Distinct carbapenems susceptibility profiles in isogenic isolates of Klebsiella pneumoniae presenting Ompk36 disruption and expression of down-regulated blaKPC-2 / Perfis distintos de suscetibilidade a carbapenêmicos em isolados isogênicos de Klebsiella pneumoniae apresentando interrupção de Ompk36 e expressão de blaKPC-2 negativamente regulada

The isolation of multidrug-resistant Klebsiella pneumoniae in hospitals is a major public health threat, increasing patient hospitalization costs, morbidity and mortality. Therefore, this work investigated the resistance mechanisms that produced different carbapenems susceptibility profiles in two isogenic strains of K. pneumoniae isolated from the same patient in a public hospital in Recife, Pernambuco. The genes that encode the main porins in K. pneumoniae, ompK35 and ompK36, and several beta-lactamase genes were analyzed. The expression of these genes was evaluated by quantitative real time PCR (polymerase chain reaction) with reverse transcriptase (RT-qPCR). SDS-PAGE (sodium dodecyl sulphate­polyacrylamide gel electrophoresis) was performed to analyze the outer membrane proteins. The analysis of the ompK36 genetic environment disclosed an IS903 insertion sequence disrupting this gene in the ertapenem resistant isolate (KPN133). The blaKPC-2 gene showed down-regulated expression in both isolates. Our findings show that changes in porins, especially OmpK36, are more determinant to carbapenems susceptibility profile of bacterial isolates than variations in blaKPC gene expression.

O isolamento de Klebsiella pneumoniae multirresistente em hospitais é uma grande ameaça à saúde pública, aumentando os custos de internação, morbidade e mortalidade dos pacientes. Portanto, este trabalho investigou os mecanismos de resistência que produziram diferentes perfis de suscetibilidade aos carbapenêmicos em duas cepas isogênicas de K. pneumoniae isoladas do mesmo paciente em um hospital público em Recife, Pernambuco. Foram analisados ​​os genes que codificam as principais porinas em K. pneumoniae, ompK35 e ompK36, e diversos genes de beta-lactamases. A expressão desses genes foi avaliada por PCR (reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real) com transcriptase reversa (RT-qPCR). SDS-PAGE (dodecil sulfato de sódio-poliacrilamida gel eletroforese) foi realizada para analisar as proteínas da membrana externa. A análise do ambiente genético ompK36 revelou uma sequência de inserção IS903 interrompendo este gene no isolado resistente ao ertapenem (KPN133). O gene blaKPC-2 apresentou expressão negativamente regulada em ambos os isolados. Nossos achados mostram que alterações nas porinas, especialmente OmpK36, são mais determinantes no perfil de suscetibilidade aos carbapenêmicos de isolados bacterianos do que variações na expressão do gene blaKPC.

Wild mouse & laboratory mouse historical aspects, genetic selection and welfare / Camundongo selvagem & camundongo de laboratório aspectos históricos, seleção genética e bem estar

The mouse is the most used animal model in biomedical pre clinical trials. Its phylogeny descends from the genus Mus, subgenus Mus and species Mus musculus. The origin of this animal as an experimental model is due to the capture of wild subspecies mainly Mus musculus domesticus, Mus musculus musculus, Mus musculus castaneus and the hybrid subspecie Mus musculus molosinus. For centuries, diverse breeders with diverse geographical locations have been breeding and swapping selected individuals from among them, which has promoted very large genetic variability and difficulty in accurately recording subspecies that gave rise to both isogenic strains and outbred stocks individuals. The couple Abbie Lathrop and Leo Loeb in Massachusetts (United States of America) are the most cited in this activity. But it was documented, mainly at the origin of the inbred lineages, however, Swiss outbred stock that other unknownsuppliers were selecting albino mice and supplying to research institutes. Currently, we believe in the theory of the subspecies Mus musculus laboratorius existence in house facilities. Because through years suffering artificial evolutionary and selective pressuresthe extreme adaptability of this animal (which made it possible to be captured in the wild and reproduce in captivity) also made the restriction of space in the laboratory enviroment. However, we must take into consideration, with great respect for this animal, that despite its adaptability, its welfare is linked to the expression of its intrinsic natural behavior to the species M. musculus. Thus we have the obligation to provide mating and management directed at reducing the aggressiveness of adult males; searchingfor equipment and materials to the mouse preference; avoiding abrupt changes inenvironment and routine and proper handling...

O camundongo é o modelo animal mais utilizado em ensaios biomédicos. Sua filogenia descende do gênero Mus, subgênero Mus e espécie Mus musculus. A origem desse animal como modelo experimental, deve-se a captura de subespécies selvagens como as Mus musculus domesticus, Mus musculus musculus, Mus musculus castaneuse do híbrido Mus musculus molosinus. Durante séculos, diversos criadores, comdiversas localizações geográficas, realizaram o acasalamento e troca de indivíduos selecionados entre eles, o que promoveu uma variabilidade genética muito grande e uma dificuldade de precisão de registros das subespécies que deram origem tanto as linhagens isogênicas e os indivíduos outbred stocks. O casal Abbie Lathrop e Leo Loebem Massachusetts nos Estados Unidos são os mais citados nessa atividade. Porém sua origem foi documentada, principalmente em relação à linhagem inbred, contudo em relação ao Swiss outbred stock os relatos sugerem que outros fornecedores desconhecidos realizavam a seleção de camundongos albinos e forneciam a instituosde pesquisa. Atualmente, acreditamos na teoria da existência da subespécie Musmusculus laboratorius, pois através de anos sofrendo pressões evolutivas e seletivas artificiais, a extrema capacidade de adaptabilidade desse animal (que o possibilitou ser capturado na natureza e se reproduzir em cativeiro) também tornou adaptado à restrição de espaço em biotério. Contudo, devemos levar em consideração, com muito respeito a esse animal, que apesar dessa adaptabilidade, o seu bem estar é inerente a expressão do comportamento natural intrínsseco da espécie M. musculus. Dessa forma temos a obrigação de propiciar acasalamento e manejo direcionado a redução da agressividade de indivíduos machos adultos, busca por equipamentos emateriais que sejam de preferência do animal, evitar mudanças abruptas de ambiente e rotina e manipulação adequada...

