estimar a prevalência de Listeria monocytogenes em uma variedade de produtos cárneos brasileiros. Um total de 29 publicações de cinco bancos de dados, publicados entre 2009 e 2019, foram incluídos no estudo. A prevalência combinada de L. monocytogenes em produtos cárneos no Brasil foi elevada, com uma maior prevalência para carnes cruas e suínas, e pertencentes ao comércio e região Sudeste. No Capítulo II, objetivou-se apresentar os resultados da qualidade microbiológica de produtos cárneos vendidos em supermercados e minimercados localizados nas cidades de Patos, Sousa, Princesa Isabel e Itaporanga, PB, Brasil. Um total de 60 amostras (30 salsichas e 30 mortadelas) foram coletadas e submetidas a avaliação de coliformes totais e termotolerantes, estafilococos coagulase positiva (CoPS), Escherichia coli, Salmonella spp., Listeria monocytogenes e Clostridium perfringens. Além disso, as colônias isoladas foram submetidas à identificação por MALDI-TOF MS. A contagem média de coliformes totais e termotolerantes foi de 1,9 ± 1,5 e 1,6 ± 1,5 log NMP/g, respectivamente. E. coli foi detectada em 6 (10%) amostras. Todas as amostras foram negativas para estafilococos coagulase positiva, Salmonella, Listeria e C. perfringens. Os gêneros mais frequentes identificados no MALDI-TOF foram Klebsiella, Enterobacter e Staphyloccoccus coagulase negativa. No Capítulo III, procurou-se determinar a ocorrência de resistência antimicrobiana e genes codificadores de enterotoxinas em Staphylococcus spp. isolados de produtos cárneos (mortadela e salsicha) comercializados no Sertão da Paraíba, Brasil. Foram isoladas 15 cepas de Staphylococcus coagulase negativa (CoNS) classificados como S. saprophyticus (n = 8), S. warneri (n = 2), S. hominis (n = 2), S. epidermidis (n = 1), S. pausteri (n = 1) e S. capitis (n = 1) por MALDI TOF MS. Os isolados foram testados quanto à resistência a ampicilina, amoxicilina/ác. clavulânico, ceftazidima, gentamicina, cloranfenicol, norfloxacina, meropenem, oxacilina, tetraciclina e vancomicina pelo método de disco difusão. A presença dos genes de resistência mecA, blaZ, femA e icaD e de enterotoxinas clássicas sea, seb, sec, sed e see foi analisada por PCR. Foi observada a ocorrência de resistência antimicrobiana nos isolados CoNS, principalmente S. saprophyticus, com altas taxas de resistência contra ampicilina e oxacilina; foram detectados altos índices de isolados com a presença de mecA, blaZ e femA; e foi verificada a presença de genes de enterotoxinas clássicas sea e sec nos isolados.

Ready-to-eat meat products are widely consumed by the Brazilian population, which may represent a risk to consumers' health if pathogenic microorganisms are present, usually due to poor hygiene conditions during the processing and handling of these products. In addition, these foods can act as disseminators of microorganisms with antimicrobial resistance. Thus, we sought to analyze the microbiological quality of meat products (sausage and mortadella) in retail, determine the phenotypic and genotypic antimicrobial resistance of the isolates, and investigate the presence of enterotoxin genes. For this, this thesis was composed of three chapters. In Chapter I, a meta-analysis of literature data was carried out in order to estimate the prevalence of L. monocytogenes in a variety of Brazilian meat products. A total of 29 publications from five databases, published between 2009 and 2019, were included in the study. The combined prevalence of Listeria monocytogenes in meat products in Brazil was high, with a higher prevalence for raw and pork meat, and belonging to the market and the Southeast region. In Chapter II, the objective was to present the results of the microbiological quality of meat products sold in supermarkets and mini-markets located in the cities of Patos, Sousa, Princesa Isabel and Itaporanga, PB, Brazil. A total of 60 samples (30 sausages and 30 mortadellas) were collected and subjected to evaluation of total and thermotolerant coliforms, coagulase positive staphylococci (CoPS), Escherichia coli, Salmonella spp., Listeria monocytogenes and Clostridium perfringens. In addition, isolated colonies were subjected to identification by MALDI-TOF MS. The average count of total and thermotolerant coliforms was 1.9±1.5 and 1.6±1.5 log MPN/g, respectively. E. coli was detected in 6 (10%) samples. All samples were negative for coagulase positive staphylococci, Salmonella, Listeria and C. perfringens. The most frequent genera identified in the MALDI-TOF were Klebsiella, Enterobacter and Staphyloccoccus coagulase negative. In Chapter III, we sought to determine the occurrence of antimicrobial resistance and genes encoding enterotoxins in Staphylococcus spp. isolated from meat products (mortadella and sausage) marketed in the Sertão da Paraíba, Brazil. Fifteen strains of coagulase negative Staphylococcus (CoNS) were classified as S. saprophyticus (n = 8), S. warneri (n = 2), S. hominis (n = 2), S. epidermidis (n = 1), S pausteri (n = 1) and S. capitis (n = 1) by MALDI TOF MS. The isolates were tested for resistance to ampicillin, amoxicillin/acid. clavulanic, ceftazidime, gentamicin, chloramphenicol, norfloxacin, meropenem, oxacillin, tetracycline and vancomycin by the disc diffusion method. The presence of the mecA, blaZ, femA and icaD resistance genes and classic sea, seb, sec, sed and see enterotoxins was analyzed by PCR. The occurrence of antimicrobial resistance was observed in CoNS isolates, mainly S. saprophyticus, with high rates of resistance against ampicillin and oxacillin; high levels of isolates were detected with the presence of mecA, blaZ and femA; and the presence of classical enterotoxin genes sea and sec was verified in the isolates.

