DETECÇÃO MOLECULAR DE HEMOPARASITOS EM CÃES COM TROMBOCITOPENIA PROVENIENTES DA ZONA NORTE DE SÃO PAULO: MANIFESTAÇÕES CLÍNICAS E ALTERAÇÕES LABORATORIAIS

As hemoparasitoses caninas são doenças transmitidas por artrópodes hematófagos e causadas por uma grande variedade de agentes. A espécie Anaplasma platys corresponde a parasitas intracelulares obrigatórias de plaquetas, principalmente em cães, sendo responsáveis pelo desenvolvimento de um quadro clínico denominado trombocitopenia cíclica canina. A babesiose canina é uma doença transmitida por carrapatos, causada por hematozoários do gênero Babesia, no qual a B. canis vogeli é a mais prevalente no Brasil. A erliquiose monocítica canina (EMC) no Brasil vem apresentando casuística crescente em hospitais e clínicas veterinárias, sendo considerada por muitos como uma das mais importantes doenças transmissíveis na clínica de pequenos animais. Outra enfermidade, pouco relatada, é a Hepatozoonose canina, causada pela ingestão do vetor infectado com o protozoário que atinge monócitos e neutrófilos do cão, levando à doenças com severidade variáveis. A Micoplasmose Canina é uma enfermidade pouco relatada, causada por bactérias que afetam os eritrócitos e que pode ser fatal em animais imunossuprimidos, esplenectomizados ou que apresentam co-infecções. Outra hemoparasitose importante em cães é a rangeliose ou nambyuvú (orelha que sangra), também conhecida como febre amarela dos cães ou peste do sangue, causada pela infecção por Rangelia vitalii. R. rickettsii é considerada a espécie mais patogênica entre as Rickettsias. A doença causada por essa bactéria é chamada de Febre maculosa das Montanhas Rochosas (RMSF) devido ao primeiro relatado ter ocorrido na região das Montanhas Rochosas nos EUA. No Brasil, é também conhecida como Febre Maculosa Brasileira e os carrapatos do gênero Amblyomma são os vetores. O objetivo desse trabalho foi avaliar a ocorrência de hemoparasitos em cães apresentando trombocitopenia, assim como relacionar com manifestações clínicas e alterações laboratoriais. Foram selecionadas 115 amostras de cães trombocitopênicos atendidos em Hospital Veterinário particular da zona norte de São Paulo/SP, sendo processadas por PCR em tempo real. 43 amostras foram positivos para ao menos um patógeno: Hepatozoon spp. (11,3%), E. canis (6,08%), B. canis vogeli (6,08%) e A. platys (0,86%). Coinfecções também foram detectadas: B. canis vogeli e Hepatozoon spp. (7,82%); E. canis e Hepatozoon spp. (1,62%); A. platys, B. canis vogeli, E. canis e Hepatozoon spp. (0,86%); B. canis vogeli, Hepatozoon spp. e Mycoplasma spp (0,86%); B. canis vogeli, Hepatozoon spp. e R. vitalii (1,62%). As manifestações clínicas apresentadas foram sinais gastrointestinais, apatia, mucosas hipocoradas, hipertermia, perda de peso, sinais neurológicos, hematúria, alterações locomotoras, respiratórias, desidratação, linfadenopatias, hemorragias, icterícia, epistaxe e óbito. Em relação ao hematócrito, 33 apresentaram anemia, sendo 12 classificadas como leve; 16 (14,15%) moderadas; 3 (2,65%) severas e 2 (1,76%) muito severas. Das 115 amostras, onze (9,64%) apresentaram leucopenia, enquanto que em 31 amostras (27,43%) observou-se leucocitose. Houve diferença estatística entre os valores de hipertermia, icterícia, linfadenopatias, sinais locomotores e epistaxe.

