Laparoscopic guided local injection in the X-linked muscular dystrophy mouse (mdx) diaphragm. An advance in experimental therapies for Duchenne Muscular Dystrophy

PURPOSE:To investigate the development of a laparoscopy technique for local injection into the X-linked muscular dystrophy (mdx) diaphragm.METHODS:It was used 10 mice Balb/C57 and 5 mdx mice and three differents decubitus type were tested: the right lateral, supine, and supine decubitus with 20 degrees elevation of the forelimb. Abdominal caudal face and the 10 intercostal space were tested as spot to introduce the needle into the diaphragm.RESULTS:Supine position with elevation of 20 degrees forelimb and the 10th intercostal space are the beneficial position to apply a local injection.CONCLUSION:It was proved to be possible to perform the laparoscopy technique in the X-linked muscular dystrophy diaphragm and this requires a specific position and technique during the surgery.(AU)

O efeito do suplemento do ácido ursólico em camundongos mdx São Paulo 2017

A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é uma doença neuromuscular, de origem genética ligada ao cromossomo X, lócus Xp21, causada por uma mutação do gene que codifica a proteína distrofina, responsável pela estabilidade do sarcolema. Na ausência / deficiência de distrofina, as células musculares são susceptíveis a danos pelos ciclos contínuos de degeneração e regeneração limitada. Inflamação, necrose e fibrose são características fisiopatológicas que levam à principal consequência da DMD, a perda de função muscular. Ocorre uma vez em cada 3000 - 3500 nascidos do sexo masculino. O camundongo mdx é um modelo distrófico amplamente utilizado na pesquisa devido à sua uniformidade genética, fácil manuseio e reprodução. Ainda não há cura da DMD, no entanto, os avanços na terapia de drogas usando glicocorticoides diminuem a progressão da doença. Posteriormente, foram estudadas terapias alternativas, dentre elas a terapia com ácido ursólico (AU). O AU é um composto natural da família triterpenóide que atua como um inibidor da atrofia muscular, aumentando a massa muscular e a força muscular. Com o objetivo de usar a AU como uma terapia alternativa, foi analisado seu efeito na suplementação diária em 20 mdx avaliados por 4 semanas. Após o tratamento foram realizadas medidas sérica de creatinofosfoquinase (CPK), teste de Kondziela para medir a força muscular, análise das citocinas fibrogênicas TNF- e TGF- e a histopatologia dos músculos extensor longo dos dedos (ELD), tibial cranial (TA) e diafragma (DIA). Como resultado, o grupo tratado com AU mostrou diminuição dos níveis de CPK e aumento significativo da força muscular, diminuição da expressão das citocinas TNF- e TGF-, maior regeneração muscular, estabilidade das fibras, indicando que o AU oferece uma proteção para as fibras musculares.

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a severe genetic neuromuscular disease, linked to the X chromosome, Xp21 locus, caused by a mutation of the gene that encodes the protein dystrophin, is responsible for the stabilization of sarcolemma. In the absence / dystrophin deficiency, muscle cells are susceptible to damage by the continuous cycles of degeneration and limited regeneration. Inflammation, necrosis and fibrosis are pathophysiological characteristics that lead to the main consequence of DMD, the loss of muscle function. It occurs once in every 3000 - 3500 live male births. The mdx mouse is a dystrophic model widely used in research due to its genetic uniformity, easy handling and reproduction. However, there is no DMD cure, however, advances in drug therapy using glucocorticoids decrease the progression of the disease. Subsequently, alternative therapies were studied, i.e. therapy with ursolic acid (UA). UA is a natural compound of the triterpenoid family that acts as an inhibitor of muscle atrophy, increasing muscle mass and strength. With the objective of using UA as an alternative therapy, the effect of daily supplementation at 20 mdx was evaluated for 4 weeks. After treatment were conducted measurements of serum creatine phosphokinase (CPK), Kondziela test to measure muscle strength, fibrogenic cytokine and histopathological analysis of the long extensor muscle (ELD), cranial tibialis (TA) and the diaphragm (DIA) muscles. As a result, the UA treated group showed decreased CPK levels, and increased muscle strength, decreased expression of TNF-, TGF- cytokines, greater muscle regeneration, fiber stability, indicating protection of muscle fibers to injury.

