Características seminais pós-descongelamento em garanhões da raça crioula / Post-thaw seminal characteristics of Criollo breed stallions

Este trabalho teve como objetivo avaliar as características seminais de garanhões da raça Crioula após o processo de criopreservação utilizando o BotuCrio® . Foram utilizados 24 garanhões alojados nas proximidades de Porto Alegre, RS, Brasil. As análises do sêmen foram realizadas pré e pósdescongelamento através do sistema Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision®. Somente foram utilizadas amostras com motilidade total ≥ 60 % e vigor ≥ 3, estas foram envasadas em palhetas de 0,5 ml, dispostas horizontalmente a 5ºC durante 20 minutos. Após colocadas a 6 cm acima do nível de nitrogênio líquido durante 20 minutos. Sendo finalmente imersas em nitrogênio líquido, após descongeladas em banho-maria a 37ºC durante 30 segundos. Os valores médios e desvios padrões das variáveis pós-descongelamento foram: motilidade total (52,85 % ± 7,27); motilidade progressiva (31,15 % ± 10,21); motilidade rápida (4,78 % ± 5,37); motilidade local (22,44 % ± 8,68); velocidade curvilinear (97,67 μm/s ± 35,25); velocidade em linha reta (35,33 μm/s ± 15,29); velocidade da trajetória média (44,99 μm/s ± 17,98); linearidade (0,3 % ± 0,15); BCF (2,5 Hz ± 1,7); ALH (0,35 μm ± 0,3); integridade funcional da membrana (42,73 % ± 7,06) e integridade estrutural da membrana (48,06 % ± 8,99). Concluímos que o protocolo utilizando diluente BotuCrio® é viável para criopreservação do sêmen de cavalos da raça Crioula, pois garante motilidade acima de 30 % pós-descongelamento que é recomendado pelo Colégio Brasileiro de Reprodução Animal.(AU)

The aim of this study was to evaluate seminal characteristics of Criollo breed stallions, after cryopreservation process using the BotuCrio®. One ejaculate from twenty-four stallions located near to Porto Alegre, RS, Brazil were used. Semen analysis were performed pre and post-freezing through the Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision® system. Only samples with total motility ≥ 60 % and vigor ≥ 3 were used. The samples were placed in 0.5 ml straws, arranged horizontally at 5ºC for 20 minutes. Then, 6 cm above the level of liquid nitrogen in vapor for 20 minutes. Finally, being immersed in liquid nitrogen, the samples thawed in a water bath at 37ºC for 30 seconds. Mean values and standard deviations of post-freeze variables were: total motility (52.85 % ± 7.27); progressive motility (31.15 % ± 10.21); rapid motility (4.78 % ± 5.37); local motility (22.44 % ± 8.68); Curvilinear Velocity (97.67 μm/s ± 35.25); Straight Line Velocity (35.33 μm/s ± 15.29); Average Path Velocity (44.99 μm/s ± 17.98); Linearity (0.3 % ± 0.15); BCF (2.5 Hz ± 1.7); ALH (0.35 μm ± 0.3) functional integrity (42.73 % ± 7.06) and physical integrity (48.06 % ± 8.99). We conclude that the protocol used for semen cryopreservation is feasible for use in the Criollo breed, because it has motility above 30 % post-freezing semen parameters, wich is the recommended by the Brazilian College of Animal Reproduction.(AU)

Características seminais pós-descongelamento em garanhões da raça crioula / Post-thaw seminal characteristics of Criollo breed stallions

Este trabalho teve como objetivo avaliar as características seminais de garanhões da raça Crioula após o processo de criopreservação utilizando o BotuCrio® . Foram utilizados 24 garanhões alojados nas proximidades de Porto Alegre, RS, Brasil. As análises do sêmen foram realizadas pré e pósdescongelamento através do sistema Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision®. Somente foram utilizadas amostras com motilidade total ≥ 60 % e vigor ≥ 3, estas foram envasadas em palhetas de 0,5 ml, dispostas horizontalmente a 5ºC durante 20 minutos. Após colocadas a 6 cm acima do nível de nitrogênio líquido durante 20 minutos. Sendo finalmente imersas em nitrogênio líquido, após descongeladas em banho-maria a 37ºC durante 30 segundos. Os valores médios e desvios padrões das variáveis pós-descongelamento foram: motilidade total (52,85 % ± 7,27); motilidade progressiva (31,15 % ± 10,21); motilidade rápida (4,78 % ± 5,37); motilidade local (22,44 % ± 8,68); velocidade curvilinear (97,67 μm/s ± 35,25); velocidade em linha reta (35,33 μm/s ± 15,29); velocidade da trajetória média (44,99 μm/s ± 17,98); linearidade (0,3 % ± 0,15); BCF (2,5 Hz ± 1,7); ALH (0,35 μm ± 0,3); integridade funcional da membrana (42,73 % ± 7,06) e integridade estrutural da membrana (48,06 % ± 8,99). Concluímos que o protocolo utilizando diluente BotuCrio® é viável para criopreservação do sêmen de cavalos da raça Crioula, pois garante motilidade acima de 30 % pós-descongelamento que é recomendado pelo Colégio Brasileiro de Reprodução Animal.

The aim of this study was to evaluate seminal characteristics of Criollo breed stallions, after cryopreservation process using the BotuCrio®. One ejaculate from twenty-four stallions located near to Porto Alegre, RS, Brazil were used. Semen analysis were performed pre and post-freezing through the Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision® system. Only samples with total motility ≥ 60 % and vigor ≥ 3 were used. The samples were placed in 0.5 ml straws, arranged horizontally at 5ºC for 20 minutes. Then, 6 cm above the level of liquid nitrogen in vapor for 20 minutes. Finally, being immersed in liquid nitrogen, the samples thawed in a water bath at 37ºC for 30 seconds. Mean values and standard deviations of post-freeze variables were: total motility (52.85 % ± 7.27); progressive motility (31.15 % ± 10.21); rapid motility (4.78 % ± 5.37); local motility (22.44 % ± 8.68); Curvilinear Velocity (97.67 μm/s ± 35.25); Straight Line Velocity (35.33 μm/s ± 15.29); Average Path Velocity (44.99 μm/s ± 17.98); Linearity (0.3 % ± 0.15); BCF (2.5 Hz ± 1.7); ALH (0.35 μm ± 0.3) functional integrity (42.73 % ± 7.06) and physical integrity (48.06 % ± 8.99). We conclude that the protocol used for semen cryopreservation is feasible for use in the Criollo breed, because it has motility above 30 % post-freezing semen parameters, wich is the recommended by the Brazilian College of Animal Reproduction.

Ablação de neoplasia no vestíbulo da cavidade oral de equino / Neoplasia ablation in the equine oral cavity vestibule

Background: Oral squamous cell carcinoma is responsible for more than 90% of head and neck neoplasms in humans.Multiple factors are associated with the development of squamous cell carcinomas in humans and animals, such as prolonged exposure to ultraviolet light, lack of pigment in the epidermis, or sparse hair coverage. In horses, oral forms arerare and represent 7% of cases, but sarcoids are the main type of oral neoplasia. In the present case, due to the location andanatomical dimensions of the oral vestibule, it was necessary to adapt it to the natural tumor excision, a fact that aimedto describe this report.Case: One Arabian 2- year-old male horse, treated at the Veterinary Hospital of the Santa Cruz State University (UESC),with signs of severe mouth bleeding and halitosis. Clinical inspection of the face showed elevation in the masseter regionand left mandible branch. Clinical examination of the oral cavity revealed soft tissue tumor extending from tooth 308(PM-1, lower left) to 311 (M-3, lower left) and on the buccal surface of the left mandible branch. Radiographic examination revealed no invasion of bone tissue by the tumor. Biopsy material was collected. The histopathological report was ofneoplastic cell proliferation, frequent mitoses, binucleate cells and extensive ulceration area associated with neutrophilicinflammatory infiltrate, indicative of squamous cell carcinoma. The animal was referred to the Surgical Sector who, afterevaluation of the animal, opted for the ablation of the neoplasia. Pre-anesthesia performed with intravenous detomidine30 µg/kg, anesthesia with regional mandibular nerve block with 20 mL of 2% lidocaine and maintenance with continuousinfusion of detoxid 0.5 µg/kg/ min. Contention for the operative act in the quadrupedal...

