Resumo
Abstract The aim of this study was to evaluate the oxidative stress in ovaries and corpus luteum (CL) of Bos taurus indicus females and the oxidant effect of CL in ovarian tissues in regions near, intermediate, or distant from it. Ovaries (n=12) of Nelore heifers (n=6) were collected from a slaughterhouse and fragmented. Experiment 1, each ovary was obtained from three fragments, resulting in 18 fragments of ovaries with CL (OV+CL) and another 18 fragments of ovaries without CL (OV-CL). Three fragments were generated from CL, totaling 18 CL fragments. In experiment 2, the ovarian fragments were removed from specific regions near, intermediate, or distant from the CL. All the fragments were placed in Eppendorf-type microtubes (1 mL), kept in a thermal container at 4 ºC, and then stored in a -80 ºC freezer for analysis of oxidative stress (TBARS and NBT) and antioxidant potential (FRAP and ABTS). In the antioxidant activity analysis, luteal tissues showed more antioxidant activity than ovarian tissue (FRAP = P < 0.0001; ABTS = P < 0.02). In the oxidative stress analysis, CL had lower levels of reactive oxygen species (ROS; TBARS = P < 0.03; NBT = P < 0.0001) than ovarian tissues. There was no difference in antioxidant activity and oxidative stress between the fragments obtained from different regions (OV+CL versus OV-CL; P > 0.05). The presence of CL in the ovaries of Bos taurus indicus females did not influence the oxidative stress or antioxidant potential of the gonad. Thus, the removal of ovarian fragments with or without the presence of CL indicates that biotechnologies such as in vitro follicle cultivation is possible.
Resumo
The aim of this study was to evaluate the oxidative stress in ovaries and corpus luteum (CL) of Bos taurus indicus females and the oxidant effect of CL in ovarian tissues in regions near, intermediate, or distant from it. Ovaries (n=12) of Nelore heifers (n=6) were collected from a slaughterhouse and fragmented. Experiment 1, each ovary was obtained from three fragments, resulting in 18 fragments of ovaries with CL (OV+CL) and another 18 fragments of ovaries without CL (OV-CL). Three fragments were generated from CL, totaling 18 CL fragments. In experiment 2, the ovarian fragments were removed from specific regions near, intermediate, or distant from the CL. All the fragments were placed in Eppendorf-type microtubes (1 mL), kept in a thermal container at 4 ºC, and then stored in a -80 ºC freezer for analysis of oxidative stress (TBARS and NBT) and antioxidant potential (FRAP and ABTS). In the antioxidant activity analysis, luteal tissues showed more antioxidant activity than ovarian tissue (FRAP = P < 0.0001; ABTS = P < 0.02). In the oxidative stress analysis, CL had lower levels of reactive oxygen species (ROS; TBARS = P < 0.03; NBT = P < 0.0001) than ovarian tissues. There was no difference in antioxidant activity and oxidative stress between the fragments obtained from different regions (OV+CL versus OV-CL; P > 0.05). The presence of CL in the ovaries of Bos taurus indicus females did not influence the oxidative stress or antioxidant potential of the gonad. Thus, the removal of ovarian fragments with or without the presence of CL indicates that biotechnologies such as in vitro follicle cultivation is possible.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Bovinos/fisiologia , Corpo Lúteo/química , Tecido Parenquimatoso/química , OxidantesResumo
Mycotoxins often contaminate cattle food, which can cause liver damage, immunosuppression, and reduced milk production. Although previous studies have shown the benefits of adsorbents in farm animals, knowledge regarding their mechanism of action is limited, especially when intoxication occurs due to naturally contaminated diets. The present study aimed to assess whether the daily oral administration of mycotoxin adsorbent bentonite clay based on aluminosilicate for 56 days, would attenuate these changes in 18 dairy cows, which were multiparous in the middle of the lactation stage, and were consuming a diet containing fumonisin B1 and B2, zearalenone, and desoxynivalenol. The animals were divided into treatment (TG, n = 9) and control (CG, n = 9) groups, and subjected to assessment of liver functions, hematological assessments, assessment of oxidative leucocyte metabolism by the tetrazolium nitroazul (NBT) technique, and physical chemical analysis of milk, every week for two months, totaling eight analyses. It was observed that the use of the adsorbent caused a reduction in the milk excretion of aflatoxin M1 (AFM1), an increase in levels of serum protein (p = 0.03) and albumin (p = 0.0001), an increase in leukocyte oxidative metabolism from day 24 of treatment(p = 0.05), and increased milk production from the day 16 of treatment (p = 0.08). There was no improvement in the physicochemical indices of the milk. It was concluded that the use of an aluminosilicate-based adsorbent was able to attenuate the effects of mycotoxins on the function of leukocytes and increase milk production.(AU)
Micotoxinas podem contaminar alimentos de bovinos, levando a distúrbios hepáticos, imunodepressão e redução da produção. Embora existam estudos mostrando os benefícios de adsorventes em animais de produção, há limitado conhecimento sobre sua ação quando a intoxicação de bovinos ocorre por dietas naturalmente contaminadas. O presente estudo objetivou avaliar se a administração oral diária do adsorvente de micotoxinas, argila bentonita a base de aluminossilicato durante 56 dias atenuaria alterações promovidas pelas micotoxinas em 18 vacas leiteiras, multíparas no meio do estágio da lactação, consumindo dieta contendo fumonisina B1 e B2, zearalenona (ZEA) e desoxinivalenol (DON). Os animais foram divididos, grupos tratamento (GT, n=9) e controle (GC, n=9), e submetidos às avaliações de enzimas e função hepática, hematológicas, metabolismo oxidativo de leucócitos pela técnica do nitroazul de tetrazolium (NBT) e análise físico-química do leite, a cada semana, durante dois meses, totalizando oito análises. Observou-se que o uso do adsorvente promoveu redução da excreção láctea de aflatoxina M1 (AFM1), aumento de proteína (p = 0,03) e albumina séricas (p= 0,0001), e aumento do metabolismo oxidativo leucocitário a partir do dia 24 (p = 0,05). Houve também elevação da produção leiteira a partir do 16º dia de tratamento (p= 0,008). Não foi observado melhora nos índices físico-químicos do leite dos animais e houve pouca influência na atividade das enzimas hepáticas. Conclui-se que o uso do adsorvente a base de aluminossilicato foi capaz de atenuar os efeitos das micotoxinas na função de leucócitos e de elevar a produção leiteira.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Bovinos , Bentonita , Aflatoxina M1 , Fumonisinas , Leite , MicotoxinasResumo
This study aimed to evaluate the neutrophil oxidative metabolism and phagocytosis of Zymonsan particles of primiparous and pluriparous Lacaune ewes during the first 30 days after lambing. A total of 20 ewes were evaluated, 10 primiparous (GPR) and 10 pluriparous (GPL). Evaluation of basal oxidative metabolism was performed using the nitroblue tetrazolium (NBT) technique, stimulating neutrophil phagocytosis with Zymosan particles. Blood samples were collected at parturition day (M1) and 1, 3, 7, 15 and 30 days after parturition, corresponding to M2, M3, M4, M5 and M6, respectively. In relation to the groups, GPR presented lower oxidative basal metabolism neutrophils in M1 compared to M4, in M3 with M1, M2, M4 and M5. In M4 and M5 differences were found at all times and in M6 with M4 and M5. Higher percentage of neutrophils than phagocytes were found in M4, M5 and M6 than in M1 and M2 in GPL animals. At all times GPR presented a lower percentage of phagocytosis than GPL. Thus it is concluded that the immune response in pluriparous sheep was more efficient than in primiparous sheep.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Fagocitose , Ovinos/sangue , Metabolismo , Neutrófilos/fisiologia , Período Pós-Parto/sangueResumo
