Cytological grading of canine mast cell tumors: correlation with histologic grading and survival time / Graduação citológica de mastocitomas caninos: correlação com graduação histológica e sobrevida

ABSTRACT: Mast cell tumors are one of the most common neoplasia in dogs and cytopathology and/or histopathology examinations are used for diagnosis. Histologic grading is considered the gold standard test to predict the prognosis of this neoplasia. However, studies have been conducted using the cytological grading system to provide similar information in a faster, less invasive, and more accessible way. This study aimed to investigate cytological graduation and correlate it with histological grading and the survival time of dogs diagnosed with cutaneous mast cell tumors at the Veterinary Hospital of "Universidade Federal de Uberlândia" over five years. For that, cytological and histological slides from 72 animals were reviewed. The statistical methods used were the kappa test for agreement between grading systems, the Kaplan-Meier for survival time, Cox regression for comparison of cytological and histological grades and survival time. The cytological grading when compared to the two-tier histologic grading, high and low grades, had a moderate agreement (kappa 0.566). When the correlation between survival time and the cytological grade was evaluated, there was a higher death rate in the group with high-grade mast cell tumors compared to low grade, pointing to a correlation between survival time and cytological grade (p=0.009). In conclusion, the cytological grade is useful to treatment planning and providing prognostic information that precedes tumor removal, showing a good correlation with the two-tier histologic grading and with the survival time of the animals.

RESUMO: O mastocitoma é uma das neoplasias cutâneas mais comum nos cães e os exames citopatológicos e/ou histopatológicos são utilizados para diagnóstico. A graduação histológica é considerada padrão ouro para prever o prognóstico dessa neoplasia. Contudo, estudos têm sido realizados visando utilizar graduação citológica para fornecer informações semelhantes de maneira rápida, menos invasiva e mais acessível. Esse trabalho objetivou realizar graduação citológica e correlacionar com as graduações histológicas e com a sobrevida de cães diagnosticados com mastocitoma cutâneo no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Uberlândia durante 5 anos. Para isso, lâminas de citologia e histologia de mastocitomas de 72 animais foram revisadas. Os métodos estatísticos utilizados foram teste kappa para concordância entre os sistemas de graduação, método Kaplan-Meier para tempo de sobrevida dos animais, e análise pela regressão de Cox para comparação do grau citológico e grau histológico e o tempo de sobrevida global. A graduação citológica quando comparada com a histológica de dois níveis, alto grau e baixo grau, obteve uma concordância moderada (kappa 0,566). Na avaliação da correlação entre sobrevida e grau citológico, houve maior taxa de óbito no grupo de cães com mastocitoma de alto grau, comparado aos de baixo grau, sendo observada correlação entre a sobrevida e o grau citológico (p=0,009). Esse estudo concluiu que o grau citológico é útil para o planejamento do tratamento e para fornecer informações prognósticas que antecedem a exérese do tumor, tendo boa correlação com a graduação histológica de dois níveis e com a sobrevida dos animais.

Frontal cystic meningioma removed by a partial transfrontal craniotomy in a cat

Background: Meningiomas are the most frequently reported intracranial tumors in cats. It is known to arise at the point of arachnoid cells project into the dural venous sinuses. Cats with intracranial meningiomas are treated by surgical management as the tumors are commonly delineated from normal brain tissue and are not likely to adhere to the cerebral parenchyma. Although meningioma is the most common intracranial tumor in cats, the incidence of cystic meningioma is low. The objective of the current study is to report a case of frontal meningioma with peritumoral cystic structure removed by a partial transfrontal craniotomy. Case: A 10-year-old castrated British shorthair cat was referred to the Baeksan Feline Medical Center with a recent onset of seizures. On the physical examination, the patient was bright and alert. Neurological examinations were unremarkable at the time of presentation. Hematologic examinations were within normal limits. Thoracic and abdominal radiography, and abdominal ultrasonography revealed unremarkable findings. Magnetic resonance imaging revealed an extra-axial mass cranial to the frontal lobe. On the sagittal plane, a cystic structure was identified in the frontal area on post-contrast T1W images. No contrast enhancement of the cystic wall was identified after intravenous injection of contrast medium on T1W. On the transverse plane of T2W images, midline shift to the left due to peritumoral edema was observed. The mass was removed via partial transfrontal craniotomy. Postoperative radiography was performed to ensure appropriate placement of the mesh. The patient recovered uneventfully after anesthesia. After the surgery, the patient was closely monitored in an intensive care unit between 24 and 48 h. Based on the histologic findings, the final diagnosis was a fibroblastic meningioma. Nineteen months after the surgery, there was no seizure activity identified by the owner. Discussion: Depending on the location of the cyst, meningiomas can be classified into 4 types according to the human literature. In types 1 and 2, the whole cyst is located within the tumor, resulting in contrast enhancement of the cystic wall. In types 3 and 4, the cysts are located outside the tumor, and no contrast enhancement of the cystic wall is observed. In type 3, the cyst lies adjacent to the brain parenchyma rather than adjacent to the tumor and the meningioma is related to a cerebrospinal fluid cyst bordered by the arachnoid. It is important to classify the type of cystic meningioma prior to surgery in order to decide whether to remove the cystic wall. In type 2, the cystic wall is infiltrated by tumor cells, while the cystic wall of type 3 meningioma is composed of gliotic tissue without any tumor cells. Therefore, in type 2, the meningiomas with cystic walls should be removed for the prevention of recurrence, while in type 3 meningioma, the tumor can be managed by cyst decompression and excision of the solid component. Based on the Nauta classification, the cystic meningioma reported here was considered to be type 3. Therefore, the surgical procedure aimed to remove the solid component of the mass, leaving the cystic wall attached to the normal brain. As the solid part of the meningioma was located beneath the internal plate of the left frontal bone, the partial transfrontal craniotomy was sufficient to expose and remove the entire mass. To the author's knowledge, this is first case report describing a patient with frontal meningioma with a peritumoral cyst removed by a partial transfrontal craniotomy based on the Nauta classification.(AU)

