Recycled pequi (Caryocar brasiliense, Camb) shell ethanolic extract induces apoptosis in canine osteosarcoma cell / Extrato etanólico de cascas recicladas de pequi (Caryocar brasiliense, Camb) induz apoptose em células de osteossarcoma canino

Osteosarcoma is a mesenchymal cancer associated with high mortality in dogs and in humans. The biodiversity-rich Cerrado, the predominant biome in the Midwest region of Brazil, is native to locally appreciated fruits such as pequi (Caryocar brasiliense, Camb). Although this plant has been frequently used in folk medicine, the pharmacological properties of pequi fruit shells have not been fully evaluated. Thus, this study aimed to determine the cytotoxic activity of ethanol extract of recycled pequi shells on canine osteosarcoma cells in vitro. Cells were cultured and treated with final extract concentrations of 0, 0.029 µg/µL, 0.29 µg/µL, and 2.91 µg/µL for 24, 48, or 72 hours. Cell viability assay using trypan blue exclusion method and tetrazolium reduction method, cell survival assay, and double labeling with annexin V and propidium iodide were performed in the treated osteosarcoma cells. These allowed the determination of IC50, survival fraction, and type of cell death, respectively. Pequi shell ethanol extract at a concentration of 2.91 µg/µL showed the greatest inhibition of osteosarcoma cell growth in vitro, resulting in a 71.80% decrease in growth compared to the control. The mean IC50 was 155.2 µg/mL at 72 hours. The calculated survival fractions showed that cell growth at 72 hours was 3.33% lower in cells treated with 2.91 µg/µL extract. Results from the double labeling experiment suggest that apoptosis was the predominant type of cell death in cells treated with 2.91 µg/µL extract. These results demonstrate that ethanol extract of recycled pequi shells promotes apoptosis in canine osteosarcoma cells.

O osteossarcoma é uma neoplasia mesenquimal associada à alta mortalidade em cães e humanos. O pequi (Caryocar brasiliense, Camb.) é nativo do Cerrado, bioma rico em biodiversidade predominante na região Centro-Oeste do Brasil. Embora esta planta seja frequentemente utilizada na medicina popular, as propriedades farmacológicas da casca do pequi ainda são pouco conhecidas. Este estudo teve como objetivo determinar a atividade citotóxica do extrato etanólico de cascas de pequi recicladas em células de osteossarcoma canino. As células foram cultivadas e tratadas com concentrações finais de extrato de zero, 0,029 µg/µL, 0,29 µg/µL e 2,91 µg/µL por 24, 48 ou 72 horas. As células foram submetidas a ensaio de viabilidade celular pelos métodos de exclusão de azul de tripano da redução de tetrazólio para determinar a IC50, ao ensaio de sobrevivência celular para calcular a fração de sobrevivência e à dupla marcação com anexina V e iodeto de propídio para determinar o tipo de morte celular. O extrato etanólico de casca de pequi na concentração de 2,91 µg/µL apresentou a maior inibição do crescimento de células de osteossarcoma, com redução de 71,80% no crescimento em relação ao controle. A IC50 média foi de 155,2 µg/mL em 72 horas. O crescimento celular em 72 horas foi 3,33% menor nas células tratadas com 2,91 µg/µL de extrato. A apoptose foi o tipo predominante de morte celular em células tratadas com 2,91 µg/µL de extrato. Esses resultados demonstram que o extrato etanólico de cascas de pequi recicladas promove apoptose em células de osteossarcoma canino.

ANÁLISE QUÍMICA DE EXTRATOS DE Caryocar brasiliense COM POTENCIAL ANTIOXIDANTE

O pequi (Caryocar brasiliense) é uma fruta típica brasileira que se destaca pelo seu alto valor nutricional, além de seus atributos sensoriais como sabor, aroma e cor. A casca do fruto é um subproduto do processamento industrial e tem potencial para exploração devido à presença de compostos fenólicos que atuam no organismo animal como antioxidantes, capazes de prevenir ou impedir a ação de radicais livres causadores de doenças degenerativas. O objetivo deste trabalho foi analisar a presença de compostos fenólicos e suas atividades antioxidante por meio de análises químicas do extrato etanólico bruto e suas frações hexânica, diclorometano, acetato de etila e aquoso da casca de Caryocar brasiliense. A identificação de compostos fenólicos foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massas de alta resolução. O teor de fenois foi analisado pela determinação do perfil total de fenois pelo método Folin-Ciocalteu e a capacidade antioxidante foi analisada pelo método de atividade antioxidante in vitro pelo ensaio DPPH. Um total de quinze compostos fenólicos foram identificados protocatecuico, ácido gentísico, ácido vanílico, ácido cafeíco, ácido ferúlico, ácido p-cumárico, catequina, cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massas de alta resolução. As frações diclorometano, acetato de etila e aquosa apresentaram treze dos quinze compostos fenólicos, o extrato bruto doze e o hexânico dez. O perfil total de fenóis variou entre 0,6 e 48 GAE g/100mL e a atividade antioxidante in vitro apresentou índices altos variando entre 26% e 99,4%. Os resultados confirmam que o extrato bruto da casca do fruto de Caryocar brasiliense e suas frações hexânico, diclorometano, acetato de etila e aquoso possuem compostos fenólicos e atividade antioxidante.