Purpose: This study assessed the regeneration potential of mesenchymal stem cells (MSC) from adipose tissue associated with platelet-rich plasma (PRP) in bone regeneration. Methods: Thirty Wistar rats (Rattus norvegicus albinos) were divided into five groups (according to the grafting material and time to euthanasia): (1) autograft - 14 days (control), (2) autograft - 28 days (control), (3) MSC + PRP - 14 days, (4) MSC + PRP + papaverine - 14 days and (5) MSC + PRP + papaverine - 28 days. After euthanasia, the graft was removed and histological slides were prepared. They were assessed by a blinded pathologist using a previously published histological scale as parameter. Results: There was some degree of neoformed bone trabeculae (NBT) in 93.3% of the samples, as well as osteoblastic activity (OA). The autograft groups (14 and 28 days) had higher levels in the formation of bone trabeculae. Nonparametric data were analyzed using the Wilcoxon-Mann-Whitney test and proved not to be statistically significant at p 0.05. Conclusions: Experimental parietal bone reconstruction, combining MSC, PRP and papaverine presented regeneration in all groups with no significant difference among them.(AU)
Assuntos
Animais , Ratos , Osso Parietal/anormalidades , Células-Tronco Mesenquimais , Regeneração Óssea , Plasma Rico em PlaquetasResumo
O uso de probióticos a base de leveduras melhora o ganho de peso e o sistema imunológico de bovinos frente a grandes desafios imunológicos, no entanto permanece a dúvida se seu uso também apresentaria efeito em desafios mais tênues. Desta maneira, o presente trabalho verificou se o uso de probiótico a base de Enterococcus faecium e Saccaromyces cerevisiae via oral interfere na imunidade inata e no peso de bezerros sadios, em fase de crescimento, alimentados principalmente com silagem de milho. Para tanto, 12 bezerros da raça Jersey (120 kg ±50 kg e 4-7 meses de idade), foram alocados nos grupos controle (n=6) ou tratamento (n=6), de acordo com a oferta de probiótico (2g/dia, via oral) durante 45 dias. Nos dias 0, 15, 30 e 45, os animais foram submetidos a pesagens, exames clínicos, e colheita de sangue para realização de hemograma e mensuração do metabolismo oxidativo neutrofílico. Observou-se que, o probiótico promoveu pequeno e pontual incremento na função neutrofilica sanguínea (P=0,10, D15), incremento nos valores de hematócrito e hemoglobina (P=0,03 e 0,05, D45), além de maior ganho de peso nas fases iniciais da administração do suplemento (P=0,05), permitindo concluir que o suplemento é benéfico para animais em fase de adaptação de trocas de dieta e de manejo, mesmo quando estes desafios são tênues.(AU)
The use of yeast probiotics improves body weight gain and the immune system of cattle submitted to husbandry challenges, however the question remains whether the probiotics could have an effect on more tenuous challenges. In this way, the present study verified if the use of probiotic (Enterococcus faecium and Saccharomyces cerevisiae) provided orally, interferes with the innate immunity and body weight of calves fed mainly with corn silage. Twelve Jersey calves (120 kg ± 50 kg and 4-7 months of age) were allocated to the control (n = 6) or treatment (n = 6) group according to the probiotic supply (2 g / day, orally) for 45 days. On days 0, 15, 30 and 45, the animals were weighted, and submitted to clinical examinations, and blood collection for hemogram and measurement of neutrophil oxidative metabolism. It was observed that the probiotic promoted a slight and punctual increase in blood neutrophilic function (P = 0.10, D15), increased hematocrit and hemoglobin values P = 0.03 and 0.05, D45) and increased the body weight gain in the initial phases of supplementation (P = 0.08), allowing to conclude that the probiotic is beneficial for animals in the adaptation phase of diet changes and management, even when these challenges are mild.(AU)
El uso de probióticos de levadura mejora el aumento de peso corporal y el sistema inmunológico del ganado sometido a los desafíos de la cría, sin embargo, la pregunta sigue siendo si los probióticos podrían tener un efecto en desafíos más tenues. De esta manera, el presente estudio verificó si el uso de probióticos (Enterococcus faecium y Saccharomyces cerevisiae) proporcionado por vía oral interfiere con la inmunidad innata y el peso corporal de los terneros alimentados principalmente con ensilaje de maíz. Doce terneros de Jersey (120 kg ± 50 kg y 4-7 meses de edad) se asignaron al grupo control (n = 6) o tratamiento (n = 6) según el suministro de probióticos (2 g / día, por vía oral) para 45 dias. En los días 0, 15, 30 y 45, los animales se pesaron y se sometieron a exámenes clínicos y se recogieron muestras de sangre para el hemograma y la medición del metabolismo oxidativo de los neutrófilos. Se observó que el probiótico promovió un aumento leve y puntual de la función neutrofílica en sangre (P = 0,10, D15), aumento de los valores de hematocrito y hemoglobina (P = 0,03 y 0,05, D45) y aumento de la ganancia de peso corporal en las fases iniciales de la suplementación. (P = 0.08), lo que permite concluir que el probiótico es beneficioso para los animales en la fase de adaptación de los cambios y el manejo de la dieta, incluso cuando estos desafíos son leves.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Enterococcus faecium , Saccharomyces cerevisiae , Aumento de Peso , Probióticos/administração & dosagem , Neutrófilos , Sistema Imunitário , Espécies Reativas de Oxigênio , Nitroazul de Tetrazólio , SilagemResumo
O uso de probióticos a base de leveduras melhora o ganho de peso e o sistema imunológico de bovinos frente a grandes desafios imunológicos, no entanto permanece a dúvida se seu uso também apresentaria efeito em desafios mais tênues. Desta maneira, o presente trabalho verificou se o uso de probiótico a base de Enterococcus faecium e Saccaromyces cerevisiae via oral interfere na imunidade inata e no peso de bezerros sadios, em fase de crescimento, alimentados principalmente com silagem de milho. Para tanto, 12 bezerros da raça Jersey (120 kg ±50 kg e 4-7 meses de idade), foram alocados nos grupos controle (n=6) ou tratamento (n=6), de acordo com a oferta de probiótico (2g/dia, via oral) durante 45 dias. Nos dias 0, 15, 30 e 45, os animais foram submetidos a pesagens, exames clínicos, e colheita de sangue para realização de hemograma e mensuração do metabolismo oxidativo neutrofílico. Observou-se que, o probiótico promoveu pequeno e pontual incremento na função neutrofilica sanguínea (P=0,10, D15), incremento nos valores de hematócrito e hemoglobina (P=0,03 e 0,05, D45), além de maior ganho de peso nas fases iniciais da administração do suplemento (P=0,05), permitindo concluir que o suplemento é benéfico para animais em fase de adaptação de trocas de dieta e de manejo, mesmo quando estes desafios são tênues.