Wild mouse & laboratory mouse historical aspects, genetic selection and welfare / Camundongo selvagem & camundongo de laboratório aspectos históricos, seleção genética e bem estar

The mouse is the most used animal model in biomedical pre clinical trials. Its phylogeny descends from the genus Mus, subgenus Mus and species Mus musculus. The origin of this animal as an experimental model is due to the capture of wild subspecies mainly Mus musculus domesticus, Mus musculus musculus, Mus musculus castaneus and the hybrid subspecie Mus musculus molosinus. For centuries, diverse breeders with diverse geographical locations have been breeding and swapping selected individuals from among them, which has promoted very large genetic variability and difficulty in accurately recording subspecies that gave rise to both isogenic strains and outbred stocks individuals. The couple Abbie Lathrop and Leo Loeb in Massachusetts (United States of America) are the most cited in this activity. But it was documented, mainly at the origin of the inbred lineages, however, Swiss outbred stock that other unknownsuppliers were selecting albino mice and supplying to research institutes. Currently, we believe in the theory of the subspecies Mus musculus laboratorius existence in house facilities. Because through years suffering artificial evolutionary and selective pressuresthe extreme adaptability of this animal (which made it possible to be captured in the wild and reproduce in captivity) also made the restriction of space in the laboratory enviroment. However, we must take into consideration, with great respect for this animal, that despite its adaptability, its welfare is linked to the expression of its intrinsic natural behavior to the species M. musculus. Thus we have the obligation to provide mating and management directed at reducing the aggressiveness of adult males; searchingfor equipment and materials to the mouse preference; avoiding abrupt changes inenvironment and routine and proper handling...(AU)

O camundongo é o modelo animal mais utilizado em ensaios biomédicos. Sua filogenia descende do gênero Mus, subgênero Mus e espécie Mus musculus. A origem desse animal como modelo experimental, deve-se a captura de subespécies selvagens como as Mus musculus domesticus, Mus musculus musculus, Mus musculus castaneuse do híbrido Mus musculus molosinus. Durante séculos, diversos criadores, comdiversas localizações geográficas, realizaram o acasalamento e troca de indivíduos selecionados entre eles, o que promoveu uma variabilidade genética muito grande e uma dificuldade de precisão de registros das subespécies que deram origem tanto as linhagens isogênicas e os indivíduos outbred stocks. O casal Abbie Lathrop e Leo Loebem Massachusetts nos Estados Unidos são os mais citados nessa atividade. Porém sua origem foi documentada, principalmente em relação à linhagem inbred, contudo em relação ao Swiss outbred stock os relatos sugerem que outros fornecedores desconhecidos realizavam a seleção de camundongos albinos e forneciam a instituosde pesquisa. Atualmente, acreditamos na teoria da existência da subespécie Musmusculus laboratorius, pois através de anos sofrendo pressões evolutivas e seletivas artificiais, a extrema capacidade de adaptabilidade desse animal (que o possibilitou ser capturado na natureza e se reproduzir em cativeiro) também tornou adaptado à restrição de espaço em biotério. Contudo, devemos levar em consideração, com muito respeito a esse animal, que apesar dessa adaptabilidade, o seu bem estar é inerente a expressão do comportamento natural intrínsseco da espécie M. musculus. Dessa forma temos a obrigação de propiciar acasalamento e manejo direcionado a redução da agressividade de indivíduos machos adultos, busca por equipamentos emateriais que sejam de preferência do animal, evitar mudanças abruptas de ambiente e rotina e manipulação adequada...(AU)

Remote ischemic preconditioning and tacrolimus in the fetal small bowel transplant in mice

PURPOSE:To evaluate the effect of remote ischemic preconditioning (IPC-R) in the fetal small bowel transplantation model.METHODS:Two groups were constituted: The Isogenic transplant (ISO, C57BL/6 mice, n=24) and the allogenic transplant (ALO, BALB/c mice, n=24). In each group, the animals were distributed with and without IPC-R. It was obtained the following subgroups: Tx, IPC-R, Fk, IPC-Fk, in both strains. Intestinal grafts were stained with hematoxylin and eosin and immunohistochemically.RESULTS:The graft development evaluation in ISO group showed that IPC-R reduced the development compared with ISO-Tx (5.2±0.4 vs 9.0±0.8) and IPC-R-Fk increased the graft development compared with IPC-R (11.2±0.7 and 10.2±0.8). In ALO group, IPC-Fk increased the development compared with ALO-Tx and ALO with IPC-R (6.0±0.8, 9.0±1.2, 0.0±0.0, 0.5±0.3). The PCNA expression was increased in ISO group treated with Fk and IPC-R compared to other groups (12.2±0.8 vs Tx: 8.8±0.9, IPC-R: 8.0±0.4 and Fk: 9.0±0.6). The graft rejection was lower in groups treated with IPC-R (-18%), Fk (-68%) or both (-61%) compared with ALO-Tx.CONCLUSION:Remote ischemic preconditioning showed benefic effect even associate with Tacrolimus on the development and acute rejection of the fetal small bowel graft in the Isogenic and Allogenic transplants.(AU)