Use of different fixation times and application of two immunohistochemical methods for detection of KIT and Ki67 proteins in canine cutaneous mast cell tumors / Utilização de diferentes tempos de fixação e métodos imuno-histoquímicos na detecção das proteínas KIT e Ki67 em mastocitomas cutâneos caninos

Due to the high prevalence of mast cell tumors (MCTs) in the diagnostic routine, several factors, especially prognostic, have been sought to determine the biological behavior of these neoplasms. Immunohistochemistry (IHC) is one of the main tools utilized to biologically differentiate more aggressive tumors from less aggressive ones. However, some immunostainings are influenced by formalin fixation, interfering with the results. This is both a retrospective and prospective study of MCTs diagnosed in laboratory routine. A total of 25 samples, without knowledge about fixation time, were analyzed in the retrospective study, whereas 12 samples, with known fixation times, were assessed in the prospective study. Two histologic grading systems (Patnaik and Kiupel), special staining of toluidine blue, and IHC for KIT and Ki67 proteins were applied in both studies. Additionally, two amplification systems (biotinylated and non-biotinylated) for Ki67 protein and counting of the argyrophilic nucleolar organizing regions (AgNOR method) were tested in the prospective study. In the retrospective study, greater agreement between the evaluating pathologists was observed when the Kiupel system was used. IHC staining for KIT protein was effective in both studies, regardless of fixation time. IHC staining for Ki67 protein was highly sensitive to formaldehyde, and staining failure was observed in 56% of the cases in the retrospective study. In the prospective study, samples fixed for longer than 24 hours showed a reduction in the number of stained cells (altering the determination of the cell growth fraction) or showed absence of IHC staining in both amplification systems. The use of the AgNOR method to evaluate the rate of cell proliferation may be an alternative when the fixation time of the neoplasm is unknown or longer than 24 hours.(AU)

Devido a alta prevalência dos mastocitomas cutâneos caninos (MCCs) na rotina diagnóstica, vários fatores, especialmente fatores prognósticos, têm sido buscados para auxiliar na determinação do comportamento biológico desse neoplasma. A imuno-histoquímica é uma das principais ferramentas empregadas para diferenciar tumores biologicamente mais agressivos de tumores menos agressivos. Entretanto, algumas imunomarcações sofrem influência pela fixação em formol, interferindo nos resultados. Este estudo compreendeu avaliar através de uma etapa retrospectiva e uma etapa prospectiva casos de MCCs diagnosticados na rotina laboratorial. Um total de 25 amostras, sem conhecimento do tempo de fixação, foi analisado no estudo retrospectivo e 12 amostras, com tempos de fixação conhecidos, no estudo prospectivo. Foram aplicados nos dois estudos, dois sistemas de graduação histológica (Patnaik e Kiupel), a coloração especial de azul de toluidina e a imuno-histoquímica para as proteínas KIT e Ki67. Adicionalmente, no estudo prospectivo, foram testados dois sistemas de amplificação (biotinilado e não biotinilado) para a proteína Ki67 e a técnica de AgNOR (contagem das regiões organizadoras nucleolares argirofílicas). Na etapa retrospectiva, observou-se uma maior concordância entre os patologistas avaliadores quando o sistema Kiupel foi utilizado. A imunomarcação para KIT se manteve eficaz em ambos os estudos, independentemente do tempo de fixação. A imunomarcação para o Ki67 mostrou-se altamente sensível ao tempo de fixação em formol, sendo observada falha na imunomarcação em 56% dos casos do estudo retrospectivo. No estudo prospectivo, constatou-se que amostras fixadas por mais de 24 horas em formol apresentaram redução na quantidade de células imunomarcadas (alterando a determinação da fração de crescimento celular) ou apresentaram ausência de imunomarcação em ambos os sistemas de amplificação. A utilização do método AgNOR, para avaliar a taxa de proliferação celular, pode ser uma alternativa quando o tempo de fixação do neoplasma for desconhecido ou superior a 24 horas.(AU)

Use of different fixation times and application of two immunohistochemical methods for detection of KIT and Ki67 proteins in canine cutaneous mast cell tumors / Utilização de diferentes tempos de fixação e métodos imuno-histoquímicos na detecção das proteínas KIT e Ki67 em mastocitomas cutâneos caninos

Due to the high prevalence of mast cell tumors (MCTs) in the diagnostic routine, several factors, especially prognostic, have been sought to determine the biological behavior of these neoplasms. Immunohistochemistry (IHC) is one of the main tools utilized to biologically differentiate more aggressive tumors from less aggressive ones. However, some immunostainings are influenced by formalin fixation, interfering with the results. This is both a retrospective and prospective study of MCTs diagnosed in laboratory routine. A total of 25 samples, without knowledge about fixation time, were analyzed in the retrospective study, whereas 12 samples, with known fixation times, were assessed in the prospective study. Two histologic grading systems (Patnaik and Kiupel), special staining of toluidine blue, and IHC for KIT and Ki67 proteins were applied in both studies. Additionally, two amplification systems (biotinylated and non-biotinylated) for Ki67 protein and counting of the argyrophilic nucleolar organizing regions (AgNOR method) were tested in the prospective study. In the retrospective study, greater agreement between the evaluating pathologists was observed when the Kiupel system was used. IHC staining for KIT protein was effective in both studies, regardless of fixation time. IHC staining for Ki67 protein was highly sensitive to formaldehyde, and staining failure was observed in 56% of the cases in the retrospective study. In the prospective study, samples fixed for longer than 24 hours showed a reduction in the number of stained cells (altering the determination of the cell growth fraction) or showed absence of IHC staining in both amplification systems. The use of the AgNOR method to evaluate the rate of cell proliferation may be an alternative when the fixation time of the neoplasm is unknown or longer than 24 hours.(AU)

