Q fever and coxiellosis in Brazil: an underestimated disease? A brief review / Febre Q e coxielose no Brasil: uma doença subestimada? Uma breve revisão

Q fever, caused by the γ-proteobacterium Coxiella burnetii, is a zoonosis of great importance and global impact. This agent has high transmissibility and can spread over long distances via wind, in which a small number of aerosolized particles are needed to infect susceptible hosts. The clinical diagnosis of Q fever is difficult owing to the variety of clinical signs shared with other diseases. In Brazil, studies related to C. burnetii are constantly being conducted, and this review aims to increase the number of approaches already studied, leading to the following question: is Q fever an unknown, neglected disease, or does it have a focal occurrence in certain areas (exotic/rare) in the country?(AU)

A febre Q, causada pela γ-proteobactéria Coxiella burnetii, é uma zoonose de grande importância e impacto global. Este agente tem alta transmissibilidade e pode se espalhar por longas distâncias via vento, em que um pequeno número de partículas aerossolizadas são necessárias para infectar hospedeiros suscetíveis. O diagnóstico clínico da febre Q é difícil devido à variedade de sinais clínicos compartilhados com outras doenças. No Brasil, estudos relacionados à C. burnetii são constantemente realizados. Esta revisão visa aumentar o número de abordagens já estudadas, levando ao seguinte questionamento: a febre Q é uma doença desconhecida, negligenciada ou tem ocorrência focal em certas áreas (exóticas/raras) no país?(AU)

Serological occurrence for tick-borne agents in beef cattle in the Brazilian Pantanal / Ocorrência sorológica para agentes transmitidos por carrapatos em bovinos de corte no Pantanal Brasileiro

This study investigated the seropositivity for five different tick-borne agents, namely Anaplasma marginale, Babesia bovis, Babesia bigemina, Coxiella burnetii, Anaplasma phagocytophilum, and Trypanosoma vivax in beef cattle in the Brazilian Pantanal. The serum samples collected from animals (200 cows; 200 calves) were used in indirect enzyme-linked immunosorbent assays (iELISA) to detect IgG antibodies against A. marginale, B. bovis, B. bigemina, and T. vivax, and Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) for detecting IgG antibodies against C. burnetii and A. phagocytophilum. No correlation was observed between seropositivity for C. burnetii and A. phagocytophilum with other agents whereas moderate correlation was observed for A. marginalexB. bigemina x B. bovis. Cows were more seropositive for T. vivax whereas calves were more seropositive for B. bovis and B. bigemina. The highest number of seropositive animals by a single agent was observed for T. vivax (15.2%). Co-seropositivity for T. vivax + A. marginale was higher in cows (25.5%) and for T. vivax + B. bovis + B. bigemina + A. marginale was higher in calves (57.5%). The high seropositivity correlation for A. marginale x B. bovis x B. bigemina is probably due to the presence of the tick biological vector, Rhipicephalus microplus, in the studied farms. Common transmission pathways, mediated by hematophagous dipterans and fomites, may explain the high co-seropositivity of cows for A. marginale and T. vivax. Low seropositivity to C. burnetii is probably due to the type of breeding system employed (extensive). Seropositivity for A. phagocytophilum in only one animal suggests the occurrence of a cross-serological reaction with another agent of the genus Anaplasma.(AU)

Este estudo teve como objetivo determinar a co-soropositividade para agentes transmitidos por carrapatos, como Anaplasma marginale, Babesia bovis, Babesia bigemina, Coxiella burnetii, Anaplasma phagocytophilum, e Trypanosoma vivax em bovinos de corte do Pantanal Brasileiro. Amostras de soro foram colhidas de 400 animais (200 vacas; 200 bezerros) e submetidas a Ensaios Imunoenzimáticos Indiretos (iELISA) para detecção de anticorpos IgG anti- A. marginale, anti- B. bovis, anti- B. bigemina e anti- T. vivax, e à Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para detecção de anticorpos IgG anti -C. burnetii e anti- A. phagocytophilum. Ausência de correlação foi vista entre os animais soropositivos para C. burnetii e A. phagocytophilum com os outros agentes e correlação moderada ocorreu entre A. marginale x B. bigemina x B. bovis. Vacas foram mais soropositivas que bezerros para T. vivax e bezerros mais soropositivos que vacas para B. bovis e B. bigemina. Maior número de animais soropositivos para um único agente foi visto para T. vivax (15,2%). Vacas demonstraram maior co-soropositividade para T. vivax + A. marginale (25,5%) e bezerros para T. vivax + B. bovis + B. bigemina + A. marginale (57,5%). A alta correlação entre a soropositividade para A. marginale x B. bovis x B. bigemina é provavelmente devida à presença do vetor biológico, o carrapato Rhipicephalus microplus, nas fazendas estudadas. As vias de transmissão comuns, mediadas por dípteros hematófagos e fômites, podem explicar a alta co-soropositividade das vacas para A. marginale e T. vivax. A baixa soropositividade para C. burnetii é provavelmente devida ao tipo de sistema de criação empregado (extenso). A soropositividade para A. phagocytophilum em apenas um animal sugere a ocorrência de reação sorológica cruzada com outro agente do gênero Anaplasma.(AU)

Serological occurrence for tick-borne agents in beef cattle in the Brazilian Pantanal / Ocorrência sorológica para agentes transmitidos por carrapatos em bovinos de corte no Pantanal Brasileiro

This study investigated the seropositivity for five different tick-borne agents, namely Anaplasma marginale, Babesia bovis, Babesia bigemina, Coxiella burnetii, Anaplasma phagocytophilum, and Trypanosoma vivax in beef cattle in the Brazilian Pantanal. The serum samples collected from animals (200 cows; 200 calves) were used in indirect enzyme-linked immunosorbent assays (iELISA) to detect IgG antibodies against A. marginale, B. bovis, B. bigemina, and T. vivax, and Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) for detecting IgG antibodies against C. burnetii and A. phagocytophilum. No correlation was observed between seropositivity for C. burnetii and A. phagocytophilum with other agents whereas moderate correlation was observed for A. marginalexB. bigemina x B. bovis. Cows were more seropositive for T. vivax whereas calves were more seropositive for B. bovis and B. bigemina. The highest number of seropositive animals by a single agent was observed for T. vivax (15.2%). Co-seropositivity for T. vivax + A. marginale was higher in cows (25.5%) and for T. vivax + B. bovis + B. bigemina + A. marginale was higher in calves (57.5%). The high seropositivity correlation for A. marginale x B. bovis x B. bigemina is probably due to the presence of the tick biological vector, Rhipicephalus microplus, in the studied farms. Common transmission pathways, mediated by hematophagous dipterans and fomites, may explain the high co-seropositivity of cows for A. marginale and T. vivax. Low seropositivity to C. burnetii is probably due to the type of breeding system employed (extensive). Seropositivity for A. phagocytophilum in only one animal suggests the occurrence of a cross-serological reaction with another agent of the genus Anaplasma.(AU)

Este estudo teve como objetivo determinar a co-soropositividade para agentes transmitidos por carrapatos, como Anaplasma marginale, Babesia bovis, Babesia bigemina, Coxiella burnetii, Anaplasma phagocytophilum, e Trypanosoma vivax em bovinos de corte do Pantanal Brasileiro. Amostras de soro foram colhidas de 400 animais (200 vacas; 200 bezerros) e submetidas a Ensaios Imunoenzimáticos Indiretos (iELISA) para detecção de anticorpos IgG anti- A. marginale, anti- B. bovis, anti- B. bigemina e anti- T. vivax, e à Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para detecção de anticorpos IgG anti -C. burnetii e anti- A. phagocytophilum. Ausência de correlação foi vista entre os animais soropositivos para C. burnetii e A. phagocytophilum com os outros agentes e correlação moderada ocorreu entre A. marginale x B. bigemina x B. bovis. Vacas foram mais soropositivas que bezerros para T. vivax e bezerros mais soropositivos que vacas para B. bovis e B. bigemina. Maior número de animais soropositivos para um único agente foi visto para T. vivax (15,2%). Vacas demonstraram maior co-soropositividade para T. vivax + A. marginale (25,5%) e bezerros para T. vivax + B. bovis + B. bigemina + A. marginale (57,5%). A alta correlação entre a soropositividade para A. marginale x B. bovis x B. bigemina é provavelmente devida à presença do vetor biológico, o carrapato Rhipicephalus microplus, nas fazendas estudadas. As vias de transmissão comuns, mediadas por dípteros hematófagos e fômites, podem explicar a alta co-soropositividade das vacas para A. marginale e T. vivax. A baixa soropositividade para C. burnetii é provavelmente devida ao tipo de sistema de criação empregado (extenso). A soropositividade para A. phagocytophilum em apenas um animal sugere a ocorrência de reação sorológica cruzada com outro agente do gênero Anaplasma.(AU)