Estudo comparativo dos valores hematológicos entre sexo e categorias sanitárias de camundongos C57BL/6 e BALB/c / Hematological comparative study between sex and sanitary categories of C57BL/6 and BALB/C Mouse

A finalidade deste estudo é oferecer aos pesquisadores dados que possam ser relevantes na escolha do modelo experimental a ser utilizado, comparando os valores hematologicos de camundongos de linhagens isogênicas, mantidos em biotérios Convencional e SPF - (Specific Pathogen Free). foram utilizados 80 camundongos selecionados por categoria sanitária e sexo, sem sinais clínicos de doenças, acima de 10 semanas. O perfil gematológico analisado foi determinado pelo processo de citometria, no qual a separação de entrócitos e leucócitos ocorre por volume celular, sendo utilizada a identificação celular pelo método em suspensão e qualificação. Os exames realizados foram eitrograma e leucograma no equipamento (Celm CC510) e os derivados hematológicos como índices hematimétricos; a quantificação morfológica de leucócitos e eritrócitos foram determinadas por varredura (Panótico-comercial) e hemoglobina por espectrofolometria (Celm E210D). A comparação dos valores hematológicos de camundongos das linhagens isogênicas BALB/c e C57BL/6, mantidos em biotérios Convencional e SPF não apresentou diferenças entre os parâmetros: contagem de hemácias, hematoctiyo, hemoglobina corpuscular média; contagem de leucócitos, monócitos, linfócitos e basofilos. Os eosinófilos apresentam valores diferentes entre os secos e entre as categorias sanitárias, em ambas as linhagens. Os neutrófilos, nas fêmeas C57Bl/6, foram superiores em número, nos convencionais quando comparadas às fêmeas SPF. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP.

The purpose of this study was to provide researchers with data that may be relevant in the choice of experimental model to be used, comparing the haematological values of isogenic strains of mice kept in conventional animal facilities and SPF - (Specific Pathogen Free). 80 mice were used for selected health category and sex, without clinical signs of disease, over 10 weeks, The blood profile analysis was determined by flow cytometry process, where the separation of erythrocytes and leukocytes occurs by cell volume and is used to identify the cell suspension method and quantification. The tests were performed on the equipment erythrogram and WBC (Celma CC510) and RBC indices as derived from hematological, morphological quantification of leukocytes and erythrocytes were determined by scanning (Panótico-commercial) and hemoglobin by spectrophometry (Celm, E210D). Comparison of leukocytes occurs by cell volume and is used to identify the cell sushaematological values of isogenic strains of mice BALB/c and C57BL/6, kept in conventional animal facilities and SPF, showed no differences between the parameters: erythrocyte count, hematocrit, hemoglobin, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin, hemoglobin concentration mean corpuscular; WBC, monocytes, lymphocytes, and basophils. Eosinophils showed different values between the sexes and between health categories, in both strains. Neutrophilis, in the female C57BL/6 were greater in number in females qhen compared to conventional SPF. Certified nº 251/11 CEAU HCFMUSP.

Estudo comparativo dos valores hematológicos entre sexo e categorias sanitárias de camundongos C57BL/6 e BALB/c / Hematological comparative study between sex and sanitary categories of C57BL/6 and BALB/C Mouse

A finalidade deste estudo é oferecer aos pesquisadores dados que possam ser relevantes na escolha do modelo experimental a ser utilizado, comparando os valores hematologicos de camundongos de linhagens isogênicas, mantidos em biotérios Convencional e SPF - (Specific Pathogen Free). foram utilizados 80 camundongos selecionados por categoria sanitária e sexo, sem sinais clínicos de doenças, acima de 10 semanas. O perfil gematológico analisado foi determinado pelo processo de citometria, no qual a separação de entrócitos e leucócitos ocorre por volume celular, sendo utilizada a identificação celular pelo método em suspensão e qualificação. Os exames realizados foram eitrograma e leucograma no equipamento (Celm CC510) e os derivados hematológicos como índices hematimétricos; a quantificação morfológica de leucócitos e eritrócitos foram determinadas por varredura (Panótico-comercial) e hemoglobina por espectrofolometria (Celm E210D). A comparação dos valores hematológicos de camundongos das linhagens isogênicas BALB/c e C57BL/6, mantidos em biotérios Convencional e SPF não apresentou diferenças entre os parâmetros: contagem de hemácias, hematoctiyo, hemoglobina corpuscular média; contagem de leucócitos, monócitos, linfócitos e basofilos. Os eosinófilos apresentam valores diferentes entre os secos e entre as categorias sanitárias, em ambas as linhagens. Os neutrófilos, nas fêmeas C57Bl/6, foram superiores em número, nos convencionais quando comparadas às fêmeas SPF. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP.(AU)

The purpose of this study was to provide researchers with data that may be relevant in the choice of experimental model to be used, comparing the haematological values of isogenic strains of mice kept in conventional animal facilities and SPF - (Specific Pathogen Free). 80 mice were used for selected health category and sex, without clinical signs of disease, over 10 weeks, The blood profile analysis was determined by flow cytometry process, where the separation of erythrocytes and leukocytes occurs by cell volume and is used to identify the cell suspension method and quantification. The tests were performed on the equipment erythrogram and WBC (Celma CC510) and RBC indices as derived from hematological, morphological quantification of leukocytes and erythrocytes were determined by scanning (Panótico-commercial) and hemoglobin by spectrophometry (Celm, E210D). Comparison of leukocytes occurs by cell volume and is used to identify the cell sushaematological values of isogenic strains of mice BALB/c and C57BL/6, kept in conventional animal facilities and SPF, showed no differences between the parameters: erythrocyte count, hematocrit, hemoglobin, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin, hemoglobin concentration mean corpuscular; WBC, monocytes, lymphocytes, and basophils. Eosinophils showed different values between the sexes and between health categories, in both strains. Neutrophilis, in the female C57BL/6 were greater in number in females qhen compared to conventional SPF. Certified nº 251/11 CEAU HCFMUSP.(AU)

