Evaluation of galectins 1 and 3 expression in canine melanoma / Avaliação da expressão das galectinas 1 e 3 no melanoma canino

Canine melanoma is a frequently-occuring neoplasm in dogs and presents as malignant and highly metastatic in this context, studies that contribute to the understanding of the tumor microenvironment in melanoma include the role of galectins. Galectins are proteins of the family of animal lectins that display carbohydrate recognition domains. Galectin-1 and galectin-3 are associated with neoplastic transformation, neoplastic cell survival, angiogenesis, immune system evasion, and metastasis. The goal of this study was to establish a correlation between expression patterns of galectin-1 and galectin-3 and the different degrees of aggressiveness of canine melanoma, as well as to determine serum concentration of galectin-3 in dogs with melanoma. Galectin-1 and galectin-3 expression was analyzed by immunohistochemistry in 30 canine melanomas, six melanocytomas and nine metastatic lymph nodes from patients whose primary tumors were also processed and analyzed. Serum samples from 30 dogs were collected and galectin-3 concentration was determined by ELISA and compared to the samples of 10 healthy dogs. Canine melanoma samples expressed galectin-1 in the cytoplasm and presented a variable pattern of galectin-3 staining depending on melanoma aggressiveness. We observed a decrease in the percentage of cells with cytoplasmic galectin-3 immunolabeling simultaneous to the increased nuclear staining intensity, while there was also a decrease in the percent frequency of nuclear galectin-3 immunolabeled cells according to progression of melanoma, comparing the least to the most aggressive cases. Dogs with melanoma had increased serum levels of galectin-3 when compared to healthy animals, suggesting its potential biomarker of patients with melanoma.(AU)

O melanoma canino é uma neoplasia frequente em cães que apresenta um potencial maligno e metastático. Neste contexto, investigar o microambiente tumoral é fundamental para compreender os mecanismos intercelulares e intracelulares envolvidos no desenvolvimento e progressão da doença. Neste estudo, destacamos as galectinas, proteínas da família das lectinas animais que exibem domínios de reconhecimento à carboidratos; a galectina-1 e a galectina-3 estão associadas a transformação neoplásica, sobrevivência de células neoplásicas, angiogênese, evasão do sistema immune e desenvolvimento de metástases. O objetivo deste estudo foi determinar os padrões de expressão de galectina-1 e galectina-3 em diferentes graus de agressividade do melanoma canino, bem como dosar a concentração sérica de galectina-3 em cães com melanoma e comparar com cães saudáveis. A expressão de galectina-1 e galectina-3 foi analisada em 30 melanomas caninos, seis melanocitomas e nove linfonodos metastáticos. A galectina-3 sérica foi mensurada em 30 cães com melanoma e comparada a 10 cães saudáveis. No melanoma canino a expressão de galectina-1 foi citoplasmática e a expressão de galectina-3 foi variável de acordo com o grau de agressividade. Notou-se uma redução na porcentagem de células com imunomarcação de galectina-3 citoplasmática e um aumento simultâneo da intensidade de imunomarcação nuclear, enquanto houve também uma diminuição na frequência percentual de células com imunomarcação nuclear de acordo com a progressão do melanoma comparando-se os casos menos com os mais agressivos. Cães com melanoma apresentaram níveis séricos aumentados de galectina-3 quando comparados a animais saudáveis, mostrando seu uso potencial como biomarcador em pacientes com melanoma.(AU)

Evaluation of galectins 1 and 3 expression in canine melanoma / Avaliação da expressão das galectinas 1 e 3 no melanoma canino