Microbiological analysis and sensitivity profile of Staphylococcus spp. in subclinical mastitis of dairy goats / Análise microbiológica e perfil de sensibilidade do Staphylococcus spp. em mastite subclínica de caprinos leiteiros

Subclinical mastitis in goats causes economic losses and risks to public health. Given the need for research that shows the most isolated staphylococci species and sensibility tests comparing the resistance between coagulase-negative (CNS) and positive Staphylococcus (CPS) goats with subclinical mastitis, the aim of this study was to identify the microorganisms isolated from milk samples of goats with subclinical mastitis, as well as define the staphylococci species and determine the sensitivity profile of Staphylococcus spp. to antimicrobials. To collect samples, tests were performed for mug of black background and California mastitis test (CMT), collecting milk from CMT positive animals. A total of 226 samples from seven herds of dairy goats was collected and forwarded to the laboratory, where they were seeded for the isolation of the microorganism and implementing the antibiotic sensibility test. Of these, 122 samples had bacterial growth and the most isolated staphylococci species were: S. epidermidis (24.55%), S. lugdunensis (15.40%) and S. intermedius (13.64%). Samples showed increased resistance to antimicrobials: penicillin (81.8%), oxacillin (60.0%) and ampicillin (55.5%). Greater sensitivity to: enrofloxacin (99.1%), erythromycin (98.2%), gentamicin (98.2%) and vancomycin (98.2%) were observed. The S. epidermidis showed higher antimicrobial resistance to amoxicillin and penicillin than S. lugdunensis and S. intermedius. Similar resistance in vitro between CNS and CPS was observed to most antimicrobials. It is important to control the overuse of antibiotics to prevent the emergence of resistant strains.(AU)

A mastite subclínica em caprinos acarreta prejuízos econômicos e riscos à saúde pública. Tendo em vista a necessidade de pesquisas que demonstrem as espécies de estafilococos mais isoladas e os testes de sensibilidade que comparem a resistência entre Staphylococcus coagulase negativa (SCN) e positiva (SCP) de cabras com mastite subclínica, os objetivos do presente estudo foram identificar os microrganismos isolados de amostras de leite de cabras com mastite subclínica, bem como definir as espécies de estafilococos e determinar o perfil de sensibilidade de Staphylococcus spp. aos antimicrobianos. Para realizar a coleta das amostras, foram executados os testes da caneca de fundo preto e California mastitis test (CMT) com o leite dos animais reagentes ao CMT. Coletaram-se 226 amostras provenientes de sete rebanhos de caprinos leiteiros, as quais foram encaminhadas para o laboratório, onde foram semeadas para o isolamento do microrganismo e a realização do teste de antibiograma. Dessas amostras, 122 tiveram crescimento bacteriano e as espécies mais isoladas de estafilococos foram: S. epidermidis (24,55%), S. lugdunensis (15,40%) e S. intermedius (13,64%). As amostras apresentaram maior resistência aos antimicrobianos penicilina (81,8%), oxacilina (60,0%) e ampicilina (55,5%). Observou-se maior sensibilidade para enrofloxacina (99,1%), eritromicina (98,2%), gentamicina (98,2%) e vancomicina (98,2%). O S. epidermidis apresentou maior resistência antimicrobiana para a amoxicilina e a penicilina do que o S. lugdunensis e o S. intermedius. Foi verificada uma resistência in vitro semelhante entre os estafilococos coagulase negativa e positiva para a maioria dos antimicrobianos testados. É importante o controle do uso abusivo de antimicrobianos para evitar o surgimento de cepas resistentes.(AU)

Atividade antibacteriana do extrato vegetal de jambu (Spilanthes acmella) em isolados de Staphylococcus spp. de amostras de leite de bovinos

No Brasil, o genero Staphylococcus spp e considerado como o principal agente causal da mastite bovina. Diversos estudos apontam que tanto a bacteria S. aureus, como os estafilococos de coagulase-negativa alem de serem os mais frequentes e encontrados na mastite, apresentam aumento crescente no padrao de resistencia a antimicrobianos, de caracteristica oportunista, acarretam em infeccoes intramamarias e diminuem a qualidade do leite. Uma das alternativas encontradas para auxiliar na reducao dos custos e, principalmente, para minimizar os processos de resistencia microbiologica e a utilizacao de agentes fitoterapicos (ou derivados destes) como agentes adjuvantes terapeuticos. Dentre estas potencias alternativas terapeuticas encontramos o Jambu (Spilanthes acmella), planta rica em isobutilamidas bioativas. Devido a presenca desta substancia, a planta possui aplicacao tradicional em produtos farmaceuticos, alimentos e produtos para a saude e cuidados pessoais. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos antibacterianos do extrato vegetal de Jambu em isolados de Staphylococcus spp. provenientes de amostras de leite bovino. Para este proposito foram coletadas 60 amostras de leite de vacas de municipios do interior do Estado do Amazonas. Estas amostras foram feitas a deteccao, contagem e confirmacao de Staphylococcus spp e, a partir destas, o teste de concentracao inibitoria minima do extrato vegetal de Jambu. Como resultados, Das 60 amostras de leite, foi possivel obter colonias caracteristicas de Staphylococcus spp. de 56 (93,3%) amostras. Destas, foram obtidas 56 cepas, sendo 19 (33,9%) caracterizadas como Staphylococcus aureus e 37 (66,1%) como Staphylococcus spp. Todas as 56 cepas apresentaram algum nivel de sensibilidade ao extrato vegetal de Jambu, desde a diluicao inicial (concentracao de 20%) ate a diluicao final (0,039%). Em nosso estudo obtivemos uma alta percentagem de isolamento (93,3%) de Staphylococcus spp das amostras, com 33,9% representando Staphylococcus aureus e 66,1% de estafilococus coagulase-negativa. Neste cenario, verificamos que o extrato vegetal de Jambu provocou inibicao no crescimento de Staphylococcus spp. isolados de amostras de leite bovina, em todas as concentracoes testadas, exceto a ultima (a 0,0195%). Para os isolados com concentracao inibitoria menor os efeitos, em sua maioria, se comportaram como bacteriostatico, ao passo que para isolados com concentracao inibitoria maiores o efeito foi similar ao bactericida. Acreditamos que essas diferencas em efeitos possam estar ligadas a diferentes niveis de sensibilidade dos isolados.

