Níveis de progesterona e os parâmetros reprodutivos no período periovulatório de vacas Nelore submetidas ao protocolo de IATF / Progesterone levels and reproductive parameters in the periovulatory period of Nellore cows under FTAI protocol

Background: Fixed Time Artificial Insemination (FTAI) has achieved a significant evolution in the last 18 years, however, despite the progress achieved by modern FTAI programs, the conception rates obtained are still low. Therefore, this study aimed to evaluate the interrelation between progesterone levels in the periovulatory period and reproductive parameters of Nellore cows submitted to an FTAI protocol. Materials, Methods & Results: On a random day, called day 0 (D0), 57 cows received a P4 device associated with the intramuscular (IM) application of 2.0 mg of estradiol benzoate. On D9, the P4 devices were removed and then were administered 500 µg of cloprostenol sodium IM; 0.6 mg of estradiol cypionate IM and 300 IUI of Equine Chorionic Gonadotrophin IM. Blood samples were collected for the determination of serum P4 concentrations on D9 and D11 of the protocol. The evaluations of follicular diameter (DFOL), follicular wall area (AFOL) and the vascularization area of the follicle wall (VFOL) were carried out on D11 using B-mode ultrasonography examination and colour Doppler, and then the artificial inseminations were performed. The evaluation of the corpus luteum diameter (CLD), of the total corpus luteum area (CLA), of the area of corpus luteum vascularization (CLV) and blood sampling for determination of postovulatory P4 levels (Post-P4) were performed on D24. For the analysis of the P4 concentration the chemiluminescence method was used, with a sensitivity of 0.1 ng/mL. According to the P4 concentrations on D11, cows were divided into 2 groups, LOW LEVELS OF P4 and HIGH LEVELS OF P4. The diagnosis of pregnancy was performed using transrectal ultrasonography on D45, at this point the cows were divided into 2 groups, PREGNANT and NON-PREGNANT. The correlation between DFOL and P4 dosage on D11 was moderate, negative and significant and between the AFOL and the serum P4 levels on D9, was moderate, negative and significant. As for the other correlations between follicular and luteal parameters and serum P4 levels, these were low to moderate, negative and not significant. Cows in the LOW LEVELS OF P4 group had significantly larger diameter and follicular areas than the cows in the HIGH LEVELS OF P4 group, the other follicular and luteal parameters showed no statistical difference. Of the total 57 cows that were inseminated, 30 cows became pregnant. Cows in the PREGNANT group had serum P4 levels on D9 equivalent to that obtained by the NON-PREGNANT group. However, at D11 the cows that became pregnant presented significantly lower serum P4 levels than cows that did not become pregnant. Discussion: The results of the interrelation between follicular parameters and P4 levels obtained in the present study, pointed out that the lower the levels of P4, the higher the follicular parameters, corroborating with other authors. Thus, larger preovulatory follicles provided high ovulation rates. Periovulatory serum P4 levels did not significantly affect the morphofunctional parameters of the CL. Such findings may be justified by high periovulatory P4 levels resulting from less efficient luteolysis, exert a negative effect on the results of FTAI protocols, because progesterone inhibits the release of LH pulses. It is concluded that lower periovulatory P4 levels established a favourable condition for follicular development and fertility, however, morphofunctional parameters of the corpus luteum were not affected.

Reproductive performance of fixed-time artificial insemination in heifers supplemented with a homeopathic complex / Desempenho reprodutivo à inseminação artificial em tempo fixo em novilhas suplementadas com complexo homeopático

For this study, ½ blood Nelore × Aberdeen Angus heifers (n = 40; 14 months) were divided into two groups: control (n=20; 310 kg) and Pró-Cio (n=20; 304 kg). For Pró-Cio group, 20g of homeopathic product (Pró-cio®, Real H, Campo Grande, Brazil) was supplied together with corn eighteen days prior (D-18) to the beginning of the fixed-time artificial insemination protocol (FTAI). On D0, all females received an intravaginal P4 device and 2 mg BE. On D5, the AFC was assessed by ultrasound and blood was collected for AMH dosage. On D8, P4 device was removed; 300 IU eCG, 0.530 mg of cloprostenol sodium and 0.5 mg of EC were administered; an estrus-identifying adhesive was fixed at the tail insertion and the diameter of the dominant follicle (DF) was measured. On D10, all heifers were inseminated, estrus manifestation was assessed and the preovulatory follicle (POF) was measured. On D20, the CL area was measured and blood flow was assessed using Doppler ultrasound. Data were analyzed by Student, Mann-Whitney or Friedman test. The rates of heat expression, ovulation, and blood flow score with Doppler were analyzed using Fisher's exact test and pregnancy rate by binary logistic regression model (P ≤ 0.05). There was no difference in AFC or AMH dosage (P > 0.05). Pró-Cio group had greater diameters of the DF (9.94 ± 0.42 mm) and POF (11.61 ± 0.56 mm) than the controls (DF: 7.72 ± 0.34 mm and POF: 9.91 ± 0.37 mm), as well a larger CL area (3.26 ± 0.26 versus 2.35 ± 0.16 cm2) and a higher mean CL vascularization score (3.06 versus 2.26; P < 0.05). There was no significant difference (P > 0.05) between estrus manifestation or conception rate for control and Pró-Cio groups. Heifers supplemented with the homeopathic product showed larger follicular diameters at the end of the FTAI protocol and CL with better blood flow scores compared to the control group.

Para esse estudo, novilhas ½ sangue Nelore x Aberdeen Angus (n = 40; 14 meses) foram divididas em dois grupos: Controle (n = 20; 310 kg) e Pró-cio (n = 20; 304 kg). Para o grupo Pró-Cio, 20 g/animal de produto homeopático (Pró-cio®, Real H, Campo Grande, Brazil) foi fornecido juntamente com o milho dezoito dias antes (D-18) de inicar o protocolo de inseminaçãoa artificial em tempo-fixo (IATF). No D0, todas as fêmeas receberam um dispositivo intravaginal de P4 e 2 mg BE. No D5, avaliou-se a contagem de folículos antrais (CFA) por ultrassonografia e realizou-se coleta de sangue para dosagem de AMH. No D8, procedeu-se a retirada do dispositivo de P4; aplicação de 300 UI de eCG, 0,530 mg de cloprostenol sódico e 0,5 mg de CE; um adesivo identificador de estro foi fixado na inserção da cauda e foi feita a mensuração do diâmetro do folículo dominante (FD). No D10, todas as novilhas foram inseminadas, foi realizada a avaliação da manifestação de estro e mensuração do folículo pré-ovulatório (FPO). No D20, realizou-se mensuração da área e avaliação do fluxo sanguíneo do CL por ultrassonografia Doppler. Os dados foram analisados pelos testes de Student, Mann-Whitney ou Friedman. As taxas de expressão de estro, ovulação e escore de fluxo sanguíneo com Doppler foram analisadas usando o teste exato de Fisher e taxa de prenhez pelo modelo de regressão logística binária (p ≤ 0,05). Não houve diferença na CFA nem na dosagem de AMH (p > 0,05). O grupo PróCio apresentou maior diâmetro do FD (9,94 ± 0,42 mm) e FPO (11,61 ± 0,56 mm) em relação ao controle (FD: 7,72 ± 0,34 mm e FPO: 9,91 ± 0,37 mm), além de maior área do CL (3,26 ± 0,26 versus 2,35 ± 0,16 cm2; p < 0,05) e maior escore de vascularização médio do CL (3,06 versus 2,26; p < 0,05). Não houve diferença (p > 0,05) na taxa de manifestação de estro e nem na taxa de concepção entre os grupos Controle e Pró-Cio, respectivamente. Novilhas suplementadas com o produto homeopático apresentaram maiores diâmetros foliculares ao final do protocolo de IATF e CL com melhores escores de fluxo sanguíneo em relação ao grupo controle.