Transmission of Coxiella burnetii to calves from infected cows

Background: Coxiella burnetii is the causative agent of a very important disease with zoonotic potential. Infected cowsrepresent risk for spreading of infection to humans and to other animals on farm and also to their offspring. There is possibility for calves from infected cows to be infected nearly after parturition or during intrauterine life. Studies have shownthat Coxiella burnetii initially infects the placenta and subsequent spread to the fetus may occur either by haematogenousor by the amniotic-oral route providing congenital infection. The main objective of the present study is to determine thepresence of Coxiella burnetii genome in milk serum of infected cows and blood serum of calves.Materials, Methods & Results: A total of 200 blood serums from dairy cows were tested for presence of antibodies toCoxiella burnetii and nine of those were found positive. These animals compiled experimental group. From animals inexperimental group milk samples during lactation, pregnancy and the postpartum period were collected. Samples wereused for performing PCR test for determination of Coxiella burnetii presence in milk serum. On calving of each cow bloodsamples were taken from calves during first 24 hours after calving, from jugular vein. These blood samples were also usedfor PCR test to determine the presence of Coxiella burnetii. Milk serum analysis showed presence of Coxiella burnetiigenome in serum, indicating on intermittent excretion. During lactation, the excretion of bacteria was greatest in the second stage when 80% of milk serum samples were positive for Coxiella burnetii. In the colostrums stage, there was a highpercentage of Coxiella burnetii excretion through milk (50% of positive milk serum samples). The lowest percentage ofexcretion through milk was in the first stage of lactation. Analyzing blood serum samples from calves, taken on first dayat calving using PCR method, all serums were positive for presence of Coxiella...

Transmission of Coxiella burnetii to calves from infected cows

Background: Coxiella burnetii is the causative agent of a very important disease with zoonotic potential. Infected cowsrepresent risk for spreading of infection to humans and to other animals on farm and also to their offspring. There is possibility for calves from infected cows to be infected nearly after parturition or during intrauterine life. Studies have shownthat Coxiella burnetii initially infects the placenta and subsequent spread to the fetus may occur either by haematogenousor by the amniotic-oral route providing congenital infection. The main objective of the present study is to determine thepresence of Coxiella burnetii genome in milk serum of infected cows and blood serum of calves.Materials, Methods & Results: A total of 200 blood serums from dairy cows were tested for presence of antibodies toCoxiella burnetii and nine of those were found positive. These animals compiled experimental group. From animals inexperimental group milk samples during lactation, pregnancy and the postpartum period were collected. Samples wereused for performing PCR test for determination of Coxiella burnetii presence in milk serum. On calving of each cow bloodsamples were taken from calves during first 24 hours after calving, from jugular vein. These blood samples were also usedfor PCR test to determine the presence of Coxiella burnetii. Milk serum analysis showed presence of Coxiella burnetiigenome in serum, indicating on intermittent excretion. During lactation, the excretion of bacteria was greatest in the second stage when 80% of milk serum samples were positive for Coxiella burnetii. In the colostrums stage, there was a highpercentage of Coxiella burnetii excretion through milk (50% of positive milk serum samples). The lowest percentage ofexcretion through milk was in the first stage of lactation. Analyzing blood serum samples from calves, taken on first dayat calving using PCR method, all serums were positive for presence of Coxiella...(AU)

Coxiella burnetii associated with BVDV (Bovine Viral Diarrhea Virus), BoHV (Bovine Herpesvirus), Leptospira spp., Neospora caninum, Toxoplasma gondii and Trypanosoma vivax in reproductive disorders in cattle / Coxiella burnetii associada ao BVDV (Vírus da Diarreia Viral Bovina), BoHV (Vírus do Herpes Bovino), Leptospira spp., Neospora caninum, Toxoplasma gondii e Trypanosoma vivax em distúrbios reprodutivos em bovinos

This is a cross-sectional study to assess the presence of antibodies in ruminants against selected pathogens associated with reproductive disorders in cattle in four Brazilian states, including the zoonotic agent Coxiella burnetii. The used tests were Virus Neutralization Assay for IBR and BVD, Microscopic Agglutination Test for Leptospira spp., Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) for C. burnetii and Toxoplasma gondii, and Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Neospora caninum and Trypanosoma vivax. Seropositivity for C. burnetii was 13.7% with titers from 128 to 131,072; 57.8% for BoHV-1, with titers between 2 and 1,024; 47.1% for BVDV-1a, with titers from 10 to 5,120; 89.2% for N. caninum; 50% for T. vivax; and 52.0% for Leptospira spp., with titers between 100 to 800 (the following serovars were found: Tarassovi, Grippotyphosa, Canicola, Copenhageni, Wolffi, Hardjo, Pomona and Icterohaemorrhagiae); 19.6% for T. gondii with titer of 40. This is the first study that has identified C. burnetii in cattle associated with BoHV and BVDV, N. caninum, Leptospira spp., T. gondii and T. vivax. Thus, future studies should be conducted to investigate how widespread this pathogen is in Brazilian cattle herds.(AU)

Este é um estudo transversal para avaliar a presença de anticorpos em ruminantes contra patógenos selecionados e associados a distúrbios reprodutivos em bovinos de quatro estados brasileiros, incluindo o agente zoonótico Coxiella burnetii. Os testes utilizados foram Teste de Vírus-Neutralização para BoHV e BVDV, teste de Aglutinação Microscópica para Leptospira spp., Reação de Imunofluorescência Indireta for C. burnetii e Toxoplasma gondii, e Ensaio de Imunoabsorção Enzimática para Neospora caninum e Trypanosoma vivax. A soropositividade para C. burnetii foi de 13,7% com títulos de 128 a 131.072; 57,8% para BoHV-1, com títulos entre 2 a 1.024; 47,1% para BVDV-1a, com títulos de 10 a 5.120; 89,2% para N. caninum; 50% para T. vivax; e 52,0% para Leptospira spp., com títulos entre 100 a 800 (sorovares encontrados: Tarassovi, Grippotyphosa, Canicola, Copenhageni, Wolffi, Hardjo, Pomona e Icterohaemorrhagiae) 19,6% para T. gondii com título de 40. Este é o primeiro estudo que evidencia a participação de C. burnetii em bovinos associada ao Vírus da Rinotraqueíte bovina infecciosa e da diarreia viral bovina, N. caninum, Leptospira spp., T. gondii e T. vivax em bovinos. Desta forma, futuros estudos devem ser conduzidos a fim de investigar o quão disseminado se encontra este patógeno em rebanhos bovinos brasileiros.(AU)

Clinical and epidemiological use of nested PCR targeting the repetitive element IS1111 associated with the transposase gene from Coxiella burnetii

Q fever is a worldwide zoonosis caused by Coxiella burnetii—a small obligate intracellular Gram-negative bacterium found in a variety of animals. It is transmitted to humans by inhalation of contaminated aerosols from urine, feces, milk, amniotic fluid, placenta, abortion products, wool, and rarely by ingestion of raw milk from infected animals. Nested PCR can improve the sensitivity and specificity of testing while offering a suitable amplicon size for sequencing. Serial dilutions were performed tenfold to test the limit of detection, and the result was 10× detection of C. burnetti DNA with internal nested PCR primers relative to trans-PCR. Different biological samples were tested and identified only in nested PCR. This demonstrates the efficiency and effectiveness of the primers. Of the 19 samples, which amplify the partial sequence of C. burnetii, 12 were positive by conventional PCR and nested PCR. Seven samples—five spleen tissue samples from rodents and two tick samples—were only positive in nested PCR. With these new internal primers for trans-PCR, we demonstrate that our nested PCR assay for C. burnetii can achieve better results than conventional PCR.(AU)

Serological diagnosis and risk factors for Coxiella burnetii in goats and sheep in a semi-arid region of Northeastern Brazil / Diagnóstico sorológico e fatores de risco para Coxiella burnetii em caprinos e ovinos da região semiárida do nordeste do Brasil

Coxiella burnetii is a zoonotic agent transmitted mainly by small ruminants. In Brazil the disease has been classified as a notifiable disease since 2013, when human cases were reported. This study aimed to identify risk factors associated with the presence of anti- Coxiella burnetii antibodies in goats and sheep in a semiarid region of Northeastern Brazil. Sera of 412 goats and 403 sheep from municipality of Petrolina, Pernambuco, were examined by the Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) against antigens of C. burnetii. Information about management variables (independent variables) that could be associated with the presence of the microorganism (dependent variables) were obtained from the supervisor of each farm. It was determined that 2.2% (9/412) of the goats and 2.1% (9/403) of the sheep had antibodies reactive to C. burnetii. The presence of anti-C. burnetii antibodies was associated with the dry area of the Sequeiro (a region in the northern part of the municipality of Petrolina) (P = 0.025), male sheep (P = 0.020), and intensive goat breeding (P = 0.005). This study therefore showed the presence of anti-C. burnetii antibodies in goat and sheep, confirming for the first time that this agent is likely circulating among goat herds in the Caatinga Biome, semi-arid of Brazil.(AU)

