Prevalence and association of mycoplasma infection in the development of coronary artery disease

Abstract Coronary heart disease (CHD) has been associated with significant morbidity and mortality worldwide. Although remain controversial, several studies have demonstrated the association of M. pneumoniae infections with atherosclerosis. We evaluated the possible association of mycoplasma infections in patients diagnosed with atherosclerosis by ELISA and PCR methods. Atherosclerotic tissue samples and blood samples were collected for the detection of mycoplasma antibodies (IgA) by ELISA from the 97 patients with coronary artery disease (CAD). M. pneumoniae specific IgA, IgG and IgM were measured by using the Anti-M. pneumoniae IgA/IgG/IgM ELISA. Detection of M. pneumoniae targeting the P1 adhesion gene was performed by PCR Acute infection of M. pneumoniae was diagnosed in 43.3% (42) of patients by PCR. The M. pneumoniae specific antibodies were detected in 36.1% (35) of patients. Twenty-five (25.8%) cases had IgG antibodies, 15 (15.5%) cases had IgM antibodies, 3 (3.1%) cases had IgA antibodies, 10 (10.3%) cases had both IgM + IgG antibodies and 1 (1%) case of each had IgM + IgA and IgG + IgA antibodies. None of the cases was positive for all three antibodies. A Pearson correlation coefficient analysis revealed an excellent correlation between the PCR and the serological results (r=0.921, p 0.001). A majority (17, 40.5%) of the M. pneumoniae positive patients are within the 41-50 years of age group, followed by 10 (23.8%) patients in the age group of 61-70 years and 2 (4.8%) patients were >70 years of age. Our study reported an unusually higher prevalence of M. pneumoniae by serological tests (36.1%) and PCR (43.3%). Although the hypothesis of the association of M. pneumoniae and CAD is yet to be proven, the unusually high prevalence of M. pneumoniae in CAD patients indicates an association, if not, in the development of atherosclerosis.

Resumo A doença coronariana (DCC) tem sido associada a significativa morbidade e mortalidade em todo o mundo. Embora ainda sejam controversos, vários estudos têm demonstrado a associação de infecções por M. pneumoniae com aterosclerose. Avaliamos a possível associação de infecções por micoplasma em pacientes com diagnóstico de aterosclerose pelos métodos ELISA e PCR. Amostras de tecido aterosclerótico e amostras de sangue foram coletadas para a detecção de anticorpos contra micoplasma (IgA) por ELISA de 97 pacientes com doença arterial coronariana (DAC). IgA, IgG e IgM específicos para M. pneumoniae foram medidos usando o Anti-M. pneumoniae IgA / IgG / IgM ELISA. A detecção de M. pneumoniae visando o gene de adesão P1 foi realizada por PCR. A infecção aguda por M. pneumoniae foi diagnosticada em 43,3% (42) dos pacientes pela PCR. Os anticorpos específicos para M. pneumoniae foram detectados em 36,1% (35) dos pacientes. Vinte e cinco (25,8%) casos tinham anticorpos IgG, 15 (15,5%) casos tinham anticorpos IgM, 3 (3,1%) casos tinham anticorpos IgA, 10 (10,3%) casos tinham anticorpos IgM + IgG e 1 (1%) caso de cada um tinha anticorpos IgM + IgA e IgG + IgA. Nenhum dos casos foi positivo para os três anticorpos. A análise do coeficiente de correlação de Pearson revelou uma excelente correlação entre o PCR e os resultados sorológicos (r = 0,921, p 0,001). A maioria (17, 40,5%) dos pacientes positivos para M. pneumoniae está na faixa etária de 41-50 anos, seguida por 10 (23,8%) pacientes na faixa etária de 61-70 anos e 2 (4,8%) pacientes tinham > 70 anos de idade. Nosso estudo relatou uma prevalência incomumente maior de M. pneumoniae por testes sorológicos (36,1%) e PCR (43,3%). Embora a hipótese da associação de M. pneumoniae e DAC ainda não tenha sido comprovada, a prevalência incomumente alta de M. pneumoniae em pacientes com DAC indica uma associação, se não, no desenvolvimento de aterosclerose.

Prevalence and association of mycoplasma infection in the development of coronary artery disease / Prevalência e associação de infecção por micoplasma no desenvolvimento de doença arterial coronariana

Coronary heart disease (CHD) has been associated with significant morbidity and mortality worldwide. Although remain controversial, several studies have demonstrated the association of M. pneumoniae infections with atherosclerosis. We evaluated the possible association of mycoplasma infections in patients diagnosed with atherosclerosis by ELISA and PCR methods. Atherosclerotic tissue samples and blood samples were collected for the detection of mycoplasma antibodies (IgA) by ELISA from the 97 patients with coronary artery disease (CAD). M. pneumoniae specific IgA, IgG and IgM were measured by using the Anti-M. pneumoniae IgA/IgG/IgM ELISA. Detection of M. pneumoniae targeting the P1 adhesion gene was performed by PCR Acute infection of M. pneumoniae was diagnosed in 43.3% (42) of patients by PCR. The M. pneumoniae specific antibodies were detected in 36.1% (35) of patients. Twenty-five (25.8%) cases had IgG antibodies, 15 (15.5%) cases had IgM antibodies, 3 (3.1%) cases had IgA antibodies, 10 (10.3%) cases had both IgM + IgG antibodies and 1 (1%) case of each had IgM + IgA and IgG + IgA antibodies. None of the cases was positive for all three antibodies. A Pearson correlation coefficient analysis revealed an excellent correlation between the PCR and the serological results (r=0.921, p70 years of age. Our study reported an unusually higher prevalence of M. pneumoniae by serological tests (36.1%) and PCR (43.3%). Although the hypothesis of the association of M. pneumoniae and CAD is yet to be proven, the unusually high prevalence of M. pneumoniae in CAD patients indicates an association, if not, in the development of atherosclerosis.

A doença coronariana (DCC) tem sido associada a significativa morbidade e mortalidade em todo o mundo. Embora ainda sejam controversos, vários estudos têm demonstrado a associação de infecções por M. pneumoniae com aterosclerose. Avaliamos a possível associação de infecções por micoplasma em pacientes com diagnóstico de aterosclerose pelos métodos ELISA e PCR. Amostras de tecido aterosclerótico e amostras de sangue foram coletadas para a detecção de anticorpos contra micoplasma (IgA) por ELISA de 97 pacientes com doença arterial coronariana (DAC). IgA, IgG e IgM específicos para M. pneumoniae foram medidos usando o Anti-M. pneumoniae IgA / IgG / IgM ELISA. A detecção de M. pneumoniae visando o gene de adesão P1 foi realizada por PCR. A infecção aguda por M. pneumoniae foi diagnosticada em 43,3% (42) dos pacientes pela PCR. Os anticorpos específicos para M. pneumoniae foram detectados em 36,1% (35) dos pacientes. Vinte e cinco (25,8%) casos tinham anticorpos IgG, 15 (15,5%) casos tinham anticorpos IgM, 3 (3,1%) casos tinham anticorpos IgA, 10 (10,3%) casos tinham anticorpos IgM + IgG e 1 (1%) caso de cada um tinha anticorpos IgM + IgA e IgG + IgA. Nenhum dos casos foi positivo para os três anticorpos. A análise do coeficiente de correlação de Pearson revelou uma excelente correlação entre o PCR e os resultados sorológicos (r = 0,921, p 70 anos de idade. Nosso estudo relatou uma prevalência incomumente maior de M. pneumoniae por testes sorológicos (36,1%) e PCR (43,3%). Embora a hipótese da associação de M. pneumoniae e DAC ainda não tenha sido comprovada, a prevalência incomumente alta de M. pneumoniae em pacientes com DAC indica uma associação, se não, no desenvolvimento de aterosclerose.