The use of yeast probiotics improves body weight gain and the immune system of cattle submitted to husbandry challenges, however the question remains whether the probiotics could have an effect on more tenuous challenges. In this way, the present study verified if the use of probiotic (Enterococcus faecium and Saccharomyces cerevisiae) provided orally, interferes with the innate immunity and body weight of calves fed mainly with corn silage. Twelve Jersey calves (120 kg ± 50 kg and 4-7 months of age) were allocated to the control (n = 6) or treatment (n = 6) group according to the probiotic supply (2 g / day, orally) for 45 days. On days 0, 15, 30 and 45, the animals were weighted, and submitted to clinical examinations, and blood collection for hemogram and measurement of neutrophil oxidative metabolism. It was observed that the probiotic promoted a slight and punctual increase in blood neutrophilic function (P = 0.10, D15), increased hematocrit and hemoglobin values P = 0.03 and 0.05, D45) and increased the body weight gain in the initial phases of supplementation (P = 0.08), allowing to conclude that the probiotic is beneficial for animals in the adaptation phase of diet changes and management, even when these challenges are mild.
El uso de probióticos de levadura mejora el aumento de peso corporal y el sistema inmunológico del ganado sometido a los desafíos de la cría, sin embargo, la pregunta sigue siendo si los probióticos podrían tener un efecto en desafíos más tenues. De esta manera, el presente estudio verificó si el uso de probióticos (Enterococcus faecium y Saccharomyces cerevisiae) proporcionado por vía oral interfiere con la inmunidad innata y el peso corporal de los terneros alimentados principalmente con ensilaje de maíz. Doce terneros de Jersey (120 kg ± 50 kg y 4-7 meses de edad) se asignaron al grupo control (n = 6) o tratamiento (n = 6) según el suministro de probióticos (2 g / día, por vía oral) para 45 dias. En los días 0, 15, 30 y 45, los animales se pesaron y se sometieron a exámenes clínicos y se recogieron muestras de sangre para el hemograma y la medición del metabolismo oxidativo de los neutrófilos. Se observó que el probiótico promovió un aumento leve y puntual de la función neutrofílica en sangre (P = 0,10, D15), aumento de los valores de hematocrito y hemoglobina (P = 0,03 y 0,05, D45) y aumento de la ganancia de peso corporal en las fases iniciales de la suplementación. (P = 0.08), lo que permite concluir que el probiótico es beneficioso para los animales en la fase de adaptación de los cambios y el manejo de la dieta, incluso cuando estos desafíos son leves.
Assuntos
Animais , Bovinos , Aumento de Peso , Enterococcus faecium , Neutrófilos , Probióticos/administração & dosagem , Saccharomyces cerevisiae , Sistema Imunitário , Espécies Reativas de Oxigênio , Nitroazul de Tetrazólio , SilagemResumo
O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito metafilático de minerais traços e vitaminas A e E injetáveis, em parâmetros do estresse oxidativo e na função de neutrófilos em fêmeas da raça Holandesa no período de transição. Sessenta animais foram divididos em dois grupos: animais que receberam minerais traços e vitaminas A e E injetáveis (GMTV) (n= 30) e grupo controle (GC) (n= 30). Não houve diferença significativa entre os grupos nos parâmetros avaliados, porém observou-se diferença significativa entre tratamento e dia para os valores da SOD, com maior atividade dessa enzima em fêmeas GMTV, nas semanas próximas ao parto. Observou-se diferença de dia e para interação tratamento e dia para o TBARS, em que fêmeas GMTV mostraram menores valores de TBARS em todos os momentos, exceto sete dias após o parto. Houve efeito significativo de dia para leucócitos, interação tratamento e dia para neutrófilos e interação tratamento e dia para fagocitose de neutrófilos, em que as fêmeas GMTV apresentaram valores menores de leucócitos e neutrófilos próximo ao parto, além de maior fagocitose de neutrófilos. Pode-se observar que houve melhora no sistema oxidativo e imune de fêmeas GMTV, resposta que provavelmente está relacionada com a administração dos minerais traços e vitaminas A e E.(AU)
This study evaluates the metaphylactic of the subcutaneous administration of a trace minerals and vitamins A and E, on the oxidative stress and neutrophil function in Holsteins cows under the transition period. Sixty females were divided in two groups: group with trace minerals and vitamins (GMTV) (n= 30) and group control (GC) (n= 30). There was no significant difference between those groups; however, we find significant difference between treatment and day for Superoxide dismutase (SOD) values with higher activity of this enzyme in females GMTV on the weeks next to the parturition. Still, there was difference on day and, for interactions between treatment and day for TBARS, were females GMTV showed lower values of TBARS in all moments, except on day seven after the parturition. For leucocytes, there is a significant effect by day, interaction on treatment and day on neutrophils, and interaction treatment and day for neutrophil phagocytosis, were females GMTV showed lower values of leucocytes and neutrophils next to the parturition, and an increase of neutrophils phagocytosis. In summary, cows from the GMTV group had an improvement on the immune and oxidative systems, probably correlated with the administration of this supplement.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Bovinos , Oligoelementos/análise , Vitamina A/administração & dosagem , Vitamina E/administração & dosagem , Estresse Oxidativo , Neutrófilos , Injeções Subcutâneas/veterináriaResumo
O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito metafilático de minerais traços e vitaminas A e E injetáveis, em parâmetros do estresse oxidativo e na função de neutrófilos em fêmeas da raça Holandesa no período de transição. Sessenta animais foram divididos em dois grupos: animais que receberam minerais traços e vitaminas A e E injetáveis (GMTV) (n= 30) e grupo controle (GC) (n= 30). Não houve diferença significativa entre os grupos nos parâmetros avaliados, porém observou-se diferença significativa entre tratamento e dia para os valores da SOD, com maior atividade dessa enzima em fêmeas GMTV, nas semanas próximas ao parto. Observou-se diferença de dia e para interação tratamento e dia para o TBARS, em que fêmeas GMTV mostraram menores valores de TBARS em todos os momentos, exceto sete dias após o parto. Houve efeito significativo de dia para leucócitos, interação tratamento e dia para neutrófilos e interação tratamento e dia para fagocitose de neutrófilos, em que as fêmeas GMTV apresentaram valores menores de leucócitos e neutrófilos próximo ao parto, além de maior fagocitose de neutrófilos. Pode-se observar que houve melhora no sistema oxidativo e imune de fêmeas GMTV, resposta que provavelmente está relacionada com a administração dos minerais traços e vitaminas A e E.(AU)
