Morphometric and vascular analyses and MMP-2 expression in bladders of animals with bovine enzootic haematuria

Background: Bovine enzootic haematuria is a chronic, non-infectious disease caused by the ingestion of bracken Pteridiumaquilinum that contain ptaquiloside, substance responsible for the development of neoplasms in combination with bovinepapillomavirus infection. Studies examining metalloproteinases have shown that these enzymes may be useful as prognosticmarkers and many studies have correlated the intratumoural microvessel density and incidence of metastasis in a varietyof cancers, including bladder cancer. This study aimed to evaluate the urothelial morphology and vasculature and quantifythe expression of the enzyme metalloproteinase-2 in the bladder lesions of bovine with enzootic haematuria.Materials, Methods & Results: Forty bladders with macroscopic lesions were subjected to routine histological processing. The material was stained using the Hematoxylin-Eosin (HE) and Weigert’s resorcin-fuchsin staining methods. Themorphometric analysis included the measurement of the total thickness of the urothelium. Microscopically, the lesionswere differentiated as neoplastic or non-neoplastic, and the vascular changes were characterised as vascular proliferation,ectasia, dilation and thickening and the material stained using the Weigert’s resorcin-fuchsin method was used to evaluatesclerosis and the vascular fibroelastosis. The metalloproteinase expression was evaluated using an anti-metalloproteinase-2antibody. The main non-neoplastic lesions found in the urothelium included clear cell metaplasia, dysplasia, hyperplasia,haemorrhage, cystitis cystica and Brunn’s nests and the neoplastic lesions were haemangioma, myxoma, transitional cellcarcinoma, adenocarcinoma, in situ carcinoma and haemangiosarcoma. The urothelium measurements revealed differencesbetween the epithelial thicknesses of bladders with and without neoplasms. The bladder vasculature evaluation revealed...

Morphometric and vascular analyses and MMP-2 expression in bladders of animals with bovine enzootic haematuria

Background: Bovine enzootic haematuria is a chronic, non-infectious disease caused by the ingestion of bracken Pteridiumaquilinum that contain ptaquiloside, substance responsible for the development of neoplasms in combination with bovinepapillomavirus infection. Studies examining metalloproteinases have shown that these enzymes may be useful as prognosticmarkers and many studies have correlated the intratumoural microvessel density and incidence of metastasis in a varietyof cancers, including bladder cancer. This study aimed to evaluate the urothelial morphology and vasculature and quantifythe expression of the enzyme metalloproteinase-2 in the bladder lesions of bovine with enzootic haematuria.Materials, Methods & Results: Forty bladders with macroscopic lesions were subjected to routine histological processing. The material was stained using the Hematoxylin-Eosin (HE) and Weigerts resorcin-fuchsin staining methods. Themorphometric analysis included the measurement of the total thickness of the urothelium. Microscopically, the lesionswere differentiated as neoplastic or non-neoplastic, and the vascular changes were characterised as vascular proliferation,ectasia, dilation and thickening and the material stained using the Weigerts resorcin-fuchsin method was used to evaluatesclerosis and the vascular fibroelastosis. The metalloproteinase expression was evaluated using an anti-metalloproteinase-2antibody. The main non-neoplastic lesions found in the urothelium included clear cell metaplasia, dysplasia, hyperplasia,haemorrhage, cystitis cystica and Brunns nests and the neoplastic lesions were haemangioma, myxoma, transitional cellcarcinoma, adenocarcinoma, in situ carcinoma and haemangiosarcoma. The urothelium measurements revealed differencesbetween the epithelial thicknesses of bladders with and without neoplasms. The bladder vasculature evaluation revealed...(AU)

Microvessel density assessment in canine mammary carcinomas as a predictive factor for metronomic chemotherapy / Mensuração da densidade microvascular em carcinomas mamários caninos como fator preditivo à quimioterapia metronômica

The canine mammary tumor is the neoplasia that most commonly affects intact female dogs (not spayed) in routine veterinary practice. Canine mammary tumor therapy is a challenge because only few effective treatments have been described for high-grade tumors in veterinary medicine. One such therapeutic option that slows down tumor growth is metronomic chemotherapy (MC), a therapeutic modality that acts by decreasing tumor angiogenesis. Quantification of intratumoral microvessel density (MVD) has been proposed as a means to evaluate the effectiveness of MC in human and canine tumors. In this study, MVD is proposed as a predictive factor for the effectiveness of MC in canine mammary tumors. Twenty female dogs with mammary carcinoma were equally distributed into a mastectomy group treated only with mastectomy, and a MC group treated with MC (cyclophosphamide and piroxicam) orally and daily for 28 days followed by mastectomy. Mammary tumors were classified and graded histologically. MVD was ascertained by CD31 immunostaining. The analysis showed statistically significant difference in MVD scores between groups, corroborating a quantitative reduction in tumor microvasculature in the group treated with MC. Our findings suggest that MVD may be an important predictive factor for the selection of female dogs with malignant mammary tumors that may benefit from MC.(AU)