Efeito da expressão do estro sobre características morfofuncionais foliculares, luteais e fertilidade em fêmeas Bos indicus sincronizadas para IATF / Effect of the estrus expression on follicular and luteal morphofunctional characteristics and fertility in Bos indicus females synchronized for FTAI

Background: Recent studies have been conducted with the aim of improving the fertility rates in the FTAI programsin beef females. The observation of the estrus expression constitutes an important indicator of fertility in zebu females.Therefore, this work has as an objective to evaluate the impact of the estrus expression on the follicular, luteal and fertilitymorphofunctional characteristics of Nelore females synchronized for FTAI.Materials, Methods & Results: Sixty five lactating female Nelore (Bos taurus indicus) were used. On a random day, denominatedday 0 (D0), the 65 Nelore females received a progesterone-releasing device associated to the application of 2.0 mg of estradiolbenzoate intramuscularly (IM). On D9, the progesterone-releasing intravaginal devices were removed and was administered500 μg of cloprostenol sodium IM; 0.6 mg of estradiol cypionate IM and 300 UI of Equine Chorionic Gonadotropin IM. At thispoint, the animals were marked with a marking stick for the determination of the estrus expression. On D11 of the synchronization protocol, the animals were characterized in two groups: without estrus expression WITHOUT ESTRUS and with estrusexpression WITH ESTRUS. The evaluation of the follicle diameter (FOLD), of the follicle wall area (FOLA), of the folliclewall vascularization (FOLV) and the percentage of vascularization in the area of the preovulatory follicle wall (%FOLV) wereconducted on D11 using B-mode ultrasonography and color Doppler and then the artificial inseminations were performed. Theevaluation of the corpus luteum diameter (CLD), the total area of the corpus luteum (CLA), of the area of vascularization of thecorpus luteum (CLV), of the percentage of vascularization of the in the area of the corpus luteum (% CLV) and the collectionof blood for the evaluation of the serum...

Efeito da expressão do estro sobre características morfofuncionais foliculares, luteais e fertilidade em fêmeas Bos indicus sincronizadas para IATF / Effect of the estrus expression on follicular and luteal morphofunctional characteristics and fertility in Bos indicus females synchronized for FTAI

Background: Recent studies have been conducted with the aim of improving the fertility rates in the FTAI programsin beef females. The observation of the estrus expression constitutes an important indicator of fertility in zebu females.Therefore, this work has as an objective to evaluate the impact of the estrus expression on the follicular, luteal and fertilitymorphofunctional characteristics of Nelore females synchronized for FTAI.Materials, Methods & Results: Sixty five lactating female Nelore (Bos taurus indicus) were used. On a random day, denominatedday 0 (D0), the 65 Nelore females received a progesterone-releasing device associated to the application of 2.0 mg of estradiolbenzoate intramuscularly (IM). On D9, the progesterone-releasing intravaginal devices were removed and was administered500 μg of cloprostenol sodium IM; 0.6 mg of estradiol cypionate IM and 300 UI of Equine Chorionic Gonadotropin IM. At thispoint, the animals were marked with a marking stick for the determination of the estrus expression. On D11 of the synchronization protocol, the animals were characterized in two groups: without estrus expression WITHOUT ESTRUS and with estrusexpression WITH ESTRUS. The evaluation of the follicle diameter (FOLD), of the follicle wall area (FOLA), of the folliclewall vascularization (FOLV) and the percentage of vascularization in the area of the preovulatory follicle wall (%FOLV) wereconducted on D11 using B-mode ultrasonography and color Doppler and then the artificial inseminations were performed. Theevaluation of the corpus luteum diameter (CLD), the total area of the corpus luteum (CLA), of the area of vascularization of thecorpus luteum (CLV), of the percentage of vascularization of the in the area of the corpus luteum (% CLV) and the collectionof blood for the evaluation of the serum...(AU)

The role of prostaglandin F2α on ovulation and LH release in cows / A função da prostaglandina F2α na ovulação e na liberação de LH em vacas

This study aimed to evaluate the role of prostaglandin F2α (PGF) on ovulation. In Experiment 1, cows were randomly allocated to two treatments to receive 150 µg of d-Cloprostenol (PGF Group, n = 12) or 2 mL of NaCl 0.9% (Control Group, n = 11) and CIDRs, were removed 4 days later. No cow ovulated in Control and PGF groups. In Experiment 2, cows were randomly separated into two experimental groups to receive 4 injections of 150 µg of d-Cloprostenol (n = 9) or 2 mL of NaCL 0.9% (n = 9). In this experiment, ovulation was not observed in any cows. In Experiment 3, ovariectomized cows receive three injections of 300µg of PGF analog (PGF Group, n = 5), 100µg of Lecirelin (GnRH Group, n = 5) or 2 mL of PBS (Control Group, n = 4). The LH concentration was higher (P <0.0001) in cows from the GnRH group than in the PGF and Control groups. In experiment 4, cows with preovulatory follicles (>11.5 mm) were treated with Saline (Control Group, n = 6); Lecirelin (GnRH Group, n = 7) or Cloprostenol Sodium (PGF Group, n = 6). There was a significant increase in the vascular area of follicles from 0 to 24 h in GnRH and PGF treatments. In conclusion, PGF was not able to induce ovulation in cows with high or low plasma progesterone concentration. Additionally, PGF alone was not able to induce LH release and follicle luteinization, but increased follicular vascularization.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar o papel da prostaglandina F2α (PGF) na ovulação. No Experimento 1, as vacas foram alocadas aleatoriamente em dois tratamentos para receber 150 µg de d-Cloprostenol (Grupo PGF, n = 12) ou 2 mL de NaCl 0,9% (Grupo Controle, n = 11) e os CIDR, foram removidos 4 dias depois. Nenhuma vaca ovulou nos grupos Controle e PGF. No Experimento 2, as vacas foram separadas aleatoriamente em dois grupos experimentais para receber 4 injeções de 150 µg de d-Cloprostenol (n = 9) ou 2 mL de NaCL 0,9% (n = 9). Não foi observada ovulação em nenhum dos animais deste experimento. No Experimento 3, vacas ovariectomizadas receberam três injeções de 300µg de análogo de PGF (Grupo PGF, n = 5), 100µg de Lecirelina (Grupo GnRH, n = 5) ou 2 mL de PBS (Grupo Controle, n = 4). A concentração de LH foi maior (P <0,0001) nas vacas do grupo GnRH do que nos grupos PGF e Controle. No Experimento 4, vacas com folículos pré-ovulatórios (> 11,5 mm) foram tratadas com solução salina (Grupo Controle, n = 6), Lecirelina (Grupo GnRH, n = 7) ou Cloprostenol Sódico (Grupo PGF, n = 6). Houve um aumento significativo na área vascular dos folículos de 0 a 24h nos tratamentos com GnRH e PGF. Em conclusão, a PGF não foi capaz de induzir ovulação em vacas com alta ou baixa concentração plasmática de progesterona. Além disso, a PGF sozinha não foi capaz de induzir a liberação de LH e a luteinização do folículo, mas aumentou a vascularização folicular.(AU)

The role of prostaglandin F2α on ovulation and LH release in cows / A função da prostaglandina F2α na ovulação e na liberação de LH em vacas

This study aimed to evaluate the role of prostaglandin F2α (PGF) on ovulation. In Experiment 1, cows were randomly allocated to two treatments to receive 150 µg of d-Cloprostenol (PGF Group, n = 12) or 2 mL of NaCl 0.9% (Control Group, n = 11) and CIDRs, were removed 4 days later. No cow ovulated in Control and PGF groups. In Experiment 2, cows were randomly separated into two experimental groups to receive 4 injections of 150 µg of d-Cloprostenol (n = 9) or 2 mL of NaCL 0.9% (n = 9). In this experiment, ovulation was not observed in any cows. In Experiment 3, ovariectomized cows receive three injections of 300µg of PGF analog (PGF Group, n = 5), 100µg of Lecirelin (GnRH Group, n = 5) or 2 mL of PBS (Control Group, n = 4). The LH concentration was higher (P <0.0001) in cows from the GnRH group than in the PGF and Control groups. In experiment 4, cows with preovulatory follicles (>11.5 mm) were treated with Saline (Control Group, n = 6); Lecirelin (GnRH Group, n = 7) or Cloprostenol Sodium (PGF Group, n = 6). There was a significant increase in the vascular area of follicles from 0 to 24 h in GnRH and PGF treatments. In conclusion, PGF was not able to induce ovulation in cows with high or low plasma progesterone concentration. Additionally, PGF alone was not able to induce LH release and follicle luteinization, but increased follicular vascularization.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar o papel da prostaglandina F2α (PGF) na ovulação. No Experimento 1, as vacas foram alocadas aleatoriamente em dois tratamentos para receber 150 µg de d-Cloprostenol (Grupo PGF, n = 12) ou 2 mL de NaCl 0,9% (Grupo Controle, n = 11) e os CIDR, foram removidos 4 dias depois. Nenhuma vaca ovulou nos grupos Controle e PGF. No Experimento 2, as vacas foram separadas aleatoriamente em dois grupos experimentais para receber 4 injeções de 150 µg de d-Cloprostenol (n = 9) ou 2 mL de NaCL 0,9% (n = 9). Não foi observada ovulação em nenhum dos animais deste experimento. No Experimento 3, vacas ovariectomizadas receberam três injeções de 300µg de análogo de PGF (Grupo PGF, n = 5), 100µg de Lecirelina (Grupo GnRH, n = 5) ou 2 mL de PBS (Grupo Controle, n = 4). A concentração de LH foi maior (P <0,0001) nas vacas do grupo GnRH do que nos grupos PGF e Controle. No Experimento 4, vacas com folículos pré-ovulatórios (> 11,5 mm) foram tratadas com solução salina (Grupo Controle, n = 6), Lecirelina (Grupo GnRH, n = 7) ou Cloprostenol Sódico (Grupo PGF, n = 6). Houve um aumento significativo na área vascular dos folículos de 0 a 24h nos tratamentos com GnRH e PGF. Em conclusão, a PGF não foi capaz de induzir ovulação em vacas com alta ou baixa concentração plasmática de progesterona. Além disso, a PGF sozinha não foi capaz de induzir a liberação de LH e a luteinização do folículo, mas aumentou a vascularização folicular.(AU)

