Immunophenotypical and pathological changes in dogs experimentally infected with Ehrlichia canis / Alterações imunofenotípicas e patológicas em cães experimentalmente infectados por Ehrlichia canis

Canine monocytic ehrlichiosis (CME) is one of the most important tick-borne diseases worldwide, with multisystemic presentations. Immune dysregulation has been proposed as the primary mechanism involved in its pathogenesis and in tissue injury in dogs with CME. Experimental infection of German Shepherd dogs in the present study demonstrated that CME caused marked pathological changes in their lymph nodes and spleen, and also gave rise to mononuclear infiltration in organs and tissues. Immunophenotyping of cells in lymph nodes, spleen and injured tissues highlighted differences in lymphocyte subsets, local expression of immunoglobulin subclasses and MHCII molecules between infected and control dogs. These findings suggest that the immunophenotypic and immunopathological changes in dogs with acute experimental CME are related to Th1 bias and compartmentalized immune response.(AU)

A erliquiose monocítica canina (EMC) é uma das doenças veiculadas por carrapatos com apresentações multisistêmicas mais relevantes em todo o mundo. A desregulação do sistema imune vem sendo proposta como o principal mecanismo envolvido na patogênese e lesão de tecidos em cães com EMC. A infecção experimental de pastores alemães nesta pesquisa evidenciou marcadas alterações patológicas em linfonodos, baço e também infiltração mononuclear em órgãos e tecidos. A imunofenotipagem de células em linfonodos, baço e tecidos lesados destacou diferenças em subconjuntos de linfócitos, expressão local de subclasses de imunoglobulinas e de moléculas MHCII entre cães infectados e controle. Esses achados sugerem que um viés Th1 e uma resposta imune compartimentalizada estão relacionados às alterações imunofenotípicas e imunopatológicas em cães com EMC experimental aguda.(AU)

Canine transmissible venereal tumor with spontaneous remission: case study with emphasis on clinical and cytopathological exams to monitor tumor evolution / Tumor venéreo transmissível canino com remissão espontânea: estudo de caso com ênfase aos exames clínico e citopatológico para monitoramento da evolução tumoral

The canine transmissible venereal tumor (TVTC) is a neoplasm transmitted mainly through copulation and with a high incidence in stray dogs in Brazil. In the process of tumor evolution of TVTC, the progression, stationary and regression phases are recognized. The host immunity is related to the disease's biological behavior, however, spontaneous regression observation in cases of naturally occurring TVTC is uncommon. A canine patient was attended, after beeing rescued from the street, due to an ulcerated mass in the external genitália and tick infestation. Cytopathological examination, which diagnosed TVTC, and laboratory tests that showed mild anemia and severe thrombocytopenia were performed. In view of the impossibility of carrying out other exams, it was made the presumptive diagnosis of canine monocytic ehrlichiosis (CME), and treatment was instituted. During follow-up it was observed quick improvement in clinical signs and laboratory changes, as well as a reduction in tumor mass. A new cytopathological evaluation was carried out, and was verified increase in mature lymphocytes and plasmocytes in the midst of the tumor cells, finding compatible with the stationary phase of the disease. From that moment on, it was decided to perform only clinical and cytopathological follow-up. In the following evaluations, continuous clinical remission and cytopathological findings compatible with those described in the regression phase were observed, until its complete remission. It is considered that the improvement in the general health of the patient after the treatment of CME is related to the spontaneous regression of TVTC, and that simultaneous performance of serial clinical and cytopathological exams may be feasible and useful for monitoring the stages of evolution of TVTC.

O tumor venéreo transmissível canino (TVTC) é uma neoplasia transmitida principalmente através da cópula, com elevada incidência em cães errantes no Brasil. No processo de evolução tumoral do TVTC, são reconhecidas as fases de progressão, estacionária e de regressão. O estado imunológico do hospedeiro está relacionado ao comportamento biológico da doença, contudo, a observação de regressão espontânea em casos de TVTC de ocorrência natural é incomum. Foi atendida uma paciente canina, resgatada da rua, por apresentar massa ulcerada na genitália externa e infestação por carrapatos. Foram realizados exame citopatológico, que diagnosticou TVTC, e exames laboratoriais que evidenciaram anemia discreta e grave trombocitopenia. Com isso e diante da impossibilidade de realizar outros exames, foi também estabelecido o diagnóstico presuntivo de erlichiose monocítica canina (EMC) e instituído tratamento para a hemoparasitose. Durante o acompanhamento, foi observada rápida melhora dos sinais clínicos e das alterações laboratoriais, bem como a redução espontânea da massa tumoral. Em sequência, foi realizada nova avaliação citopatológica do TVTC e verificado o aumento quantitativo de linfócitos maduros e plasmócitos, em meio as células tumorais, achado compatível com a fase estacionária da doença. A partir desse momento, optou-se por realizar apenas acompanhamento clínico e avaliação citopatológica da neoplasia. Foram observados contínua remissão clínica e achados microscópicos compatíveis com a fase de regressão do tumor, até sua remissão completa. Pondera-se que a melhora na saúde geral da paciente após o tratamento da EMC esteja relacionada à regressão espontânea do TVTC, e que realização simultânea de exames clínico e citopatológico seriados pode ser viável e útil ao acompanhamento das fases de evolução do TVTC.

Hematological and histopathological changes in medular aplasia resulting from Ehrlichia canis infection in a Border collie dog / Alterações hematológicas e histopatológicas na aplasia medulardecorrente da infecção por Ehrlichia canis em cão da raça Border Collie

The Canine Monocytic Ehrlichiosis (CME) is an infectious disease that commonly affects dogs of all breeds and ages. It is caused by the bacterium Ehrlichia canis and is transmitted by the tick Rhipicephalus sanguineus. The disease may pre-sent itself in the acute, subclinical, and chronic forms. The present study reports the case of a 2-year-old male Border Collie with advanced stage CME, attended at the Pet Clinic of the Veterinary Hospital of the University Federal de Jataí, which resul-ted in medullary aplasia. The diagnosis of marrow aplasia was based on the necroscopic and histopathological examinations. At necropsy, the diaphyses of the long bones were filled with diffuse, strongly whitish and pasty tissue, typical of the adipose tissue, also found in the femoral epiphyses. The histopathology showed unilocular adipose tissue as the major constituent of the bone marrow and rare islands of marrow cells. These findings were compatible with severe hypoplasia of the red bone mar-row and hyperplasia of the white bone marrow, affecting hematopoiesis, resulting in the laboratory alterations observed in the hematocrit, WBC, and plateletogram.

A erliquiose monocítica canina (EMC) é uma doença infecciosa que comumente afeta cães de todas as raças e idades. Causada pela bactéria Ehrlichia canis e transmitida pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus, a doença pode apresentar-se nas for-mas aguda, subclínica e crônica. O presente trabalho relata o caso de um cão, raça Border Collie, macho, 2 anos de idade, com EMC em estágio avançado, atendido no Setor de Clínica de Animais de Companhia do Hospital Veterinário da Universidade Federal de Jataí, caso este que resultou em aplasia medular. O diagnóstico da aplasia de medula baseou-se na realização de exames necroscópico e histopatológico. Na necropsia verificou-se a diáfise de ossos longos preenchida por tecido difuso, seve-ramente esbranquiçado e pastoso, característico de tecido adiposo, também encontrado em epífises femorais. No histopatoló-gico foi verificado tecido adiposo unilocular como maior constituinte da medula óssea e raras ilhas de células medulares. Esses achados foram compatíveis com hipoplasia severa de medula óssea vermelha e hiperplasia de medula óssea branca, afetando a hematopoiese resultando nas alterações laboratoriais verificadas no eritrograma, leucograma e plaquetograma.

