Desenvolvimento embrionário/fetal, placentação e glicosaminoglicanos no aparelho reprodutor feminino e na placenta / Embryonic/fetal development, placentation and glycosaminoglycans in the female reproductive tract and placenta

Background: Fetal attachments, placentation and embryonic development have been widely discussed in rodents such as agoutisand cavies, as well as research on glycosaminoglycans (GAGs) in rats and rabbits. Moreover, studies on buffalo, cattle and sheep aredescribed in ruminants, and work has also been reported in sheep with GAGs in placentoma. However, further studies are needed inthis regard, since there are reports of economic losses associated with reproductive failures described for cattle such as changes in thechorion and allantois, and in sheep in which changes between the transition from vitelline to allantois circulation have been discussed.Review: In relation to embryonic development, detailed studies have been described in rodents such as rats (12 days old), desertmouse (15 days old) and agoutis at 30 days. Macroscopic structures such as the cephalic region, nose, optic vesicle, cervical curvature, thoracic and pelvic limbs were observed, as well as microscopic structures such as the pituitary, lung, heart, brain cavity, liver,retina, and ossification regions. There are reports of buffalo and cattle studies in ruminants describing early embryonic development.However, the research in the case of sheep is limited, meaning there is only the ultrasound examination, such as gestational diagnosisand morphometric measurement of the embryonic vesicle. Still, studies with umbilical funicular and placental development of sheepwith different gestational ages can be highlighted. Regarding extraembryonic annexes, four important structures which contributeto embryonic maintenance have been reported. These are called the chorion, amnion, allantois and yolk sac, respectively, and areresponsible for originating the placenta, embryonic protection, collecting metabolic waste and early embryonic nutrition. In...

Desenvolvimento embrionário/fetal, placentação e glicosaminoglicanos no aparelho reprodutor feminino e na placenta / Embryonic/fetal development, placentation and glycosaminoglycans in the female reproductive tract and placenta

Background: Fetal attachments, placentation and embryonic development have been widely discussed in rodents such as agoutisand cavies, as well as research on glycosaminoglycans (GAGs) in rats and rabbits. Moreover, studies on buffalo, cattle and sheep aredescribed in ruminants, and work has also been reported in sheep with GAGs in placentoma. However, further studies are needed inthis regard, since there are reports of economic losses associated with reproductive failures described for cattle such as changes in thechorion and allantois, and in sheep in which changes between the transition from vitelline to allantois circulation have been discussed.Review: In relation to embryonic development, detailed studies have been described in rodents such as rats (12 days old), desertmouse (15 days old) and agoutis at 30 days. Macroscopic structures such as the cephalic region, nose, optic vesicle, cervical curvature, thoracic and pelvic limbs were observed, as well as microscopic structures such as the pituitary, lung, heart, brain cavity, liver,retina, and ossification regions. There are reports of buffalo and cattle studies in ruminants describing early embryonic development.However, the research in the case of sheep is limited, meaning there is only the ultrasound examination, such as gestational diagnosisand morphometric measurement of the embryonic vesicle. Still, studies with umbilical funicular and placental development of sheepwith different gestational ages can be highlighted. Regarding extraembryonic annexes, four important structures which contributeto embryonic maintenance have been reported. These are called the chorion, amnion, allantois and yolk sac, respectively, and areresponsible for originating the placenta, embryonic protection, collecting metabolic waste and early embryonic nutrition. In...(AU)

Agenesia unilateral del cuerno uterino y ovario derecho de gato: un informe de caso / Unilateral agenesis of the uterine horn and right ovary in cat: a case report / Agenesia unilateral do corno uterino e ovário direito em gata: relato de caso

El objetivo fue describir el hallazgo de agenesia uterina y ovárica en gata sometida a procedimiento para la mastectomía total de ovariohisterectomía y el tratamiento de la hiperplasia mamaria felina fibroepitelial. En este artículo se describe el caso de un felino, femenino, sin raza definida, de siete meses de edad con histórico de hinchazón de las mamas después de la administración de una dosis de anticonceptivos de acetato de medroxiprogesterona. De acuerdo con la historia clínica y el examen físico establecido el diagnóstico de la hiperplasia fibroepitelial felina. Para el tratamiento era la mastectomía completa y ovariohisterectomía (OSH). Durante la cirugía se comprobó la ausencia del cuerno uterino y ovario derecho. Este tipo de defecto puede pasar desapercibido porque los animales pueden no mostrar clínica y mostrar un comportamiento estral regular, siendo en su mayoría incidental encontrar y asume importancia, especialmente para la posibilidadde la aparición de diversas anomalías órganos con el mismo origen embriológico.(AU)

This study aimed to describe the finding of uterine and ovarian agenesis in cat after a total mastectomy procedure and ovariosalpingohisterectomy for treatment of feline mammary fibroepithelial hyperplasia. This paper described the case of a feline, female, without defined breed standard, seven months of age, it presented description of increase of mammary volume, after the administration of a dose of contraceptive medroxyprogesterone acetate. According to medical history and physical examination the diagnosis of feline fibroepithelial hyperplasia was established. For the treatment was opted to realize a complete mastectomy and ovaryhysterectomy (OSE). During the surgery was found the absence of the horn uterine and right ovary. This type of defect can go undetected since the animal may not present clinical and demonstrate the normal estrous behavior, and most often an incidental finding and assumes importance, especially for the possibility of the occurrence of various organs anomalies with the same origin embryological.(AU)

Objetivou-se descrever o achado de agenesia uterina e ovariana em gata submetida a procedimento de mastectomia total e ovariosalpingohisterectomia para tratamento de hiperplasia fibroepitelial mamária felina. O presente trabalho descreveu o caso de um felino, fêmea, sem padrão de raça definido, sete meses de idade com histórico de aumento de volume mamário após administração de uma dose de contraceptivo acetato de medroxiprogesterona. De acordo com a anamnese e o exame físico foi estabelecido o diagnóstico de hiperplasia fibroepitelial felina. Para o tratamento foi instituído a mastectomia total e a ovariosalpingohisterectomia (OSH). Durante o ato operatório constatou-se a ausência do corno uterino e ovário direito. Esse tipo de malformação pode passar despercebido já que o animal pode não apresentar alterações clínicas e demonstrar comportamento éstrico normal, sendo na maioria das vezes um achado incidental e assume importância, principalmente, pela possiblidade da ocorrência de anomalias de órgãos distintos com a mesma origem embriológica.(AU)