O tumor mamário canino é a neoplasia que mais comumente acomete cadelas não castradas na rotina veterinária. A terapia para a neoplasia mamária canina é um desafio, com poucos tratamentos eficazes descritos em medicina veterinária, especialmente para as neoplasias de alto grau. Uma opção terapêutica que diminui o crescimento tumoral é a quimioterapia metronômica (QM). A QM é uma modalidade terapêutica que age pelo decréscimo da angiogênese tumoral. Para avaliação da eficácia da QM tem sido proposta a quantificação da densidade microvascular (DMV) em neoplasias caninas. Neste estudo foi proposta a mensuração da DMV como fator preditivo à utilização da QM em neoplasias mamárias caninas. Foram utilizadas 20 (vinte) cadelas com carcinomas mamários malignos sendo um grupo mastectomia, tratado somente por mastectomia, e um grupo QM, em que foi empregada a QM (ciclofosfamida e piroxicam) ambos oralmente e de uso diário por 28 dias seguida de mastectomia. As neoplasias mamárias foram histologicamente classificadas e graduadas. A DMV foi obtida por imunomarcação utilizando o anticorpo CD31. A análise estatística mostrou diferença na DMV entre os grupos, evidenciando redução quantitativa na microvasculatura tumoral no grupo tratado com quimioterapia metronômica. Com base neste resultado é possível afirmar que a DMV pode vir a ser um fator preditivo de importância para a seleção de cadelas portadoras de neoplasia mamária maligna que possam vir a se beneficiar da quimioterapia metronômica.(AU)

Microvessel density assessment in canine mammary carcinomas as a predictive factor for metronomic chemotherapy / Mensuração da densidade microvascular em carcinomas mamários caninos como fator preditivo à quimioterapia metronômica

The canine mammary tumor is the neoplasia that most commonly affects intact female dogs (not spayed) in routine veterinary practice. Canine mammary tumor therapy is a challenge because only few effective treatments have been described for high-grade tumors in veterinary medicine. One such therapeutic option that slows down tumor growth is metronomic chemotherapy (MC), a therapeutic modality that acts by decreasing tumor angiogenesis. Quantification of intratumoral microvessel density (MVD) has been proposed as a means to evaluate the effectiveness of MC in human and canine tumors. In this study, MVD is proposed as a predictive factor for the effectiveness of MC in canine mammary tumors. Twenty female dogs with mammary carcinoma were equally distributed into a mastectomy group treated only with mastectomy, and a MC group treated with MC (cyclophosphamide and piroxicam) orally and daily for 28 days followed by mastectomy. Mammary tumors were classified and graded histologically. MVD was ascertained by CD31 immunostaining. The analysis showed statistically significant difference in MVD scores between groups, corroborating a quantitative reduction in tumor microvasculature in the group treated with MC. Our findings suggest that MVD may be an important predictive factor for the selection of female dogs with malignant mammary tumors that may benefit from MC.

O tumor mamário canino é a neoplasia que mais comumente acomete cadelas não castradas na rotina veterinária. A terapia para a neoplasia mamária canina é um desafio, com poucos tratamentos eficazes descritos em medicina veterinária, especialmente para as neoplasias de alto grau. Uma opção terapêutica que diminui o crescimento tumoral é a quimioterapia metronômica (QM). A QM é uma modalidade terapêutica que age pelo decréscimo da angiogênese tumoral. Para avaliação da eficácia da QM tem sido proposta a quantificação da densidade microvascular (DMV) em neoplasias caninas. Neste estudo foi proposta a mensuração da DMV como fator preditivo à utilização da QM em neoplasias mamárias caninas. Foram utilizadas 20 (vinte) cadelas com carcinomas mamários malignos sendo um grupo mastectomia, tratado somente por mastectomia, e um grupo QM, em que foi empregada a QM (ciclofosfamida e piroxicam) ambos oralmente e de uso diário por 28 dias seguida de mastectomia. As neoplasias mamárias foram histologicamente classificadas e graduadas. A DMV foi obtida por imunomarcação utilizando o anticorpo CD31. A análise estatística mostrou diferença na DMV entre os grupos, evidenciando redução quantitativa na microvasculatura tumoral no grupo tratado com quimioterapia metronômica. Com base neste resultado é possível afirmar que a DMV pode vir a ser um fator preditivo de importância para a seleção de cadelas portadoras de neoplasia mamária maligna que possam vir a se beneficiar da quimioterapia metronômica.