Canine melanoma is a frequently-occuring neoplasm in dogs and presents as malignant and highly metastatic in this context, studies that contribute to the understanding of the tumor microenvironment in melanoma include the role of galectins. Galectins are proteins of the family of animal lectins that display carbohydrate recognition domains. Galectin-1 and galectin-3 are associated with neoplastic transformation, neoplastic cell survival, angiogenesis, immune system evasion, and metastasis. The goal of this study was to establish a correlation between expression patterns of galectin-1 and galectin-3 and the different degrees of aggressiveness of canine melanoma, as well as to determine serum concentration of galectin-3 in dogs with melanoma. Galectin-1 and galectin-3 expression was analyzed by immunohistochemistry in 30 canine melanomas, six melanocytomas and nine metastatic lymph nodes from patients whose primary tumors were also processed and analyzed. Serum samples from 30 dogs were collected and galectin-3 concentration was determined by ELISA and compared to the samples of 10 healthy dogs. Canine melanoma samples expressed galectin-1 in the cytoplasm and presented a variable pattern of galectin-3 staining depending on melanoma aggressiveness. We observed a decrease in the percentage of cells with cytoplasmic galectin-3 immunolabeling simultaneous to the increased nuclear staining intensity, while there was also a decrease in the percent frequency of nuclear galectin-3 immunolabeled cells according to progression of melanoma, comparing the least to the most aggressive cases. Dogs with melanoma had increased serum levels of galectin-3 when compared to healthy animals, suggesting its potential biomarker of patients with melanoma.(AU)

O melanoma canino é uma neoplasia frequente em cães que apresenta um potencial maligno e metastático. Neste contexto, investigar o microambiente tumoral é fundamental para compreender os mecanismos intercelulares e intracelulares envolvidos no desenvolvimento e progressão da doença. Neste estudo, destacamos as galectinas, proteínas da família das lectinas animais que exibem domínios de reconhecimento à carboidratos; a galectina-1 e a galectina-3 estão associadas a transformação neoplásica, sobrevivência de células neoplásicas, angiogênese, evasão do sistema immune e desenvolvimento de metástases. O objetivo deste estudo foi determinar os padrões de expressão de galectina-1 e galectina-3 em diferentes graus de agressividade do melanoma canino, bem como dosar a concentração sérica de galectina-3 em cães com melanoma e comparar com cães saudáveis. A expressão de galectina-1 e galectina-3 foi analisada em 30 melanomas caninos, seis melanocitomas e nove linfonodos metastáticos. A galectina-3 sérica foi mensurada em 30 cães com melanoma e comparada a 10 cães saudáveis. No melanoma canino a expressão de galectina-1 foi citoplasmática e a expressão de galectina-3 foi variável de acordo com o grau de agressividade. Notou-se uma redução na porcentagem de células com imunomarcação de galectina-3 citoplasmática e um aumento simultâneo da intensidade de imunomarcação nuclear, enquanto houve também uma diminuição na frequência percentual de células com imunomarcação nuclear de acordo com a progressão do melanoma comparando-se os casos menos com os mais agressivos. Cães com melanoma apresentaram níveis séricos aumentados de galectina-3 quando comparados a animais saudáveis, mostrando seu uso potencial como biomarcador em pacientes com melanoma.(AU)

ESTRATÉGIAS NUTRICIONAIS E HORMONAIS EM PROTOCOLOS DE IATF SOBRE A TAXA DE CONCEPÇÃO DE VACAS DE CORTE CRIADAS NO BIOMA AMAZÔNIA