Coxiella burnetii é um agente zoonótico transmitido principalmente por pequenos ruminantes. No Brasil, a doença foi classificada como de notificação compulsória desde 2013, quando casos humanos foram relatados. O objetivo deste estudo foi identificar os fatores de risco associados à presença de anticorpos anti-Coxiella burnetii em caprinos e ovinos em uma região semiárida do Nordeste do Brasil. Este estudo envolveu um inquérito sorológico de 412 caprinos e 403 ovinos em fazendas do município de Petrolina, no estado de Pernambuco. Os soros foram examinados pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) contra antígenos de C. burnetii . Informações sobre variáveis de manejo (variáveis independentes) que poderiam estar associadas à presença do microrganismo (variáveis dependentes) foram obtidas do proprietário de cada fazenda. Foi determinado que 2,2% (9/412) dos caprinos e 2,1% (9/403) dos ovinos tinham anticorpos reativos a C. burnetii. A presença de anticorpos anti-C. burnetii foram associados com a área seca do Sequeiro (região no norte do município de Petrolina) (P = 0,025), ovinos machos (P = 0,020) e criação intensiva de caprinos (P = 0,005). Este estudo, portanto, observou a presença de anticorpos anti-C. burnetii em pequenos ruminantes, confirmando pela primeira vez que este agente pode estar circulando em rebanhos caprinos no bioma Caatinga, semiárido do Brasil.(AU)

Investigação sorológica de Rickettsia rickettsii e Coxiella burnetii em caprinos e ovinos no entorno do Parque Nacional da Serra das Confusões, Piauí / Infection survey of Rickettsia rickettsii and Coxiella burnetii in sheep and goats from National Park of Serra das Confusões, Piauí

As doenças causadas por bactérias dos gêneros Rickettsia e Coxiella possuem como vetores artrópodes hematófagos, na sua maioria carrapatos, que atuam diretamente na transmissão de patógenos responsáveis por enfermidades de grande impacto na medicina veterinária e humana. O presente estudo objetivou realizar uma investigação sorológica de Rickettsia rickettsii e Coxiella burnetii em caprinos e ovinos criados no entorno do Parque Nacional da Serra das Confusões (PNSC), localizado no estado do Piauí, região nordeste do Brasil. Amostras de soro de 202 caprinos e 153 ovinos foram testadas pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para detecção de anticorpos anti-R. rickettsii e anti-C. burnetii, sendo consideradas positivas quando apresentaram títulos ≥ 64. Carrapatos em fase de parasitismo foram coletados e identificados. Todas as amostras de caprinos e ovinos foram soronegativas para antígenos de R. rickettsii. Foi verificado soropositividade em 2% (3/153) das amostras de ovinos para C. burnetii, com títulos variando de 64 a 4.096. As amostras de caprinos não foram reagentes ao referido antígeno. Não foi observado parasitismo em caprinos por carrapatos. No total, foram coletados 56 carrapatos parasitando 15 ovinos (9,8%), todos identificados como Rhipicephalus microplus. O estudo demonstrou a ausência de anticorpos anti-R. rickettsii nas amostras de caprinos e ovinos, ausência de anticorpos anti-C. burnetii em caprinos; e possibilitou o primeiro relato da ocorrência sorológica de C. burnetii em ovinos nesta região do Brasil.(AU)

The diseases caused by bacteria from the genera Rickettsia and Coxiella have hematophagous arthropods as vectors, mostly by ticks, which act directly on the transmission of pathogens that are responsible for diseases with major impact on veterinary and human medicine. The present study aimed to survey the infection of Rickettsia rickettsii and Coxiella burnetii in sheep and goats surrounding in the National Park of Serra das Confusões (NPSC), located in the state of Piauí, Northeast of Brazil. Serum samples from 202 goats and 153 sheep were tested by Indirect Immunofluorescence Assay (IFA) for the detection of antibodies against R. rickettsii and C. burnetii. The samples were considered positive when they showed titers ≥ 64. Ticks in parasitic stage were collected and identified. All samples from sheep and goats were seronegative for R. rickettsii. Seropositivity was verified in 2% (3/153) of the samples of sheep for C. burnetii, with titers ranging from 64 to 4096. The serum samples obtained from goats were seronegative to the above antigens. In total, 56 ticks were collected from 15 sheep (9.8%) all identified as Rhipicephalus microplus. The study demonstrated absence of infection by R. rickettsii in samples of sheep and goats, absence of infection of C. burnetii in goats; and the first report of serological occurrence of C. burnetii in sheep in this region of Brazil.(AU)

Investigação sorológica de Rickettsia rickettsii e Coxiella burnetii em caprinos e ovinos no entorno do Parque Nacional da Serra das Confusões, Piauí / Infection survey of Rickettsia rickettsii and Coxiella burnetii in sheep and goats from National Park of Serra das Confusões, Piauí

As doenças causadas por bactérias dos gêneros Rickettsia e Coxiella possuem como vetores artrópodes hematófagos, na sua maioria carrapatos, que atuam diretamente na transmissão de patógenos responsáveis por enfermidades de grande impacto na medicina veterinária e humana. O presente estudo objetivou realizar uma investigação sorológica de Rickettsia rickettsii e Coxiella burnetii em caprinos e ovinos criados no entorno do Parque Nacional da Serra das Confusões (PNSC), localizado no estado do Piauí, região nordeste do Brasil. Amostras de soro de 202 caprinos e 153 ovinos foram testadas pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para detecção de anticorpos anti-R. rickettsii e anti-C. burnetii, sendo consideradas positivas quando apresentaram títulos ≥ 64. Carrapatos em fase de parasitismo foram coletados e identificados. Todas as amostras de caprinos e ovinos foram soronegativas para antígenos de R. rickettsii. Foi verificado soropositividade em 2% (3/153) das amostras de ovinos para C. burnetii, com títulos variando de 64 a 4.096. As amostras de caprinos não foram reagentes ao referido antígeno. Não foi observado parasitismo em caprinos por carrapatos. No total, foram coletados 56 carrapatos parasitando 15 ovinos (9,8%), todos identificados como Rhipicephalus microplus. O estudo demonstrou a ausência de anticorpos anti-R. rickettsii nas amostras de caprinos e ovinos, ausência de anticorpos anti-C. burnetii em caprinos; e possibilitou o primeiro relato da ocorrência sorológica de C. burnetii em ovinos nesta região do Brasil.(AU)

The diseases caused by bacteria from the genera Rickettsia and Coxiella have hematophagous arthropods as vectors, mostly by ticks, which act directly on the transmission of pathogens that are responsible for diseases with major impact on veterinary and human medicine. The present study aimed to survey the infection of Rickettsia rickettsii and Coxiella burnetii in sheep and goats surrounding in the National Park of Serra das Confusões (NPSC), located in the state of Piauí, Northeast of Brazil. Serum samples from 202 goats and 153 sheep were tested by Indirect Immunofluorescence Assay (IFA) for the detection of antibodies against R. rickettsii and C. burnetii. The samples were considered positive when they showed titers ≥ 64. Ticks in parasitic stage were collected and identified. All samples from sheep and goats were seronegative for R. rickettsii. Seropositivity was verified in 2% (3/153) of the samples of sheep for C. burnetii, with titers ranging from 64 to 4096. The serum samples obtained from goats were seronegative to the above antigens. In total, 56 ticks were collected from 15 sheep (9.8%) all identified as Rhipicephalus microplus. The study demonstrated absence of infection by R. rickettsii in samples of sheep and goats, absence of infection of C. burnetii in goats; and the first report of serological occurrence of C. burnetii in sheep in this region of Brazil.(AU)

Investigação sorológica de Rickettsia rickettsii e Coxiella burnetii em caprinos e ovinos no entorno do Parque Nacional da Serra das Confusões, Piauí

ABSTRACT: The diseases caused by bacteria from the genera Rickettsia and Coxiella have hematophagous arthropods as vectors, mostly by ticks, which act directly on the transmission of pathogens that are responsible for diseases with major impact on veterinary and human medicine. The present study aimed to survey the infection of Rickettsia rickettsii and Coxiella burnetii in sheep and goats surrounding in the National Park of Serra das Confusões (NPSC), located in the state of Piauí, Northeast of Brazil. Serum samples from 202 goats and 153 sheep were tested by Indirect Immunofluorescence Assay (IFA) for the detection of antibodies against R. rickettsii and C. burnetii. The samples were considered positive when they showed titers 64. Ticks in parasitic stage were collected and identified. All samples from sheep and goats were seronegative for R. rickettsii. Seropositivity was verified in 2% (3/153) of the samples of sheep for C. burnetii, with titers ranging from 64 to 4096. The serum samples obtained from goats were seronegative to the above antigens. In total, 56 ticks were collected from 15 sheep (9.8%) all identified as Rhipicephalus microplus. The study demonstrated absence of infection by R. rickettsii in samples of sheep and goats, absence of infection of C. burnetii in goats; and the first report of serological occurrence of C. burnetii in sheep in this region of Brazil.

