Resumo
Estima-se que 75% das doenças emergentes compreendam zoonoses, cuja maioria tem como fontes de infecção animais selvagens; destas, cerca de 22,8% são veiculadas por vetores artrópodes. Desta forma, monitorar a presença de patógenos em animais selvagens em nichos compartilhados com seres humanos se torna um importante método preventivo de infecções zoonóticas. As famílias Bartonellaceae e Anaplasmataceae englobam Alphaproteobactérias Gram-negativas, intracelulares facultativas e obrigatórias, respectivamente, que vêm sendo identificadas em uma ampla variedade de mamíferos, incluindo seres humanos. Já os micoplasmas hemotróficos são bactérias Gram-negativas sem parede celular, de localização epieritrocitária, que podem causar desde infecções assintomáticas até anemia hemolítica severa, tanto em animais como em humanos. Coxiella burnetii é o principal representante da família Coxiellaceae (Gammaproteobactérias) e é conhecida por causar a Febre Q em humanos. Apesar de ser transmitido por aerossóis, esse agente vem sendo detectado em diversos ectoparasitos que talvez possam atuar em seu ciclo de vida. Já os piroplasmas são protozoários da ordem Piroplasmida e causam principalmente anemia hemolítica em animais de produção, domésticos e, eventualmente, em seres humanos. Embora esses agentes supracitados vêm sendo cada vez mais estudados em quirópteros, ainda pouco se sabe a respeito de sua ocorrência e diversidade genética em morcegos no Brasil. Os principais ectoparasitos encontrados nesses animais são representados por moscas das famílias Streblidae e Nycteribiidae, carrapatos, e ácaros das famílias Spinturnicidae e Macronyssidae. Considerando os patógenos de interesse em Saúde Pública supracitados e a expressiva representatividade de animais da ordem Chiroptera no Brasil, objetivou-se obter informações sobre a ocorrência e diversidade genética de agentes Anaplasmataceae, Bartonellaceae, Mycoplasmataceae, Coxiellaceae e protozoários da ordem Piroplasmida em quirópteros e seus respectivos ectoparasitos coletados em área periurbana da cidade de Campo Grande, estado do Mato Grosso do Sul, no centro-oeste brasileiro. Um total de 418 amostras (135 amostras de baço, 133 de sangue e 150 ectoparasitos) foram coletados de 135 animais das famílias Phyllostomidae, Vespertillionidae e Mollossidae. Por meio de técnicas moleculares verificou-se positividade de 18,13% (34/418) para Bartonella spp. dentre todas as amostras coletadas. Dessas, 17 amostras foram clonadas para o gene gltA a fim de obter 3 clones de cada uma para acessar a diversidade genotípica dentro da mesma amostra biológica. Com os 51 gltA-clones obtidos foi possível observar 13 genótipos diferentes, sendo que pelo menos dois ocorreram dentro de uma mesma amostra. Análises filogenéticas baseadas nos genes ftsZ, rpoB e nuoG confirmaram a alta diversidade de genótipos de Bartonella spp. em quirópteros e seus ectoparasitos. Para agentes Anaplasmataceae, foi observada positividade de 1,67% (7/418), 11,96% (50/418) e 13,63% (57/418) das amostras testadas para Anaplasma spp. (16S rRNA), Ehrlichia spp. (dsb) e Neorickettsia spp. (16S rRNA), respectivamente. As sequências obtidas mostraram-se similares a Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia minasensis, Neorickettsia risticii, e Neorickettsia findlayensis por análise iv pelo nBLAST, e filogeneticamente relacionado a Ehrlichia ruminantium baseado no gene gltA. Trata-se da primeira evidência molecular de agentes Anaplasmataceae em quirópteros e ectoparasitos associados no Brasil. Já para hemoplasmas, positividade de 13,6% (57/418) foi observada. Dentre as 24 sequências obtidas pelo gene 16S rRNA foi possível encontrar 12 genótipos diferentes que se distribuíram pelo macroclado do grupo haemofelis. As duas sequências 23S rRNA obtidas se posicionaram próximas a Candidatus Mycoplasma haematohydrochaerus, M. haemofelis e M. haemocanis. Todas as amostras de sangue e baço dos morcegos amostrados mostraram-se negativas na qPCR para C. burnetii baseada no gene IS1111. Para piroplasmídeos, 17 dos 135 (12,6%) morcegos amostrados mostraram-se positivos para agentes da ordem Piroplasmida (gene 18S rRNA). Trata-se do primeiro relato molecular de piroplasmídeos em quirópteros no Brasil. A análise filogenética mostrou a possível ocorrência de duas novas espécies: Piroplasmid n. sp. Artibeus spp., posicionado filogeneticamente próximo a Babesia canis e B. vogeli, e Piroplasmid n. sp. P. discolor, que formou um clado monofilético. Infelizmente, as amostras de ectoparasitos não puderam ser utilizadas na detecção de piroplasmídeos e C. burnetii. Enquanto moscas Streblidae mostraram positividade nos ensaios moleculares para Bartonella spp. (11/64), Ehrlichia spp. (7/64) e Mycoplasma spp. (1/64), carrapatos Ornithodoros hasei mostraram-se positivos para Ehrlichia spp. (3/19), Anaplasma spp. (1/19) e Neorickettsia spp. (1/19); por fim, ácaros Spinturniciidae e Macronyssidae apresentaram positividade para Bartonella spp. (4/21 Macronyssidae) e Ehrlichia spp. (18/21 Macronyssidae e 6/46 Spinturnicidae). Ainda, co-positividade para os diversos agentes pesquisados foi observada no presente estudo. Como conclusão, morcegos não-hematófagos de área periurbana do centro-oeste brasileiro atuam como hospedeiros para diversos genótipos de Bartonella spp. e hemoplasmas, para Ehrlichia spp. filogeneticamente associadas a E. ruminantium e para duas possíveis novas espécies de piroplasmídeos.