O presente trabalho tem como objetivo geral, avaliar possíveis efeitos de estratégias nutricionais e hormonais no incremento da taxa de concepção de vacas de corte submetidas a protocolos de Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF), criadas na região da Amazônia Legal. Foram desenvolvidos dois experimentos, nos quais, o experimento 1 avaliou o efeito da combinação de cianocobalamina com butafosfan no incremento da taxa de concepção de vacas de corte, criadas no sul do Pará. O segundo experimento, avaliou o efeito da suplementação no dia da inseminação artificial (IA) com Hormônio Liberador de Gonadotrofinas (GnRH) e Galectina-1 sobre a taxa de concepção de vacas de corte criadas na região norte do Estado do Tocantins. No experimento 1 foram utilizadas 170 vacas distribuídas em dois tratamentos (grupo tratado e grupo controle), e no experimento 2 foram utilizadas 158 vacas Nelore, multíparas, distribuídas em três tratamentos (T1-Galectina-1; T2-GnRH e T3-Controle). Todos os animais foram submetidos ao mesmo protocolo de IATF de três manejos. As variáveis avaliadas foram a manifestação do cio, o efeito de lote e dos tratamentos sobre a taxa de concepção dos animais. O diagnóstico de gestação foi realizado aos 30 dias pós-IA por meio de ultrassonografia transretal e os dados foram analisados via ANOVA através do PROC GLMNMIX do programa SAS (2009) com médias comparadas através do teste T de student com nível de significância de 5%. No experimento 1, a taxa de prenhez do grupo tratado foi 61,29% (57/93) e do controle foi de 45,45% (35/77) apresentando diferença significativa (P<0,05) entre os tratamentos. Sendo assim, a suplementação mineral injetável promoveu incremento na taxa de fertilidade dos animais tratados. No experimento 2, a taxa de concepção geral foi de 63%, e por grupo tratado a mesma foi maior no T2 (GnRH) com 70,97% (44/62), seguida do T3 (controle) que obteve 62,86% (22/35) e o T1 (Galectina-1) com 55,74% (34/61), havendo diferença estatística entre T2 e demais tratamentos. A utilização do GnRH no dia da IA promoveu aumento na taxa de concepção dos animais tratados. Conclui-se que a administração da combinação de fósforo orgânico e vitamina B12, bem como a adição de GnRH no dia da IA promoveu incrementos na taxa de concepção de vacas de corte submetidas a protocolos de IATF.

The present work has as general objective, to evaluate possible effects of nutritional and hormonal strategies in the increase of the conception rate of beef cows submitted to Fixed Time Artificial Insemination (IATF) protocols, created in the Legal Amazon region. Two experiments were developed, in which, experiment 1 evaluated the effect of the combination of cyanocobalamin with butafosfan in increasing the conception rate of beef cows, reared in southern Pará. The second experiment, evaluated the effect of supplementation on the day of insemination artificial (AI) with Gonadotropin Releasing Hormone (GnRH) and Galectin-1 on the conception rate of beef cows raised in the northern region of the State of Tocantins. In experiment 1, 170 cows distributed in two treatments (treated group and control group) were used, and in experiment 2, 158 multiparous Nellore cows, distributed in three treatments (T1-Galectin-1; T2-GnRH and T3-Control). All animals were submitted to the same IATF protocol of three managements. The variables evaluated were the manifestation of heat, the effect of batch and treatments on the animals' conception rate. The pregnancy diagnosis was made at 30 days post-AI by means of transrectal ultrasound and the data were analyzed via ANOVA using the PROC GLMNMIX of the SAS program (2009) with means compared using the Student's T test with a significance level of 5%. In experiment 1, the pregnancy rate of the treated group was 61.29% (57/93) and that of the control group was 45.45% (35/77), showing a significant difference (P <0.05) between treatments. Thus, injectable mineral supplementation promoted an increase in the fertility rate of the treated animals. In experiment 2, the general conception rate was 63%, and by treated group it was higher in T2 (GnRH) with 70.97% (44/62), followed by T3 (control) which obtained 62.86% (22/35) and T1 (Galectin-1) with 55.74% (34/61), with statistical difference between T2 and other treatments. The use of GnRH on the day of AI promoted an increase in the conception rate of the treated animals. It is concluded that the administration of the combination of organic phosphorus and vitamin B12, as well as the addition of GnRH on AI day promoted increases in the conception rate of beef cows submitted to IATF protocols.