Hematological and histopathological changes in medular aplasia resulting from Ehrlichia canis infection in a Border collie dog / Alterações hematológicas e histopatológicas na aplasia medulardecorrente da infecção por Ehrlichia canis em cão da raça Border Collie

The Canine Monocytic Ehrlichiosis (CME) is an infectious disease that commonly affects dogs of all breeds and ages. It is caused by the bacterium Ehrlichia canis and is transmitted by the tick Rhipicephalus sanguineus. The disease may pre-sent itself in the acute, subclinical, and chronic forms. The present study reports the case of a 2-year-old male Border Collie with advanced stage CME, attended at the Pet Clinic of the Veterinary Hospital of the University Federal de Jataí, which resul-ted in medullary aplasia. The diagnosis of marrow aplasia was based on the necroscopic and histopathological examinations. At necropsy, the diaphyses of the long bones were filled with diffuse, strongly whitish and pasty tissue, typical of the adipose tissue, also found in the femoral epiphyses. The histopathology showed unilocular adipose tissue as the major constituent of the bone marrow and rare islands of marrow cells. These findings were compatible with severe hypoplasia of the red bone mar-row and hyperplasia of the white bone marrow, affecting hematopoiesis, resulting in the laboratory alterations observed in the hematocrit, WBC, and plateletogram.(AU)

A erliquiose monocítica canina (EMC) é uma doença infecciosa que comumente afeta cães de todas as raças e idades. Causada pela bactéria Ehrlichia canis e transmitida pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus, a doença pode apresentar-se nas for-mas aguda, subclínica e crônica. O presente trabalho relata o caso de um cão, raça Border Collie, macho, 2 anos de idade, com EMC em estágio avançado, atendido no Setor de Clínica de Animais de Companhia do Hospital Veterinário da Universidade Federal de Jataí, caso este que resultou em aplasia medular. O diagnóstico da aplasia de medula baseou-se na realização de exames necroscópico e histopatológico. Na necropsia verificou-se a diáfise de ossos longos preenchida por tecido difuso, seve-ramente esbranquiçado e pastoso, característico de tecido adiposo, também encontrado em epífises femorais. No histopatoló-gico foi verificado tecido adiposo unilocular como maior constituinte da medula óssea e raras ilhas de células medulares. Esses achados foram compatíveis com hipoplasia severa de medula óssea vermelha e hiperplasia de medula óssea branca, afetando a hematopoiese resultando nas alterações laboratoriais verificadas no eritrograma, leucograma e plaquetograma.(AU)

New sensitive real-time PCR targeting p28 gene for detection of Ehrlichia canis in blood samples from dogs / Novo PCR em tempo real sensível que visa o gene p28 para a detecção de Ehrlichia canis em amostras de sangue de cães

ABSTRACT: This study aims to describe a new detection method of a quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) targeting the 28 kDa outer membrane protein gene (p28) as well as to compare this method with a conventional PCR (cPCR), which targets the same gene, in order to evaluate the performance of the technique designed in this study in detecting Ehrlichia canis (E. canis). Optimum oligonucleotides concentrations were reached, and the analytical sensitivity and specificity of the qPCR were performed. A total of 218 dogs' whole blood samples were conventionally collected for this study. The DNA was extracted from each sample. Subsequently, the samples were tested by an established cPCR and the new qPCR to compare each technique's performances. This new qPCR method for the molecular detection of E. canis presented a detection limit of ten copies of the fragment and was considered specific for E. canis according to analytical specificity analyses performed in vitro and in silico. The standard curve revealed 100% efficiency and a coefficient of determination (R2) equivalent to 99.8%. Among the samples examined by qPCR, 24.31% were considered positive, significantly greater than those detected by cPCR (15.13%). The qPCR technique reached a higher sensitivity than the cPCR when targeting the p28 gene in detecting E. canis. The qPCR standardized in this study is an efficient method for confirming canine monocytic ehrlichiosis (CME) diagnosis and might provide the parasitemia monitoring during the disease treatment.

RESUMO: Este estudo tem como objetivo descrever um novo método de detecção de uma reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) visando o gene da proteína da membrana externa de 28 kDa (p28), bem como comparar este método com um PCR convencional (cPCR), que visa o mesmo gene, a fim de avaliar o desempenho da técnica desenhada neste estudo na detecção de Ehrlichia canis (E. canis). As concentrações ideais de oligonucleotídeos foram alcançadas e a sensibilidade analítica e a especificidade do qPCR foram determinadas. Um total de 218 amostras de sangue total de cães foram coletadas convencionalmente para este estudo. O DNA foi extraído de cada amostra. Posteriormente, as amostras foram testadas por um cPCR estabelecido e o novo qPCR para comparar os desempenhos entre cada técnica. A curva padrão revelou 100% de eficiência e coeficiente de determinação (R2) equivalente a 99,8%. Dentre as amostras examinadas por qPCR, 24,31% foram consideradas positivas, percentual significativamente maior do que as detectadas por cPCR (15,13%). A técnica qPCR atingiu uma sensibilidade maior do que a cPCR na detecção de E. canis. A qPCR padronizada neste estudo é um método eficiente para a confirmação do diagnóstico de erliquiose monocítica canina (EMC) e pode fornecer o monitoramento de níveis de parasitemia ao longo do tratamento da doença.

Serum protein profile as a biomarker in diagnosing leishmaniosis and monocytic ehrlichiosis in dogs / Perfil sérico de proteínas como biomarcador nos diagnósticos da leishmaniose e da erliquiose monocítica em cães

Diagnosing Canine Visceral Leishmaniosis is challenging for veterinarians given that its hematological and biochemical abnormalities greatly resemble those of other illnesses of dogs, such as canine ehrlichiosis, which is caused by Ehrlichia canis and is highly prevalent with high pathogenicity. The aim of this study was to determine occurrences of serological positivity for the antigens of Ehrlichia canis and Leishmania infantum and its relationship to globulin concentrations in samples from dogs. Out of 93 samples tested, 12.9% were negative for the antigens of both L. infantum and E. canis; 33.3% were seropositive for both antigens. Discordant results were found from 18.3% that were positive only for L. infantum, while 35.5% were positive only for E. canis. Hyperglobulinemia was observed in 88.2% and the statistical analysis showed that there was a significant relationship between the high levels of globulins and seropositivity for the antigen of E. canis. However, the relationship between positivity for the antigen of L. infantum and hyperglobulinemia, showed that there was no statistically significant relationship between the two laboratory findings. From these results, it can be concluded that concomitant infections occur frequently and that hyperglobulinemia is more closely related to ehrlichiosis than to leishmaniosis, in dogs.