Ablação de neoplasia no vestíbulo da cavidade oral de equino / Neoplasia ablation in the equine oral cavity vestibule

Background: Oral squamous cell carcinoma is responsible for more than 90% of head and neck neoplasms in humans.Multiple factors are associated with the development of squamous cell carcinomas in humans and animals, such as prolonged exposure to ultraviolet light, lack of pigment in the epidermis, or sparse hair coverage. In horses, oral forms arerare and represent 7% of cases, but sarcoids are the main type of oral neoplasia. In the present case, due to the location andanatomical dimensions of the oral vestibule, it was necessary to adapt it to the natural tumor excision, a fact that aimedto describe this report.Case: One Arabian 2- year-old male horse, treated at the Veterinary Hospital of the Santa Cruz State University (UESC),with signs of severe mouth bleeding and halitosis. Clinical inspection of the face showed elevation in the masseter regionand left mandible branch. Clinical examination of the oral cavity revealed soft tissue tumor extending from tooth 308(PM-1, lower left) to 311 (M-3, lower left) and on the buccal surface of the left mandible branch. Radiographic examination revealed no invasion of bone tissue by the tumor. Biopsy material was collected. The histopathological report was ofneoplastic cell proliferation, frequent mitoses, binucleate cells and extensive ulceration area associated with neutrophilicinflammatory infiltrate, indicative of squamous cell carcinoma. The animal was referred to the Surgical Sector who, afterevaluation of the animal, opted for the ablation of the neoplasia. Pre-anesthesia performed with intravenous detomidine30 µg/kg, anesthesia with regional mandibular nerve block with 20 mL of 2% lidocaine and maintenance with continuousinfusion of detoxid 0.5 µg/kg/ min. Contention for the operative act in the quadrupedal...(AU)

Adaptação morfofuncional do coração do equino da raça Crioula treinado para o Freio de Ouro

A cardiologia é uma área em ascensão da medicina veterinária e devido sua relevância na medicina esportiva equina, objetivou-se identificar a influência de do treinamento para o Freio de Ouro nos índices ecocardiográficos e eletrocardiográficos de equinos da raça Crioula. Foram avaliados 31 equinos da raça Crioula, de idade variando entre 5 e 12 anos, com peso médio de 400,23 ± 81,89 kg, altura média de 1.41 ± 0,03 m e perímetro torácico médio de 1,74 ± 0,05 m, distribuídos em dois grupos, sendo eles: Grupo 1: equinos em treinamento para o Freio de Ouro (n = 14); Grupo 2: equinos não treinados (n = 17). Os índices ecocardiográficos aferidos foram: diâmetro do átrio esquerdo (AE) e da aorta (AO) e a relação entre ambos, espessura de septo interventricular (SIV), parede livre do ventrículo esquerdo (PLVE), diâmetro interno do ventrículo esquerdo (DVE), volume sistólico final do ventrículo esquerdo (VSFVE), volume diastólico final do ventrículo esquerdo (VDFVE), espessamento fracional do septo interventricular (EFSIV), encurtamento fracional do diâmetro do ventrículo esquerdo (FEVE), MassaVE, fração de ejeção do ventrículo esquerdo (FE) e volume sistólico (VS). Para investigação dos parâmetros eletrocardiográficos avaliou-se a determinação do ritmo cardíaco, frequência cardíaca (bt/min), duração da onda P (ms), do complexo QRS (ms) e dos intervalos QT (ms), além das amplitudes (mV) da onda P, do complexo QRS, do segmento ST e da onda T na derivação DII. Nas derivações DI, DIII, aVR, aVL e aVF foram mensuradas as durações (ms) e as amplitudes (mV) dos respectivos complexos QRS (velocidade de 50 mm/s, 1cm=1mv), além da avaliação do eixo da onda P e do complexo QRS. Verificou-se diferença entre os grupos nos caracteres ecocardiográficos e eletrocardiográficos, representados pelas variáveis SIVd, SIVs, PPVEd, PPVEs, MassaVE, AO, AE e Duração T. Observou-se hipertrofia cardíaca concêntrica fisiológica nos equinos treinados quando comparados com os não treinados. Foi identificado ritmo sinusal normal como ritmo prevalente nos animais estudados. Portanto, há influência do treinamento em caracteres eco e eletrocardiográficos em equinos atletas da raça Crioula.

Cardiology is a growing area of veterinary medicine and due to its relevance in equine sports medicine, the aim was to identify the influence of training for the Freio de Ouro in the echocardiographic and electrocardiographic indices of Criollo horses. Thirty-one Criollo horses were evaluated, aged between 5 and 12 years, with averages weight of 400.23 ± 81.89kg, height of 1.41 ± 0.03m and chest circumference of 1.74 ± 0.05m, divided into two groups: horses in training for the Freio de Ouro (n = 14); untrained horses (n = 17). The echocardiographic indices measured were: left atrium (LA) and aorta (AO) diameters and the relationship between them, interventricular septum thickness (IVS), left ventricular free wall (LVLP), left ventricular inner diameter (LVD) , left ventricular end-systolic volume (LVSF), left ventricular end-diastolic volume (LVLV), interventricular septal fractional thickening (EFSIV), left ventricular fractional shortening (LVEF), LVMass, left ventricular ejection fraction (EF) and stroke volume (SV). To investigate the electrocardiographic parameters, the determination of heart rate, heart rate (bt/min), P wave duration (ms), QRS complex (ms) and QT intervals (ms), in addition to amplitudes (mV) were evaluated of the P wave, QRS complex, ST segment, and T wave in lead DII. In the DI, DIII, aVR, aVL and aVF leads, the durations (ms) and amplitudes (mV) of the respective QRS complexes (speed of 50 mm/s, 1cm=1mv) were measured, in addition to the evaluation of the P wave axis and of the QRS complex. There was a difference between the groups in the echocardiographic and electrocardiographic measures, represented by the variables SIVd, SIVs, PPVEd, PPVEs, MassaVE, AO, AE and Duration T. Physiological concentric cardiac hypertrophy was observed in trained horses when compared with untrained horses. Normal sinus was identified as the prevalent rhythm in the studied animals. Therefore, there is an influence of training in echo and electrocardiographic characters in Criollo horse athletes.

Tratamento conservativo e modelo de fisioterapia extensora na laceração total do tendão extensor digital longo em equinos: relato de três casos / Conservative treatment and extension physical therapy model in total laceration of long digital extensor tendon in horses: three cases report

A ruptura traumática do tendão extensor digital longo (TEDL) apresenta alta incidência entre as afecções que acometem o aparelho locomotor dos equinos, estando frequentemente associada aos acidentes em cercas de arame liso. O sinal clínico evidente é a perda da capacidade de extensão das falanges e do casco, trazendo déficit de propriocepção e claudicação aparente. Estas lesões tendíneas possuem prognóstico reservado, sendo que em alguns casos podem ser fatais. O objetivo deste artigo é relatar três casos de equinos com ruptura total do TEDL, submetidos a tratamentos de cicatrização de ferida por segunda intenção e modelo de fisioterapia extensora. As cicatrizações e retorno de função extensora ocorreram em média com 52,7± 7,36 dias, com retorno às atividades anteriormente desempenhadas em tempo inferior a 120 dias. Conclui-se que a cicatrização por segunda intenção com aparato de fisioterapia extensora apresenta-se como opção viável em situações que a sutura não é indicada ou nas deiscências relacionadas às lacerações de TEDL.

The traumatic rupture of the long digital extensor tendon has a high incidence of diseases that affect the locomotor system of horses, and is often associated with accidents in smooth wire fences. The obvious clinical sign is the loss of extensibility of the phalanges and the hull, bringing proprioception deficit and limping apparent. These tendon injuries have a poor prognosis, and in some cases can be fatal. The purpose of this article is to report three cases of horses with total TEDL rupture undergoing healing treatments wound by secondary intention and model extensor physiotherapy. The scarring and extensor function return occurred on average 52.7 ± 7.36 days, with return to activities previously performed in less than 120 days. It was concluded that the healing by secondary intention with extensor physiotherapy apparatus is presented as a viable option in situations where the suture is not indicated or the dehiscence related to lacerations TEDL.