Agenesia unilateral del cuerno uterino y ovario derecho de gato: un informe de caso / Unilateral agenesis of the uterine horn and right ovary in cat: a case report / Agenesia unilateral do corno uterino e ovário direito em gata: relato de caso

El objetivo fue describir el hallazgo de agenesia uterina y ovárica en gata sometida a procedimiento para la mastectomía total de ovariohisterectomía y el tratamiento de la hiperplasia mamaria felina fibroepitelial. En este artículo se describe el caso de un felino, femenino, sin raza definida, de siete meses de edad con histórico de hinchazón de las mamas después de la administración de una dosis de anticonceptivos de acetato de medroxiprogesterona. De acuerdo con la historia clínica y el examen físico establecido el diagnóstico de la hiperplasia fibroepitelial felina. Para el tratamiento era la mastectomía completa y ovariohisterectomía (OSH). Durante la cirugía se comprobó la ausencia del cuerno uterino y ovario derecho. Este tipo de defecto puede pasar desapercibido porque los animales pueden no mostrar clínica y mostrar un comportamiento estral regular, siendo en su mayoría incidental encontrar y asume importancia, especialmente para la posibilidadde la aparición de diversas anomalías órganos con el mismo origen embriológico.

This study aimed to describe the finding of uterine and ovarian agenesis in cat after a total mastectomy procedure and ovariosalpingohisterectomy for treatment of feline mammary fibroepithelial hyperplasia. This paper described the case of a feline, female, without defined breed standard, seven months of age, it presented description of increase of mammary volume, after the administration of a dose of contraceptive medroxyprogesterone acetate. According to medical history and physical examination the diagnosis of feline fibroepithelial hyperplasia was established. For the treatment was opted to realize a complete mastectomy and ovaryhysterectomy (OSE). During the surgery was found the absence of the horn uterine and right ovary. This type of defect can go undetected since the animal may not present clinical and demonstrate the normal estrous behavior, and most often an incidental finding and assumes importance, especially for the possibility of the occurrence of various organs anomalies with the same origin embryological.

Objetivou-se descrever o achado de agenesia uterina e ovariana em gata submetida a procedimento de mastectomia total e ovariosalpingohisterectomia para tratamento de hiperplasia fibroepitelial mamária felina. O presente trabalho descreveu o caso de um felino, fêmea, sem padrão de raça definido, sete meses de idade com histórico de aumento de volume mamário após administração de uma dose de contraceptivo acetato de medroxiprogesterona. De acordo com a anamnese e o exame físico foi estabelecido o diagnóstico de hiperplasia fibroepitelial felina. Para o tratamento foi instituído a mastectomia total e a ovariosalpingohisterectomia (OSH). Durante o ato operatório constatou-se a ausência do corno uterino e ovário direito. Esse tipo de malformação pode passar despercebido já que o animal pode não apresentar alterações clínicas e demonstrar comportamento éstrico normal, sendo na maioria das vezes um achado incidental e assume importância, principalmente, pela possiblidade da ocorrência de anomalias de órgãos distintos com a mesma origem embriológica.

Histological characterization of reproductive tract and fetal annexes of the West Indian Manatee (Trichechus manatus) from Brazil / Caracterização histológica do trato reprodutor e anexos fetais do peixe-boi marinho (Trichechus manatus) do Brasil

The West Indian manatee (Trichechus manatus) is one of the most threatened aquatic mammals in Brazil, and is currently classified as "endangered" (MMA). The objective of this study was to characterize histologically the reproductive tract and fetal annexes of stranded manatees in northeastern Brazil. Tissue samples were collected from the reproductive tract of 23 manatees, which were fixed in 10% buffered formalin, processed using standard histological protocols and stained with hematoxylin eosin. We qualitatively described the histological and histomorphometric characteristics of each structure. Six ovaries were analyzed. In four ovaries, we found a large number of primordial and primary follicles. Two ovaries were different from the others: one had inflammatory infiltration and the other had a thickening in the cortex and absence of follicles. We also analyzed seven uteri (of which four were in the proliferative phase, two in the secretory phase, and one in the recovery phase), four placentas, one vagina, six testes (four were in the immature phase, one in the pubertal phase, and one in the mature phase), two epididymides, two penises, and one umbilical cord. The histological and morphometric findings in our work will support future analyses of the reproductive tract of T. manatus from Brazil.(AU)

O peixe-boi marinho (Trichechus manatus) é um dos mamíferos aquáticos mais ameaçados do Brasil e, atualmente é classificado como "em perigo" (MMA). O objetivo deste estudo foi caracterizar histologicamente o trato reprodutor e os anexos fetais de peixes-bois marinhos encalhados no Nordeste do Brasil. Foram coletadas amostras de tecidos do trato reprodutor de 23 peixes-bois marinhos (T. manatus), que foram fixadas em formol tamponado a 10%, processados usando protocolos histológicos padrão e corados com hematoxilina eosina. Foi realizada a descrição qualitativa das características histológicas e histomorfométricas de cada estrutura. Foram analisados seis ovários. Em quatro ovários, foi encontrado um grande número de folículos primordiais e primários. Dois ovários eram diferentes dos outros: um tinha infiltração inflamatória e o outro tinha um espessamento no córtex e ausência de folículos. Também foram analisadas sete amostras uterinas (das quais quatro estavam na fase proliferativa, duas na fase secretória e uma na fase de recuperação), quatro placentas, uma vagina, seis testículos (quatro na fase imatura, um na fase puberal e um na fase madura), dois epidídimos, dois pênis e um cordão umbilical. Os achados histológicos e morfométricos em nosso trabalho apoiarão futuras análises do trato reprodutivo de T. manatus do Brasil.(AU)

Histological characterization of reproductive tract and fetal annexes of the West Indian Manatee (Trichechus manatus) from Brazil / Caracterização histológica do trato reprodutor e anexos fetais do peixe-boi marinho (Trichechus manatus) do Brasil