CARCINOMA DE CÉLULAS ESCAMOSAS EM CÃO: ELETROQUIMIOTERAPIA ASSOCIADA OU NÃO A CIRURGIA E CORRELAÇÃO COM A SOBREVIDA

O carcinoma de células escamosas (CCE) se destaca dentre as neoplasias malignas em cães, por sua incidência e apresentação clínica, que pode ser de nódulos únicos ou múltiplos, localmente agressivos e com potencial metastático. Este experimento teve como objetivo avaliar a resposta ao tratamento e características anatomopatológicas e imuno-histoquímicas relacionadas ao CCE, com posterior análise do intervalo livre de doença e sobrevida específica. Para tanto, foram incluídos cães referenciados ao Hospital Veterinário da Universidade Federal de Minas Gerais com diagnóstico histopatológico de CCE. Foram incluídos 54 cães neste estudo, com idade entre 1 e 14 anos (média 9,16 anos). 65,4% (34/54) dos animais do estudo possuíam pele e pelagem branca. Houve uma associação significativa entre cor do pelo do animal e tumores em locais com exposição ao sol (p = 0,001). Os animais com tumores em locais com exposição solar tiveram uma sobrevida maior do que os animais com tumores em locais não relacionados com a exposição solar (p = 0,001). A associação de cirurgia com eletroquimioterapia (EQT) conferiu um benefício 32% maior em relação à abordagem somente cirúrgica (HR = 0,32, p = 0,038, IC = 0,11-0,94). Os pacientes toleraram bem a EQT e nenhum efeito colateral local ou sistêmico importante foi observado. EQT associada ou não à cirurgia apresentou 90,9% de resposta objetiva. 33,3% (18/54) dos animais apresentaram metástase para o linfonodo regional e/ou metástase à distância no momento do diagnóstico ou em algum momento ao longo do período de acompanhamento. Considerando a graduação histopatológica, 16,2% (6/37) foram bem diferenciados (grau 1 de Broder), 81,1% (30/37) foram moderadamente diferenciados (graus 2 e 3 de Broder) e 2,7% (1/37) foram pobremente diferenciados (grau 4 de Broder). Os animais com CCE relacionados à exposição solar apresentaram características histopatológicas mais agressivas, mas apresentaram um maior tempo de sobrevida específica. Isso provavelmente se deve à programação terapêutica individualizada dos pacientes, com a associação da cirurgia com a EQT. Não foi possível estabelecer um valor de corte prognóstico para escore de COX-2, densidade de microvasos intratumoral e índice de proliferação celular (Ki-67).

Squamous cell carcinoma (SCC) is one of the most important malignancies in dogs, due to its incidence and clinical presentation, which can be of single or multiple lesions, locally aggressive, and with metastatic potential. The objective of this thesis was to evaluate response to treatment and anatomopathological and immunohistochemical characteristics related to this neoplasm, followed by disease-free interval and overall survival time evaluation. Dogs referred to the Veterinary Hospital of Universidade Federal de Minas Gerais with a histopathologic diagnosis of SCC were included in the study. 54 dogs were included in this study, with a median age of 9.16 years (1 to 14 years old). 65.4% (34/54) of the animals in this study had white skin and fur coats. There was a significant association between fur coat color and tumors in locations related to sun exposure (p = 0.001). Animals with tumors in sun exposed locations had longer overall survival time than animals with tumors in locations not associated with sun exposure (p = 0.001). Association of surgery with electrochemotherapy (ECT) yielded a survival benefit 32% higher when compared to surgical approach alone (HR = 0.32, p = 0.038, IC = 0.11-0.94). Patients tolerated ECT well and no important local or systemic side effects were noted. ECT with or withour surgery showed an objective response rate of 90.9%. 34.6% (18/52) of animals showed local lymph node and/or distant site metastasis at diagnosis or at some point during follow-up. Considering histopathological grading, 16.2% (6/37) were well differentiated (Broder grade 1), 81.1% (30/37) were moderately differentiated (Broder grades 2 and 3), and 2.7% (1/37) were poorly differentiated (Broder grade 4). Animals with tumors in sun exposed locations had more aggressive histopathological characteristics but had a longer overall survival time. This is probably due to individualized therapeutic planning, with surgery and ECT association. It was not possible to establish a prognostic value for COX-2 score, intratumoral microvessel density nor proliferation index.