Tratamento conservativo e modelo de fisioterapia extensora na laceração total do tendão extensor digital longo em equinos: relato de três casos / Conservative treatment and extension physical therapy model in total laceration of long digital extensor tendon in horses: three cases report

A ruptura traumática do tendão extensor digital longo (TEDL) apresenta alta incidência entre as afecções que acometem o aparelho locomotor dos equinos, estando frequentemente associada aos acidentes em cercas de arame liso. O sinal clínico evidente é a perda da capacidade de extensão das falanges e do casco, trazendo déficit de propriocepção e claudicação aparente. Estas lesões tendíneas possuem prognóstico reservado, sendo que em alguns casos podem ser fatais. O objetivo deste artigo é relatar três casos de equinos com ruptura total do TEDL, submetidos a tratamentos de cicatrização de ferida por segunda intenção e modelo de fisioterapia extensora. As cicatrizações e retorno de função extensora ocorreram em média com 52,7± 7,36 dias, com retorno às atividades anteriormente desempenhadas em tempo inferior a 120 dias. Conclui-se que a cicatrização por segunda intenção com aparato de fisioterapia extensora apresenta-se como opção viável em situações que a sutura não é indicada ou nas deiscências relacionadas às lacerações de TEDL.(AU)

The traumatic rupture of the long digital extensor tendon has a high incidence of diseases that affect the locomotor system of horses, and is often associated with accidents in smooth wire fences. The obvious clinical sign is the loss of extensibility of the phalanges and the hull, bringing proprioception deficit and limping apparent. These tendon injuries have a poor prognosis, and in some cases can be fatal. The purpose of this article is to report three cases of horses with total TEDL rupture undergoing healing treatments wound by secondary intention and model extensor physiotherapy. The scarring and extensor function return occurred on average 52.7 ± 7.36 days, with return to activities previously performed in less than 120 days. It was concluded that the healing by secondary intention with extensor physiotherapy apparatus is presented as a viable option in situations where the suture is not indicated or the dehiscence related to lacerations TEDL.(AU)

Avaliações macroscópica e histológica do reparo da cartilagem articular equina tratada com microperfurações do osso subcondral associadas ou não à injeção intra-articular de cartogenina / Macroscopic and histological evaluations of equine joint cartilage repair treated with microperforation of the subchondral bone associated or not with intra-articular kartogenin

O objetivo deste estudo foi avaliar o reparo da cartilagem hialina equina, por meio de análises macroscópica (através de videoartroscopia) e histológica (através de fragmentos de biopsia), em defeitos condrais induzidos na tróclea lateral do fêmur tratados pela técnica de microperfurações subcondral associada ou não com administração intra-articular de cartogenina. Foram utilizados seis equinos pesando em média (±DP) 342±1,58 kg, com a idade aproximada de 7,2±1,30 anos e escore corporal de 7,1±0,75, que foram submetidos a videoartroscopia para indução da lesão condral de 1 cm2 na tróclea lateral do fêmur e realização da técnica de microperfuração do osso subcondral de ambos os joelhos. Foram realizadas quatro aplicações semanais com 20 μM de cartogenina intra-articulares em um dos joelhos (grupo tratado) e solução de ringer com lactato na articulação contralateral (grupo controle). Após o período de 60 dias, foram feitas as avaliações macroscópicas, através de videoartroscopias, e histológicas, através de biopsia. Não foram observadas diferenças significativas nos escores macroscópicos e histológicos para reparação condral entre animais dos grupos tratados e não tratados (P>0,05). De modo geral, a porcentagem média de cartilagem hialina no tecido de reparo (17,5%) foi condizente com a literatura internacional usando outros tipos de perfuração condral. Entretanto, não se observaram diferenças estatísticas entre grupos (P>0,05). A terapia com cartogenina, segundo protocolo utilizado, não produziu melhora do processo cicatricial em lesões condrais induzidas e tratadas com microperfurações na tróclea lateral do fêmur em equinos.(AU)

The aim of this study was to evaluate the joint cartilage repair by macroscopic (via arthroscopy) and histological (biopsy fragments) analyses in chondral defects induced into equine femoral trochlea treated by microperforation associated with or without intra-articular administration of kartogenin. Six horses weighing 342±1.58 kg (mean ± SD), aged approximately 7.2±1.30 years and with a body condition score of 7.1±0.75, were used. The horses underwent arthroscopy for induction of 1-cm2 chondral lesions in lateral femoral trochlea immediately treated by microperforation of the subchondral bone of both knees. Four weekly intra-articular injections of kartogenin (20μM) in one knee (treated group) and Ringer lactate solution in the contralateral joint (control group) were performed during the postoperative period. After 60 days, macroscopic evaluations were performed by video-arthroscopy, and biopsy samples of the repair tissue were taken for histopathological healing evaluation. No significant change was observed in macroscopic and histological scores for chondral healing between treated and untreated groups (P>0.05). The overall mean percentage of hyaline cartilage in both groups (17.5%) was consistent with other international studies using other types of chondral microperforation; however, no statistical differences were observed between groups (P>0.05). In conclusion, the therapy with kartogenin, according to the used protocol, did not produce any macroscopic and histological healing improvement in induced chondral lesions treated with microperforations in equine femoral trochlea.(AU)

EFEITO DO RESVERATROL NA CRIOPRESERVAÇÃO DE SÊMEN DE GARANHÕES DA RAÇA CRIOULA

A possibilidade de transportar material genético por longas distâncias torna o uso de sêmen congelado altamente necessário para a indústria equina, mas os baixos índices de fertilidade decorrentes de danos celulares pelo processamento limitam sua utilização. Os fatores que ocasionam estes danos são diversos, entre eles, destaca-se a produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e o estresse oxidativo. A adição de antioxidantes no diluente pode minimizar estes danos, preservando parâmetros espermáticos e incrementado a fertilidade do sêmen congelado. O Resveratrol (RSV) é um polifenol derivado de plantas e apresenta algumas propriedades biológicas, entre elas, o efeito antioxidante em diversos sistemas. Deste modo, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a ação de RSV adicionado ao diluente para congelamento de sêmen de garanhões da raça Crioula sobre a viabilidade espermática e o estresse oxidativo. Para tal, doze ejaculados (n = quatro garanhões, três ejaculados cada), coletados com vagina artificial, foram diluídos até a concentração de 50x106 sptz/mL e fracionados em duas alíquotas. As alíquotas foram centrifugadas a 500G por 15min, o sobrenadante descartado e os pellets ressuspendidos e ajustados na concentração de 200x106 sptz/mL com diluente de congelamento: Botucrio® sem suplementação (Controle), ou suplementado com 10 M RSV. Após a manutenção do sêmen em nitrogênio líquido, duas palhetas de cada grupo foram descongeladas e submetidas a avaliações de cinética espermática, longevidade, morfologia, integridade de membrana plasmática, acrossomal e potencial de membrana mitocondrial, produção de ERO e potencial antioxidante total. Com este estudo, conclui-se que a adição de 10 M de RSV em diluente de congelamento não influenciou nos parâmetros cinéticos, bioquímicos e funcionais de espermatozoides descongelados de garanhões da raça Crioula. Mais estudos devem ser realizados para definição de perfis de estresse oxidativo e concentrações adequadas para preservação da qualidade do sêmen descongelado.

The possibility of transporting genetic material over long distances makes the use of frozen semen highly necessary for the equine industry, but the low fertility rates resulting from cellular damage by processing limit its use. The factors that because damages are diverse, among them, the production of reactive oxygen species (ROS) and oxidative stress stand out. The addition of antioxidants in the diluent can decrease damages, preserving sperm parameters and increasing the fertility of frozen semen. Resveratrol (RSV) is a polyphenol derived from plants and has some biological properties, including antioxidant effect in several systems. Thus, the aim of this study was to check the action of RSV added to the diluent for freezing the semen of stallions of the Crioula breed on sperm viability and oxidative stress. For this purpose, four Cioulos stallions, with known fertility, had semen collected three times during the breeding season. The semen free of gel fraction was diluted and fractionation in two aliquots, one frozen in Botucrio® diluent without any supplementation (control), and the other in diluent supplemented with 10 M RSV. After maintaining the semen in liquid nitrogen, two straws from each group were thawed and subjected to evaluations of sperm kinetics, longevity, morphology, plasma membrane integrity, acrosomal and mitochondrial membrane potential, ROS production and total antioxidant potential. With this study, it we concluded that the addition of 10 M of RSV in freezing diluent did not influence the kinetic, biochemical and functional parameters of thawed sperm from Crioulos stallions. Further studies should be carried out to define oxidative stress profiles and adequate concentrations to preserve the quality of thawed semen.

Sudden death, aortic rupture in horses, literature review, case studies reported and risk factors / Morte súbita por ruptura da aorta em cavalos, literatura, estudos de casos relatados e fatores de risco

Sudden deaths of horses in multiple equestrian disciplines have been attributed to acute and chronic respiratory and cardiovascular diseases. The aim of this study was to perform a review of aortic rupture in horses analyzing, case studies and assessing risk factors. The literature has reported a total of 137 cases of aortic rupture in horses for 28 years (1986-2014), with approximately five horses dying of aortic rupture per year. Histopathologically, there are observed discrete macroscopic degenerative changes in the intima layer only in the aorta. The histological evaluation in the beginning portion of the aorta of the heart evidenced degenerative changes with loss of continuity and distribution of elastic fibers. Risk factors for the rupture of the aorta are: spontaneous rupture associated with hypertension, preexisting vascular injury (aneurysm), dilated or hypertrophic cardiomyopathy, copper levels in the endothelium, genetic factors such as inbreeding, toxicology or pharmacological factors. Aortic rupture shows similarity with pulmonary hemorrhage induced by exercise especially under the locomotors induced trauma theory of exercise that can induce pulmonary hemorrhage. In conclusion, degenerative changes to discrete elastic fiber of the intima of the aorta in the emergence of the heart seem to predispose the aorta wall rupture at the time of maximum blood pressure during exercise and the consequent collapse and athletic horses death(AU)

