Cinética e integridade de espermatozoides caprinos criopreservados utilizando Red Cushion® como estratégia de proteção espermática durante a centrifugação do sêmen / Kinetics and integrity of cryopreserved goat sperm using Red Cushion® as a strategy to sperm protection during semen centrifugation

Objetivou-se avaliar o efeito do gradiente de Iodixanol (Red Cushion®, RC) como método deproteção espermática durante a centrifugação (CE) do sêmen caprino destinado à criopreservação. Foramrealizadas colheitas de sêmen de cinco reprodutores caprinos da raça Anglo Nubiana (N= cincoejaculados/bode). Os ejaculados foram divididos em três grupos experimentais: GC (Controle); G1 (CEutilizado 1ml de RC) e G2 (foi utilizado 0,5mL de RC, misturado ao pellet espermático após a CE). Asamostras foram centrifugadas, diluídas, envasadas e criopreservadas. A cinética espermática foi avaliada porsistema computadorizado de análise (CASA) após a descongelação e pós-teste de termorresistência (TTR), efoi avaliada a integridade de membrana plasmática e acrossomal (MPAI, %). Não foram observadasdiferenças para a motilidade total (p=0,1849) avaliada pós-descongelação (GC=45,1%, G1=51,86% eG2=55,28%) ou pós-TTR (GC=10,32%, G1=11,44% e G2=13,16%), bem como para nenhum outroparâmetro cinético avaliado. Também não foram encontradas diferenças para a MPAI (GC=43,70% ±16,60; G1=36,68 ± 17,40; G2=41,72 ± 14,76; p=0,2523). Conclui-se que a utilização de Red Cushion®não promove nenhum benefício à manutenção da cinética e integridade de espermatozoides caprinossubmetidos a centrifugação previamente ao processo de criopreservação do sêmen.(AU)

The aim of this study was to evaluate the efficacy of iodixanol gradient centrifugation (RedCushion®, RC) as a method of protection of goat semen submitted to centrifugation previously tocryopreservation process. Semen were collected from five Anglo Nubian goats (n = five ejaculates/goat).The ejaculates were divided into three experimental groups: GC (Control; conventional centrifugation);G1 (centrifugation using 1ml RC) and G2 (centrifugation using 0.5 mL RC, mixed to sperm pellet beforethe cryopreservation). Samples were centrifuged (CE) at 600xg for 10 minutes, diluted, packed andcryopreserved. Sperm kinetics were evaluated using a computer assisted semen analysis (CASA) afterthawing and after thermoresistance test (TTR), and the integrity of the plasma and acrosomal membranewas evaluated (MPAI, %). No differences were observed for total motility (P =0.1849) assessed afterthawing (GC=45.1%, G1=51.86% and G2=55.28%) or post-TTR (GC=10.32%, G1=11.44% andG2=13.16%), as well as for the other kinetic parameters analyzed. Furthermore, no differences for MPAI(CG =43.70% ± 16.60; G1=36.68 ± 17.40; G2=41.72 ± 14.76; P=0.2523) were found comparing thedifferent groups. In conclusion, Red Cushion® was not able to improve the kinetics and integrity of thegoat semen submitted to the cryopreservation process.(AU)

Cinética e integridade de espermatozoides caprinos criopreservados utilizando Red Cushion® como estratégia de proteção espermática durante a centrifugação do sêmen / Kinetics and integrity of cryopreserved goat sperm using Red Cushion® as a strategy to sperm protection during semen centrifugation

Objetivou-se avaliar o efeito do gradiente de Iodixanol (Red Cushion®, RC) como método deproteção espermática durante a centrifugação (CE) do sêmen caprino destinado à criopreservação. Foramrealizadas colheitas de sêmen de cinco reprodutores caprinos da raça Anglo Nubiana (N= cincoejaculados/bode). Os ejaculados foram divididos em três grupos experimentais: GC (Controle); G1 (CEutilizado 1ml de RC) e G2 (foi utilizado 0,5mL de RC, misturado ao pellet espermático após a CE). Asamostras foram centrifugadas, diluídas, envasadas e criopreservadas. A cinética espermática foi avaliada porsistema computadorizado de análise (CASA) após a descongelação e pós-teste de termorresistência (TTR), efoi avaliada a integridade de membrana plasmática e acrossomal (MPAI, %). Não foram observadasdiferenças para a motilidade total (p=0,1849) avaliada pós-descongelação (GC=45,1%, G1=51,86% eG2=55,28%) ou pós-TTR (GC=10,32%, G1=11,44% e G2=13,16%), bem como para nenhum outroparâmetro cinético avaliado. Também não foram encontradas diferenças para a MPAI (GC=43,70% ±16,60; G1=36,68 ± 17,40; G2=41,72 ± 14,76; p=0,2523). Conclui-se que a utilização de Red Cushion®não promove nenhum benefício à manutenção da cinética e integridade de espermatozoides caprinossubmetidos a centrifugação previamente ao processo de criopreservação do sêmen.