Padronização de parâmetros eletrocardiográficos de cães da raça Golden Retriever clinicamente sadios / Standardization of electrocardiographic parameters in healthy Golden Retrievers dogs

A distrofia muscular de Duchenne (DMD) em humanos é uma alteração neuromuscular hereditária, de caráter recessivo, ligada ao cromossomo X e causada pela ausência ou disfunção da distrofina. Clinicamente, caracteriza-se por grave alteração na musculatura esquelética, resultando em morte precoce do indivíduo acometido. Em cães da raça Golden Retriever, a mutação que leva à distrofia muscular ocorre espontaneamente e a extensa homologia entre a patogênese da DMD e da distrofia muscular do Golden Retriever permite qualificar o cão como o principal substituto de humanos nos testes clínicos de novas terapias. O miocárdio deficiente em distrofina é mais vulnerável à sobrecarga de pressão e os pacientes com DMD podem desenvolver cardiomiopatia dilatada, hipertensão arterial e o eletrocardiograma pode se apresentar distintamente anormal. No presente estudo, foram avaliados exames eletrocardiográficos de 38 cães da raça Golden Retriever clinicamente sadios (20 animais de até 12 meses de idade e 18 animais entre 12 e 36 meses de idade), com a finalidade de se obter parâmetros para a padronização do eletrocardiograma nessa referida raça, o que futuramente poderá servir de referência na identificação de cães portadores ou afetados pela distrofia muscular. Os valores eletrocardiográficos obtidos encontraram-se dentro dos valores de normalidade e referência para as diferentes raças de cães; e as variáveis peso e idade alteraram significativamente a freqüência cardíaca e a amplitude do complexo QRS.(AU)

The Duchenne's muscular dystrophy (DMD) in humans is a X-linked neuromuscular disease, of recessive character, caused either by the absence or dysfunction of the dystrophin. Clinically, it is characterized by severe alteration in the skeletal musculature, resulting in precocious death. In Golden Retriever dogs, the mutation that takes to the muscular dystrophy happens spontaneously and the extensive homology among the pathogenesis of DMD and of Golden Retriever muscular dystrophy allows to qualify the dog as the main substitute of humans in the clinical tests of new therapies. The deficient myocardium in distrofin is more vulnerable to the pressure overload and the patients with DMD can develop dilated cardiomyopathy, arterial hypertension and the electrocardiogram can come distinctly abnormal. In the present study, 38 healthy Golden Retriever dogs were evaluated by electrocardiographic exam with the purpose to obtain parameters for the standardization of the electrocardiogram in the referred breed, what hereafter can serve as reference in the identification of bearer or affected dogs. Electrocardiographic values obtained were within normal values and reference for the various breeds of dogs, and the variables weight and age significantly altered heart rate and amplitude of the QRS complex.(AU)

Validação de modelo biomecânico de marcha para uso em testes pré-clínicos com células tronco / Validation of biomechanical model of gait for use in preclinical test with stem cell