In Brazil, the genus Staphylococcus spp is considered as the main causal agent of bovine mastitis. Several studies indicate that both S. aureus bacteria and coagulase-negative staphylococci, in addition to being the most frequent and found in mastitis, have an increasing pattern of resistance to antimicrobials, which are opportunistic, leading to intramammary infections and decreasing milk quality. One of the alternatives found to help reduce costs and, mainly, to minimize the processes of microbiological resistance is the use of phytotherapeutic agents (or derivatives thereof) as therapeutic adjuvant agents. Among these potential therapeutic alternatives, we find Jambu (Spilanthes acmella), a plant rich in bioactive isobutyl amides. Due to the presence of this substance, the plant has traditional applications in pharmaceutical products, food, and products for health and personal care. Thus, the objective of this work was to evaluate the antibacterial effects of the Jambu plant extract in isolates of Staphylococcus spp. from bovine milk samples. For this purpose, 60 milk samples were collected from cows from municipalities in the interior of the State of Amazonas. These samples were made for the detection, counting, and confirmation of Staphylococcus spp and, from these, the minimum inhibitory concentration test of the Jambu plant extract. As a result, Of the 60 milk samples, it was possible to obtain colonies characteristic of Staphylococcus spp. of 56 (93.3%) samples. Of these, 56 strains were obtained, of which 19 (33.9%) were characterized as Staphylococcus aureus and 37 (66.1%) as Staphylococcus spp. All 56 strains showed some level of sensitivity to the Jambu plant extract, from the initial dilution (20% concentration) to the final dilution (0.039%). In our study, we obtained a high percentage of isolation (93.3%) of Staphylococcus spp from the samples, with 33.9% representing Staphylococcus aureus and 66.1% of coagulase-negative staphylococcus. In this scenario, we found that the Jambu plant extract inhibited the growth of Staphylococcus spp. isolated from bovine milk samples, in all tested concentrations, except the last one (at 0.0195%). For isolates with a lower inhibitory concentration, the effects, for the most part, behaved as bacteriostatic, whereas for isolates with a higher inhibitory concentration the effect was similar to the bactericide. We believe that these differences in effects may be linked to different levels of sensitivity of the isolates.

Celularidade do leite e Unidades Formadoras de Colônias nas mastites causadas por Staphylococcus coagulase positiva e coagulase negativa / Milk cellularity and colony forming units in mastitis caused by coagulase-positive staphylococci and coagulase negative

A mastite é a principal afecção do gado destinado à produção leiteira, que impacta significativamente a cadeia produtiva do leite, com reflexos ainda para a saúde pública. Estudou-se aspectos relacionados à etiologia, celularidade e de contagem bacteriana em 10 propriedades leiteiras, localizadas no Estado de São Paulo. Foram examinadas 1148 vacas em lactação, totalizando 4584 glândulas mamárias. Foram considerados os casos, em que houve isolamento de estafilococos coagulase positiva (SCP) e estafilococos coagulase negativa (SCN). Os resultados revelaram microbiota com vários patógenos e diferentes espécies de SCN (128 casos) e SCP (45), Staphylococcus aureus(90), Streptococcus agalactiae(70), Streptococcus dysgalactiae (69), Streptococcus uberis(29), Corynebacteriumspp. (230), Klebsiella pneumoniae(28), Klebsiella oxytoca(2), Escherichia coli(15), Enterobactersp. (3). Os resultados de contagem de células somáticas (CCS) relacionados aos SCP e SCN não mostraram diferenças entre as propriedades avaliadas, entretanto com diferenças significantes ao se avaliar a CCS entre os dois grupos de estafilococos, como pode ser evidenciado ao comparar SCN Discreto e SCP exuberante (P<0,01), SCP Discreto e SCP exuberante (P<0,001) e SCN moderado e SCP exuberante (P<0,01). A avaliação da CCS relacionada à intensidade da infecção, considerando-se como crescimento discreto o isolamento de até nove colônias, moderado de dez a 29 colônias e exuberante, com 30 ou mais colônias, revelou para ambos os grupos de estafilococos que quanto maior o número de unidades formadoras de colônias (UFC), a CCS é mais elevada, sendo sempre maior nos casos de SCP. Conclui-se que quando há maior número de UFC, há concomitantemente maior CCS/mL de leite, no caso dos SCP e SCN...(AU)