Devido a alta prevalência dos mastocitomas cutâneos caninos (MCCs) na rotina diagnóstica, vários fatores, especialmente fatores prognósticos, têm sido buscados para auxiliar na determinação do comportamento biológico desse neoplasma. A imuno-histoquímica é uma das principais ferramentas empregadas para diferenciar tumores biologicamente mais agressivos de tumores menos agressivos. Entretanto, algumas imunomarcações sofrem influência pela fixação em formol, interferindo nos resultados. Este estudo compreendeu avaliar através de uma etapa retrospectiva e uma etapa prospectiva casos de MCCs diagnosticados na rotina laboratorial. Um total de 25 amostras, sem conhecimento do tempo de fixação, foi analisado no estudo retrospectivo e 12 amostras, com tempos de fixação conhecidos, no estudo prospectivo. Foram aplicados nos dois estudos, dois sistemas de graduação histológica (Patnaik e Kiupel), a coloração especial de azul de toluidina e a imuno-histoquímica para as proteínas KIT e Ki67. Adicionalmente, no estudo prospectivo, foram testados dois sistemas de amplificação (biotinilado e não biotinilado) para a proteína Ki67 e a técnica de AgNOR (contagem das regiões organizadoras nucleolares argirofílicas). Na etapa retrospectiva, observou-se uma maior concordância entre os patologistas avaliadores quando o sistema Kiupel foi utilizado. A imunomarcação para KIT se manteve eficaz em ambos os estudos, independentemente do tempo de fixação. A imunomarcação para o Ki67 mostrou-se altamente sensível ao tempo de fixação em formol, sendo observada falha na imunomarcação em 56% dos casos do estudo retrospectivo. No estudo prospectivo, constatou-se que amostras fixadas por mais de 24 horas em formol apresentaram redução na quantidade de células imunomarcadas (alterando a determinação da fração de crescimento celular) ou apresentaram ausência de imunomarcação em ambos os sistemas de amplificação. A utilização do método AgNOR, para avaliar a taxa de proliferação celular, pode ser uma alternativa quando o tempo de fixação do neoplasma for desconhecido ou superior a 24 horas.(AU)

Ancillary techniques on the evaluation of canine cutaneous mast cell tumors from Brazil / Técnicas auxiliares avaliação de mastocitomas cutâneos caninos do Brasil

The use of histologic classification by a 2-tier grading system only, immunohistochemistry (IHC) for KIT and Ki-67 and polymerase chain reaction (PCR) for internal tandem duplications (ITD) on exon 11 has improved the prognostication of canine cutaneous mast cell tumors (CCMTs) particularly in the United States. However, these techniques are not commonly used in most Brazilian laboratories. Likewise, no studies, to date, have investigated the occurrence of ITD in CCMTs from the country. Thus, this study tested the 2-tier grading system, the immunohistochemistry for KIT and Ki-67 and the PCR for exon 11 in a group of Brazilian CCMTs with the goal of investigating the applicability of these tests in a Brazilian laboratory. Of the 39 CCMTs, 69.2% (27/39) were identified as low-grade and 30.8% (12/39) as high-grade by a 2-tier grading system. All tumors had a KIT expression pattern II, and 30.6% (11/36) had a high growth fraction (Ki-67). PCR amplification was successful in four of the 11 tumors examined. Two of these (50%) were positive for ITD. This study highlights the importance of using auxiliary techniques in the CCMT evaluation, identifies limitations and confirms the applicability of these methods on a routine diagnostic basis in Brazil. Our results will help to improve the prognostication of CCMTs in Brazilian diagnostic laboratories, encouraging the use of supplementary methods.(AU)

O uso de classificação histológica por um novo sistema de graduação que utiliza apenas duas categorias, imuno-histoquímica (IHQ) para KIT e Ki-67 e reação de polimerase em cadeia (PCR) para mutações (duplicações internas) no éxon 11 tem melhorado a avaliação do prognóstico de mastocitomas cutâneos caninos (MCCs), particularmente nos Estados Unidos. No entanto, essas técnicas são ainda pouco utilizadas em laboratórios brasileiros e, até então, nenhum estudo investigou a prevalência de duplicações internas (DIs) em MCCs do país. Este estudo testou o novo sistema de graduação histológica de duas categorias, a imuno-histoquímica para KIT e Ki-67 e o PCR para exon 11 em um grupo de MCCs brasileiros, com o objetivo de investigar a aplicabilidade desses métodos em um laboratório brasileiro. De 39 MCCs, 69,2% foram identificados como sendo de baixo grau e 30,8% como de alto grau. Todos tiveram um padrão II de expressão de KIT, e 30,6% (11/36) tiveram uma alta contagem para Ki-67. A amplificação foi bem-sucedida em quatro dos 11 tumores examinados. Dois destes (50%) foram positivos para DIs. Este estudo ressaltou a importância do uso de técnicas auxiliares na avaliação de MCCs, identificou limitações e confirmou a aplicabilidade desses métodos em uma rotina de diagnósticos no Brasil. Esses resultados irão auxiliar na melhor avaliação prognóstica dos MCCs em laboratórios brasileiros, encorajando o uso de métodos suplementares neste processo.(AU)

Effect of protective solutions and hydroxyethyl starch in the attenuation of the injuries of ischemia and reperfusion of splanchnic organs

PURPOSE: Vogt´s antioxidant solution (red blood cells, Ringer's solution, sodium bicarbonate, mannitol, allopurinol and 50% glucose) or its modification including hydroxyethyl starch (HES) were tested for the prevention of splanchnic artery occlusion shock.METHODS:Seventy rats were distributed in treatment (3), control (1), and sham (3) groups. Ischemia and reperfusion were induced by celiac, superior mesenteric and inferior mesenteric arteries occlusion for 40 min, followed by 60 min reperfusion or sham procedures. Controls received saline, both treatment and sham groups received the Vogt's solution, modified Vogt's solution (replacing Ringer's solution by HES), or HES. Mean arterial blood pressure (MABP), ileal malondialdehyde (MDA) and plasmatic MDA were determined, and a histologic grading system was used.RESULTS:At reperfusion, MABP dropped in all I/R groups. Only HES treatment was able to restore final MABP to the levels of sham groups. Plasmatic MDA did not show differences between groups. Ileum MDA was significantly higher in the control and treatment groups as compared to the sham group. Histology ranking was higher in the only in control group.CONCLUSIONS:Hydroxyethyl starch was able to prevent hemodynamic shock but not intestinal lesions. Both treatments with Vogt's solutions did not show any improvement.(AU)