As mortes súbitas de cavalos em várias provas equestres têm sido atribuídas a doenças respiratórias e cardiovasculares agudas e crônicas. O objetivo deste estudo foi efetuar uma revisão de literatura da ruptura da aorta em cavalos analisando estudos de caso e estabelecendo os possíveis fatores de risco. Na revisão da literatura no período de 28 anos (1986-2014) foram localizados 137 casos de ruptura da aorta em cavalos com aproximadamente cinco cavalos morrendo por essa causa por ano. Histologicamente, são observadas alterações macroscópicas discretas degenerativas na camada íntima da aorta. A avaliação histológica na porção inicial da aorta do coração evidencia alterações degenerativas com perda de continuidade e distribuição das fibras elásticas. Fatores de risco para a ruptura da aorta dos cavalos são: ruptura espontânea associada com hipertensão, lesão vascular pré-existente (aneurisma), cardiomiopatia dilatada ou hipertrófica, níveis de cobre no endotélio, fatores genéticos, tais como a consanguinidade na criação, toxicologia e aspectos farmacológicos. A ruptura aórtica mostra semelhança com hemorragia pulmonar induzida pelo exercício. Em conclusão, alterações degenerativas discretas das fibras elásticas da íntima da aorta parecem predispor a ruptura da parede da aorta, no momento da pressão máxima de sangue durante o exercício determinando o consequente colapso e morte do cavalo atleta(AU)

Lipid structural information from a single equine embryo by MALDI-MS / Informação estrutural de lipídios a partir de um único embrião equino pela técnica de MALDI-MS

It was reported the potential of MALDI-MS for the characterization of lipid species present in a single equine embryo, and studied some lipid structures detected by collision induced dissociation (CID) experiments. In the positive ion mode spectrum, it were observed mostly protonated and sodiated species of sphingomyelins (SM), phosphatidylcholines (PC) and triacylglycerols (TAG). In the negative ion mode, it were observed phosphatidylethanolamines (PE) and phosphatidylinositols (PI). MS/MS spectrum of most intense lipid ions was performed to show MALDI-MS/MS structural information potential. MS/MS spectrum in the positive mode of m/z 760.6 (attributed as PC34:1) depicted characteristic PC fragments of m/z 184.1 (choline polar head), and the neutral loss (NL) of 183 (phosphorylcholine). For the ion of m/z 766.6 (attributed as PE 38:5), we observed the NL of 140, characteristic of PE. For the ion of m/z 808.7 (attributed as PC 38.5), besides the fragment at m/z 184.1 at the NL of 183, it was possible to observe the loss of trimethylamine (ion of m/z 749.6), and the cyclophosphane (ion of m/z 147.0). Finally, for the negative ion mode, we isolated and fragmented the ion at m/z 863.6, which was attributed as PI 36:1 due to the presence of m/z 153 (glycerol phosphate H2 O-H), 223 (phospho inositol 2H2 O-H), 241 (phospho inositol H2 O-H), 281 (oleic acid), and 581.3 (lysophosphoinositol H2 O-H). It was concluded that MALDI-MS allowed the detection of a broad range of PC, SM, PE, PI and TAG lipid species, as well as a fast and confident characterization of lipid structures from a single equine embryo.(AU)

É relatado o potencial da técnica de MALDI-MS para caracterizar espécies de lipídios presentes em um único embrião equino e estudadas algumas estruturas lipídicas detectadas por dissociação induzida por colisão (CID). No espectro de modo íon positivo, foram observadas espécies, principalmente, protonadas e sodiadas de esfingomielinas (SM), fosfatidileolinas (PC) e triacilgliceróis (TAG). No modo negativo, foram observadas fosfatidiletanolaminas (PE) e fosfatidilinositos (PI). Espectros de íons de lípidos com maior intensidade foram utilizados para demonstrar o potencial da informação estrutural por MALDI-MS/MS. O espectro no modo positivo de m/z (massa sobre carga) 760,6 (atribuída como PC34:1) apresentou características de fragmentos PC de m/z 184,1 (denominada cabeça polar de colina), além de perda neutral (NL) de m/z 183 (fosforilcolina). Para o íon de m/z 766,6 (atribuída como PE38:5), observou-se a NL de 140, característica do PE. Para o íon de m/z 808,7 (38,5 atribuído como PC), além do fragmento m/z 184,1 na NL de 183, foi possível observar a perda de trimetilamina (íon de m/z 749,6) e o ciclofosfano (íon de m/z 147,0). Finalmente, para o modo de íon negativo, foram isolados e fragmentados o íon de m/z 863,6 que foi atribuído como PI36:1, devido à presença de m/z 153 (fosfato de glicerol H2 O-H ), 223 (inositol fosfo - 2H2 O-H) , 241 (fosfoinositol H2 O-H), 281 (ácido oleico) e 581,3 (lisofosfoinositol H2 O+H). Foi concluído que a MALDI - MS permite a detecção de uma ampla gama de espécies de PC, SM, PE, PI e TAG lipídicas, bem como a caracterização rápida e confiante de estruturas lipídicas a partir de um único embrião equino.(AU)

Hematoma etmoidal progressivo em equino revisão de literatura e relato de caso

O hematoma etmoidal progressivo (HEP) trata-se de uma massa não neoplásica que se expande a partir de hemorragias sucessivas da camada submucosa do labirinto etmoidal ou dos seios paranasais. Técnicas de diagnóstico, como endoscopia das vias aéreas superiores, radiografia e tomografia computadorizada, visam determinar a extensão das lesões. O tratamento é preconizado de acordo com o tamanho e localização do HEP, além da disponibilidade de equipamentos. As opções de tratamento incluem a ressecção cirúrgica, redução da massa por aplicação de agentes criogênicos ou laser e, a injeção de formaldeído intralesional. O prognóstico a longo prazo é reservado a desfavorável devido a alta taxa de recidivas da lesão. Este artigo fornece uma visão geral sobre a doença e descreve um caso de HEP tratado com sucesso pelo uso de injeção de formaldeído intralesional.

Avaliação da virulência in vitro de isolados clínicos e ambientais de fungos dermatófitos

Os dermatófitos constituem grupo de fungos que requerem queratina para crescimento, colinizando a pele e anexos de animais e do homem. Embora não sejam patógenos obrigatórios, Microsporum gypseum, M. canis e Trichophytonspp. relacionam-se a infecções em animais, causando classicamente lesões circulares na pele. Embora as dermatofitoses por dermatófitos geofílicos ocorram em menor grau, M. gypseum é a principal espécie envolvida e estes quadros devem ser considerados. Dentre os fatores que fazem com que os dermatófitos, tenham capacidade de infecção para animais, destacam-se enzimas como DNase, gelatinase, lipase, queratinase, elastase e colagenase, que foram avaliadas neste trabalho. O hábito dos animais domésticos permanecerem em contato íntimo com a terra, em quintais, vias públicas e parques, justifica o estudo de sua patogenicidade e a diferenciação do perfil enzimático de isolados clínicos e ambientais de dermatófitos, o que pode colaborar para estratégias de controle e prevenção da dermatofitose. Nossa pesquisa tem como objetivos o isolamento clínico e ambiental de fungos dermatófitos, avaliando a produção de DNase, lipase, gelatinase, queratinase, elastase e colagenase, enzimas relacionadas à virulência dos mesmos e a comparação da capacidade de produção dessas enzimas relacionadas à patogenicidade entre as cepas clínicas e ambientais. As cepas ambientais foram obtidas através da técnica descrita por Vanbreuseghem (1952), que emprega pelos estéreis de equino misturados ao solo umedecido, sendo utilizadas amostras de solo oriundas de diferentes locais do Brasil. As amostras clínicas foram oriundas de pelos e crostas de animais enviadas ao Serviço de Diagnóstico Microbiológico Veterinário/UFRRJ e semeadas em meio Mycosel®. A avaliação enzimática dos dermatófitos foi feita por leituras de absorbância em espectrofotômetro (colagenase, elastase e queratinase), formação de halo de degradação em placas (DNase e lipase) e liquefação em tubos (gelatinase). O projeto foi protocolado sob o CEUA nº 1395270617, sob a responsabilidade do professor Francisco de Assis Baroni e teve grande parcela custeada pelo próprio laboratório no qual foram desenvolvidas as atividades, uma vez que o mesmo conta com boa parte dos materiais e equipamentos requeridos durante a pesquisa.

