Anti-Leptospira spp. antibodies in wild mammals in the municipality of Monte Mor, São Paulo State, Brazil / Anticorpos anti-Leptospira spp. em mamíferos silvestres do município de Monte Mor, estado de São Paulo, Brasil

Leptospirosis is a potentially fatal zoonosis caused by Leptospira bacteria. Some animal host species are adapted to specific serovars being potential carriers and environmental dispersers. From 2009 to 2011, 45 wild mammals (39 opossums Didelphis albiventris, four porcupines Sphiggurus villosus, one coypu Myocastor coypus and one capybara Hidrochoerus hidrochaeris) found by citizens in anthropic areas of Monte Mor municipality were captured, restrained and had sera samples collected for Leptospira antibody detection. The samples were titrated by the microagglutination technique (MAT) for different serogroups. A total of 35.56% (16/45) animals were reactive for Leptospira antibodies for 11 different serogroups. The most frequent serovar, among the 12 identified, was Icterohaemorrhagiae (6/16), followed by Gryppotyphosa (4/16) and Pyrogenes (2/16). Didelphis albiventris, the most abundant species in the study, had a prevalence of 35.9% (14/39) for Leptospira antibodies, while S. villosus had 0% (0/4), M. coypus (1/1) and H. hydrochaeris (1/1) 100%. Among the seropositive D. albiventris, 35.71% (5/14) and 28.57% (4/14) seroreacted for Leptospira interrogans species, serogroups Icterohaemorrhagiae and Gryppotyphosa respectively, indicating environmental contamination by these bacteria and the possibility of exposure and infection of humans and domestic animals in the studied area.

A leptospirose é uma zoonose potencialmente fatal causada por bactérias do gênero Leptospira. Espécies animais hospedeiras adaptadas a sorovares específicos podem ser portadoras e dispersoras ambientais da bactéria. De 2009 a 2011, 45 mamíferos silvestres (39 gambás Didelphis albiventris, quatro ouriços Sphiggurus villosus, um ratão-do-banhado Myocastor coypus e uma capivara Hidrochoerus hidrochaeris) encontrados por munícipes em áreas antrópicas de Monte Mor, SP, foram capturados, contidos e tiveram amostras de soro coletadas para detecção de anticorpos para Leptospira. As amostras foram tituladas pela técnica de soroaglutinação microscópica (MAT) para diferentes sorogrupos. Um total de 35,56% (16/45) animais foram reagentes para presença de anticorpos para um total de 11 sorogrupos diferentes. O sorovar dominante mais frequente, dentre os 12 identificados, foi o Icterohaemorrhagiae (6/16), seguido de Gryppotyphosa (4/16) e Pyrogenes (2/16). Didelphis albiventris, espécie mais abundante no estudo, apresentou uma prevalência de 35,9% (14/39) de anticorpos anti-Leptospira, enquanto S. villosus teve 0% (0/4) e ambos M. coypus (1/1) e H. hidrochaeris (1/1) 100%. Dentre os Didelphis albiventris avaliados, houve maior frequência de reatividade sorológica à Leptospira interrogans, sorogrupos Icterohaemorrhagiae, com 35,71% (5/14) e Gryppotyphosa com 28,57% (4/14), indicando contaminação ambiental por tais leptospiras e a possibilidade de exposição e infecção de humanos e animais domésticos para tais bactérias na área estudada.

Anti-Leptospira spp. antibodies in wild mammals in the municipality of Monte Mor, São Paulo State, Brazil / Anticorpos anti-Leptospira spp. em mamíferos silvestres do município de Monte Mor, estado de São Paulo, Brasil

Leptospirosis is a potentially fatal zoonosis caused by Leptospira bacteria. Some animal host species are adapted to specific serovars being potential carriers and environmental dispersers. From 2009 to 2011, 45 wild mammals (39 opossums Didelphis albiventris, four porcupines Sphiggurus villosus, one coypu Myocastor coypus and one capybara Hidrochoerus hidrochaeris) found by citizens in anthropic areas of Monte Mor municipality were captured, restrained and had sera samples collected for Leptospira antibody detection. The samples were titrated by the microagglutination technique (MAT) for different serogroups. A total of 35.56% (16/45) animals were reactive for Leptospira antibodies for 11 different serogroups. The most frequent serovar, among the 12 identified, was Icterohaemorrhagiae (6/16), followed by Gryppotyphosa (4/16) and Pyrogenes (2/16). Didelphis albiventris, the most abundant species in the study, had a prevalence of 35.9% (14/39) for Leptospira antibodies, while S. villosus had 0% (0/4), M. coypus (1/1) and H. hydrochaeris (1/1) 100%. Among the seropositive D. albiventris, 35.71% (5/14) and 28.57% (4/14) seroreacted for Leptospira interrogans species, serogroups Icterohaemorrhagiae and Gryppotyphosa respectively, indicating environmental contamination by these bacteria and the possibility of exposure and infection of humans and domestic animals in the studied area.(AU)

A leptospirose é uma zoonose potencialmente fatal causada por bactérias do gênero Leptospira. Espécies animais hospedeiras adaptadas a sorovares específicos podem ser portadoras e dispersoras ambientais da bactéria. De 2009 a 2011, 45 mamíferos silvestres (39 gambás Didelphis albiventris, quatro ouriços Sphiggurus villosus, um ratão-do-banhado Myocastor coypus e uma capivara Hidrochoerus hidrochaeris) encontrados por munícipes em áreas antrópicas de Monte Mor, SP, foram capturados, contidos e tiveram amostras de soro coletadas para detecção de anticorpos para Leptospira. As amostras foram tituladas pela técnica de soroaglutinação microscópica (MAT) para diferentes sorogrupos. Um total de 35,56% (16/45) animais foram reagentes para presença de anticorpos para um total de 11 sorogrupos diferentes. O sorovar dominante mais frequente, dentre os 12 identificados, foi o Icterohaemorrhagiae (6/16), seguido de Gryppotyphosa (4/16) e Pyrogenes (2/16). Didelphis albiventris, espécie mais abundante no estudo, apresentou uma prevalência de 35,9% (14/39) de anticorpos anti-Leptospira, enquanto S. villosus teve 0% (0/4) e ambos M. coypus (1/1) e H. hidrochaeris (1/1) 100%. Dentre os Didelphis albiventris avaliados, houve maior frequência de reatividade sorológica à Leptospira interrogans, sorogrupos Icterohaemorrhagiae, com 35,71% (5/14) e Gryppotyphosa com 28,57% (4/14), indicando contaminação ambiental por tais leptospiras e a possibilidade de exposição e infecção de humanos e animais domésticos para tais bactérias na área estudada.(AU)

AVALIAÇÃO DA EFICIÊNCIA DE VACINAS COMERCIAIS PARA O CONTROLE DA LEPTOSPIROSE EM CANINOS NATURALMENTE EXPOSTOS A INFECÇÃO

A leptospirose é uma zoonose infectocontagiosa determinada por bactérias do gênero Leptospira sp. que acomete animais domésticos, selvagens e seres humanos. Um fator muito importante em relação à vacinação dos cães contra a leptospirose é a proteção a longo prazo que as vacinas devem conferir, contra o estado de portador renal. Esta proteção é especialmente importante porque cães podem carrear leptospiras na urina e disseminá-las de forma intermitente, tornandose uma ameaça à saúde pública. Considerando que a principal forma de prevenção da leptospirose em cães é a vacinação e as limitações existentes em sua utilização, este trabalho teve por objetivo avaliar as respostas pós-vacinais em cães naturalmente expostos a infecção, quanto i) a intensidade da resposta humoral, ii) a duração da resposta humoral, iii) se IgG foi produzida, iv) se os anticorpos eram neutralizantes; iv) se os anticorpos poderiam prevenir a colonização e eliminação renal. Um total de 118 cães soronegativos e PCR-negativos, sem sintomas aparentes de leptospirose, não vacinados há 12 meses e exames de sangue normais, foram incluídos no estudo. Todos os cães foram monitorados e avaliados por 365 dias. Os cães foram divididos randomicamente em grupo A (cães vacinados, n = 94) e Grupo B cães não-vacinados (grupo controle, n = 24). O grupo A foi subdividido em três grupos, Grupo A1 composto por 32 cães imunizados com a vacina 1, Grupo A2 composto por 32 cães imunizados com a vacina 2 e Grupo A3 composto por 30 cães imunizados com a vacina 3. Amostras de sangue foram coletadas para teste de aglutinação microscópica (MAT), ELISA e teste de inibição de crescimento (TICL), e urina para PCR.A coleta de sangue foi realizada em todos os cães também nos dias D15, D30, D60, D90, D120, D150, D180, D210, D270 e D365. As coletas de urina também foram realizadas nos dias D90, D180, D270 e D365.A sororreatividade aumentou rapidamente no D15 e, independentemente da marca da vacina, permaneceu elevada até D180 (p <0,05; OD2,6), com aumento na IgG após D30. Anticorpos neutralizantes anti-Leptospira foram detectados no D30. Com relação à liberação de DNA de leptospiras,46,8% dos animais do Grupo A foram PCR-positivos ao menos uma vez no estudo, em contraste com 75% de positividade no grupo B (p<0,05), independentemente da marca da vacina. Os resultados indicam que cães podem atuar como carreadores de leptospiras, apesar da profilaxia com vacinas comerciais. No entanto, uma redução significativa foi observada nos animais vacinados, indicando uma proteção parcial contra a colonização renal. Os cães são de grande importância na dinâmica de transmissão da leptospirose, pois além de adoecerem, podem se tornar carreadores assintomáticos de leptospiras. Portanto, a vacinação de cães é extremamente importante como medida de controle da leptospirose canina.