A distrofia muscular de Duchenne constitui um distúrbio genético de caráter recessivo e caracteriza-se pela deficiência ou ausência da proteína distrofina na superfície da membrana da célula muscular, podendo acometer a musculatura cardíaca e o sistema nervoso. O cão da raça Golden Retriever afetado pela distrofia muscular (GRDM), é considerado um excelente modelo para o estudo, devido às muitas similaridades entre cães afetados e meninos com distrofia muscular de Duchenne. Sabe-se que os animais do modelo GRMD apresentam fraqueza muscular progressiva, o que gera adaptações importantes na sua marcha. O conhecimento destas adaptações na ausência da musculatura esquelética pode esclarecer a evolução da doença neste modelo, bem como contribuir com uma nova ferramenta de avaliação quantitativa de futuros tratamentos da DMD. Portando este estudo abordou as variáveis da marcha do cão GRDM com o objetivo de estabelecer uma ferramenta de avaliação quantitativa da marcha neste modelo experimental que possa contribuir para futuras pesquisas terapêuticas além de colaborar com o conhecimento e aplicabilidade da biomecânica na marcha animal. Foram utilizados seis animais distróficos selecionados da colônia de cães GRMD Brasil. Foram feitas mensuração dos segmentos corporais, analise cinemáticas através da utilização de imagens e análise dinâmica resultando da utilização de uma plataforma de força. Nos resultados da biometria obtivemos a média dos segmentos corporais dos seis animais estudados: braço: 16,69cm; antebraço 17,12cm; carpo 5,16cm; coxa 18,91cm; perna 19,03cm; tarso 10,98cm; tórax 67.54cm; altura 52,14cm; e peso 20,44kg. Nos resultados referentes à análise cinemática obtivemos o grau de flexão e extensão das seguintes articulações: escapuloumeral (flexão: 121.44° e extensão 152.76°), umeroradioulnar (flexão 121.68° e extensão 153.24°), carpo (flexão 122.2° e extensão 152.84°), coxofemoral (flexão 122.08° e extensão 153.96°), femortibiopatelar (flexão 121.2° e extensão 151.64°), tarso (flexão 121.48° e extensão 153.44°). Na análise dinâmica obtida através da plataforma de força obtivemos a média dos valores dos picos de força de reação ao solo de cada um dos animais: Biz 141N, Gaspar 128N, Lola 180N, 183N, 150N, 135N. Com esses resultados podemos concluir que a articulação femortibiopatelar foi a que teve um grau de amplitude maior em relação às outras articulações; os picos de flexão e extensão articular variam de acordo com cada articulação; os picos de flexão e extensão variam mais no membro pélvico do que no membro torácico. Os resultados obtidos podem ser úteis em avaliações pré-clinicas utilizando o modelo canino GRMD.

Duchenne muscular dystrophy is a genetic disorder with a recessive trait and is characterized by a deficiency or absence of dystrophin protein on the membrane surface of muscle cells, affecting the heart muscles and nervous system. The dog Golden Retriever affected by muscular dystrophy (GRDM) is considered an excellent model for the study because of the many similarities between affected dogs and boys with Duchenne muscular dystrophy. It is known that the animal model GRMD have progressive muscle weakness, which leads to major changes in their gait. Knowlege of these adaptations in the absence of skeletal muscles can account for disease progression in this model as well as helping with a new tool for quantitative evaluation of future treatments for DMD. Porting this study addresses the variables of walking the dog GRDM in order to establish a tool for quantitative assessment of gait in this experimental model that may contribute to future therapeutic research and collaborate with the knowledge and applicability of animal gait biomechanics. We used six dystrophy animals selected from the colony of dogs GRMD Brazil. Analysis was carried out of the body segments of biometrics, using kinematic and dynamic analysis of resulting from image and use of a force platform. The results obtained from the average of the biometrics body segments of the six animals studied: arm: 16,69cm; forearm17,12cm; carpus 5,16cm; thigh18,91cm; leg 19,03cm; tarsus 10,98cm; chest 67.54cm; height 52,14cm; e weight 20,44kg. In the kinematic analysis results obtained regarding the degree of flexion and extension of the following joints: escapuloumeral (flexion: 121.44° and extension 152.76°), umeroradioulnar (flexion 121.68° and extension 153.24°), carpo (flexion 122.2° and extension 152.84°), coxofemoral (flexion 122.08° and extension 153.96°), femortibiopatelar (flexion 121.2° and extension 151.64°), tarsus (flexion 121.48° and extension 153.44°). In dynamic analysis obtained from the force plataform the average values of peak groun reaction force of each animal were: Biz 141N, Gaspar 128N, Lola 180N, Luck 183N, Monstra 150N, Winner135N. Whith these results we conclude that the join femortibiopatelar was the one whith a degree of magnitude higher than in the other joints; peak flexion and extension vary according to each joint; peak flexion and extension vary more in the hind limb when comapred to the fore limb. The results obtained can be useful in pre-clinical evaluation using a canine model.