It is estimated that 75% of emerging diseases comprise zoonoses, most of which have wild animals as sources of infection; of these, about 22.8% are carried by arthropod vectors. Thus, monitoring the presence of pathogens in wild animals in niches shared with humans becomes an important preventive method for zoonotic infections. Bartonellaceae and Anaplasmataceae families comprise Gram-negative, facultative and obligate intracellular Alphaproteobacteria, respectively, that have been identified in a wide variety of mammals, including humans. On the other hand, hemotrophic mycoplasmas are epierythrocytic Gram-negative bacteria lacking cell wall, which can cause from asymptomatic infections to severe hemolytic anemia, both in animals and in humans. Coxiella burnetii is the main representative of the Coxiellaceae family (Gammaproteobacteria) and is known to cause Q fever in humans. Despite being transmitted by aerosols, this agent has been detected in several ectoparasites that may act in its life cycle. Piroplasmids, on the other hand, are protozoa of the order Piroplasmida, which can cause hemolytic anemia in farm and domestic animals and, occasionally, in humans. Although the abovementioned agents have been increasingly studied in bats, little is known about their occurrence and genetic diversity in bats from Brazil. The main ectoparasites found in these animals are Streblidae and Nycteribiidae flies, soft ticks, and Spinturnicidae and Macronyssidae mites. Considering the abovementioned pathogens of interest in Public Health and the expressive representation of animals of the order Chiroptera in Brazil, this study aimed to investigate the occurrence and genetic diversity of Anaplasmataceae, Bartonellaceae, Mycoplasmataceae, Coxiellaceae agents and protozoa of the order Piroplasmida in chiropterans and their respective ectoparasites collected in a periurban area of the city of Campo Grande, state of Mato Grosso do Sul, in central-western Brazil. A total of 418 samples (135 spleen, 133 blood and 150 ectoparasites) were collected from 135 animals of the Phyllostomidae, Vespertillionidae and Mollossidae families. Based on molecular assays, positivity of 18.13% (34/418) for Bartonella spp. was found among all collected samples. Out of these, 17 samples had their amplified Bartonella gltA amplicons cloned in order to obtain 3 clones of each one aiming at assessing the genotypic diversity within the same sample. Among the 51 Bartonella gltA-clones obtained, 13 different genotypes were found, with at least two occurring within individual samples. Phylogenetic analyses based on the ftsZ, rpoB and nuoG genes confirmed the high genotype diversity of Bartonella spp. in bats and their ectoparasites. For Anaplasmataceae agents, positivity of 1.67% (7/418), 11.96% (50/418) and 13.63% (57/418) was observed for Anaplasma spp. (16S rRNA), Ehrlichia spp. (dsb) and Neorickettsia spp. (16S rRNA), respectively. The sequences obtained were closely related to Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia minasensis, Neorickettsia risticii, and Neorickettsia findlayensis by BLASTn analyses, and phylogenetically related to Ehrlichia ruminantium based on gltA gene. This is the first molecular evidence of Anaplasmataceae agents in bats and associated ectoparasites from Brazil. Positivity of 13.6% (57/418) for hemoplasmas was found. Among the 24 sequences obtained by the 16S rRNA gene, it was possible to find 12 different vi hemoplasma genotypes that were distributed into Haemofelis group. The two obtained 23S rRNA hemoplasma sequences were closely related to Candidatus Mycoplasma haematohydrochaerus, M. haemofelis and M. haemocanis. All bats blood and spleen samples were negative in the qPCR for C. burnetii based on the IS1111 gene. Seventeen of the 135 (12.6%) bats were positive for Piroplasmida (18S rRNA gene). This is the first molecular report of piroplasmids in bats from Brazil. Phylogenetic analysis showed the possible occurrence of two new species: Piroplasmid n. sp. Artibeus spp., which was closely related to Babesia canis and B. vogeli, and Piroplasmid n. sp. P. discolor, which formed a monophyletic clade. Unfortunately, the ectoparasite samples could not be used in the PCR assays for piroplasmids and C. burnetii. While Streblidae flies showed positivity in molecular assays for Bartonella spp. (11/64), Ehrlichia spp. (7/64) and Mycoplasma spp. (1/64), Ornithodoros hasei ticks were positive for Ehrlichia spp. (3/19), Anaplasma spp. (1/19) and Neorickettsia spp. (1/19). Spinturnicidae and Macronyssidae mites were positive for Bartonella spp. (4/21 Macronyssidae) and Ehrlichia spp. (18/21 Macronyssidae and 6/46 Spinturnicidae). Also, co-positivity for the different agents studied was observed. In conclusion, non-hematophagous bats from a periurban area of central-western Brazil act as hosts for several genotypes of Bartonella spp. and hemoplasms, Ehrlichia spp. closely related to E. ruminantium, and for two possible new species of piroplasmids.