RESUMO: As doenças causadas por bactérias dos gêneros Rickettsia e Coxiella possuem como vetores artrópodes hematófagos, na sua maioria carrapatos, que atuam diretamente na transmissão de patógenos responsáveis por enfermidades de grande impacto na medicina veterinária e humana. O presente estudo objetivou realizar uma investigação sorológica de Rickettsia rickettsii e Coxiella burnetii em caprinos e ovinos criados no entorno do Parque Nacional da Serra das Confusões (PNSC), localizado no estado do Piauí, região nordeste do Brasil. Amostras de soro de 202 caprinos e 153 ovinos foram testadas pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para detecção de anticorpos anti-R. rickettsii e anti-C. burnetii, sendo consideradas positivas quando apresentaram títulos 64. Carrapatos em fase de parasitismo foram coletados e identificados. Todas as amostras de caprinos e ovinos foram soronegativas para antígenos de R. rickettsii. Foi verificado soropositividade em 2% (3/153) das amostras de ovinos para C. burnetii, com títulos variando de 64 a 4.096. As amostras de caprinos não foram reagentes ao referido antígeno. Não foi observado parasitismo em caprinos por carrapatos. No total, foram coletados 56 carrapatos parasitando 15 ovinos (9,8%), todos identificados como Rhipicephalus microplus. O estudo demonstrou a ausência de anticorpos anti-R. rickettsii nas amostras de caprinos e ovinos, ausência de anticorpos anti-C. burnetii em caprinos; e possibilitou o primeiro relato da ocorrência sorológica de C. burnetii em ovinos nesta região do Brasil.

Soropositividade de Brucella spp. e Coxiella burnetii em pacientes com suspeita de Dengue no Estado de São Paulo

A Febre Q e a Brucelose são zoonoses que causam febre e outros sinais clínicos sistémicos em humanos, tendo suas ocorrências negligenciadas e o diagnóstico diferencial para algumas doenças desconsiderado. Este estudo visou investigar a soropositividade de Coxiella burnetii e Brucella spp. em pacientes suspeitos de Dengue, atendidos em 38 municípios do Estado de São Paulo, Brasil. As amostras (n=604) foram obtidas por conveniência e pertenciam ao banco de soros do Instituto Adolfo Lutz. Para avaliar a positividade de C. burnetii, os soros foram submetidos à técnica de Imunofluorescência Indireta (IFA) utilizando protocolos de diagnóstico in-house e comerciais. Para avaliar a positividade de Brucella spp., os soros foram submetidos às técnicas de Soroaglutinação Rápida em Placa com Antígeno Acidificado Tamponado (AAT), Soroaglutinação Lenta em Tubos (SAL) e 2-Mercaptoetanol (2-ME). Foram realizadas análises multivariadas a partir dos dados dos casos detectados. Do total, 129 pacientes apresentaram resultados positivos, indicando uma soropositividade de 21,36% (95% CI 18,15-24,85). Os títulos observados (mediana) indicam que os pacientes não estavam apenas expostos ao agente, mas também que haviam desenvolvido a doença. De todas as variáveis analisadas, a duração dos sintomas dos pacientes com Febre Q mostrou uma diferença significativa; com ênfase nos pacientes com 7 a 21 dias de sintomas (p-valor=0,0199). Não foi observada qualquer positividade para a Brucelose. Este estudo é a primeira descoberta significativa de pessoas soropositivas para a Febre Q no Estado de São Paulo e uma das primeiras no Brasil. A Febre Q consolida-se como um importante diagnóstico diferencial de doenças febris na região, reivindicando a atenção do governo e o investimento na saúde.

Q fever and Brucellosis are zoonoses that cause fever and other systemic clinical signs in humans, having their occurrences neglected and the differential diagnosis for some diseases disregarded. This study aimed to investigate the seropositivity for Coxiella burnetii and Brucella spp. in patients suspected of Dengue, attended in 38 municipalities in the State of São Paulo, Brazil. The samples (n=604) were obtained by convenience and belonged to the Adolfo Lutz Institute serum bank. To evaluate C. burnetii positivity, sera were submitted to the Indirect Immunofluorescence technique (IFA) using in-house and commercial diagnostic protocols. To assess Brucella spp. positivity, sera were subjected to Rapid Plate Serum Agglutination with Buffered Acidified Antigen (AAT), Slow Tube Serum Agglutination (SAL) and 2-Mercaptoethanol (2-ME) techniques. Multivariate analyses of the data of detected cases were performed. Of the total, 129 patients showed positive results, indicating seropositivity of 21.36% (95% CI 18.15-24.85). The observed titers (median) indicate that, in addition to being exposed to the agent, the patients had developed the disease. Of all the variables analyzed, the duration of symptoms of Q fever patients showed a significant difference; with emphasis on patients with 7 to 21 days of symptoms (p-value=0.0199). No positivity for brucellosis was observed. This study is the first significant finding of persons seropositive for Q fever in São Paulo State and one of the first in Brazil. Q fever is consolidated as an important differential diagnosis of febrile illnesses in the region claiming the government attention and investment in health

DETECÇÃO E CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE MICOPLASMAS HEMOTRÓPICOS E Coxiella burnetii EM MAMÍFEROS DA SUPERORDEM XENARTHRA NO BRASIL

Embora mamíferos da superordem Xenarthra sejam considerados hospedeiros de uma ampla gama de agentes zoonóticos, são raros os trabalhos que visam investigar o papel desses animais como hospedeiros de bactérias com potencial zoonótico. O presente estudo teve como objetivo investigar a ocorrência e caracterizar molecularmente o DNA de Coxiella burnetii e hemoplasma (micoplasmas hemotrópicos) em amostras de sangue e baço de 397 mamíferos Xenarthra de vida livre (233 preguiças, 107 tamanduás e 57 tatus) em cinco estados brasileiros (Mato Grosso do Sul, São Paulo, Pará, Rondônia e Rio Grande do Sul). Todas as amostras biológicas de Xenarthra foram negativas na qPCR para Coxiella burnetii com base no gene IS1111. A ausência de DNA de C. burnetii em amostras de sangue e baço de Xenarthra sugere que esses mamíferos podem não atuar como possíveis hospedeiros desse agente nas localidades estudadas. Quando realizados ensaios de PCR convencionais para o gene endógeno (gapdh) de mamífero, 386 amostras foram positivas. Quando triados por ensaios moleculares baseados no gene 16S rRNA de hemoplasmas, 81 amostras foram positivas, sendo 15,54% (60/386) positivas por PCR convencional e 5,44% (21/386) positivas por PCR em tempo real; três amostras foram positivas em ambos os ensaios. Destes, 39,74% (31/78) também foram positivos para o gene 23S rRNA e 7,69% (6/78) para o gene hemoplasma RNAse P. Entre as amostras positivas para hemoplasmas, 25,64% (20/78) foram obtidas de tamanduás, 39,74% (31/78) de preguiças e 34,61% (27/78) de tatus. Com base na baixa identidade e no posicionamento filogenético das sequências 16S rRNA e 23S rRNA de hemoplasmas detectados em tamanduás, tatus e preguiças, o presente estudo mostrou, pela primeira vez, a ocorrência de um novo putativo de Candidatus hemotrópico Mycoplasma spp. ('Candidatus Mycoplasma haematotetradactyla', 'Candidatus Mycoplasma haematomaximus' e 'Candidatus Mycoplasma haematotridactylus').