Canine hemoparasitoses are diseases transmitted by hematophagous arthropods and caused by a wide variety of agents. The species Anaplasma platys corresponds to obligate intracellular parasites of platelets, mainly in dogs, being responsible for the development of a clinical condition called canine cyclic thrombocytopenia. Canine babesiosis is a tick-borne disease caused by hematozoans of the genus Babesia, in which B. canis vogeli is the most prevalent in Brazil. Canine monocytic Eryliquiosis (EMC) in Brazil has presented increasing casuistry in hospitals and veterinary clinics, being considered by many as one of the most important communicable diseases in the small animal clinic. Another disease, little reported, is canine hepatozoonosis, caused by the ingestion of the vector infected with the protozoan that attacks monocytes and neutrophils of the dog, leading to diseases with variable severity. Canine Mycoplasmosis is a poorly reported disease caused by bacteria that affect erythrocytes and can be fatal in immunosuppressed, splenectomised or co-infected animals. Another important hemoparasitosis in dogs is rangeliosis or nambyuvú (ear that bleeds), also known as yellow fever of dogs or blood plague caused by infection by Rangelia vitalii. R. rickettsii is considered the most pathogenic species among Rickettsiae. The disease caused by this bacterium is called Rocky Mountain spotted fever (RMSF) due to the first reported occurring in the Rocky Mountain region in the USA. In Brazil, it is also known as Brazilian Spotted Fever. Amblyomma ticks are the vectors of Brazilian Spotted Fever (FMB). The objective of this study was to evaluate the occurrence of hemoparasites in dogs presenting thrombocytopenia, as well as to relate to clinical manifestations and laboratory abnormalities. A total of 115 samples of thrombocytopenic dogs treated at the Veterinary Hospital of the northern region of São Paulo / SP were selected and processed by real-time PCR. In real-time PCR, 43 results were positive for at least one pathogen: Hepatozoon spp. (11.3%), E. canis (6.08%), B. canis vogeli (6.08%), A. platys (0.86%). Coinfection was also detected: B. canis vogeli and Hepatozoon spp. (7.82%); E. canis and Hepatozoon spp. (1.62%); A. platys, B. canis vogeli, E. canis and Hepatozoon spp. (0.86%); B. canis vogeli, Hepatozoon spp. and Mycoplasma spp. (0.86%); B. canis vogeli, Hepatozoon spp. and R. vitalii. The clinical manifestations were gastrointestinal signs, apathy, hypochromic mucosa, hyperthermia, weight loss, neurological signs, hematuria, locomotor, respiratory alterations, dehydration, lymphadenopathies, hemorrhages, jaundice, epistaxis and death. In relation to the hematocrit, 33 presented anemia, 12 being classified as mild; 16 (14.15%) moderate; 3 (2.65%) severe and 2 (1.76%) very severe. Of the 115 samples, eleven (9.64%) similar leucopenia, whereas in 31 samples (27.43%) observed-leukocytosis. The separation is between the values of hyperthermia, jaundice, lymphadenopathy, locomotor signs and epistaxis.