Occurrence of IgG antibodies against Toxoplasma gondii, Neospora caninum, and Leptospira spp. in goats and sheep from an indigenous village in Pernambuco, Brazil / Ocorrência de anticorpos IgG contra Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leptospira spp. em caprinos e ovinos de uma aldeia indígena em Pernambuco, Brasil

This study aimed to determine the occurrence of anti-Toxoplasma gondii, Neospora caninum, and Leptospira spp. antibodies in sheep and goats raised in villages of the Xukuru do Ororubá indigenous community, Pernambuco, Brazil. A total of 180 serum samples from sheep and 108 serum samples from goats of both sexes and different ages were analyzed. For antibody research, indirect immunofluorescence antibody test (IFAT) were used for the protozoa T. gondii and N. caninum, and microscopic agglutination test (MAT) for Leptospira spp., with a cutoff titer of 1:64, 1:50 and 1:100, respectively. The frequency of anti-T. gondii antibodies was 16.6% (30/180) for sheep and 11.1% (12/108) for goats. The frequency of anti-N. caninum antibodies was 10.55% (19/180) for sheep, and 20.37% (22/108) for goats, while for Leptospira spp., 2.2% (4/180) of sheep and 1.85% (2/108) of goats reacted positively. The results obtained in this study are unprecedented in indigenous communities in the country and serve as an alert for monitoring goats and sheep from the Xukuru do Ororubá indigenous village regarding the occurrence and productive impact of infections by T. gondii, N. caninum, and Leptospira spp., in addition to the occurrence of the zoonosis toxoplasmosis and leptospirosis in the indigenous community.(AU)

Objetivou-se determinar a ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leptospira spp., em ovinos e caprinos criados em aldeias da comunidade indígena Xukuru do Ororubá, Pernambuco, Brasil. Foram analisadas 180 amostras de soro de ovinos e 108 amostras de soro de caprinos de ambos os sexos e diferentes idades. Para a pesquisa de anticorpos foi utilizada a técnica de Reação de Imunofluorescência indireta (RIFI), para os protozoários T. gondii e N. caninum e Aglutinação Microscópica (MAT) para Leptospira spp., com ponto de corte de 1:64, 1:50 e 1:100, respectivamente. A frequência de anticorpos anti-T gondii foi de 16,6% (30/180) em ovinos e 11,1% (12/108) em caprinos. A frequência de anticorpos anti-N. caninum foi de 10,55% (19/180) para ovinos e 20,37% (22/108) para caprinos, enquanto para Leptospira spp., 2,2% (4/180) dos ovinos e 1,85% (2/108) dos caprinos reagiram positivamente. Os resultados obtidos neste estudo são inéditos em comunidades indígenas do país e alertam para o monitoramento de caprinos e ovinos da aldeia indígena Xukuru do Ororubá, quanto à ocorrência e impacto produtivo de infecções por T. gondii, N. caninum e Leptospira spp., além da ocorrência de zoonoses como a toxoplasmose e leptospirose na comunidade indígena.(AU)

Prevalence and association of mycoplasma infection in the development of coronary artery disease / Prevalência e associação de infecção por micoplasma no desenvolvimento de doença arterial coronariana

Abstract Coronary heart disease (CHD) has been associated with significant morbidity and mortality worldwide. Although remain controversial, several studies have demonstrated the association of M. pneumoniae infections with atherosclerosis. We evaluated the possible association of mycoplasma infections in patients diagnosed with atherosclerosis by ELISA and PCR methods. Atherosclerotic tissue samples and blood samples were collected for the detection of mycoplasma antibodies (IgA) by ELISA from the 97 patients with coronary artery disease (CAD). M. pneumoniae specific IgA, IgG and IgM were measured by using the Anti-M. pneumoniae IgA/IgG/IgM ELISA. Detection of M. pneumoniae targeting the P1 adhesion gene was performed by PCR Acute infection of M. pneumoniae was diagnosed in 43.3% (42) of patients by PCR. The M. pneumoniae specific antibodies were detected in 36.1% (35) of patients. Twenty-five (25.8%) cases had IgG antibodies, 15 (15.5%) cases had IgM antibodies, 3 (3.1%) cases had IgA antibodies, 10 (10.3%) cases had both IgM + IgG antibodies and 1 (1%) case of each had IgM + IgA and IgG + IgA antibodies. None of the cases was positive for all three antibodies. A Pearson correlation coefficient analysis revealed an excellent correlation between the PCR and the serological results (r=0.921, p<0.001). A majority (17, 40.5%) of the M. pneumoniae positive patients are within the 41-50 years of age group, followed by 10 (23.8%) patients in the age group of 61-70 years and 2 (4.8%) patients were >70 years of age. Our study reported an unusually higher prevalence of M. pneumoniae by serological tests (36.1%) and PCR (43.3%). Although the hypothesis of the association of M. pneumoniae and CAD is yet to be proven, the unusually high prevalence of M. pneumoniae in CAD patients indicates an association, if not, in the development of atherosclerosis.

Resumo A doença coronariana (DCC) tem sido associada a significativa morbidade e mortalidade em todo o mundo. Embora ainda sejam controversos, vários estudos têm demonstrado a associação de infecções por M. pneumoniae com aterosclerose. Avaliamos a possível associação de infecções por micoplasma em pacientes com diagnóstico de aterosclerose pelos métodos ELISA e PCR. Amostras de tecido aterosclerótico e amostras de sangue foram coletadas para a detecção de anticorpos contra micoplasma (IgA) por ELISA de 97 pacientes com doença arterial coronariana (DAC). IgA, IgG e IgM específicos para M. pneumoniae foram medidos usando o Anti-M. pneumoniae IgA / IgG / IgM ELISA. A detecção de M. pneumoniae visando o gene de adesão P1 foi realizada por PCR. A infecção aguda por M. pneumoniae foi diagnosticada em 43,3% (42) dos pacientes pela PCR. Os anticorpos específicos para M. pneumoniae foram detectados em 36,1% (35) dos pacientes. Vinte e cinco (25,8%) casos tinham anticorpos IgG, 15 (15,5%) casos tinham anticorpos IgM, 3 (3,1%) casos tinham anticorpos IgA, 10 (10,3%) casos tinham anticorpos IgM + IgG e 1 (1%) caso de cada um tinha anticorpos IgM + IgA e IgG + IgA. Nenhum dos casos foi positivo para os três anticorpos. A análise do coeficiente de correlação de Pearson revelou uma excelente correlação entre o PCR e os resultados sorológicos (r = 0,921, p < 0,001). A maioria (17, 40,5%) dos pacientes positivos para M. pneumoniae está na faixa etária de 41-50 anos, seguida por 10 (23,8%) pacientes na faixa etária de 61-70 anos e 2 (4,8%) pacientes tinham > 70 anos de idade. Nosso estudo relatou uma prevalência incomumente maior de M. pneumoniae por testes sorológicos (36,1%) e PCR (43,3%). Embora a hipótese da associação de M. pneumoniae e DAC ainda não tenha sido comprovada, a prevalência incomumente alta de M. pneumoniae em pacientes com DAC indica uma associação, se não, no desenvolvimento de aterosclerose.

