Resumo

This study investigated in vitro the efficacy of four different extenders (TES-TRIS and TRIS with LDL low-density lipoprotein at concentrations of 10 or 5%) on the longevity of buffalo sperm in the refrigeration process at 5ºC. Sperm motility was assessed every 24 hours up to 72 hours of incubation using computer assisted sperm analysis and sperm membrane integrity was examined by the hypoosmotic test (HOST) at T1, T24, T48 and T72 hours. Eleven buffaloes (1 ejaculate per buffalo) of the Murrah breed were used, ranging in age from 4 to 5 years. Immediately after collection, each ejaculate was fractionated into 4 aliquots, and each aliquot was diluted in one of four diluents to obtain 50x106SPTZ/mL. The samples were packed in 0.5mL straws and refrigerated (-0.25°C/min) to 5°C and maintained at this temperature until evaluation. Prior to evaluation the samples were heated at 37°C for 30 seconds. The statistical package used for analysis was STATA 12.0 "Statistical Analysis Software" and means were compared by the Friedman test (P<0.05). The results of sperm kinetics and HOST indicate that the TRIS diluent with 10% LDL could be a promising alternative for semen refrigeration at 5ºC, to be used in conventional and fixed time artificial insemination.(AU)

Este estudo investigou in vitro a eficácia de quatro diferentes extensores (TES-TRIS e TRIS com lipoproteína de baixa densidade - LDL, nas concentrações de 10 ou 5%) sobre a longevidade espermática de búfalos no processo de refrigeração a 5ºC. A motilidade espermática foi avaliada a cada 24 horas até 72 horas de incubação, por sistema computadorizado "CASA", e a integridade de membrana espermática foi examinada pelo teste hiposmótico (HOST) em T1, T24, T48 e T72 horas. Foram utilizados 11 búfalos (um ejaculado por búfalo) da raça Murrah, com idade variando de quatro a cinco anos. Imediatamente após a coleta, cada ejaculado foi fracionado em quatro alíquotas, e cada alíquota foi diluída em um dos quatro diluidores para a obtenção de 50x106 SPTZ/mL. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL, refrigeradas (-0,25oC/minuto) até 5oC e mantidas nessa temperatura até a avaliação. Previamente à avaliação, as amostras foram aquecidas a 37oC por 30 segundos. O pacote estatístico utilizado para as análises foi o STATA 12.0 "Statistical Analysis Software", e as médias foram comparadas pelo teste de Friedman (P<0,05). Os resultados de cinética e HOST até o tempo de 48 horas indicam que o diluidor TRIS com 10% LDL seria uma alternativa promissora para a refrigeração do sêmen a 5ºC, a ser utilizado na inseminação artificial e na inseminação artificial em tempo fixo.(AU)

Resumo

As colheitas de sêmen em equinos são realizadas de forma convencional, com vagina artificial fechada, em que todas as frações se misturam. No entanto, a colheita de sêmen de forma fracionada, separa as diferentes frações do ejaculado, cada uma dessas frações possuem uma maior ou menor quantidade de plasma seminal, sendo as glândulas sexuais acessórias responsáveis por sua produção. Cada garanhão possui características individuais com relação à manutenção das células espermáticas durante a criopreservação, essas características podem estar relacionadas à produção do plasma seminal, assim como dos vários componentes. Sabe-se que existe um efeito deletério desempenhado pelos componentes do plasma seminal produzido principalmente pelas vesículas seminais, aos espermatozoides durante o processo de criopreservação, porém, esses fatores ainda são desconhecidos. Várias hipóteses são sugeridas, tais como, a redução na produção de lipídeos e os tipos de proteínas e íons presentes em cada uma das frações do ejaculado. Sabendo disso, a colheita fracionada pode trazer benefícios aos espermatozoides, de forma que as primeiras frações não tenham contato com o plasma seminal produzido pelas vesículas seminais, possibilitando uma melhor manutenção espermática durante a criopreservação.

Equine semen is collected by conventional way, with a closed artificial vagina, where all the fractions are mixed. However, semen collection discontinuously, separating the different fractions of the ejaculate, each of these fractions have a greater or lesser amount of seminal plasma, being the sex accessory glands responsible for their production. Each stud has individual characteristics with respect to the maintenance of sperm cells during the cryopreservation, these characteristics may be related to production of seminal plasma as well as the various components making up. It is known that there is a deleterious effect played by components of seminal plasma mainly produced by the seminal vesicles, the sperm cells during the cryopreservation process, however, these factors are still unknown. Several hypotheses are suggested such as reducing the production of lipids and proteins and the types of ions present in each fraction of the ejaculate. Knowing this, the fractional harvest can be beneficial to sperm, so that the first fraction have no contact with seminal plasma produced by the seminal vesicles, allowing for better maintenance sperm during cryopreservation.