Galectins and collectinis expression are increased in Haemonchus contortus-infected corriedale sheep

Galectins and collectins are proteins classified in the lectin family that have the ability to recognize molecular patterns associated with pathogens. Studies on cattle have demonstrated high expression of these proteins during infection with gastrointestinal nematodes. The aim of this study was to investigate whether the level of Haemonchus contortus infection would alter the expression of galectins (Gal11 and Gal14) and collectins (SPA and CGN) in sheep. Twelve Corriedale sheep exposed to natural infection with nematodes were divided into two groups: group 1 (G1, n = 7) and group 2 (G2, n = 5), with low and high parasite burdens, respectively, based on fecal egg counts and abomasal parasite counts. The fecal egg counts and abomasal parasite counts were significantly different (p 0.05) between the groups. Galectin and collectin gene expression was observed in all sheep abomasal samples. However, animals with lower infection levels showed lower expression of the genes Gal14, SPA and CGN (p 0.05). Expression of lectins was associated with the abomasal H. contortus burden, thus suggesting that these proteins may have a role in controlling of this infection.

Colectinas e galectinas são proteínas da família das lectinas que possuem a capacidade de reconhecer padrões moleculares associados aos patógenos. Estudos em bovinos têm demonstrado a alta expressão dessas proteínas durante a infecção por nematoides gastrintestinais. O objetivo deste estudo foi investigar se o nível de infecção de Haemonchus contortus altera a expressão de colectinas (SPA e CGN) e galectinas (Gal11 e Gal14) de ovinos. Doze ovinos da raça Corriedale expostos a infecção natural com nematoides foram separados em dois grupos: grupo 1 (G1, n=7) com menor grau de parasitismo; e grupo 2 (G2, n=5) com maior grau, a partir da contagem do número de parasitos recuperados do abomaso e OPG. A contagem de OPG e de parasitos recuperados do abomaso dos grupos G1 e G2 apresentaram diferença estatística (p 0,05). A expressão dos genes de colectinas e galectina foi observada em todas as amostras de abomaso dos ovinos, porém animais com menor grau de infecção apresentaram menor expressão dos genes de Gal14, SPA e CGN (p 0,05). A expressão de lectinas foi associada ao número de H. contortus encontrados no abomaso de ovinos, indicando um possível papel dessas proteínas no controle da infecção.

Galectins and collectinis expression are increased in Haemonchus contortus-infected corriedale sheep / Aumento da expressão gênica de colectinas e galectinas em ovinos corriedale infectados por Haemonchus contortus

Galectins and collectins are proteins classified in the lectin family that have the ability to recognize molecular patterns associated with pathogens. Studies on cattle have demonstrated high expression of these proteins during infection with gastrointestinal nematodes. The aim of this study was to investigate whether the level of Haemonchus contortus infection would alter the expression of galectins (Gal11 and Gal14) and collectins (SPA and CGN) in sheep. Twelve Corriedale sheep exposed to natural infection with nematodes were divided into two groups: group 1 (G1, n = 7) and group 2 (G2, n = 5), with low and high parasite burdens, respectively, based on fecal egg counts and abomasal parasite counts. The fecal egg counts and abomasal parasite counts were significantly different (p 0.05) between the groups. Galectin and collectin gene expression was observed in all sheep abomasal samples. However, animals with lower infection levels showed lower expression of the genes Gal14, SPA and CGN (p 0.05). Expression of lectins was associated with the abomasal H. contortus burden, thus suggesting that these proteins may have a role in controlling of this infection.(AU)

Colectinas e galectinas são proteínas da família das lectinas que possuem a capacidade de reconhecer padrões moleculares associados aos patógenos. Estudos em bovinos têm demonstrado a alta expressão dessas proteínas durante a infecção por nematoides gastrintestinais. O objetivo deste estudo foi investigar se o nível de infecção de Haemonchus contortus altera a expressão de colectinas (SPA e CGN) e galectinas (Gal11 e Gal14) de ovinos. Doze ovinos da raça Corriedale expostos a infecção natural com nematoides foram separados em dois grupos: grupo 1 (G1, n=7) com menor grau de parasitismo; e grupo 2 (G2, n=5) com maior grau, a partir da contagem do número de parasitos recuperados do abomaso e OPG. A contagem de OPG e de parasitos recuperados do abomaso dos grupos G1 e G2 apresentaram diferença estatística (p 0,05). A expressão dos genes de colectinas e galectina foi observada em todas as amostras de abomaso dos ovinos, porém animais com menor grau de infecção apresentaram menor expressão dos genes de Gal14, SPA e CGN (p 0,05). A expressão de lectinas foi associada ao número de H. contortus encontrados no abomaso de ovinos, indicando um possível papel dessas proteínas no controle da infecção.(AU)