This study evaluates the metaphylactic of the subcutaneous administration of a trace minerals and vitamins A and E, on the oxidative stress and neutrophil function in Holsteins cows under the transition period. Sixty females were divided in two groups: group with trace minerals and vitamins (GMTV) (n= 30) and group control (GC) (n= 30). There was no significant difference between those groups; however, we find significant difference between treatment and day for Superoxide dismutase (SOD) values with higher activity of this enzyme in females GMTV on the weeks next to the parturition. Still, there was difference on day and, for interactions between treatment and day for TBARS, were females GMTV showed lower values of TBARS in all moments, except on day seven after the parturition. For leucocytes, there is a significant effect by day, interaction on treatment and day on neutrophils, and interaction treatment and day for neutrophil phagocytosis, were females GMTV showed lower values of leucocytes and neutrophils next to the parturition, and an increase of neutrophils phagocytosis. In summary, cows from the GMTV group had an improvement on the immune and oxidative systems, probably correlated with the administration of this supplement.(AU)
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Animais , Feminino , Bovinos , Oligoelementos/análise , Vitamina A/administração & dosagem , Vitamina E/administração & dosagem , Estresse Oxidativo , Neutrófilos , Injeções Subcutâneas/veterináriaResumo
Background: Semen cryopreservation is one of the most common biotechnologies in the reproduction of animals ofagricultural interest, especially bulls. However, cryopreservation can be harmful to sperm cells, with susceptibility tooxidative stress being one of the causes. The addition of antioxidants such as quercetin may inhibit and/or reduce suchdamage, reducing fertility. Quercetin can increasing sperm motility and interaction capacity between spermatozoa-oocyte,to increase cellular metabolism and reduced DNA fragmentation and oxidation following thawing. Therefore, the objective of this study was to evaluate the protective effect of quercetin on the metabolism of bovine semen following thawing.Materials, Methods & Results: Three Brahman bulls in reproduction age and previously considered fit for reproductionwere used. The semen samples were collected via the electroejaculation method, and the samples were homogenized toform pooled semen from three ejaculates, which was diluted in Tris-yolk egg-glicerol diluent medium. Quercetin was addedto diluent, to final concentrations of 0, 5, 10, 15 and 20 μg.mL-1 in each group. The samples were kept frozen in strawsof 500 μL, with concentration of 40,000,000 spermatozoid / mL for 15 days and were thawed in water at 36°C for 30 s.All the tests was performed in five replicates. The cell metabolism status was evaluated by quantification of superoxideradical production with a nitroblue tetrazolium test (NBT) and scanning spectrophotometry. By spermatic evaluation, thefollowing parameters were evaluated via the computerized system of sperm analysis (CASA): total motility (TM, %),progressive motility (PM, %), velocity curved line (VCL, mm/s), velocity straight line (VSL, mm/s), velocity averagepath (VAP, mm/s), distance curved line (DCL, mm), distance straight line (DSL, mm), distance average path (DAP, mm),amplitude of lateral head displacement (ALH, mm), beat cross frequency (BCF, Hz), wobble...
Assuntos
Masculino , Animais , Bovinos , Análise do Sêmen/veterinária , Criopreservação/métodos , Criopreservação/veterinária , Preservação do Sêmen/métodos , Preservação do Sêmen/veterinária , Quercetina/administração & dosagem , Estresse Oxidativo , Motilidade dos EspermatozoidesResumo
Background: Semen cryopreservation is one of the most common biotechnologies in the reproduction of animals ofagricultural interest, especially bulls. However, cryopreservation can be harmful to sperm cells, with susceptibility tooxidative stress being one of the causes. The addition of antioxidants such as quercetin may inhibit and/or reduce suchdamage, reducing fertility. Quercetin can increasing sperm motility and interaction capacity between spermatozoa-oocyte,to increase cellular metabolism and reduced DNA fragmentation and oxidation following thawing. Therefore, the objective of this study was to evaluate the protective effect of quercetin on the metabolism of bovine semen following thawing.Materials, Methods & Results: Three Brahman bulls in reproduction age and previously considered fit for reproductionwere used. The semen samples were collected via the electroejaculation method, and the samples were homogenized toform pooled semen from three ejaculates, which was diluted in Tris-yolk egg-glicerol diluent medium. Quercetin was addedto diluent, to final concentrations of 0, 5, 10, 15 and 20 μg.mL-1 in each group. The samples were kept frozen in strawsof 500 μL, with concentration of 40,000,000 spermatozoid / mL for 15 days and were thawed in water at 36°C for 30 s.All the tests was performed in five replicates. The cell metabolism status was evaluated by quantification of superoxideradical production with a nitroblue tetrazolium test (NBT) and scanning spectrophotometry. By spermatic evaluation, thefollowing parameters were evaluated via the computerized system of sperm analysis (CASA): total motility (TM, %),progressive motility (PM, %), velocity curved line (VCL, mm/s), velocity straight line (VSL, mm/s), velocity averagepath (VAP, mm/s), distance curved line (DCL, mm), distance straight line (DSL, mm), distance average path (DAP, mm),amplitude of lateral head displacement (ALH, mm), beat cross frequency (BCF, Hz), wobble...(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Bovinos , Quercetina/administração & dosagem , Análise do Sêmen/veterinária , Criopreservação/métodos , Criopreservação/veterinária , Preservação do Sêmen/métodos , Preservação do Sêmen/veterinária , Estresse Oxidativo , Motilidade dos EspermatozoidesResumo