The pequi (Caryocar brasiliense) is a typical Brazilian fruit that stands out for its high nutritional value, besides its sensorial attributes like flavor, aroma and color. The fruit peel is a byproduct of industrial processing and has potential for exploitation due to the presence of phenolic compounds that act in the animal body as antioxidants, capable of preventing or preventing the action of free radicals that cause degenerative diseases. The objective of this work was to analyze the presence of phenolic compounds and their antioxidant activities through chemical analyzes of crude ethanolic extract and its hexane, dichloromethane, ethyl acetate and aqueous fractions of Caryocar brasiliense bark. The identification of phenolic compounds was performed by high performance liquid chromatography coupled to high resolution mass spectrometry. Phenol content was analyzed by determination of the total phenolic profile by the Folin-Ciocalteu method and the antioxidant capacity was analyzed by the in vitro antioxidant activity method by the DPPH assay. A total of fifteen phenolic compounds were identified by comparison with standards: gallic acid, ellagic acid, protocatecuic acid, gentisic acid, vanillic acid, caffeic acid, ferulic acid, p-coumaric acid, catechin, epicatechin, luteolin, kaempferol, quercetin, rutin and naringerin by high performance liquid chromatography coupled to high resolution mass spectrometry. The dichloromethane, ethyl acetate and aqueous fractions showed thirteen of the fifteen phenolic compounds, the crude extract twelve and the hexane ten. The total phenol profile ranged from 0.6 to 48 GAE g / 100mL and the in vitro antioxidant activity showed high values ranging from 26% to 99.4%. The results confirm that the crude extract of the bark of the Caryocar brasiliense fruit and its hexane, dichloromethane, ethyl acetate and aqueous fractions have phenolic compounds and antioxidant activity.

Índice mitótico em células epiteliais da brânquia de Guaru (Poecilia vivipara) tratados com frações da casca do caule e da folha de pequi (Caryocar brasiliensis) / Mitotic index of epithelia cells in gills of Guppy (Poecilia vivipara) exposed to fractions of the leaf and bark of pequi (Caryocar brasiliensis)

Várias plantas nativas do bioma Cerrado são utilizadas como plantas medicinais. Dentre elas, o pequi possuí ação moluscicida utilizada no combate a esquistossomose. Objetivamos neste trabalho a verificação da toxicidade de frações de pequi sobre outros organismos aquáticos, antes da utilização destas em mananciais. Para isso, analisamos alterações no índice mitótico das células epiteliais das brânquias de Guaru (Poecilia vivipara) expostas às frações da folha e da casca do caule de pequi extraídas com acetato de etila. Constatamos que nenhuma das frações se mostrou letal aos peixes. Os animais expostos à fração acetato de etila da folha não apresentaram modificações significativas no índice mitótico em relação ao grupo controle, mas os animais expostos à fração acetato de etila da casca do caule apresentaram aumento do índice mitótico das células epiteliais em duas regiões dos filamentos branquiais. Desta forma, a fração acetato de etila da folha poderia ser utilizada como moluscicida em mananciais, enquanto que a fração acetato de etila da casca do caule necessitaria passar por outros testes mais específicos. (AU)

Many wild plants of the Cerrado bioma are used as medicinal plants. The pequi (Caryocar brasiliensis) is representative of those equipped with molluscicidal action against schistosomiasis. This paper sets out to verify the toxic action of pequi fractions in other aquatic animals before they are used in rivers or lakes. Analysis were made of the alterations to the mitotic index of epithelia cells in the gills of guppy (Poecilia vivipara) exposed to ethyl-acetate fraction of leaf pequi and bark. Animals exposed to ethyl-acetate fraction (leaf), no significant change was observed in the mitotic index when compared with the control group, whereas in fish exposed to ethyl-acetate fraction (bark) we detected an increase in mitotic index of the epithelia cells in two regions of the branchial filaments. Thus, ethyl-acetate fractions (leaf) could be used against schistosomiasis, given their high efficacy and low action as piscicide. (AU)