Although mammals of the superorder Xenarthra are considered hosts of a wide range of zoonotic agents, works aiming at investigating the role of these animals as hosts for bacteria with zoonotic potential are rare. The present study aimed to investigate the occurrence and molecularly characterize Coxiella burnetii and hemoplasma (hemotropic mycoplasmas) DNA in blood and spleen samples from 397 free-living Xenarthra mammals (233 sloths, 107 anteaters, and 57 armadillos) in five Brazilian states (Mato Grosso do Sul, São Paulo, Pará, Rondônia, and Rio Grande do Sul). All biological samples from Xenarthra were negative in the qPCR for Coxiella burnetii based on the IS1111 gene. The absence of C. burnetii DNA in blood and spleen samples from Xenarthra suggests that these mammals may not act as possible hosts for this agent in the locations studied. When performed conventional PCR assays for the endogenous (gapdh) mammalian gene, 386 samples were positive. When screened by molecular assays based on the 16S rRNA gene of hemoplasmas, 81 samples were positive, of which 15.54% (60/386) were positive by conventional PCR and 5.44% (21/386) were positive by real-time PCR; three samples were positive in both assays. Of these, 39.74% (31/78) were also positive for the 23S rRNA gene and 7.69% (6/78) for the hemoplasma RNAse P gene. Among the samples positive for hemoplasmas, 25.64% (20/78) were obtained from anteaters, 39.74% (31/78) from sloths, and 34.61% (27/78) from armadillos. Based on the low identity and phylogenetic positioning of 16S rRNA and 23S rRNA sequences of hemoplasmas detected in anteaters, armadillos and sloths, the present study showed, for the first time, the occurrence of putative new Candidatus hemotropic Mycoplasma spp. ('Candidatus Mycoplasma haematotetradactyla', 'Candidatus Mycoplasma haematomaximus', and 'Candidatus Mycoplasma haematotridactylus').

PESQUISA DE INFECÇÃO POR Coxiella burnetii E Toxoplasma gondii EM FÊMEAS DE PRIMATAS NÃO HUMANOS EM UM INSTITUTO DE PESQUISA NO RIO DE JANEIRO

Desordens reprodutivas ocasionam grandes perdas para colônias de primatas, principalmente quando, por exemplo, se tem como objetivo que um determinado animal tenha descendentes com determinadas características genéticas. Este problema pode estar relacionado a diversos fatores, entre eles, fatores genéticos, questões de obesidade, comportamental/bem-estar e fatores de origem infecciosa. Em relação a este último fator, além dos gêneros Mycoplasma e Brucella, a proteobactéria Coxiella burnetii que é o agente etiológico da febre Q em humanos e coxielose em animais, assim como o protozoário Toxoplasma gondii, causador da toxoplasmose humana e animal, são agentes infecciosos que também precisam ser considerados, especialmente em animais com histórico de aborto e de outros distúrbios reprodutivos. Neste contexto, este projeto teve como proposta desenvolver um estudo descritivo seccional com o objetivo de verificar a presença de anticorpos anti-C. burnetii e anti-T. gondii pela reação de imunofluorescênica indireta (RIFI), além da reação em cadeia da polimerase (PCR) para pesquisa de C. burnetii em amostras de soro de fêmeas de PNHs, com e sem histórico de distúrbios reprodutivos, mantidas em cativeiro no Instituto de Ciência e Tecnologia em Biomodelos - ICTB. Das 152 amostras de soro dos PNHs, espécies Saimiri ustus, S. sciureus, Macaca fascicularis (Cynomolgus) e Macaca mulatta (Rhesus), submetidas à análise sorológica (RIFI) e molecular (PCR) para a pesquisa de infecção por C burnetii, todas foram negativas. Quanto à pesquisa de infecção por T.gondii, a presença de anticorpos foi detectadaemsetedas 152 amostras (4,6 %). Quatro destas sete fêmeas tinham histórico de abortos e todas pertenciam a espécie M. mulatta. Nossos resultados sugerem que em casos de abortos a pesquisa de T. gondii deve ser considerada.

Reproductive disorders cause great losses to primate colonies, especially when, for example, the goal is for a particular animal to have offspring with certain genetic characteristics. This problem may be related to several factors, among them, genetic factors, obesity issues, behavioral/well-being and infectiousorigin factors. Regarding this last factor, besides the Mycoplasma and Brucella genera, the proteobacterium Coxiella burnetii, which is the etiological agent of Q fever in humans and coxielosis in animals, as well as the protozoan Toxoplasma gondii, which causes human and animal toxoplasmosis, are infectious agents that also need to be considered, especially in animals with a history of abortion and other reproductive disorders. In this context, the purpose of this project was to develop a descriptive sectional study to verify the presence of anti-C. burnetii and anti-T. gondii antibodies by indirect immunofluorescence reaction (IFT), and polymerase chain reaction (PCR) to search for C. burnetii in serum samples from NHP females, with and without a history of reproductive disorders, kept in captivity at the Instituto de Ciência e Tecnologia em Biomodelos - ICTB. Of the 152 serum samples from NHP, species Saimiri ustus, S. sciureus, Macaca fascicularis (Cynomolgus) and Macaca mulatta (Rhesus), submitted to serological (RIFI) and molecular (PCR) analysis for C burnetii infection, all were negative. For T gondii infection, antibodies were detected in seven of 152 samples (4.6%). Four of these seven females had a history of abortion and all belonged to the species M. mulatta. Our results suggest that in cases of abortions the investigation for T. gondii should be considered.

MOLECULAR DETECTION AND GENETIC DIVERSITY OF ARTHROPOD AND TREMATODE-BORNE AGENTS IN NON-HEMATOPHAGOUS BATS FROM MIDWESTERN BRAZIL

Estima-se que 75% das doenças emergentes compreendam zoonoses, cuja maioria tem como fontes de infecção animais selvagens; destas, cerca de 22,8% são veiculadas por vetores artrópodes. Desta forma, monitorar a presença de patógenos em animais selvagens em nichos compartilhados com seres humanos se torna um importante método preventivo de infecções zoonóticas. As famílias Bartonellaceae e Anaplasmataceae englobam Alphaproteobactérias Gram-negativas, intracelulares facultativas e obrigatórias, respectivamente, que vêm sendo identificadas em uma ampla variedade de mamíferos, incluindo seres humanos. Já os micoplasmas hemotróficos são bactérias Gram-negativas sem parede celular, de localização epieritrocitária, que podem causar desde infecções assintomáticas até anemia hemolítica severa, tanto em animais como em humanos. Coxiella burnetii é o principal representante da família Coxiellaceae (Gammaproteobactérias) e é conhecida por causar a Febre Q em humanos. Apesar de ser transmitido por aerossóis, esse agente vem sendo detectado em diversos ectoparasitos que talvez possam atuar em seu ciclo de vida. Já os piroplasmas são protozoários da ordem Piroplasmida e causam principalmente anemia hemolítica em animais de produção, domésticos e, eventualmente, em seres humanos. Embora esses agentes supracitados vêm sendo cada vez mais estudados em quirópteros, ainda pouco se sabe a respeito de sua ocorrência e diversidade genética em morcegos no Brasil. Os principais ectoparasitos encontrados nesses animais são representados por moscas das famílias Streblidae e Nycteribiidae, carrapatos, e ácaros das famílias Spinturnicidae e Macronyssidae. Considerando os patógenos de interesse em Saúde Pública supracitados e a expressiva representatividade de animais da ordem Chiroptera no Brasil, objetivou-se obter informações sobre a ocorrência e diversidade genética de agentes Anaplasmataceae, Bartonellaceae, Mycoplasmataceae, Coxiellaceae e protozoários da ordem Piroplasmida em quirópteros e seus respectivos ectoparasitos coletados em área periurbana da cidade de Campo Grande, estado do Mato Grosso do Sul, no centro-oeste brasileiro. Um total de 418 amostras (135 amostras de baço, 133 de sangue e 150 ectoparasitos) foram coletados de 135 animais das famílias Phyllostomidae, Vespertillionidae e Mollossidae. Por meio de técnicas moleculares verificou-se positividade de 18,13% (34/418) para Bartonella spp. dentre todas as amostras coletadas. Dessas, 17 amostras foram clonadas para o gene gltA a fim de obter 3 clones de cada uma para acessar a diversidade genotípica dentro da mesma amostra biológica. Com os 51 gltA-clones obtidos foi possível observar 13 genótipos diferentes, sendo que pelo menos dois ocorreram dentro de uma mesma amostra. Análises filogenéticas baseadas nos genes ftsZ, rpoB e nuoG confirmaram a alta diversidade de genótipos de Bartonella spp. em quirópteros e seus ectoparasitos. Para agentes Anaplasmataceae, foi observada positividade de 1,67% (7/418), 11,96% (50/418) e 13,63% (57/418) das amostras testadas para Anaplasma spp. (16S rRNA), Ehrlichia spp. (dsb) e Neorickettsia spp. (16S rRNA), respectivamente. As sequências obtidas mostraram-se similares a Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia minasensis, Neorickettsia risticii, e Neorickettsia findlayensis por análise iv pelo nBLAST, e filogeneticamente relacionado a Ehrlichia ruminantium baseado no gene gltA. Trata-se da primeira evidência molecular de agentes Anaplasmataceae em quirópteros e ectoparasitos associados no Brasil. Já para hemoplasmas, positividade de 13,6% (57/418) foi observada. Dentre as 24 sequências obtidas pelo gene 16S rRNA foi possível encontrar 12 genótipos diferentes que se distribuíram pelo macroclado do grupo haemofelis. As duas sequências 23S rRNA obtidas se posicionaram próximas a Candidatus Mycoplasma haematohydrochaerus, M. haemofelis e M. haemocanis. Todas as amostras de sangue e baço dos morcegos amostrados mostraram-se negativas na qPCR para C. burnetii baseada no gene IS1111. Para piroplasmídeos, 17 dos 135 (12,6%) morcegos amostrados mostraram-se positivos para agentes da ordem Piroplasmida (gene 18S rRNA). Trata-se do primeiro relato molecular de piroplasmídeos em quirópteros no Brasil. A análise filogenética mostrou a possível ocorrência de duas novas espécies: Piroplasmid n. sp. Artibeus spp., posicionado filogeneticamente próximo a Babesia canis e B. vogeli, e Piroplasmid n. sp. P. discolor, que formou um clado monofilético. Infelizmente, as amostras de ectoparasitos não puderam ser utilizadas na detecção de piroplasmídeos e C. burnetii. Enquanto moscas Streblidae mostraram positividade nos ensaios moleculares para Bartonella spp. (11/64), Ehrlichia spp. (7/64) e Mycoplasma spp. (1/64), carrapatos Ornithodoros hasei mostraram-se positivos para Ehrlichia spp. (3/19), Anaplasma spp. (1/19) e Neorickettsia spp. (1/19); por fim, ácaros Spinturniciidae e Macronyssidae apresentaram positividade para Bartonella spp. (4/21 Macronyssidae) e Ehrlichia spp. (18/21 Macronyssidae e 6/46 Spinturnicidae). Ainda, co-positividade para os diversos agentes pesquisados foi observada no presente estudo. Como conclusão, morcegos não-hematófagos de área periurbana do centro-oeste brasileiro atuam como hospedeiros para diversos genótipos de Bartonella spp. e hemoplasmas, para Ehrlichia spp. filogeneticamente associadas a E. ruminantium e para duas possíveis novas espécies de piroplasmídeos.