Perfil bioquímico dos animais de laboratório do biotério da Faculdade de Medicina da USP / / Biochemical profile of laboratory animals of the Medical School USP

Objetivo: Os parãmetros bioquímicos são utilizados em pesquisas cientificas, em conjunto com outros fatores, para análise dos resultados experimentais. Animais de laboratório criados em diferentes biotérios apresentam variações em seus valores devido a dieta, manejo, estado sanitário, idade, vias de coleta do sangue e outros interferentes. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi determinar o perfil bioquímico de camundongos, ratos, hamsters e coelhos convencionais criados pelo Centro de bioterismo da FMUSP. Materiais e Métodos: Foram utilizados 20 camundongos das linhagens isogênicas BALB/c e C57Bl/6 e da heterogênica Swiss; 40 ratos Wistar, 40 hamsters Golden e 40 coelhos New Zealand. Os exames realizados foram: uréia/BUN (Blood Urea Nitrogen), creatinina, proteínas totais, albumina e globulinas, ferro, fósforo, glicose, colesterol total e suas frações LDI (Low Density Lipoprotein), HDL (High Density Lipoprotein), VLDL (Very Low Density Lipoprotein), Bilirrubina total e frações (direta, indireta), cloretos, magnésio, triglicerides, Alt/AST (alanina aminotransferase, aspartato aminotransaminase), amônia, cálcio, ALP (fosfatase alcalina) e LDH (desidrogenase lática), determinados por fotocolorimetria semi-automática (Cobas Mira) e kits bioclin, Labtest e Byosystems. Resultados: Apresentados pelas médias e os erros padrões das concentrações de analitos, no plasma, agrupados por sexo. Conclusão: Foram determinados os perfis bioquímicos de camundongos, ratos, hamsters e coelhos convencionais do centro de Bioterismo da FMUSP, oferecendo uma ferramenta valiosa aos pesquisadores ao analisar seus resultados experimentais. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP.

Objective: The biochemical parameters are used in scientific research in conjunction with other factors, to analyze the experimental results. Laboratory animals raised in different animal houses have variations in their values due to diet, management health status, age, the process of colecting blood and other interferences. Thus, the objective of this study was to created by conventional Bioterty Center FMUSP . Materials and Methods: We used 20 isogenic strains of mice BALB/6 and C57BL/6 and Swiss heterogeneous, 40 Wistat rats, 40 rabbits and 40 hamsters Golden New Zealand. The tests performed were: urea / BUN (Blood Urea Nitrogen), creatine, total protein, albumin and globulins, iron, phosphorus, glucose, total cholesterol and LDL (Low Density Lipoprotein), HDL (High Density Lipoprotein), VLDL (very Low Density Lipoprotein), total bilirubin and fractions (direct, indirect), chlondes, magnesium, triglucerides, ALT/AST (alanine aminotransferase, aspartate aminotransaminase), ammonium, calcium, ALP (alkaline phosphatase) and LDH (lactate denydrogenase), certain by semi-automatic spectrophotometer (Cobas Mira) and Bioclin kitas, and Labtest Biosystems. Results: Presented by the means and standard errors of the concentrations of analytes in plasma, grouped by sex. Conclusion: We determined the biochemical profiles of mice, rats, hamsters and rabbits conventional Biotery FMUSP Center, offering a valuable tool for researchers to analyze their experimental results. Certified No 251/11 CEAU HCFMUSP.

Perfil bioquímico dos animais de laboratório do biotério da Faculdade de Medicina da USP pt / / Biochemical profile of laboratory animals of the Medical School USP

Objetivo: Os parãmetros bioquímicos são utilizados em pesquisas cientificas, em conjunto com outros fatores, para análise dos resultados experimentais. Animais de laboratório criados em diferentes biotérios apresentam variações em seus valores devido a dieta, manejo, estado sanitário, idade, vias de coleta do sangue e outros interferentes. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi determinar o perfil bioquímico de camundongos, ratos, hamsters e coelhos convencionais criados pelo Centro de bioterismo da FMUSP. Materiais e Métodos: Foram utilizados 20 camundongos das linhagens isogênicas BALB/c e C57Bl/6 e da heterogênica Swiss; 40 ratos Wistar, 40 hamsters Golden e 40 coelhos New Zealand. Os exames realizados foram: uréia/BUN (Blood Urea Nitrogen), creatinina, proteínas totais, albumina e globulinas, ferro, fósforo, glicose, colesterol total e suas frações LDI (Low Density Lipoprotein), HDL (High Density Lipoprotein), VLDL (Very Low Density Lipoprotein), Bilirrubina total e frações (direta, indireta), cloretos, magnésio, triglicerides, Alt/AST (alanina aminotransferase, aspartato aminotransaminase), amônia, cálcio, ALP (fosfatase alcalina) e LDH (desidrogenase lática), determinados por fotocolorimetria semi-automática (Cobas Mira) e kits bioclin, Labtest e Byosystems. Resultados: Apresentados pelas médias e os erros padrões das concentrações de analitos, no plasma, agrupados por sexo. Conclusão: Foram determinados os perfis bioquímicos de camundongos, ratos, hamsters e coelhos convencionais do centro de Bioterismo da FMUSP, oferecendo uma ferramenta valiosa aos pesquisadores ao analisar seus resultados experimentais. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP. (AU)