Evaluation of alveolar macrophage functions of cattle is an important tool in order to assess whether measures taken during the cattle husbandry can decrease the respiratory tract defense. The aim of this study was to determine whether dexamethasone used at therapeutic dose can affect the oxidative metabolism of alveolar macrophages of cattle. This was evaluated by two tests, the fluorometric and colorimetric. The similarity of the results was studied, using alveolar macrophages of six healthy cattle, obtained from bronchoalveolar lavage on a basal and an immunosuppressant moment after the application of dexamethasone. For the fluorometric test, alveolar macrophages were incubated with Staphylococcus aureus and 2'-7'dichlorohidroflurescein, and analyzed by flow cytometer. For the colorimetric test, alveolar macrophages were incubated with Phorbol 12- miristate-13 acetate and nitroblue tetrazolium, dissolved and analyzed in a spectrophotometer. It was noted that dexamethasone therapeutic dose (0.05 mg/kg) reduced the functions of alveolar macrophages from healthy bovine. This result was observed by both tests with the difference that the flow cytometry assay was more informative for identifying which specific cellular function has been compromised.(AU)
A avaliação das funções de macrófagos alveolares de bovinos é uma ferramenta importante no intuito de analisar se medidas adotadas durante a criação desses animais diminuem a defesa do trato respiratório, aumentando a susceptibilidade à pneumonia. O objetivo deste trabalho foi verificar se a dexametasona em dose terapêutica afeta o metabolismo oxidativo de macrófagos alveolares de bovinos por meio de duas provas, a fluorimétrica e a colorimétrica, avaliando a similaridade dos resultados. Para tanto, utilizaram-se macrófagos alveolares de seis bovinos sadios, obtidos por meio de lavados broncoalveolares em um momento basal e em um momento imunossupressor, após a aplicação da dexametasona. Na prova fluorimétrica, os macrófagos alveolares foram incubados com Staphylococcus aureus e o fluorófilo 2'-7' diclorohidrofluresceína e analisados por citometria de fluxo. Na prova colorimétrica, os macrófagos alveolares foram incubados com Phorbol 12- miristate-13 acetate e nitroazul de tetrazolium, dissolvidos e analisados em espectofotômetro. Observou-se que a dexametasona em dose terapêutica (0,05 mg/kg) reduziu as funções dos macrófagos alveolares de bovinos sadios, sendo este resultado obtido em ambas as provas, com a diferença de que o teste de citometria de fluxo foi mais esclarecedor por identificar qual função celular específica foi comprometida.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Sistema Respiratório , Macrófagos Alveolares , Pneumonia , Staphylococcus aureus , DexametasonaResumo
Evaluation of alveolar macrophage functions of cattle is an important tool in order to assess whether measures taken during the cattle husbandry can decrease the respiratory tract defense. The aim of this study was to determine whether dexamethasone used at therapeutic dose can affect the oxidative metabolism of alveolar macrophages of cattle. This was evaluated by two tests, the fluorometric and colorimetric. The similarity of the results was studied, using alveolar macrophages of six healthy cattle, obtained from bronchoalveolar lavage on a basal and an immunosuppressant moment after the application of dexamethasone. For the fluorometric test, alveolar macrophages were incubated with Staphylococcus aureus and 2'-7'dichlorohidroflurescein, and analyzed by flow cytometer. For the colorimetric test, alveolar macrophages were incubated with Phorbol 12- miristate-13 acetate and nitroblue tetrazolium, dissolved and analyzed in a spectrophotometer. It was noted that dexamethasone therapeutic dose (0.05 mg/kg) reduced the functions of alveolar macrophages from healthy bovine. This result was observed by both tests with the difference that the flow cytometry assay was more informative for identifying which specific cellular function has been compromised.(AU)
A avaliação das funções de macrófagos alveolares de bovinos é uma ferramenta importante no intuito de analisar se medidas adotadas durante a criação desses animais diminuem a defesa do trato respiratório, aumentando a susceptibilidade à pneumonia. O objetivo deste trabalho foi verificar se a dexametasona em dose terapêutica afeta o metabolismo oxidativo de macrófagos alveolares de bovinos por meio de duas provas, a fluorimétrica e a colorimétrica, avaliando a similaridade dos resultados. Para tanto, utilizaram-se macrófagos alveolares de seis bovinos sadios, obtidos por meio de lavados broncoalveolares em um momento basal e em um momento imunossupressor, após a aplicação da dexametasona. Na prova fluorimétrica, os macrófagos alveolares foram incubados com Staphylococcus aureus e o fluorófilo 2'-7' diclorohidrofluresceína e analisados por citometria de fluxo. Na prova colorimétrica, os macrófagos alveolares foram incubados com Phorbol 12- miristate-13 acetate e nitroazul de tetrazolium, dissolvidos e analisados em espectofotômetro. Observou-se que a dexametasona em dose terapêutica (0,05 mg/kg) reduziu as funções dos macrófagos alveolares de bovinos sadios, sendo este resultado obtido em ambas as provas, com a diferença de que o teste de citometria de fluxo foi mais esclarecedor por identificar qual função celular específica foi comprometida.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Sistema Respiratório , Macrófagos Alveolares , Pneumonia , Staphylococcus aureus , DexametasonaResumo
A doença periodontal (DP) é a enfermidade inflamatória mais comum da cavidade oral dos cães. A quantificação de biomarcadores do plasma e da saliva tem sido utilizada para avaliar o estresse oxidativo sistêmico (EOS) e local (EOL) da DP humana. Na DP canina, os mecanismos do estresse oxidativo não estão bem caracterizados e estabelecidos. O objetivo do presente estudo foi investigar a hipótese de que o EOS ocorre na DP canina e de que a saliva pode ser utilizada para avaliar o EOL. Analisou-se, também, a hipótese de que a ativação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos contribui para EOS na DP dos cães. Para tal, foram selecionados 20 cães adultos portadores de DP, agrupados de acordo com o grau de lesão: gengivite (n=6), periodontites leve (n=8) e avançada (n=6). O grupo controle foi composto pelos mesmos 20 cães, 30 dias após o tratamento periodontal. Para avaliar o metabolismo oxidativo dos neutrófilos circulantes foi quantificada a produção de superóxido pelo teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT). As concentrações de oxidante total (TOC) e de espécies reativas ao ácido tiobartbitúrico (TBARS) no plasma foram quantificadas para avaliar o EOS. Para a avaliação do estresse oxidativo local, foi quantificado o TOC salivar e a concentração dos principais antioxidantes da saliva (albumina, ácido úrico e bilirrubina total). O EOS na DP foi confirmado pelo aumento da produção de superóxido dos neutrófilos circulantes, TOC e TBARS plasmático. Foi possível quantificar todos os biomarcadores na saliva de cães, porém nenhum foi capaz de expressar o EOL da DP canina. Esta é uma das primeiras evidências de que o EOS ocorre em cães com DP e que a ativação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos pode contribuir para desequilíbrio entre antioxidantes e oxidantes. Este estudo ressalta a importância da higiene bucal dos cães para a prevenção da DP e de lesões degenerativas crônicas de diversos tecidos causadas pelo EOS.(AU)