Leptospirosis is an infectious contagious zoonosis determined by bacteria of the genus Leptospira sp. that affects domestic animals, wild animals and humans. A very important factor in relation to the vaccination of dogs against leptospirosis is the longterm protection that vaccines must provide against the renal carrier status. This protection is especially important because carrier dogs can carry leptospires in their urine and shed them intermittently, posing a threat to public health. Considerin4 that the main form of prevention of leptospirosis in dogs is vaccination and the existing limitations in its use, this study aimed to evaluate the post-vaccinal responses in dogs naturally exposed to infection, as i) the intensity of the humoral response, ii) the duration of the humoral response, iii) whether IgG was produced, iv) whether the antibodies were neutralizing; iv) whether the antibodies could prevent colonization and renal elimination. A total of 118 seronegative and PCR-negative dogs, with no apparent symptoms of leptospirosis, unvaccinated for 12 months and normal blood tests, were included in the study. All dogs were monitored and evaluated for 365 days. Dogs were randomly divided into Group A (vaccinated dogs, n = 94) and Group B non-vaccinated dogs (control group, n = 24). Group A was subdivided into three groups, Group A1 composed of 32 dogs immunized with vaccine 1, Group A2 composed of 32 dogs immunized with vaccine 2 and Group A3 composed of 30 dogs immunized with vaccine 3. Blood samples were collected for microscopic agglutination test (MAT), ELISA and growth inhibition test (GIT), and urine for PCR. Blood collection was performed in all dogs also on days D15, D30, D60, D90, D120, D150, D180, D210, D270 and D365. Urine collections were also performed on days D90, D180, D270 and D365. Seroreactivity increased rapidly at D15 and, regardless of vaccine brand, and remained elevated until D180 (p < 0.05; OD 2.6) with an increase in IgG after D30. Anti-Leptospira neutralizing antibodies were detected on D30. Regarding the release of DNA from leptospires, 46,8% of animals in Group A were PCR-positive at least once in the study, in contrast to 75% positivity in group B (p<0.05), regardless of vaccine brand. The results indicate that dogs can act as carriers of leptospires, despite prophylaxis with commercial vaccines. However, a significant reduction was observed in the vaccinated animals, indicating partial protection against renal colonization. Dogs are of great importance in the dynamics of leptospirosis transmission, as in addition to becoming ill, they can become asymptomatic carriers of leptospires. Therefore, dog vaccination is extremely important as a control measure for canine leptospirosis.

Perfil sanitário de pequenos ruminantes do estado de Sergipe, Brasil / Sanitary profile of small ruminants the state of Sergipe, Brazil

Objetivou-se com essa revisão realizar um levantamento dos dados disponíveis quanto às características das criações de pequenos ruminantes no estado de Sergipe e a frequência sorológica e bacteriológica das principais enfermidades que acometem essas espécies. As coletas de material dos estudos disponíveis ocorreram entre os anos de 2008 e 2014 e demonstraram que a maioria dos rebanhos são da espécie ovina, da raça Santa Inês, criados em sistema semiextensivo, enquanto os caprinos representam uma menor parte sendo, em geral, de mestiços voltados à produção leiteira. Dentre as enfermidades foi observada a ocorrência principalmente de anticorpos contra o T. gondii, N. caninum e Leptispiras e em menor numero contra Lentivirus de Pequenos Ruminantes, B. ovis e Micoplasma. Pesquisas bacteriológicas evidenciaram a presença da linfadenite caseosa cutânea e visceral, além de ocorrência de falhas no manejo de ordenha e secagem dos animais em lactação. Importantes agentes etiológicos estão presentes nos rebanhos Sergipanos sendo necessária a adoção de práticas de manejo sanitários para a manutenção da saúde dos animais.

The objective of this review was to study the available data regarding the characteristics of small ruminant bred in the state of Sergipe and the serological and bacteriological frequency of the main diseases that affect these species. Material collections from the available studies occurred between 2008 and 2014 and showed that the majority of the herds are of the Santa Inês breed, raised in a semiextensive system, whereas the goats represent a smaller part being in general Mestizos for milk production. Among the diseases, the presence of antibodies against T. gondii, N. caninum and Leptispiras was observed, and in a smaller number against Lentivirus of Small Ruminants, B. ovis and Mycoplasma. Bacteriological research evidenced the presence of cutaneous and visceral caseous lymphadenitis, besides occurrence of failures in the management of milking and drying of lactating animals. Important etiological agents are present in the Sergipe herds and it is necessary to adopt sanitary management practices for the maintenance of animal health.

Perfil sanitário de pequenos ruminantes do estado de Sergipe, Brasil / Sanitary profile of small ruminants the state of Sergipe, Brazil

Objetivou-se com essa revisão realizar um levantamento dos dados disponíveis quanto às características das criações de pequenos ruminantes no estado de Sergipe e a frequência sorológica e bacteriológica das principais enfermidades que acometem essas espécies. As coletas de material dos estudos disponíveis ocorreram entre os anos de 2008 e 2014 e demonstraram que a maioria dos rebanhos são da espécie ovina, da raça Santa Inês, criados em sistema semiextensivo, enquanto os caprinos representam uma menor parte sendo, em geral, de mestiços voltados à produção leiteira. Dentre as enfermidades foi observada a ocorrência principalmente de anticorpos contra o T. gondii, N. caninum e Leptispiras e em menor numero contra Lentivirus de Pequenos Ruminantes, B. ovis e Micoplasma. Pesquisas bacteriológicas evidenciaram a presença da linfadenite caseosa cutânea e visceral, além de ocorrência de falhas no manejo de ordenha e secagem dos animais em lactação. Importantes agentes etiológicos estão presentes nos rebanhos Sergipanos sendo necessária a adoção de práticas de manejo sanitários para a manutenção da saúde dos animais.(AU)

The objective of this review was to study the available data regarding the characteristics of small ruminant bred in the state of Sergipe and the serological and bacteriological frequency of the main diseases that affect these species. Material collections from the available studies occurred between 2008 and 2014 and showed that the majority of the herds are of the Santa Inês breed, raised in a semiextensive system, whereas the goats represent a smaller part being in general Mestizos for milk production. Among the diseases, the presence of antibodies against T. gondii, N. caninum and Leptispiras was observed, and in a smaller number against Lentivirus of Small Ruminants, B. ovis and Mycoplasma. Bacteriological research evidenced the presence of cutaneous and visceral caseous lymphadenitis, besides occurrence of failures in the management of milking and drying of lactating animals. Important etiological agents are present in the Sergipe herds and it is necessary to adopt sanitary management practices for the maintenance of animal health.(AU)

Evidence of leptospiral exposure in neotropical primates rescued from illegal trade and a Zoo in Bahia, Brazil / Indícios de exposição a leptospiras em primatas neotropicais resgatados do comércio ilegal e de um Zoológico da Bahia

Few studies have compared the seroprevalence of antileptospiral agglutinins with the demonstration of urinary shedding of leptospires or evidence of active infection in the bloodstreams of non-human primates. The study population consists of 58 animals, including d 42 monkeys from the Zoological Park of Salvador (Parque Zoobotânico Getúlio Vargas), Bahia, Brazil. The study also evaluated 16 primates (Cebus sp.) rescued from illegal trade that were housed in the Wildlife Rehabilitation Center of Salvador (CETAS), Bahia, Brazil. The seroprevalence of antileptospiral antibodies was low (2%) in the animals from the Zoo. A higher rate (31%) was observed among the animals that were rescued from illegal trade in the state of Bahia. Even if all the blood and urine samples were negative for leptospiral DNA fragments, the high frequency of serological evidence of exposure suggests a potential risk of leptospirosis transmission when keeping these animals as pets.(AU)

Poucos estudos compararam a soroprevalência de aglutininas antileptospira com a demonstração de excreção urinária de leptospiras ou evidência de infecção ativa em primatas não humanos. A população estudada consistiu em 58 animais, sendo 42 primatas do Parque Zoobotânico Getúlio Vargas, Bahia, Brasil. O estudo avaliou ainda 16 primatas (Cebus sp.) resgatados do tráfico ilegal e abrigados no Centro de Triagem de Animais Silvestres Chico Mendes, Salvador, Bahia, Brasil. A soroprevalência de anticorpos antileptospira foi baixa (2%) nos animais do Zoológico. Uma taxa mais elevada (31%) foi observada nos animais resgatados do tráfico ilegal. Mesmo que todas as amostras de sangue e urina tenham sido negativas para DNA de leptospiras, a alta frequência de evidência de exposição nos animais de origem selvagem indicam o risco potencial da adoção de primatas como animais de estimação.(AU)

Evidence of leptospiral exposure in neotropical primates rescued from illegal trade and a Zoo in Bahia, Brazil / Indícios de exposição a leptospiras em primatas neotropicais resgatados do comércio ilegal e de um Zoológico da Bahia

Few studies have compared the seroprevalence of antileptospiral agglutinins with the demonstration of urinary shedding of leptospires or evidence of active infection in the bloodstreams of non-human primates. The study population consists of 58 animals, including d 42 monkeys from the Zoological Park of Salvador (Parque Zoobotânico Getúlio Vargas), Bahia, Brazil. The study also evaluated 16 primates (Cebus sp.) rescued from illegal trade that were housed in the Wildlife Rehabilitation Center of Salvador (CETAS), Bahia, Brazil. The seroprevalence of antileptospiral antibodies was low (2%) in the animals from the Zoo. A higher rate (31%) was observed among the animals that were rescued from illegal trade in the state of Bahia. Even if all the blood and urine samples were negative for leptospiral DNA fragments, the high frequency of serological evidence of exposure suggests a potential risk of leptospirosis transmission when keeping these animals as pets.(AU)