Objective: The biochemical parameters are used in scientific research in conjunction with other factors, to analyze the experimental results. Laboratory animals raised in different animal houses have variations in their values due to diet, management health status, age, the process of colecting blood and other interferences. Thus, the objective of this study was to created by conventional Bioterty Center FMUSP . Materials and Methods: We used 20 isogenic strains of mice BALB/6 and C57BL/6 and Swiss heterogeneous, 40 Wistat rats, 40 rabbits and 40 hamsters Golden New Zealand. The tests performed were: urea / BUN (Blood Urea Nitrogen), creatine, total protein, albumin and globulins, iron, phosphorus, glucose, total cholesterol and LDL (Low Density Lipoprotein), HDL (High Density Lipoprotein), VLDL (very Low Density Lipoprotein), total bilirubin and fractions (direct, indirect), chlondes, magnesium, triglucerides, ALT/AST (alanine aminotransferase, aspartate aminotransaminase), ammonium, calcium, ALP (alkaline phosphatase) and LDH (lactate denydrogenase), certain by semi-automatic spectrophotometer (Cobas Mira) and Bioclin kitas, and Labtest Biosystems. Results: Presented by the means and standard errors of the concentrations of analytes in plasma, grouped by sex. Conclusion: We determined the biochemical profiles of mice, rats, hamsters and rabbits conventional Biotery FMUSP Center, offering a valuable tool for researchers to analyze their experimental results. Certified No 251/11 CEAU HCFMUSP.(AU)

Obtenção e caracterização de células do broto hepático de ratos para terapia celular / Obtaining and characterization of strains of cells of the liver of rats to bud stem cells

As células-tronco são capazes de se diferenciarem em praticamente todos os tipos celulares, podendo ser utilizadas em terapias de substituição em várias doenças. Células de linhagens hepáticas embrionárias e fetais pode ser uma fonte importante para a terapia celular em indivíduos com doenças hepáticas, pois possuem um alto índice de diferenciação em hepatócitos e células do ducto biliar. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial e o controle da resposta proliferativa de células do broto hepático de ratos Fischer 344 em cultura. A obtenção das células do broto hepático foi realizada nos períodos 12,5; 14,5 e 16,5 dias de gestação e os fragmentos foram cultivados em meio DMEM-F12. A caracterização morfológica foi realizada em microscopia invertida de luz e eletrônica de varredura. A caracterização dos marcadores de células mesenquimais, do citoesqueleto, progressão e fases do ciclo celular, morte celular, e do potencial elétrico mitocondrial foram realizadas por citometria de fluxo. A função bioquímica foi realizada pela análise das transaminases hepáticas e pela produção de radicais livres lipoperoxidados. Os resultados encontrados no acasalamento dos ratos isogênicos da linhagem Fischer 344 seguiu o protocolo de 12 h de luz, alcançando o índice reprodutivo satisfatório e reprodutível. O isolamento e separação do broto hepático desta linhagem de ratos permitiu a obtenção, expansão e caracterização de uma cultura primária nos diferentes dias de gestação 12,5; 14,5 e 16,5. Os aspectos morfológicos encontrados foram de células fusiformes do tipo fibroblast-like para todos os períodos de gestação em cultura. As análises das transaminases hepáticas TGO e TGP, mostraram se em concentrações menores no período 12,5 dias de gestação. A expressão dos marcadores de células-tronco de origem mesenquimais (CD90, Nanog, Oct ¾ e STRO1), marcadores do citoesqueleto (CK8, CK18 e Desmina), marcadores envolvidos na checagem e progressão do ciclo celular (P53, P21, P27 e Ciclina D1) e marcadores envolvidos na morte celular (Anexina V/PI, Caspase 3, Bax, Bad e Bcl2) mostraram diferencialmente expressos, nos diferentes períodos gestacionais. A análise do potencial elétrico mitocondrial nos períodos de gestação de 14,5 e 16,5 dias, foi maior na proporção de células inativas com menor capacidade funcional ou metabólica, quando comparada ao período de 12,5 dias ou mesmo em relação ao hepatócito normal de um rato adulto. Análise das fases do ciclo celular observou-se uma concentração de célula na fase G0/G1, repercutindo na modulação da capacidade de proliferação e aumento na proporção de células com DNA fragmentado, nas CBH no período de 16,5 dias em comparação aos demais períodos e ao hepatócito normal. O aumento da fragmentação do DNA em média de 3,5 e 2,3 vezes, respectivamente nos períodos de 12,5 e 14,5 dias de gestação. A capacidade de síntese e de divisão celular das CBH foi mantida em todos os períodos de gestação. Os radicais livres lipoperoxidados mostraram quantidades insignificantes em CBH nos diferentes dias de gestação