The dermatophytes are a group of fungi that require keratin for growth, keratinizing the skin and attachments of animals and man. Although not obligatory pathogens, Microsporum gypseum, M. canis and Trichophytonspp. are related to infections in animals, causing classic circular lesions on the skin. Although dermatophytosis by geophilic dermatophytes occurs to a lesser extent, M. gypseum is the main species involved and these frames should be considered. Among the factors that cause dermatophytes to be able to infect animals, we highlight enzymes such as DNase, gelatinase, lipase, keratinase, elastase and collagenase, which were evaluated in this study. The habit of domestic animals remain in close contact with the land, in backyards, public roads and parks, justifies the study of their pathogenicity and the differentiation of the enzymatic profile of clinical and environmental isolates of dermatophytes, which may contribute to control strategies and prevention of dermatophytosis. Our research aims at the clinical and environmental isolation of dermatophyte fungi, evaluating the production of DNase, lipase, gelatinase, keratinase, elastase and collagenase, enzymes related to their virulence and the comparison of the production capacity of these enzymes related to the pathogenicity between clinical and environmental strains. The environmental strains were obtained through the technique described by Vanbreuseghem (1952), which uses the equine sterility mixed with the moist soil, using soil samples from different Brazilian sites. The clinical specimens were obtained from animal hairs and crusts sent to the Veterinary Microbiological Diagnostic Service / UFRRJ and sown in Mycosel ® medium. The enzymatic evaluation of the dermatophytes was performed by spectrophotometer (collagenase, elastase and keratinase) absorbance, plaque degradation halo formation (DNase and lipase) and liquefaction in tubes (gelatinase). The project was filed under CEUA nº 1395270617, under the responsibility of professor Francisco de Assis Baroni and had a large portion funded by the laboratory in which the activities were developed, since it has a good part of the materials and equipment required during the search.

USO DA TERMOGRAFIA NO ACOMPANHAMENTO DE CAVALOS PURO SANGUE INGLÊS DE CORRIDA EM INÍCIO DE TREINAMENTO

A termografia infravermelha é capaz de medir a temperatura das superfícies corporais e pode detectar distúrbios circulatórios provenientes da inflamação semanas antes da manifestação clínica, portanto tem sido usada para ajudar no diagnóstico de claudicação. Desta forma, surge como hipótese, que ela poderia ser também uma ferramenta valiosa para entender a adaptação musculoesquelética ao treinamento de corrida, e uma técnica sensível para prever a ocorrência de lesões. Este estudo teve como objetivo avaliar a variação térmica do sistema musculoesquelético de equinos jovens da raça Puro Sangue Inglês (PSI) durante seus primeiros meses de treinamento para corrida. Os exames termográficos foram realizados quinzenalmente em 16 cavalos PSI (10 machos e seis fêmeas) entre 20 e 23 meses de idade (21.7 ± 0.9). As avaliações foram realizadas desde o início do treinamento desses animais, em junho de 2016, e finalizaram em janeiro de 2017, totalizando 16 avaliações. As imagens termográficas eram realizadas no início da manhã, 30 minutos após a limpeza dos cavalos dentro de suas baias e no mesmo horário (06:00 am), a uma distância de 1,5 m do animal, utilizando uma câmera térmica (modelo E50bx, FLIR Systems Sorocaba, Brasil). Os termogramas foram avaliados usando o software FLIR Tools, e a temperatura (°C) foi medida nos aspectos dorsais e palmares/plantares de regiões específicas de interesse, incluindo regiões do boleto, metacarpo e metatarso, e regiões do carpo e do tarso. A imagem também foi realizada na coluna toracolombar e sacroilíaca, e na anca. Inicialmente, a temperatura aumentou em todas as regiões anatômicas ao longo do estudo, com temperaturas significativamente mais altas na avaliação final em comparação com a inicial (p<0,0001). Todas as regiões demonstraram uma correlação positiva entre si. No entanto, houve uma diferença significativa entre os lados direito e esquerdo durante os diferentes períodos de treinamento. Quatro cavalos tiveram interrupção no treinamento devido a lesões musculoesqueléticas; sendo que o exame termográfico anterior à manifestação clínica foi capaz de revelar mudanças significativas de temperatura nas regiões de interesse. Os resultados deste estudo demonstraram que a termografia infravermelha é uma técnica sensível e não invasiva, que pode facilitar na compreensão das adaptações do sistema musculoesquelético ao treinamento para a corrida, e pode ser usada como uma ferramenta preditiva com antecipação na ocorrência de lesões.

Infrared thermography is able to measure the body surfaces temperatures and has been used to aid in the diagnosis of lameness, and can detect circulatory disorders from inflammation weeks before the clinical manifestation. In this way, it appears as a hypothesis that it could also be a valuable tool to understand the musculoskeletal adaptation to running training, and a sensitive technique to predict the occurrence of injuries. The present study was aimed to evaluate the thermal variation in musculoskeletal system of young Thoroughbred (TB) horses during their initial months of race training. Were performed thermographic examinations fortnightly on 16 (10 male, six female) TB racehorses with approximately two years old, with a total of 16 evaluations from arrival to the racetrack in June 2016, until January 2017. Was performed the thermographic imaging early in the morning (06:00 am), 30 min after the horses were cleaned inside their stable stalls, at 1.5 m of distance using a thermal camera (Model E50bx, FLIR Systems, Sorocaba, Brazil). The images were evaluated using FLIR Tools software, and temperature (°C) was measured at the dorsal and palmar/plantar aspects of specific regions of interest, including fetlock, metacarpal and metatarsal regions, and carpal and tarsal regions. Imaging was also performed on the thoracolumbar and sacroiliac spine, and in both hips. As a result, all regions demonstrated a positive correlation with which other. The temperature increased in all anatomical regions throughout the study, with significantly higher temperatures in the final evaluation compared with the initial one (p < 0.0001). However, there was a significant difference between the right and left sides during the different training periods. Some horses exhibited poor musculoskeletal conditions associated with training; and the thermographic examination before training was able to reveal significant changes before clinical manifestation. Results of this study demonstrated that infrared thermography is a non-invasive and sensitive technique that can facilitate understanding of musculoskeletal system adaptations to race training, and may be used as a predictive tool to anticipate the occurrence of lesions.

PLASMA RICO EM PLAQUETAS EM EQUINOS: OBTENÇÃO E EFEITO SOBRE A PROLIFERAÇÃO DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS IN VITRO

LOUZADA, Janaina Godinho. Plasma Rico em Plaquetas e m e quinos : obte nção e efeito sobre a proliferação celular de células-tronco me s e nquimais in vitro. p. Dissertação (Mestrado em Patologia e Ciências Clínicas, Medicina Veterinária). Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2018. O Plasma Rico em Plaquetas (PRP) é um concentrado de plaquetas obtido por meio de uma metodologia simples, com boa relação custo-benefício para obter altas concentrações de fatores de crescimento a partir das plaquetas, que possuem propriedades regenerativas, com ação sobre a angiogênese, proliferação e migração celular. Atualmente o PRP é utilizado na medicina equina como produto autólogo terapêutico, principalmente no tratamento de fraturas ósseas, tendinites, desmites, artropatias e feridas cutâneas. As células-tronco estão presentes em todos os tecidos e órgãos, tendo como função primária a reposição de células perdidas durante o desgaste normal. Elas também estão envolvidas no reparo de tecidos lesionados por doenças e traumas e são, cada vez mais, objeto de estudo e de utilização na medicina equina para tratamentos diversos, visando a regeneração celular, permitindo desta forma recuperações acima da média de tratamentos habituais, onde o retorno à atividade atlética do equino é a principal finalidade de sua utilização. A associação de PRP e células-tronco tem sido cada vez mais empregada em lesões ósseas, ligamentares e tendíneas de forma a obter-se regeneração celular em tais lesões. Vários protocolos para obtenção de PRP têm sido propostos e citados na literatura e isso dificulta a escolha do protocolo mais adequado. Tentando encontrar um PRP com maior concentração plaquetária, demos início ao nosso estudo, onde a partir da avaliação de cinco protocolos citados em literatura e um determinado em nosso laboratório, seleciona mos um que atendeu a esse requisito. Após a obtenção do protocolo de PRP, avaliamos o efeito do PRP e do Plasma Pobre em Plaquetas (PPP) em cocultivo com células-tronco mesenquimais obtidas de tecido adiposo equino (MSCs), a fim de avaliarmos seu possível efeito sobre a proliferação celular das mesmas. Obtivemos um PRP com contagem plaquetária dez vezes o valor médio basal inicial, sendo o protocolo mais eficiente em concentras plaquetas. Não conseguimos replicar os resultados obtidos em outros laboratórios, indicando a necessidade do desenvolvimento de protocolos adequados para cada laboratório. Diferentes concentrações de PRP e PPP influencia ra m a proliferação celular de células-tronco mesenquimais obtidas de tecido adiposo equino. A morfologia fibroblastoide das MSCs foi mantida no cultivo com acréscimo de 2 % de PRP ao meio de cultivo. O PRP na concentração de 2% não inibiu a proliferação celular de MSCs in vitro e ainda manteve suas características morfológicas iniciais. Palavras-chave: PRP, células-tronco, equino.

