Isolamento, caracterização e diferenciação de células-tronco mesenquimais do líquido amniótico equino obtido em diferentes idades gestacionais / Isolation, characterization and differentiation of mesenchymal stem cells derived from equine amniotic fluid obtained from different gestacional ages

O interesse nas pesquisas com células-tronco derivadas de anexos fetais de diversas espécies cresceu exponencialmente nas últimas décadas em virtude de serem fontes de células-tronco adultas com potencial de diferenciação em diversas linhagens celulares que apresentam pouca ou nenhuma imunogenicidade, apresentando-se assim como alternativa de grande importância para a formação de bancos celulares. Apesar do crescente interesse, os estudos para espécie equina ainda são escassos. O objetivo deste trabalho foi isolar, caracterizar e diferenciar células-tronco mesenquimais (CTMs) derivadas do líquido amniótico equino obtidas do terço inicial, médio e final da gestação (LA-CTMs), comparando suas características. Foram colhidas 23 amostras de líquido amniótico as quais foram submetidas às análises morfológica, imunocitoquímica, imunofenotípica por citometria de fluxo e às diferenciações osteogênica, adipogênica e condrogênica in vitro. Todas as amostras demonstraram adesão ao plástico e morfologia fibroblastóide. No ensaio imunocitoquímico as células de todos os grupos foram imunomarcadas para CD44, PCNA e vimentina com ausência de marcação para citoqueratina e Oct-4. Na citometria de fluxo observou-se a expressão de CD44 e CD90 e ausência de expressão de CD34, sendo que os marcadores CD44 e CD90 mostraram padrão de expressão decrescente em relação ao desenvolvimento gestacional. As amostras obtidas de todas as fases da gestação foram capazes de diferenciação nas linhagens osteogênica, condrogênica e adipogênica. Portanto, as células obtidas do líquido amniótico apresentaram características morfológicas, imunofenotípicas e potencial de diferenciação típicos das CTMs, demonstrando que a colheita pode ser realizada em qualquer fase gestacional. No entanto, mais pesquisas devem ser realizadas principalmente quanto à expressão de marcadores de pluripotencialidade (como o Oct-4) e ao seu potencial de diferenciação em linhagens extra mesodermais já relatados na literatura.(AU)

The interest in stem cells derived from fetal annexes of many species has exponentially increased during the last decades, because they are adult stem cell sources with potential of differentiation in several cell lineages; which present little or no immunogenicity and are an alternative with great importance for storage cell banks. Despite the rising interest, studies for the equine species are still rare. The aim of this study was to isolate, characterize and differentiate mesenchymal stem cells derived from equine amniotic fluid obtained from initial, middle and late third of gestation (AF-MSCs), and compare their results. Twenty three samples from equine amniotic fluid were evaluated by morphological, immunocytochemical and immunophenotypical (Flow cytometer) assays and osteogenic, adipogenic and chondrogenic in vitro differentiation. All samples demonstrated plastic adhesion and fibroblastoid morphology. The immunocytochemical assay demonstrated cells from all the studied groups were positive for CD44, PCNA and vimentin and negative for cytokeratin and Oct-4. Flow cytometry demonstrated expression of CD44 and CD90 and no expression of CD34, where CD44 and CD90 markers presented decreasing pattern of expression in relation to the gestational development. All samples collected from all gestational phases were capable to differentiate in osteogenic, chondrogenic and adipogenic lineages. Thus, cells obtained from equine amniotic fluid presented morphological and immunophenotypical characteristics and potential of differentiation typical of MSCs showing that the collection can be performed at any stage of pregnancy. However, more studies should be performed about the expression of pluripotent markers as Oct-4 and the differentiation potential for extra mesodermal lineages prior demonstrated in the literature.(AU)

GLIAL CELLS ANEUPLOID FROM CULTURE OF EQUINE NEONATE SPINAL CORD. / ANEUPLOIDIA EM CÉLULAS DA GLIA PROVENIENTES DA CULTURA DE MEDULA ESPINHAL DE EQUINO NEONATO. / ANEUPLOIDÍA EN CÉLULAS DE LA GLIA PROVENIENTES DEL CULTIVO DE LA MÉDULA ESPINAL DE EQUINO NE