The aim of this study was to evaluate the efficacy of iodixanol gradient centrifugation (RedCushion®, RC) as a method of protection of goat semen submitted to centrifugation previously tocryopreservation process. Semen were collected from five Anglo Nubian goats (n = five ejaculates/goat).The ejaculates were divided into three experimental groups: GC (Control; conventional centrifugation);G1 (centrifugation using 1ml RC) and G2 (centrifugation using 0.5 mL RC, mixed to sperm pellet beforethe cryopreservation). Samples were centrifuged (CE) at 600xg for 10 minutes, diluted, packed andcryopreserved. Sperm kinetics were evaluated using a computer assisted semen analysis (CASA) afterthawing and after thermoresistance test (TTR), and the integrity of the plasma and acrosomal membranewas evaluated (MPAI, %). No differences were observed for total motility (P =0.1849) assessed afterthawing (GC=45.1%, G1=51.86% and G2=55.28%) or post-TTR (GC=10.32%, G1=11.44% andG2=13.16%), as well as for the other kinetic parameters analyzed. Furthermore, no differences for MPAI(CG =43.70% ± 16.60; G1=36.68 ± 17.40; G2=41.72 ± 14.76; P=0.2523) were found comparing thedifferent groups. In conclusion, Red Cushion® was not able to improve the kinetics and integrity of thegoat semen submitted to the cryopreservation process.

Ultrassonografia modo B e Doppler na avaliação renal de cães submetidos à tomografia computadorizada após administração intravenosa de diferentes meios de contraste iodado

ABSTRACT: Contrast-induced nephropathy (CIN) is an acute disease, secondary to intravascular administration of iodinated contrast media (ICM). The most important mechanisms of this nephropathy are intrarenal prolonged vasoconstriction, medular hypoxia, and ischemia associated with renal tubular damage due to contrast cytotoxicity. Owing to the limited information available in veterinary literature regarding these mechanisms this study aims to compare the renal effects of intravenous administration of two nonionic ICM of different osmolarities in groups of dogs with risk factors for CIN development, by using a B-mode, color, power- and pulsed-wave Doppler ultrasonography, and other laboratory tests, in order to indirectly estimate the nephrotoxic potential of each contrast. The following two groups were established according to the nonionic ICM used: the GIH group [11 dogs administered iohexol (low osmolarity)] and the GID group [seven dogs administered iodixanol (iso-osmolarity)]. Both the groups were administered the same dose (600mgI/kg/IV). The following renal aspects were evaluated before administration of ICM (baseline) and after 1h30min, 24h, and 48h: renal morphometry (length and volume), renal morphology, cortical echogenicity, renal perfusion, and intrarenal vascular resistance (resistive and pulsatility indices); in addition, urinalysis was performed, and urinary gamma-glutamyl transferase:creatinine ratio (GGT:C), urinary protein:creatinine ratio (UPC), and serum creatinine were also measured. Both groups showed similar characteristics with respect to the length, volume, UPC ratio, urinalysis, and serum creatinine levels. No similarity was observed with respect to the pulsatility index (PI) in both the groups and there were no significant differences between baseline and 1h30min, 24h and 48h time points. With respect to the IR and urinary GGT:C, both groups showed no similarity, and significant increases were observed in the resistive index (RI) and urinary GGT:C only in the GIH group, 1h30min after contrast administration. In conclusion, RI can be used to monitor intrarenal hemodynamics, and along with the urinary GGT:C, revealed that iohexol had higher nephrotoxic potential than iodixanol. Thus, iodixanol is considered a favorable option for dogs with risk factors for CIN development.

RESUMO: A nefropatia induzida por contraste (NIC) é uma doença de caráter agudo, secundária à administração intravascular de meios de contraste iodado (MCI). Dentre os mecanismos fisiopatológicos desta enfermidade destacam-se a vasoconstrição intrarrenal prolongada, consequente redução da perfusão renal, hipóxia e isquemia medulares, associada ao dano tubular renal devido à citotoxicidade do contraste. Frente à existência de poucas informações relacionadas a estes mecanismos na literatura médico-veterinária, objetivaram-se comparar os efeitos renais da administração intravenosa de MCI não iônicos de diferentes osmolaridades, em grupos de cães com fatores de risco para o desenvolvimento da NIC, por meio das avaliações ultrassonográficas modo B, Doppler colorido, de amplitude e pulsado, pareada aos exames laboratoriais, a fim de estimar indiretamente o potencial nefrotóxico de cada contraste. Constituíram-se dois grupos de acordo com o MCI utilizado: o grupo GIH [11 cães receberam iohexol (baixa osmolaridade)] e o grupo GID [sete cães receberam iodixanol (isosmolar)]. Administrou-se a dose de 600mgI/kg/IV em ambos. Avaliaram-se os seguintes aspectos renais antes da administração do MCI (momento basal) e após 1h30min, 24 horas e 48 horas: morfometria (comprimento e volume), morfologia, ecogenicidade cortical e perfusão renais e resistência vascular intrarrenal (índices hemodinâmicos de resistividade e pulsatilidade). Realizou-se ainda exame de urina e se mensuraram as razões gama-glutamil transferase:creatinina (GGT:C) e proteína:creatinina (RPC) urinárias e a concentração sérica de creatinina. Os grupos apresentaram comportamentos similares para comprimento, volume, RPC, exame de urina e creatinina sérica. Em relação ao índice de pulsatilidade (IP), os grupos apresentaram comportamentos não similares, mas sem diferenças significantes entre o momento basal e os demais. Para o índice de resistividade (IR) e a razão GGT:C urinária, os grupos revelaram comportamentos não similares e se constataram aumentos significantes do IR e da razão GGT:C urinária no período de 1h30min após a administração do contraste, somente para o grupo que recebeu iohexol. Concluiu-se que o IR pode ser utilizado para monitorar a hemodinâmica intrarrenal, visto que junto com a razão GGT:C urinária, demonstrou a existência de maior potencial nefrotóxico do iohexol, quando comparado ao iodixanol. Dessa forma, considera-se o uso do iodixanol, opção favorável para cães com fatores de risco para o desenvolvimento da NIC.