Análise de sobrevida e fatores prognósticos de cães com mastocitoma cutâneo / Survival analyses and prognostic markers in canine cutaneous mast cell tumors

O mastocitoma é a neoplasia cutânea maligna de maior frequência em cães. Apesar do estudo e do desenvolvimento de diversos marcadores prognósticos na tentativa de prever o comportamento biológico deste tipo de neoplasia, a graduação histológica continua sendo utilizada como principal delineador prognóstico para os animais acometidos, mesmo não conseguindo prever o comportamento de mastocitomas de diferenciação intermediária. Diferentes marcadores de proliferação e atividade celular vêm sendo testados com resultados promissores, entretanto, em sua maioria, demandam técnicas específicas de coloração e imuno-histoquímica que, ainda hoje, são de alto custo e muitas vezes não estão facilmente disponíveis. O índice mitótico é um método indireto de mensuração da atividade proliferativa celular, que pode ser contabilizado em uma lâmina comum de avaliação histológica e estudos vêm determinando-o como importante marcador prognóstico para o mastocitoma canino. Dada a recente publicação sugerindo nova graduação em dois graus (alto e baixo) e indisponibilidade das técnicas específicas utilizadas na determinação de outros fatores prognósticos, objetivou-se avaliar o poder prognóstico das diferentes classificações, associando-as à sobrevida destes animais e comparando com o índice mitótico. Apesar de isoladamente ambas as classificações histológicas apresentarem associação com a sobrevida (P<.001) dos animais acometidos, na análise multifatorial nenhuma foi significativamente associada com a sobrevida (P>0,05). O índice mitótico foi o fator prognóstico mais confiável para sobrevida, independente do ponto de corte utilizado (P<0,05), principalmente para os mastocitomas grau 2 de Patnaik et al. (1984), que apresentam comportamento biológico variado, sendo também associado à ocorrência de recidivas, tanto locais como distantes, e de síndromes paraneoplásicas (P<0,05). Conclui-se ser o índice mitótico o fator prognóstico mais significante, na ausência de técnicas específicas mais avançadas. Preconiza-se seu uso associado às graduações histológicas, visando maior poder prognóstico.(AU)

Mast cell tumor (MCT) is the most common malignant cutaneous neoplasm in dogs. Even with several prognostic markers being studied, in attempt to previse the biological behavior of these tumors, the histological grading is still commonly used to predict behavior, however, it is not significant to predict intermediately differentiated MCT behavior. Different prognostic and cell proliferation markers are being tested with promising results however, the majority of then requires specific staining and immunohistochemical techniques that even nowadays are expensive and not suitable for all veterinarians. Mitotic index is an indirect measure of cell proliferation and it can be established in a common histological microscope slide, and studies indicate it as an important prognostic marker for MCT in dogs. Given the recent publication of the novel two-tier histologic grading system, this study objective to evaluate the prognostic value of the different grading systems associating with survival and compare it with the mitotic index. Even though both grading systems associate with survival in the univariable analyses (P<.001), at the multivariable analyses neither was associated with survival (P>0,05), and the mitotic index was the most significant prognostic factor for survival, regardless of the cut-off point used (P<0,05), especially when Patnaik grade 2 tumors with unpredictable biological behavior were analyzed. The mitotic index was also significantly associated with both local and distant reccurence and paraneoplastic syndrome. In this study, mitotic index was the most significant prognostic factor, in the absence of specific staining and advanced immunohistochemical techniques, and its use is indicated in association with both histological grading system, aiming to add higher prognostic value possible.(AU)

Características clínicas e anatomo-histopatologicas da infecção experimental mista por Orthoreovirus aviario e Mycoplasma synoviae em frangos de corte / Clinical and histologic lesions of mixed infection with Avian orthoreovirus and Mycoplasma synoviae in broilers

A artrite infecciosa em frangos de corte representa um problema sanitário e econômico de grande impacto, provocando perdas de produtividade e nos processos de produção e industrialização. Os principais agentes etiológicos associados aos casos de artrites e tenossinovites infecciosas em aves são Mycoplasma synoviae (MS) e Orthoreovirus aviario (ARV). Esse trabalho propôs investigar as alterações anatomohistopatológicas causadas pela infecção experimental concomitante por Mycoplasma synoviae e Orthoreovirus aviario em frangos de corte e confirmar a presença dos agentes através das técnicas de PCR e imuno-luorescência indireta (RIFI). Para tal foram utilizados 16 frangos de corte, alojados em cama, com fornecimento de ração e água ad libitum. A infecção experimental foi realizada utilizando amostras atenuadas de MS e de ARV. Clinicamente as aves inoculadas apresentaram apatia e edemaciação da região da articulação tíbiotársica. Após 30 dias procedeu-se a eutanásia e a necropsia das aves. Na análise histopatológica constatou-se o efeito da infecção mista com MS e ARV sobre os diferentes órgãos/tecidos. Todos os animais apresentaram quadro de artrite e tenossinovite caracterizado pela presença de infiltrado inflamatório linfohistiocitário difuso, com acúmulo de heterófilos na cápsula articular/membrana sinovial e tendão flexor digital. Além disso, foi possível observar infiltrado inflamatório na traquéia, nos pulmões e sacos aéreos, no fígado, baço, pericárdio e proventrículo. A utilização da RIFI foi necessária para visualizar a presença de ambos os agentes nas articulações, identificando a presença de antígenos do ARV e do MS. A técnica de PCR constatou positividade do MS na traquéia, pulmões/sacos aéreos, cápsula articular/membrana sinovial e liquido sinovial. Já para o ARV a PCR foi positiva em amostras de fígado, baço, cápsula articular/membrana sinovial e tendão flexor digital. Com base nas lesões observadas e nos dados da literatura, sugere-se a ação concomitante por MS e ARV nos diferentes tecidos.(AU)