Poucos estudos compararam a soroprevalência de aglutininas antileptospira com a demonstração de excreção urinária de leptospiras ou evidência de infecção ativa em primatas não humanos. A população estudada consistiu em 58 animais, sendo 42 primatas do Parque Zoobotânico Getúlio Vargas, Bahia, Brasil. O estudo avaliou ainda 16 primatas (Cebus sp.) resgatados do tráfico ilegal e abrigados no Centro de Triagem de Animais Silvestres Chico Mendes, Salvador, Bahia, Brasil. A soroprevalência de anticorpos antileptospira foi baixa (2%) nos animais do Zoológico. Uma taxa mais elevada (31%) foi observada nos animais resgatados do tráfico ilegal. Mesmo que todas as amostras de sangue e urina tenham sido negativas para DNA de leptospiras, a alta frequência de evidência de exposição nos animais de origem selvagem indicam o risco potencial da adoção de primatas como animais de estimação.(AU)

LEPTOSPIROSE CANINA NO MUNICÍPIO DE FRANCO DA ROCHA, SP

A leptospirose é uma zoonose com distribuição mundial que afeta várias espécies,incluindo animais domésticos, silvestres e os seres humanos. Causada porespiroquetas patogênicas do gênero Leptospira. A doença é endêmica nos países tropicais, mas também ocorre em zonas subtropicais e temperadas e sua ocorrência é favorecida pelas condições geoclimáticas e sociais, que facilitam a transmissão e contribuem para crescente incidência da doença. A leptospirose tem sido reconhecida como um importante problema emergente de saúde pública global e os cães também podem desempenhar um papel importante na manutenção das leptospiras no ambiente urbano e na sua transmissão aos seres humanos devido ao contato próximo com estes. Os cães errantes e os cães de abrigo são consideradosos mais suscetíveis à infecção por leptospiras devido a um maior grau de exposição ambiental ao agente/patógeno. Este projeto tem como objetivo realizar um estudo sobre a leptospirose canina no município de Franco da Rocha, SP por meio de um levantamento sorológico e do isolamento de leptospiras e para isso, foram coletadas207 amostras de sangue e seis amostras de urina de cães errantes, comunitários e de abrigo do município. Foram sororreagentes 36 do total de 207 cães (17,39%) para pelo menos um sorovar testado, com títulos variando de 100 a 12800. Seis cães (16,66%) foram sororreativos com títulos 800 e 4 cães (11,11%) apresentaram reações cruzadas para até oito sorovares diferentes. O sorovar mais frequente foi o Canicola com 12 amostras (33,33%), seguidos do sorovar Butembo com 9 amostras (25,0%) e Australis com 3 amostras (8,33%), os sorovares Hardjo, Icterohaemorrhagiae, Pomona e Sentot foram sororreagentes com duas amostras cada (5,55%) e os sorovares Castellonis, Hebdomadis e Hardjobovis apresentaram uma amostra reagente (2,17%). No entanto o título mais alto foi detectado contra o sorovar Butembo. Os cultivos bacterianos de leptospiras das amostras de urinas coletadas foram negativos. Os resultados sugerem que a população canina pode desempenhar um papel importante na infecção por leptospiras para diversas espécies nesta região.

Leptospirosis is a zoonosis with worldwide distribution that affects several species, including domestic animals, wild animals and humans. It is caused by pathogenic spirochetes of the genus Leptospira. The disease is endemic in tropical countries, but it also occurs in subtropical and temperate zones and its occurrence is favored by geoclimatic and social conditions, which facilitate transmission and contribute to the increasing incidence of the disease. Leptospirosis has been recognized as an important emerging global public health problem and dogs can alsoplay an important role in maintaining leptospires in the urban environment and in transmitting them to humans due to close contact with them. Stray dogs and shelter dogs are considered to be the most susceptible to leptospiral infection due to a greater degree of environmental exposure to the agent / pathogen. This project aims to conduct a study on canine leptospirosis in the municipality of Franco da Rocha, SP by means of a serological survey and isolation of leptospires and for this purpose, 207 blood samples and six urine samples from community stray dogs were collected and shelter in the municipality. 36 out of 207 dogs (17.39%) were seroreactive for at least one tested serovar, with titers ranging from 100 to 12800. Six dogs (16.66%) were seroreactive with titers 800 and 4 dogs (11,11 %) presented cross reactions for up to eight different serovars. The most frequent serovar was Canicola with 12 samples (33.33%), followed by Butembo serovar with 9 samples (25.0%) and Australis with 3 samples (8.33%), Hardjo, Icterohaemorrhagiae, Pomona and Sentot were seroreactive with two samples each (5.55%) and the serovars Castellonis, Hebdomadis and Hardjobovis presented a reagent sample (2.17%). However, the highest titer was detected against the Butembo serovar. The bacterial leptospiral cultures of the collected urine samples were negative. The results suggest that this canine population may play an important role in leptospiral infection for several species in this region.

AGLUTININAS ANTI-Leptospira spp EM SUÍNOS ABATIDOS EM MATADOURO-FRIGORÍFICO

A leptospirose assume grande importância econômica em criações de suínos, devido às grandes perdas e aos transtornos reprodutivos ocasionados pela doença. As sorovariedades mais envolvidas na infecção dos suínos são: Pomona, Icterohaemorrhagiae, Canicola, Gryppotyphosa, Bratislava e Copenhageni.. Assim, pretendeu-se com o presente trabalho determinar a frequência das sorovariedades presentes e a distribuição espacial da Leptospira spp. em suínos em determinadas mesorregiões de alguns estados brasileiros. Foram colhidas 549 amostras de sangue de suínos em matadouros-frigoríficos das mesorregiões: Norte Pioneiro Paranaense (PR), Centro-Sul Paranaense (PR), Oeste Catarinense (SC) microrregiões Chapecó, Joaçaba e Concórdia , Sudoeste de Mato Grosso do Sul (MS), Ribeirão Preto (SP), Sul Goiano (GO). As amostras de soro sanguíneo foram submetidas ao teste de soroaglutinação microscópica (SAM), para o diagnóstico da leptospirose, utilizando 24 sorovares de leptospiras (patogênicas e saprófitas). Foram observados 217 (39,5%) suínos sororreagentes a pelo menos uma das 24 sorovariedades testadas, com título igual ou superior a 100. Os sorovares predominantes foram Icterohaemorrhagiae nos estados de Goiás (44,8% - Sul ), Mato Grosso do Sul (18,5% - Sudoeste) e Paraná (10,1% -Norte Pioneiro e 55,2%-Centro Sul). Em Santa Catarina houve predominância de Icterohaemorrhagiae (40,5% - Chapec

CARACTERIZAÇÃO SOROEPIDEMIOLÓGICA DA LEPTOSPIROSE EM BOVINOS ABATIDOS EM FRIGORÍFICOS DO SUDOESTE GOIANO

A leptospirose é uma zoonose de grande importância em saúde pública. Além disso, a Leptospira sp. é considerada uma das bactérias mais relacionadas com problemas reprodutivos em bovinos. O objetivo deste trabalho foi investigar a frequência da leptospirose em bovinos provenientes de 14 dos 18 munícipios presentes na região do Sudoeste Goiano. Foram analisadas 2.006 amostras de soro sanguíneo por meio do teste de soroaglutinação microscópica (SAM), perante uma bateria de 32 sorovares de leptospira, em que, eram considerados positivos títulos iguais ou superiores a 100. A frequência da leptospirose bovina nessa região foi 70,1%. O sorovar mais provável foi o Guaricura (30,80%), seguido dos sorovares Wolffi (30,51%), Shermani (9,39%), Hardjo (7,54%), Bananal (4,27%) e Pomona (3,27%). O resultado obtido demostra que a Leptospirose está amplamente difundida entre os bovinos desta região, verificando assim, a importância da implementação de medidas de controle eficientes e direcionadas para as principais fontes de infecção, sendo a vacinação sistemática com a utilização dos sorovares prevalentes na região uma das mais importantes medidas para prevenção da leptospirose.

Leptospirosis is a great of importance in public health zoonosis, Leptospira sp. it is considered to be one of the most responsible bacterias for reproductive problems in cattle. The objective of this study was to investigate the frequency of leptospirosis in cattle from 14 of the 18 districts in the Southwest region of the state of Goias. A total of 2,006 blood serum samples were analyzed by the microscopic serum agglutination test (SAM) against a battery of 32 leptospira serovars, where titers of 100 or greater were considered positive. The frequency of bovine leptospirosis in this region was 70.1 %. The most probable serovar was Guaricura (30.80%), followed by Wolffi (30.51%), Shermani (9.39%), Hardjo (7.54%), Bananal (4.27%) and Pomona serovars. (3.27%). The results shows that Leptospirosis is widespread among cattle in this region, therefore, this verifies the importance of implementing efficient and targeted control measures for the main sources of infection, being systematic vaccination with use of serovars prevalente in the region one of most importante measures for the prevention of leptospirosis.