Ultrassonografia modo B e Doppler na avaliação renal de cães submetidos à tomografia computadorizada após administração intravenosa de diferentes meios de contraste iodado / B-mode and Doppler ultrasonography in the renal evaluation of dogs undergoing computed tomography after intravenous administration of different iodinated contrast media

A nefropatia induzida por contraste (NIC) é uma doença de caráter agudo, secundária à administração intravascular de meios de contraste iodado (MCI). Dentre os mecanismos fisiopatológicos desta enfermidade destacam-se a vasoconstrição intrarrenal prolongada, consequente redução da perfusão renal, hipóxia e isquemia medulares, associada ao dano tubular renal devido à citotoxicidade do contraste. Frente à existência de poucas informações relacionadas a estes mecanismos na literatura médico-veterinária, objetivaram-se comparar os efeitos renais da administração intravenosa de MCI não iônicos de diferentes osmolaridades, em grupos de cães com fatores de risco para o desenvolvimento da NIC, por meio das avaliações ultrassonográficas modo B, Doppler colorido, de amplitude e pulsado, pareada aos exames laboratoriais, a fim de estimar indiretamente o potencial nefrotóxico de cada contraste. Constituíram-se dois grupos de acordo com o MCI utilizado: o grupo GIH [11 cães receberam iohexol (baixa osmolaridade)] e o grupo GID [sete cães receberam iodixanol (isosmolar)]. Administrou-se a dose de 600mgI/kg/IV em ambos. Avaliaram-se os seguintes aspectos renais antes da administração do MCI (momento basal) e após 1h30min, 24 horas e 48 horas: morfometria (comprimento e volume), morfologia, ecogenicidade cortical e perfusão renais e resistência vascular intrarrenal (índices hemodinâmicos de resistividade e pulsatilidade). Realizou-se ainda exame de urina e se mensuraram as razões gama-glutamil transferase:creatinina (GGT:C) e proteína:creatinina (RPC) urinárias e a concentração sérica de creatinina. Os grupos apresentaram comportamentos similares para comprimento, volume, RPC, exame de urina e creatinina sérica. Em relação ao índice de pulsatilidade (IP), os grupos apresentaram comportamentos não similares, mas sem diferenças significantes entre o momento basal e os demais. Para o índice de resistividade (IR) e a razão GGT:C urinária, os grupos revelaram comportamentos não similares e se constataram aumentos significantes do IR e da razão GGT:C urinária no período de 1h30min após a administração do contraste, somente para o grupo que recebeu iohexol. Concluiu-se que o IR pode ser utilizado para monitorar a hemodinâmica intrarrenal, visto que junto com a razão GGT:C urinária, demonstrou a existência de maior potencial nefrotóxico do iohexol, quando comparado ao iodixanol. Dessa forma, considera-se o uso do iodixanol, opção favorável para cães com fatores de risco para o desenvolvimento da NIC.(AU)

Contrast-induced nephropathy (CIN) is an acute disease, secondary to intravascular administration of iodinated contrast media (ICM). The most important mechanisms of this nephropathy are intrarenal prolonged vasoconstriction, medular hypoxia, and ischemia associated with renal tubular damage due to contrast cytotoxicity. Owing to the limited information available in veterinary literature regarding these mechanisms this study aims to compare the renal effects of intravenous administration of two nonionic ICM of different osmolarities in groups of dogs with risk factors for CIN development, by using a B-mode, color, power- and pulsed-wave Doppler ultrasonography, and other laboratory tests, in order to indirectly estimate the nephrotoxic potential of each contrast. The following two groups were established according to the nonionic ICM used: the GIH group [11 dogs administered iohexol (low osmolarity)] and the GID group [seven dogs administered iodixanol (iso-osmolarity)]. Both the groups were administered the same dose (600mgI/kg/IV). The following renal aspects were evaluated before administration of ICM (baseline) and after 1h30min, 24h, and 48h: renal morphometry (length and volume), renal morphology, cortical echogenicity, renal perfusion, and intrarenal vascular resistance (resistive and pulsatility indices); in addition, urinalysis was performed, and urinary gamma-glutamyl transferase:creatinine ratio (GGT:C), urinary protein:creatinine ratio (UPC), and serum creatinine were also measured. Both groups showed similar characteristics with respect to the length, volume, UPC ratio, urinalysis, and serum creatinine levels. No similarity was observed with respect to the pulsatility index (PI) in both the groups and there were no significant differences between baseline and 1h30min, 24h and 48h time points. With respect to the IR and urinary GGT:C, both groups showed no similarity, and significant increases were observed in the resistive index (RI) and urinary GGT:C only in the GIH group, 1h30min after contrast administration. In conclusion, RI can be used to monitor intrarenal hemodynamics, and along with the urinary GGT:C, revealed that iohexol had higher nephrotoxic potential than iodixanol. Thus, iodixanol is considered a favorable option for dogs with risk factors for CIN development.(AU)