Periodontal disease (PD) is the most common inflammatory disease of the oral cavity of dogs. Quantitation of plasma and salivary biomarkers have been used to assess the systemic oxidative stress (SOS) and local (LOS) of human PD. In canine PD, oxidative stress mechanisms are not well characterized and established. Our objective was to investigate the hypothesis that SOS occurs in dog PD and saliva can be used to evaluate the LOS. We also investigated the hypothesis that the activation of neutrophil oxidative metabolism contributes to SOS in dog SD. For this purpose, 20 adult dogs were selected PD patients, grouped according to the degree of injury: gingivitis (n=6), light periodontitis (n=8) and advanced periodontitis (n=6). The control group was composed of the same 20 dogs, 30 days after periodontal treatment. To assess oxidative metabolism of circulating neutrophils superoxide production was measured by test nitroblue tetrazolium reduction (NBT). The total oxidant concentrations (TOC) and reactive species to tiobartbitúrico acid (TBARS) in plasma were quantified to evaluate SOS. For the evaluation of local oxidative stress were quantified salivary TOC and concentration of the main antioxidant in saliva (albumin, uric acid, and total bilirubin). EOS in dogs with PD was confirmed by increased superoxide production of circulating neutrophils, TOC, and plasma TBARS. It was possible to quantify all the biomarkers in the saliva of dogs, but none was able to express the LOS canine PD. This is the first evidence that SOS occurs in dogs with PD and that activation of the oxidative metabolism of neutrophils may contribute to an imbalance between oxidants and antioxidants. This study highlights the importance of oral hygiene of dogs to prevent PD and chronic degenerative lesions of various tissues caused by SOS.(AU)
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Animais , Cães , Biomarcadores/análise , Cães/anatomia & histologia , Estresse Oxidativo , Periodontite/veterináriaResumo
A doença periodontal (DP) é a enfermidade inflamatória mais comum da cavidade oral dos cães. A quantificação de biomarcadores do plasma e da saliva tem sido utilizada para avaliar o estresse oxidativo sistêmico (EOS) e local (EOL) da DP humana. Na DP canina, os mecanismos do estresse oxidativo não estão bem caracterizados e estabelecidos. O objetivo do presente estudo foi investigar a hipótese de que o EOS ocorre na DP canina e de que a saliva pode ser utilizada para avaliar o EOL. Analisou-se, também, a hipótese de que a ativação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos contribui para EOS na DP dos cães. Para tal, foram selecionados 20 cães adultos portadores de DP, agrupados de acordo com o grau de lesão: gengivite (n=6), periodontites leve (n=8) e avançada (n=6). O grupo controle foi composto pelos mesmos 20 cães, 30 dias após o tratamento periodontal. Para avaliar o metabolismo oxidativo dos neutrófilos circulantes foi quantificada a produção de superóxido pelo teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT). As concentrações de oxidante total (TOC) e de espécies reativas ao ácido tiobartbitúrico (TBARS) no plasma foram quantificadas para avaliar o EOS. Para a avaliação do estresse oxidativo local, foi quantificado o TOC salivar e a concentração dos principais antioxidantes da saliva (albumina, ácido úrico e bilirrubina total). O EOS na DP foi confirmado pelo aumento da produção de superóxido dos neutrófilos circulantes, TOC e TBARS plasmático. Foi possível quantificar todos os biomarcadores na saliva de cães, porém nenhum foi capaz de expressar o EOL da DP canina. Esta é uma das primeiras evidências de que o EOS ocorre em cães com DP e que a ativação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos pode contribuir para desequilíbrio entre antioxidantes e oxidantes. Este estudo ressalta a importância da higiene bucal dos cães para a prevenção da DP e de lesões degenerativas crônicas de diversos tecidos causadas pelo EOS.(AU)
Periodontal disease (PD) is the most common inflammatory disease of the oral cavity of dogs. Quantitation of plasma and salivary biomarkers have been used to assess the systemic oxidative stress (SOS) and local (LOS) of human PD. In canine PD, oxidative stress mechanisms are not well characterized and established. Our objective was to investigate the hypothesis that SOS occurs in dog PD and saliva can be used to evaluate the LOS. We also investigated the hypothesis that the activation of neutrophil oxidative metabolism contributes to SOS in dog SD. For this purpose, 20 adult dogs were selected PD patients, grouped according to the degree of injury: gingivitis (n=6), light periodontitis (n=8) and advanced periodontitis (n=6). The control group was composed of the same 20 dogs, 30 days after periodontal treatment. To assess oxidative metabolism of circulating neutrophils superoxide production was measured by test nitroblue tetrazolium reduction (NBT). The total oxidant concentrations (TOC) and reactive species to tiobartbitúrico acid (TBARS) in plasma were quantified to evaluate SOS. For the evaluation of local oxidative stress were quantified salivary TOC and concentration of the main antioxidant in saliva (albumin, uric acid, and total bilirubin). EOS in dogs with PD was confirmed by increased superoxide production of circulating neutrophils, TOC, and plasma TBARS. It was possible to quantify all the biomarkers in the saliva of dogs, but none was able to express the LOS canine PD. This is the first evidence that SOS occurs in dogs with PD and that activation of the oxidative metabolism of neutrophils may contribute to an imbalance between oxidants and antioxidants. This study highlights the importance of oral hygiene of dogs to prevent PD and chronic degenerative lesions of various tissues caused by SOS.(AU)
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Animais , Cães , Biomarcadores/análise , Cães/anatomia & histologia , Estresse Oxidativo , Periodontite/veterináriaResumo