Resumo
Hemoplasmas are bacteria living in feline red blood cells. Feline hemoplasmosis is frequently associated with old male cats that have access to the streets. This study aimed to detect the presence of hemoplasma speciess in domiciled and free-roaming cats in Campo Grande, state of Mato Grosso do Sul (MS), Brazil, using molecular techniques. Between January 2013 and April 2013, EDTA-whole blood samples were collected from 151 domestic cats (65 free-roaming and 86 domiciled cats). Samples were subjected to PCR assays targeting hemoplasmas 16S rRNA, followed by sequencing, BLAST analysis and phylogenetic analysis. Results show an occurrence of 36.4% for hemoplasmas. Twenty-three cats (15.2%) were positive for Candidatus Mycoplasma haemominutum, 17 (11.2%) for M. haemofelis and 15 (9.9%) for Candidatus M. turicensis, from PCR. Coinfection by two or three hemoplasmas was found in 25 cats (16.6%). No statistically significant difference between genders or between lifestyles was observed for the presence of hemoplasmas among the cats. Results show different hemoplasma species are present in cat population (Campo Grande, MS, Brazil). It is suggested that a differential diagnosis for feline hemoplasmosis should be made when cats show nonspecific clinical signs of disease with systemic manifestation.
Hemoplasmas são bactérias encontradas aderidas aos eritrócitos de felinos. A hemoplasmose felina está frequentemente associada a gatos velhos machos, sem raça definida e com acesso à rua. O presente estudo objetivou realizar a detecção molecular de espécies de hemoplasmas em gatos domiciliados e errantes em Campo Grande, estado do Mato Grosso do Sul (MS), Brasil. Entre janeiro/2013 e abril/2013, amostras de sangue foram colhidas de 151 gatos domésticos (65 errantes e 86 domiciliados) e avaliadas por PCR frente à presença de sequências do gene do 16S rRNA de hemoplasmas, seguidas de sequenciamento, análise pelo BLAST e análise filogenética. Os resultados deste estudo mostraram uma ocorrência de 36,4%. Vinte e três (15,2%) gatos mostraram-se positivos na PCR para Candidatus Mycoplasma haemominutum, 17 (11,2%) para Mycoplasma haemofelis, e 15 (9,9%) para Candidatus Mycoplasma turicensis. A co-infecção por dois ou três hemoplasmas ocorreu em 25 gatos (16,6%). Não foi observada diferença estatística significativa entre sexo e estilo de vida dos gatos amostrados e a presença de hemoplasmas. O estudo mostrou que diferentes espécies de hemoplasmas circulam na população de gatos (domiciliados e errantes) na cidade de Campo Grande, MS, Brasil. Sugere-se o diagnóstico diferencial para hemoplasmose felina em gatos que apresentam sinais clínicos inespecíficos de doença com manifestação sistêmica.
Assuntos
Animais , Masculino , Feminino , Gatos/parasitologia , Eritrócitos/parasitologia , Infecções por Mycoplasma/veterinária , Mycoplasma/isolamento & purificação , Brasil , Técnicas de Diagnóstico Molecular , Infecções por Mycoplasma/sangue , Infecções por Mycoplasma/diagnóstico , Infecções por Mycoplasma/epidemiologia , Reação em Cadeia da PolimeraseResumo
Hemotrophic mycoplasmas (hemoplasmas), Bartonellasp., Hepatozoon sp. and Cytauxzoon felis are prominent pathogens that circulate between cats and invertebrate hosts. The present study aimed to detect the presence of DNA from hemoplasmas,Bartonella sp., Hepatozoon sp. andCytauxzoon felis, and then confirm it by means of sequencing, in blood samples from cats in Cuiabá, MT, Brazil. From February 2009 to February 2011, blood samples with added EDTA were collected from 163 cats that were being housed in four different animal shelters in the city of Cuiabá, state of Mato Grosso, Brazil and from 15 cats that were admitted to the veterinary hospital of the Federal University of Mato Grosso (UFMT). Out of the 178 cats sampled, 15 (8.4%) were positive for hemoplasmas: four (2.2%) forMycoplasma haemofelis, 12 (6.7%) for Candidatus M. haemominutum and one (0.5%) for Candidatus M. turicensis. One cat (0.5%), a patient that was attended at the veterinary hospital, was coinfected with M. haemofelis, Candidatus M. haemominutum and Candidatus M. turicensis, based on sequencing confirmation. Four cats were positive for Bartonella spp.: three (1.7%) for B. henselae and one (0.5%) for B. clarridgeiae. None of the animals showedCytauxzoon sp. or Hepatozoon sp. DNA in their blood samples. This study showed that cats housed in animal shelters in the city of Cuiabá, state of Mato Grosso, are exposed to hemoplasmas andBartonella species.