O diagnóstico da leishmaniose canina é um desafio ao Médico Veterinário visto que anormalidades hematológicas e bioquímicas muito se assemelham à outras enfermidades dos cães, como a erliquiose canina, causada pela Ehrlichia canis, muito prevalente e de alta patogenicidade. O objetivo deste estudo foi determinar a positividade sorológica frente aos antígenos de Ehrlichia canis e Leishmania infantum e a sua relação com as concentrações de globulinas em amostras de cães. Das 93 amostras testadas, 12,9% foram negativas frente aos antígenos de E. canis e L. infantum e 33% foram soropositivas. Resultados discordantes foram encontradas em 18,3% positivas apenas para L. infantum, enquanto que 35,5% reagiram apenas frente a E. canis. Hiperglobulinemia foi observada em 88,2% das amostras e a análise estatística mostrou haver relação significante entre a soropositividade frente aos antígenos de E. canis e a hiperglobulinemia, e em contrapartida, a relação entre esse aumento de globulinas e a positividade para L. infantum foi insignificante. Pelos resultados apresentados, pode-se concluir que as infecções concomitantes são frequentes e que a hiperglobulinemia está mais intimamente relacionada a erliquiose quando comparada à leishmaniose em cães.

Serum protein profile as a biomarker in diagnosing leishmaniosis and monocytic ehrlichiosis in dogs / Perfil sérico de proteínas como biomarcador nos diagnósticos da leishmaniose e da erliquiose monocítica em cães

Diagnosing Canine Visceral Leishmaniosis is challenging for veterinarians given that its hematological and biochemical abnormalities greatly resemble those of other illnesses of dogs, such as canine ehrlichiosis, which is caused by Ehrlichia canis and is highly prevalent with high pathogenicity. The aim of this study was to determine occurrences of serological positivity for the antigens of Ehrlichia canis and Leishmania infantum and its relationship to globulin concentrations in samples from dogs. Out of 93 samples tested, 12.9% were negative for the antigens of both L. infantum and E. canis; 33.3% were seropositive for both antigens. Discordant results were found from 18.3% that were positive only for L. infantum, while 35.5% were positive only for E. canis. Hyperglobulinemia was observed in 88.2% and the statistical analysis showed that there was a significant relationship between the high levels of globulins and seropositivity for the antigen of E. canis. However, the relationship between positivity for the antigen of L. infantum and hyperglobulinemia, showed that there was no statistically significant relationship between the two laboratory findings. From these results, it can be concluded that concomitant infections occur frequently and that hyperglobulinemia is more closely related to ehrlichiosis than to leishmaniosis, in dogs.(AU)

O diagnóstico da leishmaniose canina é um desafio ao Médico Veterinário visto que anormalidades hematológicas e bioquímicas muito se assemelham à outras enfermidades dos cães, como a erliquiose canina, causada pela Ehrlichia canis, muito prevalente e de alta patogenicidade. O objetivo deste estudo foi determinar a positividade sorológica frente aos antígenos de Ehrlichia canis e Leishmania infantum e a sua relação com as concentrações de globulinas em amostras de cães. Das 93 amostras testadas, 12,9% foram negativas frente aos antígenos de E. canis e L. infantum e 33% foram soropositivas. Resultados discordantes foram encontradas em 18,3% positivas apenas para L. infantum, enquanto que 35,5% reagiram apenas frente a E. canis. Hiperglobulinemia foi observada em 88,2% das amostras e a análise estatística mostrou haver relação significante entre a soropositividade frente aos antígenos de E. canis e a hiperglobulinemia, e em contrapartida, a relação entre esse aumento de globulinas e a positividade para L. infantum foi insignificante. Pelos resultados apresentados, pode-se concluir que as infecções concomitantes são frequentes e que a hiperglobulinemia está mais intimamente relacionada a erliquiose quando comparada à leishmaniose em cães.(AU)

New sensitive real-time PCR targeting p28 gene for detection of Ehrlichia canis in blood samples from dogs / Novo PCR em tempo real sensível que visa o gene p28 para a detecção de Ehrlichia canis em amostras de sangue de cães

This study aims to describe a new detection method of a quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) targeting the 28 kDa outer membrane protein gene (p28) as well as to compare this method with a conventional PCR (cPCR), which targets the same gene, in order to evaluate the performance of the technique designed in this study in detecting Ehrlichia canis (E. canis). Optimum oligonucleotides concentrations were reached, and the analytical sensitivity and specificity of the qPCR were performed. A total of 218 dogs’ whole blood samples were conventionally collected for this study. The DNA was extracted from each sample. Subsequently, the samples were tested by an established cPCR and the new qPCR to compare each technique’s performances. This new qPCR method for the molecular detection of E. canis presented a detection limit of ten copies of the fragment and was considered specific for E. canis according to analytical specificity analyses performed in vitro and in silico. The standard curve revealed 100% efficiency and a coefficient of determination (R²) equivalent to 99.8%. Among the samples examined by qPCR, 24.31% were considered positive, significantly greater than those detected by cPCR (15.13%). The qPCR technique reached a higher sensitivity than the cPCR when targeting the p28 gene in detecting E. canis. The qPCR standardized in this study is an efficient method for confirming canine monocytic ehrlichiosis (CME) diagnosis and might provide the parasitemia monitoring during the disease treatment.

Este estudo tem como objetivo descrever um novo método de detecção de uma reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) visando o gene da proteína da membrana externa de 28 kDa (p28), bem como comparar este método com um PCR convencional (cPCR), que visa o mesmo gene, a fim de avaliar o desempenho da técnica desenhada neste estudo na detecção de Ehrlichia canis (E. canis). As concentrações ideais de oligonucleotídeos foram alcançadas e a sensibilidade analítica e a especificidade do qPCR foram determinadas. Um total de 218 amostras de sangue total de cães foram coletadas convencionalmente para este estudo. O DNA foi extraído de cada amostra. Posteriormente, as amostras foram testadas por um cPCR estabelecido e o novo qPCR para comparar os desempenhos entre cada técnica. A curva padrão revelou 100% de eficiência e coeficiente de determinação (R²) equivalente a 99,8%. Dentre as amostras examinadas por qPCR, 24,31% foram consideradas positivas, percentual significativamente maior do que as detectadas por cPCR (15,13%). A técnica qPCR atingiu uma sensibilidade maior do que a cPCR na detecção de E. canis. A qPCR padronizada neste estudo é um método eficiente para a confirmação do diagnóstico de erliquiose monocítica canina (EMC) e pode fornecer o monitoramento de níveis de parasitemia ao longo do tratamento da doença.