PERFIL ULTRASSONOGRÁFICO E ELASTOSSONOGRÁFICO EM CÃES ACOMETIDOS POR LINFADENOPATIAS

A literatura veterinária possui escasso conteúdo a respeito do uso da ultrassonografia e elastossonografia para caracterização de lesões em linfonodos de cães. O objetivo do primeiro estudo foi comparar as características ultrassonográficas e elastossonográficas entre 50 linfonodos neoplásicos (LN) e 69 linfonodos não neoplásicos (LNN), em cães, com base no diagnóstico microscópico. A hipótese desse estudo é que seja possível distinguir lesões neoplásicas e não neoplásicas com tais técnicas de imagem. Variáveis quantitativas foram comparadas entre os grupos com teste t de student não pareado e, as variáveis categóricas, com teste U de Mann-Whitney. Linfonodos neoplásicos apresentaram dimensões significativamente maiores, relação entre eixo curto e eixo longo (RECEL) superior, maior frequência na perda da arquitetura interna, distribuição vascular predominante mista, índices de resistividade (IR) e de pulsatilidade (IP) superiores e maior rigidez à distribuição do escore elastográfico, em comparação com LNN. O objetivo do segundo estudo foi descrever as características ultrassonográficas e elastossonográficas de 25 linfonodos caninos parasitados por Leishmania spp. A hipótese desse estudo é que seja possível padronizar linfonodos contendo formas amastigotas de Leishmania spp por meio da ultrassonografia e elastografia. Houve aumento nas dimensões dos linfonodos, com RECEL próximo da normalidade. Observou-se alta prevalência de contornos irregulares, bordas nítidas e ausência de definição de tecido hilar. Alguns linfonodos apresentaram ecogenicidade heterogênea, devido à presença de áreas nodulares ou halo hipoecogênico periférico. A vascularização foi predominantemente hilar e os índices de resistividade e pulsatilidade médios obtidos foram 0,63 (± 0,07) e 1,16 (± 0,27), respectivamente. O escore elastográfico observado com maior frequência foi o 2, referente a tecido de elasticidade intermediária, tendendo a macio. Tais estudos sustentam a hipótese de que o exame ultrassonográfico e o elastográfico permitam a diferenciação entre lesões nodais neoplásicas e não neoplásicas e a caracterização de linfonodos acometidos pelas formas amastigotas de Leishmania spp.

Applicability of ultrasonography and sonoelastography for characterization of lymph node lesions has not been established. The aim of the first study was to compare sonographic and sonoelastographic features between 50 neoplastic and 69 non-neoplastic lymph nodes of dogs, categorized according to microscopy. We hypothesize that sonography and sonoelastography allow the differentiation between neoplastic and non-neoplastic lymph node lesions. Quantitative variables were compared using Students unpaired t test and categoric variables were assessed using non-parametric Mann-Whitney U test. Neoplastic nodes had larger size, and short-to-long axis, predominantly mixed vascular flow distribution (hilar and peripheral) on Color Doppler and on Power Doppler, higher resistivity and pulsatility indices, and higher stiffness (score predominantly 4) on elastographic chromatic scale in comparison with non-neoplastic lymph nodes. The aim of the second study was to describe sonographic and elastosonographic features of 25 canine lymph nodes parasitized with Leishmania spp. We hypothesize that sonography and sonoelastography allow standardization of lymph nodes with Leishmania spp. There was enlargement of the lymph nodes associated with maintenance of the shape. Most of the nodes had irregular contour, well-defined borders and absent hilar tissue definition. A minority of the nodes had heterogeneous uniformity due to focal hypoechoic areas or peripheric hypoechoic areas. Vascular flow distribution was predominantly hilar and mean resistivity and pulsatility indexes were 0.63 (± 0.07) and 1.16 (± 0.27), respectively. The most frequent elastographic score was 2, indicating an intermediate soft composition of the lymph node tissue.

Alterações microscópicas em linfonodos de bovinos sorologicamente positivos para brucelose / Microscopic changes in cattle lymph odes serologically positive for brucellosis / Cambios microscópicos en ganglios linfáticos de bovinos serológicamente positivos para brucelosis

La brucelosis es una enfermedad infectocontagiosa causada por bacterias intracelulares facultativas del género Brucella spp, zoonosis de distribución mundial. Las principales manifestaciones clínicas de la enfermedad provocan reducción en la producción de los animales, y sus implicaciones económicas causan obstáculos en la comercialización. En esta investigación se buscó encontrar cambios microscópicos en los ganglios linfáticos de ganados sorológicamente positivos para brucelosis, listando la reacción inflamatoria de los ganglios linfáticos como indicativo para el diagnóstico histopatológico de la enfermedad. Las muestras fueron recolectadas en los ganglios linfáticos superiores del cuello de veinte vacas, diez de la raza Gir, y diez de la raza Nelore, y enviadas al Laboratorio de Patología Animal de la Universidad de Uberaba. Al realizar el examen macroscópico de los ganglios linfáticos, se comprobó que todos se presentaban reactivos, aunque discretamente. En la lectura de las diapositivas histopatológicas, se diagnosticó en 100% de ellos linfadenitis crónica, compatible con el cuadro de brucelosis. El impacto económico y zoonótico de la enfermedad justifican la necesidad definitiva de establecer programas de control y erradicación, siendo que el diagnóstico representa gran relevancia en este proceso, y el examen histopatológico se convierte en importante ayuda en la confirmación del diagnóstico serológico.(AU)