Stem cells are able to differentiate into virtually all cell types and can be used in replacement therapies in various diseases. Cells of embryonic and fetal liver lines can be an important source for cell therapy in patients with liver disease because they have a high rate of differentiation into hepatocytes and biliary duct cells. The aim of this study was to evaluate the potential and control of the proliferative response of liver bud cells during the maturation of hepatocytes in culture. The acquirement of liver bud cells was performed for 12.5, 14.5 and 16.5 days of gestation and the fragments were cultured in DMEM-F12. Morphological characterization was performed on inverted light microscopy and scanning electron microscopy. The characterization of mesenchymal cell markers, cytoskeleton, and progression stages of the cell cycle, cell death and mitochondrial electric potential were performed by flow cytometry. The biochemical function was performed by analysis of liver transaminases and the production of free radicals lipoperoxidados. The results found in rats\' mating isogenic Fischer 344 followed the protocol of 12 hours of light reaching the reproductive rate satisfactory. The isolation and separation of the liver bud of this strain of mice allowed the isolation, expansion and characterization of a primary culture at different days of gestation, 12.5, 14.5 and 16.5 days. The morphological features were found of spindle cell type to fibroblast-like cells of the liver bud in culture. Analyses of hepatic transaminases GOT and GPT showed lower concentrations in the period 12.5 days of gestation. The expression of stem cell markers of mesenchymal origin (CD90, Nanog, Oct STRO1 and ¾), cytoskeletal markers (CK8, CK18 and desmin) markers involved in checking and cell cycle progression (P53, P21, P27 and Cyclin D1) and markers involved in apoptosis (Annexin V / PI, caspase 3, Bax, Bad and Bcl2) showed differentially expressed in different gestational periods. In the analysis of mitochondrial electrical potential in the gestation periods of 14.5 and 16.5 days, it was observed the higher proportion of quiescent cells with lower metabolic of functional capacity when compared to the periodo of 12.5 days or even compared to a normal hepatocyte adult rat. In the analysis of cell cycle phases it was observed the concentration of cell in the G0/G1 phase, resulting in modulation of proliferation capacity and the increase in the proportion of cells with fragmented DNA, CBH in the period 16.5 days compared to other periods and the normal hepatocyte. The increase of DNA fragmentation on average 3.5 and 2.3 times respectively in the periods of 12.5 and 14.5 days of gestation. The synthesis and cellular division of CBH was maintained in all stages of pregnancy. The free radicals lipoperoxidados showed insignificant amounts of CBH in the days of gestation

Fungal microbiota of isogenic and congenic strains on mice in aninal holding rooms / Microbiótica fúngica na pelagem de camundongos de linhagens isogênicas e congênicas mantidos em biotério de criação

With the development of laboratory animal housing and care technology, where animals are kept under various different schemes according to specific purposes, an appropriate evaluation of the microbiota of the environment and of the animals is important. The occurrence of fungi was studied in the fur coat of 95 mice (47 males and 48 females) aging between 37 and 55 days of the following strains: isogenic (A/Sn (10), BALB/c (16), CBA (15), CS7BL/10J (10) and congenic (B10.A (14), B10 D2/o (15) e B1 .02/n (15). The material was collected frictioning a small piece of sterilized carpet in all the extension of the mouse corporal region. Sabouraud-dextrose agar plus chloramphenicol (100 µ g/ml) and Mycobiotic agar were used. The first medium presented a greater number of isolations (224) than the second (61). The isolation frequencies where the following: Penicillium sp (93,68%) , Trichoderme sp (92,63%), Cladosporium sp (38,95%), Torulopsis sp (7,37%), Rhizopus sp (4,21%), Aureobasidium sp (3,16%), Absidia sp (1,05%), Aspergillus sp (1,05%), Mycellia sterilla (1,05%), Trichotecium sp (1,05%), Candida sp (1,05%) e Rhodotorula sp (1,05%). A great number of fungi genera was isolated from isogenic strains and from female mice. These results were statistically significant (p=0,05) in the signals test. The fungi isolated from the housing rooms belong to the following genera: Absidia, Aur

Como desenvolvimento da tecnologia e do manejo de animais de laboratório, mantidos em biotérios que seguem diferentes normas de trabalho, de acordo com os objetivos a que se propõem, é mister que se avalie a microbiota dos ambientes de criação, bem como dos animais que deles fazem parte. Estudou-se a frequência de fungos na pelagem de 35 camundongos (47 machos e 43 fêmeas) de linhagens isogênicas (A/Sn (10), BALB/c (16), CBA (15), CS7BL/10J (10) e congênicas (B10.A (14), B10 D2/o (15) e B1 .02/n (15), com idade que variava entre 37 e 55 dias. A coleta de material foi realizada pela fricção de um pedaço de tapete esterilizado, em toda região corpórea das camundongos, seguida da compressão do material em placas de Petri, contendo ágar Sabouraud dextrose  acrescido de cloranfenicol (100 µ g/ml) - ASD e Mycobiotic agar (MA), para o isolamento dos fungos. Verificou-se maior número de isolamentos no primeiro (224) do que no segundo (61). As frequências de isolamento foram, respectivamente: Penicillium sp (93,68%) , Trichoderme sp (92,63%), Cladosporium sp (38,95%), Torulopsis sp (7,37%), Rhizopus sp (4,21%), Aureobasidium sp (3,16%), Absidia sp (1,05%), Aspergillus sp (1,05%), Mycellia sterilla (1,05%), Trichotecium sp (1,05%), Candida sp (1,05%) e Rhodotorula sp (1,05%). Maior numero de gênero fúngicos foi isolado de linhagens isogênicas e de camundongos do sexo feminino. Estes re

Heart implantation in subcutaneous tissue of isogenic mice. Study of an experimental model / Implante de coração no subcutâneo de camundongos isogênicos. Estudo de um modelo experimental

An experimental model of heart implantation in mice was studied, in accordance to the feasibility, post-surgical kinetics by histopathology and practical application. Isogenic animals from BALB/c and C57BL/10 strains were used, supplied by the Animal House of the Department of Parasitology, Microbiology and Imnunology of FMRP-USP. The experimental protocols were performed according to the operatory steps of the implantation of hearts extracted from just-born donors to the subcutaneous space of the dorsal face of the ear of adult singeneic and non singeneic receptors. Obtained results showed, basically, good feasibility and success in singeneic implantation. For non singeneics, there was sistematic rejection. The analysis altogether of the studied parameters allows to foresee the great utility of the model and the subsides that will bring to further studies in the field of alotransplantation.