"Função da galectina-1 na resistência do hospedeiro contra a infecção experimental por Neospora caninum"

Neospora caninum (Nc) é um protozoário Apicomplexa, parasita intracelular obrigatório, causador da neosporose, uma doença clínica indicada como uma das principais causas de aborto, morte neonatal e infertilidade em bovinos, representando um importante problema de saúde veterinária com grande impacto econômico no mundo todo. Galectina-1 (gal-1), uma proteína ligante de -galactosídeos, exibe diversas atividades biológicas em muitas doenças inflamatórias, mas nada foi descrito até o momento sobre a gal-1 na infecção por Nc. Este trabalho foi desenvolvido para avaliar o efeito da gal-1 (tanto endógena quanto exógena) na infecção experimental murina por N. caninum e o efeito da gal-1 exógena sobre a invasão celular de N. caninum em ensaios in vitro. Primeiramente, foram realizados ensaios para investigar a capacidade de ligação da gal-1 com taquizoítas de Nc e seu papel na invasão in vitro por Nc em diferentes modelos celulares. Nesses ensaios, gal-1 mostrou ligar-se aos taquizoítas de Nc via CRD (domínio de reconhecimento de carboidrato) de maneira dose-dependente. Tanto células VERO, quanto macrófagos e esplenócitos mostraram ser modelos eficazes para o estudo in vitro do processo de invasão e proliferação de Nc, porém, gal-1 não interfere no processo de invasão. Para os ensaios in vivo, camundongos C57BL/6 machos selvagens (WTgal-1+/+) e geneticamente deficientes de gal-1 (KOgal-1-/-) foram infectados com taquizoítas de Nc1-lacZ, por via intraperitoneal, e tratados com gal-1 exógena por 7 dias. Aos 5, 8 e 15 dias pós-infecção, foram avaliados diversos parâmetros imunológicos, como carga parasitária peritoneal e produção de óxido nítrico por células da cavidade peritoneal, perfil celular do peritônio e baço, produção de citocinas por células T, quantificação de anticorpos específicos anti-Nc e quantificação de citocinas nos sobrenadantes de cultura de células esplênicas. A ausência de galectina-1 endógena levou ao aumento da produção de óxido nítrico (NO), da população de macrófagos F4/80+ peritoneais e da secreção de IL-6. Porém, essa deficiência de gal-1 levou à redução da população de linfócitos T (CD4+ e CD8+) produtores de IFN- , diminuição da ativação de linfócitos B e da secreção de IFN- e IL-10. Com relação aos camundongos WTgal-1+/+, foi destacada a contribuição da gal-1 exógena para estimular a produção de NO, promover o aumento do número de células F4/80+, induzir a secreção de IFN- , IL-10, IL-4 e IL-6, além de aumentar a produção de IgG e IgM. Em animais KOgal-1-/-, em contrapartida, foi observado um efeito imunorregulatório dessa galectina exógena sobre a resposta à infecção, caracterizado pelo aumento da carga parasitária peritoneal e diminuição da população de macrófagos (F4/80+) produção de NO na cavidade peritoneal. Além disso, e em conformidade com o perfil regulatório da resposta, foi possível observar a diminuição da população de linfócitos TCD8+ produtores de IFN- e aumento das células T (CD4+ e CD8+) produtoras de IL-10 nos animais infectados e tratados, que corroborou com a secreção destas citocinas por células esplênicas. Com base nestes resultados, sugerimos que a gal-1 endógena medeia perfis imunológicos da resposta do hospedeiro, inibindo mecanismos efetores da resposta inata e estimulando a resposta adaptativa contra o parasita N. caninum e que a suplementação com gal-1 exógena gera uma imunorregulação na reposta do hospedeiro contra o parasita N. caninum. Nosso trabalho é pioneiro no estudo da interação da gal-1 na infecção com Nc e, embora seja um investigação inicial dos mecanismos imunológicos envolvidos nesse processo, sugere uma ação da gal-1 na modulação da resposta imunológica contra N. caninum.