Brucellosis is an infectious and contagious disease caused by intracellular bacteria of the genus Brucella spp., zoonosis of worldwide distribution. The main clinical manifestations of this disease cause reduction in the animals production, and their economic implications provoke barriers in trade. The aim of this study is to find microscopic changes in cattle lymph nodes from animals serologically positive for brucellosis, associating the inflammatory reaction nodes as indicative findings for the histopathologic diagnosis of the disease. Samples were collected from upper cervical lymph nodes in twenty cows, ten from Gir breed, and ten, Nellore, sent to Laboratory of Animal Pathology at the University of Uberaba. In macroscopic examination of the lymph nodes, it was found that all had been reactive even if discretely. In reading the histopathological slides, it was diagnosed in 100% of cases, the same chronic lymphadenitis, compatible with the framework of brucellosis. The economic impact and the zoonotic characteristic of the disease justify the definitive need to establish programs of control and eradication, as the diagnosis is very relevant in this process, histopathological examination turns an important aid to confirm serological diagnosis.(AU)

A Brucelose é uma doença infecto-contagiosa provocada por bactérias intracelulares facultativas do gênero Brucella spp., zoonose de distribuição mundial. As principais manifestações clínicas da doença provocam redução na produção dos animais, e suas implicações econômicas causam barreiras na comercialização. Objetivou-se pesquisar alterações microscópicas nos linfonodos de bovinos sorologicamente positivos para brucelose, relacionando à reação inflamatória ganglionar como achado indicativo para o diagnóstico histopatológico da doença. Foram colhidas amostras de linfonodos cervicais superiores em vinte bovinos fêmeas, 10 da raça Gir e 10 da raça Nelore, enviadas ao Laboratório de Patologia Animal da Universidade de Uberaba. Ao realizar o exame macroscópico dos linfonodos, verificou-se que todos se apresentavam reacionais, mesmo que discretamente. Na leitura das lâminas histopatológicas, diagnosticou-se em 100% deles linfadenite crônica, compatível com o quadro de brucelose. O impacto econômico e zoonótico da doença justificam a necessidade definitiva do estabelecimento de programas de controle e erradicação, sendo que o diagnóstico representa grande relevância neste processo, e o exame histopatológico perfaz importante auxílio na confirmação do diagnóstico sorológico.(AU)

Detection of Ehrlichia canis in bone marrow aspirates of experimentally infected dogs

The present work describes the detection of infected cells in the bone marrow aspirates of dogs experimentally infected with a Brazilian isolate of Ehrlichia canis. Dogs were monitored twice a day by clinical evaluation and peripheral blood smear examination. Every three days, blood samples were collected for cell counts. Weekly, aspirates from the bone marrow were examined and serum samples were tested by IFAT. The clinical signs observed were fever, pallid membranes, lymphadenopathy, serous nasal secretions, and pronounced weight loss. Hematological alterations included normocytic normochromic anemia, decrease of neutrophils and lymphocytes, and thrombocytopenia. Few E. canis infected cells were seen in blood smears. However, stages of E. canis were visualized in bone marrow aspirates 15 days post infection.

O presente trabalho descreve a detecção de células infectadas em aspirados de medula óssea de cães experimentalmente infectados com uma amostra brasileira de Ehrlichia canis. Os cães foram monitorados duas vezes por dia através de avaliação clínica e exames de esfregaços de sangue periférico. A cada três dias, amostras de sangue foram coletadas para contagem celular. Semanalmente foram feitas punções de medula óssea para exame microscópico direto do material aspirado e coleta de sangue para exames sorológicos através da reação de imunofluorescência indireta. Os sinais clínicos observados foram febre, membranas pálidas, linfadenopatias, secreções nasais serosas e acentuada perda de peso. As alterações hematológicas incluíram anemia normocítica normocrômica, redução de neutrófilos e linfócitos e trombocitopenia. Poucas células infectadas com E. canis foram observadas em esfregaços sanguíneos, entretanto várias formas de desenvolvimento de E. canis foram visualizadas em aspirados de medula óssea 15 dias após a infecção.