Ultrassonografia modo B e Doppler na avaliação renal de cães submetidos à tomografia computadorizada após administração intravenosa de diferentes meios de contraste iodado / B-mode and Doppler ultrasonography in the renal evaluation of dogs undergoing computed tomography after intravenous administration of different iodinated contrast media

A nefropatia induzida por contraste (NIC) é uma doença de caráter agudo, secundária à administração intravascular de meios de contraste iodado (MCI). Dentre os mecanismos fisiopatológicos desta enfermidade destacam-se a vasoconstrição intrarrenal prolongada, consequente redução da perfusão renal, hipóxia e isquemia medulares, associada ao dano tubular renal devido à citotoxicidade do contraste. Frente à existência de poucas informações relacionadas a estes mecanismos na literatura médico-veterinária, objetivaram-se comparar os efeitos renais da administração intravenosa de MCI não iônicos de diferentes osmolaridades, em grupos de cães com fatores de risco para o desenvolvimento da NIC, por meio das avaliações ultrassonográficas modo B, Doppler colorido, de amplitude e pulsado, pareada aos exames laboratoriais, a fim de estimar indiretamente o potencial nefrotóxico de cada contraste. Constituíram-se dois grupos de acordo com o MCI utilizado: o grupo GIH [11 cães receberam iohexol (baixa osmolaridade)] e o grupo GID [sete cães receberam iodixanol (isosmolar)]. Administrou-se a dose de 600mgI/kg/IV em ambos. Avaliaram-se os seguintes aspectos renais antes da administração do MCI (momento basal) e após 1h30min, 24 horas e 48 horas: morfometria (comprimento e volume), morfologia, ecogenicidade cortical e perfusão renais e resistência vascular intrarrenal (índices hemodinâmicos de resistividade e pulsatilidade). Realizou-se ainda exame de urina e se mensuraram as razões gama-glutamil transferase:creatinina (GGT:C) e proteína:creatinina (RPC) urinárias e a concentração sérica de creatinina. Os grupos apresentaram comportamentos similares para comprimento, volume, RPC, exame de urina e creatinina sérica. Em relação ao índice de pulsatilidade (IP), os grupos apresentaram comportamentos não similares, mas sem diferenças significantes entre o momento basal e os demais. Para o índice de resistividade (IR) e a razão GGT:C urinária, os grupos revelaram comportamentos não similares e se constataram aumentos significantes do IR e da razão GGT:C urinária no período de 1h30min após a administração do contraste, somente para o grupo que recebeu iohexol. Concluiu-se que o IR pode ser utilizado para monitorar a hemodinâmica intrarrenal, visto que junto com a razão GGT:C urinária, demonstrou a existência de maior potencial nefrotóxico do iohexol, quando comparado ao iodixanol. Dessa forma, considera-se o uso do iodixanol, opção favorável para cães com fatores de risco para o desenvolvimento da NIC.(AU)

Contrast-induced nephropathy (CIN) is an acute disease, secondary to intravascular administration of iodinated contrast media (ICM). The most important mechanisms of this nephropathy are intrarenal prolonged vasoconstriction, medular hypoxia, and ischemia associated with renal tubular damage due to contrast cytotoxicity. Owing to the limited information available in veterinary literature regarding these mechanisms this study aims to compare the renal effects of intravenous administration of two nonionic ICM of different osmolarities in groups of dogs with risk factors for CIN development, by using a B-mode, color, power- and pulsed-wave Doppler ultrasonography, and other laboratory tests, in order to indirectly estimate the nephrotoxic potential of each contrast. The following two groups were established according to the nonionic ICM used: the GIH group [11 dogs administered iohexol (low osmolarity)] and the GID group [seven dogs administered iodixanol (iso-osmolarity)]. Both the groups were administered the same dose (600mgI/kg/IV). The following renal aspects were evaluated before administration of ICM (baseline) and after 1h30min, 24h, and 48h: renal morphometry (length and volume), renal morphology, cortical echogenicity, renal perfusion, and intrarenal vascular resistance (resistive and pulsatility indices); in addition, urinalysis was performed, and urinary gamma-glutamyl transferase:creatinine ratio (GGT:C), urinary protein:creatinine ratio (UPC), and serum creatinine were also measured. Both groups showed similar characteristics with respect to the length, volume, UPC ratio, urinalysis, and serum creatinine levels. No similarity was observed with respect to the pulsatility index (PI) in both the groups and there were no significant differences between baseline and 1h30min, 24h and 48h time points. With respect to the IR and urinary GGT:C, both groups showed no similarity, and significant increases were observed in the resistive index (RI) and urinary GGT:C only in the GIH group, 1h30min after contrast administration. In conclusion, RI can be used to monitor intrarenal hemodynamics, and along with the urinary GGT:C, revealed that iohexol had higher nephrotoxic potential than iodixanol. Thus, iodixanol is considered a favorable option for dogs with risk factors for CIN development.(AU)