Infectious arthritis in broiler represents an economic and health problem resulting in severe losses due to retarded growth and down grading at slaughterhouse. The most common agents associated with cases of infectious arthritis in poultry are Mycoplasma synoviae and Avian orthoreovirus. This study proposed to investigate the histopathological changes caused by mixed infection with Mycoplasma synoviae and Avian orthoreovirus in broilers and confirm the presence of the agents through PCR and immunofluorescence assay (IFA). We used 16 broiler chickens, housed in bed, with supply of food and water ad libitum. Ten-day-old broilers were infected with Mycoplasma synoviae and Avian orthoreovirus. Clinically, they showed lethargy and swelling of the hock joint. After 30 days, we proceeded to their euthanasia and necropsy. Histological lesions were observed due to the mixed infection with Mycoplasma synoviae and Avian orthoreovirus in different tissues. The histopathology of the joints was characterized by infiltration of heterophil leucocytes in the synovial membrane and the digital flexor tendon. The inflammatory process was also found in trachea, lungs, air sac, liver, spleen, pericardium and proventriculus. The use of IFA was necessary to verify the presence of both agents in the hock joints, identifying the antigens of Mycoplasma synoviae and Avian orthoreovirus. The presence of M. synoviae was detected by PCR in trachea, lung, air sacs, synovial membrane and synovial fluid. Avian orthoreovirus was detected with PCR in liver, spleen, synovial membrane and digital flexor tendon. In conclusion, this investigation suggests that a synergistic relationship exists between Mycoplasma synoviae and Avian orthoreovirus.(AU)

CARACTERIZAÇÃO HISTOPATOLÓGICA E MARCADORES IMUNO-HISTOQUÍMICOS NO CÂNCER DE MAMA DE GATAS

As neoplasias mamárias das gatas podem ser malignas e agressivas, com predomínio de carcinomas, classificados em tubulopapilíferos, sólidos e cribriformes ou avaliados pelo grau histológico. Esse tipo de carcinoma tem poucos estudos relacionando índices proliferativos e apoptóticos com o tipo e a graduação histológica ou identificando marcadores para origem e composição celular como as citoqueratinas (CK14) e a alfa-actina de músculo liso (alfa-SMA) e para a expressão de moléculas que influenciam o comportamento dessas neoplasias como as caderinas, confrontando com o tipo histológico e sua graduação. Foram classificadas histologicamente e graduadas 31 amostras de carcinomas mamários de gatas, sendo submetidas a painel imuno-histoquímico com os anticorpos anti-Ki-67, anti-caspase 3 clivada, anti-CK14, anti-alfa-SMA, anti-E caderina e anti-P caderina. Predominaram as gatas SRD, com média de idade de 12 anos. O percentual dos tipos histológicos foi: 42%, 45,50% e 12,50% para os carcinomas tubulopapilíferos, sólidos e cribriformes. A graduação das neoplasias teve o percentual de 9,65%, 41,95% e 48,80%, para os graus I, II e III. Os carcinomas tubulopapilíferos mostraram índice mitótico inferior aos carcinomas sólidos, assim como os carcinomas de grau I em relação aos carcinomas de grau II e III. O imunofenótipo basal (células CK14 positivas) foi frequente nesses carcinomas e o imunofenótipo mioepitelial (alfa-SMA positivo ou alfa-SMA-CK14 positivo) não. A E-caderina teve baixa expressão e foi mais alta nos tumores de grau baixo, e a molécula de adesão P-caderina foi expressa pela maioria desses carcinomas, não havendo relação da sua expressão com o tipo histológico ou grau da neoplasia.

Mammary tumors of the cats can be malignant and aggressive, with a predominance of carcinomas, classified tubulopapillary, solid and cribriform or evaluated by histologic grade. This type of cancer has few studies relating proliferative and apoptotic indices with the type and histologic grading or identifying markers for source and cellular composition as cytokeratin (CK14) and smooth muscle alpha-actin (alpha-SMA) and expression molecules that influence the behavior of these neoplasms as cadherins, confronted with the histological type and their graduation. histologically they were classified and graded 31 samples of breast carcinomas cats, and subjected to immunohistochemistry panel with anti-Ki-67 antibodies, anti-cleaved caspase 3, anti-CK14, anti-alpha SMA, anti-E cadherin and anti-P-cadherin. Predominated SRD cats, with a mean age of 12 years. The percentage of histological types was 42%, 45.50% and 12.50% for tubulopapillary, solid and cribriform carcinomas. The grading of tumors had the percentage of 9.65%, 41.95% and 48.80%, for grades I, II and III. The tubulopapillary carcinomas showed mitotic index lower than the solid carcinomas, as well as grade I carcinomas compared to grade II and III carcinomas. Basal immunophenotype (CK14 positive cells) was common in these carcinomas and myoepithelial immunophenotype (positive alpha-SMA or alpha-SMA-positive CK14) does not. The E-cadherin expression was low and was higher in low-grade tumors, and the adhesion molecule P-cadherin was expressed by most of these carcinomas, no relation of their expression with the histological type or grade of the neoplasia. Ke

CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS E ANATOMOPATOLÓGICAS DAS NEOPLASIAS MAMÁRIAS DE CADELAS ATENDIDAS NO HOSPITAL VETERINÁRIO DO CAV/UDESC

BACH, Eloisa Carla. Características clínicas e anatomopatológicas das neoplasias mamárias de cadelas atendidas no hospital veterinário do CAV/UDESC. 2015. 101 f. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal Área: Clínica e cirurgia veterinária). Centro de Ciências Agroveterinárias, Universidade do Estado de Santa Catarina. Programa de Pós Graduação em Ciência Animal. Lages, 2015. O objetivo do estudo foi realizar um levantamento de dados sobre cadelas com tumores de mama atendidas no HCV do CAV/UDESC, no período de agosto de 2012 a novembro de 2014, para avaliação de fatores de risco e sobrevida dos animais. Foram acompanhados 178 animais entre 2 e 18 anos de idade. Todas passaram por avaliação pré-cirúrgica e foram classificadas através do exame físico e radiográfico segundo o sistema TNM. Na anamnese foram colhidas informações referentes a idade, status sexual, exposição a progestágenos e tempo de evolução do tumor. Todos os animais foram mastectomizados e amostras das mamas foram submetidas a exame histopatológico com graduação de malignidade pelo sistema Nottingham modificado por Elston e Ellis. A idade média dos animais acompanhados foi de 9,8 anos. Os cães de raça foram os mais acometidos, sendo o poodle o mais prevalente. Do total de cadelas, 32 eram castradas, mas esse fator não teve influência na sobrevida dos animais. 58 animais receberam progestágenos e essa característica foi associada à maior ocorrência de tumores malignos e menor sobrevida das pacientes. A maioria dos animais apresentou tumores maiores que 5cm e a graduação dos sistema TNM e a ulceração do tumor influenciaram negativamente na sobrevida dos animais. A maioria das neoplasias foram malignas de origem epitelial, sendo o carcinoma misto o mais frequente. Na graduação histológica somente o índice de formação tubular e o índice mitótico tiveram influência na sobrevida dos animais.