LOUZADA, Janaina Godinho. Plasma Rico em Plaquetas e m e quinos : obte nção e efeito sobre a proliferação celular de células-tronco me s e nquimais in vitro. p. Dissertação (Mestrado em Patologia e Ciências Clínicas, Medicina Veterinária). Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2018. Platelet Rich Plasma (PRP) is a platelet concentrate obtained through a simple, costeffective methodology to obtain high concentrations of platelet growth factors that have regenerative properties, acting on angiogenesis, cell proliferation and migratio n. Currently PRP is used in equine medicine as an autologous therapeutic product, mainly in the treatment of bone fractures, tendinitis, defects, arthropathies and cutaneous wounds. Stem cells are present in all tissues and organs, with the primary functio n of replacing cells lost during normal wear and tear. They are also involved in the repair of tissue damaged by diseases and traumas and are increasingly being studied and used in equine medicine for various treatments, aiming at cellular regeneration, allowing in this way recoveries above the average of usual treatments, where the return to athletic activity of the equine is the main purpose of its use. he association of PRP and stem cells has been increasingly employed in bone, ligament and tendinous lesions in order to obtaining cellular regeneration in such lesions. Several protocols for obtaining PRP have been proposed and cited in the literature and this makes it difficult to choose the most appropriate protocol. Trying to find a PRP with higher platelet concentration, we started our study, where from the evaluation of five protocols cited in the literature and one in our laboratory, we selected one that met this requirement. After obtaining the PRP protocol, we evaluated the effect of PRP and Poor Plasma on Platelets (PPP) in cocultivation with mesenchymal stem cells obtained from equine adipose tissue (MSCs), in order to evaluate its possible effect on the cellular proliferation of themselves. We obtained a PRP with platelet count ten times the baseline mean value, being the most efficient protocol in platelet concentrates. We could not replicate the results obtained in other laboratories, indicating the need to develop protocols suitable for each laboratory. Different concentrations of PRP and PPP influenced the cell proliferation of mesenchymal stem cells obtained from equine adipose tissue. The fibroblas to id morphology of the MSCs was mainta ined in the culture with a 2% increase of PRP to the culture medium. PRP at 2% concentration didnt inhib it cell prolifera tio n of MSCs in vitro and still mainta ined its initia l morphologica l characteristics. Key word: PRP, stem cells, equine.

Papel da ubiquitina em garanhões com alta e baixa congelabilidade e aplicação da Coenzima Q-10 como promotora da função mitocondrial espermática

Resumo: Estudos demonstram que existe grande variabilidade na qualidade de sêmen entre garanhões, isso influencia na capacidade de resistir a criopreservação. A coenzima Q-10 (CoQ-10), é um cofator na cadeia de transporte de elétrons na mitocôndria, essencial para a produção de energia em forma de ATP e pode ser uma alternativa para melhorar a qualidade do sêmen criopreservado equino. Por outro lado, a ubiquitina é uma molécula que está envolvida em uma via de degradação de proteínas danificadas, ou com erros de síntese. Este processo ocorre na passagem do espermatozoide pelo epidídimo e está relacionado com a infertilidade no macho. Sendo assim, este trabalho possuiu como objetivos tentar melhorar a qualidade do sêmen criopreservado equino através da adição da CoQ-10 ao protocolo de criopreservação, além de estudar a proteína ubiquitina e sua relação com os garanhões de alta e baixa qualidade espermática. Levando em consideração esses objetivos, delineou-se dois experimentos. Em ambos foram utilizados 4 garanhões com alta e 4 com baixa qualidade espermática. Cada animal foi submetido a 5 colheitas de sêmen seguidas de congelações. Experimento 1: o sêmen foi criopreservado com a adição de duas concentrações da CoQ-10: 50 µM e 1 mM, a amostra controle foi criopreservada com diluidor Botucrio®. As partidas de sêmen foram analisadas quanto às características de motilidade espermática (CASA), integridades de membrana plasmática, acrossomal e potencial de membrana mitocondrial (através das sondas fluorescentes iodeto de propídeo, Hoechst 33342, JC-1 e FITC-PSA), alterações no citoesqueleto (phalloidin-FITC) e função mitocondrial (DAB). Experimento 2: foram comparadas a quantidade de ubiquitina presente nos espermatozoides de garanhões de alta e baixa qualidade seminal pela técnica de imunofluorescência, além disso foram feitas análises de morfologia espermática (DIC) e correlacionadas com a localização e intensidade de ubiquitina presente nos espermatozoides. Foi possível notar com o experimento 1 que a CoQ-10 na concentração de 1 mM melhorou a qualidade do sêmen pós-descongelação quando comparada ao controle. Já no experimento 2, foi constatado que garanhões com baixa qualidade espermática possuem maior quantidade de espermatozoides marcados com ubiquitina em seu ejaculado e a localização da ubiquitina em cabeça, peça intermediária e cauda dos espermatozoides está diretamente correlacionada com respectivos defeitos morfológicos encontrados.

Abstract: Studies have shown that there is great variability in the quality of semen among stallions, and that influences the ability to resist cryopreservation. Coenzyme Q-10 (CoQ-10) is a cofactor in the electron transport chain in the mitochondria, essential for energy production in the ATP form and may be an alternative to improve the quality of equine cryopreserved semen. Ubiquitin is a molecule that is involved in a pathway of degradation of damaged proteins, or with errors of synthesis. This process occurs in the sperm passage through the epididymis and is related to male infertility. Therefore, the objective of this thesis was to try to improve the quality of equine cryopreserved semen through the addition of (CoQ-10) to the cryopreservation protocol and also to study the protein ubiquitin and its relation to stallions of high and low seminal quality. Considering these objectives, two experiments were outlined. In both of them, 4 stallions with high seminal quality and 4 with low seminal quality were used. Each animal was submitted to 5 semen collections followed by freezing. Experiment 1: the semen was cryopreserved with the addition of two concentrations of CoQ-10: 50 M and 1 mM, the control sample was cryopreserved with Botucrio®. Semen samples were analyzed for sperm motile characteristics (CASA); plasma membrane integrity, acrosomal membrane integrity and mitochondrial membrane potential (through fluorescence probe propidium iodide, Hoechst 33342, JC-1 and FITC-PSA); cytoskeleton (phalloidin-FITC) and mitochondrial function (DAB). Experiment 2: the amounts of ubiquitin present in the spermatozoa of high and low semen quality stallions were compared by immunofluorescence technique. Also, sperm morphology (DIC) analysis were done and were correlated with the location and intensity of ubiquitin present in spermatozoa. It was possible to note from experiment 1 that CoQ-10 at 1 mM concentration improved post-thaw semen quality when compared to the control. In the experiment 2, we found that stallions with low seminal quality have a higher amount of spermatozoa marked with ubiquitin in their ejaculate and the location of the ubiquitin in the head, middle part and tail of the spermatozoa is directly correlated with the respective morphological defects in such locations.

ESTUDO DOPPLER E HISTOGRAMA EM ESCALA DE CINZA NA AVALIAÇÃO HEPÁTICA DE EQUINOS (Equus caballus) ADULTOS

A técnica ultrassonográfica permite a avaliação de quase todas as estruturas abdominais, inclusive do fluxo sanguíneo. A análise do fluxo portal, e de outros grandes vasos abdominais, como a veia cava caudal (VCC) e artéria aorta (AA) abdominal, auxilia o diagnóstico de doenças intra e extrahepáticas. Devido à escassez literária sobre o assunto em equinos, a pesquisa teve como objetivo estudar a técnica ultrassonográfica dos grandes vasos abdominais, determinar referências do diâmetro vascular e velocidade de fluxo sanguíneo da veia porta (VP), a partir do uso da ultrassonografia em modo bidimensional, e pela técnica Triplex Doppler. Foram selecionados 18 animais adultos, com os valores dos exames laboratoriais dentro da normalidade para a espécie, e clinicamente sadios. A partir da obtenção das imagens ultrassonográficas pelo modo-B, mediu-se o diâmetro dos vasos. O método Triplex doppler foi acionado, permitindo a análise da velocidade, pelo corte longitudinal do vaso. A média do diâmetro vascular foi de 2,74±0,25 cm para VP, 2,68±0,36 cm para VCC, e 2,78±0,23 para AA. A velocidade do fluxo venoso portal foi 0,35±0,05 m/s, e a relação porta aorta caval foi aproximadamente 1:1. Não se observou diferenças significativas ao comparar os valores obtidos para as variáveis entre os grupos de machos e fêmeas, ou forte correlação com a idade e peso. O fluxo portal demonstrou um aspecto morfológico contínuo, hepatopetal, e com discreta variação de velocidade. Pelas imagens realizadas em modo bidimensional, regiões de interesse foram selecionadas para determinação da ecotextura, e ecogenicidade, do parênquima hepático hígido, pelo histograma em escala de cinza. Observou-se que a ecogenicidade hepática das fêmeas é maior que ecogenicidade dos machos, e a ecotextura em ambos os gêneros teve o valor aproximado de 2%. Os valores da média do Mean foi 91,64, e do Mode 90,72, para amostragem do n total de animais. A avaliação dos grandes vasos deve ser inclusa na rotina de avaliação transcutânea do abdômen equino. O histograma em escala de cinza, demonstrou ser uma técnica eficaz, na detecção de mudanças sutis na ecogenicidade dos tecidos