Objetivou-se estudar um modelo experimental de implante de coração em camundongos, segundo a exequibilidade, cinética pós-operatória, por histopatologia e aplicação prática. Foram empregados animais isogênicos das cepas BALB/c e C57BL/10, fornecidos pelo Biotério do Departamento de Parasitologia, Microbiologia e Imunologia da FMRP/USP. Os protocolos experimentais foram conduzidos mediante a execução dos tempos operatórios envolvidos com a técnica e se resumiram na implantação de corações obtidos de doadores recém-natos, para o subcutâneo da região dorsal da orelha externa de receptores singenêicos e não singenêicos adultos. Os resultados obtidos demonstraram, fundamentalmente, boa exequibilidade e êxito nos implantes singenêicos. Nos não singenêicos houve rejeição sistemática. A análise  conjunta dos parâmetros estudados permite adiantar a grande utilidade do modelo e os subsídios que trará para estudos futuros no campo da alotransplantação.

Toxoplasma gondii vs radiação ionizante: imunidade humoral e celular em baço e intestino de camundongos isogênicos imunizados com taquizoítos irradiados por Cobalto 60 / Toxoplasma gondii vs ionizing radiation: Cell and humoral immunity in spleen and gut of isogenic mice immunized with 60Co irradiated tachyzoites

Toxoplasma gondii vs radiação ionizante: Imunidade humoral e celular em baço e intestino de camundongos isogênicos imunizados com taquizoítos irradiados por Cobalto 60 Andrés Jimenez Galisteo Jr. Estudamos o desenvolvimento de uma vacina para toxoplasmose utilizando a radiação ionizante como ferramenta. Aqui avaliamos o desenvolvimento da imunidade sistêmica e intestinal e a resistência à infecção, em diferentes camundongos imunizados, por via oral e parenteral, com taquizoítos irradiados a 255 Gy e desafiados com cistos da cepa ME49. Camundongos C57Bl/6j, BALB/c e C57Bl/6j IFN--/- foram imunizados com 107 taquizoitos de T. gondii irradiados a 255Gy por diferentes vias. As preparações de taquizoítos irradiados, por via oral e parenteral, induziram produção de imunoglobulinas IgG e IgA no soro de camundongos, sendo predominante a subclasse de IgG2b, determinadas por ELISA. A produção de IgM foi mínima. Os animais imunizados pela via parenteral, apresentaram uma maturação mais rápida da avidez de anticorpos IgG que os animais imunizados por via oral. Houve excreção de IgG, IgA e IgM nas fezes dos animais imunizados, mais intensa nos animais imunizados por via oral. No estudo da imunidade celular induzida por antígeno e detectada for real-time PCR, houve uma grande produção de IFN- por células esplênicas, menor por células das placas de Peyer intestinais, onde houve maior produção de IL-2. Houve proteção em todos os nossos esquemas avaliados, maior nos animais BALB/c. Os animais deficientes de IFN-, não foram afetados pelo processo de imunização e apresentaram produção de IgG e IgA sérico e excreção de S-IgA e S-IgM nas fezes, com menor numero de cistos cerebrais em animais imunizados por via parenteral. Todos nossos dados apontam para a possibilidade do desenvolvimento de uma vacina oral para toxoplasmose, utilizando taquizoítos irradiados, com aplicação prática na imunização de felinos domésticos e selvagens

We are developing a vaccine for toxoplasmosis, using ionizing radiation as a tool. Here we analyzed the production of sytemic and intestinal immunity, with protection studies, in several strains of inbred mice, by oral or parenteral route, using 255 Gy irradiated tachyzoites of T. gondii RH strain, with challenge with cysts of ME- 49 strain. C57Bl/6j, BALB/c and C57Bl/6j IFN--/- mice were immunized with 107 irradiated tachyzoites, be parenteral or oral route. Those preparations, both by parenteral or oral routes, induced the production of specific IgG, mainly of the IgG2b subclass, and IgA immunoglobulins in serum, , as determined by ELISA. IgM production was negligible. Parenteral immunized mice showed higher IgG avidity maturation, as compared to oral immunized mice. Fecal excretion of IgG, IgA and IgM was detected in stools of immunized animals, more intense in oral immunized mice. In cellular immunity studies, induced by antigen, with detection of cytokine production by quantitative real-time PCR, there are a great production of IFN- by spleen cells, with lower levels in Peyer patches cells, where there are a greater IL-2 production. Challenge studies in immunized mice demonstrated protection to infection in all used schedules, greater in BALB/c mice. C57Bl/6j IFN--/- mice, when immunized, showed no signs of disease and produced similar or greater levels of antibodies than wild type mice. They also excreted S-IgA and S-IgM in stools, but with low numbers of brain cysts in parenteral immunized mice, despite similar mortality. Our data points to a fair possibility of use of those irradiated parasites as an oral vaccine, devised to use for veterinary or wild felines vaccination, reducing the production of oocysts by those hosts and interrupting the chain transmission of human toxoplasmosis

Inbred F344 rats as a biologic model of intra-abdominal sepsis / Ratos isogênicos F344 como modelo biológico de sepsis intra-abdominal