Validação de modelo biomecânico de marcha para uso em testes pré-clínicos com células tronco / Validation of biomechanical model of gait for use in preclinical test with stem cell

A distrofia muscular de Duchenne constitui um distúrbio genético de caráter recessivo e caracteriza-se pela deficiência ou ausência da proteína distrofina na superfície da membrana da célula muscular, podendo acometer a musculatura cardíaca e o sistema nervoso. O cão da raça Golden Retriever afetado pela distrofia muscular (GRDM), é considerado um excelente modelo para o estudo, devido às muitas similaridades entre cães afetados e meninos com distrofia muscular de Duchenne. Sabe-se que os animais do modelo GRMD apresentam fraqueza muscular progressiva, o que gera adaptações importantes na sua marcha. O conhecimento destas adaptações na ausência da musculatura esquelética pode esclarecer a evolução da doença neste modelo, bem como contribuir com uma nova ferramenta de avaliação quantitativa de futuros tratamentos da DMD. Portando este estudo abordou as variáveis da marcha do cão GRDM com o objetivo de estabelecer uma ferramenta de avaliação quantitativa da marcha neste modelo experimental que possa contribuir para futuras pesquisas terapêuticas além de colaborar com o conhecimento e aplicabilidade da biomecânica na marcha animal. Foram utilizados seis animais distróficos selecionados da colônia de cães GRMD Brasil. Foram feitas mensuração dos segmentos corporais, analise cinemáticas através da utilização de imagens e análise dinâmica resultando da utilização de uma plataforma de força. Nos resultados da biometria obtivemos a média dos segmentos corporais dos seis animais estudados: braço: 16,69cm; antebraço 17,12cm; carpo 5,16cm; coxa 18,91cm; perna 19,03cm; tarso 10,98cm; tórax 67.54cm; altura 52,14cm; e peso 20,44kg. Nos resultados referentes à análise cinemática obtivemos o grau de flexão e extensão das seguintes articulações: escapuloumeral (flexão: 121.44° e extensão 152.76°), umeroradioulnar (flexão 121.68° e extensão 153.24°), carpo (flexão 122.2° e extensão 152.84°), coxofemoral (flexão 122.08° e extensão 153.96°), femortibiopatelar (flexão 121.2° e extensão 151.64°), tarso (flexão 121.48° e extensão 153.44°). Na análise dinâmica obtida através da plataforma de força obtivemos a média dos valores dos picos de força de reação ao solo de cada um dos animais: Biz 141N, Gaspar 128N, Lola 180N, 183N, 150N, 135N. Com esses resultados podemos concluir que a articulação femortibiopatelar foi a que teve um grau de amplitude maior em relação às outras articulações; os picos de flexão e extensão articular variam de acordo com cada articulação; os picos de flexão e extensão variam mais no membro pélvico do que no membro torácico. Os resultados obtidos podem ser úteis em avaliações pré-clinicas utilizando o modelo canino GRMD. (AU)

Duchenne muscular dystrophy is a genetic disorder with a recessive trait and is characterized by a deficiency or absence of dystrophin protein on the membrane surface of muscle cells, affecting the heart muscles and nervous system. The dog Golden Retriever affected by muscular dystrophy (GRDM) is considered an excellent model for the study because of the many similarities between affected dogs and boys with Duchenne muscular dystrophy. It is known that the animal model GRMD have progressive muscle weakness, which leads to major changes in their gait. Knowlege of these adaptations in the absence of skeletal muscles can account for disease progression in this model as well as helping with a new tool for quantitative evaluation of future treatments for DMD. Porting this study addresses the variables of walking the dog GRDM in order to establish a tool for quantitative assessment of gait in this experimental model that may contribute to future therapeutic research and collaborate with the knowledge and applicability of animal gait biomechanics. We used six dystrophy animals selected from the colony of dogs GRMD Brazil. Analysis was carried out of the body segments of biometrics, using kinematic and dynamic analysis of resulting from image and use of a force platform. The results obtained from the average of the biometrics body segments of the six animals studied: arm: 16,69cm; forearm17,12cm; carpus 5,16cm; thigh18,91cm; leg 19,03cm; tarsus 10,98cm; chest 67.54cm; height 52,14cm; e weight 20,44kg. In the kinematic analysis results obtained regarding the degree of flexion and extension of the following joints: escapuloumeral (flexion: 121.44° and extension 152.76°), umeroradioulnar (flexion 121.68° and extension 153.24°), carpo (flexion 122.2° and extension 152.84°), coxofemoral (flexion 122.08° and extension 153.96°), femortibiopatelar (flexion 121.2° and extension 151.64°), tarsus (flexion 121.48° and extension 153.44°). In dynamic analysis obtained from the force plataform the average values of peak groun reaction force of each animal were: Biz 141N, Gaspar 128N, Lola 180N, Luck 183N, Monstra 150N, Winner135N. Whith these results we conclude that the join femortibiopatelar was the one whith a degree of magnitude higher than in the other joints; peak flexion and extension vary according to each joint; peak flexion and extension vary more in the hind limb when comapred to the fore limb. The results obtained can be useful in pre-clinical evaluation using a canine model. (AU)