IMUNOMARCAÇÃO DE VEGF, CD31 E BMP-2 EM NEOPLASIAS MAMÁRIAS MALIGNAS DE CADELAS

Neoplasias malignas em cadelas é uma das enfermidades mais frequentes em animais domésticos no Brasil. Tais neoplasias apresentam uma grande similaridade com neoplasias de mamas em mulheres e, devido a esse fato, o entendimento da patogênese e das características biológicas visando a identificação de fatores prognósticos e preditivos são necessários para a melhoria de tratamentos e diagnósticos mais eficazes. Estudos recentes buscam correlacionar a densidade microvascular (DMV) e a quantidade de células estromais através da quantificação de imunomarcadores considerados fatores prognósticos do câncer mamário. Nesse contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar a densidade de microvasos, por meio da contagem de vasos marcados por CD31, além de correlacionar a imunomarcação por VEGF-A e BMP2 com o subtipo histológico e grau de malignidade de neoplasias malignas mamárias de cadelas. Para tal, neoplasias malignas de mama em cadelas foram separadas quanto ao grau de malignidade em alto e baixo. Foi realizada imuno-histoquímica para os anticorpos anti-CD31, VEGF-A e BMP2, seguindo recomendações do fabricante do kit DAKO EnVision FLEX+. As amostras utilizadas no estudo foram provenientes de diagnóstico histopatológico de clínicas veterinárias da cidade de Goiânia-GO. Foram construídos blocos de microarranjo de tecido para otimização dos experimentos. Os testes estatísticos foram feitos com o software GraphPad Prism 7.0, considerando o nível de significância de 5%. A imunomarcação de CD31 foi diferente em todos os grupos analisados, assim como a marcação por VEGF-A e BMP2. Carcinomas com baixo grau de malignidade apresentaram maior imunomarcação por VEGF-A e BMP2, bem como maior DMV por CD31. O presente estudo demonstrou que carcinomas de baixo grau apresentaram uma maior imunomarcação pelos marcadores angiogênicos VEGF-A e CD31, bem como uma maior imunomarcação por BMP2, e tal achado reforça a ideia de que o VEGF-A é uma molécula envolvida na formação vascular e que BMP2 pode agir estimulando a angiogênese, principalmente por liberação de VEGF-A. Os nossos achados também sugerem a importância de outros fatores angiogênicos do microambiente do tumor na regulação da angiogênese tumoral em tumores mamários caninos. A realização deste trabalho demonstrou a importância da avaliação angiogênica por imuno-histoquímica na determinação de fatores prognósticos associados à neoplasias malignas mamárias caninas.

Malignant neoplasms in dogs is one of the most frequent diseases in domestic animals in Brazil. Such neoplasms have a great similarity with breast neoplasms in women and, due to this fact, an understanding of the pathogenesis and biological characteristics aiming at the identification of prognostic and predictive factors are necessary for the improvement of more effective treatments and diagnoses. Recent studies seek to demonstrate the microvascular density and the amount of stromal cells through the quantification of immunomarkers considered prognostic factors for breast cancer. In this context, the objective of this study was to evaluate the microvessel density, by counting vessels marked by CD31, in addition to correlating immunomarking by VEGF-A and BMP2 with the histological subtype and degree of malignancy of dogs' malignant neoplasms. For this, malignant breast neoplasms in dogs were separated as to the degree of malignancy in high and low. Immunohistochemistry was performed for anti-CD31, VEGF-A and BMP2 antibodies, following recommendations from the DAKO EnVision FLEX + kit manufacturer. The samples used in the study came from the histopathological diagnosis of veterinary clinics in the city of Goiânia-GO. Tissue microarray blocks were built to optimize the experiments. Statistical tests were performed using the GraphPad Prism 7.0 software, considering the significance level of 5%. The immunostaining of CD31 was different in all groups analyzed, as well as the staining by VEGF-A and BMP2. Carcinomas with a low degree of malignancy showed greater immunostaining by VEGF-A and BMP2, as well as greater MVD by CD31. The present study demonstrated that low-grade carcinomas show greater immunostaining by angiogenic markers VEGF-A and CD31, as well as greater immunostaining by BMP2, and this finding reinforces the idea that VEGF-A is a molecule involved in vascular formation and that BMP2 can act by stimulating angiogenesis, mainly by releasing VEGF-A. Our findings also suggest the importance of other angiogenic factors of the tumor microenvironment in the regulation of tumor angiogenesis in canine mammary tumors. This work demonstrated the importance of angiogenic evaluation by immunohistochemistry in determining prognostic factors associated with canine mammary malignancies.