The West Indian manatee (Trichechus manatus) is one of the most threatened aquatic mammals in Brazil, and is currently classified as "endangered" (MMA). The objective of this study was to characterize histologically the reproductive tract and fetal annexes of stranded manatees in northeastern Brazil. Tissue samples were collected from the reproductive tract of 23 manatees, which were fixed in 10% buffered formalin, processed using standard histological protocols and stained with hematoxylin eosin. We qualitatively described the histological and histomorphometric characteristics of each structure. Six ovaries were analyzed. In four ovaries, we found a large number of primordial and primary follicles. Two ovaries were different from the others: one had inflammatory infiltration and the other had a thickening in the cortex and absence of follicles. We also analyzed seven uteri (of which four were in the proliferative phase, two in the secretory phase, and one in the recovery phase), four placentas, one vagina, six testes (four were in the immature phase, one in the pubertal phase, and one in the mature phase), two epididymides, two penises, and one umbilical cord. The histological and morphometric findings in our work will support future analyses of the reproductive tract of T. manatus from Brazil.(AU)

O peixe-boi marinho (Trichechus manatus) é um dos mamíferos aquáticos mais ameaçados do Brasil e, atualmente é classificado como "em perigo" (MMA). O objetivo deste estudo foi caracterizar histologicamente o trato reprodutor e os anexos fetais de peixes-bois marinhos encalhados no Nordeste do Brasil. Foram coletadas amostras de tecidos do trato reprodutor de 23 peixes-bois marinhos (T. manatus), que foram fixadas em formol tamponado a 10%, processados usando protocolos histológicos padrão e corados com hematoxilina eosina. Foi realizada a descrição qualitativa das características histológicas e histomorfométricas de cada estrutura. Foram analisados seis ovários. Em quatro ovários, foi encontrado um grande número de folículos primordiais e primários. Dois ovários eram diferentes dos outros: um tinha infiltração inflamatória e o outro tinha um espessamento no córtex e ausência de folículos. Também foram analisadas sete amostras uterinas (das quais quatro estavam na fase proliferativa, duas na fase secretória e uma na fase de recuperação), quatro placentas, uma vagina, seis testículos (quatro na fase imatura, um na fase puberal e um na fase madura), dois epidídimos, dois pênis e um cordão umbilical. Os achados histológicos e morfométricos em nosso trabalho apoiarão futuras análises do trato reprodutivo de T. manatus do Brasil.(AU)

Isolation, culture, characterization and cryopreservation of stem cells derived from amniotic mesenchymal layer and umbilical cord tissue of bovine fetuses / Isolamento, cultura, caracterização e criopreservação de células tronco derivadas de camada amniótica mesenquimal e de tecido do cordão umbilical de fetuses bovinos

Stem cells are undifferentiated cells with a high proliferation potential. These cells can be characterized by their in vivo ability to self-renew and to differentiate into specialized cell lines. The most used stem cell types, in both human and veterinary fields, are the mesenchymal stem cells (MSC) derived from bone marrow and adipose tissue. Nowadays, there is a great interest in using stem cells derived from fetal tissues, such as amniotic membrane (AM) and umbilical cord tissue (UCT), which can be obtained non-invasively at delivery time. Due to the scarcity of studies in bovine species, the aim of this study was to isolate, characterize, differentiate and cryopreserve MSC derived from the mesenchymal layer of amniotic membrane (AM), for the first time, and umbilical cord tissue (UCT) of dairy cow neonates after assisted delivery (AD) and from fetus at initial third of pregnancy (IT) obtained in slaughterhouse. Cells were isolated by enzymatic digestion of the tissue fragments with 0.1% collagenase solution. Six samples of AM and UCT at delivery time and six samples of AM and UCT at first trimester of pregnancy were subjected to morphology evaluation, imunophenotype characterization, in vitro osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation and viability analysis after cryopreservation. All samples showed adherence to plastic and fibroblast-like morphology. Immunocytochemistry revealed expression of CD 44, NANOG and OCT-4 and lack of expression of MHC II in MSC from all samples. Flow cytometry demonstrated that cells from all samples expressed CD 44, did not or low expressed CD 34 (AM: IT-0.3%a, AD-3.4%b; UCT: 0.4%, 1.4%) and MHC II (AM: IT-1.05%a, AD-9.7%b; UCT: IT-0.7%a, AD-5.7%b). They were also capable of trilineage mesenchymal differentiation and showed 80% viability after cryopreservation. According to the results, bovine AM and UCT-derived cells, either obtained at delivery time or from slaughterhouse, are a painless and non-invasive source of MSC and can be used for stem cell banking.(AU)

As células tronco mesenquimais (CTMs) estão presentes na maioria dos tecidos adultos e possuem grande capacidade de multiplicação. Quando cultivadas in vitro são capazes de se auto renovar e dar origem a novos tipos celulares. As células tronco mais utilizadas, tanto na medicina humana como na medicina veterinária são as células tronco mesenquimais derivadas da medula óssea e do tecido adiposo. Atualmente, uma grande tendência para a utilização de CTMs obtidas de tecidos fetais, como a membrana amniótica (MA), matriz extravascular do cordão umbilical (TCU) e sangue do cordão umbilical (SCU) pode ser observada, já que estas fontes podem ser colhidas no momento do parto por uma técnica não invasiva. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi isolar, caracterizar, diferenciar e criopreservar CTMs obtidas de MA e TCU de fetos bovinos colhidos no momento do parto e de fetos do terço inicial da gestação em abatedouro-frigorífico. As células foram recuperadas por meio de digestão enzimática tecidual, realizada com solução de colagenase 0,1%. Foram colhidas amostras de MA e TCU no momento do parto (n=6) e de MA e TCU no terço inicial de gestação (n=6), as quais foram submetidas às análises morfológicas, imunofenotípica por imunocitoquímica e citometria de fluxo, diferenciações in vitro nas linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica e ainda, avaliação da viabilidade após a criopreservação por citometria de fluxo. Todas as amostras dos diferentes grupos demonstraram adesão ao plástico e morfologia fibroblastóide. No ensaio imunocitoquímico todas as amostras foram imunomarcadas para CD44, NANOG e Oct-4, com ausência de marcação para MHC II. Na análise imunofenotipica por citometria de fluxo, todas as amostras apresentaram marcação para CD44, ausência de marcação para ou baixíssima expressão de CD34 (MA: TI-0,3%a, PA-3.4%b; TCU: TI-0,4%, PA-1.4%) e nula ou baixa expressão de MHC II (MA: TI-1.5%a, PA-9.7%b; UCT: TI-0.7%a, PA-5.7%b. Apresentaram também capacidade de diferenciação in vitro nas três linhagens mesodermais e quando analisadas pós criopreservação por citometria de fluxo, todas as amostras apresentaram viabilidade de 80%. Estes resultados indicam que MA e TCU, obtidos tanto no momento de parto como em abatedouro, de fetos bovinos podem ser utilizados como fonte não invasiva e indolor de CTMs e possibilitam a formação de bancos de armazenamento de células.(AU)