ESTUDO DA LEPTOSPIROSE EM PEQUENOS RUMINANTES NO BIOMA CAATINGA

A leptospirose é uma enfermidade de caráter zoonótico, que apresenta ampla distribuição mundial, sendo apontada como uma das enfermidades mais frequentes que provocam distúrbios reprodutivos nos pequenos ruminantes. O objetivo do trabalho foi determinar a frequência de caprinos fêmeas e ovinos machos soropositivos para pesquisa de anticorpos anti-Leptospira spp., bem como identificar os sorogupos predominantes no Semiárido paraibano, detectar DNA de Leptospira spp. e isolamento bacteriológico de Leptospira sp., no trato urinário de caprinos fêmeas e ovinos machos abatidos no matadouro público de Patos, PB. Descreve-se 34 fêmeas adultas da espécie caprina no capítulo I e 24 machos adultos da espécie ovina no capítulo II. Coletou-se amostras de tecido renal e bexiga na linha de abate para posterior detecção molecular por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR) e isolamento bacteriológico. As amostras com melhores reações foram amplificadas e submetidas ao sequenciamento genético. O sangue coletado foi destinado à investigação sorológica por meio do teste de aglutinação 2 microscópica (SAM), utilizando-se 24 sorovares como antígenos e ponto de corte 1:100. 2No capítulo I a frequência de sororeativos encontrada foi de 17,6 %, com títulos variando entre 100 a 200. Os sorovares Autumnalis, Icterohaemorrhagiae, Tarassovi foram os mais frequentes nesse estudo com 33,3% cada. Na PCR foi encontrado DNA leptospírico em 2 17,6% das amostras de tecido renal e 5,8% de bexiga. Foi possível realizar o sequenciamento em uma amostra de tecido renal com 99% de similaridade à L. interrogans e isolamento em duas amostras de tecido renal (5,8%) e uma de bexiga (2,9%). No Capítulo II não foi encontrado animal sororeativo. Na PCR foi encontrado DNA leptospírico em 16,0% das amostras de tecido renal e 41,6% de bexiga. Foi possível realizar o sequenciamento em três amostras de tecido renal com 99% de similaridade à L. interrogans e isolamento em duas amostras de tecido renal (8,3%) e duas de bexiga (8,3%). Conclui-se que o trato urinário é um importante local de colonização de leptospiras em pequenos ruminantes criados no semiárido nordestino. Os resultados moleculares demonstram a grande quantidade de animais assintomáticos portadores de leptospiras, enfatizando a necessidade de associar a MAT e PCR para um seguro diagnóstico da leptospirose em caprinos e ovinos.

Leptospirosis is a disease of a zoonotic character, which has a wide worldwide distribution, was identified as one of the most frequent illnesses that cause reproductive disorders in small ruminants. The objective of the work was to determine the frequency of seropositive female goats and male sheep to search for anti-Leptospira spp. Antibodies, as well as to identify the predominant serogroups in the Semi-arid of Paraiba, to detect Leptospira spp DNA. and bacteriological isolation of Leptospira sp., in the urinary tract of female goats and male sheep slaughtered in the public slaughterhouse in Patos, PB. 34 adult females of the caprine species were described in Chapter I and 24 adult males of the sheep species in chapter II. Samples of kidney and bladder tissue were collected in the slaughter line for later molecular detection through polymerase chain reaction (PCR) and bacteriological isolation. The samples with the best response were amplified and subjected to genetic sequencing. The blood collected was used for serological investigation using the microscopic agglutination test (SAM), using 24 serovars as antigens and a cut-off point of 1: 100. In Chapter I, the frequency of seroreactivity found was 17.6%, with titers ranging from 100 to 200. The serovars Autumnalis, Icterohaemorrhagiae, Tarassovi were the most frequent in this study by 33.3% each. In PCR, leptospiral DNA was found in 17.6% of renal tissue samples and 5.8% of the bladder. It was possible to perform the sequencing in a sample of renal tissue with 99% similarity to L. interrogans and isolation in two samples of renal tissue (5.8%) and one of the bladders (2.9%). In Chapter II, no seroreactive animal was found. In PCR, leptospiral DNA was found in 16.0% of the renal tissue samples and 41.6% of the bladder. It was possible to perform the sequencing in three selected renal tissue with 99% similarity to L. interrogans and isolation in two samples of renal tissue (8.3%) and two of the bladder (8.3%). We conclude that the urinary tract is a necessary site for the colonization of leptospires in small ruminants raised in the Northeast semiarid. The molecular results show a large number of asymptomatic animals with leptospires, require to associate MAT and PCR for a safe diagnosis of leptospirosis in goats and sheep.

Isolamento e caracterização molecular de Leptospira sp. em animais silvestres do Semiárido da Paraíba, Brasil

A leptospirose é uma doença bacteriana zoonótica que está entre as mais difundidas globalmente, acometendo animais domésticos, silvestres e ser humano. Essa infecção é causada por espécies patogênicas de Leptospira sp., que podem penetrar no hospedeiro por meio da pele íntegra ou lesionada, por contato direto com a urina de um animal infectado ou através da água contaminada. A ocorrência de leptospirose está ligada a fatores ambientais e a presença de animais reservatórios, sendo que para o controle da doença um passo crucial é a identificação desses hospedeiros que são fontes de infecção, os quais são responsáveis por disseminar o agente no ambiente. Uma série de estudos desenvolvidos no Semiárido do Nordeste permitem o entendimento sobre a ocorrência da leptospirose em diversas espécies de animais domésticos, no entanto existe uma lacuna sobre o conhecimento nas espécies silvestres, bem como o papel destes no ciclo de transmissão da doença. Diante disso objetivou-se investigar a ocorrência de Leptospira sp. nas espécies teiú (Tupinambis merianae) e gambá-de-orelha-branca (Didelphis albiventris) do semiárido paraibano. Para isso o Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis (IBAMA) autorizou a captura de 12 teiús e 12 gambás (protocolo Nº57190-1). Amostras de tecido do trato reprodutivo, rim, fígado e bexiga, além da urina, foram coletados para a detecção molecular (nos gambás ainda foi coletado tecido do sistema nervoso central) e tentativa de isolamento, e o soro sanguíneo para o teste sorológico. O teste molecular realizado foi a reação em cadeia da polimerase (PCR) e o sorológico foi a prova de soroaglutinação microscópica (SAM), na tentativa de isolamento foram utilizados os meios de cultura Fletcher, EMJH e EMJH enriquecido com antibióticos, além disso as amostras com amplificação de DNA foram submetidas ao sequenciamento genético. Nos teiús foram encontrados seis (50%) animais com anticorpos anti-Leptospira sp., sendo a maioria das reações para o sorogrupo Tarassovi (50%) e Pyrogenes (33,3%), o DNA leptospiral foi detectado em nove (75%) animais, e os genes de duas amostras (fígado e urina) foram sequenciados e apresentaram identidade com Leptospira interrogans. Nos gambás não foi encontrado anticorpos anti-Leptospira sp., em nenhuma das amostras sorológicas, pela PCR foi detectado o DNA leptospírico no sistema nervoso central (SNC) de cinco animais (41,7%), o gene de uma dessas amostras foi sequenciado e apresentou identidade com Leptospira interrogans. Em nenhuma das espécies houve o crescimento microbiano nos tecidos cultivados. Os resultados mostram que os Tupinambis merianae participam do ciclo epidemiológico da leptospirose no Semiárido, sendo uma fonte de infecção para os animais domésticos e os seres humanos. E a presença de Leptospira sp. no SNC de Didelphis albiventris não permite ainda caracterizar esta essa espécie como reservatório com potencial de transmissão do agente na região, no entanto representa um sítio de localização que precisa ser melhor investigado. Isso evidencia a dificuldade no controle da doença em regiões como o Nordeste brasileiro, onde existe uma diversidade de espécies silvestres, que através do contato indireto acabam disseminando o agente para outros animais.

Leptospirosis is a zoonotic bacterial disease that is among the most widespread globally, affecting domestic animals, wild and humans. This infection is caused by pathogenic species of Leptospira sp., Which can penetrate the host through intact or damaged skin, by direct contact with the urine of an infected animal or through contaminated water. The occurrence of leptospirosis is linked to environmental factors and the presence of reservoir animals, and for the control of the disease a crucial step is the identification of these hosts that are sources of infection, which are responsible for spreading the agent in the environment. A series of studies carried out in the Semi-arid region of the Northeast allow for an understanding of the occurrence of leptospirosis in several species of domestic animals, however there is a gap about knowledge in wild species, as well as their role in the disease transmission cycle. Therefore, the objective was to investigate the occurrence of Leptospira sp. in the species teiú (Tupinambis merianae) and gambá-de-orelha-branca (Didelphis albiventris) from the semiarid region of Paraíba. For this, the Brazilian Institute of the Environment and Renewable Natural Resources (IBAMA) authorized the capture of 12 teiús and 12 possums (protocol Nº57190-1). Samples of tissue from the reproductive tract, kidney, liver and bladder, in addition to urine, were collected for molecular detection (tissue from the central nervous system was still collected) and attempted isolation, and blood serum for serological testing. The molecular test performed was the polymerase chain reaction (PCR) and the serological test was the microscopic agglutination test (SAM), in an attempt to isolate were used the medium culture Fletcher, EMJH and EMJH enriched with antibiotics, in addition to the samples with amplification of DNA were subjected to genetic sequencing. In the teiús, six (50%) animals were found with anti-Leptospira sp. antibodies, the majority of the reactions for the serogroup Tarassovi (50%) and Pyrogenes (33,3%), the leptospiral DNA was detected in nine (75%) animals, and the genes from two samples (liver and urine) were sequenced and showed identity to Leptospira interrogans. In opossums, no anti-Leptospira sp. antibodies were found. In none of the serological samples, the leptospiric DNA was detected in the central nervous system (SNC) of five animals (41.7%), the gene from one of these samples was sequenced. and presented identity with Leptospira interrogans. In none of the species there was microbial growth in the cultured tissues. The results show that the Tupinambis merianae participate in the epidemiological cycle of leptospirosis in the Semiarid region, being a source of infection for domestic animals and humans. And the presence of Leptospira sp. no SNC of Didelphis albiventris does not yet allow characterizing this species as a reservoir with potential for agent transmission in the region, however it represents a location that needs to be further investigated. This shows a difficulty in controlling the disease in regions such as Northeastern Brazil, where there is a diversity of wild species, which through indirect contact has just disseminated the agent to other animals.