Mastitis is the main affection of cattle intended for dairy production, which significantly impacts the milk production chain, with consequences yet to public health. It was studied aspects related to etiology, cellularity and bacterial count in 10 dairy farms, in the State of São Paulo. There were examined 1148 milking cows, totaling 4584 mammary glands. Cases in which there was isolation coagulase positive staphylococci (CPS) and coagulase-negative staphylococci (CNS) were considered. The results showed microbiota with various different pathogens and CNS (128 cases) and CPS (45), Staphylococcus aureus (90), Streptococcus agalactiae (70), Streptococcus dysgalactiae (69), Streptococcus uberis (29), Corynebacterium spp . (230), Klebsiella pneumoniae (28), Klebsiella oxytoca (2), Escherichia coli (15), Enterobacter spp. (3). The somatic cell count (SCC) related to CPS and CNS showed no differences among the evaluated properties, although with significant differences when evaluating the SCC between both groups of staphylococci, as evidenced by comparing discreet CNS and exuberant CPS (P <0.01), discreet CPS and exuberant CPS (P <0.001) and moderate SCN and exuberant SCP (P <0.01). The evaluation of SCC was related to the intensity of infection, considering how slight growth isolation of up to nine colonies, moderate ten to 29 colonies and lush, with 30 or more colonies, revealed for both groups of staphylococci that the higher the number of colony forming units (CFU), SCC is higher being larger in cases of CPS. The results indicate that the importance of both CPS and CNS when considering the high occurrence of the evaluated properties and the fact that it raises the SCC, which compromises the quality of milk. We conclude that when there is a larger number of CFU, is concomitantly higher SCC/ml of milk, in the case of CPS and CNS, which shows a direct relationship of the intensity of the infectious process with the response of milk cellularity...(AU)

Beta-lactamase detection in Staphylococcus aureus and coagulase-negative Staphylococcus isolated from bovine mastitis / Detecção de beta-lactamase em Staphylococcus aureus e Staphylococcus coagulase negativa isolados de mastite bovina

The objectives of the study were to evaluate the presence/production of beta-lactamases by both phenotypic and genotypic methods, verify whether results are dependent of bacteria type (Staphylococcus aureus versus coagulase-negative Staphylococcus - CNS) and verify the agreement between tests. A total of 200 bacteria samples from 21 different herds were enrolled, being 100 CNS and 100 S. aureus. Beta-lactamase presence/detection was performed by different tests (PCR, clover leaf test - CLT, Nitrocefin disk, and in vitro resistance to penicillin). Results of all tests were not dependent of bacteria type (CNS or S. aureus). Several S. aureus beta-lactamase producing isolates were from the same herd. Phenotypic tests excluding in vitro resistance to penicillin showed a strong association measured by the kappa coefficient for both bacteria species. Nitrocefin and CLT are more reliable tests for detecting beta-lactamase production in staphylococci.(AU)

Os objetivos do presente estudo foram avaliar a presença/produção de beta-lactamases por ambos os métodos fenotípicos e genotípicos, verificar se os resultados são dependentes do tipo de bactéria (Staphylococcus aureus contra Staphylococcus coagulase negativa - CNS) e verificar a concordância entre os testes. Um total de 200 amostras bactérianas oriundas de 21 rebanhos distintos foram incluídos, sendo 100 CNS e 100 S. aureus. A presença/detecção de beta-lactamase foi realizada por diferentes testes (PCR, teste trevo (clover leaf test) - CLT, disco Nitrocefin e resistência in vitro à penicilina). Os resultados de todos os testes não foram dependentes do tipo de bactérias (CNS ou S. aureus). Vários isolados de S. aureus produtores de beta-lactamase eram de um mesmo rebanho. Testes fenotípicos excluindo resistência in vitro à penicilina mostraram uma forte associação medida pelo coeficiente kappa para ambas as espécies de bactérias. Nitrocefina e CLT são testes mais confiáveis para detectar a produção de beta-lactamase em estafilococos.(AU)

Produção in vitro de biofilme por Staphylococcus spp. isolados de salgadinhos e lanches / In vitro biofilm production by Staphylococcus spp. strains isolated from finger-foods and snacks

Staphylococcus aureus is one of the most important food-borne pathogens, and although Brazilian Sanitation Surveillance Agency (ANVISA) does not specifically regards for coagulase-negative Staphylococcus (CNS) isolation from foods, it is known that this group of bacteria possesses genes associated with biofilm formation and enterotoxins production. In this context, the present study aimedat identifying the S. aureus and CNS in finger-foods and snacks samples, and to evaluate the ability ofthese strains to produce biofilm in vitro by means of two methodologies: Congo Red agar and polystyrene microplates cultures. Twenty-two staphylococcal isolates belonging to eight species were obtained from 122 finger-foods, sandwiches and ready-to-eat (RTE) food products. S. aureus, S. warneri and S. haemolyticus were the most frequent isolates. Biofilm production by Staphylococcus spp. was observed in seven (31.8 %) isolates by Congo Red agar technique and three (13.6 %) by polyestirene microplate methodology. There was no positive isolate biofilm producer by both methodologies. Despite the low number of isolates, a concordance of 59.1 % between the tests was found. The ability to produce biofilm is an important virulence factor in Staphylococcus spp., and it can support to define the role of CNS as food-borne pathogen.(AU)