Distrofia muscular nutricional em ovinos na Paraíba / Nutritional muscular dystrophy in sheep in Paraíba

Descreve-se um surto de distrofia muscular nutricional em ovinos no semi-árido Nordestino. Foram afetados animais de 3-4 meses de idade, da raça Dorper, pesando 30-40 kg. Os animais eram alimentados, à vontade, com leite, ração balanceada, capim Tifton e sal mineral. Dos 70 animais Dorper, 6 adoeceram e morreram em um período de 48 horas. Apresentaram temperatura, entre 40 e 41ºC, incoordenação com posterior paralisia e decúbito, depressão, prostração e diminuição dos reflexos pupilar e de ameaça, flacidez da língua e mandíbula, salivação, edema submandibular, dispnéia e aumento da freqüência cardíaca. A morte ocorreu após curso clínico de 6- 12 horas. Na necropsia de 3 animais, os músculos esqueléticos estavam de coloração pálida, o fígado estava aumentado de volume e de coloração amarelada, os gânglios parotídeos, submandibulares, retrofaríngeos, prescapulares e mediastínicos estavam aumentados de volume e avermelhados e os pulmões apresentavam áreas vermelhas. Na histologia havia necrose segmentar de todos os músculos examinados e congestão dos gânglios linfáticos e pulmão. Posteriormente mais três animais adoeceram, sendo tratado com oxitetraciclina e complexo vitamínico A,D e E. Desses 3 animais, 2 morreram e um sobreviveu. Na mesma fazenda havia e não adoeceram 20 ovinos da raça Santa Inês, da mesma idade que os animais afetados, que recebiam a mesma alimentação exceto o leite, e 900 ovinos de outras idades. A superalimentação em animais com rápido crescimento e o estresse causado pela restrição de água durantes 2 dias, para aumentar o consumo de leite, parecem ter sido fatores predisponentes para a ocorrência da doença. É possível, também, que algum dos minerais suplementados tenha antagonizado o Se presente na alimentação.(AU)

An outbreak of nutritional muscular dystrophy is reported in the semiarid region of northeastern Brazil affecting 3-4 months old Dorper sheep. The animals, weighing 30-40 kg, were fed ad libitum with milk, concentrated ration, Tifton hay, and a mineral mixture. Six out of 70 lambs were affected and died in the first 48 hours after the onset of the outbreak. Clinical signs were fever of 40-41ºC, incoordination followed by paralysis and recumbence, depression, prostration with decreased pupillary and corneal reflexes, decreased tonus of the tongue and maxilla, salivation, submaxillar edema, and increased cardiac and respiratory rates. Death occurred after a clinical manifestation period of 6-12 hours. At necropsy of three animals, skeletal muscles were pale, the liver was yellowish and enlarged, the parotid, submaxillary, retropharyngeal, prescapular and mediastinal lymph nodes were enlarged with red surface, and red areas were observed on the lung surface. On histology, segmental muscular necrosis was observed in all skeletal muscles examined. The liver had centrilobular fatty degeneration, and congestion was observed in the lung and lymph nodes. From 48-96 hours after the begin of the outbreak, another 3 animals were affected. They were treated with Vitamin A, E and D complex; two of them died and one survived. On the same farm, a flock of 20 Santa Inês sheep of the same age as the affected animals, fed with the same food, but no milk, and another 900 sheep of different ages were not affected. The over nutrition of sheep with fast growing rates, and the stress caused by two days of water restriction to improve milk consumption had been predisposing factors for the occurrence of the disease. It is also possible that some of the minerals supplemented interfered with selenium availability.(AU)