Efeito do iodixanol como crioprotetor sobre a cinética e características morfofuncionais de espermatozoides bovinos

O presente estudo teve como objetivo verificar os efeitos da suplementação do diluente de criopreservação de sêmen bovino com iodixanol, tanto como aditivo quanto como crioprotetor. Em ambos os experimentos foram utilizados três touros da raça Nelore de fertilidade comprovada, com idade entre 3 e 8 anos, mantidos em regime regular de colheita de sêmen na Central de Inseminação Artificial Tairana (Presidente Prudente, São Paulo, Brasil). Os ejaculados foram obtidos através de vagina artificial, duas vezes por semana, por três semanas consecutivas. As amostras de sêmen fresco foram analisadas individualmente quanto à motilidade, vigor, morfologia e concentração espermática. Os ejaculados dos três touros foram misturados em frações proporcionais para compor o pool de sêmen e, assim, eliminar a variabilidade individual dos animais. No experimento I, o pool de sêmen foi dividido em quatro partes iguais e essas diluídas em meio de congelamento comercial (com glicerol) suplementado com solução de iodixanol a 60% nas concentrações de 0 (grupo controle, CO), 2,5% (I-2.5), 5% (I-5) ou 10% (I-10) do volume total do diluente, resultando em uma concentração final de 0, 1,5%, 3% e 6% de iodixanol, respectivamente. Em seguida as palhetas foram refrigeradas e congeladas. Os resultados das análises pós-descongelamento realizadas no CASA e utilizando sondas fluorescentes por citometria de fluxo mostraram que a suplementação com iodixanol preservou a motilidade e integridade das membranas espermáticas durante a criopreservação, bem como protegeu os espermatozoides contra a ação de espécies reativas de oxigênio, especialmente no grupo I-10. No experimento II, o pool de sêmen foi dividido igualmente em três partes e diluídas em meio de congelamento comercial (preparado sem glicerol) suplementado com diferentes crioprotetores: 7% de glicerol (grupo controle, CO), associação de 3,5% de glicerol com 3,5% de iodixanol (GI) e 7% de iodixanol (I7) do volume final do diluente, resultando na concentração final de 5,95% de glicerol, 2,95% de glicerol e 2,1% de iodixanol e 4,2% de iodixanol, respectivamente. À análise pós-descongelamento foi possível observar que a associação de glicerol com iodixanol resultou em maior motilidade e longevidade espermática, integridade de membrana e menor peroxidação lipídica, bem como o iodixanol como único crioprotetor não foi eficiente em proteger o espermatozoide durante a criopreservação.

This study aimed to evaluate the effects of iodixanol supplementation in bovine freezing extender both as additive and as cryoprotectant. Three Nellore bulls (3- 8 age years) with proven fertility were used in both experiments and keep in regular semen collection at Tairana Artificial Insemination Center (Presidente Prudente, São Paulo, Brazil). Ejaculates were collected by using artificial vagina, twice a week, for three consecutive weeks. The semen samples were individually evaluated for sperm motility, vigor, morphology and concentration, and pooled in proportional fractions to avoid individual variations. In experiment I, the pooled sample was divided in four equal fractions and diluted in commercial bovine freezing extender supplemented with a commercial iodixanol 60% solution in the following concentrations: 0% (control, CO), 2.5% (I-2.5; 1.5% iodixanol), 5.0% (I-5; 3% iodixanol) or 10% (I-10; 6% iodixanol) of the final volume of diluent. Thereafter, the straws were cooled and frozen. Post- thawed analysis results of CASA and fluorescent probes in flow cytometry showed that iodixanol supplementation preserved the motility and integrity of sperm membranes during cryopreservation and protected the spermatozoa from ROS attack, especially in I-10. In experiment II, the pooled semen sample was divided in three equal fractions and diluted in commercial bovine freezing extender (manufactured without glycerol) added with different cryoprotectants: 7% glycerol (control group, CO), association of 3.5% glycerol and 3.5% iodixanol (GI) or 7% iodixanol (I7; iodixanol 60%), resulting in the final concentration of 5.95% glycerol, 2.95% glycerol and 2.1% iodixanol and 4.2% iodixanol, respectively. In the post-thaw sperm analysis was found that iodixanol association with glycerol results in higher sperm motility and longevity as well as in higher membrane integrity and lower lipid peroxidation. In addition, iodixanol as the sole cryoprotectant is not efficient for bovine sperm cryopreservation.