Staphylococcus aureus é um dos principais causadores de doenças de origem alimentar e, embora a Agência Nacional de Vigilância Sanitária ANVISA não contemple especificamente a detecção de estafilococos coagulase-negativa (ECN) em alimentos, sabe-se que este grupo de bactérias apresenta genes responsáveis pela formação de biofilme e produção de enterotoxinas. No presente estudo foram identificados os S. aureus e ECN em amostras de salgados, e sua capacidade de produzir biofilme in vitro foi avaliada por duas metodologias: ágar vermelho Congo e placa de microtitulação de poliestireno. Vinte e dois isolados de Staphylococcus pertencentes a oito diferentes espécies foram obtidos de 122 salgados, sanduíches e lanches. S. aureus, S. warneri e S. haemolyticus foram as espécies mais frequentemente isoladas. A produção de biofilme foi verificada em sete (31,8 %) isolados pela técnica de ágar vermelho Congo e em três (13,6 %) em placa de microtitulação. Nenhum isolado foi considerado positivo em ambas as metodologias. Apesar do baixo número de isolados, houve concordância de 59,1 % entre os testes. A capacidade de produzir biofilme é importante fator de virulência para Staphylococcus spp. e a detecção destes isolados de amostras de alimentos pode ajudar a definir o papel dos ECN como agentes patogênicos transmitidos por alimentos.(AU)

POTENCIAL DE VIRULÊNCIA RELACIONANDO A PRESENÇA DE RESISTÊNCIA AOS ANTIMICROBIANOS, GENES DE ENTEROTOXINAS E FORMAÇÃO DE BIOFILME DE Staphylococcus sp. ISOLADOS DO LEITE E QUEIJO ARTESANAL SERRANO

Os estafilococos são frequentemente associados a surtos de intoxicações alimentares. Dentre os alimentos envolvidos nesses surtos encontram-se o leite e seus derivados, principalmente, queijos produzidos de forma artesanalmente e com leite cru. Este trabalho objetivou identificar os Staphylococcus coagulase positiva (CoPS), verificar o potencial enterotoxigênico através da pesquisa dos genes codificadores de enterotoxinas estafilocócicas (sea, seb, sec, sed e see), verificar a capacidade de produzir biofilme através do Ágar Vermelho Congo (CRA), identificar a ocorrência dos genes icaA, icaC e icaD, caracterizar fenotipicamente o perfil de resistência à antimicrobianos e detectar molecularmente a presença de genes resistência aos fármacos beta-lactâmicos (mecA e blaZ) e dos genes mecC e femA em cepas de Staphylococcus sp. Para este estudo foram testadas 58 isolados de Staphylococcus coagulase positiva e 46 isolados de Staphylococcus coagulase negativa (CoNS), totalizando 104 cepas bacterianas, isoladas do leite (33 isolados) e de seus respectivos queijos (71 isolados) artesanais serrano, produzidos na região serrana de Santa Catarina. A técnica de multiplex PCR foi utilizada para a pesquisa dos genes sea, seb, sec, sed, see, icaA, icaC, icaD, mecA, mecC, blaZ e femA. A produção fenotípica de biofilme foi realizada pelo cultivo bacteriano em Ágar Vermelho Congo (CRA). Das 58 cepas de CoPS analisadas 64% foram identificadas fenotípica e genotipicamente como S. aureus. Oito cepas CoPS isoladas do leite apresentaram o gene seb e uma cepa oriunda do queijo foi positiva para o gene sea. Nenhum gene para as SEs foi detectado nas cepas de CoNS. Quanto ao potencial em formar biofilme das cepas CoPS, 53% (31/58) foram positivas para o gene icaA isoladamente, 5% (3/58) apresentaram somente o gene icaD e 27% (16/58) apresentaram ambos os genes icaA e icaD. Em relação aos CoNS 100% das amostras foram positivas para o gene icaA e 9% (4/46) apresentaram, simultaneamente, os genes icaA e icaD. Quanto ao teste do CRA, 64% (67/104) cepas de Staphylococcus spp. foram positivas e destas 7% (5/67) não apresentaram nenhum dos genes icaA, icaD e icaC testados. Para a detecção do perfil de resistência 103 cepas foram submetidas ao teste de susceptibilidade a antimicrobianos, no qual observou-se maiores índices de resistência contra a PEN (41% CoPS) e (31% CoNS), AMO (40% CoPS), AMP (36% CoPS) e SUT (35% CoNS). Vinte e sete (26%) cepas (18 CoPS e 9 CoNS) demosntraram perfil de multirresistência, sendo resistentes a pelo menos três diferentes classes dos antimicrobianos testados. Observou-se ausência dos genes mecC em todas as cepas, 12 cepas (9 CoPS e 3 CoNS) foram positivas para mecA e 10 cepas (4 CoPS e CoNS) positivas para blaZ. A alta prevalência de Staphylococcus aureus, a presença de genes codificadores de enterotoxinas, genes formadores de biofilme e genes de resistência a antimicrobianos, bem como, a presença de cepas resistentes e multirresistentes evidenciam o potencial de virulência dos CoPS e CoNS, destacando a importância de serem seguidas rigorosamente as boas práticas de fabricação do alimento. Ademais, estes resultados destacam um risco para clínica veterinária e para a saúde pública, uma vez que, esses genes de resistência podem ser transferidos ao homem e/ou aos animais, dificultando ou até mesmo impossibilitando o tratamento de doenças potencialmente curáveis.