Las cosechas convencionales de semen equino, son realizadas con vagina artificial cerrada, donde todas las fracciones seminales quedan mescladas. No obstante, la colecta de semen de forma dividida o fraccionada, separa las diferentes “fracciones” del eyaculado. Fracciones que contiene una mayor o menor cantidad de plasma seminal, siendo las glándulas sexuales accesorias responsables por su producción. Cada reproductor posee características individuales con relación al mantenimiento de las células espermáticas durante la criopreservación, características que pueden estar relacionadas a la producción del plasma seminal, o a alguno de sus componentes. Es conocido la existencia de un efecto deletéreo desempeñado por los componentes del plasma seminal, producido principalmente por las vesículas seminales a los espermatozoides durante el proceso de criopreservación. Sin embargo, esos factores se desconocen. Varias hipótesis son sugeridas, tales como, reducción en la producción de lípidos y los tipos de proteínas e iones presentes en cada una de las fracciones del eyaculado. Sabiendo esto, la cosecha fraccionada puede traer beneficios a los espermatozoides, de forma que las primeras fracciones no tengan contacto con el plasma seminal producido por las vesículas seminales, posibilitando una mejor manutención espermática durante la criopreservación.

Resumo

The aim of this study was to evaluate the effect of two different extenders (Skimmed Milk Glucose - SMG or Lactose - Egg Yolk - LEY) on physical characteristics and fertility of fractionated donkey semen cooled at 5°C. For this, four Pêga donkeys were used as semen donors. The sperm rich fraction of the ejaculate was diluted preparing insemination doses containing 400 x 106 motile spermatozoa in a volume of 22 mL, cooled to 5°C and stored up to 48 hours in a container proposed by Palhares (1997). Sperm motility and vigor were assessed in fresh semen, after first semen dilution, before insemination, at 24 and 48 hours after storage. For the fertility evaluation, 44 mares were inseminated with semen stored for a period between 12 and 24 hours. The mares were inseminated on fixed days (Mondays, Wednesdays, and Fridays) after the detection of a follicle greater than a 30mm diameter in one of the ovaries through ovulation. Pregnancy diagnosis was performed on day 12 post-ovulation, using transrectal ultrasonography. Semen diluted in SMG showed superior sperm motility than LEY, at the Pre-AI evaluation (P<0.05). At 48 hours of storage, all donkeys had motility values between 45 and 53% for semen diluted in SMG, while only one donkey showed motility greater than 30% in the LEY treatment. The pregnancy rate/cycle for mares inseminated with semen diluted in SMG was superior than that obtained using LEY (56.52% vs 4.76%, respectively).(AU)

Objetivou-se com o presente experimento avaliar o efeito de dois diferentes diluidores (leite em pó desnatado glicose - SMG ou lactose gema de ovo - LEY) sobre as características físicas e a fertilidade do sêmen asinino coletado de forma fracionada e resfriado a 5ºC. Para isso, quatro jumentos da raça Pêga foram utilizados como doadores de sêmen. A fração espermática rica do ejaculado foi diluída preparando-se doses inseminantes contendo 400 x 106 espermatozoides móveis em um volume de 22 mL, resfriadas a 5ºC e armazenadas por até 48 horas em contêiner proposto por Palhares (1997). A motilidade e o vigor espermáticos foram avaliados no sêmen fresco, após a pré-diluição, antes das inseminações, às 24 e 48 horas de armazenamento. Para avaliação de fertilidade, 44 éguas foram inseminadas com sêmen armazenado por um período entre 12 e 24 horas, em dias fixos (segundas, quartas e sextas-feiras), após a detecção de um folículo de diâmetro maior ou igual a 30mm em um dos ovários, até a ovulação. O diagnóstico de gestação foi realizado a partir de 12 dias após a ovulação, por meio de ultrassonografia transretal. O sêmen diluído em SMG apresentou motilidade espermática superior à do LEY, já a partir do tempo pré-IA. Às 48 horas de armazenamento, todos os jumentos apresentaram valores de motilidade entre 45% e 53%, quando o sêmen foi diluído em SMG, enquanto apenas um jumento apresentou motilidade superior a 30% no tratamento utilizando LEY. A taxa de concepção/ciclo das éguas inseminadas também foi superior para o sêmen diluído em SMG em relação ao diluído em LEY (56,52% versus 4,76%, respectivamente).(AU)