It is estimated that 75% of emerging diseases comprise zoonoses, most of which have wild animals as sources of infection; of these, about 22.8% are carried by arthropod vectors. Thus, monitoring the presence of pathogens in wild animals in niches shared with humans becomes an important preventive method for zoonotic infections. Bartonellaceae and Anaplasmataceae families comprise Gram-negative, facultative and obligate intracellular Alphaproteobacteria, respectively, that have been identified in a wide variety of mammals, including humans. On the other hand, hemotrophic mycoplasmas are epierythrocytic Gram-negative bacteria lacking cell wall, which can cause from asymptomatic infections to severe hemolytic anemia, both in animals and in humans. Coxiella burnetii is the main representative of the Coxiellaceae family (Gammaproteobacteria) and is known to cause Q fever in humans. Despite being transmitted by aerosols, this agent has been detected in several ectoparasites that may act in its life cycle. Piroplasmids, on the other hand, are protozoa of the order Piroplasmida, which can cause hemolytic anemia in farm and domestic animals and, occasionally, in humans. Although the abovementioned agents have been increasingly studied in bats, little is known about their occurrence and genetic diversity in bats from Brazil. The main ectoparasites found in these animals are Streblidae and Nycteribiidae flies, soft ticks, and Spinturnicidae and Macronyssidae mites. Considering the abovementioned pathogens of interest in Public Health and the expressive representation of animals of the order Chiroptera in Brazil, this study aimed to investigate the occurrence and genetic diversity of Anaplasmataceae, Bartonellaceae, Mycoplasmataceae, Coxiellaceae agents and protozoa of the order Piroplasmida in chiropterans and their respective ectoparasites collected in a periurban area of the city of Campo Grande, state of Mato Grosso do Sul, in central-western Brazil. A total of 418 samples (135 spleen, 133 blood and 150 ectoparasites) were collected from 135 animals of the Phyllostomidae, Vespertillionidae and Mollossidae families. Based on molecular assays, positivity of 18.13% (34/418) for Bartonella spp. was found among all collected samples. Out of these, 17 samples had their amplified Bartonella gltA amplicons cloned in order to obtain 3 clones of each one aiming at assessing the genotypic diversity within the same sample. Among the 51 Bartonella gltA-clones obtained, 13 different genotypes were found, with at least two occurring within individual samples. Phylogenetic analyses based on the ftsZ, rpoB and nuoG genes confirmed the high genotype diversity of Bartonella spp. in bats and their ectoparasites. For Anaplasmataceae agents, positivity of 1.67% (7/418), 11.96% (50/418) and 13.63% (57/418) was observed for Anaplasma spp. (16S rRNA), Ehrlichia spp. (dsb) and Neorickettsia spp. (16S rRNA), respectively. The sequences obtained were closely related to Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia minasensis, Neorickettsia risticii, and Neorickettsia findlayensis by BLASTn analyses, and phylogenetically related to Ehrlichia ruminantium based on gltA gene. This is the first molecular evidence of Anaplasmataceae agents in bats and associated ectoparasites from Brazil. Positivity of 13.6% (57/418) for hemoplasmas was found. Among the 24 sequences obtained by the 16S rRNA gene, it was possible to find 12 different vi hemoplasma genotypes that were distributed into Haemofelis group. The two obtained 23S rRNA hemoplasma sequences were closely related to Candidatus Mycoplasma haematohydrochaerus, M. haemofelis and M. haemocanis. All bats blood and spleen samples were negative in the qPCR for C. burnetii based on the IS1111 gene. Seventeen of the 135 (12.6%) bats were positive for Piroplasmida (18S rRNA gene). This is the first molecular report of piroplasmids in bats from Brazil. Phylogenetic analysis showed the possible occurrence of two new species: Piroplasmid n. sp. Artibeus spp., which was closely related to Babesia canis and B. vogeli, and Piroplasmid n. sp. P. discolor, which formed a monophyletic clade. Unfortunately, the ectoparasite samples could not be used in the PCR assays for piroplasmids and C. burnetii. While Streblidae flies showed positivity in molecular assays for Bartonella spp. (11/64), Ehrlichia spp. (7/64) and Mycoplasma spp. (1/64), Ornithodoros hasei ticks were positive for Ehrlichia spp. (3/19), Anaplasma spp. (1/19) and Neorickettsia spp. (1/19). Spinturnicidae and Macronyssidae mites were positive for Bartonella spp. (4/21 Macronyssidae) and Ehrlichia spp. (18/21 Macronyssidae and 6/46 Spinturnicidae). Also, co-positivity for the different agents studied was observed. In conclusion, non-hematophagous bats from a periurban area of central-western Brazil act as hosts for several genotypes of Bartonella spp. and hemoplasms, Ehrlichia spp. closely related to E. ruminantium, and for two possible new species of piroplasmids.

Coxiella burnetti EM PRODUTOS LÁCTEOS ARTESANAIS COMERCIALIZADOS NO MUNICÍPIO DE PATOS DE MINAS/MG

Coxiella burnetii é o agente etiológico de uma zoonose denominada febre Q. Essa infecção, caracterizada por sinais clinicos agudos e crônicos inespecíficos, é transmitida ao humano, principalmente, por aerossóis de fezes, urina, leite e restos placentários ou consumo de leite e derivados provenientes de animais infectados. Embora passivel de ocorrer, a transmissão por produtos lácteos é pouco descrita na literatura. O presente trabalho objetivou investigar a presença de DNA de C. burnetii em queijos Minas Artesanais comercializados informalmente em pequenos, médios e grandes mercados no Município de Patos de Minas-Minas Gerais, sudeste do Brasil. Para tal, utilizou-se a tecnica de PCR em tempo real quantitativa (qPCR) baseada no gene IS1111. Foram realizadas 150 entrevistas de consumidores de produtos lácteos para análise do perfil. Os resultados mostraram que 4,6% (4/87) das amostras foram positivas para C. burnetii na qPCR, com 99,84% de identidade para o gene 16S. Nas entrevistas, foram observados que 95,3% (143/150) dos entrevistados consomem leite e derivados; 50% (75/150) consomem leite e queijo tipo Minas Artesanal fresco pelo menos uma vez ao dia; 62% (93/150) não observam os carimbos de inspeção nas embalagens na hora da compra; e, 81,3% (122/150) não sabem o significado desses carimbos. Dessa forma, a presença de DNA de C. burnetii nos queijos analisados e o consumo desse produto comercializado informalmente, ascende um alerta para o risco de transmissão de febre Q na população que consome esse tipo de produto.