New sensitive real-time PCR targeting p28 gene for detection of Ehrlichia canis in blood samples from dogs / Novo PCR em tempo real sensível que visa o gene p28 para a detecção de Ehrlichia canis em amostras de sangue de cães

This study aims to describe a new detection method of a quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) targeting the 28 kDa outer membrane protein gene (p28) as well as to compare this method with a conventional PCR (cPCR), which targets the same gene, in order to evaluate the performance of the technique designed in this study in detecting Ehrlichia canis (E. canis). Optimum oligonucleotides concentrations were reached, and the analytical sensitivity and specificity of the qPCR were performed. A total of 218 dogs whole blood samples were conventionally collected for this study. The DNA was extracted from each sample. Subsequently, the samples were tested by an established cPCR and the new qPCR to compare each techniques performances. This new qPCR method for the molecular detection of E. canis presented a detection limit of ten copies of the fragment and was considered specific for E. canis according to analytical specificity analyses performed in vitro and in silico. The standard curve revealed 100% efficiency and a coefficient of determination (R²) equivalent to 99.8%. Among the samples examined by qPCR, 24.31% were considered positive, significantly greater than those detected by cPCR (15.13%). The qPCR technique reached a higher sensitivity than the cPCR when targeting the p28 gene in detecting E. canis. The qPCR standardized in this study is an efficient method for confirming canine monocytic ehrlichiosis (CME) diagnosis and might provide the parasitemia monitoring during the disease treatment.(AU)

Este estudo tem como objetivo descrever um novo método de detecção de uma reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) visando o gene da proteína da membrana externa de 28 kDa (p28), bem como comparar este método com um PCR convencional (cPCR), que visa o mesmo gene, a fim de avaliar o desempenho da técnica desenhada neste estudo na detecção de Ehrlichia canis (E. canis). As concentrações ideais de oligonucleotídeos foram alcançadas e a sensibilidade analítica e a especificidade do qPCR foram determinadas. Um total de 218 amostras de sangue total de cães foram coletadas convencionalmente para este estudo. O DNA foi extraído de cada amostra. Posteriormente, as amostras foram testadas por um cPCR estabelecido e o novo qPCR para comparar os desempenhos entre cada técnica. A curva padrão revelou 100% de eficiência e coeficiente de determinação (R²) equivalente a 99,8%. Dentre as amostras examinadas por qPCR, 24,31% foram consideradas positivas, percentual significativamente maior do que as detectadas por cPCR (15,13%). A técnica qPCR atingiu uma sensibilidade maior do que a cPCR na detecção de E. canis. A qPCR padronizada neste estudo é um método eficiente para a confirmação do diagnóstico de erliquiose monocítica canina (EMC) e pode fornecer o monitoramento de níveis de parasitemia ao longo do tratamento da doença.(AU)

Analysis on the prokaryotic microbiome in females and embryonic cell cultures of Rhipicephalus sanguineus tropical and temperate lineages from two specific localities in Brazil / Análise do microbioma procarionte de fêmeas e cultura celular embrionária de Rhipicephalus sanguineus linhagens tropical e temperada de duas localidades no Brasil

Two lineages of Rhipicephalus sanguineus are known in Brazil: the temperate or southern and the tropical or northern populations. The distribution patterns of both lineages of R. sanguineus have epidemiological implications that can affect vectorial competence concerning Ehrlichia canis, the agent of canine monocytic ehrlichiosis. Intending to identify the microbiomes of both lineages and compare microorganisms in R. sanguineus, we used the 16S rRNA (V4-V5 region) gene-based metataxonomic approach, through NGS sequencing on the MiSeq Illumina platform. We selected specimens of females from the environment and samples of primary embryonic cell cultures, from both lineages, and this was the first study to investigate the prokaryotic microbiome in tick cell cultures. The results showed that many bacterial taxa detected in the samples were typical members of the host environment. A significant diversity of microorganisms in R. sanguineus females and in embryonic cell cultures from both lineages was found, with emphasis on the presence of Coxiella in all samples, albeit in different proportions. The Coxiella species present in the two lineages of ticks may be different and may have co-evolved with them, thus driving different patterns of interactions between ticks and the pathogens that they can harbor or transmit to vertebrate hosts.(AU)

Duas linhagens de Rhipicephalus sanguineus são conhecidas no Brasil: populações da linhagem temperada ou do sul, e tropical ou do norte. Os padrões de distribuição de ambas as linhagens de R. sanguineus têm implicações epidemiológicas, podendo afetar a competência vetorial de Ehrlichia canis, o agente etiológico da erliquiose monocítica canina. Com a intenção de identificar os microbiomas de ambas as linhagens e comparar microrganismos de R. sanguineus, foi utilizada a metataxonomia, baseada no gene 16S rRNA (região V4-V5), por meio do sequenciamento de nova geração na plataforma MiSeq Illumina. Foram selecionadas amostras de fêmeas do ambiente e cultivo primário de células embrionárias, considerando-se as duas linhagens conhecidas do Brasil. Este é o primeiro estudo que investiga o microbioma procariótico de células de cultura de carrapato. Os resultados mostram que muitos grupos de bactérias detectadas nas amostras são membros típicos do ambiente do hospedeiro. Uma diversidade significativa de microrganismos em fêmeas e cultura de células embrionárias nas duas linhagens de R. sanguineus foi encontrada, com ênfase na presença de Coxiella em todas as amostras, ainda que em diferentes proporções. Possivelmente, as espécies de Coxiella presentes nas duas linhagens de carrapatos são diferentes e co-evoluíram com essas linhagens, conduzindo a diferentes padrões de interação entre carrapatos e patógenos que podem abrigar ou transmitir aos hospedeiros vertebrados.(AU)

Analysis on the prokaryotic microbiome in females and embryonic cell cultures of Rhipicephalus sanguineus tropical and temperate lineages from two specific localities in Brazil / Análise do microbioma procarionte de fêmeas e cultura celular embrionária de Rhipicephalus sanguineus linhagens tropical e temperada de duas localidades no Brasil

Abstract Two lineages of Rhipicephalus sanguineus are known in Brazil: the temperate or southern and the tropical or northern populations. The distribution patterns of both lineages of R. sanguineus have epidemiological implications that can affect vectorial competence concerning Ehrlichia canis, the agent of canine monocytic ehrlichiosis. Intending to identify the microbiomes of both lineages and compare microorganisms in R. sanguineus, we used the 16S rRNA (V4-V5 region) gene-based metataxonomic approach, through NGS sequencing on the MiSeq Illumina platform. We selected specimens of females from the environment and samples of primary embryonic cell cultures, from both lineages, and this was the first study to investigate the prokaryotic microbiome in tick cell cultures. The results showed that many bacterial taxa detected in the samples were typical members of the host environment. A significant diversity of microorganisms in R. sanguineus females and in embryonic cell cultures from both lineages was found, with emphasis on the presence of Coxiella in all samples, albeit in different proportions. The Coxiella species present in the two lineages of ticks may be different and may have co-evolved with them, thus driving different patterns of interactions between ticks and the pathogens that they can harbor or transmit to vertebrate hosts.

Resumo Duas linhagens de Rhipicephalus sanguineus são conhecidas no Brasil: populações da linhagem temperada ou do sul, e tropical ou do norte. Os padrões de distribuição de ambas as linhagens de R. sanguineus têm implicações epidemiológicas, podendo afetar a competência vetorial de Ehrlichia canis, o agente etiológico da erliquiose monocítica canina. Com a intenção de identificar os microbiomas de ambas as linhagens e comparar microrganismos de R. sanguineus, foi utilizada a metataxonomia, baseada no gene 16S rRNA (região V4-V5), por meio do sequenciamento de nova geração na plataforma MiSeq Illumina. Foram selecionadas amostras de fêmeas do ambiente e cultivo primário de células embrionárias, considerando-se as duas linhagens conhecidas do Brasil. Este é o primeiro estudo que investiga o microbioma procariótico de células de cultura de carrapato. Os resultados mostram que muitos grupos de bactérias detectadas nas amostras são membros típicos do ambiente do hospedeiro. Uma diversidade significativa de microrganismos em fêmeas e cultura de células embrionárias nas duas linhagens de R. sanguineus foi encontrada, com ênfase na presença de Coxiella em todas as amostras, ainda que em diferentes proporções. Possivelmente, as espécies de Coxiella presentes nas duas linhagens de carrapatos são diferentes e co-evoluíram com essas linhagens, conduzindo a diferentes padrões de interação entre carrapatos e patógenos que podem abrigar ou transmitir aos hospedeiros vertebrados.