BACH, Eloisa Carla. Clinical and anatomopathological features of mammary neoplasms of the bitches answered in CAV/UDESC veterinary hospital. 2015. 101 f. Dissertation (Master in Animal Science Area: Veterinary Clinical and Surgery). Agroveterinary Science Center, University of Santa Catarina State, Postgraduate Program in Animal Science. Lages, 2015. The aim of the study was carried out data collection on bitches breast tumors treated at HCV CAV / UDESC, from August 2012 to November 2014, to assess risk factors and survival of animals. 178 animals were followed up between 2 and 18 years of age. All underwent presurgical evaluation and were classified by physical and radiographic examination according to the TNM system. In history it was collected information on age, sexual status, exposure to progestins and tumor progression time. All animals were mastectomizados and breast samples were submitted to histopathology with undergraduate at Nottingham malignancy system modified by Elston and Ellis. The average age of the animals followed up was 9.8 years. The breed dogs were most affected, and the poodle the most prevalent. Of all dogs, 32 were castrated, but this factor had no influence on survival of animals. 58 animals received progestogens and this characteristic was associated with a higher occurrence of malignant tumors and lower survival of patients. Most of the animals had tumors larger than 5 cm and the ranking of TNM system and tumor ulceration negatively impact the survival rate of the animals. Most tumors were malignant epithelial origin, and mixed cell carcinoma is the most common. In histologic grading only the tubular formation index and the mitotic index influenced the survival of animals.

INVESTIGAÇÕES OFTÁLMICAS EM ESPÉCIES SELECIONADAS DE UNGULADOS ARTIODÁTILOS.

A presente dissertação engloba três artigos distintos que contribuem para o conhecimento científico atual da oftalmologia de ungulados artiodátilos selvagens e domésticos. Cada artigo científico tornou-se um capítulo da dissertação. Todos os estudos foram conduzidos pela autora e por colaboradores do Laboratório de Oftalmologia Comparada (LABOCO), da Universidade Federal do Paraná (UFPR). O primeiro capítulo relata uma estrutura anatômica jamais descrita em camelídeos do Velho Mundo, uma espinha óptica localizada no osso esfenóide. No que se refere à importância deste novo achado, a observação da estrutura óssea na órbita de camelos e dromedários (Artiodactyla), quando combinada com a constatação anterior de uma estrutura anatômica semelhante em morcegos (Chiroptera), pode fornecer apoio adicional quanto à proximidade dessas duas ordens animais, aparentemente muito distintas na árvore filogenética. A função exata da espinha óssea descrita deverá ser mais investigada no futuro, porém aparenta servir como suporte para músculos extraoculares. O segundo capítulo descreve as características anatômicas normais do olho, biometria ocular e parâmetros de testes oftálmicos para o aoudad (Ammotragus lervia). Seus olhos localizam-se lateralmente na cabeça, são proeminentes e possuem diversas características anatômicas especializadas provenientes de adaptações evolutivas para o pastejo, as quais já foram previamente observadas em outras espécies de ungulados como cavalos, bois e ovelhas. Foram estabelecidos os valores normais para testes oftálmicos comumente realizados: Teste Lacrimal de Schirmer (TLS), microbiota bacteriana normal da superfície ocular, estesiometria corneal, tonometria, espessura da córnea, ultrassonografia em modo B do bulbo ocular, análise de fotografia do fundo de olho e, por fim, mensuração da fissura corneana e palpebral. O conhecimento das variações anatômicas normais, resultados biométricos e parâmetros normais para testes diagnósticos oftálmicos nunca antes explorados nesta espécie podem auxiliar médicos veterinários e particularmente oftalmologistas veterinários no diagnóstico de várias doenças oculares que eventualmente ocorrem. O aoudad é um capríneo selvagem considerado ameaçado de extinção em seu habitat natural, entretanto está presente em diversos parques zoológicos ao redor do mundo e também em parques de caças legalizados. O terceiro e último capítulo consiste em um estudo histopatológico do carcinoma espinocelular ocular bovino (CEOB), uma importante doença neoplásica de ocorrência mundial, que impacta no bem-estar animal e que também traz sérios efeitos deletérios na produção de gado bovino. Trata-se da primeira investigação realizada exclusivamente com casos de CEOB diagnosticados no Estado do Paraná e em Santa Catarina. Foi realizada a classificação histológica de 10 casos diagnosticados de CEOB no LABOCO, sendo que esta foi uma tentativa pioneira de produzir um esquema de graduação histológica plausível em estudo brasileiro de CEOB. Curiosamente os nossos resultados de análise fenotípica estão em desacordo com dados de investigações anteriores, visto que seis de dez casos de CEOB foram observados em animais com olhos bem pigmentados. O parâmetro de anaplasia não se correlacionou bem com invasão tumoral mais profunda e índice mitótico, isso ocorreu com a maior parte das amostras analisadas. Uma associação entre a classificação histológica e técnicas moleculares pode ser alternativa viável para investigar e prever o comportamento do CEOB no futuro.