A ováriohisterectomia (OVH) é procedimento comum em pequenos animais, sendo diversas as técnicas descritas. O procedimento cirúrgico resulta em alterações orgânicas, a citar os neutrófilos, que se afetados, aumentam a susceptibilidade a patógenos. Este trabalho teve objetivo de verificar o efeito de diferentes métodos cirúrgicos (aberto ou videoassistido) e hemostático (ligadura ou coagulação bipolar) na OVH de caninos em relação à atividade dos neutrófilos, sendo para tal, as pacientes alocadas em três grupos conforme a técnica cirúrgica. Realizou-se coleta de sangue antes do procedimento e após duas, seis, 12, 24, 48 horas e sete dias após a cirurgia. Foi realizada contagem dos neutrófilos totais, a avaliação do metabolismo oxidativo e a atividade fagocítica destas células, com e sem estimulação, pelo teste de redução do NBT. Observou-se que às 12 horas de pós-operatório, a atividade de neutrófilos é mais afetada, e que dentre as técnicas, a celiotomia e hemostasia por coagulação bipolar provocou maior comprometimento da atividade dos neutrófilos
Ovarian hysterectomy (OVH) is a common procedure in small animals, with several techniques described. The surgical procedure results in organic changes, including neutrophils, which, if affected, increase the susceptibility to pathogens. This study aimed to verify the effect of different surgical methods (open or video-assisted) and hemostatic (bipolar ligation or coagulation) on canine OVH in relation to neutrophil activity. . Blood collection was performed before the procedure and after two, six, 12, 24, 48 hours and seven days after surgery. Total neutrophil counts, assessment of oxidative metabolism and phagocytic activity of these cells were performed, with and without stimulation, by the NBT reduction test. It was observed that at 12 hours after surgery, neutrophil activity is more affected, and that among the techniques, celiotomy and hemostasis by bipolar coagulation caused greater impairment of neutrophil activity
Resumo
Micotoxinas frequentemente contaminam alimentos de bovinos, podendo causar quadros de lesão hepática, imunodepressão e redução da produção, e em aves e suínos, os adsorventes como bentonita atenuam tais perdas, porém para bovinos há poucos estudos sobre seu uso especialmente quando a intoxicação ocorre por dietas naturalmente contaminadas. Assim, foram escolhidas 18 vacas leiteiras, multíparas no meio do estágio da lactação, consumindo dieta contendo na ração total fumonisina B1 (683,7 g/Kg) e B2 (306,6 g/Kg), zearalenona (503,9 g/Kg). Os animais foram divididos em dois grupos: tratamento (GT, n=9) e controle (GC, n=9), e submetidos às avaliações hematológicas, metabolismo oxidativo de neutrófilos pela técnica do nitroazul de tetrazolium (NBT) e análise físico química do leite, a cada semana, durante dois meses, totalizando oito análises. Foi também realizada a pesquisa para aflatoxina M1 no leite em três momentos. Objetivou-se avaliar se a administração oral diária do adsorvente de micotoxinas, argila bentonita a base de aluminossilicato durante 56 dias atenuaria as alterações causadas pelas micotoxinas. Observou-se que o uso do adsorvente reduziu a excreção láctea de aflatoxina M1 (AFM1), aumento de proteína (p = 0,03) e albumina séricas (p= 0,0001) e aumento do metabolismo oxidativo leucocitário a partir do dia 24 (p = 0,05), e elevou a produção leiteira a partir do 16º dia (p= 0,08). Não foi observado melhora nos índices físico-químicos do leite. Conclui-se que o uso do adsorvente a base de aluminossilicato foi capaz de atenuar os efeitos das micotoxinas na função de leucócitos e de elevar a produção leiteira
Mycotoxins often contaminate cattle feed, which can cause liver damage, immunosuppression and reduced production, and in birds and pigs, adsorbents such as bentonite mitigate such losses, however for cattle there are few studies on their use, especially when intoxication occurs due to naturally contaminated diets. So, 18 dairy cows were chosen, they were multiparous in the middle of the lactation stage, consuming a diet containing fumonisin B1 (683,7 g/Kg) e B2 (306,6 g/Kg) and zearalenona (503,9 g/Kg) on total animal feed. The animals were divided into treatment (TG, n = 9) and control (CG, n = 9) groups, and subjected to hematological assessments, oxidative neutrophil metabolism by the tetrazolium nitroazul (NBT) technique and physical chemical analysis of milk, every week for two months, totaling eight analyzes. A search for aflatoxin M1 in milk was also carried out in three moments. This study aimed to assess whether the daily oral administration of mycotoxin adsorbent, bentonite clay based on aluminosilicate for 56 days would attenuate these changes It was observed that the use of the adsorbent promoted a reduction in the milk excretion of aflatoxin M1 (AFM1), an increase in serum protein (p = 0.03) and albumin (p = 0.0001), an increase in leukocyte oxidative metabolism from the day 24 (p = 0.05), and increased milk production from the 16th day of treatment (p = 0.08). There was no improvement in the physical-chemical indexes of the animals' milk. It is concluded that the use of aluminosilicate-based adsorbent was able to attenuate the effects of mycotoxins on the function of leukocytes and to increase milk production.
Resumo
Estímulos à pesquisa de novos materiais impulsionam o setor das ciências biomédicas na procura de compostos aplicados à medicina regenerativa. A gelatina apresenta boas propriedades em processos cicatriciais além de ser biocompatível com a maioria das estruturas celulares sendo possível sua aplicação em diversas especialidades médicas. Assim como a gelatina, filmes poliméricos obtidos a partir deste precursor apresentam boas propriedades mecânicas e biocompatibilidade, ampliando a sua gama de aplicações. Este trabalho tem como objetivo aplicar um biomaterial de gelatina extraído das escamas de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus), e avaliar a atuação in vitro pela porcentagem de degranulação de neutrófilos de cães, comparando os resultados com grupos de amostras de neutrófilos estimulados pela N-formil-metionil-leucil-fenilalanina (fMLP). Para execução desse estudo foram coletadas amostras de sangue de cães clinicamente hígidos e divididas em oito grupos, sendo um controle negativo (fMLP sem a presença de polímero); três condições com a adição de polímero de gelatina de massas diferentes, e outras três condições com adição do polímero de gelatina com fMLP. Para avaliar o estresse oxidativo dos neutrófilos gerado pelo polímero foi utilizado o método de redução do corante tetrazólio nitroazul (NBT) e a sua quantificação deu-se pela técnica de espectrofotometria na região do ultravioleta e do visível (UV/VIS). Os resultados mostraram que na maioria das condições apresentadas a diferentes concentrações de polímero de gelatina avaliado não produziram estresse oxidativo demonstrando assim baixo potencial de citotoxicidade.