CENTRIFUGAÇÃO COM AMORTECIMENTO DURANTE A SELEÇÃO ESPERMÁTICA NA PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS

Os métodos de seleção espermática são utilizados com o objetivo de isolar uma maior população de espermatozoides morfologicamente melhor, além de permitir a capacitação destes, incrementando a taxa de embriões produzidos in vitro. Entre os métodos de seleção, o mais utilizado comercialmente na produção in vitro (PIV) de embriões bovinos é o método de Gradiente Descontínuo de Percoll® (GDP). No entanto, apesar da praticidade desta técnica, a etapa de centrifugação é prejudicial, sendo responsável por danos estruturais as células espermáticas, bem como a diminuição da motilidade e da taxa de recuperação, interferindo assim, nas taxas de fecundação in vitro (FIV). Este estudo objetivou avaliar a centrifugação com amortecimento utilizando uma solução de iodixanol durante a seleção espermática para a PIV de embriões bovinos. No experimento I, o sêmen foi descongelado e dividido em quatro grupos, e os espermatozoides submetidos a separação espermática pelo método de GDP com ou sem a solução colóide; sendo o amortecimento testado na primeira (C1), segunda (C2) ou ambas centrifugações (C1-2). Em seguida, foram avaliadas a taxa de recuperação, a cinética espermática, e a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs). No experimento II foi avaliada a taxa de fecundação e a cinética de desenvolvimento embrionário dos grupos C e C1, que foram os tratamentos que demonstraram os melhores resultados para a cinética espermática, taxa de recuperação e análise bioquímica no primeiro experimento. Neste estudo, o grupo com amortecimento obteve um aumento na taxa de fecundação e clivagem, quando comparado ao grupo controle (60,5 vs 48,55 e 80,0 vs 64,7%, respectivamente). Com base nestes resultados foi possível concluir que o uso de uma solução de amortecimento durante a etapa de centrifugação para a seleção espermática permitiu a preservação da cinética e da integridade da membrana dos espermatozoides, sem reduzir a taxa de recuperação. Adicionalmente, foi demonstrado pela primeira vez que o uso da centrifugação com amortecimento incrementa, não apenas a taxa de fecundação e clivagem, mas também o número de embriões que clivam mais cedo.

In order to optimize bovine in vitro fertilization (IVF), sperm selection methods have been used to isolate sperm subpopulations with high fertilizing capacity for use in animal breeding. Among the methods of sperm selection, the most common method used is the Discontinuous Percoll® Gradients (DPG). However, again despite the practicality of this technique, the centrifugation step is harmful, accounting for structural damage in sperm and decrease in motility and sperm recovery rate, as well as interfering with in vitro fertilization rates. This study aimed to evaluate the cushioned centrifugation using an iodixanol solution on sperm selection for in vitro production (IVP) of bovine embryos. In experiment I, the thawed semen was divided into four groups and the sperm subjected to the separation method by discontinuous Percoll® gradients with and without a colloid solution, where the cushioning was tested in the first (C1), second (C2), and both centrifugations (C1-2). Then, the recovery rate, sperm kinetics, and production of reactive oxygen species (ROS) were evaluated. Experiment II evaluated the fertilization rate and embryonic development kinetics of C and C1 groups; who were the treatments that have shown the best results for motion kinetics, recovery rate, and biochemical analysis in Experiment I. In this assay, the group with cushioning obtained an increase in the fertilization and cleavage rate when compared with the control (60.5 vs 48.55 and 80.0 vs 64.7%, respectively). With this study, we can conclude that the use of a cushion solution during centrifugation on sperm selection had preserved the motion properties of spermatozoa and the integrity of the sperm membrane without lowering the recovery rate. Furthermore, it was demonstrated for the first time that the use of cushioned centrifugation increases not only the cleavage rate but the number of embryos previously cleaved

Efeitos renais da administração intravenosa de meios de contraste iodado em cães submetidos à tomografia computadorizada: aspectos ultrassonográficos e laboratoriais