The present dissertation encompasses three different texts contributing to the current scientific ophthalmology knowledge of ungulate artiodactyls. Each of these papers became a chapter in the present dissertation. All studies were conducted by the author and collaborators from Laboratory of Comparative Ophthalmology (LABOCO), Federal University of Paraná (FUPR). The first chapter reports a previously undescribed anatomic structure, an optic spine on the sphenoid bone in Old World camelids. Concerning the importance of this novel finding, the observation of this osseous structure on the bony orbit of camels and dromedaries (Artiodactyla) when combined with the previous finding of a similar anatomic structure in a bat (Chiroptera) may provide further support to the close proximity of these two apparently very distinct animal orders in the phylogenetic tree. The exact function of this osseous spine remains to be further investigated but seems to serve as an attachment for extraocular muscles. The second chapter describes normal anatomic eye features, biometry and ophthalmic test parameters for the aoudad (Ammotragus lervia). Its eyes are large and laterally placed in the head with several specialized anatomic features attributed to be evolutionary adaptations for grazing, which were also previously observed in other prey species of ungulates, such as horses, sheep and cattle. Normal values for commonly used ophthalmic tests were established, namely: Schirmer tear test (STT), normal ocular surface bacterial microbiota, corneal esthesiometry, tonometry, corneal thickness, B-mode ultrasonography of the globe, fundus photography analysis and lastly corneal and palpebral fissure measurements. Knowledge of the normal anatomic variations, biometric findings and normal parameters for ocular diagnostic tests may assist veterinarians and particularly veterinary ophthalmologists in the diagnosis of several ocular diseases that eventually occur in this previously unexplored wild caprid species, which is considered under threat of extinction in its natural habitat but rather widespread in zoological parks throughout the world and also used as game in legalized hunting parks. The third and last chapter consists of a histopathological study of the bovine ocular squamous cell carcinoma (OSSC), a worldwide prevalent and serious neoplastic disease, while having negative effects on animal welfare also have profoundly deleterious effects on cattle production. This was the first investigation performed exclusively in OSCC cases diagnosed in the State of Paraná and Santa Catarina. A histologic classification of 10 OSCC cases referred to LABOCO was performed. This is a first attempt to produce an acceptable histological grading scheme in a Brazilian OSCC study. Curiously our findings are in disagreement with previous investigations since six out of ten OSCC cases were observed in animals with heavily pigmented eyes. Awkwardly, anaplasia parameters did not correlate well with tumor invasion of deeper tissues and mitotic indexes in most samples analyzed. Possibly, an association between histological grading and molecular techniques such as in situ hybridization and immunohistochemistry would be a feasible route to investigate and predict OSCC behavior in the future.

Immunodetecção de marcadores de prognóstico em neoplasias mamárias de gatas: correlação dos padrões classificados

As neoplasias mamárias em gatas representam o terceiro tipo neoplásico mais frequente nesta espécie. A maioria destas neoplasias são malignas, e exibem alto potencial metastático. Devido a isto, e a escassez de trabalhos referentes ao prognóstico de gatas com câncer de mama, foram avaliados em 32 amostras de neoplasia mamária de gatas, a expressão imuno- histoquímica de alguns marcadores de prognóstico. As amostras foram segregadas em grupos seguindo os parâmetros de classificação da organização mundial de saúde em carcinomas tubulopapilares, cribriformes e sólidos e de acordo com o método de Nottighan modificado em graus I, II e III. Os cortes histológicos foram submetidos a processamento imuno-histoquímico para avaliação da expressão da metaloproteinase 9 (MMP-9), do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), da proteína de proliferação celular Ki- 67 e de linfócitos TCD3+, CD79+ e macrófagos, afim de se avaliar os diferentes padrões de classificação. Os resultados da marcação imuno- histoquímica foram avaliados com auxílio de um sistema de análise de imagem computadorizada para determinar a porcentagem da área imunomarcada. Em relação à classificação morfológica observou-se diferença significativa entre a densidade de linfócitos TCD3+ entre os grupos. Durante a análise nas amostras segregadas de acordo com a gradação histológica verificou-se diferença significativa entre a imunomarcação da MMP-9, entre a intensidade de infiltração de células TCD3+ e uma tendência de variação na proteína Ki-67. Observamos também correlação positiva entre os níveis de expressão da MMP-9 e da Ki-67, da MMP-9 e células TCD3, e da proteína Ki-67 com as células TCD3. Desta forma concluímos que classificação histológica dos carcinomas de mama em gatas não é um bom parâmetro para determinação do prognóstico da doença...

The mammary tumors in cats represent the third most common tumor type in the species. Most of these are malignant neoplasms exhibit a high metastatic potential. Because of this and the lack of studies regarding the prognosis for cats with breast cancer were evaluated 32 samples of breast cancer in cats. These samples were grouped according to morphological and histological classification, and the sections were submitted to immunohistochemical processing to evaluate the expression of metalloproteinase 9 (MMP-9), the vascular endothelial growth factor (VEGF) protein of cell proliferation Ki-67 and CD3 + T lymphocytes, and CD79 + macrophages in order to evaluate differences in the different grading standards. The results of immunohistochemical marking were evaluated by using a system of computerized image analysis to assess the percentage of area immunomarked. Regarding the morphological classification showed a significant difference between the amount of T lymphocytes CD3 + between the groups. During analysis the samples segregated according to histologic grading there was significant difference between the immunostaining of MMP-9, between the intensity of infiltration of T cells CD3 + and a tendency of variation in the Ki-67 protein. We also observed a positive correlation between the expression levels of MMP-9 and Ki-67, MMP-9 and TCD3 cells, and Ki-67 protein in cells T CD3+. Thus we conclude that histologic classification of breast carcinomas in cats is not a good parameter for determining the prognosis of the disease when evaluated together with the levels of immunohistochemical expression of MMP- 9, VEGF and Ki67. The best best parameters for determining the prognosis was observed when the histological grade was considered . The higher was the proliferative index determined by the positivity of Ki-67 protein from neoplastic cells, the greater...