Neospora caninum (Nc) is an apicomplexa protozoan, an obligate intracellular parasite that causes neosporosis, a clinical disease indicated as one of the main causes of abortion, neonatal death and infertility in cattle, representing an important veterinary health problem with great economic impact worldwide. Galectin-1 (gal-1), a -galactosidase binding protein, exhibits several biological activities in many inflammatory diseases. This work was aimed to evaluating the effect of gal-1 (both endogenous and exogenous) on N. caninum infection and the effect of exogenous gal-1 on the in vitro cellular invasion of N. caninum. Firstly, assays were developed to investigate the binding capacity of gal-1 with Nc tachyzoites and the role of this lectin in in vitro invasion process by Nc. Different cell models were used and VERO cells, macrophages and splenocytes proved to be effective models for the study of the Nc invasion and proliferation process. However, although galectin-1 has the ability to bind to Nc via CRD in a dose-dependent manner, this lectin does not interfere with the invasion process. For the in vivo assays, wild-type (WTgal-1+/+) and genetically deficient gal-1 mice (KOgal-1-/-) were intraperitoneally infected with Nc1-lacZ tachyzoites and treated with gal-1 for 7 days. At 5, 8 and 15 days post infection, various immunological parameters were evaluated, such as peritoneal parasite load and nitric oxide production by peritoneal cells, peritoneal and spleen cell profile, cytokine production by T cells, quantification of specific anti-Nc and quantification of cytokines in splenic cell culture supernatants. The absence of endogenous galectin-1 led to increased nitric oxide, peritoneal F4/80+ macrophage population and IL-6 secretion. However, gal-1 deficiency decreased the population of T cells (CD4+ and CD8+) producing IFN-, the B lymphocyte activation and the secretion of IFN- and IL-10. With respect to WTgal-1+/+ mice, we can highlight a contribution of exogenous gal-1 to stimulating NO production, promoting the increase of F4/80+ cells, inducing the secretion of IFN-, IL-10, IL-4 and IL-6, in addition to increasing the production of IgG and IgM. In contrast, an immunoregulatory effect of this galectin in response to infection was observed in the KOgal-1-/- animals. It was observed an increased peritoneal parasite burden, decreased macrophage (F4/80+) population and NO production by these cells in the peritoneal cavity. In addition, in agreement with the regulatory profile of the response, it was observed a decrease of the CD8+ T cells population producing IFN- and increased T cells (CD4+ and CD8+) producing IL-10, which corroborated with the secretion of these cytokines by the splenic cells. Based on these results, we suggest that endogenous gal-1 mediates immunological profiles of host response by inhibiting innate effector mechanisms and stimulating an adaptive response against N. caninum. Furthermore, exogenous gal-1 immunoregulate the host immune response against the parasite. Our work is a pioneer in studying the interaction of gal-1 in Nc infection and, although it is an initial investigation of the immunological mechanisms, our data suggests role of gal-1 in the modulation of the immune response against N. caninum.