Coxiella burnetii is the etiological agent of a zoonosis called Q fever. This infection characterized by acute and chronic non-specific clinical signs. It is transmitted to humans, mainly by aerosols from feces, urine, milk and placental remains or consumption of milk and derived from infected animals. Although likely to occur, transmission by dairy products is poorly recorded in the literature. The present study aimed to investigate the presence of DNA from C. burnetii in cheeses Minas Artisanal marketed informally in small, medium and large markets in the Municipality of Patos de Minas Gerais, southeastern Brazil. To do this, use a quantitative realtime PCR (qPCR) technique that is not based on the IS1111 gene. Were 150 interviews of consumers of dairy products were carried out for profile analysis. The results showed that 4.6% (4/87) of the samples were positive for C. burnetii in qPCR, with 99.84% of identity for the 16S rRNA gene. In the interviews, 95.3% (143/150) of the interviewees consumed milk and dairy products were observed; 50% (75/150) consumption cheeses Mins Artisanal Minas in nature milk at least once a day; 62% (93/150) did not observe the inspection stamps on the packaging at the time of purchase; and 81.3% (122/150) do not know the meaning of these stamps. Thus, the presence of C. burnetii DNA in the analyzed products and the consumption of this product sold informally, raises an alert for the risk of transmission of Q fever in the population that consumes this type of product.

AVALIAÇÃO DE ATIVIDADE ANTIVIRAL DE DUAS FRAÇÕES DE SAPONINAS DE QUILLAJA SPP. FRENTE À ARBOVÍRUS E FORMULAÇÃO DE MATRIZES ISCOM

Saponinas são moléculas anfifílicas que apresentam versatilidade no que diz respeito a suas propriedades biológicas. Uma das propriedades biológicas mais estudadas remete à atividade imunoadjuvante, sendo a fração comercial Quil-A®, obtida a partir das cascas de Quillaja saponaria amplamente pesquisada frente ao sistema imune. O principal limitante quanto ao seu uso em humanos é a toxicidade. Uma alternativa para atenuar a citotoxicidade é a complexação com colesterol, fosfatidilcolina e um antígeno, originando complexos imunoestimulantes (ISCOMs). Também é descrita a atividade antiviral para saponinas frente a vírus envelopados e não envelopados de DNA e RNA. Uma questão pertinente ao estudo das saponinas de Q. saponaria remete à depredação da espécie, uma vez que as cascas constituem a principal fonte de obtenção. Neste contexto, a espécie congênere Q. brasiliensis vem sendo estudada como uma alternativa, uma vez que as folhas são ricas em saponinas. O presente trabalho propôs-se a avaliar o potencial antiviral de uma fração purificada de saponinas de Q. brasiliensis denominada Fração B e de uma fração comercial de Q. saponaria denominada Quil-A® frente ao vírus da Febre Amarela (YFV) e ao vírus Chikungunya (CHIKV), bem como realizar um estudo de formulação de matrizes ISCOM. Para tanto, foi avaliada a citotoxicidade da Fração B e de Quil-A® em células VERO (por serem permissivas à replicação viral) por meio do ensaio de MTT. A avaliação da atividade antiviral foi realizada pelos ensaios de inibição do efeito citopático e por redução no número de placas de lise. A formação de matrizes ISCOM foi realizada através da técnica de injeção de etanol, sendo caracterizadas posteriormente por microscopia eletrônica de transmissão (MET), espalhamento de luz dinâmico e potencial zeta. A Fração B se mostrou ligeiramente menos citotóxica que Quil-A® em todos os tempos de exposição testados. As saponinas demonstraram ausência de atividade frente ao YFV, a qual foi confirmada através do ensaio de inibição do efeito citopático. Por outro lado, as saponinas foram eficazes ao bloquear a replicação viral do CHIKV, atingindo percentuais de inibição de 95% para Quil-A® e 97% para Fração B. Quanto às matrizes ISCOMs, foram elaboradas sete formulações, sendo uma utilizando Quil-A® (controle positivo) e as demais Fração B. A proporção descrita na literatura como otimizada à formulação dos complexos para Quil-A®, 63:12:24, também resultou em mais estruturas típicas para Fração B. Mesmo não apresentando ação frente ao YFV, as saponinas mostraram-se promissores agentes antivirais. Desta forma, a avaliação dos mecanismos pode auxiliar no entendimento de como estas atuam no bloqueio da replicação viral. No que diz respeito às matrizes ISCOM, com base na proporção otimizada para formulação pode-se realizar a avaliação das propriedades biológicas das estruturas com ou sem antígenos.

Saponins are amphiphilic molecules that exhibit versatility regarding their biological properties. One of the most studied biological properties refers to immunoadjuvant activity. Quil-A® fraction is a commercially available fraction obtained from the barks of Quillaja saponaria and it is extensively researched about its immunostimulatory activity. The main limiting factor for its use in humans is toxicity. An alternative to attenuate cytotoxicity is the complexation with cholesterol, phosphatidylcholine and an antigen, forming immunostimulating complexes (ISCOMs). Another biological property refers to the antiviral activity, and it is known that they act against enveloped and nonenveloped DNA and RNA viruses. A concern involving the study of the saponins from Q. saponaria refers to the depredation of the specie, since the barks are the main source of saponins. In this context, the congener specie Quillaja brasiliensis has been studied as an alternative once the leaves are rich in saponins. The present work aimed to evaluate the antiviral potential of a purified fraction of saponins from Q. brasiliensis named Fraction B against Yellow Fever Virus (YFV) and Chikungunya Virus (CHIKV), as well as to perform a formulation study of ISCOM matrices. The cytotoxicity of Fraction B and Quil-A® was evaluated in VERO cells (permissive to viral replication) using the MTT assay. The antiviral screening was performed by the cytopathic effect inhibition assay and by plaques reduction assay. ISCOM matrices were formulated by ethanol injection technique. Structures were characterized by transmission electron microscopy (TEM), dynamic light scattering and zeta potential. Fraction B was slightly less cytotoxic than Quil-A® in all exposure times tested. Saponins demonstrated absence of activity against YFV, which was confirmed by the cytopathic effect inhibition assay. On the other hand, they were effective blocking CHIKV replication, reaching 95% inhibition percentages for Quil-A® and 97% for Fraction B. As for the ISCOMs matrices, seven formulations were prepared, one using Quil- A® (positive control) and the remaining using Fraction B. The optimized proportion related for Quil-A® 63:12:24 also resulted in the highest number of typical ISCOM structures for Fraction B. Though they did not inhibit viral replication for YFV, saponins were promising antiviral agents for CHIKV. The evaluation of the antiviral mechanisms may help understanding how they act in blocking viral replication. Regarding the ISCOM matrices, the biological properties of the structures with or without an antigen can be determined based on the optimized formulation ratios.

Inquérito soro-epidemiológico das infecções por Coxiella burnetii em bovinos da região Oeste do estado de São Paulo

A coxielose é uma zoonose associada à bactéria intracelular Coxiella burnetii sendo uma infecção comum em ruminantes e humanos de países asiáticos e europeus. No Brasil estudos epidemiológicos sobre a enfermidade são escassos. O presente estudo avaliou a presença de anticorpos anti-Coxiella (fase II) em 231 amostras de soro bovino provenientes de doze fazendas de leite e corte da região Oeste do estado de São Paulo, colhidas entre os anos de 2012-2018, que estavam mantidas em estoque sob congelamento a -25oC, utilizadas em outras rotinas diagnósticas. As amostras foram testadas pelo método ELISA, utilizando kit comercial importado (Bio-X - Diagnostics®). Do total avaliado, 176 (76,2%) animais foram sorologicamente positivos. Onze (91,6%) das 12 propriedades apresentaram ao menos um animal positivo, com prevalências variando entre 20 e 100%. Os resultados denotam alta prevalência da coxielose em bovinos de leite e corte na região Oeste Paulista, sugerindo que a enfermidade deve ser avaliada com relação aos potencias impactos na reprodução dos animais, incluindo diagnóstico diferencial com patógenos abortivos. Considerando-se o risco de transmissão zoonótica e o desconhecimento acerca da doença, as autoridades de saúde locais devem estar atentas a possíveis casos humanos subdiagnosticados ou confundidos com outras enfermidades similares.