Micoplasmas hemotróficos (hemoplasmas), Bartonellasp., Hepatozoon sp. e Cytauxzoon felis se destacam como importantes patógenos que circulam entre gatos e hospedeiros invertebrados. O presente estudo objetivou detectar e, posteriormente confirmar por seqüenciamento, a presença de DNA de hemoplasmas,Bartonella sp., Hepatozoon sp. eCytauxzoon felis em amostras de sangue de gatos de Cuiabá, MT, Brasil. Entre fevereiro/2009 e fevereiro de 2011, amostras de sangue acrescidas de EDTA foram coletadas de 163 gatos mantidos em quatro diferentes abrigos na cidade de Cuiabá, estado do Mato Grosso, Brasil, e de 15 gatos atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Federal do Mato Grosso (UFTM). Dos 178 gatos amostrados, 15 (8,4%) foram positivos para hemoplasmas: quatro (2,2%) para Mycoplasma haemofelis, 12 (6,7%) para Candidatus M. haemominutum e um (0,5%) para Candidatus M. turicensis. Um (0.5%) gato, atendido no Hospital Veterinário da UFMT, estava co-infectado com M. haemofelis, Candidatus M. haemominutum e Candidatus M. turicensis, baseado na confirmação por sequenciamento. Quatro gatos mostraram-se positivos paraBartonella spp.: três (1,7%) para B. henselae e um (0.5%) para B. clarridgeiae. Todos os gatos amostrados mostraram-se negativos para Cytauxzoon sp. e Hepatozoon sp. Este estudo mostrou que gatos mantidos em abrigos na cidade de Cuiabá, estado do Mato Grosso, são expostos a hemoplasmas e espécies de Bartonella sp.
Resumo
Hemotrophic mycoplasmas (hemoplasmas), Bartonellasp., Hepatozoon sp. and Cytauxzoon felis are prominent pathogens that circulate between cats and invertebrate hosts. The present study aimed to detect the presence of DNA from hemoplasmas, Bartonella sp., Hepatozoon sp. and Cytauxzoon felis, and then confirm it by means of sequencing, in blood samples from cats in Cuiabá, MT, Brazil. From February 2009 to February 2011, blood samples with added EDTA were collected from 163 cats that were being housed in four different animal shelters in the city of Cuiabá, state of Mato Grosso, Brazil and from 15 cats that were admitted to the veterinary hospital of the Federal University of Mato Grosso (UFMT). Out of the 178 cats sampled, 15 (8.4%) were positive for hemoplasmas: four (2.2%) for Mycoplasma haemofelis, 12 (6.7%) for 'Candidatus M. haemominutum' and one (0.5%) for 'Candidatus M. turicensis'. One cat (0.5%), a patient that was attended at the veterinary hospital, was coinfected with M. haemofelis, 'Candidatus M. haemominutum' and 'Candidatus M. turicensis', based on sequencing confirmation. Four cats were positive for Bartonella spp.: three (1.7%) for B. henselae and one (0.5%) for B. clarridgeiae. None of the animals showed Cytauxzoon sp. or Hepatozoon sp. DNA in their blood samples. This study showed that cats housed in animal shelters in the city of Cuiabá, state of Mato Grosso, are exposed to hemoplasmas and Bartonella species.
Micoplasmas hemotróficos (hemoplasmas), Bartonellasp., Hepatozoon sp. e Cytauxzoon felis se destacam como importantes patógenos que circulam entre gatos e hospedeiros invertebrados. O presente estudo objetivou detectar e, posteriormente confirmar por seqüenciamento, a presença de DNA de hemoplasmas, Bartonella sp., Hepatozoon sp. e Cytauxzoon felis em amostras de sangue de gatos de Cuiabá, MT, Brasil. Entre fevereiro/2009 e fevereiro de 2011, amostras de sangue acrescidas de EDTA foram coletadas de 163 gatos mantidos em quatro diferentes abrigos na cidade de Cuiabá, estado do Mato Grosso, Brasil, e de 15 gatos atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Federal do Mato Grosso (UFTM). Dos 178 gatos amostrados, 15 (8,4%) foram positivos para hemoplasmas: quatro (2,2%) para Mycoplasma haemofelis, 12 (6,7%) para 'Candidatus M. haemominutum' e um (0,5%) para 'Candidatus M. turicensis'. Um (0.5%) gato, atendido no Hospital Veterinário da UFMT, estava co-infectado com M. haemofelis, 'Candidatus M. haemominutum' e 'Candidatus M. turicensis', baseado na confirmação por sequenciamento. Quatro gatos mostraram-se positivos para Bartonella spp.: três (1,7%) para B. henselae e um (0.5%) para B. clarridgeiae. Todos os gatos amostrados mostraram-se negativos para Cytauxzoon sp. e Hepatozoon sp. Este estudo mostrou que gatos mantidos em abrigos na cidade de Cuiabá, estado do Mato Grosso, são expostos a hemoplasmas e espécies de Bartonella sp.
Assuntos
Animais , Masculino , Feminino , Bartonella , Vetores Artrópodes , Gatos/sangue , DNA Bacteriano/sangue , Mycoplasma/genética , Mycoplasma/isolamento & purificação , Reação em Cadeia da Polimerase , BrasilResumo
Hemoplasmas are bacteria that infect erythrocytes, attaching to the red blood cell. There is a need for more reports of hemoplasma infection prevalence and molecular characterization among cats in Brazil since there are only few published reports. The present work aimed to detect and molecularly characterize the presence of hemotrophic mycoplasmas in domestic cats with outdoor access from São Luís, Maranhão, Brazil. Twenty cats (10%) were positive for Candidatus M. haemominutum, five (2.5%) for M. haemofelis, and four (2.%) for M. turicensis based on 16S rRNA gene PCRs. Five cats (2.5%) were co-positive for Candidatus M. haemominutum and M. haemofelis. PCR diagnosis was confirmed by sequencing; and phylogenetic analysis was based on 16S rRNA and rnpb genes.