Isolation, culture, characterization and cryopreservation of stem cells derived from amniotic mesenchymal layer and umbilical cord tissue of bovine fetuses / Isolamento, cultura, caracterização e criopreservação de células tronco derivadas de camada amniótica mesenquimal e de tecido do cordão umbilical de fetuses bovinos

Stem cells are undifferentiated cells with a high proliferation potential. These cells can be characterized by their in vivo ability to self-renew and to differentiate into specialized cell lines. The most used stem cell types, in both human and veterinary fields, are the mesenchymal stem cells (MSC) derived from bone marrow and adipose tissue. Nowadays, there is a great interest in using stem cells derived from fetal tissues, such as amniotic membrane (AM) and umbilical cord tissue (UCT), which can be obtained non-invasively at delivery time. Due to the scarcity of studies in bovine species, the aim of this study was to isolate, characterize, differentiate and cryopreserve MSC derived from the mesenchymal layer of amniotic membrane (AM), for the first time, and umbilical cord tissue (UCT) of dairy cow neonates after assisted delivery (AD) and from fetus at initial third of pregnancy (IT) obtained in slaughterhouse. Cells were isolated by enzymatic digestion of the tissue fragments with 0.1% collagenase solution. Six samples of AM and UCT at delivery time and six samples of AM and UCT at first trimester of pregnancy were subjected to morphology evaluation, imunophenotype characterization, in vitro osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation and viability analysis after cryopreservation. All samples showed adherence to plastic and fibroblast-like morphology. Immunocytochemistry revealed expression of CD 44, NANOG and OCT-4 and lack of expression of MHC II in MSC from all samples. Flow cytometry demonstrated that cells from all samples expressed CD 44, did not or low expressed CD 34 (AM: IT-0.3%a, AD-3.4%b; UCT: 0.4%, 1.4%) and MHC II (AM: IT-1.05%a, AD-9.7%b; UCT: IT-0.7%a, AD-5.7%b). They were also capable of trilineage mesenchymal differentiation and showed 80% viability after cryopreservation. According to the results, bovine AM and UCT-derived cells, either obtained at delivery time or from slaughterhouse, [...](AU)

As células tronco mesenquimais (CTMs) estão presentes na maioria dos tecidos adultos e possuem grande capacidade de multiplicação. Quando cultivadas in vitro são capazes de se auto renovar e dar origem a novos tipos celulares. As células tronco mais utilizadas, tanto na medicina humana como na medicina veterinária são as células tronco mesenquimais derivadas da medula óssea e do tecido adiposo. Atualmente, uma grande tendência para a utilização de CTMs obtidas de tecidos fetais, como a membrana amniótica (MA), matriz extravascular do cordão umbilical (TCU) e sangue do cordão umbilical (SCU) pode ser observada, já que estas fontes podem ser colhidas no momento do parto por uma técnica não invasiva. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi isolar, caracterizar, diferenciar e criopreservar CTMs obtidas de MA e TCU de fetos bovinos colhidos no momento do parto e de fetos do terço inicial da gestação em abatedouro-frigorífico. As células foram recuperadas por meio de digestão enzimática tecidual, realizada com solução de colagenase 0,1%. Foram colhidas amostras de MA e TCU no momento do parto (n=6) e de MA e TCU no terço inicial de gestação (n=6), as quais foram submetidas às análises morfológicas, imunofenotípica por imunocitoquímica e citometria de fluxo, diferenciações in vitro nas linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica e ainda, avaliação da viabilidade após a criopreservação por citometria de fluxo. Todas as amostras dos diferentes grupos demonstraram adesão ao plástico e morfologia fibroblastóide. No ensaio imunocitoquímico todas as amostras foram imunomarcadas para CD44, NANOG e Oct-4, com ausência de marcação para MHC II. Na análise imunofenotipica por citometria de fluxo, todas as amostras apresentaram marcação para CD44, ausência de marcação para ou baixíssima expressão de CD34 (MA: TI-0,3%a, PA-3.4%b; TCU: TI-0,4%, PA-1.4%) e nula ou baixa expressão de MHC II (MA: TI-1.5%a, PA-9.7%b; UCT: TI-0.7%a, PA-5.7%b. [...](AU)

Isolamento, caracterização e diferenciação de células-tronco mesenquimais do líquido amniótico equino obtido em diferentes idades gestacionais / Isolation, characterization and differentiation of mesenchymal stem cells derived from equine amniotic fluid obtained from different gestacional ages