Coxielose is a zoonosis associated with the intracellular bacterium Coxiella burnetii being a common infection in ruminants and humans from Asian and European countries. In Brazil, epidemiological studies on the disease are scarce. The present study evaluated the presence of anti-Coxiella antibodies (phase II) in 231 bovine serum samples from 12 dairy farms in the western region of the state of São Paulo, collected between the years of 2012-2018, which were maintained in stock under freezing at -25oC, used in other diagnostic routines. Samples were tested by the ELISA method using imported commercial kit (Bio-X - Diagnostics®). Of the total evaluated, 176 (76.2%) animals were serologically positive. Eleven (91.6%) of the 12 farms presented at least one positive animal, with prevalence varying between 20 and 100%. The results indicate a high prevalence of coxielose in milk and beef cattle in the western region of São Paulo, suggesting that the disease should be evaluated in relation to the potential impacts on animal reproduction, including differential diagnosis with abortive pathogens. Considering the risk of zoonotic transmission and lack of knowledge about the disease, local health authorities should be aware of possible human cases that are underdiagnosed or confused with other similar diseases.

Ocorrência de anticorpos anti-Coxiella Burnetii em caprinos e ovinos do Município de Petrolina PE

Coxiella burnetii é uma bactéria Gram-negativa intracelular, agente da Febre Q, uma doença que acometem animais de produção e o homem. Caprinos e ovinos são reservatórios importantes para a infecção humana. No Brasil, além de ser uma doença de difícil diagnóstico, estudos sobre o agente são escassos e a epidemiologia não é bem conhecida. O presente estudo objetivou estimar a soroprevalência de C. burnetii em caprinos e ovinos do município de Petrolina, localizada em região semiárida de Pernambuco, Nordeste. O sangue foi coletado de 412 caprinos e 403 ovinos, e os soros obtidos foram testados para Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para o antígeno de C. burnetii. A presença de anti-C. Burnetii foi determinada em aproximadamente 2,2% (9/412) e 2,2% (9/403) de caprinos e ovinos, respectivamente. Os títulos dos parâmetros variaram de 64 a 4.096 em caprinos e 64 a 65.536 em ovinos. Dados sanitários de ambas as espécies foram obtidos para avaliação de fatores de risco. Na análise univariada, as variáveis associadas com a ocorrência da infecção de C. burnetii em caprinos foram animais com raça definida, criação intensiva, instalação aprisco, não ocorrência de parto prematuro, presença de assistência veterinária, localidade C1 e área dentro dos projetos de irrigação; e em ovinos foram sexo masculino, animais com raça definida, idade > 4 anos, frequência de limpeza das instalações 1 por mês, venda de esterco na propriedade, ocorrência de parto prematuro, descendência fraca ao nascer, vacinação, assistência veterinária, localidade Rajada e área Sequeiro. Na análise multivariada, com as variáveis das duas espécies, não foi identificada nenhuma variável como fator de risco para infecção por C. burnetii. Este estudo revelou, pela primeira vez, a presença de anticorpos anti-C. burnetii em pequenos ruminantes do Nordeste do Brasil, sugerindo que caprinos e ovinos podem atuar como reservatórios do agente nesta região.

Coxiella burnetii is an intracellular Gram-negative bacterium, agent of Q fever, a disease that affects production animals and human. Goats and sheep are important reservoirs for human infection. In Brazil, besides being a difficult diagnosis, studies on the agent are scarce and epidemiology is not well known. The present study aimed to estimate the seroprevalence of C. burnetii in goats and sheep of the municipality of Petrolina, located in the semiarid region of Pernambuco, Northeast. Blood was collected from 412 goats and 403 sheep, and the sera obtained were tested by Indirect Immunofluorescence Assay (IFA) for C. burnetii antigen. The presence of anti-C. Burnetii was determined in approximately 2.1% (9/412) and 2.2% (9/403) of goats and sheep, respectively. Parameter titers ranged from 64 to 4,096 in goats and 64 to 65,536 in sheep. Sanitary data of both species were obtained for the evaluation of risk factors. In the univariate analysis, the variables associated with the occurrence of C. burnetii infection in goats were defined breed animals, intensive breeding, sheep herding, no preterm birth, presence of veterinary care, location C1 and area within irrigation projects; and sheep were male, animals with defined breed, age > 4 years, frequency of cleaning of facilities 1 month, sale of manure on the property, occurrence of preterm birth, weak offspring at birth, vaccination, veterinary care, Sequeiro area. In the multivariate analysis, with the variables of the two species, no variable was identified as a risk factor for C. burnetii infection. This study revealed, for the first time, the presence of indirect infection of C. burnetii in small ruminants from Northeast of Brazil, suggesting that goats and sheep may act as reservoirs of the agent in this region.

Ácaros trombiculídeos (Trombidiformes: Trombiculidae) de pequenos mamíferos dos estados de São Paulo e Paraná: estudos morfológicos e investigação da presença de Rickettsia

Para o Brasil foram reportadas 53 espécies de ácaros trombiculídeos. Destas, 5 espécies parasitam anfíbios, 6 espécies parasitam aves, 4 espécies parasitam répteis, 25 espécies parasitam roedores, 8 espécies parasitam marsupiais e 12 espécies parasitam outros mamíferos (incluindo humanos). Assim que os primeiros casos de Febre Maculosa Brasileira (FMB) foram diagnosticados em São Paulo nos anos 30, os ácaros hematófagos, como os trombiculídeos, foram sugeridos como potenciais vetores. No entanto, o papel desses ácaros na epidemiologia da riquetsiose não foi confirmado. Dessa forma, a situação fragmentária dos registros de ocorrência dos trombiculídeos, sua complexidade taxonômica e a escassez de informações sobre sua participação na epidemiologia de riquétsias, foram os principais motivos que levaram à proposição do presente estudo. Com isso, os ácaros que estão depositados nas coleções acarológicas do Instituto Butantan (IBSP), do Museu de Zoologia da USP (MZUSP) e da FIOCRUZ (CAVAIS-IOC), foram examinados e identificados. Igualmente, aqueles obtidos de roedores e marsupiais coletados em algumas localidades do estado de São Paulo e Paraná foram também identificados, bem como, investigados para a presença de Rickettsia spp. No total, foram identificadas as espécies Arisocerus hertigi, Eutrombicula sp. n., Kymocta brasiliensis, Quadraseta azulae, Q. brasiliensis, Q. mackenziei, Q. mirandae e Trombewingia bakeri. Além do encontro da nova espécie de Eutrombicula sp. n., foi ainda constatado que E. butantanensis e E. alfreddugesi são espécies distintas. As espécies Q. azulae, Q mackenziei e Q. mirandae, são assinaladas pela primeira vez no país. Com excessão de Q. brasiliensis em M. americana, todos os hospedeiros são novos registros para as espécies de ácaros examinados, bem como todas as localidades são novos registros de ocorrência. Assim, o número de espécies de trombiculídeos no Brasil aumentou para 58. Os ácaros investigados para Rickettia foram também preservados em lâminas, como testemunhos. Entretanto, nos espécimes analisados, a presença da bactéria não foi detectada.

For Brazil were reported 53 species of chigger mites. Of these, 5 species parasitize amphibians, 6 species parasitize birds, 4 species parasitize reptiles, 25 species parasitize rodents, 8 species occur on marsupials, and 12 species parasitize other wild mammals (including humans). In the 30s, as soon as the first cases of Brazilian Spotted Fever (BSF) in São Paulo were diagnosed, the haematophagous mites, such as chiggers, were suggested as potential vectors. However, the role of these mites in the epidemiology of the rickettsiosis was not confirmed. Thus, the fragmentary situation of the records of the chigger mites' occurrence, their taxonomic complexity, and the lack of information about their participation in the BSF epidemiology, were the main reasons that led to the present study proposition. So, the mites deposited in the collections of the Instituto Butantan (IBSP), Museu de Zoologia of USP (MZUSP) and FIOCRUZ (CAVAIS-IOC), were identified. Also, those obtained from rodents and marsupials collected in some localities of the state of São Paulo and Paraná were identified and investigated for the presence of Rickettsia spp. In total, the species Arisocerus hertigi, Eutrombicula n. sp., Kymocta brasiliensis, Quadraseta azulae, Quadraseta brasiliensis, Quadraseta mackenziei, Quadraseta mirandae, and Trombewingia bakeri, were identified. Besides of the new specie of Eutrombicula sp. n., the mites E. alfreddugesi and E. butantanensis were found to be distinct species. The species Q. azulae, Q. mackenziei, and Q. mirandae, are highlighted for the first time in the country. Except for Q. brasiliensis in M. americana, all other hosts are new records for the species of examined mites, as well as all locaties are also new occurences. Thus, the number of chigger mite species in Brazil increased to 58. The mites investigated to Rickettsia were also preserved in slides, as voucher. However, in the analyzed specimens, the bacteria could not be detected.