Subdose of human chorionic gonadotropin applied at the Hou Hai acupoint on follicular dynamics and luteal development in donkeys

The objective of this study was to evaluate the effects of an hCG subdose applied at the Hou Hai acupoint as an ovulation inducer in donkeys. Eleven donkeys were distributed in randomized blocks in T1 = application of 1,500 IU of hCG intravenous (IV); T2 = 450 IU of hCG applied at the false acupoint (IV), and T3 = 450 IU of hCG applied at the Hou Hai acupoint. There was no difference (P > 0.05) between the treatments regarding the mean diameter of the pre-ovulatory follicle (34.5 ± 1.3 mm), the ovulation rate (96.97%), the interval between induction and ovulation (58.07 ± 16.82 h), the mean diameter of the CL (D0 = 23.0 ± 0.6; D2 = 27.7 ± 1.9 and D8 = 28.2 ± 0.8mm), and serum P4 concentrations (10.50 ± 2.99 ng.mL-1). The application of 450 IU of hCG at the Hou Hai acupoint increased ovulation rate (72.73%) more than 48 h after induction (P = 0.03) and a larger diameter of the CL on D4 (30.7 ± 5.1 mm) (P = 0.04). The vascularization area of the CL on D8, obtained by minimum number of colored pixel (NCP), was greater (P 0.05) in the donkeys that received 1,500 IU of IV hCG (T1, 41.91 ± 1.17), and we found a positive correlation (P 0.05) between mean NCP and P4 concentration in the donkeys that received 450 IU of hCG IV at the false acupoint (T2) or at the Hou Hai acupoint (T3). The application of 450 IU of hCG by IV route at the false acupoint or the Hou Hai acupoint was sufficient to induce ovulation in donkeys, demonstrating that the average dosage commonly used for this species is too high.

Subdose of human chorionic gonadotropin applied at the Hou Hai acupoint on follicular dynamics and luteal development in donkeys

The objective of this study was to evaluate the effects of an hCG subdose applied at the Hou Hai acupoint as an ovulation inducer in donkeys. Eleven donkeys were distributed in randomized blocks in T1 = application of 1,500 IU of hCG intravenous (IV); T2 = 450 IU of hCG applied at the false acupoint (IV), and T3 = 450 IU of hCG applied at the Hou Hai acupoint. There was no difference (P > 0.05) between the treatments regarding the mean diameter of the pre-ovulatory follicle (34.5 ± 1.3 mm), the ovulation rate (96.97%), the interval between induction and ovulation (58.07 ± 16.82 h), the mean diameter of the CL (D0 = 23.0 ± 0.6; D2 = 27.7 ± 1.9 and D8 = 28.2 ± 0.8mm), and serum P4 concentrations (10.50 ± 2.99 ng.mL-1). The application of 450 IU of hCG at the Hou Hai acupoint increased ovulation rate (72.73%) more than 48 h after induction (P = 0.03) and a larger diameter of the CL on D4 (30.7 ± 5.1 mm) (P = 0.04). The vascularization area of the CL on D8, obtained by minimum number of colored pixel (NCP), was greater (P 0.05) in the donkeys that received 1,500 IU of IV hCG (T1, 41.91 ± 1.17), and we found a positive correlation (P 0.05) between mean NCP and P4 concentration in the donkeys that received 450 IU of hCG IV at the false acupoint (T2) or at the Hou Hai acupoint (T3). The application of 450 IU of hCG by IV route at the false acupoint or the Hou Hai acupoint was sufficient to induce ovulation in donkeys, demonstrating that the average dosage commonly used for this species is too high.(AU)

Effect of eCG on the follicular dynamics and vascularization of crossbred cows with different circulating progesterone concentrations during synchronization of ovulation in an FTAI protocol / Efeito do eCG na dinâmica e na vascularização folicular de vacas mestiças com diferentes concentrações circulantes de progesterona durante a sincronização de ovulação em um protocolo IATF

This study aimed to evaluate the effect of treatment with equine chorionic gonadotrophin (eCG) on the follicular dynamics and function of crossbred cows with different circulating progesterone (P4) concentrations during synchronization of ovulation in a fixed-time artificial insemination (FTAI) protocol. To this end, 30 crossbred cows were submitted to a pre-synchronization protocol to ensure that all of them presented corpus luteum (CL) at the beginning of the protocol, and were evaluated by transrectal ultrasonography (TRUS) to verify the presence of CL. After that, the animals underwent an ovulation synchronization protocol and evaluation of follicular dynamics and vascularization by B-mode and power-Doppler ultrasound (US). High plasma P4 concentrations at the time of ovulation synchronization negatively influenced follicle diameter on day 10 (D10), preovulatory follicle diameter, and preovulatory follicle wall vascularization area (p<0.05). Cows with high P4 concentration at the time of ovulation synchronization that were treated with eCG showed follicle diameter on D10 and preovulatory follicle diameter and wall vascularization area (p>0.05) similar to those of animals with low P4 concentration at the time of ovulation synchronization. Therefore, high P4 concentrations at the time of ovulation synchronization negatively influence follicular diameter and vascularization, and eCG can be used as a strategy to favor better follicular and luteal response in crossbred cows with high P4 concentrations submitted to an FTAI protocol.(AU)

Objetivou-se neste estudo avaliar o efeito do tratamento com gonadotrofina coriônica equina (eCG) sobre a dinâmica e função folicular em fêmeas mestiças com diferentes concentrações circulantes de P4 durante a sincronização da ovulação em um protocolo de IATF. Para tanto, foram utilizadas 30 fêmeas mestiças e submetidas a um protocolo de pré-sincronização para garantir que todos os animais apresentassem corpo lúteo (CL) no início do protocolo, sendo avaliadas por ultrassonografia (US) transretal para a verificação da presença ou não de CL. Em seguida foram submetidas a um protocolo de sincronização da ovulação e avaliação da dinâmica e vascularização folicular por ultrassonografia (US) em modo B e Doppler colorido. Altas concentrações de P4 no momento da sincronização da ovulação impactaram negativamente no diâmetro do folículo no D10, o diâmetro do folículo pré-ovulatório e na área de vascularização da parede do folículo pré-ovulatório (P<0,05). As vacas com alta concentração de P4 no momento da sincronização da ovulação e que foram tratadas com eCG apresentaram diâmetro do folículo no D10 e no diâmetro e a área de vascularização da parede do folículo pré-ovulatório (P>0,05), semelhantes às vacas que com baixa concentração de P4 no momento da sincronização da ovulação. Conclui-se que elevadas concentrações de P4 no momento da sincronização da ovulação impactam negativamente no diâmetro e vascularização folicular e que o eCG pode ser utilizado como uma estratégia para favorecer uma melhor resposta folicular e luteal em fêmeas mestiças com altas concentrações de P4 submetidas a um protocolo de IATF.(AU)

Effect of eCG on the follicular dynamics and vascularization of crossbred cows with different circulating progesterone concentrations during synchronization of ovulation in an FTAI protocol / Efeito do eCG na dinâmica e na vascularização folicular de vacas mestiças com diferentes concentrações circulantes de progesterona durante a sincronização de ovulação em um protocolo IATF