Contribuições para o diagnóstico e epidemiologia da leptospirose em ovinos criados em condições semiáridas

Em regiões de clima semiárido existem fatores ambientais que são adversos à sobrevivência e propagação das leptospiras, assim o papel das peculiaridades nas rotas de transmissão que independem do ambiente precisam ser melhor investigadas. Dessa forma, buscou-se gerar contribuições para o diagnóstico e epidemiologia da infecção por Leptospira sp. em ovinos criados em condições semiáridas. No Capítulo I, descreveu um estudo a partir de 104 ovelhas fêmeas adultas amostradas durante o período seco e chuvoso, compreendidos entre os anos de 2018 e 2019. Coletou-se na linha de abate amostras de fluido vaginal, urina, bexiga, rim, útero, tuba uterina, ovário e placenta para posterior detecção molecular por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR). As amostras de melhores reações foram amplificadas e submetidas ao sequenciamento genético. Para o cultivo bacteriológico, apenas fluido vaginal e urina foram utilizados, enquanto o sangue foi destinado à investigação sorológica por meio do teste de aglutinação microscópica (SAM). No total, foram detectados anticorpos anti- Leptospira sp. em 26 (25%) dos animais analisados pela SAM na diluição inicial 1:50, enquanto que 69 (66,3%) animais possuíam, no mínimo, um órgão/fluido com presença de DNA leptospiral. Das 758 amostras de órgãos/fluidos dos tratos genital e urinário, em 519 (68,5%) amostras havia presença de DNA. Na análise das variáveis estatísticas de cada tipo de material biológico entre período seco e chuvoso, apenas no fluido vaginal houve diferença significativa entre as proporções (p <0,001), no qual o período seco se sobrepôs. Foi possível realizar o sequenciamento em nove amostras com 99% de similaridade à L. interrogans e isolamento em três amostras de fluido vaginal. E em três cultivos de fluido vaginal foram obtidos resultados positivos na PCR, indicando a recuperação de estirpes viáveis. No Capítulo II foi realizado um estudo para detectar a transmissão vertical de Leptospira sp. em fetos de ovinos abatidos no Semiárido Nordestino. Após abate das progenitoras, os conceptos foram retirados do ambiente uterino e conduzidos ao laboratório, onde foram necropsiados, Amostras de sangue das matrizes e dos fetos foram coletados para investigação da ocorrência de anticorpos anti-Leptospira sp. através da SAM. Para análise molecular através da PCR a partir dos conceptos, foram coletadas amostras do sistema nervoso central (SNC), pulmão, fígado, baço, conteúdo estomacal, líquido peritoneal, rim, bexiga, urina e sistema reprodutor e naqueles que estavam no início da formação, as amostras consistiram apenas em sistema nervoso central e macerado do tórax (ovóide córmico). Foram amostradas 23 progenitoras e destas, sete apresentaram anticorpos a partir do título 50. Em relação aos fetos, foram coletados 29, sendo dois (6,9%) soropositivos na titulação 10 para os sorogrupos Pyrogenes, Tarassovi e Autumnalis. Na PCR, 24 (82,7%) tiveram pelo menos um órgão positivo. De um total de 209 amostras, em 61 (29,2%) foi comprovada a presença de DNA leptospírico. O sequenciamento de DNA leptospírico foi possível em três amostras de fragmentos de rim, SNC e fígado com 99,3% similares a L. interrogans. Na análise macroscópica foram observados que três fetos possuíam múltiplas malformações.

In regions with a semiarid climate, there are environmental factors that are adverse to the survival and spread of leptospires, so the role of peculiarities in transmission routes that are independent of the environment needs to be further investigated. Thus, it sought to generate contributions to the diagnosis and epidemiology of infection by Leptospira sp. in sheep reared in semiarid conditions. In Chapter I, a study was described of 104 adult female sheep sampled during the dry and rainy period, between the years 2018 and 2019. Samples of vaginal fluid, urine, bladder, kidney, uterus, uterine tube, ovary and placenta were collected in the slaughter line for subsequent molecular detection through the polymerase chain reaction (PCR). The samples with the best reactions were amplified and subjected to genetic sequencing. For bacteriological culture, only vaginal fluid and urine were used, while the blood was destined for serological investigation through the microscopic agglutination test (SAM). In total, anti-Leptospira sp. in 26 (25%) of the animals analyzed by SAM in the initial 1:50 dilution, while 69 (66.3%) animals had at least one organ/fluid with the presence of leptospiral DNA. Of the 758 samples of organs/fluids from the genital and urinary tracts, in 519 (68.5%) samples there was DNA. In the analysis of the statistical variables of each type of biological material between dry and rainy periods, only in the vaginal fluid had a significant difference between the proportions (p <0.001), in which the dry period overlapped. It was possible to perform the sequencing in nine samples with 99% similarity to L. interrogans and isolation in three samples of vaginal fluid. And in three cultures of vaginal fluid, positive results were obtained in PCR, indicating the recovery of viable strains. In Chapter II, a study was carried out to detect vertical transmission of Leptospira sp. in fetuses of sheep slaughtered in the Northeastern Semiarid. After slaughtering the progenitors, the fetuses were removed from the uterine environment and taken to the laboratory, where they were necropsied. Blood samples from the matrices and fetuses were collected to investigate the occurrence of anti-Leptospira sp. through SAM. For molecular analysis through PCR from the conceptuses, samples of the central nervous system (SNC), lung, liver, spleen, stomach contents, peritoneal fluid, kidney, bladder, urine and reproductive system were collected and from those who were at the beginning of formation , the samples consisted only of central nervous system and macerated chest (choroid ovoid). 23 progenitors were sampled and of these, seven showed antibodies from the title 50. Regarding the fetuses, 29 were collected, two (6.9%) of whom were seropositive in titration 10 for the serogroups Pyrogenes, Tarassovi and Autumnalis. In PCR, 24 (82.7%) had at least one positive organ. Of a total of 209 samples, 61 (29.2%) demonstrated the presence of leptospiric DNA. Leptospiric DNA sequencing was possible in three samples of kidney, CNS and liver fragments with 99.3% similar to L. interrogans. In macroscopic analysis, it was observed that three fetuses had multiple malformations.

PEQUENOS MAMÍFEROS NÃO VOADORES NO VALE DO RIO PARANAÍBA, BRASIL: MANUTENÇÃO DE LEPTOSPIRAS PATOGÊNICAS E CARRAPATOS

O rio Paranaíba está localizado predominantemente no bioma Cerrado, com algumas manchas de Mata Atlântica. Os pequenos mamíferos são modelos aplicáveis no estudo de carrapatos e circulação de patógenos, inclusive em ambientes com diferentes graus de degradação. O presente estudo descreve as diferentes espécies de pequenos mamíferos não voadores no vale do rio Paranaíba, e a identificação destes como portadores renais de leptospiras patogênicas; investiga o papel de pequenos mamíferos não voadores silvestres e sinantrópicos na ecologia da leptospirose em uma propriedade rural na região sudeste do estado de Goiás e avalia o papel desses animais como hospedeiros para carrapatos em áreas de Cerrado no vale do rio Paranaíba. Foram capturados 72 pequenos mamíferos não voadores de três espécies de marsupiais (36,1%, 38 espécimes) e oito espécies de roedores (63,9%, 46 espécimes). Do total, 24 (33,33%) estavam positivos à PCR do gene lipL32 e apenas um espécime de marsupial, Gracilinanus agilis, foi reagente à técnica de aglutinação microscópica (MAT) para o sorovar Australis na diluição de 1/100. Frente a PCR, 10 roedores (34,48%) e 14 marsupiais (32,56%) foram positivos. Bovinos de propriedade na região sudeste do estado de Goiás reagiram principalmente para estirpes pertencentes ao sorogrupo Icterohaemorrhagiae, adaptados às espécies de pequenos mamíferos. Do total de pequenos mamíferos capturados, apenas 14 espécimes, correspondentes aos gêneros Nectomys, Cerradomys, Oecomys, Necromys e Gracilinanus estavam infestados por carrapatos. A riqueza de carrapatos foi de pelo menos 04 espécies no Alto Paranaíba (Ixodes sp., Ornithodoros sp., Amblyomma dubitatum, Amblyomma sculptum), além de larvas de Amblyomma sp.; 02 no Médio Paranaíba (Ornithodoros sp. e Amblyomma dubitatum) e larvas de Amblyomma sp.; e apenas 01 no Baixo Paranaíba (Ornithodoros sp.). Pequenos mamíferos não voadores cumprem o papel de veiculadores de leptospiras patogênicas no vale do rio Paranaíba. Este é o primeiro relato de identificação, via PCR, de Gracilinanus agilis, Calomys sp., Hylaeamys megacephalus e Oecomys bicolor como portadores renais e veiculadores de leptospiras patogênicas. Pequenos mamíferos desempenham relevante papel na ecologia da leptospirose em propriedade rural produtora de leite, favorecendo a infecção de bovinos. Carrapatos do gênero Ornithodoros sp. foram encontrados parasitando apenas o didelfídeo Gracilinanus agilis. O carrapato da espécie Amblyomma dubitatum foi o de maior ocorrência em pequenos mamíferos do vale do rio Paranaíba e este parece ser o primeiro registro desta espécie em Nectomys sp. no bioma Cerrado. Como também o primeiro registo de Ixodes loricatus parasitando Cerradomys sp. e Ixodes loricatus em Rhipidomys sp. no Brasil.