The ultrasound technique allows the assessment of almost all abdominal structures, including blood flow. The portal flow analysis, and of other large abdominal vessels, such as the caudal vena cava (VCC) and abdominal aorta arterie (AA), helps to diagnose intra and extrahepatic diseases. Due to the lack of literature on the subject in equines, this research aimed to study the ultrasonographic technique on great abdominal vessels, determine references of vascular diameter and the flow velocity of portal vein (VP), by using ultrasonography in B-mode, and Triplex Doppler technique. Eighteen adult animals were selected, with laboratory tests values within the normal range for the species, and clinically healthy. From the Bmode ultrasonographic imaging, vessels diameters were measured. The Triplex Doppler was used, allowing the analysis of velocity, through longitudinal section of the vessel. The mean vascular diameter was 2.74 ± 0.25 cm for PV, 2.68 ± 0.36 cm for VCC, and 2.78 ± 0.23 for AA. The portal blood flow velocity was 0.35 ± 0.05 m / s, and the porta aorta caval ratio was approximately 1:1. No significant differences were observed, when comparing the values obtained for the variables between the groups of males and females, nor strong correlation with age and weight. The portal flow presented/exhibited a continuous morphological aspect, hepatopetal, and with little velocity variation. Through B-mode images, regions of interest were selected to determine echotexture and echogenicity of the hepatic liver parenchyma, by grayscale histogram. It was observed that females presented bigger echogenicity of liver when compared to males, and the echotexture in both genders had an approximate value of 2%. The values were 91.64 to Mean, and 90.72 to Mode, for sampling the total n of animals. The grayscale histogram has been shown to be an effective technique in detecting subtle changes in tissue echogenicity. The analysis of the great vessels should be included to abdominal transcutaneous evaluation.

Influência do bloqueio da Na+, K+-ATPase em blastocistos equinos

Atualmente, um dos desafios na reprodução equina é a baixa taxa de sobrevivência de embriões criopreservados com diâmetro > 300 m, usando métodos de vitrificação ou clássicos. Pesquisas sobre a influência da bomba de sódio e potássio (Na+, K+-ATPase) no desenvolvimento embrionário de equinos têm mais de 30 anos e hoje se sabe que participa da cavitação embrionária, modifica o gradiente iônico das células trofoblásticas, além de influenciar a formação, distribuição e permeabilidade das tight junctions (TJ) entre células trofoblásticas. Devido aos diversos tipos de isoformas da Na +, K+-ATPase, a depender das subunidades que a compõe, e a peculiaridades do desenvolvimento embrionário nas diferentes espécies, esse trabalho é caracterizado por uma revisão de literatura, para demonstrar os resultados dos principais estudos na área. Apresenta os resultados de um estudo que foi desenvolvido com o objetivo de buscar um meio capaz de reduzir o diâmetro do embrião equino a campo, para apoiar a vitrificação do blastocisto. Embriões equinos foram recuperados e submetidos a inibição da Na+, K+-ATPase por 1 ou 6 h, utilizando ouabaína isolada ou conjugada à sonda fluorescente (OuabaínaFL), durante incubação a 37° C. Os embriões foram avaliados quanto a características morfométricas (microscopia em campo claro) e de viabilidade (Hoechst 33342 + iodeto de propídeo). Acredita-se que este tenha sido o primeiro estudo que objetivou avaliar primariamente os efeitos da inibição da Na+, K+-ATPase com ouabaína, um inibidor específico, sobre embriões equinos. Observou-se que a inibição da Na+, K+-ATPase com ouabaína é capaz de reduzir o diâmetro dos blastocistos equinos, independetemente do dia de desenvolvimento (D7 ou D9), tendo sua confirmada a capacidade de ligação aos embriões a partir de estudos com ouabaína conjugada a sonda fluorescente. Todavia, a inibição da Na+, K+-ATPase compromente a viabilidade do embrião, não sendo recomendada a sua adoção com estratégia para redução do diâmetro de blastocistos equinos.

Currently, one of the challenges on equine reproduction is the low survival rate of horse embryos cryopreserved with diameter > 300 m, using either vitrification or classic methods. Researches about the influence of sodium pump and potassium (Na+, K+-ATPase) on horse embryo development have more than 30 years and nowadays it is known that participates on embryo cavitation, changes ionic gradient of trophoblastic cells, as well as influences formation, distribution and permeability of tight junctions (TJ) between trophoblastic cells. Due to many Na+, K+-ATPase isoforms, depending on comprising subunits, as well as peculiarities on embryo development depends on species, this work is characterizied by a literature review to demonstrate the main results in the field of research. It is also presented the results of a study that aimed to develop a medium able to reduce horse embryo diameter in the field, to support horse blastocyst vitrification. Horse embryos were hasvested and subjected to Na+, K+-ATPase inhibition for 1 or 6 h, using ouabain isolated or conjugates to fluorescent probe (OuabaínaFL), during incubation at 37 ° C. Embryos were assessed for morphometric characteristics (bright field microscopy) and viability (Hoechst 33342 + propridium iodide). To our knowledge, this is the first study that primarly aimed to evaluate the influence of Na+, K+-ATPase inhibition with ouabain, a specific inhibitor, on the horse embryos. It was observed that Na+, K+-ATPase inhibition with ouabain is able to reduce horse blastocyst diameter, in spite of embryo development (D7 ou D9), and ouabain binding to blastocysts were confirmed after embryo exposition to fluorescent conjugated ouabain. However, Na+, K+-ATPase inhibiton compromised embryo viability and it is not recommended as a strategy to reduce horse blastocyst diameter.

Avaliação do condicionamento físico em equinos de concurso completo de equitação, submetidos a treinamento intervalado

Todos os equinos que participam de competições de alto rendimento devem ser submetidos a um plano de treinamento estruturado baseado nas suas condições fisiológicas. Este deve ter como finalidade desenvolver um atleta que expresse o máximo do seu potencial, preservando o equino para que ele tenha uma vida desportiva mais duradoura possível e com o menor número de lesões. O treinamento físico promove alterações fisiológicas nos sistemas energético, aeróbico e anaeróbico, cardiovascular e respiratório, endócrino e musculoesquelético. O presente estudo teve como objetivos avaliar o metabolismo de equinos destinados à modalidade de Concurso Completo de Equitação (CCE) de uso militar, por um protocolo de treinamento intervalado, utilizando testes a campo, através da frequência cardíaca, respiratória e bioquímica sanguínea (Lactato, Glicose, Creatina Quinase, Lactato Desigrogenase e Aspartato Aminotransferase). Os equinos destinados à equipe de CCE foram submetidos primeiramente a três dias de teste (Etapa 1) com intervalo de quatro dias de descanso entre cada teste, após participaram de um programa de treinamento intervalado por três dias semanais durante seis semanas consecutivas e novamente foram submetidos aos mesmos testes realizados no inicio do programa (Etapa 2). Os testes consistiam em Teste de Velocidade Incremental (TVI) em cinco estágios de velocidades crescentes (240, 320, 400, 480 e 560 m/min); Teste de Salto Incremental (TSI) realizado em três estágios de altura crescente (40, 55 e 70 cm) e Percurso de Salto (PS) contendo 13 esforços em uma velocidade de 325m/min. No TVI foi encontrado aumento da Frequência Cardíaca (FC) em todos estágios de acordo com aumento de velocidade. Os valores de FC da Etapa 1 foram inferiores ao da Etapa 2. Obtivemos diferença significativa nas velocidades 240m/min; 320m/min; 480m/min e 10 min/Ap. A FR dos animais foi superior na Etapa 1 comparada à Etapa 2. A diminuição dessa variável se mostrou significativa em todas velocidades. O nível de lactato plasmático não teve diferença significativa comparando as duas etapas. Os valores de glicose, durante o teste, mostraram diferença significativa somente na velocidade de 240 m/min da Etapa 2 em comparação com a Etapa 1. A mensuração das enzimas musculares CK, AST e LDH mostraram, em quase totalidade, diminuição significativa nas velocidades da Etapa 2 comparadas a Etapa 1. Na velocidade de 560 m/min e 10min/Ap, Etapa 2, o nível de CK sanguíneo não mostrou diminuição significativa, nesta mesma velocidade não houve decréscimo significativo no valor de AST. Durante o TSI a frequência cardíaca mostrou aumento significativo nas alturas 55 e 70 cm. A frequência respiratória mostrou uma diminuição significativa nas duas últimas voltas, 55 e 70cm, e nos 10min após exercício da Etapa 2 comparado a Etapa 1. Os valores de Lactato e glicose não distinguiram estatisticamente com algum nível de significância comparando as duas etapas. A enzima CK não teve diferença significativa entre as duas etapas em contrapartida a LDH mostrou diminuição em todos valores das mensurações da Etapa 2 comparado a Etapa 1. Os valores de AST diminuíram com significância aos 55cm e nos 10 min após exercício da Etapa 2. No PS a frequência cardíaca no não teve variação na comparação entre as duas etapas. A frequência respiratória teve uma taxa de recuperação com diminuição significativa na Etapa 2. Os valores de lactato não aumentaram durante o percurso de salto na Etapa 2; os valores de glicose diminuíram durante o percurso, mas não mostraram variações significativas em nenhuma das etapas. As enzimas musculares CK e AST tiveram um aumento significativo nos 10 min/Ap durante a Etapa 2 comparado a Etapa 1. Os três testes demonstraram um efeito positivo na avaliação do condicionamento dos equinos destinados ao CCE. Se este efeito pode ser maximizado aumentando a intensidade, frequência ou período de treinamento intervalado, pesquisas adicionais são recomendadas.