Staphylococi are often associated with outbreaks of food poisoning. Among the foods involved in these outbreaks are milk and its derivatives, mainly, cheeses produced by handmade and with raw milk. This work aimed to identify Coagulase positive Staphylococcus (CoPS), to verify the enterotoxigenic potential by investigating the genes coding for staphylococcal enterotoxins (sea, seb, sec, sed and see), verify the ability to produce biofilm through Congo Red Agar (CRA), to identify the occurrence of icaA, icaC and icaD genes, phenotypically characterize the antimicrobial resistance profile and molecularly detect the presence of resistance genes to beta-lactam drugs (mecA and blaZ) and the mecC and femA genes in strains of Staphylococcus spp. For this study, 58 strains of Staphylococcus coagulase positive and 46 strains of Staphylococcus coagulase negative (CoNS) were tested, totalizing 104 bacterial strains, isolated from milk (33 isolates) and their respective handmade serrano cheeses (71 isolates), produced in the mountain region of Santa Catarina Santa. The multiplex PCR technique was used for the search of the genes sea, seb, sec, sed, see, icaA, icaC, icaD, mecA, mecC, blaZ and femA. Phenotypic biofilm production was performed by bacterial culture in Congo Red Agar (CRA). Of the 58 CoPS strains analyzed, 64% were identified phenotypically and genotypically as S. aureus. Eight strains CoPS isolated from the milk showed the seb gene and one strain from the cheese was positive for the sea gene. No gene for SEs was detected in the strains of CoNS. As for the biofilm formation potential of the CoPS strains, 53% (31/58) were positive for the icaA gene alone, 5% (3/58) presented only the icaD gene and 27% (16/58) presented both icaA and icaD genes. In relation to the CoNS, 100% of the samples were positive for the icaA gene and 9% (4/46) presented the icaA and icaD genes simultaneously. Regarding the CRA test, 64% (67/104) strains of Staphylococcus spp. were positive and of these 7% (5/67) did not present any of the icaA, icaD and icaC genes tested. For the detection of the resistance profile, 103 strains were submitted to the antimicrobial susceptibility test, in which higher resistance indices were observed against PEN (41% CoPS) and (31% CoNS), AMO (40% CoPS), AMP (36% CoPS) e SUT (35% CoNS). Twenty-seven (26%) strains (18 CoPS and 9 CoNS) demonstrated a multiresistance profile and were resistant to at least three different classes of antimicrobials tested. Absence of mecC was observed in all strains, 12 strains (9 CoPS and 3 CoNS) were positive for mecA and 10 strains (4 CoPS and 6 CoNS) positive for blaZ. The high prevalence of Staphylococcus aureus, the presence of enterotoxin encoding genes, biofilm forming genes and antimicrobial resistance genes, as well as the presence of resistant and multiresistant strains show the potential for virulence of CoPS and CoNS, highlighting the importance of strict adherence to good food manufacturing practices. In addition, these results highlight a risk for veterinary clinics and public health, since these resistance genes can be transferred to humans or animals, making it difficult or even impossible to treat potentially curable diseases.

Capacidade de resistência à fagocitose e atividade bactericida de neutrófilos por distintas cepas de estafilococos associadas à mastite em vacas primíparas e multíparas.

Estafilococos coagulase negativa (ECN) são frequentemente isolados de quartos mamários com mastite subclínica, ápice do teto e ambiente. Os fatores espécie-específicos associados à esta infecção ainda não foram identificados e a susceptibilidade difere entre vacas e quartos. Diante disto, foi comparada a viabilidade, produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e fagocitose de neutrófilos sanguíneos frente à distintas cepas de estafilococos, entre vacas em lactação. Até onde se sabe, não existem relatos na literatura sobre esta investigação na espécie alvo, ou seja, bovinos sendo este o principal objetivo deste estudo. Foram utilizadas doze vacas sadias (seis primíparas e seis multíparas) em terço médio de lactação e 50 cepas de estafilococos (38 ECN e doze Staphylococcus aureus) isoladas de diferentes nichos ecológicos. O valor de P < 0.05 foi considerado significativo. Os resultados demonstraram que não houve diferença estatística na viabilidade de neutrófilos (P = 0.55), produção de ERO (P = 0.12) e atividade funcional dos fagócitos (P = 0.33) entre primíparas e multíparas. Foram observadas diferenças estatísticas (P < 0.05) entre os grupos de patógenos de espécies e nichos ecológicos distintos, ao serem comparados com isolados de S. aureus, provenientes de infecção intramamária persistente, considerados padrão. Conclui-se que a variação substancial epidemiológica entre os ECN resulta no surgimento de diferentes perfis de infecção intramamária. Portanto, tem que se é por fatores inerentes aos patógenos.

Coagulase negative staphylococci (CNS) are often isolated from mammary quarters with subclinical mastitis, teat apex and environment. The species-specific factors associated with this infection have not yet been identified and the susceptibility differs between cows and quarters. In view of this, the viability, reactive oxygen species production (ROS) and blood neutrophil phagocytosis were compared to different strains of staphylococci among lactating cows. As far as is known, there are no reports in the literature about this research in the target species, that is, cattle - this being the main objective of this study. Twelve healthy cows (six primiparous and six multiparous) were used in the middle third of lactation and 50 strains of staphylococci (38 CNS and 12 Staphylococcus aureus) isolated from different ecological niches. The value of P < 0.05 was considered significant. The results showed that there was no statistical difference in the viability of neutrophils (P = 0.55), ROS production (P = 0.12) and phagocyte functional activity (P = 0.33) between primiparous and multiparous. Statistical differences (P < 0.05) were observed between groups of species pathogens and distinct ecological niches when compared to isolates of S. aureus from persistent intramammary infection, considered standard. It is concluded that the substantial epidemiological variation among CNS results in the appearance of different profiles of intramammary infection. Therefore, it has to be whether it is due to factors inherent to pathogens