Avaliação da expressão das galectinas no melanoma canino

O melanoma canino é uma neoplasia frequente em cães, tem um caráter maligno, invasivo, com potencial metastático e, neste contexto, estudos acerca do envolvimento das galectinas se justifica para ampliar o conhecimento do microambiente tumoral desta neoplasia. As galectinas são proteínas da família das lectinas animais que apresentam domínios de reconhecimento de carboidratos e podem estar localizadas no núcleo, no citoplasma, na superfície de células e secretadas em diversos tecidos. Acredita-se que principalmente a galectina-1 (gal-1) e a galectina-3 (gal-3) estejam associadas à transformação neoplásica, sobrevivência da célula neoplásica, angiogênese, evasão do sistema imune e formação de metástases. A gal-1 está principalmente relacionada com a transformação tumoral e evasão do sistema imune. A gal-3 está principalmente associada com a angiogênese, desenvolvimento de metástases pelo aumento da motilidade e adesão entre as células neoplásicas e adesão entre as células neoplásicas e o endotélio, além de contribuir para a evasão do sistema imune. O objetivo do estudo foi verificar o padrão de expressão de gal-1 e gal-3 nos diferentes graus de agressividade do melanoma canino, além de avaliar a concentração sérica de gal-3 e comparar com cães clinicamente saudáveis. Foram analisadas a expressão de gal-1 e gal-3 em 30 fragmentos de melanoma canino, seis fragmentos de melanocitoma e nove fragmentos de linfonodos metastáticos. Foi realizada a dosagem sérica de gal-3 em 30 cães com melanoma e comparada a 10 cães clinicamente saudáveis. O melanoma canino expressou gal-1 principalmente no citoplasma e expressou um padrão variável de gal-3 no citoplasma e no núcleo. Em relação à expressão de gal-3 observou-se que conforme a agressividade do melanoma houve diminuição da frequência de células com marcação citoplasmática e um aumento da intensidade de marcação nuclear com concomitante diminuição da frequência de células com marcação nuclear. Os cães com melanoma apresentaram aumento dos níveis séricos de gal-3 antes da exérese da neoplasia quando comparados aos animais clinicamente saudáveis, mostrando o seu potencial uso como biomarcador do melanoma.

Canine melanoma is a frequent neoplasm in dogs. It has a malignant, invasive and metastatic potential. In this context, studies about the involvement of galectins are justified to increase the knowledge of melanoma tumor microenvironment. Galectins are proteins of the animal lectins family, that display carbohydrate recognition domains and may be located in the nucleus, cytoplasm, cell surface, as well as secreted in various tissues. Galectin-1 (Gal-1) and galectin-3 (Gal-3) are associated with neoplastic transformation, neoplastic cell survival, angiogenesis, immune system evasion, and metastasis formation. Gal-1 is mainly related to tumor transformation and immune system evasion. Gal-3 is mainly associated with angiogenesis, development of metastasis by increased motility and adhesion between neoplastic cells and adhesion between neoplastic cells and endothelium, while contributing to the evasion of the immune system. The aim of the study was to ascertain the expression pattern of Gal-1 and Gal-3 in different severity degrees of canine melanoma, as well as to evaluate the serum concentration of Gal-3 and to compare with clinically healthy dogs. Gal-1 and Gal-3 expression was analyzed in 30 canine melanoma fragments, six melanocytoma fragments and nine fragments of metastatic lymph nodes. Serum Gal-3 was measured in 30 dogs with melanoma and compared to 10 clinically healthy dogs. Canine melanoma expressed Gal-1 primarily in the cytoplasm and presented a variable pattern of Gal-3 in the cytoplasm and nucleus. Regarding the expression of Gal-3, it was observed that according to melanoma severity, there was a decrease in the percent frequence of cells with cytoplasmic labeling and an increase in the nuclear marking intensity with concomitant decrease in the percent frequency of nuclear-labeled cells. Dogs with melanoma had increased serum levels of Gal-3 before the excision of the neoplasia when compared to the clinically healthy animals, showing its potential use as a melanoma biomarker.

Resposta de citocinas e lectinas a Trichostrongilídeos de ovinos em distintas fases de crescimento