Detection of Ehrlichia canis in bone marrow aspirates of experimentally infected dogs

The present work describes the detection of infected cells in the bone marrow aspirates of dogs experimentally infected with a Brazilian isolate of Ehrlichia canis. Dogs were monitored twice a day by clinical evaluation and peripheral blood smear examination. Every three days, blood samples were collected for cell counts. Weekly, aspirates from the bone marrow were examined and serum samples were tested by IFAT. The clinical signs observed were fever, pallid membranes, lymphadenopathy, serous nasal secretions, and pronounced weight loss. Hematological alterations included normocytic normochromic anemia, decrease of neutrophils and lymphocytes, and thrombocytopenia. Few E. canis infected cells were seen in blood smears. However, stages of E. canis were visualized in bone marrow aspirates 15 days post infection.

O presente trabalho descreve a detecção de células infectadas em aspirados de medula óssea de cães experimentalmente infectados com uma amostra brasileira de Ehrlichia canis. Os cães foram monitorados duas vezes por dia através de avaliação clínica e exames de esfregaços de sangue periférico. A cada três dias, amostras de sangue foram coletadas para contagem celular. Semanalmente foram feitas punções de medula óssea para exame microscópico direto do material aspirado e coleta de sangue para exames sorológicos através da reação de imunofluorescência indireta. Os sinais clínicos observados foram febre, membranas pálidas, linfadenopatias, secreções nasais serosas e acentuada perda de peso. As alterações hematológicas incluíram anemia normocítica normocrômica, redução de neutrófilos e linfócitos e trombocitopenia. Poucas células infectadas com E. canis foram observadas em esfregaços sanguíneos, entretanto várias formas de desenvolvimento de E. canis foram visualizadas em aspirados de medula óssea 15 dias após a infecção.

Uveitis associated to the infection by Leishmania chagasi in dog from the Olinda city, Pernambuco, Brazil

Among the parasitic diseases, Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) is included in the systemic illnesses of chronic evolution that attack men and dogs, presenting varied clinical manifestations as cachexia, dermatologic lesions, peripheral lymphadenopathies, besides the ocular lesions. This work report the case of a dog clinically suspected of having CVL, presenting skin lesions, cachexia, gryphosis, and ocular signs of uveitis. The parasitological diagnosis was accomplished for Canine Leishmaniasis through the visualization of amastigote forms of Leishmania chagasi in smears of bone marrow fluid aspirate, of non-lesioned, and lesioned skin. Alterations in the ocular structures are characterized mainly by mononuclear-plasmocitic infiltrate.

Dentre as doenças parasitárias, a Leishmaniose Visceral Canina (LVC) inclui-se entre as enfermidades sistêmicas de evolução crônica que acometem seres humanos e cães, suscitando nessa última espécie, manifestações clínicas variadas como caquexia, dermatopatias, linfadenopatias periféricas, além das lesões oculares. Neste trabalho, relata-se o caso de um cão com suspeita clínica de LVC, apresentando lesões dermatológicas, caquexia, grifose e sinais oculares de uveíte. Realizou-se diagnóstico parasitológico para leishmaniose canina através do encontro de formas amastigotas de Leishmania sp. Alterações nas estruturas oculares caracterizaram-se, principalmente, por infiltrado mononuclear-plasmocitário.

Uveitis associated to the infection by Leishmania chagasi in dog from the Olinda city, Pernambuco, Brazil

Among the parasitic diseases, Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) is included in the systemic illnesses of chronic evolution that attack men and dogs, presenting varied clinical manifestations as cachexia, dermatologic lesions, peripheral lymphadenopathies, besides the ocular lesions. This work report the case of a dog clinically suspected of having CVL, presenting skin lesions, cachexia, gryphosis, and ocular signs of uveitis. The parasitological diagnosis was accomplished for Canine Leishmaniasis through the visualization of amastigote forms of Leishmania chagasi in smears of bone marrow fluid aspirate, of non-lesioned, and lesioned skin. Alterations in the ocular structures are characterized mainly by mononuclear-plasmocitic infiltrate.