Aiming to design a biologic model of acute intra-abdominal sepsis for experimental studies, conventional, isogenic rats F344 were infected with the bacteria Escherichia coli (E.coli), strain 11775, serotype H7:01:K1. Six hours after inoculation with E. coli, the animals - males and females - showed the following symptoms: piloerection, hyperpnea and decreased motor activity. The lethal dosis (LD50), was 6 x 10(5) CFU/ml, analyzed in 32 males and 32 females. The highest mortality rate was observed on the first 24 hours. Liver dysfunction, common in intra-abdominal sepsis, was evaluated at 0, 24, 48 and 168 hours after inoculation, by means of serum enzyme activities. Study of the migration of polymorphonuclear-neutrophil cells (PMN) and mononuclear-macrophage ones (MN) showed a significant increase of PMN in E. coli inoculated males (z > 4.7; P<0.003) and females (z > 6.2; P < 0.0003), when compared to control groups. As for MN cells, there were no differences between inoculated and control groups, in males (z = 2.3; P = 0.0107) and in females (z = 1.8; P = 0.0359) as well. In conclusion, these results show that inbred F344 rats are adequate biologic models for studies of acute, intra-abdominal sepsis.(AU)

Com o objetivo de estudar um modelo biológico de sepsis intra-abdominal aguda para estudos experimentais, foram infectados ratos isogênicos F344, convencionais, com a bactéria Escherichia coli (E.coli), cepa ATCC 11775, sorotipo H7:O1:K1. Os animais inoculados, machos e fêmeas, apresentaram 6 horas após a inoculação por E.coli os seguintes sintomas: arqueamento do dorso, piloereção, hiperpnéia e diminuição das atividades motoras. A dose que produziu 50% de mortalidade (DL50) após 7 dias, determinada pelo método Reed & Muench, foi de 6 x 105 CFU/ml (analisado em 32 machos e 32 fêmeas). A maior concentração de mortalidade foi observada nas primeiras 24 horas. A disfunção hepática, comum em sepsis intra-abdominal, foi avaliada por provas enzimáticas, em 0, 24, 48 e 168 horas após a inoculação. O estudo da migração de células polimorfonucleares-neutrófilos (PMN) e mononucleares-macrófagos (MN) apontou um aumento significante de PMN entre o grupos de machos (z ³ 4,7; p < 0,003) e de fêmeas (z ³ 6,2; p < 0,0003) inoculados E.coli, quando comparados ao grupos controles. Quanto às células MN, não houve diferença entre os grupos inoculados e os controles, tanto para os machos (z=2,3; p = 0,0107), como para as fêmeas (z=1,8; p =0,0359). Em conclusão, estes resultados demonstram que os ratos isogênicos F344 são modelos biológicos adequados para estudos de sepsis intra-abdominal aguda.(AU)

Caracterização fenotípica e estimativa da reatividade cruzada de cepas de Streptococcus equi isoladas de eqüinos da região sul do Rio Grande do Sul / Characterization and evaluation of cross reactivity of strains of Streptococcus equi recovered from horses in shouthern Rio Grande do Sul, Brazil

Streprococcus equi é o agente causador da Adenite eqüina, uma das mais disseminadas e comuns enfermidades que acomete eqüinos. Essa doença altamente contagiosa apresenta como principais sinais clínicos febre e linfoadenite com formação de abscessos na região de garganta. Vacinas contra a enfermidade tem sido usadas, mas não conferem proteção eficiente contra o agente. No presente trabalho foram caracterizadas 13 cepas de Streptococcus equi isoladas de materiais provenientes de 35 eqüinos com manifestações clínicas de Adenite Equina na região sul do Rio Grande do Sul. Prepararam-se vacinas monovalentes com as cepas de S. equi isoladas. Camundongos Balb/c isogênicos foram vacinados com as vacinas produzidas e com duas vacinas comerciais para garrotilho nos dias 0 e 14. Coletaram-se amostras de sangue nos dias 0, 14, 28 e 56. Titularam-se anticorpos pelo teste de ELISA, e estimaram-se os índices de reatividade cruzada. De 35 amostras coletadas, 13 foram de S. equi, das quais cinco produziram ácido a partir de algum açúcar, comportando-se como cepas atípicas. Destas, quatro só fermentaram açúcares em meio enriquecido com soro eqüino inativado. Os IRC demonstraram que as cepas de S. equi estudadas pertencem a um mesmo sorogrupo, entanto os IRC das vacinas comerciais variaram de 23 a 46 com as cepas de campo, demonstrando baixa reatividade

Streptococcus equi is the causative agent of strangles, one of the most widespread and costly horse diseases. The disease is highly contagious, and common symptoms are fever and lynphadenitis with abscesses in the neck region. Vaccines against strangles have been used but do not confer efficient protection against infection with Streptococcus equ i. In this paper, Strains of Streptococcus equi recovered from thirty-five horses with clinical Strangles in southern Rio Grande do Sul, Brazil, were characterized. Monovalent inactivated vaccines were produced with the strains. Groups of isogenic Balb/c mice were vaccinated on days 0 and 14 with the vaccines and with two commercial vaccines for strangles. Blood samples were collected on days 0, 14, 28, 56 and 70. Antibodies were titrated through ELISA using homologous and heterologous antigens, and Cross Reactivy Indices estimated. Thirteen strains of S. equi were recovered from the thirty-five samples studied. Five of them produced acid from some of the carbohydrates used, behaving as atypical strains. Four of these only metabolised the carbohydrate when equine serum was added. Cross Reactivity Indices showed that the strains studied belonged to the same serogroup. Cross Reactivity Indices among the strains recovered and the vaccines, on the contrary, varied from 23 to 46, showing very low reactivity among them