All horses that participate in high level competitions should be submitted to a training protocol based on their own physiological conditions. Its aim must be to develop an athlete able to achieve its maximum potential, preserving the horse in order to permit the longest sportive life as possible and with the minimum of injuries. The physical training promotes physiological changes in aerobic and anaerobic energetic systems, cardiac, respiratory, endocrine and muscleskeletal systems. This studys objective is to evaluate the athletic metabolism of eventing horses, using an interval training protocol. Field tests observing heart rate, respiratory rate and blood biochemistry (Lactate, Glucose, Kinase Creatine, Dehydrogenase Lactate and Aminotransferase) were used. The eventing teams horses were submitted, firstly, to three tests (Phase 1), with a four days rest between each test. Then, after accomplishing a six week interval training protocol, a new sequence of tests were performed (Phase 2), repeating exactly those performed on Phase 1. The tests were: Incremental Speed Test in five raising speed stages (240, 320, 400, 480 and 560 m/min); Incremental Jumping Test in three increasing heights (40, 55 and 70cm); and Show Jumping Course Test with 13 fences and 380m/min speed. In the IST a heart rate increment was found in all stages according to the speed raising. The heart rate numbers on Phase 1 were lower than in Phase 2. Significant difference was found in speeds 240, 320 and 480m/min, and also 10 minutes after the last stage. The animals´ respiratory rate in Phase 1 was higher than in Phase 2. The lowering in this parameter was significant at all speed stages. Plasma lactate levels showed no significant difference between the two Phases. Glucose numbers showed significant difference between Phase 1 and 2 only in the 240m/min speed stage. The measurement of CK, AST and LDH enzymes showed, in almost all tests, significant decreasing numbers in Phase 2 compared to Phase 1. In 560m/min speed and 10 after, at Phase 2, Blood CK and AST levels showed no significant decrease. During IJT the heart rate numbers increased significantly in 55cm and 70cm heights. Respiratory rates decreased significantly in 55cm and 70cm heights and also 10 after, comparing Phase 2 to Phase 1. Glucose and Lactate values had no significant statistic difference between the two Phases. CK enzyme showed no significant difference between the two Phases, although LDH showed decreasing measurement values in Phase 2 when compared to Phase 1. AST values decreased significantly in 55cm, 70cm and 10after at Phase 2. In SJCT the heart rate had no variation comparing the two Phases. Respiratory rate showed significant decreasing in recovery rate on Phase 2. Lactate values did not increase during SJCT on Phase two; Glucose decreased during the SJCT, but did not show significant variation in any of the two Phases. CK and AST muscle enzymes increased significantly in 10after at Phase 2 when compared to Phase 1. All three tests have a positive effect on the physical fitness level of eventing horses. Whether this effect can be maximized by increasing intensity, frequency or interval training period, further research is recommended.

DESEMPENHO FÍSICO DE EQUINOS SOROPOSITIVOS PARA ANEMIA INFECCIOSA EQUINA

A Anemia Infecciosa Equina (AIE) é uma enfermidade incurável que acomete os equídeos, sendo endêmica no Pantanal Mato-Grossense, onde o controle da doença, através da eutanásia dos animais soropositivos não é obrigatória. Os equinos portadores de AIE são rotineiramente utilizados nos trabalhos com a bovinocultura de corte,principal atividade da região. O estudo avaliou o desempenho físico dos animais soropositivos para AIE visando obter dados para incentivar o controle da doença no pantanal mato-grossense. Foram utilizados 16 equinos machos da raça Pantaneira, entre 10 e 16 anos, sendo 8 soronegativos (G1) e 8 soropositivos (G2). Os grupos foram mantidos separados, a uma distância superior a 200 m, em fazendas próximas, na região de Nhecolândia no Pantanal e permaneceram soltos em pastagem nativa, com sal mineral e água à vontade. Antes (T1) e após (T2) 42 dias de treinamento foram realizados testes de esforço progressivo, em pista gramada, com topografia plana e com 1.500 m de comprimento, onde, um mesmo cavaleiro percorreu com cada animal no trote, trote alongado, galope reunido e galope alongado. Durante os testes os animais usaram frequencímetro cardíaco e ao final de cada etapa foram monitoradas a frequência cardíaca (FC), frequência respiratória (FR) e concentração plasmática de lactato ([La]). Quando o animal atingia [La] igual ou superior a 4 mmol/L e FC acima de 150 bpm o teste era interrompido. A distância percorrida (DP) foi o período do início do teste até o momento em que ele foi interrompido e foi mensurada por GPS. Hematócrito (Ht), proteína total (PT), triglicerídeos (Tg) e ácido úrico (UA) foram avaliados em repouso e 0, 10, 30 e 60 min após os testes, junto com a FC, FR e temperatura retal. Para avaliar as enzimas creatina quinase (CK), aspartato aminotransferase (AST) e lactato desidrogenase (LDH), amostras foram coletadas em repouso e 6, 12 e 24h após o teste. O protocolo de treinamento foi: trabalho em dias alternados durante 1h no passo e galope sendo a velocidade do galope individual, correspondendo à VLa3 do 1º teste. Nos dois testes a DP foi maior (p<0,05) nos animais de G1. Em T1 não houve diferença entre os grupos experimentais no Ht, FC e na [La], mas, no T2, os animais de G2 apresentaram menor (p<0,05) Ht, FC e [La]. Maiores valores de Tg foram observados no T1 em relação ao T2 e houve redução da concentração de UA em ambos os grupos experimentais. Não houve indicativo de injúria muscular. Os resultados mostram que a AIE afeta o desempenho funcional dos equinos pantaneiros, cuja principal função na região é o trabalho na lida com o gado, e por isso, é importante seu controle no pantanal mato-grossense.

Equine Infectious Anemia (EIA) is an incurable disease in equids, being endemic in the Pantanal mato-grossense region, where the disease control through euthanasia of seropositive animals is not mandatory. EIA-carrier equines are routinely used at work for beef cattle farming, which is the regions main economic activity. The objective of this study was to assess the athletic performance of EIA-seropositive animals and obtain data to incentive disease control in the region. We used 16 male Pantaneiro equines between 10 and 16 years old, being eight seronegative (G1) and eight seropositive (G2) for EIA. Both groups were kept separately, at a distance of over 200 meters, in nearby farms in the Nhecolândia region of Pantanal. They were kept free in natural pasture with mineral salt and water ad libitum. Tests were performed before (T1) and after (T2) 42 days of physical training. Tests included progressive effort on a plane 1500-meter grass track, with the same horseman guiding each horse in jog, trot, canter and gallop gaits. During tests, all animals wore heart rate monitors and at the end of each step we registered their heart rate (HR) and blood lactate concentration ([La]). When an animal reached a [La] equal to or higher than 4 mmol/L and HR over 150 bpm, the test was interrupted. The distance covered (DC) was measured by GPS, being the sum of all distances from the test start until it was interrupted. Hematocrit (Ht), total protein (PT),triglicerid (Tg) and uric acid (UA) was evaluated at rest and 0, 10, 30 and 60 min after the tests, along with HR, RR and temperature rectal. To evaluate creatine kinase (CK), aspartate aminotransferase (AST) and lactate dehydrogenase (LDH), samples were collected at rest and 6, 12 and 24 hours after the test. The training protocol was: work in alternate days for 1 h between walk and canter being an individual gallop speed, corresponding to the VLa3 of the 1st test. The individual canter speed was determined as the speed at which the animal reached 3 mmol/L of [La] in the first test. In both test, the DC was longer (p<0.05) in G1 animals. In T1, there was no difference between G1 and G2 regarding Ht, HR and [La], however, in T2, animals from G2 had lower (p<0.05) Ht, FC e [La]. Higher values of Tg were observed in T1 in relation to T2 and there was a reduction in UA concentration in both experimental groups. There was no indication of muscle injury. The results indicate the EIA affects the functional performance of Pantanal equines, whose main function in the region is the work in the cattle handling, and for that reason, its control in the Pantanal of Mato Grosso is important.