Resumo
BOTELHO, Camila Flávia Magalhães Diagnóstico molecular e avaliação hematológica de micoplasmas hemotróficos em cães domésticos (Canis familiaris) nas áreas urbana e rural de Araguaína, Tocantins, Brasil. 2017. 50p. Dissertação (Mestrado em Medicina Veterinária, Ciências Clínicas). Instituto de Veterinária, Departamento de Medicina e Cirurgia Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2017. Os hemoparasitos micoplasmas hemotróficos são organismos pleomórficos, epicelulares, Gram negativos, que se localizam na superfície dos eritrócitos de diversas espécies. Em cães, a infecção pelos hemoplasmas pode causar anemia hemolítica na fase aguda, enquanto na doença crônica os sinais em geral são inaparentes, sendo que a imunossupressão pode desencadear a doença aguda. O presente estudo objetivou detectar molecularmente a presença de infecção pelos agentes micoplasmas hemotróficos em cães domésticos procedentes de áreas urbana e rural de Araguaína, Tocantins e, adicionalmente correlacionar as alterações hematológicas e fatores associados com a infecção natural. Na análise dos resultados obtidos, 2,9% (3/105) dos cães amostrados da área urbana e 24,49% (24/99) da área rural foram positivos pela Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (qPCR) para Mycoplasma spp. A frequência de infecção das espécies de hemoplasmas pela PCR, utilizando oligonucleotídeos espécie-específicos, foi de 1,9 % (2/105) e 13,26% (13/99) para Mycoplasma haemocanis na área urbana e rural, respectivamente. Não foram observados cães positivos para Candidatus Mycoplasma turicensis e Candidatus Mycoplasma haematoparvum/Candidatus Mycoplasma haemominutum em ambas as áreas estudadas. No tocante às alterações hematológicas, não houve associação estatística com a infecção por Mycoplasma spp. De modo semelhante, dentre as variáveis analisadas (idade, sexo, padrão racial, limpeza do local e moradia) não foi verificada qualquer correlação estatística com a infecção pelo agente Mycoplasma spp., seja na área urbana ou na rural. Esta constitui a primeira detecção molecular de Mycoplasma haemocanis em cães do Tocantins e abre perspectivas para futuros estudos neste grupo de agentes hemotróficos.
BOTELHO, Camila Flávia Magalhães. Molecular diagnostic of haemotropic parasites of dogs (Canis familiaris) under natural conditions of urban and rural areas of Araguaína, state of Tocantins, Brazil. 2017. 50p. Dissertation (Master of Science in Veterinary Medicine, Clinical Sciences). Instituto de Veterinária, Departamento de Medicina e Cirurgia Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2017. Hemotrophic mycoplasmas hemoparasites are pleomorphic, epicellular, gram negative organisms that are located on the surface of erythrocytes of several species. In dogs, hemoplasma infection can cause hemolytic anemia in the acute phase, while in the chronic phase the signs are generally inapparent, and immunosuppression can trigger the acute disease. The present study aimed to detect molecularly the presence of hemotrophic mycoplasma agents in domestic dogs from the urban and rural areas of Araguaína, Tocantins and, in addition, to correlate hematological alterations and factors associated with natural infection. In the analysis of the results, 2.9% (3/105) of the dogs sampled from the urban area and 24.49% (24/99) from the rural area were positive for Mycoplasma spp. by the Real Time Polymerase Chain Reaction (qPCR). The frequency of hemoplasmas species infection by PCR using species-specific oligonucleotides was 1.9% (2/105) and 13.26% (13/99) for Mycoplasma haemocanis in the urban and rural areas, respectively. No positive dogs were observed for Candidatus Mycoplasma turicensis and Candidatus Mycoplasma haematoparvum/Candidatus Mycoplasma haemominutum in both areas studied. Regarding hematological alterations, there was no statistical association with the infection by Mycoplasma spp. Similarly, among the analyzed variables (age, gender, racial pattern, site cleanliness and housing), no statistical correlation was observed in either urban or rural areas. This is the first report of the molecular detection of Mycoplasma haemocanis in dogs from Tocantins and opens up prospects for future studies in this group of hemotrophic agents.