This study aimed to evaluate the effect of treatment with equine chorionic gonadotrophin (eCG) on the follicular dynamics and function of crossbred cows with different circulating progesterone (P4) concentrations during synchronization of ovulation in a fixed-time artificial insemination (FTAI) protocol. To this end, 30 crossbred cows were submitted to a pre-synchronization protocol to ensure that all of them presented corpus luteum (CL) at the beginning of the protocol, and were evaluated by transrectal ultrasonography (TRUS) to verify the presence of CL. After that, the animals underwent an ovulation synchronization protocol and evaluation of follicular dynamics and vascularization by B-mode and power-Doppler ultrasound (US). High plasma P4 concentrations at the time of ovulation synchronization negatively influenced follicle diameter on day 10 (D10), preovulatory follicle diameter, and preovulatory follicle wall vascularization area (p<0.05). Cows with high P4 concentration at the time of ovulation synchronization that were treated with eCG showed follicle diameter on D10 and preovulatory follicle diameter and wall vascularization area (p>0.05) similar to those of animals with low P4 concentration at the time of ovulation synchronization. Therefore, high P4 concentrations at the time of ovulation synchronization negatively influence follicular diameter and vascularization, and eCG can be used as a strategy to favor better follicular and luteal response in crossbred cows with high P4 concentrations submitted to an FTAI protocol.(AU)

Objetivou-se neste estudo avaliar o efeito do tratamento com gonadotrofina coriônica equina (eCG) sobre a dinâmica e função folicular em fêmeas mestiças com diferentes concentrações circulantes de P4 durante a sincronização da ovulação em um protocolo de IATF. Para tanto, foram utilizadas 30 fêmeas mestiças e submetidas a um protocolo de pré-sincronização para garantir que todos os animais apresentassem corpo lúteo (CL) no início do protocolo, sendo avaliadas por ultrassonografia (US) transretal para a verificação da presença ou não de CL. Em seguida foram submetidas a um protocolo de sincronização da ovulação e avaliação da dinâmica e vascularização folicular por ultrassonografia (US) em modo B e Doppler colorido. Altas concentrações de P4 no momento da sincronização da ovulação impactaram negativamente no diâmetro do folículo no D10, o diâmetro do folículo pré-ovulatório e na área de vascularização da parede do folículo pré-ovulatório (P<0,05). As vacas com alta concentração de P4 no momento da sincronização da ovulação e que foram tratadas com eCG apresentaram diâmetro do folículo no D10 e no diâmetro e a área de vascularização da parede do folículo pré-ovulatório (P>0,05), semelhantes às vacas que com baixa concentração de P4 no momento da sincronização da ovulação. Conclui-se que elevadas concentrações de P4 no momento da sincronização da ovulação impactam negativamente no diâmetro e vascularização folicular e que o eCG pode ser utilizado como uma estratégia para favorecer uma melhor resposta folicular e luteal em fêmeas mestiças com altas concentrações de P4 submetidas a um protocolo de IATF.(AU)

Estudo da vascularização folicular e do corpo lúteo de éguas cíclicas tratadas com extrato de pituitária equina utilizando ultrassom Doppler colorido

ABSTRACT Knowledge about follicle and corpus luteum vascularization associated with superovulation in mares is scarce. Aiming to evaluate the effect of equine pituitary extract (EPE) on superovulation, the experiment was conducted using six mares Purebred Arabian in two estrous cycles (control and treatment). The mares were synchronized, and monitored daily by ultrasound B mode until the follicles reached diameter 23 mm (deviation). In the treatment cycle, from the deviation, mares received 8 mg of EPE, once a day, intramuscularly, until two or more follicles reached a diameter between 32 and 35 mm. Ovulation was induced with deslorelin acetate when follicles reached at least 35 mm. At the time of follicular deviation, induction of ovulation and final preovulatory exam, it was used B-mode ultrasound to measure the diameter of follicles and on the eighth day after ovulation to measure the area of the corpus luteum (CL); color Doppler was also used to assess blood perfusion of the follicle wall and luteal parenchyma. In the control cycle was performed the same procedure except for the use of EPE. Data were subjected to analysis of variance, with 5% significance level. There was no effect of EPE on ovulation number, diameter of follicles, vascularity of the follicular wall and serum estrogen concentration. The animals treated or not, showed functional CLs, with no difference in parenchymal area or luteal vascularization, or in serum progesterone concentration on the eighth day after ovulation. It was observed that the EPE provided a greater number of subordinate follicles at the time of induction of ovulation of the dominant follicle. Although these follicles have failed to ovulate, it was concluded that EPE influenced the follicles growth, and it can be used in other biotechnologies, with greater utilization of equine ovarian follicular reserve.

RESUMO Informações sobre a vascularização da parede folicular e do corpo lúteo equino, associadas à superovulação, são escassas. Com o objetivo de avaliar o efeito superovulatório do extrato de pituitária equina (EPE) no fluxo sanguíneo folicular e luteal, foram utilizadas seis éguas Puro Sangue Árabe, em dois ciclos estrais (controle e tratamento). As éguas foram monitoradas diariamente por ultrassonografia modo B, até que os folículos atingissem diâmetro de 23mm (desvio). No ciclo tratamento, as éguas receberam 8mg de EPE, uma vez ao dia, por via IM, até que dois ou mais folículos atingissem o diâmetro entre 32 e 35mm. A ovulação foi induzida com acetato de deslorelina, quando os folículos atingiram, no mínimo, 35mm. No momento do desvio folicular, da indução da ovulação e do último exame pré-ovulatório, foi utilizada a ultrassonografia modo B para medir o diâmetro dos folículos e, no oitavo dia pós-ovulação, para a área do corpo lúteo (CL). Utilizou-se também ultrassonografia com Doppler colorido para avaliar a perfusão sanguínea da parede folicular e do parênquima luteal. No ciclo controle, foi realizado o mesmo procedimento, exceto pelo uso do EPE. Os dados foram submetidos à análise de variância, com nível de significância de 5%. Não foi observado efeito do EPE sobre o número de ovulações, o diâmetro dos folículos, a vascularização da parede folicular e a concentração sérica de estrógeno. Os animais, tratados ou não, apresentaram CLs funcionais, não havendo diferença na área do parênquima ou da vascularização luteal, nem na concentração sérica de progesterona, no oitavo dia após a ovulação. Foi observado que o EPE proporcionou um maior número de folículos subordinados no momento da indução da ovulação do folículo dominante (P 0,05). Embora esses folículos não tenham chegado a ovular, concluiu-se que o EPE atuou no crescimento de folículos, que podem ser utilizados em outras biotécnicas, como a transferência de oócitos, com maior aproveitamento da reserva folicular de ovários equinos.

Estudo da vascularização folicular e do corpo lúteo de éguas cíclicas tratadas com extrato de pituitária equina utilizando ultrassom Doppler colorido

ABSTRACT Knowledge about follicle and corpus luteum vascularization associated with superovulation in mares is scarce. Aiming to evaluate the effect of equine pituitary extract (EPE) on superovulation, the experiment was conducted using six mares Purebred Arabian in two estrous cycles (control and treatment). The mares were synchronized, and monitored daily by ultrasound B mode until the follicles reached diameter 23 mm (deviation). In the treatment cycle, from the deviation, mares received 8 mg of EPE, once a day, intramuscularly, until two or more follicles reached a diameter between 32 and 35 mm. Ovulation was induced with deslorelin acetate when follicles reached at least 35 mm. At the time of follicular deviation, induction of ovulation and final preovulatory exam, it was used B-mode ultrasound to measure the diameter of follicles and on the eighth day after ovulation to measure the area of the corpus luteum (CL); color Doppler was also used to assess blood perfusion of the follicle wall and luteal parenchyma. In the control cycle was performed the same procedure except for the use of EPE. Data were subjected to analysis of variance, with 5% significance level. There was no effect of EPE on ovulation number, diameter of follicles, vascularity of the follicular wall and serum estrogen concentration. The animals treated or not, showed functional CLs, with no difference in parenchymal area or luteal vascularization, or in serum progesterone concentration on the eighth day after ovulation. It was observed that the EPE provided a greater number of subordinate follicles at the time of induction of ovulation of the dominant follicle. Although these follicles have failed to ovulate, it was concluded that EPE influenced the follicles growth, and it can be used in other biotechnologies, with greater utilization of equine ovarian follicular reserve.