Prevalence and association of mycoplasma infection in the development of coronary artery disease / Prevalência e associação de infecção por micoplasma no desenvolvimento de doença arterial coronariana

Coronary heart disease (CHD) has been associated with significant morbidity and mortality worldwide. Although remain controversial, several studies have demonstrated the association of M. pneumoniae infections with atherosclerosis. We evaluated the possible association of mycoplasma infections in patients diagnosed with atherosclerosis by ELISA and PCR methods. Atherosclerotic tissue samples and blood samples were collected for the detection of mycoplasma antibodies (IgA) by ELISA from the 97 patients with coronary artery disease (CAD). M. pneumoniae specific IgA, IgG and IgM were measured by using the Anti-M. pneumoniae IgA/IgG/IgM ELISA. Detection of M. pneumoniae targeting the P1 adhesion gene was performed by PCR Acute infection of M. pneumoniae was diagnosed in 43.3% (42) of patients by PCR. The M. pneumoniae specific antibodies were detected in 36.1% (35) of patients. Twenty-five (25.8%) cases had IgG antibodies, 15 (15.5%) cases had IgM antibodies, 3 (3.1%) cases had IgA antibodies, 10 (10.3%) cases had both IgM + IgG antibodies and 1 (1%) case of each had IgM + IgA and IgG + IgA antibodies. None of the cases was positive for all three antibodies. A Pearson correlation coefficient analysis revealed an excellent correlation between the PCR and the serological results (r=0.921, p<0.001). A majority (17, 40.5%) of the M. pneumoniae positive patients are within the 41-50 years of age group, followed by 10 (23.8%) patients in the age group of 61-70 years and 2 (4.8%) patients were >70 years of age. Our study reported an unusually higher prevalence of M. pneumoniae by serological tests (36.1%) and PCR (43.3%). Although the hypothesis of the association of M. pneumoniae and CAD is yet to be proven, the unusually high prevalence of M. pneumoniae in CAD patients indicates an association, if not, in the development of atherosclerosis.(AU)

A doença coronariana (DCC) tem sido associada a significativa morbidade e mortalidade em todo o mundo. Embora ainda sejam controversos, vários estudos têm demonstrado a associação de infecções por M. pneumoniae com aterosclerose. Avaliamos a possível associação de infecções por micoplasma em pacientes com diagnóstico de aterosclerose pelos métodos ELISA e PCR. Amostras de tecido aterosclerótico e amostras de sangue foram coletadas para a detecção de anticorpos contra micoplasma (IgA) por ELISA de 97 pacientes com doença arterial coronariana (DAC). IgA, IgG e IgM específicos para M. pneumoniae foram medidos usando o Anti-M. pneumoniae IgA / IgG / IgM ELISA. A detecção de M. pneumoniae visando o gene de adesão P1 foi realizada por PCR. A infecção aguda por M. pneumoniae foi diagnosticada em 43,3% (42) dos pacientes pela PCR. Os anticorpos específicos para M. pneumoniae foram detectados em 36,1% (35) dos pacientes. Vinte e cinco (25,8%) casos tinham anticorpos IgG, 15 (15,5%) casos tinham anticorpos IgM, 3 (3,1%) casos tinham anticorpos IgA, 10 (10,3%) casos tinham anticorpos IgM + IgG e 1 (1%) caso de cada um tinha anticorpos IgM + IgA e IgG + IgA. Nenhum dos casos foi positivo para os três anticorpos. A análise do coeficiente de correlação de Pearson revelou uma excelente correlação entre o PCR e os resultados sorológicos (r = 0,921, p < 0,001). A maioria (17, 40,5%) dos pacientes positivos para M. pneumoniae está na faixa etária de 41-50 anos, seguida por 10 (23,8%) pacientes na faixa etária de 61-70 anos e 2 (4,8%) pacientes tinham > 70 anos de idade. Nosso estudo relatou uma prevalência incomumente maior de M. pneumoniae por testes sorológicos (36,1%) e PCR (43,3%). Embora a hipótese da associação de M. pneumoniae e DAC ainda não tenha sido comprovada, a prevalência incomumente alta de M. pneumoniae em pacientes com DAC indica uma associação, se não, no desenvolvimento de aterosclerose.(AU)

Reactivity against Sarcocystis neurona and Sarcocystis falcatula-like in horses from Southeastern and Midwestern Brazil / Reatividade contra Sarcocystis neurona e Sarcocystis falcatula-like em equinos das regiões Sudeste e Centro-Oeste do Brasil

Equine protozoal myeloencephalitis (EPM) is a neurological disease caused by Sarcocystis neurona. Immunofluorescence antibody tests (IFATs) have been widely used to identify exposure of horses to S. neurona in Brazil. Here we used IFAT to search for IgG antibodies against Sarcocystis falcatula-like (Dal-CG23) and S. neurona (SN138) in sera from 342 horses sampled in Campo Grande, Mato Grosso do Sul state (Midwestern), and São Paulo, São Paulo state (Southeastern), Brazil. The 1:25 cutoff value was chosen to maximize sensitivity of the test. IgG antibodies against S. neurona were detected in 239 horses (69.88%), whereas IgG antibodies against S. falcatula-like were detected in 177 horses (51.75%). Sera from 132 horses (38.59%) reacted against both isolates. Absence of reactivity was evidenced in 58/342 horses (16.95%). The lower cutoff used, and the presence of opossums infected with S. falcatula-like and Sarcocystis spp. in the regions where the horses were sampled, might justify the high seroprevalence observed here. Owing to the similarity among antigens targeted in immunoassays, reports on S. neurona-seropositive horses in Brazil may also derive from the exposure of horses to other Sarcocystis species. The role of other Sarcocystis species in causing neurological diseases in horses in Brazil remains unclear.(AU)

Mieloencefalite protozoária equina (MPE) é uma doença neurológica causada por Sarcocystis neurona. Reação de imunofluorescência indireta (RIFI) tem sido utilizada para identificar a exposição de equinos à S. neurona no Brasil. Neste estudo, a RIFI foi utilizada para avaliar a presença de anticorpos IgG anti-Sarcocystis falcatula-like (Dal-CG23) e anti-S. neurona (SN138) no soro de 342 equinos de Campo Grande, Mato Grosso do Sul (Centro-oeste) e São Paulo, São Paulo (Sudeste), Brasil. O ponto de corte de 1:25 foi escolhido para maximizar a sensibilidade. Anticorpos IgG anti-S. neurona foram detectados em 239 cavalos (69,88%), enquanto anticorpos IgG anti-S. falcatula-like foram detectados em 177 cavalos (51,75%). O soro de 132 animais (38,59%) reagiu contra ambos os isolados. A ausência de reatividade foi evidenciada em 58/342 animais (16,95%). O baixo ponto de corte e a presença de gambás infectados com S. falcatula-like e Sarcocystis spp., nas regiões onde os equinos foram amostrados podem justificar a alta soroprevalência aqui observada. Devido à similaridade entre antígenos de superfície detectados nos imunoensaios, relatos de soropositividade contra S. neurona no Brasil podem resultar da exposição dos equinos a outras espécies de Sarcocystis. O papel de outras espécies de Sarcocystis como causa de doença neurológica em equinos no Brasil permanece incerto.(AU)

Viability of Toxoplasma gondii in cattle semen cryopreserved with different concentrations of cryoprotectant / Viabilidade do Toxoplasma gondii em sêmen de bovino criopreservado em diferentes concentrações de crioprotetores