Clinical, hematological, blood gasometric and electrolytic changes in dogs receiving whole blood transfusions

Blood transfusion is a tool capable of saving lives. Patients undergoing blood transfusion usually present several alterations in the acid-base and electrolyte balance, aggravating the condition of critically ill patients. Some studies have demonstrated haematological alterations in certain species that received whole blood transfusions, however, few studies have evaluated acid base and electrolyte changes in dogs undergoing whole blood haemotherapy. The aim of this study was to analyze clinical, hematological, blood gas and electrolyte changes in anemic dogs after whole blood transfusion. Twenty nine dogs transfused due to anemia were enrolled in the study. Donors blood was collected in a transfusion bag containing citrate phosphate adenine dextrose and stored up to 24 h. Blood collections and evaluations were made before and 24 h after the transfusion. Data distribution normality was tested by the Shapiro Wilk Test. The means of the variables were compared by paired t-test. It was observed an increase in diastolic blood pressure and a reduction in heart rate (P < 0.05). There was a not significant increase in systolic blood pressure, temperature, and a reduction in respiratory rate per minute. Erythrocyte, haemoglobin and haematocrit averages were significantly increased after blood transfusion (P < 0.05). It was observed a reduction in the mean values of pH (P < 0.05), potassium (P > 0.05) and ionized calcium (P > 0.05) and an increase in the mean partial pressure of carbon dioxide (pCO2 ) (P < 0.001), bicarbonate (P > 0.05) and sodium (P < 0.05). The probable cause of anemia was monocytic ehrlichiosis (14/29), visceral leishmaniasis (1/29), babesiosis (1/29), co-infection of Ehrlichia canis and Leishmania infantum (2/29), co-infection of E. canis and Babesia vogeli (1/29). It was not possible to determine the etiology of the anemia in ten dogs. Heart rate significantly reduced after transfusion, probably because of the increase in hematocrit, hemoglobin and erythrocyte values. It may be justified by the displacement of extravascular fluid to the intravascular space. Mean values of systolic blood pressure were slightly elevated before transfusion and remained elevated afterwards, while diastolic and mean arterial pressure increased significantly after transfusion. These changes may be due to the morbid condition and may be influenced by many other factors. Haematocrit, haemoglobin and erythrocyte values increased significantly after transfusion, according to what was observed in other studies. The significant reduction in pH and increase in pCO2 reflects the compensatory mechanism for metabolic acidosis to increase ventilation, leading to pCO2 reduction and changes in pH. The reduction in pH due to the contact of the collected blood with conservative solutions is one of the main changes thar occurs during blood storage. It was described significantly lower pH in dogs' whole blood samples stored for more than 24 h in vacutainer plastic containing CPDA-1. We may assume there was no intense pH reduction in the present study because the bags were stored for up to 24 h. Although not statistically significant, the increase of pO2 mean reflects the improvement of tissue oxygen perfusion. It was observed a significant increase in sodium ions. The mean sodium ion concentration before transfusion was very close to the maximum reference value. Hyperkalaemia was not observed, nor was there significant reduction of potassium ions after transfusion. Several studies report hyperkalaemia and transfusion-associated cardiac arrests in humans, associated with infusion of large volumes of blood. Whole blood transfusion increased erythrogram values and did not negatively affect the electrolyte or acid-base status, representing a safe and useful tool in the intensive care of small animals.(AU)

Molecular diagnosis and risk factors of canine ehrlichiosis in the municipality of Itabuna-Bahia, Brazil / Diagnóstico molecular e fatores de risco da erliquiose canina no município de Itabuna-Bahia

Ehrlichiosis is an emerging zoonosis worldwide and has had several adverse effects on public health. Canine monocytic ehrlichiosis (CME), caused by Ehrlichia canis, has the tick Rhipicephalus sanguineus as the vector. The main clinical signs in affected dogs are fever, apathy, anorexia, weight loss, and neurological signs. The diagnosis is made through the association of clinical signs with parasitological, serological, and molecular tests. The aim of this study was to evaluate the occurrence of E. canis infection in dogs from the city of Itabuna-Bahia, as well as to identify the risk factors related to infection. For this, 405 dogs from the Center for Zoonoses Control (CCZ), non-governmental organizations (NGOs), and dogs domiciled and semi-domiciled in the city of Itabuna, southern Bahia, were evaluated. After initial physical evaluation of the dogs, blood samples were collected by venipuncture for subsequent DNA extraction and E. canis testing using the nested Polymerase Chain Reaction (nested-PCR) technique. In addition, an epidemiological questionnaire that included questions related to the animals was administered to the dog owners to identify the risk factors for exposure to the etiological agent and to the vector. Approximately 17% of the dogs in the municipality of Itabuna-Bahia tested positive for E. canis by nested-PCR, a result higher than that found in other studies conducted in the same municipality. Among the factors associated with E. canis infection, contact with other dogs (p = 0.0226) was an important factor for the dissemination of CME, since dogs are reported to be reservoirs of E. canis. Male dogs (p = 0.0016) presented lower risk for E. canis infection. Other studies, however, describe no association between animal gender and infection by E. canis. Preventive measures to reduce exposure to the vector of ehrlichiosis are necessary.

A erliquiose é uma zoonose emergente em todo o mundo e tem acarretado diversos transtornos para a saúde pública. A erliquiose monocítica canina (EMC), causada pela Ehrlichia canis, tem como vetor o carrapato Rhipicephalus sanguineus. Os principais sinais clínicos nos cães afetados são febre, apatia, anorexia, perda de peso e sinais neurológicos. O diagnóstico é feito através da associação dos sinais clínicos, exames parasitológicos, sorológicos e moleculares. Objetivou-se através deste estudo avaliar a ocorrência de infecção por E. canis em cães do município de Itabuna-Bahia, bem como identificar os fatores de risco relacionados à infecção. Para tanto, foram avaliados 405 cães provenientes do Centro de Controle de Zoonoses (CCZ), Organizações não governamentais (ONGs), cães domiciliados e semi-domiciliados da cidade de Itabuna-Bahia. Após avaliação física inicial dos cães, procedeu-se em seguida a coleta de amostras de sangue por punção venosa, para posterior extração de DNA e pesquisa de E. canis pela técnica de nested-Reação em Cadeia de Polimerase (nested-PCR). Adicionalmente, um questionário epidemiológico foi aplicado junto aos responsáveis, no qual constavam questões relacionadas aos animais, com a finalidade de identificar os fatores de risco de exposição destes ao agente etiológico e ao vetor. Em suma, este estudo mostrou que aproximadamente 17% dos cães do município de Itabuna-Bahia foram positivos para E. canis pela nested-PCR, resultado superior ao encontrado em outros estudos realizados no mesmo município. Dos fatores associados à infecção por E. canis, foi significativo o contato com outros cães (p=0,0226), um fator importante para a disseminação da EMC, pois os cães são relatados como reservatórios da E. canis. O gênero macho (p=0,0016) apresentou menor risco para a infecção por E. canis. Outros estudos, no entanto, descrevem que não há nenhuma associação entre o gênero do animal e a infecção por...