RESUMO Informações sobre a vascularização da parede folicular e do corpo lúteo equino, associadas à superovulação, são escassas. Com o objetivo de avaliar o efeito superovulatório do extrato de pituitária equina (EPE) no fluxo sanguíneo folicular e luteal, foram utilizadas seis éguas Puro Sangue Árabe, em dois ciclos estrais (controle e tratamento). As éguas foram monitoradas diariamente por ultrassonografia modo B, até que os folículos atingissem diâmetro de 23mm (desvio). No ciclo tratamento, as éguas receberam 8mg de EPE, uma vez ao dia, por via IM, até que dois ou mais folículos atingissem o diâmetro entre 32 e 35mm. A ovulação foi induzida com acetato de deslorelina, quando os folículos atingiram, no mínimo, 35mm. No momento do desvio folicular, da indução da ovulação e do último exame pré-ovulatório, foi utilizada a ultrassonografia modo B para medir o diâmetro dos folículos e, no oitavo dia pós-ovulação, para a área do corpo lúteo (CL). Utilizou-se também ultrassonografia com Doppler colorido para avaliar a perfusão sanguínea da parede folicular e do parênquima luteal. No ciclo controle, foi realizado o mesmo procedimento, exceto pelo uso do EPE. Os dados foram submetidos à análise de variância, com nível de significância de 5%. Não foi observado efeito do EPE sobre o número de ovulações, o diâmetro dos folículos, a vascularização da parede folicular e a concentração sérica de estrógeno. Os animais, tratados ou não, apresentaram CLs funcionais, não havendo diferença na área do parênquima ou da vascularização luteal, nem na concentração sérica de progesterona, no oitavo dia após a ovulação. Foi observado que o EPE proporcionou um maior número de folículos subordinados no momento da indução da ovulação do folículo dominante (P 0,05). Embora esses folículos não tenham chegado a ovular, concluiu-se que o EPE atuou no crescimento de folículos, que podem ser utilizados em outras biotécnicas, como a transferência de oócitos, com maior aproveitamento da reserva folicular de ovários equinos.

Estudo da vascularização folicular e do corpo lúteo de éguas cíclicas tratadas com extrato de pituitária equina utilizando ultrassom Doppler colorido / Study of follicular and corpus luteum vascularization in mares treated with Equine Pituitary Extract using ultrasound color Doppler

Informações sobre a vascularização da parede folicular e do corpo lúteo equino, associadas à superovulação, são escassas. Com o objetivo de avaliar o efeito superovulatório do extrato de pituitária equina (EPE) no fluxo sanguíneo folicular e luteal, foram utilizadas seis éguas Puro Sangue Árabe, em dois ciclos estrais (controle e tratamento). As éguas foram monitoradas diariamente por ultrassonografia modo B, até que os folículos atingissem diâmetro de 23mm (desvio). No ciclo tratamento, as éguas receberam 8mg de EPE, uma vez ao dia, por via IM, até que dois ou mais folículos atingissem o diâmetro entre 32 e 35mm. A ovulação foi induzida com acetato de deslorelina, quando os folículos atingiram, no mínimo, 35mm. No momento do desvio folicular, da indução da ovulação e do último exame pré-ovulatório, foi utilizada a ultrassonografia modo B para medir o diâmetro dos folículos e, no oitavo dia pós-ovulação, para a área do corpo lúteo (CL). Utilizou-se também ultrassonografia com Doppler colorido para avaliar a perfusão sanguínea da parede folicular e do parênquima luteal. No ciclo controle, foi realizado o mesmo procedimento, exceto pelo uso do EPE. Os dados foram submetidos à análise de variância, com nível de significância de 5%. Não foi observado efeito do EPE sobre o número de ovulações, o diâmetro dos folículos, a vascularização da parede folicular e a concentração sérica de estrógeno. Os animais, tratados ou não, apresentaram CLs funcionais, não havendo diferença na área do parênquima ou da vascularização luteal, nem na concentração sérica de progesterona, no oitavo dia após a ovulação. Foi observado que o EPE proporcionou um maior número de folículos subordinados no momento da indução da ovulação do folículo dominante (P ≤ 0,05). Embora esses folículos não tenham chegado a ovular, concluiu-se que o EPE atuou no crescimento de folículos, que podem ser utilizados em outras biotécnicas, como a transferência de oócitos, com maior aproveitamento da reserva folicular de ovários equinos.(AU)

Knowledge about follicle and corpus luteum vascularization associated with superovulation in mares is scarce. Aiming to evaluate the effect of equine pituitary extract (EPE) on superovulation, the experiment was conducted using six mares Purebred Arabian in two estrous cycles (control and treatment). The mares were synchronized, and monitored daily by ultrasound B mode until the follicles reached diameter ≤ 23 mm (deviation). In the treatment cycle, from the deviation, mares received 8 mg of EPE, once a day, intramuscularly, until two or more follicles reached a diameter between 32 and 35 mm. Ovulation was induced with deslorelin acetate when follicles reached at least 35 mm. At the time of follicular deviation, induction of ovulation and final preovulatory exam, it was used B-mode ultrasound to measure the diameter of follicles and on the eighth day after ovulation to measure the area of the corpus luteum (CL); color Doppler was also used to assess blood perfusion of the follicle wall and luteal parenchyma. In the control cycle was performed the same procedure except for the use of EPE. Data were subjected to analysis of variance, with 5% significance level. There was no effect of EPE on ovulation number, diameter of follicles, vascularity of the follicular wall and serum estrogen concentration. The animals treated or not, showed functional CLs, with no difference in parenchymal area or luteal vascularization, or in serum progesterone concentration on the eighth day after ovulation. It was observed that the EPE provided a greater number of subordinate follicles at the time of induction of ovulation of the dominant follicle. Although these follicles have failed to ovulate, it was concluded that EPE influenced the follicles growth, and it can be used in other biotechnologies, with greater utilization of equine ovarian follicular reserve.(AU)

Estudo da vascularização folicular e do corpo lúteo de éguas cíclicas tratadas com extrato de pituitária equina utilizando ultrassom Doppler colorido / Study of follicular and corpus luteum vascularization in mares treated with Equine Pituitary Extract using ultrasound color Doppler

Informações sobre a vascularização da parede folicular e do corpo lúteo equino, associadas à superovulação, são escassas. Com o objetivo de avaliar o efeito superovulatório do extrato de pituitária equina (EPE) no fluxo sanguíneo folicular e luteal, foram utilizadas seis éguas Puro Sangue Árabe, em dois ciclos estrais (controle e tratamento). As éguas foram monitoradas diariamente por ultrassonografia modo B, até que os folículos atingissem diâmetro de 23mm (desvio). No ciclo tratamento, as éguas receberam 8mg de EPE, uma vez ao dia, por via IM, até que dois ou mais folículos atingissem o diâmetro entre 32 e 35mm. A ovulação foi induzida com acetato de deslorelina, quando os folículos atingiram, no mínimo, 35mm. No momento do desvio folicular, da indução da ovulação e do último exame pré-ovulatório, foi utilizada a ultrassonografia modo B para medir o diâmetro dos folículos e, no oitavo dia pós-ovulação, para a área do corpo lúteo (CL). Utilizou-se também ultrassonografia com Doppler colorido para avaliar a perfusão sanguínea da parede folicular e do parênquima luteal. No ciclo controle, foi realizado o mesmo procedimento, exceto pelo uso do EPE. Os dados foram submetidos à análise de variância, com nível de significância de 5%. Não foi observado efeito do EPE sobre o número de ovulações, o diâmetro dos folículos, a vascularização da parede folicular e a concentração sérica de estrógeno. Os animais, tratados ou não, apresentaram CLs funcionais, não havendo diferença na área do parênquima ou da vascularização luteal, nem na concentração sérica de progesterona, no oitavo dia após a ovulação. Foi observado que o EPE proporcionou um maior número de folículos subordinados no momento da indução da ovulação do folículo dominante (P ≤ 0,05). Embora esses folículos não tenham chegado a ovular, concluiu-se que o EPE atuou no crescimento de folículos, que podem ser utilizados em outras biotécnicas, como a transferência de oócitos, com maior aproveitamento da reserva folicular de ovários equinos.(AU)

Knowledge about follicle and corpus luteum vascularization associated with superovulation in mares is scarce. Aiming to evaluate the effect of equine pituitary extract (EPE) on superovulation, the experiment was conducted using six mares Purebred Arabian in two estrous cycles (control and treatment). The mares were synchronized, and monitored daily by ultrasound B mode until the follicles reached diameter ≤ 23 mm (deviation). In the treatment cycle, from the deviation, mares received 8 mg of EPE, once a day, intramuscularly, until two or more follicles reached a diameter between 32 and 35 mm. Ovulation was induced with deslorelin acetate when follicles reached at least 35 mm. At the time of follicular deviation, induction of ovulation and final preovulatory exam, it was used B-mode ultrasound to measure the diameter of follicles and on the eighth day after ovulation to measure the area of the corpus luteum (CL); color Doppler was also used to assess blood perfusion of the follicle wall and luteal parenchyma. In the control cycle was performed the same procedure except for the use of EPE. Data were subjected to analysis of variance, with 5% significance level. There was no effect of EPE on ovulation number, diameter of follicles, vascularity of the follicular wall and serum estrogen concentration. The animals treated or not, showed functional CLs, with no difference in parenchymal area or luteal vascularization, or in serum progesterone concentration on the eighth day after ovulation. It was observed that the EPE provided a greater number of subordinate follicles at the time of induction of ovulation of the dominant follicle. Although these follicles have failed to ovulate, it was concluded that EPE influenced the follicles growth, and it can be used in other biotechnologies, with greater utilization of equine ovarian follicular reserve.(AU)