PERFIL FENOTÍPICO E GENOTÍPICO DA RESISTÊNCIA AOS ANTIMICROBIANOS EM KLEBSIELLA PNEUMONIAE, SALMONELLA ENTERICA E ESTAFILOCOCOS COAGULASE-NEGATIVOS ISOLADOS DE ANIMAIS DOMÉSTICOS E PACIENTES HUMANOS

A resistência antimicrobiana é um problema comumente encontrado em medicina humana e veterinária. Agentes como Klebsiella pneumoniae, Salmonella enterica e estafilococos coagulase-negativa (ECN) são alvo de pesquisas na detecção e identificação de genes de resistência aos antimicrobianos. O presente estudo visou estabelecer o perfil de resistência fenotípico e genotípico em: (i) amostras de S. enterica isoladas de animais domésticos e pacientes humanos no Estado de São Paulo; (ii) amostras de K. pneumoniae isoladas de fezes e leite de bovinos leiteiros em rebanhos Brasileiros; e (iii) amostras de ECN isoladas de leite bovino de rebanhos leiteiros Canadenses. Ainda, estudar associações entre os respectivos perfis e a origem dos isolados, os diferentes sistemas de produção, os estratos de células somáticas do tanque, e estabelecer associações entre a utilização de antimicrobianos e resistência aos mesmos em isolados de ECN. Neste projeto, 166 isolados de K. pneumoniae oriundos de 24 propriedades leiteiras, 153 S. enterica oriundos de carcaças de frangos de corte e pacientes humanos e 1.859 amostras de ECN isoladas de leite de vacas em rebanhos Canadenses foram submetidos ao antibiograma e à detecção molecular de genes de resistência, associados ao respectivo perfil. Ainda, foram obtidas associações dos perfis de resistência com a origem dos isolados. No caso de S. enterica, resistência foi comumente observada para estreptomicina, tetraciclina, combinação de sulfametoxazol / trimetoprim e amoxicilina. Os genes mais comumente encontrados de acordo com estes perfis foram aadA, tetC, sul1 e blactx-m, sendo este, para nosso conhecimento, o primeiro relato do gene qnrB em S. enterica isolada de humanos no Brasil. Os perfis observados foram distintos em isolados humanos e animais corroborando com estudos prévios que demonstram diferentes mecanismos de resistência em medicina humana e veterinária, com o primeiro demonstrando maiores proporções de resistência para diversas drogas. Nos isolados de K. pneumoniae, foi detectada uma associação entre a origem do isolado (leite ou fezes) e a resistência para estreptomicina, cloranfenicol, tetraciclina e sulfametoxazol. Perfis multirresistentes foram observados apenas em isolados de origem clínica (leite mastítico). Os genes comumente encontrados incluíram tetD, tetB e sul2. Tratando-se de isolados de ECN, resistência às sulfonamidas foi o perfil mais comumente observado (18,65%) seguido pela penicilina, tetraciclina e eritromicina (11,95%, 11,29% e 6,5% respectivamente). Entre as Províncias Canadenses, Alberta apresentou a menor prevalência de resistência às sulfonamidas, apesar de a prevalência de isolados multirresistentes ter sido constante nas diferentes Províncias. Nos diferentes tipos de instalações, isolados de tie-stalls tiveram maior chance de serem multirresistentes em comparação com isolados de free-stall. A utilização de antimicrobianos foi associada à presença de isolados multirresistentes, especialmente no caso do cloranfenicol e macrolídeos. Os genes blaZ e mecA (beta-lactâmicos), str e aadE (aminoglicosídeos), ermA e ermC (macrolídeos), tetK e tetL (tetraciclinas) foram os mais comumente observados.

Antimicrobial resistance is a major concern in both human and veterinary medicine. Agents such as Klebsiella pneumoniae, Salmonella enterica and coagulase-negative Staphylococcus (CNS) are subject of researches involving detection and identification of antimicrobial resistance genes. The present study aimed to establish the phenotypic and genotypic resistance profile in: (i) S. enterica isolated from domestic animals and human patients from São Paulo State; (ii) K. pneumoniae isolated from bovine feces and milk in Brazilian dairy herds and; (iii) CNS samples isolated from lactating cows in Canadian dairy herds. Still, study associations between resistance profiles and different sources, barn types, bulk tank somatic cell count and to establish associations between antimicrobial usage and resistance in CNS. In this project, 166 K. pneumoniae isolates from 24 dairy farms, 153 S. enterica isolates originating from broiler carcasses and human patients and 1,859 CNS isolates from Canadian dairy herds were subjected to antimicrobial susceptibility tests and molecular detection of resistance genes according to the respective phenotypic profile. Still, associations between resistance profile and the origin of the isolates were determined. For S. enterica, non-susceptibility was commonly observed for streptomycin, tetracycline, sulfamethoxazole and amoxicillin. Genes commonly observed according to the distinct profiles were aadA, tetC, sul1 and blactx-m according to the respective profile. For our knowledge, this is the first report of the presence of qnrB gene in S. enterica isolated from human patients in Brazil. Profiles were distinct for human and animal isolates, with the first showing a higher proportion of non-susceptibility for several drugs. For K. pneumoniae isolates, it was observed an association between the source (milk; feces) and non-susceptibility for streptomycin, chloramphenicol, tetracycline and sulfamethoxazole. Multidrug resistance (MDR) was observed only for clinical mastitis isolates. Genes commonly observed included tetD, tetB and sul2. For CNS isolates, non-susceptibility to sulfonamides was the most commonly observed (18.65%) followed by penicillin, tetracycline and erythromycin (11.95, 11.29 and 6.5% of isolates tested, respectively). Alberta showed the lowest prevalence of sulfonamides non-susceptibility, although the prevalence of MDR isolates was constant across different Provinces. Samples from tie-stalls had higher odds of being MDR than samples from free-stalls. Antimicrobial usage was associated with the presence of MDR, especially for chloramphenicol and macrolides. blaZ and mecA (beta-lactams), str and aadE (aminoglycosides), ermA and ermC (macrolides), tetK and tetL (tetracyclines) genes were the most commonly observed.