O interesse nas pesquisas com células-tronco derivadas de anexos fetais de diversas espécies cresceu exponencialmente nas últimas décadas em virtude de serem fontes de células-tronco adultas com potencial de diferenciação em diversas linhagens celulares que apresentam pouca ou nenhuma imunogenicidade, apresentando-se assim como alternativa de grande importância para a formação de bancos celulares. Apesar do crescente interesse, os estudos para espécie equina ainda são escassos. O objetivo deste trabalho foi isolar, caracterizar e diferenciar células-tronco mesenquimais (CTMs) derivadas do líquido amniótico equino obtidas do terço inicial, médio e final da gestação (LA-CTMs), comparando suas características. Foram colhidas 23 amostras de líquido amniótico as quais foram submetidas às análises morfológica, imunocitoquímica, imunofenotípica por citometria de fluxo e às diferenciações osteogênica, adipogênica e condrogênica in vitro. Todas as amostras demonstraram adesão ao plástico e morfologia fibroblastóide. No ensaio imunocitoquímico as células de todos os grupos foram imunomarcadas para CD44, PCNA e vimentina com ausência de marcação para citoqueratina e Oct-4. Na citometria de fluxo observou-se a expressão de CD44 e CD90 e ausência de expressão de CD34, sendo que os marcadores CD44 e CD90 mostraram padrão de expressão decrescente em relação ao desenvolvimento gestacional. As amostras obtidas de todas as fases da gestação foram capazes de diferenciação nas linhagens osteogênica, condrogênica e adipogênica. Portanto, as células obtidas do líquido amniótico apresentaram características morfológicas, imunofenotípicas e potencial de diferenciação típicos das CTMs, demonstrando que a colheita pode ser realizada em qualquer fase gestacional. No entanto, mais pesquisas devem ser realizadas principalmente quanto à expressão de marcadores de pluripotencialidade (como o Oct-4) e ao seu potencial de diferenciação em linhagens extra mesodermais já relatados na literatura.(AU)

The interest in stem cells derived from fetal annexes of many species has exponentially increased during the last decades, because they are adult stem cell sources with potential of differentiation in several cell lineages; which present little or no immunogenicity and are an alternative with great importance for storage cell banks. Despite the rising interest, studies for the equine species are still rare. The aim of this study was to isolate, characterize and differentiate mesenchymal stem cells derived from equine amniotic fluid obtained from initial, middle and late third of gestation (AF-MSCs), and compare their results. Twenty three samples from equine amniotic fluid were evaluated by morphological, immunocytochemical and immunophenotypical (Flow cytometer) assays and osteogenic, adipogenic and chondrogenic in vitro differentiation. All samples demonstrated plastic adhesion and fibroblastoid morphology. The immunocytochemical assay demonstrated cells from all the studied groups were positive for CD44, PCNA and vimentin and negative for cytokeratin and Oct-4. Flow cytometry demonstrated expression of CD44 and CD90 and no expression of CD34, where CD44 and CD90 markers presented decreasing pattern of expression in relation to the gestational development. All samples collected from all gestational phases were capable to differentiate in osteogenic, chondrogenic and adipogenic lineages. Thus, cells obtained from equine amniotic fluid presented morphological and immunophenotypical characteristics and potential of differentiation typical of MSCs showing that the collection can be performed at any stage of pregnancy. However, more studies should be performed about the expression of pluripotent markers as Oct-4 and the differentiation potential for extra mesodermal lineages prior demonstrated in the literature.(AU)

CARACTERIZAÇÃO HISTOLÓGICA DO TRATO REPRODUTOR E ANEXOS FETAIS DO PEIXE-BOI-MARINHO (Trichechus manatus, Linnaeus 1758) NO BRASIL

O peixe-boi marinho (Trichechus manatus) é um dos mamíferos aquáticos mais ameaçados do Brasil, sendo classificado como Em perigo na Lista Nacional Oficial de Espécies da Fauna Ameaçadas de Extinção. Para desenvolver estratégias efetivas de conservação de espécies ameaçadas, como o peixe-boi-marinho, é essencial entender sua história de vida e biologia reprodutiva. O objetivo deste estudo foi caracterizar histologicamente o trato reprodutor e os anexos fetais de peixes-bois-marinhos machos e fêmeas encalhados no nordeste do Brasil. Foram utilizadas amostras de tecidos do trato reprodutor de 23 espécimes, sendo 14 fêmeas e nove machos, de distintas faixas etárias, que encalharam mortos, morreram em reabilitação ou nasceram em cativeiro entre julho de 1995 e outubro de 2016. Os tecidos do trato reprodutor foram fixados em formol tamponado a 10%. Em seguida foram obtidas amostras teciduais de aproximadamente 2cm de espessura. Posteriormente, os fragmentos obtidos foram processados em rotina histológica habitual e submetidos à coloração histológica com Hematoxilina-Eosina. Os fragmentos de testículo, pênis, cordão umbilical e placenta foram corados, posteriormente, também com Tricrômico de Masson. Durante a avaliação foi realizada a descrição qualitativa das características histológicas de cada estrutura analisada, bem como avaliadas as características histomorfométricas. Foram analisados seis ovários, em nenhum foi observado corpo lúteo ou corpo albicans, em quatro foram observados grande quantidade de folículos primordiais e primários e dois ovários diferiam dos demais, pois um possuía infiltrado inflamatório e outro possuía um espessamento no córtex e ausência de folículos. Foram analisados sete úteros, com quatro em fase proliferativa, dois em fase secretória e um em fase de recuperação; quatro placentas; uma vagina; seis testículos, dos quais quatro se encontraram na fase imatura, um na fase púbere e um na fase madura; dois epidídimos; dois pênis e um cordão umbilical. Os achados histológicos e as medições desta pesquisa servirão como subsídios para futuras análises do trato reprodutor de T. manatus do Brasil. Salienta-se que este trabalho é o primeiro na descrição das características histológicas dos tecidos do trato reprodutor, placenta e cordão umbilical desta espécie, sendo essas características similares às conhecidas a de outros mamíferos aquáticos.

The West Indian manatee (Trichechus manatus) is one of the most threatened aquatic mammals in Brazil, being classified as "Endangered" in the Official National List of Endangered Species. To develop effective conservation strategies for endangered species, such as the manatee, it is essential to understand their life history and reproductive biology. The objective of this study was to characterize the reproductive tract and the fetal annexes of male and female manatees stranded in northeastern Brazil. Tissue samples from the reproductive tract of 23 specimens were used, of which 14 females and 9 males of different age groups who stranded dead, died in rehabilitation or were born in captivity, between July 1995 and October 2016. The tissues of the reproductive tract were fixed in 10% buffered formalin. Tissue samples of approximately 2 cm of thickness were then obtained. Subsequently, the obtained fragments were processed in normal histological routine and submitted to histological staining with Hematoxylin Eosin. The fragments of testis, penis, umbilical cord and placenta were stained later with Massons trichrome too. During the evaluation, the qualitative description of the histological characteristics of each analyzed structure was performed, as well as the histomorphometric characteristics were evaluated. Six ovaries were analyzed, and no corpus luteum or corpus albicans were observed, in four of them, a large number of primordial and primary follicles were observed, and two ovaries differed from the others, since one had inflammatory infiltrate and the other one had a thickening in the cortex and absence of follicles. Seven uterus, four in the proliferative phase, two in the secretory phase and one in the recovery phase were analyzed. Four placentas; a vagina; six testis, four of which were found in the immature phase, one in the pubertal phase, and one in the mature phase; two epididymides; two penises and one umbilical cord were also analyzed. The histological findings and the measurements of this research will serve as subsidies for future analyzes of the reproductive tract of T. manatus in Brazil. It should be noted that this work is the first to describe the histological characteristics of the reproductive tract, placenta and umbilical cord tissues of this species, these characteristics being similar to those of other aquatic mammals.