Dentre as doenças parasitárias, a Leishmaniose Visceral Canina (LVC) inclui-se entre as enfermidades sistêmicas de evolução crônica que acometem seres humanos e cães, suscitando nessa última espécie, manifestações clínicas variadas como caquexia, dermatopatias, linfadenopatias periféricas, além das lesões oculares. Neste trabalho, relata-se o caso de um cão com suspeita clínica de LVC, apresentando lesões dermatológicas, caquexia, grifose e sinais oculares de uveíte. Realizou-se diagnóstico parasitológico para leishmaniose canina através do encontro de formas amastigotas de Leishmania sp. Alterações nas estruturas oculares caracterizaram-se, principalmente, por infiltrado mononuclear-plasmocitário.

Use of the Dorfman-Warnke classification (modified by Burke) in veterinary pathology in the evaluation of the lymphadenitis induced through canine parvovirus in guinea -pigs (Cavia porcellus ) / Utilização da classificação de Dorfman-Warnke (modificada por Burke) em patologia veterinária na avaliação da linfadenite induzida por parvovírus canino em cobaias (Cavia porcellus )

In human pathology the adequate system used to analyze and interprete reactive lymphadenopathies is based on the morphological characterization of the various areas within the lymphoid node. In veterinary pathology there is no standardization of histopathological evaluation of lymph nodes. Therefore, in this study, we applied the Dorfman-Warnke (modified by Burke) human classification of reactive lymphadenopathies to evaluate virus-induced lymphadenitis in guinea-pigs. Canine parvovirus was inoculated into the footpads of guinea-pigs and the response of popliteal lymph nodes was histologically studied. The footpads were excised after different periods of time, processed, and stained with HE, Mallory, Gordon & Sweets, Giemsa and by immunohistochemical methods. A significant increase in the weight of ipsilateral lymph nodes to the inoculation site (p 0.05) was observed. The follicular response in the lymph nodes was characterized by the reaction of the germinative center, which showed partial loss of delimitation in the mantle zone. Increased numbers of blast cells and hypertrophy of post-capillary venules were evidenced in the paracortical area of the lymph nodes. There was a discrete hyperplasia of the medullary cords and a general enlargement of the reticular net associated with those alterations. The reactional response observed was similar to viral lymphadenitis ident

Em patologia humana, a análise e interpretação das linfadenopatias reacionais baseia-se na caracterização morfológica das várias regiões do linfonodo. Em patologia veterinária não há essa padronização. No presente estudo, utilizamos as bases da classificação de Dorfman-Warnke (modificada por Burke), utilizada na área médica humana para avaliarmos uma linfadenite viral experimental em cobaias. Parvovírus canino foi inoculado em coxim plantar de cobaias e a resposta dos linfonodos poplíteos avaliada. No fim de cada período experimental, linfonodos foram excisados, pesados e processados histologicamente em cortes corados pelos métodos de Giemsa, Mallory, Gordon & Sweets e Hematoxilina-Eosina e por meio de imunoistoquímica com anticorpos pan-T e pan-B. Foi observado aumento de peso significante (p 0,05) dos linfonodos ipsilaterais ao sítio de inoculação em comparação com os contralaterais. A resposta folicular nos primeiros linfonodos foi caracterizada por reação do centro germinativo, apresentando perda parcial da delimitação da zona do manto. Em região paracortical aumentou o número de células blásticas, ocorrendo hipertrofia de vênulas pós-capilares. Associou-se discreta hiperplasia de cordões medulares e densificação do estroma reticular. A reação observada apresenta semelhanças com a identificada em humanos frente a estímulo viral, sugerindo a adequação do uso dessa cla