The Paranaibas river is located predominantly without Cerrado biome, with some spots of Atlantic Forest. Small mammals are models and no study of ticks and circulation of pathogens, even in environments with different degrees of degradation. The present study describes the different species of small non-flying mammals in the Paranaíba River valley, and their identification as renal carriers of pathogenic leptospiras. Investigates the role of small non-flying wild and synanthropic mammals in the ecology of leptospirosis in a rural property in the southeastern region of the state of Goiás. In addition, evaluates the role of these animals as hosts for ticks in Cerrado areas, in the Paranaíba river valley. Seventy-two small non-flying mammals were captured from three species of marsupials and eight rodent species. Of these 72, 24 (33.33%) were positive for lipL32 gene PCR and only one specimen, Gracilinanus agilis, was MAT reagent for serovar Australis. Among the marsupials, 14 (32.56%) were PCR positive, and 10 rodent specimens (34.48%) were diagnosed as renal carriers by the same technique. Cattle owned in the southeastern region of the state of Goiás reacted mainly to strains belonging to the serogroup Icterohaemorrhagiae, maintained by small mammals. Of the total of small mammals captured, ticks infested only 14 animals, corresponding to the genera Nectomys, Cerradomys, Oecomys, Necromys and Gracilinanus. The tick richness was at least 04 species in the Alto Paranaíba (Ixodes sp., Ornithodoros sp., Amblyomma dubitatum, Amblyomma sculptum) in addition to Amblyomma sp. 02 in the Middle Paranaíba (Ornithodoros sp. and Amblyomma dubitatum), and Amblyomma sp. and only 01 in the Low Paranaíba (Ornithodoros sp.). Small non-flying mammals play a role of pathogenic leptospires carriers in the Paranaíba river valley. This is the first report of PCR identification of Gracilinanus agilis, Calomys sp., Hylaeamys megacephala and Oecomys bicolor as renal carriers of pathogenic leptospires. Small mammals play a relevant role in the ecology of leptospirosis in rural dairy farms, favoring the infection of cattle. Ticks of the genus Ornithodoros sp. were found parasitizing only the didelid Gracilinanus sp. The Ambliomma dubitatum tick was the most frequent occurrence in small mammals in the Paranaíba river valley, and this seems to be the first record of this species in Nectomys sp. in the Cerrado biome. As well as the first, record of Ixodes loricatus parasitizing Cerradomys sp., and the first record of Ixodes loricatus in Rhipidomys sp. in Brazil.

DETECÇÃO DE CARREADORES UTERINOS DE Leptospira sp. EM BOVINOS DESTINADOS AO ABATE NO ESTADO DO RIO DE JANEIRO

A leptospirose em bovinos é uma doença de caráter crônico, caracterizada por insuficiência reprodutiva que leva a grandes perdas econômicas. Leptospiras viáveis têm sido recuperadas de várias amostras clínicas, em especial urina e trato genital, e acredita-se que a infecção neste último sítio provoque morte embrionária precoce e, consequentemente, abortamentos. Apesar disso, muitos estudos relatam a recuperação de leptospiras nos rins ou na urina, e pouco se sabe sobre a infecção uterina. Neste contexto, o objetivo do presente estudo foi detectar carreadores uterinos de Leptospira sp. entre vacas não prenhes abatidas em matadouros locais. Entre setembro de 2016 e abril de 2017, foram coletadas amostras de sangue (n=39), urina (n=40), fluido vaginal (FV, n=34), fragmento uterino (FU, n=42) e folículos ovarianos (n=10) de 42 vacas não prenhes aleatoriamente selecionadas. A sorologia para leptospirose (Soroaglutinação microscópica MAT) foi realizada em 39 vacas, e Reação em Cadeia de Polimerase (PCR), usando como alvo uma parte do gene lipL32, presente somente em leptospiras patogênicas, foi realizada em todas as amostras clínicas, exceto sangue. Também foi realizada cultura bacteriológica em meio EMJH e EMJH+SATFF nas amostras de FV, urina e folículo ovariano. A estirpe isolada foi caracterizada geneticamente por sequenciamento dos genes secY e rrs (16s RNA), e foi traçado o perfil de VNTR. Apenas quatro animais (4/39) apresentaram-se sororeativos perante o sorogrupo Sejroe, com titulação máxima de 400. Somente uma estirpe foi isolada de uma amostra de urina, sendo caracterizada geneticamente como Leptospira santarosai. O DNA leptospírico foi observado com maior frequência em folículos ovarianos (7/10, 70%), FU (19/42, 45,2%), seguido de urina (15/40, 37,5%) e, finalmente, FV (8/34, 20,6%). Comparativamente, a regressão logística indicou que a positividade no FU é um fator de risco para a positividade na FV (OR = 3,4), enquanto a positividade na urina não o é. Sendo assim, observou-se uma taxa inesperadamente elevada de infecção por Leptospira sp. em amostras de útero e folículo ovariano de vacas não prenhes. Tal resultado demonstra que o estado de carreador genital em vacas assintomáticas é bastante alto e negligenciado. Acredita-se que uma vez presente no trato genital, a bactéria possa exercer um papel importante na fisiopatogenia da falha reprodutiva. A sorologia e a cultura bacteriana representam técnicas limitadas de detecção de leptospiras no trato genital, não sendo recomendadas para tal diagnóstico. Embora menos sensível do que a biópsia uterina, o FV pode representar uma amostra fácil de coletar a campo, e representa adequadamente o ambiente uterino. Assim, este pode simplificar o diagnóstico de leptospirose genital por PCR.

Leptospirosis in cattle is a chronic disease, characterized by reproductive disorders that lead to several economic losses. Viable leptospires have been recovered from various clinical samples, especially urine and genital tract, and it is believed that infection in the genital tract may cause early embryonic death and consequently abortions. Despite this, many studies report the recovery of leptospires in the kidneys or urine, and little is known about the uterine infection. In this context, the objective of the present study was to detected uterine carriers of Leptospira sp. among non-pregnant cows slaughtered in local slaughterhouses. Between September 2016 and April 2017, blood samples (n = 39), urine (n=40), vaginal fluid (VF, n=34), uterine fragment (UF, n=42) and ovarian follicles n=10) from 42 randomly selected non-pregnant cows. The serology for leptospirosis (Microscopic Agglutination Test - MAT) was performed in 39 cows, and Polymerase Chain Reaction (PCR), targeting a partial lipL32 gene, found in pathogenic leptospires only, was carried out in all clinical samples except blood. Bacteriological culture from VF, urine and ovarian follicle was also performed in EMJH and EMJH + SATFF mediums. The isolated strain was genetically characterized by sequencing the secY and rrs (16s RNA) genes, and the VNTR profile was delineated. Only four animals (4/39) were seroreactive against Sejroe serogroup, with a maximum titre of 400. Only one strain could be isolated from a urine sample, genetically characterized as Leptospira santarosai. Leptospiral DNA was observed most frequently in ovarian follicles (7/10, 70%), UF (19/42, 45.2%), followed by urine (15/40, 37.5%) and finally VF (8/34, 20.6%). Comparatively, the logistic regression indicated that the positivity in the UF is a risk factor for the VF positivity (OR = 3.4), while the urine positivity is not. Thus, an unexpectedly high rate of infection with Leptospira sp. in samples of uterus and ovarian follicles of non-pregnant cows was observed. These results demonstrate that the status of genital carrier in asymptomatic cows is quite high and neglected. It is believed that once present in the genital tract, the bacterium may play an important role in the physiopathology of reproductive failure. Serology and bacterial culture represent limited techniques for the detection of leptospires in the genital tract and they are not recommended for such diagnosis. Although less sensitive than uterine biopsy, VF may represent an easy-to-collect sample on the field conditions, and adequately represents the uterine environment. Thus, it can simplify the diagnosis of genital leptospirosis by PCR.

CONTRIBUIÇÕES PARA A EPIDEMIOLOGIA E CONTROLE DA LEPTOSPIROSE EM RUMINANTES DO NORDESTE DO BRASIL

Esta tese é composta por três capítulos, no capítulo I são descritas as estratégias de controle de um surto de infecção por leptospirose em bovinos leiteiros no estado do Maranhão, Nordeste do Brasil. O diagnóstico de leptospirose foi baseado na sorologia, cultura bacteriológica e reação em cadeia da polimerase. De todos os animais da fazenda, 136 (48,6%) foram soropositivos para Leptospira sp. Oito dos animais com problemas reprodutivos foram positivos na PCR. O sequenciamento genético de uma amostra PCR positiva de fluido vaginal revelou Leptospira borgpetersenii. Um ano após a adoção de medidas de controle, não foram observados problemas reprodutivos. Assim, a leptospirose provavelmente causou falhas reprodutivas no rebanho, e as medidas de controle e prevenção implementadas foram eficientes no controle da doença. No capítulo II é descrita a caracterização sorológica e molecular de Leptospira sp. em rebanhos bovinos e ovinos em condições semiáridas do Nordeste brasileiro. Foi realizado diagnóstico sorológico, molecular e tentativa de isolamento de Leptospira sp. de 99 fêmeas em idade reprodutiva. Destes 38,4% foram reagentes no teste sorológico, sendo 49% fêmeas bovinas e 27,1% fêmeas ovinas. Os sorogrupos detectados em bovinos foram Sejroe, Hebdomadis, Australis, Djasiman, Balum, Pomona e Cynopteri. Nos ovinos, os sorogrupos reagentes foram Australis, Balum, Djasiman, Tarassovi, Icterohaemorrhagiae e Cynopteri. Na PCR, foi detectado DNA leptospírico em nove amostras de urina. Não foi observado crescimento do agente em meio de cultura em amostras de urina. Em condições semiáridas, a transmissão entre animais da mesma espécie parece ser a principal forma de disseminação de leptospiras nos rebanhos ovinos e bovinos, porém a participação de outros animais domésticos e silvestres não pode ser descartada. Sugere-se ainda que a prática da criação consorciada de bovinos e ovinos e o estreito convívio entre eles propicia a disseminação do agente nas propriedades rurais. O capítulo III determinou a soropositividade para leptospirose e os sorogrupos predominantes nos testes sorológicos realizados no Laboratório de Doenças Transmissíveis (LDT) da Universidade Federal de Campina Grande (UFCG), Patos, Paraíba, Nordeste do Brasil, em bovinos, caprinos, ovinos e bubalinos no período de 2010 a 2017. Foram computados os registros dos exames sorológicos para leptospirose de 5.594 animais, provenientes de quatro estados brasileiros. Foram positivas 662 amostras no teste sorológico, resultando em uma frequência de 11,8%. Sejroe, Autumnalis e Icterohaemorrhagiae foram os sorogrupos mais frequentes para todas as espécies. As frequências individuais de bovinos, caprinos, ovinos e bubalinos foram de 20%, 8,3%, 7,9%, e 27,9%, respectivamente. Com relação aos sorogrupos mais frequentes por espécie animal, o Sejroe predominou em bovinos, Autumnalis foi o mais frequente em caprinos e ovinos e Australis predominou nos bubalinos. infecção por Leptospira sp., determinada por sorologia, encontra-se difundida em ruminantes (bovinos, caprinos, ovinos e bubalinos) do Nordeste do Brasil, o que sugere a existência de vias de transmissão alternativas menos dependentes de fatores ambientais, bem como a identificação dos sorogrupos mais frequentes sugere a necessidade de melhoria das condições sanitárias e implementação de medidas de controle eficientes e direcionadas para as principais fontes de infecção.