Mast cells and angiogenesis in canine mammary tumor / Mastócitos e angiogênese nos tumores mamários caninos

The correlation between microvessel density and mast cells density in canine mammary tumors was studied. Sixty-five samples of canine mammary tumors, being 24 benign and 41 malignant, were analyzed. The routine Toluidine Blue staining method was used to assess the mast cells. To evaluate angiogenesis, the immunohistochemical expression of CD31 was assessed. There was no significant difference in either mast cells (P=0.44) or microvessel density (P=0.77) between malignant and benign tumors. A positive correlation was observed between microvessel density and mast cells (r=0.39; P=0.011) in malignant tumors. These results suggest that mast cells may play a role in canine mammary malignant tumors development, promoting angiogenesis, similar to some tumors described in the human species.(AU)

Estimou-se a correlação entre a densidade de microvasos e a densidade de mastócitos em tumores mamários caninos. Sessenta e cinco amostras de tumores mamários caninos - 24 benignos e 41 malignos - foram analisadas, pela técnica rotineira de coloração com Azul de Toluidina para avaliação da densidade de mastócitos. Para a avaliação da angiogênese, foi utilizada a técnica de imunoistoquímica para expressão de CD31. Não foram observadas diferenças significativas de mastócitos (P=0.44) ou densidade microvascular (P=0.77) entre tumores malignos e benignos. A correlação entre densidade microvascular e densidade de mastócitos foi positiva (r=0,39; P=0,011) em tumores malignos. Estes resultados sugerem que os mastócitos podem exercer um importante papel no desenvolvimento de tumores mamários malignos caninos mediante promoção da angiogênese, similarmente a alguns tumores descritos na espécie humana.(AU)

Avaliação do comportamento vascular do tumor de Ehrlich na forma sólida em camundongos submetidos à eletroquimioterapia com bleomicina

A eletroquimioterapia (EQT) é uma modalidade de tratamento recente que se baseia na associação de quimioterápicos potencializados pela eletroporação. Possui indicação para neoplasias sólidas de origens histológicas distintas, apresentando baixa morbidade e elevada eficiência. A ação da EQT ocorre em múltiplos sítios, tanto envolvendo a quebra da molécula de DNA, quanto exercendo efeito sobre a vasculatura tumoral. No presente estudo buscou-se maior compreensão dos eventos vasculares, avaliando-se qualitativamente e quantitativamente, com auxílio de marcação imunológica, com fator VIII e VEGF-A, a vascularização do tumor de Ehrlich implantado na forma sólida em camundongos, não tratados e submetidos à EQT com bleomicina, após sete dias de tratamento. No intuito de melhor elucidar os fenômenos vasculares, também foi investigado o efeito do resveratrol associado à EQT. O resveratrol, presente em vegetais como as uvas, possui efeitos de inibição do HIF1-a, reconhecida proteina que estimula a angiogênese em condições de hipoxia tumoral. Os animais submetidos à quimioterapia com bleomicina não apresentaram redução de volume tumoral, ao contrário dos que sofreram EQT com o mesmo fármaco. Evidenciou-se maior densidade microvascular tumoral em animais tratados com quimioterapia, quando comparados aos não tratados e aos submetidos à EQT. O tratamento com resveratrol diminuiu a expressão de VEGF-A e obteve efeito mais pronunciado quando associado à EQT com bleomicina. Através dos fenômenos pesquisados pôde-se evidenciar que a EQT com bleomicina foi efetiva na redução do volume do tumor de Ehrlich e que houve redução da atividade proliferativa assim como da densidade microvascular tumoral. Também observou-se que o resveratrol, ainda mais quando associado à EQT com bleomicina, reduz a proliferação tumoral e a expressão de VEGF-A.