ABSTRACT: Toxoplasma gondii can be eliminated in bovine semen. Cryopreserved semen is often used due to the fact that artificial insemination in dairy and beef cattle provides benefits in terms of production. However, little is known regarding the viability and infectivity of T. gondii tachyzoites in cryopreserved bovine semen. In the present study, cattle semen negative for T. gondii were contaminated with 1 x 106 tachyzoites (RH strain) and cryopreserved with and without different cryoprotectants, such as DMSO (concentrations of 2.5%, 5.0%, 7.5%, 8.0% and 10.0%) and glycerol (2.25%, 2.5%, 3.0%, 5.0%, 7.5% and 10.0%), followed by freezing in liquid nitrogen (-196°C). After 24 hours, the samples were thawed and inoculated in 10 mice per cryoprotectant concentration. The mice were evaluated for clinical signs of toxoplasmosis (rough coat, diarrhea, hypoactivity and sudden death) as well as serum titers of IgM and IgG and the presence of tachyzoites in the peritoneal lavage. The results revealed that T. gondii remained infective in all samples. Clinical signs of toxoplasmosis were observed in the mice beginning with the 6th day post-inoculation (DPI) and 100% lethality was found between the 7th and 9th DPI. Viable tachyzoites were recovered from peritoneal exudate of dead mice (except for the control group), with higher mean of tachyzoite counts in the intraperitoneal lavage for 5% DMSO (±3.32 x 106), 8% DMSO (±3.53 x 106), 3% glycerol (±4.75 x 106), 7.5% glycerol (±6.26 x 106) and the absence of cryoprotectant (±3.11 x 106). Seroconversion occurred in the treated groups, with titers of IgG from 1:16 to 1:128 and IgM from 1:16 to 1:512. T. gondii viability and infectivity were maintained in cattle semen during 24 hours of cryopreservation at -196°C with and without cryoprotectant. However, further studies are necessary to determine whether cryopreserved semen contributes to the spread of toxoplasmosis through artificial insemination.

RESUMO: Sabe-se que Toxoplasma gondii pode ser eliminado no sêmen bovino. A inseminação artificial em bovinos leiteiros e de corte proporcionou avanços e benefícios nas produções e para isso o sêmen criopreservado é frequentemente utilizado. No entanto, pouco se sabe sobre a viabilidade e infectividade dos taquizoítos de T. gondii em sêmen bovino criopreservado. Para isso o sêmen bovino, negativo para T. gondii, foi contaminado com 1x106 taquizoítos (cepa RH), criopreservados com ou sem diferentes crioprotetores como DMSO (2.5%, 5.0%, 7.5%, 8.0% e 10.0%) e Glicerol (2.25%, 2.5%, 3.0%, 5.0%, 7.5% e 10.0%) e congelados em nitrogênio líquido (-196°C). Após 24 horas, essas amostras foram descongeladas e inoculadas em 10 camundongos por diluente de concentração de crioprotetor. Os camundongos foram avaliados quanto a sinais clínicos de toxoplasmose (pele áspera, diarreia, hipoatividade e morte súbita), títulos séricos de IgM e IgG e presença de taquizoítos no lavado peritoneal. Os resultados mostraram que T. gondii se manteve infectante em todas as amostras, inclusive naquelas sem crioprotetor. Sinais clínicos de toxoplasmose foram observados nos camundongos a partir do 6º dia pós-inoculação (DPI) e 100% de letalidade foi verificada entre o 7º ao 9º DPI. Nos camundongos mortos, exceto no grupo controle, taquizoítos viáveis foram recuperados do exsudato peritoneal, com maior média de taquizoítos quantificados na lavagem intraperitoneal para DMSO a 5% (±3.32x106), 8% (±3.53x106) e glicerol 3% (±4.75x106), 7,5% (±6.26x106) e livre de crioprotetor (±3.11x106). A soroconversão ocorreu nos grupos tratados com títulos de IgG (1:16 a 1:128) e IgM (1:16 a 1:512). A viabilidade e infectividade do T. gondii no sêmen bovino durante as 24 horas de criopreservação a -196°C foram mantidas com ou sem crioprotetor. No entanto, mais estudos são necessários para verificar se o sêmen criopreservado contribui para a disseminação da toxoplasmose na inseminação artificial.

Toxoplasma gondii in lactating animals: potential risk to milk consuming population in Khyber Pakhtunkhwa / Toxoplasma gondii em animais lactantes: risco potencial para população consumidora de leite em Khyber Pakhtunkhwa

Toxoplasma gondii is an intracellular zoonotic protozoan parasite usually infects human and animal worldwide. This study aimed to analyze the sero-prevalence of T. gondii in blood of lactating animals and human living in close proximity and also to detect Toxoplasma DNA in unpasteurized milk of the studied animals. A total of 233 blood and milk samples were collected from lactating animals, and 735 blood samples were taken from humans in District Upper Dir, Khyber Pakhtunkhwa, Pakistan. The blood samples were analyzed through ELISA while the milk samples were analyzed by PCR for the presence of T. gondii DNA. A standard questionnaire was introduced to collect the data from the participants. In animals, the reported sero-prevalence was 32.18% for IgM, 17.16% for IgG, and 6.4% for both IgM and IgG. The reported positivity for T. gondii DNA in milk was 14.44%, 34.8%, 20%, and 26% in sheep, goats, cows, and buffaloes, respectively. In the human blood samples, 9.8% were found positive for IgM and 11.2% for IgG while none of the samples was found positive for both IgM and IgG. Overall sero-prevalence reported in females was significantly higher than the male (p< 0.0001) were the significant risk factors associated with T. gondii infections in animals. In conclusion, T. gondii infection is prevalent in lactating animals and humans using their raw milk in the study area. It is suggested that raw milk should be considered as a vehicle for the transmission of T. gondii to humans. Proper pasteurization of milk is very useful in limiting the transmission of infection. Awareness and control programs should be implemented to prevent the infection.

Toxoplasma gondii é um protozoário parasita intracelular zoonótico que geralmente infecta humanos e animais em todo o mundo. Este estudo teve como objetivo analisar a soroprevalência de T. gondii no sangue de animais lactantes e humanos que vivem em proximidade, além de detectar o DNA de Toxoplasma no leite não pasteurizado dos indivíduos estudados. Um total de 233 amostras de sangue e leite foram coletadas de animais lactantes e 735 amostras de sangue foram coletadas de humanos no Distrito Upper Dir Khyber Pakhtunkhwa, no Paquistão. As amostras de sangue foram analisadas pelo método ELISA enquanto as amostras de leite foram analisadas por PCR para a presença de DNA de T. gondii. Um questionário padrão foi introduzido para coletar os dados dos participantes. Em animais, a soroprevalência relatada foi de 32,18% para IgM, 17,16% para IgG e 6,4% para IgM e IgG. A positividade relatada para DNA de T. gondii encontrada no leite foi de 14,44%, 34,8%, 20% e 26% em ovelhas, cabras, vacas e búfalas, respectivamente. Nas amostras de sangue humano, 9,8% foram consideradas positivas para IgM e 11,2% para IgG, enquanto nenhuma das amostras foi considerada positiva para IgM e IgG. A soroprevalência geral relatada em mulheres foi significativamente maior do que em homens (p < 0,05). Neste estudo, contato com gatos (p < 0,0001), hábitos alimentares (p < 0,0001), fonte de água para beber (p < 0,0001) e más condições de higiene (p < 0,0001) foram os fatores de risco significativos associados a infecções por T. gondii em animais. Em conclusão, a infecção por T. gondii é prevalecente em animais lactantes e humanos que utilizam leite cru, isto é, não-pasteurizado, na área de estudo. Sugere-se que o leite não-pasteurizado seja considerado um veículo de transmissão do T. gondii para humanos. A pasteurização adequada do leite é muito útil para limitar a transmissão de infecções. Programas de conscientização e controle devem ser implementados para prevenir a infecção.