This thesis consists of three chapters, in Chapter I, the strategies of control of an outbreak of leptospirosis infection in dairy cattle in the state of Maranhão, Northeastern Brazil, are described. The diagnosis of leptospirosis was based on serology, bacteriological culture and polymerase chain reaction. Of all farm animals, 136 (48.6%) were seropositive for Leptospira sp. Eight of the animals with reproductive problems were PCR positive. Genetic sequencing of a positive PCR sample of vaginal fluid revealed Leptospira borgpetersenii. One year after the adoption of control measures, no reproductive problems were observed. Thus, leptospirosis probably caused reproductive failures in the herd, and the control and prevention measures implemented were efficient in controlling the disease. In Chapter II the serological and molecular characterization of Leptospira sp. in cattle and sheep in semi-arid conditions of Northeast Brazil. Serological, molecular and and attempt isolation of Leptospira sp. of 99 females of reproductive age. Of these 38.4% were reagents in the serological test, being 49% bovine females and 27.1% ovine females. Serogroups detected in cattle were Sejroe, Hebdomadis, Australis, Djasiman, Balum, Pomona and Cynopteri. In sheep, the reactive serogroups were Australis, Balum, Djasiman, Tarassovi, Icterohaemorrhagiae and Cynopteri. In PCR, leptospiral DNA was detected in nine urine samples. Growth of the agent in culture medium was not observed in urine samples. In semi-arid conditions, transmission between animals of the same species seems to be the main form of dissemination of leptospires in sheep and cattle, but the participation of other domestic and wild animals can not be ruled out. It is also suggested that the practice of intercropping cattle and sheep and the close coexistence between them facilitates the dissemination of the agent in the rural properties. Chapter III determined the seropositivity for leptospirosis and the serogroups prevalent in the serological tests carried out at the Transmissible Diseases Laboratory (TDL) of the Federal University of Campina Grande (UFCG), Patos, Paraíba, Northeast Brazil, in cattle, goats, sheep and buffaloes in the period from 2010 to 2017. The records of the serological tests for leptospirosis of 5,594 animals from four Brazilian states were computed. A total of 662 samples were positive in the serological test, resulting in a frequency of 11.8%. Serjoe, Autumnalis and Icterohaemorrhagiae were the most frequent serogroups for all species. The individual frequencies of cattle, goats, sheep and buffaloes were 20%, 8.3%, 7.9%, and 27.9%, respectively. In relation to the most frequent serogroups by animal species, Serjoe predominated in cattle, Autumnalis was the most frequent in goats and sheep and Australis predominated in buffaloes. Leptospira sp. infection, determined by serology, is widespread in ruminants (cattle, goats, sheep and buffalo) in Northeast Brazil, suggesting the existence of alternative transmission routes less dependent on environmental factors, as well as identification of the most frequent serogroups suggests the need to improve sanitary conditions and implement efficient and targeted control measures for the main sources of infection.

CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR E SOROLÓGICA DE ISOLADOS DE LEPTOSPIRA A PARTIR DE CÃES NATURALMENTE INFECTADOS

Estudos sorológicos para caracterização da leptospirose em cães no nosso cenário epidemiológico são pouco frequente e discordantes. Adicionalmente, as informações quanto a circulação das espécies, sorogrupos e sorovares nesses animais também são escassas. O presente estudo objetivou isolar e caracterizar cepas autóctones de Leptospira sp. em amostras de urina e sangue total obtidos de cães naturalmente infectados e com suspeita clínica de leptospirose atendidos no período de agosto de 2012 a setembro de 2017. Amostras de sangue e urina foram coletadas de 70 animas e destinadas ao Teste de Aglutinação Microscópica (MAT) e ao cultivo bacteriano. A MAT mostrou que 74,29% das amostras foram reativas. Icterohemorrhagiae (sv. Copenhageni M20) foi o sorogrupo de maior predominância com 33/52 (63,46%) de reatividade, seguido por Australis (sv. Bratislavae (5) sv. Autralis (2) com 7/52 (13,47%)). Em relação à distribuição dos títulos, 14/52 (26,92%) das amostras tiveram títulos de 200 seguido de 10/52 (19,23%) das amostras reagiram para os títulos de 400 e 800. Isolamos bactérias com morfologia e movimentação característicos de leptospiras em 13 (9,28%) amostras dentre as 140 testadas (70 de urina e 70 de sangue). A determinação da espécie foi realizada com base na identidade das sequências parciais do gene rrs (16S rRNA), enquanto o sorogrupo presuntivo dos isolados foi estabelecido através da MAT, utilizando um painel de 18 anti-soros representativos para 15 sorogrupos patogênicos. A identificação de sorovar foi feita pelo Teste de Aglutinação Microscópica com Absorção Cruzada (CAAT) com três anticorpos referentes ao sorogrupo Icterohaemorrhagiae: Mab F70 C14 (sorovar Icterohaemorrhagiae), Mab F70 C24 (sorovar Copenhegeni) e Mab F89 C12 (todos os sorovares do sorogrupo Icterohaemorrhagiae exceto Copenhageni). Todas as cepas foram caracterizadas como pertencetes à espécie Leptospira interrogans. A sorogrupagem demonstrou que nove isolados fazem parte do sorogrupo Icterohaemorrhagiae Sorovar (sv) Copenhageni. Entretanto, em quatro isolados (C29, C41, C51 e C72) foi possível determinar apenas que eram pertencentes ao sorogrupo Icterohaemorrhagiae, sendo o resultado em nível de sorovar indeterminado. Demonstramos que há a circulação da espécie Leptospira interrogans, sorogrupo Icterohaemorrhagiae, sv. Copenhageni. Adicionalmente, sugerimos que possa haver a circulação de um sorovar ainda não identificado. Desta forma, já se pode inferir a necessidade de revisão dos protocolos vacinais adotados.

Serological studies for the characterization of leptospirosis in dogs in our epidemiological scenario are infrequent and discordant. In addition, information on the circulation of species, serogroups and serovars in these animals is also scarce. The present study aimed to isolate and characterize autochthonous strains of Leptospira sp. in urine and whole blood samples obtained from naturally infected and clinically suspected leptospirosis dogs from August 2012 to September 2017. Samples of blood and urine were collected from 70 animals for the Microscopic Agglutination Test (MAT) and bacterial culture. The MAT showed that 74.29% of the samples were reactive. Icterohemorrhagiae (sv. Copenhageni M20) was the most prevalent serogroup with 33/52 (63.46%) reactivity, followed by Australis (sv. Bratislavae (5) sv. Autralis (2) with 7/52 (13.47%)). Regarding the distribution of titers, 14/52 (26.92%) of the samples had titers of 200 followed by 10/52 (19.23%) of the samples reacted for the 400 and 800 titers. We isolate bacteria with characteristic morphology and movement of leptospires in 13 (9.28%) samples from 140 tested (70 urine and 70 blood). Species determination was performed based on the identity of the rrs (16S rRNA) partial sequences, while the presumptive serogroup of the isolates was established through MAT using a panel of 18 representative antisera to 15 pathogenic serogroups. Identification of serovar was done by the Cross-Absorption Microscopic Agglutination Test (CAAT) with three antibodies related to the serogroup Icterohaemorrhagiae: Mab F70 C14 (serovar Icterohaemorrhagiae), Mab F70 C24 (serovar Copenhegeni) and Mab F89 C12 (all serogroups of the serogroup Icterohaemorrhagiae except Copenhageni). All strains were characterized as belonging to the species Leptospira interrogans. Serogroups showed that nine isolates were part of the serovar Icterohaemorrhagiae Serovar (sv) Copenhageni. However, in four isolates (C29, C41, C51 and C72), it was possible to determine only that they belonged to the serogroup Icterohaemorrhagiae, and the result was at the indeterminate serovar level. We show that there is circulation of the species Leptospira interrogans, serogroup Icterohaemorrhagiae, sv. Copenhageni. Additionally, we suggest that there may be a circulation of a yet unidentified serovar. In this way, it is possible to infer the need to review the vaccine protocols adopted.