Fetal membranes stem cells application in pets

Background: Stem cells are precursor cells that have the capacity for self-renewal and could generate cells with characteristics similar to cells and differentiation, generating varied cell lines. Considering the plasticity of cells can be classified into totipotent, pluripotent or multipotent. According to the isolation period, the stem cells can be classified as embryonic, fetal and adult. In the embryo stage are considered totipotent because they can rebuild any tissue in the body and adulthood are considered multipotent, since they have a more limited plasticity. The fetal tissues and the fetus is a potential source for stem cells, since they expand more rapidly compared to the cells after birth. Stem cells of fetal membranes are derived from extraembryonic tissues with high capacity to differentiate into various tissues. The cord blood stem cells have mesenchymal and hematopoietic, and mesenchymal cells have the potential to proliferate and differentiate into multiple cell lineages. The yolk sac in dogs is morphologically composed of three layers: a single layer of endoderm, a simple mesothelium, and intermediate to them, the vascular mesenchyme. Work identified a population of pluripotent cells in the yolk sac can differentiate into hematopoietic cells, however, can be isolated mesenchymal stem cells. In this review we aim to focus new isolations of cells from umbilical cord blood and yolk sac of dogs, reviewing the main literature on this species. The importance of using dogs out of work has intensified in recent years, since many diseases can manifest itself in a similar way to humans. Additionally, the dog is a pet, and interest in the treatment of diseases and improved quality of life of this species has been accentuated in veterinary medicine. Thus, identifying the cellular sources in the dog opens new horizons for preclinical studies and new therapies for veterinary medicine. Review: This study is related to morphological biology multipotent stem cells, focusing its expansion and use in cell therapy in animal models that have different pathologies. A widely studied model for muscular dystrophy is the GRMD (Golden Retriever Muscular Dystrophy), which is homologous to DMD (Duchenne Muscular Dystrophy) that affects humans. It is a recessive genetic disease, X chromosome which affects approximately 1 in every 3500 boys. It is characterized by a progressive muscle degeneration, resulting from the absence or reduction in the production of dystrophin protein present in the sarcoplasmic membrane of muscle fibers. Conclusion: The use of cells derived from fetal tissue are strong candidates for veterinary regenerative medicine, since they have high capacity for cellular differentiation. The use of fetuses and fetal tissues of humans still has limitations, so the dog is a viable alternative for studies of fetal stem cells. Thus, it is extremely important to know the characteristics of morphology and proliferation of cells derived from fetuses and fetal annexes canines, including yolk sac and umbilical cord as well as know the feasibility of clinical application of these cells in preclinical testing in animal models and eventually in human medicine, thus contributing to regenerative medicine.

Evolução morfométrica dos anexos embrionários e fetais bovinos obtidos por monta natural, com 10 a 70 dias da gestação / Biometrics evolution of the embryonic and fetal annexes in cows obtained by natural mating, at 10 to 70 days of gestation

O período inicial da gestação de bovinos é caracterizado por grandes perdas embrionárias. Considerando a importância deste fator no âmbito da reprodução animal foram estudados os anexos embrionários e fetais bovinos fecundados por monta natural de 15-70 dias de gestação, com o objetivo de estabelecer parâmetros morfométricos da placenta na fase inicial da gestação. Com uso de um paquímetro foram realizadas mensurações do comprimento (crânio caudal), largura (latero lateral) e altura (dorso ventral) das membranas corioalantóide e amniótica. O início da formação dos cotilédones foi observado e quantificado, assim como, o peso placentário. O peso médio do saco gestacional aumentou com o evoluir da idade gestacional, entretanto, o crescimento foi acelerado a partir de 20-30 dias de gestação. O comprimento crânio caudal e dorso ventral da membrana corioalantóide e do âmnio apresentaram crescimento lento e gradual com o evoluir dos períodos gestacionais analisados. Com 30-40 dias de gestação, os primeiro cotilédones já eram visualizados e contatos com facilidade na superfície coriônica. Os períodos de crescimento coincidiram com os maiores índices de perdas gestacionais em bovinos. Os parâmetros aqui analisados poderão servir para futuras investigações dos anexos embrionários de organismos manipulados em laboratório.(AU)

The main goal of this morphometrical study was to characterize the development of the extra-embryonic membranes of 15 to 70-day-old bovine embryos obtained by natural mating. With a millimeter paquimeter the cranio-caudal, latero-lateral and dorso-ventral measurements of chorion and amnion were determined. The development of the cotyledons and weight of the gestational sac were observed and quantified. The weight of the gestational sac increased during gestation; however, the growth was faster then 20 to 30 days. The cranial-caudal and dorsal-ventral length of the choriallantois and the amnion developed slowly and gradually with progress of the gestational period, and the cranio-caudal length decreased after 50 to 60 days of gestation, increasing in the next period. After 30 to 40 days of gestation, the first cotyledons were visualized and counted easily in the chorionic surface. The growth periods were the same of the main gestational losses in cattle. The parameters analyzed could be useful for investigations of extra-embryonic membranes in organisms manipulated in the laboratory.(AU)

Medicina veterinária regenerativa: multipotencialidade das células da membrana amniótica e do saco vitelino no modelo equino (Equus caballus, Linnaeus 1758) / Veterinary regenerative medicine: multipotential of the cells amniotic membrane and yolk sac the model horse