Polineuropatia motora em cão adulto / Motor polyneuropathy in an adult dog

Background: Nonambulatory flaccid tetraparesis can be the result of diseases of the peripheral nervous system and it is characterized by generalized lower motor neuron (LMN) signs, as weakness, tetraparesis/tetraplegia, decreased muscle tone and reflexes. The term polyneuropathy is used for dysfunction of multiple peripheral nerves. In Brazil, there are several etiologies for polyneuropathy in dogs, such as acute idiopathic polyradiculoneuritis, botulism and myasthenia gravis. Toxoplasma gondii is an uncommon cause of LMN diseases in dogs. The aim of this report was to describe a case of flaccid tetraplegia toxoplasmosis in an adult dog with a Toxoplasma gondii serology with a markedly elevated IgG titer of 1:4096. Case: A 4-year-old intact mongrel male dog, weighing 19.6 kg, was referred to the Veterinary Medical Teaching Hospital of the Universidade Estadual de Londrina (UEL) with a 5-day history of weakness that progressed to tetraparesis. Physical examination revealed no significant changes other than the dull and unkempt coat. Neurologic examination revealed severe tetraparesis that was worse in the pelvic limbs, with decreased muscle tone in all four limbs. Postural reactions and the interdigital reflex were absent in all four limbs, as was the patellar reflex, but pain perception was present. There were no clinical signs of dysfunction on examination of the cranial nerves. Laboratory tests were performed, and creatine kinase was elevated (819 U/L). Blood was drawn to look for antibodies to Toxoplasma gondii and Neospora caninum class IgG using the indirect immunofluorescence technique. The antibody titer for Toxoplasma gondii (IgG) was 1:4096. A chest radiograph was performed to look for megaesophagus, and a pulmonary pattern suggestive of mild diffuse pneumonia was observed. Treatment was performed with sulfamethoxazole and trimethoprim, and the dog's condition improved slightly. Discussion: Based on lower motor neuron findings, the neurologic lesion was localized in the nerve roots, peripheral nerves, neuromuscular junctions, or muscles. The most important diseases in the list of differential diagnoses were immune-mediated or infectious polyradiculoneuritis (toxoplasmosis, neosporosis), myasthenia gravis, toxic polyneuropathy (botulism, chronic organophosphate poisoning), and paraneoplastic polyneuropathy. Among these differential diagnoses, polyradiculoneuritis is one of the most common. It is an idiopathic inflammatory disease. Exposure to raccoon saliva (in the U.S.), vaccination, or infection have been proposed as precipitating causes, but the triggers of this disease remain unknown. Serology for neosporosis was negative, while IgG titers for toxoplasmosis were 1:4096. In a previous study, dogs with acute polyradiculoneuritis were more likely to have T. gondii IgG serum antibody titers than dogs without neurologic signs. Infection with the protozoa T. gondii and N. caninum can cause intense polyradiculoneuritis in dogs accompanied by myositis, especially in puppies. One treatment trial was based on the administration of sulfonamide-trimethoprim with pyrimethamine, whose efficacy in the treatment of toxoplasmosis in dogs has also been reported in the literature. Neurologic deficits improved slightly, and there is a possibility that certain signs may not disappear completely because of the permanent damage caused by inflammation of the nervous system, as observed in the present case. The case had the limitation that it was not possible to perform other laboratory tests to demonstrate histopathologically the presence of Toxoplasma gondii organisms in muscles or nerves. Recovery of normal function is less likely in protozoan polyradiculoneuritis than in noninfectious polyradiculoneuritis. Thus, in the present case, the main suspicion was polyradiculoneuritis secondary to toxoplasmosis. Although it is a rare condition, it is important to consider toxoplasmosis in dogs with LMN-type tetraparesis or tetraplegia.

Effect of Dietary Supplementation with Rosemary Complex Powder on the Growth Performance of Native Chickens

This study investigated the effects of dietary supplementation with rosemary complex powder on the growth performance of native chickens. In total, 180 one day-old native chicks were assigned to one of three dietary groups (60 birds each). The control group (Group A) received the basal diet. In addition to the basal diet, the two experimental diets (Groups B and C) were supplemented with 0.2% and 0.4% rosemary complex powder, which contained rosemary leaves, sweet basil, pineapple sage and sweet lavender. Over 19 weeks, feed intake was recorded to determine the average daily gain and feed conversion ratio. In weeks 10 and 15, blood samples were taken for serum antibody titer analysis. At the end of the experiment, serum immunoglobulin A (IgA) and serum immunoglobulin G (IgG) concentrations were examined. No differences were observed among the groups in terms of the starting weight, weight in week 19, average daily feed intake, average daily gain, or average feed conversion ratio. The addition of rosemary complex powder improved total weight gain by 1.52%. Serum IgA and serum IgG concentrations were significantly lower in the experimental groups in comparison to the control group (p<0.05). Villus height, villus width, crypt depth, and villus height/crypt depth ratio were significantly higher in group B than in group A (p<0.05). In summary, rosemary complex powder improved the intestinal absorption capacity of chickens and significantly reduced their immunoglobulin concentrations.(AU)

Effect of Sunflower Kernel Peptides Produced by Dual-Degradation on the Growth Performance, Nutrient Digestibility, and Health Status of Broilers

The purpose of this study was to investigate the effect of sunflower kernel peptides produced by enzymatic digestion, fermentation, or both on the growth performance, nutrient digestibility, and health status of broilers. Four diets contained 20% of sunflower kernel meal as its raw form (CON) or degraded by protease (ESM), Bacillus pumilus (FSM), or both (DSM). A total of 480 yellow broilers at one day old were randomly distributed to 4 groups with 6 replicates of 20 chicks each. The feeding trial lasted for 63 d. Results showed that peptide content was increased (p<0.001) from 3.97% (CON) to 32.5% (ESM), 24.2% (FSM), and 39.1% (DSM). The three sunflower peptide groups improved (p≤0.001) feed intake and body weight gain. The peptide groups increased (p≤0.015) ileal apparent digestibility of dry matter, energy, crude protein, and amino acids (methionine, lysine, tryptophan, and threonine). Furthermore, the peptide groups improved (p≤0.029) the health status by increasing serum immunoglobulins (IgA, IgG) and glutathione peroxidase. Additionally, among the peptide groups, DSM showed more pronounced effects (p<0.05) on these parameters than ESM or FSM. It is concluded that dual-degradation by enzymolysis and fermentation has a better improvement in the nutrition and application of sunflower kernel meal in broilers.(AU)

Passive immunity in foals born from mares vaccinated against Theileira equi and Streptococcus equi subspecies equi / Imunidade passiva em potros provenientes de éguas vacinadas contra Theileira equi e Streptococcus equi subspécie equi

The aims of this study were: 1) determine total specific IgG and subisotypes in serum and colostrum of pregnant mares vaccinated against Theileria equi and Streptococcus equi subspecies equi; 2) determine total specific IgG and subisotypes in foals born from these mares. In mares, the highest total serum IgG value for T. equi was at 335 days of gestation declining 30 days postpartum, while for S. equi was at 328 days of gestation remaining high up to 30 days postpartum. Transfer of passive immunity against both antigens was observed with specific IgG values in colostrum and foals' serum proportional to mares' values. The most detected specific IgG subisotypes were IgG3/5 and IgG4/7 for both antigens. Foals born from mares immunized with T. equi kept maternal IgG values until 2 months of age, while those born from mares immunized with S. equi kept maternal IgG values until 3-4 months of age. These results suggest that foals should be vaccinated after this period.