Molecular diagnosis and risk factors of canine ehrlichiosis in the municipality of Itabuna-Bahia, Brazil / Diagnóstico molecular e fatores de risco da erliquiose canina no município de Itabuna-Bahia

Ehrlichiosis is an emerging zoonosis worldwide and has had several adverse effects on public health. Canine monocytic ehrlichiosis (CME), caused by Ehrlichia canis, has the tick Rhipicephalus sanguineus as the vector. The main clinical signs in affected dogs are fever, apathy, anorexia, weight loss, and neurological signs. The diagnosis is made through the association of clinical signs with parasitological, serological, and molecular tests. The aim of this study was to evaluate the occurrence of E. canis infection in dogs from the city of Itabuna-Bahia, as well as to identify the risk factors related to infection. For this, 405 dogs from the Center for Zoonoses Control (CCZ), non-governmental organizations (NGOs), and dogs domiciled and semi-domiciled in the city of Itabuna, southern Bahia, were evaluated. After initial physical evaluation of the dogs, blood samples were collected by venipuncture for subsequent DNA extraction and E. canis testing using the nested Polymerase Chain Reaction (nested-PCR) technique. In addition, an epidemiological questionnaire that included questions related to the animals was administered to the dog owners to identify the risk factors for exposure to the etiological agent and to the vector. Approximately 17% of the dogs in the municipality of Itabuna-Bahia tested positive for E. canis by nested-PCR, a result higher than that found in other studies conducted in the same municipality. Among the factors associated with E. canis infection, contact with other dogs (p = 0.0226) was an important factor for the dissemination of CME, since dogs are reported to be reservoirs of E. canis. Male dogs (p = 0.0016) presented lower risk for E. canis infection. Other studies, however, describe no association between animal gender and infection by E. canis. Preventive measures to reduce exposure to the vector of ehrlichiosis are necessary.(AU)

A erliquiose é uma zoonose emergente em todo o mundo e tem acarretado diversos transtornos para a saúde pública. A erliquiose monocítica canina (EMC), causada pela Ehrlichia canis, tem como vetor o carrapato Rhipicephalus sanguineus. Os principais sinais clínicos nos cães afetados são febre, apatia, anorexia, perda de peso e sinais neurológicos. O diagnóstico é feito através da associação dos sinais clínicos, exames parasitológicos, sorológicos e moleculares. Objetivou-se através deste estudo avaliar a ocorrência de infecção por E. canis em cães do município de Itabuna-Bahia, bem como identificar os fatores de risco relacionados à infecção. Para tanto, foram avaliados 405 cães provenientes do Centro de Controle de Zoonoses (CCZ), Organizações não governamentais (ONGs), cães domiciliados e semi-domiciliados da cidade de Itabuna-Bahia. Após avaliação física inicial dos cães, procedeu-se em seguida a coleta de amostras de sangue por punção venosa, para posterior extração de DNA e pesquisa de E. canis pela técnica de nested-Reação em Cadeia de Polimerase (nested-PCR). Adicionalmente, um questionário epidemiológico foi aplicado junto aos responsáveis, no qual constavam questões relacionadas aos animais, com a finalidade de identificar os fatores de risco de exposição destes ao agente etiológico e ao vetor. Em suma, este estudo mostrou que aproximadamente 17% dos cães do município de Itabuna-Bahia foram positivos para E. canis pela nested-PCR, resultado superior ao encontrado em outros estudos realizados no mesmo município. Dos fatores associados à infecção por E. canis, foi significativo o contato com outros cães (p=0,0226), um fator importante para a disseminação da EMC, pois os cães são relatados como reservatórios da E. canis. O gênero macho (p=0,0016) apresentou menor risco para a infecção por E. canis. Outros estudos, no entanto, descrevem que não há nenhuma associação entre o gênero do animal e a infecção por...(AU)

Expression and antigenic analysis of the recombinant TRP36 protein from Ehrlichia canis São Paulo strain for serologic tests / Expressão e análise antigênica da proteína RTP36 recombinante da amostra São Paulo de Ehrlichia canis para testes sorológicos

Ehrlichia canis is the main etiological agent of canine monocytic ehrlichiosis (CME), a globally canine infectious disease. In Brazil, CME is considered to be endemic, and its prevalence can reach 65% in some states. The diagnosis of ehrlichiosis is important for treatment and epidemiological purposes. The E. canis TRP36 (Tandem Repeat Protein) protein elicits the earliest acute-phase antibody response observed during the course of the disease. This study aimed to generate the recombinant TRP36 protein from E. canis São Paulo strain and to evaluate its potential as a tool for the serologic diagnosis of CME. The E. canis São Paulo isolate was cultivated in DH82 lineage cells, and its genomic DNA was obtained. The bacterial DNA fragment encoding the entire ORF of TRP36 was cloned into the pBAD/Thio-TOPO vector and transformed into Escherichia coli DH10B competent cells with the trp36-bearing plasmid for protein expression. To evaluate the protein antigenicity, 16 canine serum samples were previously tested (by PCR and the commercial SNAP®4Dx® serological test). The results were in accordance with the SNAP®4Dx® test. Experiments using this recombinant protein as an antigen, targeting the development of a serologic test based on ELISA methodology, are the next step to produce a reliable, affordable and useful diagnostic tool for CME in Brazil.(AU)

Ehrlichia canis é o principal agente etiológico da erliquiose monocítica canina (EMC), uma doença infecciosa canina globalmente dispersa. No Brasil, a EMC é considerada endêmica, e a infecção pode atingir 65% em cães em alguns estados. O diagnóstico de erliquiose é importante para fins de tratamento e epidemiológicos. A proteína TRP36 de E. canis leva a uma resposta humoral com produção de anticorpos em fase aguda, encontrada durante o curso da doença. O objetivo deste estudo foi obter a proteína TRP36 recombinante da amostra São Paulo de E. canis e avaliar seu potencial como ferramenta para o diagnóstico sorológico da CME. O isolado de E. canis São Paulo foi cultivado em células da linhagem DH82 e o DNA genômico foi obtido. O fragmento de DNA bacteriano que codifica toda a ORF de TRP36 foi clonado no vetor pBAD / Thio-TOPO e transformado em células competentes Escherichia coli DH10B, com o plasmídeo portador de trp36 para expressão de proteínas. Para avaliar a antigenicidade da proteína, 16 amostras de soro canino foram previamente analisadas (por PCR e teste sorológico comercial SNAP®4Dx®). Os resultados estavam de acordo com o teste SNAP®4Dx®. Os experimentos que utilizam essa proteína recombinante como antígeno, visando ao desenvolvimento de um teste sorológico baseado no ELISA, são o próximo passo para produzir um teste de diagnóstico confiável, acessível e útil para o diagnóstico da EMC no Brasil.(AU)

Canine monocytic ehrlichiosis in Buenos Aires, Argentina: comparison of serological and molecular assays / Ehrlichiose monocítica canina em Buenos Aires: comparação de testes serológicos e moleculares