The electrochemotherapy (EQT) is a new treatment modality based on the association of chemotherapy potentiated by electroporation. Has indication for solid neoplasms of histological distinct origins, presenting low morbidity and high efficiency. The action of the EQT occurs in multiple sites, both involving the breakage of the DNA molecule, as having an effect on the tumor vasculature. The present study aimed at better understanding of vascular events, evaluating qualitatively and quantitatively, using immune labeling, with factor VIII and VEGF-A, the vascularization of the Ehrlich tumor implanted in solid form in mice, untreated and submitted to EQT with bleomycin, after seven days of treatment. In order to better elucidate the vascular phenomena, was also investigated the effect of resveratrol associated with EQT. The resveratrol present in plants such as grapes, has inhibitory effects of HIF1-, a protein that is recognized to stimulates angiogenesis in tumor hypoxia. The animals submitted to chemotherapy with bleomycin showed no reduction of tumor volume, unlike those who suffered EQT with the same drug. It was evidenced increased microvessel density tumor in animals treated with chemotherapy, when compared to untreated and those submitted to EQT. The treatment with resveratrol decreased the expression of VEGF-A and obtained effect was more pronounced when associated to the EQT with bleomycin. This research can prove that the EQT with bleomycin was effective in reducing the volume of Ehrlich tumor and that there was a reduction of proliferative activity as well as of microvascular density tumor. Also it was observed that the resveratrol, even more when associated with EQT with bleomycin, reduces the tumor proliferation and the expression of VEGF-A.

Burn wound angiogenesis is increased by exogenously administered recombinant leptin in rats

BACKGROUND: Leptin is a potent direct angiogenic factor that stimulates endothelial cell migration and activation in vitro and angiogenesis in vivo. In addition, leptin has been discussed to play an important role in angiogenesis, as it promotes the formation of new blood vessels. PURPOSE: The effect of exogenously administered leptin on the healing process of a full tissue burn wound model. METHODS: Sixty-three Sprague-Dawley male rats were used. Full tissue burn wound was created by electrocautery. The width of the pin was 0.3 cm; its length was 2 cm and was used at the "cut" modulation. Rats were divided into seven groups of nine animals each. Burn wounds were injected with murine recombinant leptin and the rats were sacrificed 3, 7 and 9 days after surgery. Every group had obtained three animals for the three different days of sacrifice. Three different leptin doses of 250 pg/ml, 500 pg/ml and 1000 pg/ml were used in different animal groups (A, B and C). For every one of the three leptin doses used, another animal group was evaluated by using the combined injection of leptin and antileptin (A1, B1, and C1), in order to study the inhibitory effect to the leptin factor. Nine rats were served as controls. These were injected with 0.3 ml water for injection solution and sacrificed at the same time intervals. After sacrifice of the animals, the skin was grossly determined by its appearance, colour and texture. Full thickness burn wounds were dissected for histological examination. A qualitative analysis of angiogenesis in the burn wound was conducted following a standard hematoxylin and eosin stain. The wound tissue samples from each experimental group underwent immunohistochemical evaluation of microvessel density by endothelial cell staining with mouse anti-rat CD 34 monoclonal antibody. RESULTS: The most impressive growth of new blood vessels appeared seven and nine days after treatment with the highest leptin doses. There were no significant...(AU)

INTRODUÇÃO: A leptina é um potente fator angiogênico que estimula a migração e a ativação de células endoteliais in vitro e a angiogênese in vivo. Além disso, a leptina tem sido considerada importante na angiogênese pois ela promove a formação de novos vasos sanguíneos. OBJETIVO: Investigar o efeito da leptina administrada por via exógena no processo de cicatrização em um modelo experimental de queimadura. MÉTODOS: Foram utilizados sessenta e três ratos Sprague-Dawley, machos. A lesão de espessura total da queimadura foi realizada por eletrocautério. O dano tecidual foi de 0.3 cm numa extensão de 2 cm tendo sido empregada o módulo de "corte"do eletrocautéio. Os ratos foram distribuídos em sete grupos de nove animais. As lesões por queimadura receberam leptina recombinante. Os animais foram sacrificados 3, 7 e 9 dias após o ato operatório. Obteve-se três animais de cada grupo nos três períodos estipulados. Três diferentes dosagens de leptina: 250 pg/ml, 500 pg/ml e 1000 pg/ml foram aplicados nos três diferentes grupos (A, B e C). Para cada uma das três dosagens de leptina, outro grupo de animais foi avaliado pelo uso de injeção combinada de leptina e antileptina (A1, B1 e C1) no sentido de investigar o efeito inibitório do fator leptina. Nove ratos serviram de controles. Estes foram submetidos à injeção de 0.3 ml de água e sacrificados nos mesmos intervalos de tempo. Após o sacrifício dos animais, o tegumento foi avaliado por sua aparência, cor e textura. Fragmentos das feridas queimadas foram ressecadas para exame histológico. A análise qualitativa de angiogênese, na ferida queimada, seguia o padrão da coloração de hematoxilina e eosina. Cada fragmento de tecido, de cada grupo experimental, foi submetido à avaliação imunohistoquímica da densidade dos microvasos pela coloração da célula endotelial por anti-rato CD 34 anticorpo monoclonal. RESULTADOS: O desenvolvimento de novos vasos sanguíneos foi mais significativo após sete e nove dias...(AU)