Incentives for the search for new materials drive the biomedical sciences sector to search for compounds applied to regenerative medicine. Gelatin has good properties in healing process as well as being biocompatible with most cell structures, making it possible to be applied in several medical specialties. Like gelatin, the polymeric films obtained from this precursor present good mechanical properties and biocompatibility, expanding its range of applications. This project aims to apply a gelatins biomaterial extracted from Nile tilapia (Oreochromis niloticus) scales and evaluate in vitro performance by the percentage of neutrophil degranulation in dogs comparing the results with samples groups neutrophils stimulated by N-Formylmethionineleucyl-phenylalanine (fMLP). To qualify this study, blood samples were collected from dogs and divided into eight groups, being a negative control (fMLP - without the presence of polymer); three conditions with the addition of gelatin polymer of different masses, and three other conditions with the addition of gelatin polymer with fMLP. To evaluate the neutrophils oxidative stress generated by the polymer, the method of reduction of the nitro-blue tetrazolium (NBT) dye will be used and its quantification will be done using the spectrophotometry method in the ultraviolet and visible (UV / Vis) region. The results showed that in most of the conditions presented to different concentrations of gelatin polymer evaluated, they did not produce oxidative stress, thus demonstrating low potential for cytotoxicity
Resumo
Abstract: The nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) is one of the most used methods to evaluate the oxidative metabolism of neutrophils. However, the cost for each sample and dye's life-time are disadvantages of the method. This paper aim was to compare two NBT test methodologies in order to maximize its use and decrease the cost for each sample. It was made using 10 adult and healthy goats and blood samples were taken through venipuncion in jugular vein, using 10mL tubes, and then a 500L sample was taken in eppendoff tubes with 2L of heparin. Using this sample were made three methodologies for the NBT test: A) Park & Good (1970) original technique; B) dye reduction in 50% of the volume; C) 50% reduction and dye storage at -20°C for 180 days. It was made and dyed the blood smear (May Grünwald-Giemsa) from the samples, using the proposed methodologies and then made the counting of 100 neutrophils in optic microscopy, to determinate the percentage of NBT reactive neutrophils. The statistic analysis by the method of Repeated Measuring Analysis (ANOVA) evinced significant differences (P 0,05) between the two methods and the original (A=14.4±4.6; B=1.9±1.4; C=1.1±0.9), however it showed high correlation by the Spearman test between the methods (rs=0,82 (AxB), rs=0,75 (BxC) e rs=0.93 (AxC)). It was concluded that the original Park & Good (1970) method and two methodologies for dye reduction in 50% and it's reduction associated with NBT dye freezing for 180 days can be used in caprines, but the values should be compared with their respective methodologies.
Resumo: O teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) é um dos métodos mais utilizados para a avaliação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos. Porém, o custo por amostra e o tempo de utilização do corante são desvantagens do método. O objetivo deste trabalho foi comparar duas metodologias para realização do teste do NBT a fim de maximizar a sua utilização e diminuir o custo por amostra processada. Foram utilizadas 10 cabras, adultas clinicamente sadias e colhidas amostras de sangue por meio de venipunção jugular em tubos de 10mL sendo retirada uma alíquota de 500L em tubo "eppendorff" contendo 2L de heparina. Através desta alíquota foram realizadas três metodologias para o teste do NBT: A) técnica original Park & Good (1970); B) redução de 50% do volume do corante; C) redução de 50% e armazenamento do corante a -20°C por 180 dias. Foram confeccionados e corados esfregaços sanguíneos (May Grünwald-Giemsa) das amostras com as metodologias propostas e realizada contagem de 100 neutrófilos em microscopia óptica para determinar o percentual de neutrófilos reativos ao NBT. A análise estatística pelo método de Análise de Medidas Repetida (ANOVA) demonstrou diferenças significativas (P 0,05) entre os dois métodos e o original (A=14,4±4,6; B=1,9±1,4; C=1,1±0,9), porém apresentou alta correlação pelo teste de Spearman entre os métodos (rs=0,82 (AxB), rs=0,75 (BxC) e rs=0,93 (AxC)). Conclui-se que o teste de Redução do Tetrazólio Nitroazul (NBT) segundo a metodologia descrita por Park & Good (1970) e a redução do corante em 50% do seu volume e a sua redução associada ao congelamento por 180 dias a -20ºC podem ser realizadas em caprinos, porém os valores devem ser comparados com as respectivas metodologias utilizadas.
Resumo
Abstract: The nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) is one of the most used methods to evaluate the oxidative metabolism of neutrophils. However, the cost for each sample and dye's life-time are disadvantages of the method. This paper aim was to compare two NBT test methodologies in order to maximize its use and decrease the cost for each sample. It was made using 10 adult and healthy goats and blood samples were taken through venipuncion in jugular vein, using 10mL tubes, and then a 500L sample was taken in eppendoff tubes with 2L of heparin. Using this sample were made three methodologies for the NBT test: A) Park & Good (1970) original technique; B) dye reduction in 50% of the volume; C) 50% reduction and dye storage at -20°C for 180 days. It was made and dyed the blood smear (May Grünwald-Giemsa) from the samples, using the proposed methodologies and then made the counting of 100 neutrophils in optic microscopy, to determinate the percentage of NBT reactive neutrophils. The statistic analysis by the method of Repeated Measuring Analysis (ANOVA) evinced significant differences (P 0,05) between the two methods and the original (A=14.4±4.6; B=1.9±1.4; C=1.1±0.9), however it showed high correlation by the Spearman test between the methods (rs=0,82 (AxB), rs=0,75 (BxC) e rs=0.93 (AxC)). It was concluded that the original Park & Good (1970) method and two methodologies for dye reduction in 50% and it's reduction associated with NBT dye freezing for 180 days can be used in caprines, but the values should be compared with their respective methodologies.
Resumo: O teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) é um dos métodos mais utilizados para a avaliação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos. Porém, o custo por amostra e o tempo de utilização do corante são desvantagens do método. O objetivo deste trabalho foi comparar duas metodologias para realização do teste do NBT a fim de maximizar a sua utilização e diminuir o custo por amostra processada. Foram utilizadas 10 cabras, adultas clinicamente sadias e colhidas amostras de sangue por meio de venipunção jugular em tubos de 10mL sendo retirada uma alíquota de 500L em tubo "eppendorff" contendo 2L de heparina. Através desta alíquota foram realizadas três metodologias para o teste do NBT: A) técnica original Park & Good (1970); B) redução de 50% do volume do corante; C) redução de 50% e armazenamento do corante a -20°C por 180 dias. Foram confeccionados e corados esfregaços sanguíneos (May Grünwald-Giemsa) das amostras com as metodologias propostas e realizada contagem de 100 neutrófilos em microscopia óptica para determinar o percentual de neutrófilos reativos ao NBT. A análise estatística pelo método de Análise de Medidas Repetida (ANOVA) demonstrou diferenças significativas (P 0,05) entre os dois métodos e o original (A=14,4±4,6; B=1,9±1,4; C=1,1±0,9), porém apresentou alta correlação pelo teste de Spearman entre os métodos (rs=0,82 (AxB), rs=0,75 (BxC) e rs=0,93 (AxC)). Conclui-se que o teste de Redução do Tetrazólio Nitroazul (NBT) segundo a metodologia descrita por Park & Good (1970) e a redução do corante em 50% do seu volume e a sua redução associada ao congelamento por 180 dias a -20ºC podem ser realizadas em caprinos, porém os valores devem ser comparados com as respectivas metodologias utilizadas.