Canine monocytic ehrlichiosis (CME) is an infectious disease caused by the bacterium Ehrlichia canis and transmitted by Rhipicephalus sanguineus sensu lato, a tick with worldwide distribution. When not diagnosed and treated early, disease can be severe. Currently, the disease is confirmed by serological or molecular assays. The objective of this study was to compare a serological assay based on immunochromatography (SPEED® EHRLI immunochromatographic test; BVT, France) and a molecular assay (a screening PCR followed by a nested PCR specific for E. canis) for the diagnosis of E. canis in suspected dogs from Buenos Aires city and southern Greater Buenos Aires, Argentina. Blood samples from 20 clinically healthy dogs (Control Group) and from 80 sick dogs suspected of having CME (Groups 1 to 4) were tested in parallel. Neither the immunochromatographic test nor the PCR assay was able to detect the presence of E. canis in the Control Group. In the group which had been previously tested by serology, the agreement between the tests was low (kappa: 0.200), whereas in the group which had been previously tested by PCR, the concordance between the tests was adequate (kappa: 0.650). The concordance between the tests evaluated in the total population studied was moderate (kappa: 0.496). The results of our study suggest that the use of rapid serological tests as a first approach, together with subsequent confirmation by PCR, will improve the diagnosis of CME.(AU)

A ehrlichiose monocítica canina (CME) é uma doença infecciosa transmitida pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato com distribuição mundial causada por Ehrlichia canis, que pode produzir uma doença grave se não foi diagnosticada e tratada precocemente. A confirmação da doença é feita diretamente pela detecção do DNA fazendo a reação em cadeia da polimerase (PCR) ou indiretamente por métodos sorológicos. O objetivo deste estudo foi comparar o método sorológico baseado na imunocromatografia e a técnica de PCR para o diagnóstico de E. canis em cães suspeitos da Cidade de Buenos Aires e da região sul da Grande Buenos Aires. As amostras de sangue de 20 cães clinicamente saudáveis (Grupo Controle) e de 80 cães com suspeita clínica de CME (Grupo 1-4) foram avaliadas em paralelo. O diagnóstico serológico foi feito pelo teste imunocromatográfico SPEED® EHRLI (BVT, França). Para a detecção molecular, foi utilizada uma PCR de triagem para amplificar um fragmento de 345 pb do gene que codifica a subunidade 16S do rRNA da família Anaplasmataceae. As amostras positivas depois foram processadas pela PCR aninhada específica para E. canis. No Grupo Controle, a presença de E. canis não foi detectada por PCR ou anticorpos específicos com o teste imunocromatográfico. No grupo em que a sorologia foi solicitada inicialmente (1 e 2), a concordância entre os testes foi baixo (kappa: 0,200) enquanto que no grupo onde o teste inicialmente solicitado foi a PCR, a concordância entre os testes era adequado (kappa: 0,650). A concordância entre os testes avaliados na população total estudada foi moderada (kappa: 0,496). Em conclusão, os resultados do nosso estudo sugerem que o uso de testes serológicos rápidos inicialmente, juntamente com a confirmação subsequente por PCR, permitirá melhorar o diagnóstico de CME.(AU)

Canine monocytic ehrlichiosis in Buenos Aires, Argentina: comparison of serological and molecular assays / Ehrlichiose monocítica canina em Buenos Aires: comparação de testes serológicos e moleculares

Canine monocytic ehrlichiosis (CME) is an infectious disease caused by the bacterium Ehrlichia canis and transmitted by Rhipicephalus sanguineus sensu lato, a tick with worldwide distribution. When not diagnosed and treated early, disease can be severe. Currently, the disease is confirmed by serological or molecular assays. The objective of this study was to compare a serological assay based on immunochromatography (SPEED® EHRLI immunochromatographic test; BVT, France) and a molecular assay (a screening PCR followed by a nested PCR specific for E. canis) for the diagnosis of E. canis in suspected dogs from Buenos Aires city and southern Greater Buenos Aires, Argentina. Blood samples from 20 clinically healthy dogs (Control Group) and from 80 sick dogs suspected of having CME (Groups 1 to 4) were tested in parallel. Neither the immunochromatographic test nor the PCR assay was able to detect the presence of E. canis in the Control Group. In the group which had been previously tested by serology, the agreement between the tests was low (kappa: 0.200), whereas in the group which had been previously tested by PCR, the concordance between the tests was adequate (kappa: 0.650). The concordance between the tests evaluated in the total population studied was moderate (kappa: 0.496). The results of our study suggest that the use of rapid serological tests as a first approach, together with subsequent confirmation by PCR, will improve the diagnosis of CME.(AU)

A ehrlichiose monocítica canina (CME) é uma doença infecciosa transmitida pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato com distribuição mundial causada por Ehrlichia canis, que pode produzir uma doença grave se não foi diagnosticada e tratada precocemente. A confirmação da doença é feita diretamente pela detecção do DNA fazendo a reação em cadeia da polimerase (PCR) ou indiretamente por métodos sorológicos. O objetivo deste estudo foi comparar o método sorológico baseado na imunocromatografia e a técnica de PCR para o diagnóstico de E. canis em cães suspeitos da Cidade de Buenos Aires e da região sul da Grande Buenos Aires. As amostras de sangue de 20 cães clinicamente saudáveis (Grupo Controle) e de 80 cães com suspeita clínica de CME (Grupo 1-4) foram avaliadas em paralelo. O diagnóstico serológico foi feito pelo teste imunocromatográfico SPEED® EHRLI (BVT, França). Para a detecção molecular, foi utilizada uma PCR de triagem para amplificar um fragmento de 345 pb do gene que codifica a subunidade 16S do rRNA da família Anaplasmataceae. As amostras positivas depois foram processadas pela PCR aninhada específica para E. canis. No Grupo Controle, a presença de E. canis não foi detectada por PCR ou anticorpos específicos com o teste imunocromatográfico. No grupo em que a sorologia foi solicitada inicialmente (1 e 2), a concordância entre os testes foi baixo (kappa: 0,200) enquanto que no grupo onde o teste inicialmente solicitado foi a PCR, a concordância entre os testes era adequado (kappa: 0,650). A concordância entre os testes avaliados na população total estudada foi moderada (kappa: 0,496). Em conclusão, os resultados do nosso estudo sugerem que o uso de testes serológicos rápidos inicialmente, juntamente com a confirmação subsequente por PCR, permitirá melhorar o diagnóstico de CME.(AU)

Kidney disease in natural infection by Ehrlichia canis in dogs / Doença renal na infecção natural por Ehrlichia canis em cães

Canine monocytic ehrlichiosis, caused by the intracellular bacterium Ehrlichia canis, can affect different organs, including the kidneys, in different stages of infection, and kidney involvement is considered one of the main causes of death related to the disease. This study aimed to investigate the occurrence of kidney disease in dogs naturally infected with E. canis and to correlate antibody levels with the severity of renal disease. Serum concentrations of urea, creatinine, and proteins (albumin and globulin), along with urine concentration, urine gamma-glutamyl transferase, and urine protein levels, were evaluated in 60 dogs with E. canis infection diagnosed by polymerase chain reaction. The detection of anti-E. canis antibodies was also performed for each dog. Of the 60 dogs with E. canis infection, 73.33% presented anti-E. canis antibodies. Laboratory abnormalities consistent with renal disease were observed in 33 (55%) infected dogs, and of these, 43.3% were in stage I chronic kidney disease. A positive correlation was observed between antibody levels and total plasma protein (p = 0.0332) and serum globulin (p = 0.0057) levels. In this study, renal disease was observed on routine laboratory testing in 55% of dogs with monocytic ehrlichiosis; however, there was no correlation between the stage of renal disease and the antibody titer against E. canis.(AU)