Utilização de Doppler como fator prognóstico e suas correlações com marcadores imunoistoquímicos no mastocitoma cutâneo canino

O mastocitoma (MCT) cutâneo é uma das neoplasias malignas mais comuns em cães, representa 11% dos tumores de pele nesta espécie e apresenta comportamento biológico variável. Este trabalho dá continuidade a pesquisas com biomarcadores prognósticos em MCTs cutâneos em cães. Foi realizado um estudo em busca de critérios complementares ao exame clínico (ultrassonografia pelo método Doppler), que auxiliem na determinação do potencial de recidiva e metástase do tumor, correlacionando-os com a expressão da proteína KIT, densidade microvascular (DMI), tamanho, número de tumores, tempo de evolução, ulceração, tempo de sobrevida e graduação histopatológica. Além disso, foi realizada uma análise dos parâmetros clínicos, incluindo dados epidemiológicos, achados histológicos e moleculares e a correlação destes com o comportamento biológico do MCT. Foram avaliados 20 cães, que totalizaram 28 tumores. A ultrassonografia (US) pelo método Doppler permitiu a identificação de vasos em 54% dos tumores. Não houve correlação entre a presença de vasos e a DMI, a localização da proteína KIT, os graus histológicos, o tempo de evolução, o tamanho, a ocorrência de recidivas e metástases, e o tempo de sobrevida, mas sim com a presença de ulceração tumoral. Observou-se correlação estatística entre o grau histológico, a DMI, a presença de ulceração e o número de tumores e também da expressão de Ki-67 com os padrões de marcação da proteína KIT. O grau histológico no MCT cutâneo canino não deve ser avaliado isoladamente, mas sim em conjunto com a expressão da proteína KIT, DMI, proliferação celular, presença de ulceração, número de tumores e ocorrência de recidivas e metástases. Indicamos que estudos adicionais...

Cutaneous mast cell tumor (MCT) is one of the most common malignant neoplasms in dogs, representing 11% of skin tumors in this species and shows a variable biological behavior. This article maintains the search on prognostic biomarkers in cutaneous MCTs in dogs. A study was conducted to find additional criteria to the clinical examination (Doppler ultrasound) to add in determining the potential for recurrence and metastasis of tumors, correlating them with KIT protein expression, intratumoral microvessel density (IMD), size, number of tumors, duration time, ulceration, survival rates and histological classification. In addition, we performed an analysis of clinical parameters, including epidemiological data, histological and molecular ones and correlate them with the biological behavior of MCT. We evaluated 20 dogs, in a total of 28 tumors. The Doppler ultrasound (US) allowed the identification of vessels in 54% of tumors. There was no correlation between the presence of vessels and IMD, KIT protein location, histological grades, duration time, tumor size, recurrence and metastasis, and survival rates, but with ulceration. We have observed statistical correlation between histological grade, IDM, presence of ulceration and number of tumors and also the expression of Ki-67 with patterns of KIT protein. The histological grade in canine cutaneous MCT should not be assessed in isolation but in conjunction with expression of KIT protein, IDM, cell proliferation, presence of ulceration, number of tumors and recurrences and metastases rates. We suggest that additional studies should be done to further evaluate the use of Doppler US as a noninvasive method to chacarterize the vascularization and blood flow in...

Assessment of angiogenesis expression and its relationship with prognosis of colorectal cancer by conventional and computer-assisted histopathological image analysis / Investigação da expressão da angiogênese e sua relação com o prognóstico do câncer colorretal pela análise convencional e informatizada da imagem histopatológica