Biochemical, thermographic, and follicular responses of murine models of hormone-treated bovine ovarian renal capsule xenografts / Respostas bioquímicas, termográficas e foliculares de modelos murinos tratados hormonalmente após xenotransplante de ovário bovino sob a cápsula renal

This study aimed to evaluate the characteristics of two different murine models of hormone-treated renal-encapsulated bovine ovarian tissue xenotransplantation. Two immunodeficient mouse models (BALB/c Nude and C57BL6 SCID) were xenografted with ovarian pieces from heifers and each group was subjected to two hormonal treatments of eCG or a combination of FSH+LH. Donor ovaries and recipients were evaluated by histology and infrared thermography at different times. At the time of xenograft collection, animals were evaluated for alterations in hepatorenal biochemistry. The statistical test used in the study was ANOVA, followed by Tukey's test. Among the strains, 80% of C57BL6 SCID and 77% of BALB/c Nude mice showed development and vascularization of the transplanted tissue, which acquired cyclicity at 19 and 9 days post-transplant, respectively. Hemorrhagic follicles in xenografts induced with FSH+LH were found in the C57BL6 SCID strain. Infrared thermography was insufficient to distinguish the tissue donor recipient. In conclusion, the C57BL6 SCID strain appears to be the best host for ovarian xenografts, since the transplants in these mice were viable and showed robust follicular development. This work will aid future choices of immunodeficient strains for xenografting procedures.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar as características dos dois diferentes modelos de murinas tratadas hormonalmente após xenotransplante de tecido ovariano bovino sob a cápsula renal. Dois modelos de camundongos imunodeficientes (BALB/c NUDE e C57BL6 SCID) receberam fragmentos de ovário de novilhas e cada grupo foi submetido a dois tratamentos hormonais de eCG ou uma combinação de FSH+LH. Ovários doadores e receptores foram avaliados por histologia e termografia infravermelha em diferentes momentos. No momento da retirada do xenotranplante, os animais foram avaliados quanto a alterações na bioquímica hepatorrenal. O teste estatístico utilizado no estudo foi ANOVA, seguido do teste de Tukey. Entre as linhagens, 80% de C57BL6 SCID e 77% das BALB/c NUDE mostraram desenvolvimento e vascularização do tecido transplantado, que adquiriu a ciclicidade 19 e 9 dias após o transplante, respectivamente. Corpos hemorrágicos foram encontrados após o xenotransplante induzidos com FSH+LH na linhagem C57BL6 SCID. A termografia infravermelha foi insuficiente para distinguir o tecido doador do receptor. Em conclusão, a linhagem C57BL6 SCID demonstrou ser o melhor hospedeiro para xenotransplante de ovário, uma vez que os transplantes nestes camundongos foram viáveis e mostraram desenvolvimento folicular. Este trabalho ajudará futuras escolhas de linhagens imunodeficientes para procedimentos de xenotranplante.(AU)

Biochemical, thermographic, and follicular responses of murine models of hormone-treated bovine ovarian renal capsule xenografts / Respostas bioquímicas, termográficas e foliculares de modelos murinos tratados hormonalmente após xenotransplante de ovário bovino sob a cápsula renal

This study aimed to evaluate the characteristics of two different murine models of hormone-treated renal-encapsulated bovine ovarian tissue xenotransplantation. Two immunodeficient mouse models (BALB/c Nude and C57BL6 SCID) were xenografted with ovarian pieces from heifers and each group was subjected to two hormonal treatments of eCG or a combination of FSH+LH. Donor ovaries and recipients were evaluated by histology and infrared thermography at different times. At the time of xenograft collection, animals were evaluated for alterations in hepatorenal biochemistry. The statistical test used in the study was ANOVA, followed by Tukeys test. Among the strains, 80% of C57BL6 SCID and 77% of BALB/c Nude mice showed development and vascularization of the transplanted tissue, which acquired cyclicity at 19 and 9 days post-transplant, respectively. Hemorrhagic follicles in xenografts induced with FSH+LH were found in the C57BL6 SCID strain. Infrared thermography was insufficient to distinguish the tissue donor recipient. In conclusion, the C57BL6 SCID strain appears to be the best host for ovarian xenografts, since the transplants in these mice were viable and showed robust follicular development. This work will aid future choices of immunodeficient strains for xenografting procedures.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar as características dos dois diferentes modelos de murinas tratadas hormonalmente após xenotransplante de tecido ovariano bovino sob a cápsula renal. Dois modelos de camundongos imunodeficientes (BALB/c NUDE e C57BL6 SCID) receberam fragmentos de ovário de novilhas e cada grupo foi submetido a dois tratamentos hormonais de eCG ou uma combinação de FSH+LH. Ovários doadores e receptores foram avaliados por histologia e termografia infravermelha em diferentes momentos. No momento da retirada do xenotranplante, os animais foram avaliados quanto a alterações na bioquímica hepatorrenal. O teste estatístico utilizado no estudo foi ANOVA, seguido do teste de Tukey. Entre as linhagens, 80% de C57BL6 SCID e 77% das BALB/c NUDE mostraram desenvolvimento e vascularização do tecido transplantado, que adquiriu a ciclicidade 19 e 9 dias após o transplante, respectivamente. Corpos hemorrágicos foram encontrados após o xenotransplante induzidos com FSH+LH na linhagem C57BL6 SCID. A termografia infravermelha foi insuficiente para distinguir o tecido doador do receptor. Em conclusão, a linhagem C57BL6 SCID demonstrou ser o melhor hospedeiro para xenotransplante de ovário, uma vez que os transplantes nestes camundongos foram viáveis e mostraram desenvolvimento folicular. Este trabalho ajudará futuras escolhas de linhagens imunodeficientes para procedimentos de xenotranplante.(AU)

Estratégias hormonais para a indução de atresia folicular e estimulação da emergência de nova onda de crescimento folicular em éguas