Graduação histológica e expressão de metaloproteinases (MMP-9 e MMP-2) e seus inibidores (TIMP-1 e TIMP-2) na glândula mamária canina neoplásica / Histological grade and expression of matrix metalloproteinases (MMP-9 e TIMP-2) and their inhibitors (TIMP-1 and TIMP-2) in neoplastic canine mammary gland

Nas fêmeas caninas, as glândulas mamárias são os locais mais comuns para a ocorrência de neoplasias. Para avaliar o comportamento biológico dessas lesões empregam-se rotineiramente métodos histológicos descritivos que, associados à graduação histológica, auxiliam na predição prognóstica dessas enfermidades. Ainda, o desequilíbrio entre a quantidade tissular de metaloproteinases de matriz (MMP), enzimas proteolíticas implicadas em processos fisiológicos e patológicos, e seus inibidores (TIMP), desempenha papel importante na evolução e invasão tumoral. Para avaliar o comportamento biológico de alguns tipos tumorais frequentes da mama das cadelas esta pesquisa foi dividida em duas etapas. A primeira teve como objetivo relacionar a classificação e a graduação histológicas das neoplasias mamárias de cadelas, bem como correlacionar a graduação dos tumores malignos com o tamanho tumoral. Para isso, avaliaram-se 119 amostras de tumores mamários caninos, sendo considerados tumores todos os distúrbios do crescimento da glândula mamária canina, incluindo os neoplásicos (benignos e malignos) e os não neoplásicos (alterações hiperplásicas). Todos os tumores foram classificados e apenas os malignos graduados histologicamente e correlacionados ao tamanho tumoral. Concluiu-se que o carcinoma complexo é o tipo histológico mais comum e que possui menor grau histológico em relação aos demais tipos tumorais de classificação maligna. Ainda, neoplasias maiores que cinco centímetros foram predominantemente malignas (92,3% ou 12/13) e não foi observada correlação entre tamanho tumoral e grau histológico. A relação entre a classificação e a graduação histológica compreendeu instrumento auxiliar na descrição microscópica dos tumores mamários malignos das cadelas. A segunda etapa teve como objetivo avaliar a expressão de MMP-9, MMP-2, TIMP-1 e TIMP-2 no tecido mamário canino normal e neoplásico. Para isso, foram selecionadas 48 amostras de glândula mamária canina, sendo 14 de carcinoma complexo (CC), 13 de carcinoma tubulopapilar (CT), seis de adenoma mamário simples (AM) e 15 de mama normal (MN), submetidas à técnica de imuno-histoquímica para a avaliação da intensidade de marcação e do número de células epiteliais e estromais marcadas. Houve diferença na expressão de MMP-9, TIMP-1 e TIMP-2 de acordo com a histomorfologia mamária. A MMP-9 apresentou maior expressão nas células epiteliais e estromais dos CC e CT em relação às MN. Constatou-se menor expressão de TIMP-1 nas células estromais do CC e superexpressão de TIMP-2 nas células epiteliais do CT. Ainda, houve correlação positiva entre MMP-9 e TIMP-1 quanto a intensidade de marcação e número de células epiteliais e estromais marcadas na MN, e entre MMP-9 e TIMP-2 nas células epiteliais neoplásicas do CT. Concluiu-se que há variação na expressão da MMP-9, TIMP-1 e TIMP-2 entre os tipos tumorais, além de correlação positiva entre TIMP-1 e MMP-9 nas mamas normais e entre MMP-9 e TIMP-2 no carcinoma tubulopapilar. A atividade equilibrada entre MMP-9, MMP-2, TIMP-1 e TIMP-2 é fundamental à homeostase da glândula mamária canina normal enquanto a superexpressão de MMP-9 e TIMP-2, e a expressão reduzida de TIMP-1 nos carcinomas pode representar condição adequada à evolução tumoral

In bitchs, mammary glands are the most common sites for the occurrence of neoplasms. To evaluate the biological behavior of these lesions is routinely employ descriptive histological methods that, combined with histological grading, help predict prognosis of these diseases. The imbalance between the amount of tissue matrix metalloproteinases (MMPs), proteolytic enzymes involved in physiological and pathological processes, and their inhibitors (TIMP), plays an important role in development and tumor invasion. To evaluate the biological behavior of some common types of breast tumor bitches this research was divided in two steps. The first one was correlating histological classification and degree of mammary neoplasms in bitches, and to correlating the degree of malignancy and tumor size. For this, 119 samples were evaluated in canine mammary tumors, all tumors were considered disorders of the growth of canine mammary gland, including neoplastic (benign and malignant) and non-neoplastic (hyperplastic changes). All tumors were classified and only the malignant were graded histologically and correlated with tumor size. It was concluded that the complex carcinoma is the most common cancer histological type and which has the lowest histological grade compared to other malignant tumor types. Further, neoplasms larger than five centimeters were predominantly malignant (92,3% or 12/13) and no correlation was observed between tumor size and histologic grade. The relation between histological classification and graduation helped in microscopic description of malignant mammary tumors in bitches. The second step was to evaluate the expression of MMP-9, MMP-2 TIMP-1 and TIMP-2 in normal and neoplastic canine mammary tissue. For this purpose it was selected 48 samples of canine mammary tissue, 14 complex carcinomas (CC), 13 tubulopapillary carcinoma (TC), six simple mammary adenoma (MA) and 15 normal breast (MN), and submitted to technical immunohistochemistry for the evaluation of the intensity staining and the number of epithelial and stromal cells selected. Differences were observed in the expression of MMP-9 and TIMP-1 and TIMP-2 according to the mammary histomorphology. The MMP-9 showed higher expression in epithelial and stromal cells of the CC and CT compared to MN. It was found a lower expression of TIMP-1 in stromal cells of the CC and overexpression of TIMP-2 in epithelial cells of the CT. Also a positive correlation between MMP-9 and TIMP-1 and the intensity staining and number of epithelial and stromal cells marked in MN and between MMP-9 and TIMP-2 on TC neoplastic epithelial cells. It was concluded that there is variation between expression of MMP-9, TIMP-1 and TIMP-2 among the tumor types, and a positive correlation between TIMP-1 and MMP-9 in normal mammary gland and between MMP-9 and TIMP-2 in tubulopapilar carcinoma. The balanced expression of MMP-9, MMP-2, TIMP-1 and TIMP-2 is essential for the homeostasis of canine normal mammary gland, while the overexpression of MMP-9 and TIMP-2, and the reduced expression of TIMP-1 in carcinomas represents an appropriate condition to the tumor development