AVALIAÇÃO DE TESTES DIAGNÓSTICO PARA MASTITE SUBCLÍNICA CAPRINA EM SOBRAL/CE

Atualmente existem testes diagnósticos eficientes que detectam a mastite subclínica em bovinos, porém, para caprinos os métodos ainda são controversos por apresentarem resultados falso-positivos, sendo necessário portanto, avaliação dos testes disponíveis para inferir confiabilidade ao diagnóstico da enfermidade. Foram coletadas amostras mensais durante seis meses, de 20 cabras das raças Saanen (n=9) e Anglo Nubiana (n=11). As coletas foram realizadas individualmente, por teto, totalizando 232 amostras de leite, nas quais foram realizadas pesquisa de Staphylococcus spp., teste de condutividade elétrica (CE), pesquisa do teor de cloretos, pH e a contagem de células somáticas (CCS) pelo método microscópico e eletrônico. Usou-se um delineamento inteiramente casualizado e as médias foram comparadas pelo Teste F a 5% para raças e Tukey a 5% para o período. Avaliou-se também a correlação entre as variáveis CCS microscópica e CCS eletrônica utilizando a correlação de Pearson, considerando-se um nível de significância de 5%. Um modelo de regressão linear foi usado para avaliar a concordância entre a CCS automática e microscópica. Para sensibilidade dos testes diagnósticos foi definida como a proporção dos verdadeiros positivos entre todos os doentes, a especificidade como a proporção dos verdadeiros negativos entre todos os sadios, e a eficiência ou acurácia como a proporção de acertos do teste diagnóstico. Foi possível observar correlação positiva entre os parâmetros CCS eletrônica e CCS microscópica de r=0,88 e associação de R2=0,77 (p=<0,0001). A CCS pelo método eletrônico superestimou 2,2 vezes a CCS microscópica. A CCS obtida pelo método microscópico utilizando o corante pyronina Y-verde de metila foi a mais confiável e os métodos de CCS analisados apresentam alta correlação linear crescente entre si. O teste CMT não é recomendado para o diagnóstico por apresentar sensibilidade de 61,1% e especificidade de 43%, considerados baixo. A CE acusou 100% dos animais verdadeiramente sadios, indicando que pode ser recomendado como prova de triagem para mastite subclínica. A prevalência de mastite subclínica causada por estafilococos coagulase-negativa foi de 8%. Os resultados encontrados para o teste de cloretos apresentaram sensibilidade de 88,8% e especificidade de 9,3%, das 210 amostras analisadas que apresentaram média superior a 0,221, 194 (92,0%) não apresentaram isolamento microbiológico, não sendo portanto eficiente em identificar cabras com mastite subclínica. O pH foi superior nas amostras com isolamento bacteriano, independente da raça.

Nowadays there are efficient tests that detect subclinical mastitis in bovine, but, for goats the diagnosis is still controversial to present false positive result, Therefore, it is necessary to evaluate the available tests to infer reliability to the diagnosis of the disease. Monthly samples were collected for six months, of 20 goats of the Saanen (n = 9) and Anglo Nubian (n = 11). The sample were performed individually, per ceiling, totaling 232 milk samples, in which were research of Staphylococcus spp., electrical conductivity test, content of chlorides, pH, somatic cell count (SCC) by the method microscopic and electronic. Has been used a completely randomized design and the average compared by test F 5% to race and Tukey 5% to period. Also evaluated the correlation between the variables SCC electronic and SCC microscopic using Pearson's correlation, considered a significance level of 5%. A linear regression model was used to evaluate the concordance between SCC electronic and microscopic. For the sensitivity of diagnostic tests was defined as the proportion of true positives among all sick, and specificity as the proportion of true negatives among all healthy, and the efficiency or accuracy as the proportion of the successes of diagnostic test. Was possible observed a positive correlation between the parameters SCC electronic and SCC microscopic of r=0,88 and association of R2=0,77; (p=<0,0001). The SCC by electronic method overestimated 2,2 times the SCC microscopic. The SCC by microscopic method using the dye pyronin-y methyl green was the most trusted and the methods of SCC analyzed showed high linear crescent correlation each other. The CMT test showed a sensitivity of 61.1% and specificity of 43%, not being recommended for the diagnosis of mastitis. The EC test showed 100% NPV, considered high value, that is, the test was able to identify 100% of truly healthy animals, indicating that it may be recommended screening for subclinical mastitis. The prevalence of subclinical mastitis caused by Staphylococcus coagulase-negative was 8%. The results found for the chlorides test showed sensitivity of 88.8% and specificity of 9.3%, the 210 analyzed samples that presented an average higher than 0.221, 194 (92.0%) didn't present microbiological isolation, being therefore not efficient in identifying goats with subclinical mastitis. the pH was higher in samples with bacterial isolation, independent of race.