PURPOSE: To quantify the degree of angiogenesis by conventional method (microvessel density, MVD) and computerized method (endothelial area, EA), and to evaluate their relationships with the prognosis of patients operated on for colorectal adenocarcinoma. METHODS: Tumoral angiogenesis was studied by means of an immunohistochemical technique, using CD 34, on 126 patients; to quantify the angiogenesis, MVD (defined as number of microvessels per mm²) and EA measurement (defined as the area occupied by EA in the microscope field). A computerized method, IMAGELab software was utilized to quantify endothelial area. RESULTS: The mean number of microvessels was 128.6 MV/mm² (SD = 44.5) and the mean EA was 4.3 percent (SD = 2.1). The Pearson method demonstrated a low correlation coefficient between MVD and EA (r = 0.429). No relationship between MVD and EA was observed with regard to relapse-free interval and overall survival. CONCLUSION: The histological analysis of angiogenesis expression in patients with colorectal adenocarcinoma can be performed either by computer-assisted image analysis of endothelial area or by conventional microvessels counting. Both methods did not show any significant relationship between these angiogenesis parameters with relapse-free interval and overall survival.(AU)

OBJETIVO: Quantificar a intensidade da angiogênese pelo método convencional (densidade microvasal, DMV) e pelo método informatizado, área endothelial (AE) e avaliar a sua correlação com o prognóstico de doentes operados por adenocarcinoma colorretal. MÉTODOS: A angiogênese tumoral foi investigada por meio de técnica imuno-histoquímica, utilizando-se CD-34, em 126 doentes; para quantificar a angiogênese, a microdensidade vascular, definida como o número de microvasos por mm² e a medida da área endotelial, definida como a área ocupada pelo endotélio vascular identificada no campo microscópico foram empregadas. Um programa computadorizado, o IMAGELab foi empregado para a quantificação da área endothelial. RESULTADOS: A media do número de microvasos foi de 128,6 MV/mm ² (d esvio padrão de 44,5). O método do coeficiente de Pearson demonstrou uma baixa correlação entre a DMV e a AE (r=0,429). Nenhuma correlação entre a DMV e AE com o intervalo livre de doença e tempo global de sobrevida foi observada. CONCLUSÃO: A análise histológica da expressão angiogênica em doentes com adenocarcinoma colorretal pode ser realizada tanto da forma informatizada, na quantificação da área endotelial, como pela convencional, na contagem dos microvasos. Ambos métodos não demonstraram relação estatisticamente significante entre estes parâmetros de angiogênese e o intervalo livre de doença e a sobrevida global.(AU)

CD34 immunoexpression in penile carcinoma

OBJECTIVE: To investigate microvessel density as a risk factor in squamous cell carcinoma of the penis. METHODS: Fifty patients with penile carcinoma were evaluated retrospectively. The mean age and standard deviation were 60.8±11.8 years. All of them were treated by penectomy and with positive nodes underwent groin lymphadenectomy. Tumor grading was 36 G1 and 24 G2/3. Primary lesion stage was 22 pT1 and 28 pT2-4. Positive inguinal nodes were observed in 18 patients. Selected paraffin embedded sections were submitted to CD34 immunohistochemical analysis by the avidin-biotin-immunoperoxidase method with antigen retrieval. All slides were examined using an automatic analyzer system and the number of micro-vessels in 10 high magnification power fields (400X) were counted in a blind analysis. RESULTS: Median number of microvessels was 631 in G1 versus 695 in G2/3 tumors (p=0.78), and 696 in pT1 versus 566 pT2-4 tumors (p=0.23). The respective data for pN0 patients was 525 and for pN+ was 696 (p=0.01), which is an unexpected result. CONCLUSION: CD34 immunoexpression or microvessel density determined by this method bear no association with tumor grade, stage or prognosis.

CD34 immunoexpression in penile carcinoma

OBJECTIVE: To investigate microvessel density as a risk factor in squamous cell carcinoma of the penis. METHODS: Fifty patients with penile carcinoma were evaluated retrospectively. The mean age and standard deviation were 60.8±11.8 years. All of them were treated by penectomy and with positive nodes underwent groin lymphadenectomy. Tumor grading was 36 G1 and 24 G2/3. Primary lesion stage was 22 pT1 and 28 pT2-4. Positive inguinal nodes were observed in 18 patients. Selected paraffin embedded sections were submitted to CD34 immunohistochemical analysis by the avidin-biotin-immunoperoxidase method with antigen retrieval. All slides were examined using an automatic analyzer system and the number of micro-vessels in 10 high magnification power fields (400X) were counted in a blind analysis. RESULTS: Median number of microvessels was 631 in G1 versus 695 in G2/3 tumors (p=0.78), and 696 in pT1 versus 566 pT2-4 tumors (p=0.23). The respective data for pN0 patients was 525 and for pN+ was 696 (p=0.01), which is an unexpected result. CONCLUSION: CD34 immunoexpression or microvessel density determined by this method bear no association with tumor grade, stage or prognosis.