Resumo
Hemotrophic mycoplasmas and Bartonella species are important pathogens that circulate between cats and invertebrate hosts, occasionally causing diseases in humans. Nevertheless, there are few reports on occurrences of these agents in cats in Brazil. The present study aimed to detect the presence of hemoplasma and Bartonella DNA by means of PCR and sequencing. FIV antigens and anti-FeLV antibodies, were studied by using a commercial kit on blood and serum samples, respectively, among 46 cats that were sampled during a spaying/neutering campaign conducted in Jaboticabal, SP. Three (6.5%) cats were positive for hemoplasmas: two (4.3%) for 'Candidatus M. haemominutum' and one (2.2%) for both M. haemofelis and 'Candidatus M. turicensis'. One of the two 'Candidatus M. haemominutum'-infected cats was also positive for FeLV antigens and showed antibodies for FIV. Two cats (4.3%) were positive for B. henselae. One of them was also positive for FeLV antigens. Eight cats (17.4%) were positive for FeLV, and just one (2.2%) showed anti-FIV antibodies. Bartonella species and hemoplasmas associated with infection due to retroviruses can circulate among apparently healthy cats.(AU)
Micoplasmas hemotróficos e espécies de Bartonella são importantes patógenos que circulam entre gatos e hospedeiros invertebrados, causando ocasionalmente doenças no homem. Apesar disto, poucos são os estudos acerca da ocorrência destes agentes entre gatos no Brasil. O presente estudo objetivou detectar o DNA de hemoplasmas e Bartonella sp. pela PCR e sequenciamento. Antígeno de FIV e anticorpos anti-FeLV foram estudados utilizando um "kit" comercial, em amostras de sangue e soro, respectivamente, de 46 gatos amostrados em uma campanha de castração em Jaboticabal, SP. Três gatos (6,5%) foram positivos para hemoplasmas: dois (4,3%) para 'Candidatus M. haemominutum' e um (2,2%) para M. haemofelis and 'Candidatus M. turicensis'. Um dos gatos positivos para 'Candidatus M. haemominutum' mostrou-se também positivo na detecção de antígeno de FeLV e de anticorpos para FIV. Dois (4,3%) gatos mostraram-se positivos para B. henselae, sendo que um deles também se mostrou positivo para antígeno de FeLV. Oito gatos (17,4%) foram positivos para FeLV, e apenas um gato mostrou anticorpos anti-FIV. Bartonella sp. e hemoplasmas associados à infecção por retrovírus podem circular entre gatos aparentemente saudáveis.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Feminino , Gatos , Infecções por Bartonella/veterinária , Bartonella/isolamento & purificação , Doenças do Gato/microbiologia , Coinfecção , Infecções por Mycoplasma/veterinária , Mycoplasma/isolamento & purificação , Infecções por Retroviridae/veterinária , Esterilização Reprodutiva , Anticorpos Antivirais/sangue , Infecções por Bartonella/sangue , Infecções por Bartonella/complicações , Brasil , Doenças do Gato/sangue , Vírus da Imunodeficiência Felina/imunologia , Vírus da Leucemia Felina/imunologia , Infecções por Mycoplasma/sangue , Infecções por Mycoplasma/complicações , Infecções por Retroviridae/sangue , Infecções por Retroviridae/complicaçõesResumo
A anemia infecciosa felina é uma doença causada por bactérias pertencentes ao gênero Mycoplasma, que compreendem um grupo distinto, pois são encontradas aderidas à superfície dos eritrócitos, no entanto, são incapazes de romper a membrana celular. São conhecidas como hemoplasmas ou micoplasmas hemotrópicos. Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma haemominutum e Candidatus Mycoplasma turicensis, são as espécies capazes de infectar felinos domésticos. A infecção pelos hemoplasmas está presente em quase todos continentes, exceto na Antártida. A doença pode variar de uma forma assintomática a grave e fatal, dependendo da espécie envolvida e da susceptibilidade do hospedeiro. A principal forma de diagnóstico da infecção é através da reação em cadeia do polimerase (PCR), método bastante sensível e específico. O objetivo deste trabalho foi verificar a frequência da infecção por hemoplasmas felinos na cidade de Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brasil e, também analisar os parâmetros hematológicos dos animais positivos, assim como o sexo e a idade. Dessa forma, foram analisadas 192 amostras de sangue de felinos domésticos provenientes do Laboratório de Análises Clínicas Veterinárias da Universidade Federal de Santa Maria (LACVetUFSM). Hemograma, extração de DNA e PCR, para as três espécies de hemoplasmas supracitadas, foram realizados, bem como a análise do histórico clínico, sexo e idade. A frequência total de micoplasmas hemotrópicos encontrada foi de 14,6%, sendo que, 7,83% foram positivos para Candidatus M. haemominutum, 4,17% para Mycoplasma haemofelis, 1,56% para Candidatus M. turicensis, 0,52% para Candidatus M. haemominutum e Mycoplasma haemofelis e 0,52% para Candidatus M. turicensis e Candidatus M. haemominutum. Quanto ao sexo 10,95% de amostras infectadas eram de machos, enquanto que 3,65% eram de fêmeas. Os animais até quatro anos de idade foram mais acometidos pela infecção do que os felinos mais velhos e, apenas 3 animais apresentaram anemia, não foram observadas alterações no leucograma dos animais positivos. Sendo assim, foi possível verificar que a infecção causada por estes organismos está presente na cidade de Santa Maria e, que o Candidatus M. haemominutum é a espécie mais frequente associada à infecção, além disso, os felinos machos e jovens são mais acometidos.
Feline infectious anemia is a disease caused by bacteria belonging to the genus Mycoplasma, comprising a different group since they are found attached to the surface of erythrocytes, however, are unable to break the cell membrane. They are known as hemoplasmas or mycoplasma Hemotrophic. Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma haemominutum and Candidatus Mycoplasma turicensis, are species capable of infecting domestic cats. Infection by hemoplasmas is present in almost all continents except Antarctica. The disease can vary from asymptomatic to severe and fatal form, depending upon the species involved and host susceptibility. The main tool for diagnosing the infection is by polymerase chain reaction (PCR), highly sensitive and specific method. The objective of this study was to determine the frequency of infection hemoplasmas cats in the city of Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brazil, and also analyze the hematological parameters of positive animals, as well as sex and age. Thus, it analyzed 192 blood samples from domestic cats from the Laboratory of Analyzes Clinics Veterinaries at Universidade Federal de Santa Maria (LACVet-UFSM). CBC, DNA extraction and PCR for the three species hemoplasmas above were performed, and the analysis of the medical history, age and sex. The overall frequency of Hemotrophic mycoplasmas found was 14.6%, and, 7.83% were positive for Candidatus M. haemominutum, 4.17% for Mycoplasma haemofelis, 1.56% for Candidatus M. turicensis, 0.52% for Candidatus M. haemominutum and Mycoplasma haemofelis and 0.52% for Candidatus M. turicensis and Candidatus M. haemominutum. The sex 10.95% of infected samples were males, while 3.65% were females. The animals up to four years of age were most affected by the infection than older cats and only 3 animals had anemia, there were no changes in white blood cell count of positive animals. Thus, it observed that the infection caused by these organisms is present in the city of Santa Maria and the Candidatus M. haemominutum is the most common species associated with infection, in addition, males and young cats are most affected.