A nefropatia induzida por contraste (NIC) é uma nefropatia aguda, secundária à administração intravascular de meios de contraste iodado (MCI), cujas propriedades físico-químicas, especialmente a osmolaridade, relacionam-se ao seu desenvolvimento. Dentre os mecanismos fisiopatológicos desta enfermidade destacam-se a vasoconstrição intrarrenal prolongada, consequente redução da perfusão renal, hipóxia e isquemia medulares, associada ao dano tubular renal devido à citotoxicidade do contraste. Frente à existência de poucas informações relacionadas a estes mecanismos na literatura médico-veterinária e a grande demanda de exames de tomografia computadorizada que utilizam contrastes, objetivaram-se caracterizar e comparar os efeitos renais da administração intravenosa de MCI não iônicos de diferentes osmolaridades, em grupos de cães com fatores de risco para o desenvolvimento da NIC, por meio das avaliações ultrassonográficas modo B, Doppler colorido, de amplitude e pulsado, pareada aos exames laboratoriais, a fim de estimar indiretamente o potencial nefrotóxico de cada contraste. Este estudo também objetivou verificar a ocorrência da NIC. Constituíram-se dois grupos de acordo com o MCI utilizado: o grupo GIH (11 cães receberam iohexol [baixa osmolaridade]) e o grupo GID (sete cães receberam iodixanol [isosmolar]). Administrou-se a dose de 600 mgI/kg/IV em ambos. Avaliaram-se os seguintes aspectos renais antes da administração do MCI (momento basal) e após 1,5 horas, 24 horas e 48 horas: morfometria (comprimento e volume), morfologia, ecogenicidade cortical e perfusão renais e resistência vascular intrarrenal (índices hemodinâmicos de resistividade e pulsatilidade), realizou-se ainda exame de urina I e se mensuraram as razões gama-glutamil transferase:creatinina (GGT:C) e proteína:creatinina (RPC) urinárias e a concentração sérica de creatinina. Estipulou-se avaliar os aspectos sonográficos do rim esquerdo, desde que ambos os rins apresentassem características morfométricas, morfológicas, de ecogenicidade cortical e perfusão, semelhantes na abordagem inicial de cada paciente. Os grupos apresentaram comportamentos similares para comprimento, RPC, exame de urina I e creatinina sérica. Constataram-se aumentos significativos do índice de resistividade (IR) e da razão GGT:C urinária e evidências de aumento significativo do volume renal, 1,5 horas após a administração do contraste, somente no grupo que recebeu iohexol. Em relação ao índice de pulsatilidade, embora ambos os grupos tenham apresentado comportamentos não similares, não se detectaram diferenças significativas entre o momento basal e os demais. Concluiu-se que o IR foi capaz de monitorar a hemodinâmica intrarrenal e demonstrar, assim como a razão GGT:C urinária, maior potencial nefrotóxico do iohexol, quando comparado ao iodixanol. Dessa forma, considerou-se o iodixanol uma opção favorável para cães com fatores de risco para o desenvolvimento da NIC. Um cão de 14 anos de idade, portador de insuficiência cardíaca e disfunção renal preexistente, desenvolveu a forma subclínica da NIC, reconhecida pela elevação de 0,5 mg/dL na creatinina sérica basal, 24 horas após a administração intravenosa do iohexol. A redução da perfusão renal verificada 1,5 horas após a utilização do contraste pode ser preditiva de NIC. De modo semelhante ao observado no homem, idade avançada, insuficiência cardíaca e disfunção renal preexistente, principalmente quando associadas, constituem fatores de risco para o desenvolvimento da NIC em cães.

Contrast-induced nephropathy (CIN) is a type of acute nephropathy, secondary to intravascular administration of iodinated contrast media (ICM). The physicochemical properties of ICM, particularly the osmolarity of the media, are related to the development of CIN. The most important mechanisms of this nephropathy are intrarenal prolonged vasoconstriction, medular hypoxia, and ischemia associated with renal tubular damage due to contrast cytotoxicity. Owing to the limited information available in veterinary literature regarding these mechanisms and increase in the number of contrast-enhanced computed tomography examinations performed, this study aims to characterize and compare the renal effects of intravenous administration of two nonionic ICM of different osmolarities in groups of dogs with risk factors for CIN development, by using a B-mode, color, power- and pulsedwave Doppler ultrasonography, and other laboratory tests, in order to indirectly estimate the nephrotoxic potential of each contrast. This study also aims to investigate the occurrence of CIN. The following two groups were established according to the nonionic ICM used: the GIH group (11 dogs administered iohexol [low osmolarity]) and the GID group (seven dogs administered iodixanol [iso-osmolarity]). Both the groups were administered the same dose (600 mgI/kg/IV). The following renal aspects were evaluated before administration of ICM (baseline) and after 1.5 h, 24 h, and 48 h: renal morphometry (length and volume), renal morphology, cortical echogenicity, renal perfusion, and intrarenal vascular resistance (resistive and pulsatility indices); in addition, urinalysis was performed, and urinary gammaglutamyl transferase:creatinine ratio (GGT:C), urinary protein:creatinine ratio (UPC), and serum creatinine were also measured. The sonographic aspects of the left kidney were evaluated, only if both kidneys presented similar morphometry, morphology, cortical echogenicity, and perfusion during the first assessment of each patient. Both groups showed similar characteristics with respect to the length, UPC ratio, urinalysis, and serum creatinine levels. Significant increases were observed in the resistive index (RI) and urinary GGT:C, and evidence of significant increase was observed in the renal volume only in the GIH group, 1.5 h after contrast administration. No similarity was observed with respect to the pulsatility index in both the groups; however, there were no significant differences between baseline and 1.5-, 24- and 48-h time points. In conclusion, RI can be used to monitor intrarenal hemodynamics, and along with the urinary GGT:C, revealed that iohexol had higher nephrotoxic potential than iodixanol. Thus, iodixanol was considered a favorable option for dogs with risk factors for CIN development. A 14-year-old dog with heart failure and preexisting renal dysfunction developed subclinical CIN, due to an increase in the serum creatinine (0.5 mg/dL) 24 h after intravenous iohexol administration. The decrease in renal perfusion observed 1.5 h after ICM administration may be predictive of CIN. As observed in humans, advanced age, heart failure, and pre-existing renal dysfunction, especially various associated factors, should be considered as risk factors for the development of CIN in dogs.