Morphometric analysis of Poecilia vivipara chloride cells exposed to fractions of Caryocar brasiliensis leaf and bark - DOI: 10.4025/actascibiolsci.v25i1.2107 / Análise morfométrica das células de cloro de Poecilia vivípara expostas a frações da folha e da casca do caule de Caryocar brasiliensis - DOI: 10.4025/actascibiolsci.v25i1.2107

Fractions of Caryocar brasiliensis leaf and bark, tested as molluscicidal, fought the intermediary host of schistosomiasis. The ecological niche of this mollusk is related to water sources. Besides this, a fungitoxic action of the ethyl-acetate fraction (leaf) was verified, exhibiting high activity towards Paracoccidioides brasiliensis. The gill epithelium of Poecilia vivipara (Cyprinodontiformes, Poeciliidae) was used to test the toxicity of these fractions to animal cells. Quantitative analyses demonstrated a decrease in the density of chloride cells exposed to the leaf fractions and an increase in those exposed to bark fractions. The leaf and bark fractions induced a decrease in the area of the chloride cells (CC) in the gill filament. The perimeter of the CC did not suffer significant changes in face of these fractions. The aqueous fraction of the leaf is more toxic to the guaru. Bark fractions are less debilitating, and can be employed in the control of cell populations, showing high efficacy at it

Frações da folha e casca de pequi (Caryocar brasiliensis), testadas como moluscicidas, combateram o hospedeiro intermedário da esquistossomose. O nicho ecológico desse molusco está associado a mananciais de água. Além disso foi verificada a ação fungiotóxica da fração acetato de etila (folha), que apresentou elevada atividade frente ao fungo Paracoccidioides brasiliensis. Utilizou-se o epitélio branquial de Poecilia vivípara (Cyprinodontiformes, Poeciliidae), para testar a toxicidade dessas frações para células animais. Análises quantitativas demonstraram redução da densidade numérica das células de cloro expostas às frações da folha e aumento das expostas à casca. A folha e a casca causaram a redução da área das células de cloro (CC) no filamento branquial. O perímetro das CC não sofreu alteração significativa perante tais frações. A fração aquosa da folha foi mais tóxica ao guaru. Frações da casca são menos prejudiciais, podendo ser empregadas no controle de populações celulares, pois se mostraram muito eficazes

Morphometric analysis of Poecilia vivipara chloride cells exposed to fractions of Caryocar brasiliensis leaf and bark - DOI: 10.4025/actascibiolsci.v25i1.2107 / Análise morfométrica das células de cloro de Poecilia vivípara expostas a frações da folha e da casca do caule de Caryocar brasiliensis - DOI: 10.4025/actascibiolsci.v25i1.2107

Fractions of Caryocar brasiliensis leaf and bark, tested as molluscicidal, fought the intermediary host of schistosomiasis. The ecological niche of this mollusk is related to water sources. Besides this, a fungitoxic action of the ethyl-acetate fraction (leaf) was verified, exhibiting high activity towards Paracoccidioides brasiliensis. The gill epithelium of Poecilia vivipara (Cyprinodontiformes, Poeciliidae) was used to test the toxicity of these fractions to animal cells. Quantitative analyses demonstrated a decrease in the density of chloride cells exposed to the leaf fractions and an increase in those exposed to bark fractions. The leaf and bark fractions induced a decrease in the area of the chloride cells (CC) in the gill filament. The perimeter of the CC did not suffer significant changes in face of these fractions. The aqueous fraction of the leaf is more toxic to the guaru. Bark fractions are less debilitating, and can be employed in the control of cell populations, showing high efficacy at it

Frações da folha e casca de pequi (Caryocar brasiliensis), testadas como moluscicidas, combateram o hospedeiro intermedário da esquistossomose. O nicho ecológico desse molusco está associado a mananciais de água. Além disso foi verificada a ação fungiotóxica da fração acetato de etila (folha), que apresentou elevada atividade frente ao fungo Paracoccidioides brasiliensis. Utilizou-se o epitélio branquial de Poecilia vivípara (Cyprinodontiformes, Poeciliidae), para testar a toxicidade dessas frações para células animais. Análises quantitativas demonstraram redução da densidade numérica das células de cloro expostas às frações da folha e aumento das expostas à casca. A folha e a casca causaram a redução da área das células de cloro (CC) no filamento branquial. O perímetro das CC não sofreu alteração significativa perante tais frações. A fração aquosa da folha foi mais tóxica ao guaru. Frações da casca são menos prejudiciais, podendo ser empregadas no controle de populações celulares, pois se mostraram muito eficazes