O desenvolvimento de um protocolo hormonal capaz de sincronizar o estro e a ovulação de éguas em tempo fixo tem sido desafiador. Os dois principais desafios a serem superados para garantir a eficiência desses protocolos são: (1) a promoção da atresia folicular e (2) a emergência do crescimento de uma nova onda folicular de forma sincrônica entre as éguas tratadas. Estudos prévios deste laboratório foram capazes somente de suprimir o crescimento folicular, por alguns dias, sem ocorrência de atresia e com posterior reestabelecimento do crescimento desses folículos estáticos. Esta condição não proporcionou um desenvolvimento folicular similar entre as éguas tratadas que permitisse sincronia de tamanho de folículos entre elas e, consequentemente, uma única indução da ovulação em tempo fixo. Este projeto teve como objetivo principal desenvolver um protocolo hormonal capaz de promover a atresia, a emergência sincrônica de uma nova onda folicular e a sincronização da ovulação em éguas. Cinco experimentos foram realizados, sendo: Capítulo 3: Experimento 1 - Estabelecimento da curva de concentração plasmática de progesterona (P4) diária em éguas castradas e inteiras utilizando dispositivo intravaginal como fonte exógena de progesterona. Experimento 2 - Avaliação de seis protocolos hormonais para indução de atresia folicular e sincronização de uma nova onda de crescimento folicular durante o período de estação reprodutiva. Experimento 3 - Reavaliação dos protocolos hormonais previamente testados no experimento 2 com reajustes na dose de P4 e na frequência de administração de estradiol (E2) para indução de atresia e sincronização de uma nova onda de crescimento folicular. Capítulo 4: Experimento 4 - Avaliação dos níveis plasmáticos de progesterona e do status funcional do corpo lúteo por meio de ultrassonografia Doppler em éguas cíclicas submetidas aos tratamentos utilizando diferentes fontes de progesterona exógena. Capítulo 5: Experimento 5 Teste de eficiência da indução da ovulação em tempo fixo e da fertilidade em éguas cíclicas submetidas a protocolos hormonais para sincronização das ondas foliculares e da ovulação. Foi levantada a hipótese de que o grau de sincronia do crescimento folicular dependeria da eficiência obtida na indução da atresia folicular devido ao tratamento hormonal realizado. Além disso, formulou-se a hipótese de que a função luteal dos CLs resultantes de ovulações após tratamentos hormonais apresentaria um elevado grau de vascularização e, consequentemente, as éguas apresentariam elevados níveis plasmáticos de P4. Outra hipótese consistia em ser possível realizar a inseminação artificial a tempo fixo em éguas e que os oócitos submetidos a tratamento hormonal para sincronização do estro e da ovulação seriam férteis. O efeito de novas combinações de fontes hormonais de progesterona e estradiol e a associação de baixas doses de hCG e deslorelina foram testados durante duas estações reprodutivas. Dois dos protocolos hormonais testados foram selecionados com base em sua eficiência e estudos de fertilidade desenvolvidos com eles (Capítulo 5; Experimento 5). O primeiro promoveu atresia folicular e os oócitos foram originados de folículos emergidos em uma nova onda de crescimento folicular. O segundo não foi capaz de promover a atresia e a emergência de uma nova onda folicular, porém provocou supressão do crescimento dos folículos e as ovulações ocorreram em folículos que retomaram o crescimento após a remoção da fonte de progesterona exógena. A função luteal pós-tratamentos hormonais permaneceu com boa capacidade de produção de P4. A fertilidade das éguas submetidas a esses protocolos hormonais, após inseminação artificial em tempo fixo 30 horas após a indução das ovulações, foi avaliada por meio de diagnóstico ultrassonográfico de gestação aos treze dias após a ovulação. As taxas de prenhez nos grupos tratados para sincronização da ovulação foram de 83% (15/18) e 72% (13/18), respectivamente, não sendo estatisticamente diferentes (P > 0,05). Entretanto, o diâmetro médio das vesículas embrionárias do grupo que não apresentou atresia folicular foi menor do que no outro grupo que foi capaz de promover atresia folicular (P < 0,05) e também menor do que a média citada pela literatura no décimo terceiro dia de gestação. O desenvolvimento embrionário pode ter sido comprometido no grupo cujos oócitos foram provenientes de folículos que tiveram seu crescimento retardado pela ação da progesterona exógena. Desta forma, as estratégias hormonais utilizadas foram capazes de desenvolver dois protocolos de tratamento hormonal capazes de sincronizar as ovulações para a realização da inseminação artificial em tempo fixo em éguas e obtiveram boas taxas de prenhez.

The development of a hormonal protocol capable of estrus synchronization and time- fixed ovulation induction in mares has been a challenge. The two main difficulties to achieve it are to promote follicular atresia and to induce the emergence of a new synchronic follicular wave among treated mares. Previous studies from our laboratory were capable, for a few days, to stop follicular growth with no occurrence of atresia and posterior reestablishment of the follicular growth. This condition did not permit a similar follicular development among the mares to permit only one treatment to induce ovulation in a fixed-time manner. The main objectives of this project were: (1) to develop a hormonal protocol capable to promote follicular atresia, and (2) the emergence of a synchronic follicular wave in mares. Five experiments were performed: Chapter 3: Experiment 1 Daily plasma progesterone (P4) concentration curve in ovariectomized and cyclic mares treated with an intravaginal P4 releasing device. Experiment 2 Evaluation of six hormonal protocols for atresia induction and synchronization of a new follicular wave. Experiment 3 Test of two modified hormonal protocols for follicular atresia induction and synchronization of a new follicular wave. Chapter 4: Experiment 4 - Evaluation of plasma P4 levels and functional status of the corpus luteum (CL) using Doppler ultrasonography in cyclic mares submitted to treatments using different sources of exogenous P4. Chapter 5: Experiment 5 - Test of the efficiency of fixed-time ovulation induction and fertility in cyclic mares submitted to hormonal protocols for follicular wave and ovulation synchronization. It was hypothesized that the degree of synchrony of follicular growth would dependent on the efficiency obtained for induction of follicular atresia by the hormonal treatment performed. Besides, it was hypothesized that luteal function of CLs resulting from ovulations post-hormonal treatments would present high degree of vascularization and consequently the mares would present high plasmatic levels of P4. Another hypothesis was that it would be possible to perform fixed time artificial insemination in mares and its oocytes submitted to hormonal treatment for synchronization of estrus and ovulation would be fertile. The effect of new sources of hormonal combinations of P4 and estradiol and the association of low doses of hCG and deslorelin were tested during two reproductive seasons. Two of the previously tested hormonal protocols were selected based on their efficiency for new studies of fertility (Chapter 5; Experiment 5). The first protocol promoted follicular atresia and the oocytes were originated from follicles emerged from a new follicular wave. The second protocol was not capable to promote neither atresia nor the emergence of a new follicular wave, however caused follicle growth suppression and ovulation of follicles that resumed its growth after exogenous P4 source removal. The luteal function post-hormonal treatments remained with a good capacity of P4 production. The fertility of mares submitted to hormonal treatment protocols for ovulation synchronization, after fixed time artificial insemination 30 hours after ovulation induction, was evaluated by ultrasound diagnosis of gestation thirteen days after ovulation. Pregnancy rates were 83% (15/18) and 72% (13/18), on both treatments and were not statistically different (P > 0.05). Nevertheless, the average diameter of the embryonic vesicles in the group not capable of causing follicular atresia was smaller than in the group that showed follicular atresia (P < 0.05), and even smaller than the average reported in the literature on the thirteenth day of gestation. Initial embryonic development may have been compromised when the oocytes resulted from follicles which presented suppressed growth by the action of exogenous P4. Therefore, the hormonal strategies used were able to develop two hormonal treatment protocols capable of synchronizing ovulations for fixed time artificial insemination in mares presenting satisfactory pregnancy rates.

DINÂMICA FOLICULAR E FLUXO SANGUÍNEO INTRAOVARIANO EM CABRAS ESTIMULADAS COM DIFERENTES PROTOCOLOS HORMONAIS

A ultrassonografia (USG) em modo B e Doppler são ferramentas úteis na avaliação ginecológica e andrológica dos animais e, em anos recentes vem se implementando o uso da USG Doppler (USGD) em pequenos ruminantes, na mensuração dos índices velocimétricos de vascularidade da artéria ovariana, na avaliação da vascularização do corpo lúteo e, na mensuração da área vascularizada dos ovários, esses dados podem fornecer informação em quanto á função dos ovários, qualidade oocitária e, resposta ou eficiência dos protocolos hormonais. O objetivo deste estudo será avaliar o fluxo sanguíneo intraovariano e a dinâmica folicular em cabras estimuladas com diferentes protocolos hormonais. As cabras (n=29) serão divididas em três grupos (PHA, PHB, PHC), e cada grupo será submetido a um protocolo hormonal de estimulação folicular, no PHA (n=10), o protocolo iniciará com a administração intramuscular de 0,075mg de Cloprostenol, 48h depois será feita a inserção intravaginal de um controlled internal drug release (CIDR) e, 48h depois da inserção do CIDR será administrada uma dose única de 60 mg de FSH e 300UI eCG. No PHB (n=8), o protocolo iniciará com a inserção de uma esponja intravaginal com Acetato de Medroxiprogesterona (MPA) mantida durante 10 dias, no dia 8 do protocolo será administrada 1ml de cloprostenol e, 36 horas antes da remoção da esponja será feita a administração de uma dose única de 80mg de FSH e 300UI de eCG. No PHC (n=11), o protocolo hormonal iniciará com a inserção de uma esponja intravaginal mantida durante 12 dias, no dia 12 será feita a injeção de 1ml de cloprostenol e 0,750ml de eCG e, 36 horas depois será feita a injeção de 1ml de GnRH. O fluxo sanguíneo do ovário será monitorado por USGD antes e depois da administração das gonadotrofinas (FSH e eCG). Antes e depois da aplicação das gonadotrofinas nos PHs, a dinâmica folicular foi monitorada por ultrassonografia em modo B em tempo real e a vascularização intraovariana foi verificada por ultrassonografia Doppler. A partir das imagens Doppler, a área foi quantificada e pontuações subjetivas da área vascularizada foram atribuídas. Em todos os PHs houve um aumento significativo (P < 0.001) no número de folículos totais. Para folículos > 3 mm e > 5 mm. PHB mostrou um aumento de +111% e +120% respectivamente. Em relação ao diâmetro folicular máximo, foi semelhante (P = 0.2877) após a administração de gonadotrofinas e apenas em PHB e PHC incrementos positivos deste parâmetro foram observados durante o período em exame (+ 19.8% vs. +18%). O protocol C mostrou, depois da aplicação hormonal, um aumento significativo (P = 0.0323) na área Doppler de vascularização intraovariana, um resultado que não foi confirmado pela análise das pontuações da escala arbitrária. Podemos concluir que todos os protocolos de estimulação hormonal analisados foram eficientes em caprinos na indução do crescimento folicular. No entanto, apenas na associação eCG + GnRH no protocolo hormonal usado em programas para IATFdemonstraram um aumento na área de vascularização intraovariana.