As amostras foram obtidas de éguas adultas, totalizando 42 animais, sendo 30 destinados à descrição e caracterização da placenta e anexos embrionários/fetais. Os outros 12 animais foram destinados ao cultivo celular das membranas vitelinas e amnióticas. Os embriões foram mensurados obtendo Crow-Rump e fixados para descrição morfológica. Os fragmentos vitelínicos e amnióticos foram cultivados em meio α-MEM, suplementado com 20% de soro fetal bovino, 1% de aminoácidos não essenciais, 1% de glutamina e 1% de antibiótico, incubados a 37º C e 5% de CO2. Quanto ao material obtido, o córion é a membrana mais externa ao embrião, morfologicamente constituído por epitélio colunar e mesênquima ricamente vascularizado e rico em fibras colágenas. O alantóide é bem desenvolvido e vascularizado, constituído por epitélio simples pavimentoso e por microvilosidades. O âmnio é uma membrana avascular e delgada constituída por uma única camada de células pavimentosas, membrana basal e mesênquima. O saco vitelino exibe um aspecto amarelado com vasos na superfície, constituído por duas camadas celulares entremeadas por mesênquima vascularizado. A cinta coriônica aparece como um halo ao redor do concepto no ponto onde as membranas do alantóide e saco vitelino se encontram. Em relação aos embriões em geral, notamos a presença do prosencéfalo em formação, arcos branquiais, vesícula óptica pigmentada, neuróporo cranial aberto expondo o chamado 4º ventrículo encefálico, e uma flexura cervical acentuada. Notamos a impressão cardíaca; os membros torácicos e pélvicos apresentam formato de "remo". Nos fetos em geral observamos as cavidades orais e nasais delimitadas externamente; o crescimento do pavilhão auricular e início do crescimento da orelha externa; formação do aparelho ungueal nos membros torácicos e pélvicos. As costelas tornam-se mais proeminentes e algumas estruturas já apresentam ossificações Morfologicamente às células vitelinas e amnióticas exibem morfologia fibroblastóide e epitelióide. As células progenitoras isoladas do saco vitelino e do âmnio, na quinta passagem, demonstraram cariótipo normal (2n=64). A população de células do saco vitelino apresentou um crescimento progressivo, não constante até a quinta passagem, e em P10 um declínio acentuado. Para a membrana amniótica, a população celular apresentou um crescimento constante, não linear, até a oitava passagem, e em P10 um declínio acentuado. À imunocitoquímica, as células do saco vitelino e da membrana amniótica, apresentaram-se imunopositivas para: Oct-4, Nanog, SSEA-3, vimentina, citoqueratina 18 (ck18) e PCNA. Tanto as células do saco vitelino como as da membrana amniótica expressaram os seguintes marcadores: CD 45, CD 105, Oct3/4, Nanog, CD 34 e Stro-1. As duas linhagens celulares demonstraram capacidade de diferenciação em adipócitos, osteócitos e condrócitos e não apresentaram potencial carcinogênico em camundongos NUDE

The samples were obtained from adult mares, totalizing 42 animals, being 30 for the description and characterization of the placenta and embryonic annexes / fetus. The other 12 animals were used for the cell culture of amniotic membranes and yolk sac. The embryos were measured obtaining Crow-Rump and fixed for morphological description. The vitelline and amniotic fragments were cultured in α-MEM, supplemented with 20% fetal bovine serum, 1% nonessential amino acids, 1% glutamine and 1% antibiotic, incubated at 37 º C and 5% CO2. As for the material obtained, the chorion is the outer embryo membrane, consisting of morphologically columnar epithelium and mesenchyme richly vascularized and rich in collagen fibers. The allantois is well vascularized and developed, consisting of a simple squamous epithelium and with the presence of microvilli. The amnion is an avascular membrane consisting of a single thin layer of squamous cells, basal membrane and mesenchyme. The yolk sac exhibits a yellowish appearance with surface vessels, consisting of two cell layers interspersed with a vascularized mesenchyme. The chorionic girdle appears as a halo around the fetus at the point where the allantoid membranes and the yolk sack meet. Regarding embryos in general, the presence of the forebrain in formation, branchial arches, pigmented optic vesicle, open cranial neuropore exposing the so called 4th encephalic ventricle, and pronounced cervical flexure were noticed. The cardiac impression was observed and the fore and hindlimbs had a \"paddle\" shape. Fetuses in general had the nasal and oral cavities externally defined; presented the growth of the auricular pavilion and early growth of the external ear; and formation of the nail apparatus in fore and hindlimbs. The ribs become more prominent and some structures already presented ossification. Morphologically the yolk and amniotic cells was presented as fibroblastoid and epithelioid. The progenitor cells isolated from the yolk sac and the amnion, in the fifth passage, showed normal karyotype (2n = 64). The cells population in the yolk sac showed a progressive growth, not constant until the fifth passage, and a marked decline in P10. For the amniotic membrane, the cell population showed a constant growth, not linear, until the eighth passage, and a marked decline in P10. In immunocytochemistry, the yolk sac cells and amniotic membranes presented themselves as immunopositive for: Oct-4, Nanog, SSEA-3, vimentin, cytokeratin 18 (CK18) and PCNA. Either the yolk sack as the aminiotic membranes expressed the markers CD 45, CD 105, Oct3 / 4, Nanog, CD 34 and Stro-1. Both cell lines demonstrated the capacity to differentiate into adipocytes, osteocytes and chondrocytes and had no carcinogenic potential in NUDE mice

Biochemical and immunological profiles during the parturition period in dairy cows with and without placental retention / Perfis bioquímicos e imunológicos no período peripartal de vacas leiteiras com e sem retenção de placenta

Blood biochemical profiles of 16 Holstein cows with and 23 without placental retention (PR), all on the same diet with 18 % of protein and 70% of total digestive nutrients (NDT), were compared. Blood samples were taken five times from all animals: on parturiton day (PD) minus 15 days or PD-15; PD-5 days; PD; PD+3 days and PD+5 days. Cows with PR had higher levels of cholesterol (p 0.01); phosphorus (P) (p 0.01); alkaline phosphatase (ALP) (p 0.05); lactic dehydrogenase (LDH)(p 0.05); aspartateaminotransferase (AST), blood urea nitrogen (BUN) and acid phosphatase (ACP) and lower levels of calcium (Ca). Total protein were normal in both groups but immunoglobulins were lower in cows with PR, probably due to a failure in normal production of IgM, IgG (p 0.01) and IgA (p 0.01) on cholostrum and milk (p 0.01) when compared to those without PR. On calving day, cows with PR had neutrophilia, monocytosis and lymphocytosis; 87.5% had endometritisand 62.5% acute mastitis. These data suggest a relationship between immunoglobulin production capacity, circulating white blood cells, uterus and mammary gland inflamation with placental retention, making possible a forecast of fetal annexes retention as far as 15 days before parturition in milking cows.