Resumo
Hemoplasmas são bactérias que prendem-se frouxamente à membrana plasmática de eritrócitos, podendo parasitar mamíferos domésticos e selvagens. Felídeos são conhecidamente parasitados por Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma haemominutum e Candidatus Mycoplasma turicensis, enquanto canídeos são infectados por pelo menos duas espécies de hemoplasmas: Mycoplasma haemocanis e Candidatus Mycoplasma haematoparvum. As hemoplasmoses são de grande relevância na clínica veterinária, tanto por sua distribuição cosmopolita e severidade de sinais clínicos, a depender da espécie do parasita e imunocompetência do hospedeiro, quanto pelo seu potencial zoonótico e de infecção de animais selvagens ameaçados de extinção. O presente trabalho se propôs a investigar quais espécies de hemoplasmas parasitam as diferentes espécies de carnívoros de cativeiro, a fim de esclarecer a epidemiologia da doença nestas espécies. Além disso, a pesquisa visou caracterizar as alterações hematológicas causadas pela infecção por diferentes espécies de micoplasmas hemotrópicos, a fim de estabelecer sua importância clínica para as espécies selvagens e a capacidade dessas espécies de se tornarem reservatório dos agentes estudados. Foram investigadas as amostras de 33 felídeos e 18 canídeos selvagens e observou-se que a ocorrência da infecção por hemoplasmas nessas espécies é de 45,5% e 83,3%, respectivamente. Fatores como faixa etária, gênero ou presença de anemia não apresentaram correlação com a positividade para a infecção. Sendo assim, conclui-se que a infecção por hemoplasmas em carnívoros selvagens tem alta prevalência, a patogenicidade dos agentes é baixa, ou o estágio crônico é mais frequente, resultando na redução de seu diagnóstico.
Hemoplasmas are bacteria able to adhere themselves loosely to the plasma membrane of erythrocytes and may parasitize several species of mammals. There are three known species of hemoplasmas that parasitize domestic and wild cats: Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma haemominutum and Candidatus Mycoplasma turicensis. Dogs are infected by at least two species of hemoplasmas: Candidatus Mycoplasma haematoparvum and Mycoplasma haemocanis. The hemoplasmoses are very important in the veterinary clinic, either because of its worldwide distribution and severity of clinical signs, depending on parasite species and host immune competence, or due to its zoonotic potential and capability of infecting endangered species. This study set out to investigate which hemoplasmas species parasitize different species of captive wild carnivores in order to clarify the epidemiology of the disease in these species. Furthermore, the research intended to characterize the hematological changes caused by different species of hemotrophic mycoplasmas infection in order to establish their clinical importance to wild species and the capacity of these species to become a reservoir of studied agents. Samples of 33 wild felids and 18 wild canids were investigated and it was observed that the occurrence of hemoplasma infection in these species is 45.5% and 83.3%, respectively. Factors such as age, gender or anemia are not more frequent in animals positive for the infection. Therefore, it is concluded that infection by hemoplasmas in wild carnivores has high prevalence, and either agent pathogenicit
Resumo
Recent studies have been conducted in Brazil using molecular techniques for the detection of hemotrophic mycoplasmas in several mammals. In domestic cats, Mycoplasma haemofelis, 'Candidatus M. haemominutum', and 'Candidatus M. turicensis' infections have been identified. These species have also been found in free-ranging and captive neotropical felid species. Two canine hemoplasmas, Mycoplasma haemocanis and 'Candidatus Mycoplasma haematoparvum', have been identified in dogs. In commercial swine populations, Mycoplasma suis was found to be highly prevalent, especially in sows. Moreover, novel mycoplasma species have been identified in Brazilian commercial pigs and domestic dogs. A hemoplasma infection in a human patient infected with the human immunodeficiency virus (HIV) was also recently documented. In conclusion, hemoplasma species are common and important infectious agents in Brazil. Further studies should be conducted to better understand their impact on pets, production animals, and wildlife fauna, as well as their role as zoonotic agents, particularly in immunocompromised patients.
Estudos recentes utilizando técnicas moleculares para a detecção de micoplasmas hemotróficos em diferentes mamíferos têm sido conduzidos no Brasil. Em gatos domésticos, infecções por Mycoplasma haemofelis, 'Candidatus M. haemominutum' e 'Candidatus M. turicensis' foram identificadas. Estas espécies também foram encontradas em felídeos neotropicais de vida livre e de cativeiro. Dois hemoplasmas caninos, Mycoplasma haemocanis e 'Candidatus Mycoplasma haematoparvum', foram identificados em cães domésticos. Em populações comerciais de suínos, Mycoplasma suis possui alta prevalência, especialmente em porcas. Além disso, novas espécies de hemoplasmas foram detectadas em suínos comercias e cães. Infecção por um hemoplasma em um paciente humano infectado com o vírus da imunodeficiência humana (HIV) foi recentemente documentada. Em conclusão, espécies de hemoplasmas são comuns e importantes agentes de infecções no Brasil. Estudos futuros devem ser conduzidos para melhor entender seu impacto em cães e gatos, animais de produção e na fauna silvestre, e também para determinar o seu papel como agentes zoonóticos, particularmente em pacientes imunocomprometidos.