The B-mode and Doppler ultrasound are useful tools in the gynecological and andrological assessment of animals and, in recent years, the use of Doppler ultrasonography has been implemented in small ruminants, in measuring the velocimetric indexes of vascularity of the ovarian artery, in evaluating the corpus luteum vascularization and in measuring the vascularized area of the ovaries, these data can provide information on the ovaries function, oocyte quality and response or efficiency of hormonal protocols. The aim of this study will be to evaluate intraovarian blood flow and follicular dynamics in goats stimulated with different hormonal protocols. The goats (n=29) will be divided into three groups (PHA, PHB, PHC), and each group will be submitted to one hormonal protocol of follicular stimulation, in PHA (n=10), the protocol will start with the intramuscular administration of 0,075mg of Cloprostenol, 48h after will be performed the intravaginal insertion of a controlled internal drug release (CIDR) and, 48h after a single dose of FSH (60mg) and eCG (300UI). In PHB (n=8), the hormonal protocol will start with the insertion of an intravaginal sponge with Medroxyprogesterone Acetate (MPA) maintained during 10 days, on day 8 of the protocol will be administered 1ml of Cloprostenol and, 36h before removing the sponge, a single dose of FSH (80mg) and eCG (300UI) will be administered. In PHC (n=11), the hormonal protocol will start with the insertion of an intravaginal sponge maintained during 12 days, on the day 12 will be injected 1ml of Cloprostenol and 0,750ml of eCG and 36h later the injection of 1ml of GnRH. Ovarian blood flow will be monitored by ultrasound Doppler before and after administration of gonadotropins (FSH and eCG). Before and after application of gonadotropins in PHs, follicular dynamics were monitored by real-time B-mode ultrasonography and intraovarian vascularization was verified by Doppler ultrasonography. From the Doppler images, the area was quantified and subjective scores of the vascularized area were assigned. In all PHs there was a significant increase (P < 0.001) in the number of total follicles. For follicles > 3 mm and > 5 mm, PHB showed an increase of +111% and +120% respectively. Regarding the maximum follicular diameter, this was similar (P = 0.2877) after the administration of gonadotropins and only in PHB and PHC positive increments of this parameter were observed during the period under examination (+ 19.8% vs. +18%). Protocol C showed, after hormonal application, a significant increase (P = 0.0323) in the Doppler area of intraovarian vascularization, a result that was not confirmed by the analysis of the arbitrary scale scores. We can conclude that all hormone stimulation protocols analyzed were efficient in goats in inducing follicular growth. However, only the eCG + GnRH association in the hormonal protocol used for FTAI programs demonstrated an increase in the area of intraovarian vascularization.

TRANSCRIPTOMA DAS CÉLULAS DA GRANULOSA DURANTE O DESENVOLVIMENTO FOLICULAR EM BOVINOS

Os mecanismos pelos quais ocorrem o desenvolvimento folicular e o estabelecimento da dominância ainda são apenas parcialmente compreendidos, constituindose como peçaschave para o completo entendimento não apenas da fisiologia reprodutiva, como também das patologias. O objetivo do estudo foi descrever, holisticamente, a expressão diferencial de genes nos estágios foliculares de prédesvio, desvio, pósdesvio e préovulatorio. Um total de 1805 genes foram diferencialmente expressos (DEGs). Desses DEGs, cento e cinco apresentaram intersecção nos diferentes estágios foliculares. A análise em conjunto da ontologia gênica (GO), enriquecimento em conjunto de genes (GSEA) e a interação de proteínaproteína (IPP), mostrou que os DEGs se associaram a respostas esteroidogênicas, proliferação celular e processos vasculares no folículo durante o estágio de desvio. No folículo pósdesvio e préovulatorio, esses processos mantiveram estreita relação com a resposta inflamatória; fenômeno que foi liderado, principalmente, por DEGs da família quinase. Moléculas como Fig, kitligante, FGFs e seus receptores, GDF9 e BMP15, IGFs, ativina, EGF, KGF, peptídeo intestinal vasoativo e angiotensinaII foram identificadas em vários estudos prévios e são relacionadas a numerosas atividades no contexto da dinâmica ovariana como a esteroidogênese, o crescimento e apoptose celular e a angiogênese. O nosso estudo complementou esses achados e mostrou a importância de DEGs que ainda não tinham sido descritos. Dentre esses DEGs, destacamse a ADM, NPR1, NPR3, CSF1R, RAGE. Em conclusão, os nossos resultados evidenciaram que a expressão do gene ADM, NPR1 e 3 é diferente entre o folículo desvio um e dois, regulando a vascularização e processos de desenvolvimento. Adicionalmente, a resposta inflamatória entre o folículo pósdesvio e o folículo préovulatorio foi caracterizada pela expressão de genes agrupados no termo ontológico de RAGE e família das quinases, respectivamente.

The mechanisms by which follicular development and the establishment of dominance occur are still partially understood, constituting key elements for a complete understanding not only of reproductive physiology but also of pathologies. The aim of the study was to describe, holistically, the differential expression of genes in the predeviation, deviation, postdeviation, and preovulatory follicular stages. A total of 1805 genes were differentially expressed (DEGs). One hundred and ive DEGs presented intersections in the different follicular stages. Together, gene ontology (GO),pooled gene enrichment (GSEA) and proteinprotein interaction (IPP) showed that DEGs were associated with steroidogenic responses, cell proliferation, and vascular processes in the follicle during the deviation. In the postdeviation and preovulatory follicles, these processes were closely related to the inlammatory response; a phenomenon that was led mainly by DEGs of the kinase family. Molecules such as Fig, kit ligand, FGFs, and their receptors, GDF9 and BMP15, IGFs, activin, EGF, KGF, vasoactive intestinal peptide, and angiotensinII were identiied in several previous studies and are related to numerous activities in the context of ovarian dynamics, notably steroidogenesis, follicle growth and apoptosis, and angiogenesis. Our study complemented these indings and showed the importance of DEGs that had not yet been described. Among these DEGs, were relevant ADM, NPR1, NPR3 and CSF1R. In conclusion, our results showed that the expression of the gene ADM, NPR1, and 3 is different between follicle deviation one and two, regulating vascularization and developmental processes. Additionally, the inlammatory response between the post deviation follicle and the preovulatory follicle was characterized by the expression of genes grouped in the ontological term of RAGE and kinase family, respectively.

Avaliação dopplervelocimétrica do ovário em cabras submetidas à estimulação ovariana / Dopplervelocimetric ovarian assessment in goats submitted to ovarian stimulation

As biotecnias da reprodução vêm sendo utilizadas na Medicina Veterinária, a fim de melhorar o desempenho reprodutivo de animais sem padrão racial definido (SRD), aumentando a produtividade desses animais. Dentre essas biotecnias, a ultrassonografia modo B, associada ao Doppler, permite a avaliação da dinâmica do fluxo sanguíneo e a detecção da neovascularização; além de permitir o escaneamento pelo modo Doppler, para calcular índices de vascularidade da artéria ovariana, índice de resistividade (IR) e velocidade do pico sistólico (PSV). Assim, o objetivo do presente trabalho foi comparar dois protocolos de estimulação ovariana em caprinos SRD, dando enfoque na Dopplervelocimetria ovariana, a fim de verificar fluxo sanguíneo e dopplervelocimetria da artéria ovariana; bem como, observar a dinâmica folicular de cabras submetidas a dois diferentes protocolos hormonais.

Reproductive biotechnologies have been used in veterinary medicine to improve the productivity and reproductive performance in caprine. Among these biotechniques, the mode B ultrasonography associated with Doppler allows the evaluation of blood flow dynamics and the vascularization detection by the determination of vascularity index such as resistivity index (IR) and systolic peak velocity (PSV) of two hormonal ovarian stimulation protocols on follicular dynamics and Doppler velocitometry parameters of the ovarian artery in caprine.