Comparação de dois métodos para criopreservação de sêmen ovino / Comparison of two methods to ram semen cryopreservation

Com o interesse em intensificar a produção ovina, a inseminação artificial (IA) com sêmen criopreservado apresenta papel fundamental no melhoramento genético. Objetivou-se, no presente trabalho, comparar os parâmetros espermáticos do sêmen ovino (motilidade, vigor), testes complementares (termorresistência – TTR, hiposmótico – HO, teste do MTT e coloração), em dois sistemas de criopreservação de sêmen ovino com diferentes crioprotetores e suas associações. Para tanto, foram realizadas colheitas e criopreservação de sêmen e as amostras foram divididas em seis grupos: Grupo controle, utilizando o método convencional (palhetas soltas) e glicerol 5% e os Grupos teste (palhetas soltas e em raques – Glicerol 5% + iodixanol 2,5% e Iodixanol 2,5%). Em relação aos parâmetros espermáticos não foi observada diferença significativa (p>0,05) entre os grupos. Para o TTR, foi observada diferença estatística (p<0,05), onde os grupos glicerol 5% e iodixanol 2,5% não-raqueado foram superiores aos demais. O grupo controle mostrou-se superior aos demais no teste HO. Para a coloração observou-se diferença entre os grupos, assim como no teste do MTT

With the intensifying interest in sheep production, artificial insemination (AI) with semen cryopreserved presents key role in breeding. The aim of the present study was to compare sperm parameters in ram semen (motility, vigor), additional tests (thermo - TTR, hyposmotic - HO, the MTT assay and staining) in two systems of sheep semen cryopreservation and different cryoprotectants and their association.For this purpose, samples were taken and cryopreservation of semen and samples were divided into six groups: control group, using the conventional method (loose straws) and 5% glycerol and test groups (loose straws and raques - Glycerol + 5% iodixanol 2.5% and 2.5% iodixanol). In relation to sperm parameters was not significantly different (p> 0.05) between groups. For TTR, was a statistical difference (p <0.05), where groups glycerol 5% and 2.5% iodixanol non-raqueado were superior to others. The control group was superior to the others in the test HO.For the color difference was observed among the groups, as in the MTT assay.

Comparação de dois métodos para criopreservação de sêmen ovino / Comparison of two methods to ram semen cryopreservation

Com o interesse em intensificar a produção ovina, a inseminação artificial (IA) com sêmen criopreservado apresenta papel fundamental no melhoramento genético. Objetivou-se, no presente trabalho, comparar os parâmetros espermáticos do sêmen ovino (motilidade, vigor), testes complementares (termorresistência TTR, hiposmótico HO, teste do MTT e coloração), em dois sistemas de criopreservação de sêmen ovino com diferentes crioprotetores e suas associações. Para tanto, foram realizadas colheitas e criopreservação de sêmen e as amostras foram divididas em seis grupos: Grupo controle, utilizando o método convencional (palhetas soltas) e glicerol 5% e os Grupos teste (palhetas soltas e em raques Glicerol 5% + iodixanol 2,5% e Iodixanol 2,5%). Em relação aos parâmetros espermáticos não foi observada diferença significativa (p>0,05) entre os grupos. Para o TTR, foi observada diferença estatística (p<0,05), onde os grupos glicerol 5% e iodixanol 2,5% não-raqueado foram superiores aos demais. O grupo controle mostrou-se superior aos demais no teste HO. Para a coloração observou-se diferença entre os grupos, assim como no teste do MTT

With the intensifying interest in sheep production, artificial insemination (AI) with semen cryopreserved presents key role in breeding. The aim of the present study was to compare sperm parameters in ram semen (motility, vigor), additional tests (thermo - TTR, hyposmotic - HO, the MTT assay and staining) in two systems of sheep semen cryopreservation and different cryoprotectants and their association.For this purpose, samples were taken and cryopreservation of semen and samples were divided into six groups: control group, using the conventional method (loose straws) and 5% glycerol and test groups (loose straws and raques - Glycerol + 5% iodixanol 2.5% and 2.5% iodixanol). In relation to sperm parameters was not significantly different (p> 0.05) between groups. For TTR, was a statistical difference (p <0.05), where groups glycerol 5% and 2.5% iodixanol non-raqueado were superior to others. The control group was superior to the others in the test HO.For the color difference was observed among the groups, as in the MTT assay. (AU)