Foram determinados alguns perfis bioquímicos e imunológicos em 16 vacas holandesas com retenção de placenta (RP) e 23 sem retenção (NRP) de 241 partos observados. A alimentação dos animais era baseada em forragens cultivadas no inverno e verão, silagem de milho, feno e concentrado com 18,0% de proteína bruta e 70,0% de nutrientes digestíveis totais. As determinações dos componentes plasmáticos no período peripartal (dias -15, -5, dia do parto, +3 e +5) revelaram maiores concentrações de colesterol (p 0,01), fósforo (p 0,01), fosfatase alcalina (p 0,05), desidrogenase láctica (p 0,05), aspartatoaminotransferase, uréia, fosfatase ácida e menores níveis de cálcio em vacas RP. As proteínas totais estiveram dentro dos padrões fisiológicos em ambos os grupos. Os níveis de imunoglobulinas demonstraram a incapacidade das vacas RP de produzir IgM, IgG sangüíneas (p 0,001) e IgA no colostro e no leite (p 0,01) quando comparadas às vacas NRP. As RP apresentaram, no dia da parturição, quadro de neutrofilia, eosinofilia, monocitose e linfocitose, revelando imunodepressão periférica, quando comparadas com as NRP. Observaram-se complicações nas vacas RP, com 87,5% de endometrite e 62,5% de mastite aguda, demonstrando que estas eram mais susceptíveis. Os resultados reforçam a existência de relação estreiw entre a produção de imunoglobulinas, número de leucócitos,

Aspectos morfológicos da placenta e anexos fetais da paca (Agouti paca, Linnaeus 1766) / Morphological aspects of the placenta and fetal annexes of Paca (Agouti paca, L.,1766)

Neste trabalho realizamos a análise macroscópica das estruturas do funículo umbilical e da placenta, a análise macroscópica da vascularização funicular e placentária, e a análise à microscopia de luz dos componentes funiculares da paca, procurando melhor conhecer a morfologia reprodutiva desta espécie. Para tanto, utilizamos nove pacas fêmeas, provenientes do Setor de Animais Silvestres do Departamento de Zootecnia da Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias de Jaboticabal - UNESP, nos estágios inicial, intermediário e final de prenhez, os animais tiveram o corno uterino gestante retirado cirurgicamente. Com o útero aberto identificamos as membranas fetais e fizemos a mensuração do funículo umbilical e da distância céfalo-coccígea fetal, em seguida identificamos os vasos funiculares que foram injetados com látex do tipo Neoprene corado com pigmento específico; após injeção, esses vasos foram dissecados para a visualização da disposição das artérias e veias na placenta. Três animais foram direcionados à análise microscópica do funículo umbilical que depois de colhido foi seccionado em porções proximal, intermediária e distal que foram fixadas e sofreram processamento histológico usual com posterior colorações em hematoxilina- eosina e tricromico de Masson. Constatamos nestes animais uma placenta de formato discoidal globoso e as membranas fetais constavam de cório-alantóide e âmnio. As médias das medidas dos comprimentos dos funículos umbilicais e das distâncias cefalococcígeas foram de 7,31cm e 14,5 cm respectivamente. Macroscopicamente observamos no funículo umbilical a presença de duas artérias umbilicais, uma veia umbilical, o alantóide, vasos onfalomesentéricos; microscopicamente, observamos que as artérias e veias umbilicais eram musculares, o ducto alantóide era constituído por epitélio bi-estratificado cúbico e, essas estruturas, juntamente com os vasos onfalomesentéricos estavam englobadas pela gelatina de Wharton, também se observou a presença de vasa vasorum. A dissecação dos vasos umbilicais injetados indicou que as veias se localizavam basicamente na periferia da placenta enquanto as artérias ocupavam posição centralizada

On this research we peform the macroscopic analysis of the umbilical cord and placenta structure, the macroscopic analysis of umbilical cord and placenta valcularization, and analysis with light microscopy of umbilical cords constituents of paca, aiming to increase the knowledge about the reproductive morphology in this species. To achieve that we used nine female pacas, which came from the Wild Animal Sector of the Zootechnology Departament at the Faculty of Agrarian and Veterenary Sciences of Jaboticabal - UNESP -, in early, entermediary and late phases of pregnancy. The animals had their pregnanty uterine horn taken out on surgery. After opening the uterus, we identified the fetal membranes and measured the umbilical cord and the cephalococcyga distance. Than we identified the umbilical cords vessels with were injected with latex (Neoprene®) dyed by specific pigment; after the injections, the vessels were dissected for visualization of the disposition of arteries and veins in the placenta. Three animals were carried out to microscopic analysis of the umbilical cord that , after the collect, was sectioned in proximal, intermediary and distal portions wich were set and than went to an usual histological processing with furthering colorations with hematoxilin-eosin and Masson tricome method. In these animals we noticed a discoid globular placenta, and the fetal membranes were constituted by chorion-alantois and amnion. The averages of the umbilical cords length and the crown-rump distance were 7,31 cm and 14,5 cm respectively. Macroscopically, we noticed the presence of two umbilical cord arteries, one umbilical cord vein, the allantois and onfalomesenteric vessels; microscopically, we noticed that the umbilical cord arteries and veins were muscly, the alantoic duct was formed by a cubic double layer epthelium and this sctructures, together with the onfalomezenteric vessels, were surrounded by the Wharton´s gelatin. The presence of vasa vasorum was also observed. The dissection of the injected umbilical cord vessels pointed that veins were basically placed that the placenta periphery and arteries presented a central position