Variáveis epidemiológicas e alterações clínicas, hematológicas e urinárias em cães sororreagentes para Leptospira spp / Epidemiological variables and clinical, haematological and urinary / alterations in dogs seropositive for Leptospira spp

Com o objetivo de verificar a freqüência sorológica anti-leptospírica em cães de Botucatu –SP com suspeita clínica e os fatores de risco para esta zoonose, bem como as possíveis alterações hematológicas e urinárias, foram coletadas amostras de sangue de 248 cães. A prova diagnóstica utilizada foi a de Soroaglutinação Microscópica (SAM), testando-se 29 sorovares de leptospiras, considerando-se reagente a partir do título ≥200. Das 248 amostras testadas,17,7% (44/248) foram reagentes. Dentre os sorovares reagentes, verificou-se prevalência para: Autumnalis (20,5%); Pyrogenes (18,2%); Grippothyphosa (15,9%); Canicola (13,6%), Bratislava e Copenhageni (9,1%); Andamana (4,5%) e Djasiman (2,3%). Em relação à análise do questionário epidemiológico aplicado aos proprietários dos cães, observou-se significância estatística para as variáveis sexo, faixa etária e presença de ratos no domicílio, demonstrando-se que, pela análise de regressão logística, somente a variável sexo foi significativamente associada à presença de anticorpos anti-Leptospira. Os níveis de uréia e creatinina estiveram significativamente aumentados no grupo de animais reagentes à SAM, demonstrando o comprometimento renal nestes animais, bem como a diminuição do nível de hemoglobina.(AU)

In order to determine antibodies anti-Leptospira spp. in dogs from Botucatu-SP with a clinical suspicion and the risk factors for this zoonosis, as well possible hematological and urine alterations were collected blood samples from 248 dogs. The diagnostic test performed was the Microscopic Agglutination Test (MAT) with 29 serovars of leptospires. Titers were considered reagent ≥200 and detected in 17.7% (44/248) of the dogs. The most frequent serovars were Autumnalis (20.5%); Pyrogenes (18.2%); Gryppothyphosa (15.9%); Canicola (13.6%); Bratislava and Copenhageni (9.1%); Andamana (4.5%) and Djasiman (2.3%). Regarding the analysis of the epidemiological questionnaire administered to owners of the dogs, there was statistical significance for sex, age and presence of rats at home, showing that, by logistic regression analysis, only the sex variable was been significantly associated to the presence of antibodies anti-Leptospira. The levels of urea and creatinine were significantly increased in the group of animals reagents to the Microscopic Agglutination Test, showing the renal damage in these animals and decreased hemoglobin level.(AU)

Estudo bacteriológico e molecular de vacas portadoras vaginais e renais de Leptospira sp.

A leptospirose em bovinos determina principalmente falhas reprodutivas, porém o mecanismo envolvido na doença reprodutiva ainda não está elucidado. Apesar de demonstrada a potencial transmissibilidade sexual (macho-fêmea) em bovinos, a presença de leptospiras no ambiente vaginal é pouco estudada. Sendo assim, o presente estudo avaliou por meio de métodos bacteriológicos e moleculares a ocorrência de portadores vaginais e renais de Leptospira sp. entre bovinos abatidos em matadouro frigorífico no estado do Rio de Janeiro. Foram coletadas amostras de urina (cultura e PCR) e fluido vaginal (FV; cultura e PCR) de 275 animais durante o abate. Em um primeiro momento foi feita uma avaliação preliminar de um novo coquetel de antibióticos (STAFF) adicionado ao meio de cultura EMJH para obtenção de cultura pura de leptospiras a partir de amostras clínicas bovinas. Após esta primeira avaliação, excluiu-se os machos (n=21) para os estudos posteriores. Com o uso de EMJH suplementado com o novo coquetel, foram obtidas dez estirpes de Leptospira, onde cinco correspondiam à espécie L. santarosai sorogrupo Sejroe. À análise de sequência do gene secY, estas estirpes mostraram proximidade genética com estirpes Guaricura isoladas no Brasil. Foi observado um percentual de 60,3% de animais com DNA leptospírico em pelo menos uma das amostras. Em 26/254 (11,3%) vacas o DNA foi detectado somente nas amostras de urina e em 67/254 (29,2%), somente no FV. Com os resultados foi possível concluir que a detecção do DNA leptospírico e a recuperação de leptospiras viáveis do fluido vaginal (principalmente os pertencentes ao sorogrupo Sejroe) em um elevado número de vacas assintomáticas ressalta a ocorrência da infecção vaginal por leptospiras entre bovinos. Neste contexto o coquetel de antimicrobianos STAFF se mostrou um avanço na obtenção de culturas puras a partir de amostras clínicas bovinas. Com a obtenção em grande número de novos isolados foi possível observar que outros membros do sorogrupo Sejroe que não Hardjo, particularmente genótipos de L. santarosai sorovar Guaricura, estão difundidos nos rebanhos bovinos brasileiros, mesmo que ainda não se tenha clara a participação destes na leptospirose reprodutiva.

Bovine leptospirosis determines mainly reproductive failures, however its mechanisms have not been elucidated. Despite evidence of the potential venereal transmissibility (male-female) in cattle, leptospiral presence in vaginal environment is poorly studied. Therefore, the purpose of the present study was to evaluate by bacteriological and molecular methods, the occurrence of vaginal carriers of Leptospira sp. among slaughtered cows in Rio de Janeiro, Brazil. Samples of urine (culture and PCR) and vaginal fluid (VF, culture and PCR) were collected from 275 animals during slaughter. First, a preliminary study was conducted to evaluate a new antibiotic cocktail (STAFF) added to the EMJH medium to obtain pure cultures of leptospires from bovine clinical samples. After this first evaluation, males (n = 21) were excluded for the following studies. Ten Leptospira pure cultures were obtained using EMJH supplemented with the new cocktail, five of them belonging to L. santarosai species from serogroup Sejroe. Analysis of secY gene sequence showed genetic proximity to Guaricura strains isolated in Brazil. On PCR, 60.3% of cows showed leptospiral DNA at least in one sample. From those, 26 (11.3%) cows were PCR positive only in urine samples and 67 (29.2%) only in VF. In conclusion, detection of leptospiral DNA and the recovery of viable leptospires from vaginal fluid (manly those belonging to serogroup Sejroe) in a large number of asymptomatic cows highlights the occurrence of leptospiral vaginal infection in cattle. It was suggested that the venereal transmission (female-male) could occur in these animals. In this context, STAFF antimicrobial cocktail showed to be an advance in obtaining pure cultures from clinical bovine samples. The obtaining of new isolates showed that other members of serogroup Sejroe, particularly Guaricura genotypes from L. santarosai, may be widespread in Brazilian cattle.

INFECÇÃO LEPTOSPÍRICA EM CÃES: ESTUDO SOROLÓGICO, BIOQUÍMICO, MOLECULAR, E AVALIAÇÃO DE FATORES DE RISCO

A leptospirose figura entre as principais zoonoses em todo o mundo. Os animais domésticos e silvestres são elos fundamentais na cadeia de transmissão do patógeno para os seres humanos. Dentre os animais domésticos, o cão é reconhecido como importante fonte de infecção em áreas urbanas, representando sério problema de saúde pública. Mesmo imunizados, os cães podem eliminar leptospiras na urina durante longos períodos. O contato com água ou solo contaminado pela urina destes animais constitui importante via de transmissão o humano. O objetivo desse trabalho foi avaliar 318 cães portadores assintomáticos para o gênero Leptospira spp. em amostras obtidas do HV da FMVZ, do canil municipal e de cães domiciliados no munícipio de Botucatu SP pelas técnicas de soroaglutinação microscópica (SAM), reação em cadeia da polímerase (PCR) para Leptospira spp, e avaliação bioquímica. Aplicou-se também um questionário epidemiológico para avaliação dos fatores de risco da doença no município. Os sorovares mais prevalentes foram NUP 50%, Gryppotyphosa 42%, Copenhageni 52%, Icterohaemorrhagiae 42%, observando-se uma prevalência de 42,77% de sororeagentes. Não foram encontradas amostras positivas pela técnica de PCR. O fator de risco estatisticamente significante foi a variável zona urbana, sendo mais prevalente os animais sororreagentes provenientes dos bairros da zona sul e oeste do município de Botucatu - SP. Conclui-se que a bactéria leptospira está circulante nos cães assintomáticos avaliados, podendo-se dispersar a bactéria para outros animais e inclusive para os humanos.

Leptospirosis is among the leading zoonoses worldwide. Domestic and wild animals are key links in the transmission chain of the pathogen to humans. Among domestic animals, the dog is recognized as an important source of infection in urban areas, representing a serious public health problem. Even immunized, dogs can eliminate leptospires in the urine for long periods. Contact with water or soil contaminated by urine of these animals constitutes an important human transmission route. The objective of this study was to evaluate 318 dogs asymptomatic carriers for the genus Leptospira spp. In samples obtained from the veterinary hospital of UNESP, the municipal kennel and dogs domiciled in the municipality of Botucatu - SP by the microscopic serum agglutination (SAM) techniques, polymerase chain reaction (PCR) for Leptospira spp, and biochemical evaluation. An epidemiological questionnaire was also applied to evaluate the risk factors of the disease in the municipality. The most prevalent serovars were NUP 50%, Gryppotyphosa 42%, Copenhageni 52%, Icterohaemorrhagiae 42%, with a prevalence of 42.77% of seroreagents. No positive samples were found by the PCR technique. The statistically significant risk factor was the urban zone variable, the most prevalent being the seroreagent animals from the southern and western districts of the city of Botucatu - SP. It is concluded that leptospira bacteria are circulating in the asymptomatic dogs evaluated, being able to disperse the bacteria to other animals and even humans. ¨¨