Os objetivos deste estudo foram: 1) determinar IgG total específica e seus subisotipos no soro e colostro de éguas vacinadas contra Theileria equi e Streptococcus equi subspécie equi; 2) determinar IgG total específica e seus subisotipos em potros provenientes dessas éguas. Em éguas vacinadas contra T. equi, o maior nível sérico de IgG total específico ocorreu aos 335 dias de gestação, decaindo 30 dias pós parto, enquanto nas vacinadas contra S. equi, ocorreu aos 328 dias de gestação e manteve-se pelo mesmo período. A avaliação de IgG total específica no colostro de éguas vacinadas demonstrou níveis de IgG proporcionais aos títulos do soro materno. Os isotipos de IgG mais detectados foram IgG3/5 e IgG4/7 para ambos antígenos avaliados. Potros provenientes de éguas vacinadas com antígeno de T. equi mantiveram os níveis de IgG específica até dois meses de idade, enquanto potros provenientes de éguas vacinadas com antígeno de S. equi mantiveram por três a quatro meses, sugerindo que esse seja o período ideal para início do esquema vacinal em potros.

Acute and chronic immunomodulatory response mechanisms against Toxocara canis larvae infection in mice / Mecanismos da resposta imunomoduladora aguda e crônica contra a infecção por larvas de Toxocara canis em camundongos

The objective of this work was to evaluate the early and late immunological modulation of an experimental infection of T. canis larvae in mice. Mice were infected with 100 infective larvae and euthanized at different period: 24, 48 hours post infection (HPI), 15- and 30 days post infection (DPI). The humoral response was evaluated by indirect ELISA. Quantitative RT-PCR (qPCR) was used to quantify the mRNA transcription of cytokines IL4, IL10, IL12 and Ym1 in the early and late infection periods. Infection with T. canis was able to generate specific total IgG at 15- and 30- DPI. Analyzing the IgG isotype revealed a significant differentiation for IgG1 compared with IgG2a, IgG2b and IgG3, characterizing a Th-2 response. Evaluating the gene transcription at the early phase of infection, higher transcription levels of IL10, IL4 and Ym1 and a downregulation of IL12 were observed. By the late phase, increased transcription levels of IL4, Ym1 and IL12 were observed, and downregulation of IL-10 transcription was observed. The data obtained suggest that during experimental infection with T. canis, the participation of the IL4, IL10, IL12 cytokines and Ym1 can play an important role in T. canis immunomodulation.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a modulação imunológica precoce e tardia da infecção experimental de larvas de T. canis em camundongos. Estes foram infectados com 100 larvas infectantes e eutanasiados em diferentes períodos: 24 e 48 horas pós infecção (HPI), 15 e 30 dias após a infecção (DPI). A resposta humoral foi avaliada por ELISA indireto. RT-PCR quantitativo (qPCR) foi usado para quantificar a transcrição de mRNA das citocinas IL4, IL10, IL12 e Ym1 nos períodos de infecção precoce e tardia. A infecção por T. canis foi capaz de gerar IgG total específico aos 15 e 30 DPI. A análise do isótipo IgG revelou uma diferenciação significativa para IgG1 em comparação com IgG2a, IgG2b e IgG3, caracterizando uma resposta Th-2. Avaliando-se a transcrição gênica na fase inicial da infecção, foram observados níveis mais elevados de transcrição de IL10, IL4 e Ym1 e a regulação negativa de IL12. Na fase tardia, foram observados níveis aumentados de transcrição de IL4, Ym1 e IL12, e foi observada regulação negativa da transcrição de IL-10. Os dados obtidos sugerem, que durante a infecção experimental com T. canis, a participação das citocinas IL4, IL10, IL12 e Ym1 podem desempenhar um papel importante na imunomodulação de T. canis.(AU)

Research for anti - Toxoplasma gondii antibodies in free-living ducks (Cairina moschata) from Rio de Janeiro, RJ, Brazil / Pesquisa de anticorpos anti - Toxoplasma gondii em patos (Cairina moschata) em vida livre do Rio de Janeiro, RJ, Brasil

Toxoplasmosis is a zoonosis determined by the protozoan Toxoplasma gondii with wide geographic distribution, which affects homeothermic animals, with felids being their definitive hosts and other mammals and birds being their intermediate hosts. Regarding the Latin American bird species Cairina moschata, there are few reports in Brazil of the exposure of these animals to this protozoan. Based on the above, this study aimed to report for the first time the exposure of C. moschata to infection by this parasite in Rio de Janeiro, Brazil, determining the serological frequency of anti-T. gondii antibodies in birds of this species. Sixty-seven specimens of C. moschata were captured in the vicinity of the Rio de Janeiro Zoo, and these animals at the time of capture were sorted by gender and type of feather. Blood samples from these animals were obtained by venipuncture to obtain the serum. The serum samples were subjected to IFAT for anti-T. gondii IgG. In general, the frequency of positive results was 58.21% (n=39), with a statistically significant association (p<0.05) between the animals with adult plumage and seropositivity. The exposure of ducks to T. gondii in the vicinity of the Zoo may indicate contamination of this area with protozoan oocysts.

Toxoplasmose é uma zoonose determinada pelo protozoário Toxoplasma gondii de ampla distribuição geográfica, que acomete animais homeotérmicos, sendo os felídeos os seus hospedeiros definitivos, e outros mamíferos e aves os seus hospedeiros intermediários. Em relação à espécie de ave latino-americana Cairina moschata, há poucos relatos no Brasil da exposição desses animais a esse protozoário. Mediante o exposto, este estudo teve como objetivo relatar pela primeira vez a exposição de C. moschata à infecção por esse parasito no Rio de Janeiro, Brasil, determinando a frequência sorológica de anticorpos anti-T. gondii em aves dessa espécie. Foram capturados, nos arredores do Zoológico do Rio de Janeiro, 67 espécimes de C. moschata, sendo esses animais, no momento da captura, triados pelo gênero e pelo tipo de pena. Amostras de sangue desses animais foram obtidas por venopunção para obtenção do soro. As amostras de soro foram submetidas à RIFI para pesquisa de anticorpos IgG anti-T. gondii. De forma geral, a frequência de positividade evidenciada foi de 58,21% (n=39), sendo observada associação estatística significativa (P<0,05) entre animais com plumagem de adultos e soropositividade. A exposição dos patos a T. gondii nos arredores do zoológico pode indicar a contaminação dessa área com oocistos do protozoário.

Can intramammary infections change immunoglobulins and acute phase proteins of colostrum and transition milk in dairy goats? / A infecção intramamária pode alterar imunoglobulinas e proteínas de fase aguda do colostro e do leite de transição de cabras leiteiras?

Proteiongram analysis is useful for the early diagnosis of intramammary infections during the period of colostrogenesis. This study aimed to evaluate the profile of total proteins, immunoglobulins, lactoferrin, and gamma-glutamyl transferase (GGT) in the colostrum of dairy goats with intramammary infections. Animals were divided in groups: GI (n=12) of goats without mammary gland infections, and GII (n=8) of goats with mammary gland infections. Intramammary infections were diagnosed using microbiological isolations and somatic cell counts Cs). Total protein was evaluated in the samples using SDS-PAGE shortly after parturition, and 24 and 48 hours after that event. Non-aureus Staphylococcus (NAS) were detected all isolates. At 48 h, GII had high IgG levels and a SCC of 1660.25 x 103/mL. Levels of total protein were high in this group at 24 and 48 h. Albumin levels were high in goats with mastitis at 24 h. Overall, the IgG, lactoferrin, and albumin levels differed between animals with and without intramammary infections at M0. GGT activity was not influenced by the intramammary infection. The results of this study reinforce the importance of the proteinogram as an auxiliary tool in the diagnosis of mastitis in dairy goats.