A resposta imune contra parasitos em modelos murinos tem caracteristicas de indução de células Th2. Infecções experimentais por diversas espécies parasitárias em ruminantes nem sempre apresentam este perfil Th2 clássico de indução de citocinas e células efetoras. Outras moléculas tem sido implicadas na resposta contra nematoides em ruminantes dentre elas as letinas, que são proteínas ligadoras de carboidratos que estão envolvidas tanto nas respostas inata como adaptativa. Somado a isso observamos que estudos de infecção natural por nematoides são muito escassos e infecções experimentais em ambientes controlados não simulam com exatidão o que ocorre nos animais criados extensivamente. O objetivo do estudo foi detectar a expressão gênica de colectinas, galectinas e citocinas em tecido abomasal de ovinos de diferentes faixas etárias naturalmente infectados por helmintos gastrintestinais. Cada grupo foi formado com seis ovinos: o grupo I foi composto por lactentes, com menos de dois meses; o grupo II, borregos, de quatro a seis meses de idade, e o grupo III, adultos, com idade entre 18 e 24 meses. A carga parasitária foi determinada pelas contagens de ovos nas fezes (OPG) e de estádios imaturos e adultos no trato gastrintestinal. Fragmentos do abomaso foram coletados para quantificação da expressão gênica por RT-qPCR para a proteína surfactante A (SP-A), conglutinina (CGN), galectina 11 (GAL11) e 14 (GAL14), interleucina 4 (IL-4), IL-5, IL-13, IL-10, IL-6, fator transformador de crescimento-beta (TGF-), interferon-gama (IFN-) e proteínase de mastócitos (MCP-1). As proteínas recombinantes, galectina 11(r-Gal11) e conglutinina (r-Cgn) foram produzidas para indução da produção de anticorpo policlonal e posterior caracterização em tecido abomasal por imunohistoquímica. Haemonchus contortus foi o principal parasita observado no abomaso. Todos os marcadores foram detectados no tecido abomasal destes ovinos, e diferenças estatisticamente significativas foram observadas na expressão gênica de CGN, galectina 11, MCP-1 e IL-5 onde o Grupo II apresentou maior expressão que os demais (p <0,05), apesar de não ser encontrada correlação entre a carga parasitária e a expressão das lectinas e citocinas neste compartimento. A caracterização tecidual de galectina 11 e conglutinina por imunohistoquímica revelou um padrão granular no citoplasma de células secretoras da mucosa abomasal de ambas as proteínas sendo que a conglutinina também marcou o tecido conjuntivo de forma inespecífica.

The characteristics of immune response against parasites in murine models have a profile of Th2 cell induction. Experimental parasitic infections in ruminant do not have the classical profile of Th2 cytokine induction and effector cells. Other molecules have been implicated in ruminants response against nematodes such letins, a carbohydrate-binding proteins that are involved in both innate and adaptive immune responses. Additionally, studies of natural infection of nematodes are very scarce and experimental infections in controlled environments do not simulate exactly what occurs in animals raised extensively. The objective of the study was meansure collectins, galectins and cytokines gene expression in abomasal tissue in different ages of sheep naturally infected with gastrointestinal helminths. Each group consisted of six sheep: group I consisted of infants under two months; group II, lambs, four to six months old, and the group III, adults, aged between 18 and 24 months. The parasite load was determined by egg counts in faeces (EPG) and immature stages and adults in the gastrointestinal tract. Fragments of the abomasum were collected for quantification of gene expression by RT-qPCR for surfactant protein A (SP-A), conglutinin (CGN), galectin 11 (GAL11) and 14 (GAL14), interleukin 4 (IL-4), IL -5, IL-13, IL-10, IL-6, transforming growth factor-beta (TGF-), interferon-gamma (IFN-) and mast cell proteinase (MCP-1). The recombinant proteins, galectin 11 (r-Gal11) and conglutinin (r-CGN) were produced to induce polyclonal antibody production and further characterization of abomasal tissue by immunohistochemistry. Haemonchus contortus was the main parasite observed in the abomasum. All markers were detected in abomasal tissue of these sheep, and statistically significant differences in gene expression of CGN, galectin 11, MCP-1 and IL-5 where the Group II showed higher expression than the others (p <0.05) although not find any correlation between the parasitic load and the expression of lectins, and cytokines in this compartment. The tissue characterization galectin 11 and conglutinin by immunohistochemistry showed a granular pattern in the cytoplasm of cells secreting the abomasal mucosa of both proteins and that the conglutinin also marked the tissue nonspecific.