A Erliquiose monocítica canina, causada pela bactéria intracelular Ehrlichia canis, pode acometer diferentes órgãos inclusive os rins, nas distintas fases da infecção, sendo considerada uma das principais causas de óbito relacionadas a essa doença. Este trabalho teve por objetivo investigar a ocorrência de doença renal em cães naturalmente infectados por E. canis correlacionando à gravidade da doença renal. Sessenta cães com infecção por E. canis diagnosticados pela reação em cadeia pela polimerase (PCR) foram avaliados a concentração sérica de ureia e creatinina, proteínas (albumina e globulinas), urinálise, gamaglutamil transferase urinária e proteinúria. Paralelamente foi pesquisado a presença de anticorpos anti-E. canis pelo ensaio imunoenzimático (dot ELISA). Dos 60 cães com infecção por E. canis, 73,33% apresentaram anticorpos anti- E. canis, enquanto, 33 (55%) cães apresentaram achados laboratoriais condizentes com doença renal, e destes 43,3% dos cães encontravam-se no estágio I da doença renal. Correlação positiva foi observada entre os níveis de anticorpos, globulina sérica (p=0,0057) e proteínas plasmáticas totais (p=0,0332). Neste estudo, a doença renal foi observada em 55% dos cães com erliquiose monocítica, utilizando exames laboratoriais empregados na rotina clínica, sem correlação com o estadiamento da doença renal, apesar dos altos títulos de anticorpos contra E. canis.(AU)

Canine monocytic ehrlichiosis in Buenos Aires, Argentina: comparison of serological and molecular assays

ABSTRACT: Canine monocytic ehrlichiosis (CME) is an infectious disease caused by the bacterium Ehrlichia canis and transmitted by Rhipicephalus sanguineus sensu lato, a tick with worldwide distribution. When not diagnosed and treated early, disease can be severe. Currently, the disease is confirmed by serological or molecular assays. The objective of this study was to compare a serological assay based on immunochromatography (SPEED® EHRLI immunochromatographic test; BVT, France) and a molecular assay (a screening PCR followed by a nested PCR specific for E. canis) for the diagnosis of E. canis in suspected dogs from Buenos Aires city and southern Greater Buenos Aires, Argentina. Blood samples from 20 clinically healthy dogs (Control Group) and from 80 sick dogs suspected of having CME (Groups 1 to 4) were tested in parallel. Neither the immunochromatographic test nor the PCR assay was able to detect the presence of E. canis in the Control Group. In the group which had been previously tested by serology, the agreement between the tests was low (kappa: 0.200), whereas in the group which had been previously tested by PCR, the concordance between the tests was adequate (kappa: 0.650). The concordance between the tests evaluated in the total population studied was moderate (kappa: 0.496). The results of our study suggest that the use of rapid serological tests as a first approach, together with subsequent confirmation by PCR, will improve the diagnosis of CME.

RESUMO: A ehrlichiose monocítica canina (CME) é uma doença infecciosa transmitida pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato com distribuição mundial causada por Ehrlichia canis, que pode produzir uma doença grave se não foi diagnosticada e tratada precocemente. A confirmação da doença é feita diretamente pela detecção do DNA fazendo a reação em cadeia da polimerase (PCR) ou indiretamente por métodos sorológicos. O objetivo deste estudo foi comparar o método sorológico baseado na imunocromatografia e a técnica de PCR para o diagnóstico de E. canis em cães suspeitos da Cidade de Buenos Aires e da região sul da Grande Buenos Aires. As amostras de sangue de 20 cães clinicamente saudáveis (Grupo Controle) e de 80 cães com suspeita clínica de CME (Grupo 1-4) foram avaliadas em paralelo. O diagnóstico serológico foi feito pelo teste imunocromatográfico SPEED® EHRLI (BVT, França). Para a detecção molecular, foi utilizada uma PCR de triagem para amplificar um fragmento de 345 pb do gene que codifica a subunidade 16S do rRNA da família Anaplasmataceae. As amostras positivas depois foram processadas pela PCR aninhada específica para E. canis. No Grupo Controle, a presença de E. canis não foi detectada por PCR ou anticorpos específicos com o teste imunocromatográfico. No grupo em que a sorologia foi solicitada inicialmente (1 e 2), a concordância entre os testes foi baixo (kappa: 0,200) enquanto que no grupo onde o teste inicialmente solicitado foi a PCR, a concordância entre os testes era adequado (kappa: 0,650). A concordância entre os testes avaliados na população total estudada foi moderada (kappa: 0,496). Em conclusão, os resultados do nosso estudo sugerem que o uso de testes serológicos rápidos inicialmente, juntamente com a confirmação subsequente por PCR, permitirá melhorar o diagnóstico de CME.

Molecular detection of Ehrlichia canis and Anaplasma platys in dogs from municipality of Belém, State of Pará, Brazil / Detecção molecular de Ehrlichia canis e Anaplasma platys em cães do município de Belém, Estado do Pará, Brasil

The occurrence of diseases transmitted by ticks in dogs is very frequent in Brazil, among these diseases we can highlight the ehrlichiosis and anaplasmosis, which are caused by Ehrlichia canis and Anaplasma platys, respectively. The objective of this study was to survey the occurrence of these pathogens in blood samples from domiciled and stray dogs from the city of Belém, Pará. Two hundred and seventy six dogs were sampled for convenience, and the DNA extracted from the blood of these animals was submitted to nested-PCR for research of E. canis and A. platys. E. canis DNA was detected in 39.4% (109/276) and A. platys DNA in 23.1% (64/276) of the samples, there was a statistically significant difference between the frequency of these agents (P<0.0001), and there was coinfection in 13.4% (37/276) of animals. The frequency of detection of these parasites was higher in stray dogs than in those domiciled for both E. canis (OR=2.84) and A. platys (OR=10.5). Considering the results, it was possible to conclude that E. canis and A. platys are present in the studied population, with stray dogs being more affected by these parasites.(AU)

A ocorrência de doenças transmitidas por carrapatos em cães é muito frequente no Brasil, dentre estas enfermidades podemos destacar a erliquiose e a anaplasmose, que são causadas por Ehrlichia canis e Anaplasma platys, respectivamente. O objetivo deste trabalho foi fazer um levantamento da ocorrência destes patógenos em amostras de sangue de cães domiciliados e errantes do município de Belém, Pará. Foram amostrados 276 cães por conveniência, sendo que o DNA extraído do sangue desses animais foi submetido à nested-PCR para a pesquisa de E. canis e A. platys. O DNA de E. canis foi detectado em 39,4% (109/276), e o DNA de A. platys em 23,1% (64/276) dos cães amostrados. Houve diferença estatisticamente significante entre a frequência desses agentes (p<0,0001), pois foi encontrada coinfecção entre os agentes em 13,4% (37/276) dos animais. A frequência de detecção desses parasitos foi maior em cães errantes do que nos domiciliados tanto para E. canis (OR=2,84) quanto para A. platys (OR=10,5). Diante dos resultados, foi possível concluir que E. canis e A. platys estão presentes na população canina estudada, sendo os cães errantes mais acometidos por esses parasitos.(AU)