O proteinograma do colostro/leite pode ser útil para diagnóstico precoce de infecções intramamárias, assim como para a avaliação da intensidade da resposta inflamatória. Este estudo teve como objetivo avaliar o perfil de proteínas, imunoglobulinas, lactoferrina e gamaglutamiltransferase no colostro de cabras leiteiras portadoras s de infecções intramamárias. Os animais foram distribuídos em dois grupos, GI (n 12), composto por cabras sem isolamento microbiológico das glândulas mamárias, e GII (n 8), composto por cabras com resultados positivos na cultura do leite de pelo menos uma das glândulas mamárias. O diagnóstico de infecção intramamária foi realizado logo após o parto, por meio de isolamento microbiológico e de contagem de células somáticas (CCS). Os níveis de proteína total, imunoglobulina A (IgA), imunoglobulina (G) (IgG), lactoferrina, albumina e atividade da gamaglutamiltransferase (GGT) foram avaliados em amostras de colostro/leite de transição, usando-se SDS-PAGE logo após o parto bem como às 24 e às 48 horas após esse evento. Staphylococcus não aureus (NAS) foram encontrados em todos os isolamentos. A concentração de IgG de 186 foi superior no GII apenas às 48h, ao mesmo tempo em que o CCS foi de 1660,25 x 10/mL. No entanto, a proteína total foi maior neste grupo às 24 e às 48h. A albumina foi maior nas cabras com mastite às 24h, e a lactoferrina no momento 0h (M0) e às 48h. Em geral, os valores de IgG, lactoferrina e albumina diferiram entre os animais com e sem infecções intramamárias no M0. A atividade da gamaglutamiltransferase não foi influenciada pela infecção intramamária. Os resultados deste estudo reforçam a importância do proteinograma como uma ferramenta auxiliar no diagnóstico da mastite em cabras leiteiras.

Detection of antigens in paraffin sections of worms and snails infected by Angiostrongylus cantonensis by immunofluorescence reaction / Detecção de antígenos em cortes parafinados de vermes e caramujos infectados por Angiostrongylus cantonensis pela reação de imunofluorescência

The Indirect Immunofluorescence Assay (IFA) was used to identify stage-specific antigenic structures in paraffin sections of female larvae and worms and snails tissues, infected with third stage larvae of Angiostrongylus cantonensis. Sera from eosinophilic meningitis cases were used to assess reactivity. Non-reactive sera from patients with other parasitic diseases and from individuals without other etiologies were used as controls for cross-reactivity. Larvae and worms showed high reactivity to IgG antibodies. IgM antibodies reacted with low intensity only to larvae. Fluorescent reactions were observed in the cuticles and internal structures on worms sections, with a marked reaction in the uterus content. In the snail tissues, the larvae were found exclusively inside the granulomas, with fluorescent markings in the cuticles of the larvae and inside the granulomatous tissues. This fluorescent pattern suggests the presence of excretory/secretory antigens distributed throughout the granulomas. Expressive cross-reactivity occurred in sera from patients with other parasitic diseases, especially strongyloidiasis. The use of IFA applied to paraffin sections to identify structures with antigenic potential and the study of new serological markers, can contribute to the improvement of the laboratory diagnosis of eosinophilic meningitis. (AU)

A Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) foi utilizada para localizar antígenos em estruturas estágio-específicas em cortes parafinados de vermes fêmeas e em tecidos de caramujos do Gênero Biomphalaria infectados com larvas de terceiro estágio de Angiostrongylus cantonensis. Soros de casos confirmados de meningite eosinfílica foram usados para avaliação da reatividade. Soros não reagentes de casos suspeitos; de pacientes com outras parasitoses e de indivíduos sem outras etiologias foram utilizados como controle de reatividade cruzada. Anticorpos da classe IgG foram reativos para antígenos presentes nos dois estágios e, anticorpos IgM somente para o estágio larvário. Nos cortes de vermes, as marcações fluorescentes foram assinaladas nas cutículas e estruturas internas, com acentuada marcação para os conteúdos uterinos. Nos tecidos dos caramujos as larvas foram encontradas exclusivamente no interior dos granulomas, com marcações fluorescentes nas cutículas das larvas e no interior dos tecidos granulomatosos. O padrão de fluorescência no granuloma sugere a marcação de antígenos excretores/secretores. Reatividade cruzada mais expressiva ocorreu com anticorpos presentes em soros de pacientes com outras parasitoses, com destaque para estrongiloidíase. A RIFI em cortes parafinados abre novas perspectivas para identificação de antígenos e de marcadores sorológicos, que possam ser aplicados no aprimoramento do diagnóstico laboratorial da meningite eosinofílica. (AU)

Comparison between immunofluorescence and immunohistochemistry for Listeria monocytogenes detection in formalin-fixed paraffin-embedded tissues / Comparação entre imunofluorescência e imuno-histoquímica para detecção de Listeria monocytogenes em tecidos fixados e parafinizados

Listeria monocytogenes is a bacterium that infect humans and animals and causes a zoonotic disease characterized by encephalitis, septicemia or abortion. In addition, listeriosis leads to significant economic losses due to animal death and sacrifice. This research compared the technique of immunofluorescence (IF) and immunohistochemistry (IHC) for the diagnosis of L. monocytogenes in formalin-fixed and paraffin-embedded (FFPE) tissues. A total of 30 tissue blocks from 15 animals with history and/or lesions compatible with listeriosis were selected. For both IHC and IF, the same diluted (1:200) polyclonal primary antibody was used against L. monocytogenes serotypes 1 and 4. For IHC, a polymer secondary antibody conjugated to peroxidase (HRP) was used. For IF, samples were incubated with a fluorescein-labeled anti-rabbit IgG secondary antibody. Each sample was classified according to the presence and percentage of immunolabeling area. From 30 samples, 10 were positive at least for one technique, whereas eight samples were positive for both IHC and IF with similar score. There was strong immunolabeling in tissue samples from bovines experimentally infected with L. monocytogenes ATCC 7644, as well as in nervous tissues from naturally infected ruminants. Additionally, IF did not show any difference in sensitivity when compared to IHC. Using processed biological materials for IF, instead of fresh tissues, is a quite unique technique, since there are few protocols described. Therefore, this study demonstrated that both techniques are efficient to detect L. monocytogenes in FFPE tissues.

Listeria monocytogenes é uma bactéria que infecta humanos e animais, podendo causar uma doença zoonótica caracterizada por encefalite, septicemia e abortos. Além disso, a listeriose resulta em perdas econômicas significativas pela morte e sacrifício de animais. O objetivo deste trabalho foi comparar a técnica de imunofluorescência (IF) e imuno-histoquímica (IHQ) para detecção de L. monocytogenes em tecidos fixados e parafinizados. Foram selecionados 30 blocos de tecidos de 15 animais com histórico e/ou lesões compatíveis com listeriose. Para ambas as técnicas, foi utilizado o mesmo anticorpo primário policlonal diluído (1:200) para detecção de L. monocytogenes sorotipos 1 e 4. Para a IHQ foi utilizado anticorpo secundário em polímero acoplado a peroxidase (HRP). Para a IF, as amostras foram incubadas com anticorpo secundário anti-IgG de coelho marcado com fluoresceína. Cada amostra foi classificada quanto à presença de imunomarcação e porcentagem de área positiva. Das 30 amostras, 10 foram positivas em pelo menos uma das técnicas, sendo oito amostras positivas em ambas IHQ e IF com o mesmo escore. Houve forte imunomarcação tanto em amostras de bovino experimentalmente infectado com L. monocytogenes ATCC 7644, como em amostras de tecido nervoso de ruminantes naturalmente infectados. Além disso, a IF não apresentou diferença na sensibilidade quando comparada com a IHQ. O uso de materiais biológicos processados para IF, ao invés de tecidos frescos, é algo inovador, uma vez que existem poucos protocolos descritos. Portanto, este estudo demonstrou que as duas técnicas foram eficientes para detectar L. monocytogenes em tecidos fixados em formol e parafinizados.