ABSTRACT The aim of this communication is to report the occurrence of glia cells aneuploid obtained from the culture of spinal cord of a newborn horse. Cells were maintained in culture until the sixth passage characterized by imunocytochemistry technique prior to cytogenetic analysis. Karyotype analysis showed loss or gain of one or more chromosomes in glial cells analyzed, when compared with the normal karyotype for equine specie. The occurrence of aneuploidy may be considered a normal finding in young neural cells, as well as a signal of several diseases. Thus, others cytogenetic studies should be performed to elucidate if the high occurrence of aneuploid glial cells in equine neonate nervous system is a physiological or pathological finding. Keywords: nervous system, cell culture, cytogenetic, kariotype, aneuploidy, horse. ANEUPLOIDIA EM CÉLULAS DA GLIA PROVENIENTES DA CULTURA DE MEDULA ESPINHAL DE EQUINO NEONATO RESUMO O objetivo desta comunicação é relatar a ocorrência de aneuploidia em células da glia provenientes do cultivo da medula espinhal de um equino neonato. As células foram mantidas em cultivo até a sexta passagem e caracterizadas pela técnica de imunocitoquimica previamente à análise citogenética. A análise do cariótipo revelou perda ou ganho de um ou mais cromossomos nas células gliais analisadas, quando comparado ao cariótipo normal para espécie eq

Glial cells aneuploid from culture of equine neonate spinal cord. / aneuploidia em células da glia provenientes da cultura de medula espinhal de equino neonato. / aneuploidía en células de la glia provenientes del cultivo de la médula espinal de equino ne

ABSTRACT The aim of this communication is to report the occurrence of glia cells aneuploid obtained from the culture of spinal cord of a newborn horse. Cells were maintained in culture until the sixth passage characterized by imunocytochemistry technique prior to cytogenetic analysis. Karyotype analysis showed loss or gain of one or more chromosomes in glial cells analyzed, when compared with the normal karyotype for equine specie. The occurrence of aneuploidy may be considered a normal finding in young neural cells, as well as a signal of several diseases. Thus, others cytogenetic studies should be performed to elucidate if the high occurrence of aneuploid glial cells in equine neonate nervous system is a physiological or pathological finding. Keywords: nervous system, cell culture, cytogenetic, kariotype, aneuploidy, horse. ANEUPLOIDIA EM CÉLULAS DA GLIA PROVENIENTES DA CULTURA DE MEDULA ESPINHAL DE EQUINO NEONATO RESUMO O objetivo desta comunicação é relatar a ocorrência de aneuploidia em células da glia provenientes do cultivo da medula espinhal de um equino neonato. As células foram mantidas em cultivo até a sexta passagem e caracterizadas pela técnica de imunocitoquimica previamente à análise citogenética. A análise do cariótipo revelou perda ou ganho de um ou mais cromossomos nas células gliais analisadas, quando comparado ao cariótipo normal para espécie eq

Aneuploidía en células de la glia provenientes del cultivo de la médula espinal de equino neonato / Glial cells aneuploid from culture of equine neonate spinal cord / Neuploidia em células da glia provenientes da cultura de medula espinhal de equino neonato

El objetivo de este trabajo es reportar la presencia de aneuploidía en células de la glía provenientes del cultivo de médula espinal de un neonato equino. Las células fueron mantenidas en cultivo hasta el sexto pasaje y caracterizadas por la técnica de inmunocitoquímica previamente a la realización de la citogenética. El análisis del cariotipo reveló pérdida o ganancia de uno o más cromosomas en las células gliales analizadas, en comparación con el cariotipo normal. La presencia de aneuploidía puede ser considerada un hallazgo normal en células jóvenes, bien como una señal de enfermedad severa. De esta forma, otros estudios citogenéticos deben ser realizados para esclarecer si la presencia elevada de aneuploidía en células de la glía del sistema nervioso de neonatos equinos constituye un hallazgo fisiológico o patológico.

The aim of this communication is to report the occurrence of glia cells aneuploid obtained from the culture of spinal cord of a newborn horse. Cells were maintained in culture until the sixth passage characterized by imunocytochemistry technique prior to cytogenetic analysis. Karyotype analysis showed loss or gain of one or more chromosomes in glial cells analyzed, when compared with the normal karyotype for equine specie. The occurrence of aneuploidy may be considered a normal finding in young neural cells, as well as a signal of several diseases. Thus, others cytogenetic studies should be performed to elucidate if the high occurrence of aneuploid glial cells in equine neonate nervous system is a physiological or pathological finding.

O objetivo desta comunicação é relatar a ocorrência de aneuploidia em células da glia provenientes do cultivo da medula espinhal de um equino neonato. As células foram mantidas em cultivo até a sexta passagem e caracterizadas pela técnica de imunocitoquimica previamente à análise citogenética. A análise do cariótipo revelou perda ou ganho de um ou mais cromossomos nas células gliais analisadas, quando comparado ao cariótipo normal para espécie equina. A ocorrência de aneuploidia pode ser considerada um achado normal em células jovens, bem como um sinal de enfermidade severa. Desta forma, outros estudos citogenéticos devem ser realizados para elucidar se a elevada ocorrência de aneulpoidia observadas em células da glia no sistema nervoso de neonato equino é achado fisiológico ou patológico.