Resumo

The first three jets of the sperm-rich fraction of Pêga jackasses were collected and assessed separately. Five fertile Pêga jackasses were used as semen donors and underwent fractionated semen collection, using an open model artificial vagina. The first three jets of the semen were collected separately and assessed for volume, sperm motility, vigor, concentration/mL of semen, and sperm morphology. These characteristics were compared between first, second and third jets and between jackasses. It was observed that the jet volume differed (P<0.05) between jackasses, although it was similar (P>0.05) between first, second and third jets. Sperm motility did not differ (P>0.05) between jets and jackasses. Vigor was similar (P>0.05) between jets of the same jackass, and only the first jet differed (P<0.05) between jackasses. The first, second and third jets of the sperm-rich fraction had decreased sperm concentrations (P<0.05) of 955.56, 725.56 and 280.56x 106 sperm/mL of semen, respectively. Sperm morphology differed between the first three jets only for the incidence of mid-piece defect, higher in the third one (4.26%), compared to the first (3.36%) and second (3.38%) ones. When comparing the morphological characteristics of the sperm-rich fraction between five jackasses, regardless of the jet, there were differences in the percentage of normal sperm, proximal cytoplasmic droplet, mid-piece and head defects.(AU)

Objetivou-se, no presente experimento, caracterizar os três primeiros jatos da fração rica do ejaculado de jumentos da raça Pêga. Para tal, cinco jumentos foram submetidos à coleta fracionada do sêmen, utilizando-se vagina artificial modelo aberta. Os três primeiros jatos da fração rica do ejaculado foram coletados separadamente e avaliados quanto ao volume, à motilidade e ao vigor espermáticos, à concentração espermática/mL de sêmen e à morfologia espermática. Comparações foram realizadas entre jatos e entre jumentos. Observou-se que o volume do jato diferiu (P<0,05) entre os jumentos, embora fosse similar (P>0,05) entre os jatos. A motilidade espermática não diferiu (P>0,05) entre jatos nem entre jumentos. O vigor espermático foi similar (P>0,05) entre os jatos de um mesmo jumento, e apenas o vigor do jato 1 diferiu (P<0,05) entre os jumentos. Independentemente do jumento, a fração rica do ejaculado foi composta por três jatos apresentando concentrações espermáticas decrescentes (P<0,05), com 955,56; 725,56 e 280,56 x 106 espermatozoides/mL de sêmen. A morfologia espermática diferiu entre os três jatos avaliados apenas para a incidência de defeitos de peça intermediária, sendo maior no jato três (4,26%), em relação aos jatos um (3,36%) e dois (3,38%). Comparando-se as características morfológicas do sêmen entre os cinco jumentos avaliados, independentemente do jato, observaram-se diferenças entre os reprodutores quanto ao percentual de espermatozoides normais, com gota citoplasmática proximal, com defeitos de peça intermediária e de cabeça.(AU)

Resumo

Avaliou-se a hipótese de que a adição de ciclodextrina carregada com colesterol (CCC) ao sêmen innatura de touros da raça Nelore, previamente ao processo de criopreservação, melhora os parâmetros demotilidade, morfologia e integridade de membrana no sêmen congelado/descongelado. Foram obtidos poreletroejaculação, cinco ejaculados de cada touro, e fracionados em: grupo controle e adição de 2 mg e 3 mg deCCC para cada 120 x 106 espermatozoides. Após 15 minutos de incubação à temperatura ambiente, amostrasforam diluídas e submetidas à criopreservação por congelamento. Amostras congeladas/descongeladas foramavaliadas quanto aos aspectos físicos e morfológicos sob microscopia óptica e à cinética espermática pelosistema CASA (Computer Assisted Sperm Analysis). A integridade de membrana foi avaliada pelo testehiposmótico e colorações supravital e de epifluorescência. Os resultados das análises de morfologia e testes deintegridade de membrana plasmática, bem como os valores de motilidade total (MT), motilidade progressiva(MP) e demais parâmetros avaliados pelo CASA, mostram que não houve diferença (P > 0,05) entre ostratamentos. Sendo assim, conclui-se que a adição de CCC ao ejaculado in natura de touros da raça Nelorepreviamente à criopreservação, não melhora os parâmetros de morfologia, integridade de membrana e cinéticaespermática.

It was evaluated if the addition of cyclodextrin loaded with cholesterol (CCC) to in natura semen ofNellore bulls prior to the cryopreservation process improves the parameters of membrane motility, morphologyand integrity in the frozen / thawed semen. Five ejaculates of each bull were obtained and fractionated in:control group and addition of 2 mg or 3 mg of CCC for each 120 x 106 spermatozoa. After 15 minutes ofincubation at room temperature, samples were diluted and subjected to cryopreservation. Frozen/thawedsamples were evaluated for physical and morphological aspects under optical microscopy and for spermatickinetics by the CASA system. For the evaluation of the plasma membrane integrity of the frozen / thawedspermatozoa, the hyposmotic test and the supravital and epifluorescent stains were used. The results of themorphology and plasma membrane integrity tests, as well as the values of total motility (MT), progressivemotility (MP) and other parameters of sperm kinetics evaluated by CASA, show that there was no statisticallysignificant difference (P > 0.05) among the treatments performed. Therefore, it is concluded that the addition ofCCC to the in natura ejaculate of Nellore bulls prior to cryopreservation, does not improve parameters ofmorphology, membrane integrity and sperm kinetics.