Dung avoidance behavior in Crioula Lanada lambs naturally infected with gastrointestinal nematodes in a rotational pasture system / Comportamento de afastamento do bolo fecal em cordeiros Crioula Lanada naturalmente infectados com nematoides gastrintestinais em sistema de pastoreio rotacionado

Abstract This study aimed to evaluate foraging distance (FD) from the dung, parasitological and physiological factors in 18 Crioula Lanada lambs naturally infected by nematodes with three infection levels (IL) in a Voisin Grazing System. In the pre-experimental phase animal feces collection, deworming, observer training, animal adaptation and dung demarcation were carried out; in the experimental phase, grazing distance, feces, pasture and blood sampling. An initial exploratory analysis was carried out (Kruskal-Wallis test). Fixed predictors were selected with a cumulative logit regression model; an ordinal logistic regression mixed model identified influencing factors of ordinal responses for (i) FD, (ii) infective larvae quantity (L3). Animals approached the dung when the radiation or temperature were more intense (P < 0.05). Paddock entry/exit, IgG and L3 influenced FD over time (P < 0.05). L3, in turn, was influenced by IL, FEC and corpuscular volume (CV). In the High IL group, FD varied between 60-100 cm. Greater L3 and FEC were found in the High and Low IL from the 4th week (P < 0.05). Naturally infected Crioula Lanada lambs increased the distance from the dung, which was not related to IL but to the dynamics of solar radiation and parasitological and immunological factors.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a distância de forrageamento do bolo fecal (DF), fatores parasitológicos e fisiológicos em 18 cordeiros Crioula Lanada, naturalmente infectados por nematoides com três níveis de infecção (NI) em sistema Pastoreio Racional Voisin (PRV). Na fase pré-experimental, houve coleta de fezes dos animais, vermifugação, treinamento de observadores, adaptação dos animais e demarcação do bolo fecal; na fase experimental, distância, fezes, pastagem e sangue. Um modelo de regressão "logit" cumulativa selecionou preditores fixos; um modelo misto de regressão logística ordinal identificou fatores influenciadores das respostas ordinais para (i) DF (ii) quantidade de larva infectante (L3). Os cordeiros se aproximaram do bolo fecal quando a radiação ou temperatura foram mais intensas (P < 0,05). A entrada e a saída dos piquetes, a ingestão de L3 e IgG influenciaram DF (P < 0,05). L3 foi influenciada por NI, OPG e volume corpuscular. O grupo NI Alta variou a distância entre 60-100 cm. Maior L3 e a FEC foram encontrados nos grupos NI Alta e Baixa a partir da 4ª semana (P < 0,05). Cordeiros Crioula Lanada, naturalmente infectados, aumentaram a DF, sem relação com nível, de infecção, mas com a dinâmica da radiação solar e dos fatores parasitológicos e imunológicos.

Cyclosporine A increases the intensity of Toxocara canis infection in swiss mice / Ciclosporina A aumenta a intensidade da infecção por Toxocara canis em camundongos suíços

Toxocariasis is a zoonotic disease of worldwide distribution. The connection between parasitic diseases and conditions that depress the immune system, such as the use of immunosuppressive drugs, has been studied. The purpose of this study was to evaluate the effect of Cyclosporine A (CsA) on the intensity of infection, humoral response and gene transcription of interleukins IL-4, IL-10 and IL-12 in mice experimentally infected with Toxocara canis. To this end, mice were divided into two groups treated with CsA (G1: 10 mg/Kg and G2: 50 mg/kg), the G3 and G4 group received PBS. After the last administration of the drug or PBS (orally every 48 hours for 15 days), groups G1, G2 and G3 were inoculated with 1200 eggs of T. canis. Was collected blood samples on days zero, 15 and 30 days post-inoculation (PI), for ELISA test and the mice were euthanized 30 days PI. The organs and striated muscle tissue were collected for the recovery of larvae. The splenocytes were analyzed by RT-PCR. The intensity of infection in the mice treated with 50 mg/kg of CsA was 65.5% higher than in the control group (p=0.001). An analysis of the kinetics of anti-Toxocara antibody revealed that the groups treated with CsA showed significantly higher mean levels of antibodies on day 15 PI. The transcription of the three tested interleukins showed no statistical difference between G2 and G3 (control). It was concluded that the immunosuppression triggered by CsA (50 mg/Kg) favored the establishment of a larger number of T. canis larvae without, however, altering immunoglobulin production and IL-4, IL-10 and IL-12 transcription on day 30 PI.

A toxocaríase é uma zoonose de distribuição mundial. A conexão entre doenças parasitárias e condições que deprimem o sistema imunológico, como o uso de drogas imunossupressoras, tem sido estudada. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da Ciclosporina A (CsA) na intensidade da infecção, resposta humoral e transcrição gênica das interleucinas IL-4, IL-10 e IL-12 em camundongos experimentalmente infectados com Toxocara canis. Para tanto, os camundongos foram divididos em dois grupos tratados com CsA (G1: 10 mg/Kg e G2: 50 mg/kg), os grupos G3 e G4 receberam PBS. Após a última administração da droga ou PBS (via oral a cada 48 horas por 15 dias), os grupos G1, G2 e G3 foram inoculados com 1200 ovos de T. canis. Foram coletadas amostras de sangue nos dias zero, 15 e 30 dias pós-inoculação (PI), para teste de ELISA e os camundongos foram eutanasiados 30 dias PI. Os órgãos e tecido muscular estriado foram coletados para a recuperação das larvas. Os esplenócitos foram analisados ​​por RT-PCR. A intensidade da infecção nos camundongos tratados com 50 mg/kg de CsA foi 65,5% maior do que no grupo controle (p=0,001). Uma análise da cinética do anticorpo anti-Toxocara revelou que os grupos tratados com CsA apresentaram níveis médios de anticorpos significativamente maiores no dia 15 PI. A transcrição das três interleucinas testadas não apresentou diferença estatística entre G2 e G3 (controle). Concluiu-se que a imunossupressão desencadeada pela CsA (50 mg/Kg) favoreceu o estabelecimento de um maior número de larvas de T. canis sem, no entanto, alterar a produção de imunoglobulinas e a transcrição de IL-4, IL-10 e IL-12 no dia 30 PI.

Effects of Vitamin A and K3 on Immune Function and Intestinal Antioxidant Capacity of Aged Laying Hens

This study was conducted to investigate effects of vitamin A (VA) and vitamin K3 (VK3) on immune function and intestinal antioxidant capacity of aged laying hens. In a 3 × 3 factorial arrangement, the diets of 1080 Roman Pink laying hens (87 weeks old) was formulated with deficient, adequate and excess VA and VK3, including 0, 7000 and 14000 IU/kg VA and 0, 2.0 and 4.0 mg/kg VK3 for 8 weeks. Interactive effects between VA and VK3 were observed that VA and VK3 decreased the splenetic mRNA expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and tumour necrosis factor α (TNF-α), but increased the plasma immunoglobulin G (IgG) content and jejunal mRNA expression of nuclear factor-like 2 (Nrf2). Hens fed adequate or excess VA had higher spleen index, mRNA expression of interleukin-10 (IL-10) in spleen, sIgA content, catalase (CAT), glutathione peroxidase and total dismutase (T-SOD) activity, and mRNA expression of polymeric immunoglobulin receptor (pIgR) in jejunum and lower mRNA expression of IL-1ß in jejunum and iNOS, TNF-α in spleen. Furthermore, adequate or excess VK3 significantly increased plasma IgG content, the CAT, T-SOD and total antioxidant capacity activities, up-regulated the mRNA expression of pIgR, Nrf2, SOD1 and CAT in jejunum and down-regulated the mRNA expression of iNOS and TNF-α in spleen.(AU)