Resumo
Com o objetivo de avaliar a magnitude da infecção por micoplasmas hemotrópicos nos felinos anêmicos, amostras sangüíneas de 270 felinos anêmicos (Ht≤29%) e 53 felinos saudáveis foram submetidas à exames hematológicos, bioquímicos séricos (proteína total, albumina, fosfatase alcalina, alanina aminotransferase, aspartato aminotransferase, gamaglutamil transferase, bilirrubinas, uréia e creatinina), avaliação citológica do esfregaço sangüíneo e testes moleculares para a detecção de material genético de Mycoplasma spp. Foram encontradas 25 amostras positivas no grupo dos felinos anêmicos, pela técnica de Nested-PCR utilizando-se primers que amplificam fragmentos do gene 16S rRNA dos hemoplasmas. Dentre as amostras positivas, 23 foram caracterizadas por meio de seqüenciamento como Mycoplasma haemofelis e as duas restantes como \"Candidatus Mycoplasma turicensis\" e Mycoplasma haemocanis, respectivamente. As seqüências de nucleotídeos encontradas nesse estudo estão disponíveis no GenBank, sob os números de acesso EU442616 a EU442640, sendo os números EU442629 e EU442623, referentes ao \"Candidatus M. turicensis\" e M. haemocanis, respectivamente. Nos felinos infectados por M. haemofelis a anemia foi mais intensa quando comparados aos animais anêmicos negativos para qualquer uma das espécies de micoplasmas. Quanto à bioquímica sérica, as concentrações das bilirrubinas e a atividade sérica da ALT foram maiores nos felinos infectados. Adicionalmente, com o intuito de avaliar o papel desempenhado pelos retrovírus no desenvolvimento ou agravamento da anemia causada por micoplasmas hemotrópicos, todos os felinos foram avaliados quanto à infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV) e da leucemia felina (FeLV), por meio de testes imunoenzimáticos (ELISA) para a detecção de ambos os vírus, de imunofluorescência indireta para detecção do antígeno do FeLV e de técnicas moleculares de detecção do DNA viral do FIV. Dentre os felinos saudáveis não foi observada nenhuma amostra positiva para os micoplasmas hemotrópicos e/ou retrovírus. A associação entre M. haemofelis e FIV (p=0,009) e entre o M. haemofelis e FeLV (p=0,015) , foi evidenciada. O felino infectado por \"Candidatus M. turicensis\" apresentou discreta diminuição do hematócrito e ausência de sinais de regeneração medular e o felino positivo para M. haemocanis apresentou anemia mais profunda com sinais de regeneração. No primeiro a infecção por nenhum dos retrovírus foi identificada, enquanto que o segundo apresentou co-infecção por FIV e FeLV. As informações obtidas das alterações hematológicas e bioquímicas correlacionadas à infecção pelo M. haemofelis evidenciaram o potencial patogênico dessa espécie de micoplasma hemotrópico. A disfunção imunológica resultante da infecção pelos retrovírus pode predispor à infecção por M. haemofelis, não se excluindo a possibilidade de infecção por outros hemoplasmas
The present study aimed to evaluate the magnitude of the hemotrophic mycoplasmas infections in anemic cats. Samples from 270 anemic cats (PCV≤29%) and 53 healthy cats were submitted to hematological analysis (CBC, cytologic evaluation of blood smear), serum biochemistry (total protein, albumin, alkaline phosphatase, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, gama glutamil transferase, bilirubins, urea and creatinin), and molecular assays for hemoplasma DNA detection in blood samples. Among the anemic cats, 25 samples were positive by Nested-PCR for the gender Mycoplasma using primers targeting the 16S rRNA. For species identification, sequencing of the products revealed that 23 cats were infected with Mycoplasma haemofelis, one with \"Candidatus M. turicensis\" and another with M. haemocanis. The GenBank accession numbers of the nucleotide sequences derived in this study are from EU442616 to EU442640 (EU442629 and EU442623 refer to \"Candidatus M. turicensis\" and M. haemocanis, respectively). M. haemofelis-infected cats presented significantly more severe anemia and higher bilirubins concentration and ALT serum activity. Additionally, with purpose to evaluate the role play by the retrovirus in the development or aggravation of the anemia caused by hemotrophic mycoplasmas, all cats were tested for FeLV p27 antigenemia by enzyme-linked immunosorbent assay and by indirect immunofluorescence, and anti-FIV antibodies by enzyme-linked immunosorbent assay and viral DNA by Nested-PCR. None of the healthy cats presented infection with hemotrophic mycoplasmas and/or retroviruses. The association between M. haemofelis and retroviruses (FIV, p=0,009 and FeLV, p=0,015) in anemic cats was evidenced. In the \"Candidatus M. turicensis\"-infected cat, slightly decreased hematocrit with no signs of regeneration were observed; and in the M. haemocanis-infected cat anemia was severe and regenerative. In the first, retroviruses infections were not detected, whereas the second was infected with FIV and FeLV. The hematological and biochemistry abnormalities correlated to the M. haemofelis infection had evidenced the pathogenic potential of this hemoplasma species. In conclusion, immunological dysfunction resulting from retrovirus infection may predispose to M. haemofelis infection, without excluding the possibility of infection with other hemoplasma