Ultrastructure of phagocytes and oocysts of Nematopsis sp. (Apicomplexa, Porosporidae) infecting Crassostrea rhizophorae in Northeastern Brazil / Ultraestrutura de fagócitos e oocistos de Nematopsis sp. (Apicomplexa, Porosporidae) infectando Crassostrea rhizophorae no Nordeste brasileiro

This work describes the detailed ultrastructural morphology of the phagocyte imprisoning an oyster of Nematopsis(Apicomplexa) found in Crassostrea rhizophorae, in the city of Maceió (AL), Brazil. The highly infected hosts had half-open leaflets with weak, slow retraction of the adductor muscles. Variable number of ellipsoid oocytes, either isolated and or clustered, was found between myofibrils of the adductor muscle. Each oocyst was incarcerated in a parasitophorous vacuole of host uninucleated phagocyte. The oocysts were composed of a dense wall containing a uninucleate vermiform sporozoite. The wall of the fine oocysts was composed of homogeneous electron-lucent material formed by three layers of equal thickness, having a circular orifice-micropyle obstructed by the operculum. The oocysts presented ellipsoid morphology with their wall was surrounded by a complex network of numerous microfibrils. Important details of the taxonomic value were visualized such as the ultrastructural organization of the oocyst wall and the organization of the micropyle and operculum, beyond the microfibrils that protrude from the oocyst wall only observed by transmission electron microscopy (TEM) and that may aid in the identification of the species. However, in order to clarify the systematic position of the species reported of the genus Nematopsis, it is important to proceed with genetic analyses.(AU)

Este trabalho descreve a morfologia ultraestrutural detalhada do fagócito encarcerando um oocisto de Nematopsis(Apicomplexa) encontrado em Crassostrea rhizophorae, na cidade de Maceió (AL), Brasil. Os hospedeiros muito infectados apresentavam valvas entreabertas com retração fraca e lenta dos músculos abdutores. Número variável de oócitos de forma elipsoide, isolados e ou agrupados foi encontrado entre as miofibrilas do músculo abdutor. Cada oocisto estava encarcerado num vacúolo parasitóforo do fagócito uninucleado do hospedeiro. Os oocistos eram compostos por uma parede densa contendo um esporozoíto vermiforme uninucleado. A parede dos oocistos finos era composta de material electron-lucente homogêneo formado por três camadas de espessura igual, possuindo um orifício circular - micrópila, obstruída pelo opérculo. Os oocistos apresentavam morfologia elipsoide, sua parede era circundada por uma complexa rede de numerosas microfibrilas. Detalhes de valor taxonômico importantes foram visualizados tais como: a organização ultraestrutural da parede do oocisto e a organização da micrópila e do opérculo, além das microfibrilas que se projetam da parede do oocisto, estrutura apenas observada em microscopia eletrônica de transmissão (MET) e que pode auxiliar na identificação da espécie. Contudo, para esclarecer a posição sistemática da maioria das espécies relatadas do gênero Nematopsis é importante prosseguir com as análises genéticas.(AU)

Parasitism by Nematopsis sp. (Apicomplexa: Eugregarinida) in Mytella guyanensis at the Marine Extractive Reserve Baía do Iguape, Bahia, Brazil / Parasitismo por Nematopsis sp. (Apicomplexa: Eugregarinida) em Mytella guyanensis na Reserva Extrativista Marinha Baía do Iguape, Bahia, Brasil

Several studies show the presence of protozoa of the genus Nematopsis Schneider, 1892, in many species of bivalves. The pathogenicity of this Apicomplexa is still much debated, which is possibly related to the parasitism degree and host habitat. In this context, this study investigated parasitism by Nematopsis sp. in Mytella guyanensis (Bivalvia: Mytilidae) in a mangrove of the Marine Extractive Reserve Baía do Iguape, Bahia, Brazil. The collections were made monthly, from March 2014 to March 2015, consisting of 30 adults with shell height above 40 mm per month, totaling 360 specimens. The specimens were measured, weighed, opened, and macroscopically examined for identifying parasites and/or signs of morphological changes. After that, they were fixed in Davidsons solution and processed according to classical histological techniques, with inclusion in paraffin, obtaining 5 m-thick sections by microtomy, and stained by Harris Hematoxylin and Eosin (HE). The water temperature ranged from 25.5 to 33.6 ºC and the salinity from 21.1 to 34.3 Practical Salinity Units (PSU). The specimens measured between 41.1 and 68.6 mm and had an average weight of 7.24 g. Macroscopically, there was no presence of the parasite or any morphological changes related its presence. The frequency percentage of Nematopsis sp. was 99.45%. The mantle was the organ with the highest frequency of infection (46

Diversos estudos evidenciam a presença de protozoários do gênero Nematopsis Schneider, 1892 em várias espécies de bivalves. A patogenicidade desse apicomplexo ainda é bastante debatida, a qual possivelmente relaciona-se ao grau de parasitismo e habitat do hospedeiro. Nesse contexto, este estudo investigou o parasitismo por Nematopsis sp. em Mytella guyanensis (Bivalvia: Mytilidae) em um manguezal da Reserva Extrativista Marinha Baía do Iguape, Bahia, Brasil. As coletas foram efetuadas mensalmente, de março de 2014 a março de 2015, constando 30 adultos com altura da concha acima de 40 mm, totalizando 360 espécimens. Os espécimens foram medidos, pesados, abertos e examinados macroscopicamente para a identificação de parasitos e/ou sinais de alterações morfológicas, em seguida fixados em solução de Davidson e processados segundo técnica histológica clássica, com inclusão em parafina, obtenção de cortes de 5 m de espessura por microtomia e coloração por hematoxilina de Harris e Eosina (HE). A temperatura da água variou de 25,5 a 33,6 ºC e a salinidade de 21,1 a 34,3 Unidades Práticas de Salinidade (UPS). Os espécimens mediram entre 41,1 e 68,6 mm e tiveram um peso médio de 7,24 g. Macroscopicamente, não se observou presença do parasito ou qualquer alteração morfológica relacionada à presença do mesmo. A frequência percentual de Nematopsis sp. foi de 99,45%. O manto foi o órgão de

Parasitism by Nematopsis sp. (Apicomplexa: Eugregarinida) in Mytella guyanensis at the Marine Extractive Reserve Baía do Iguape, Bahia, Brazil / Parasitismo por Nematopsis sp. (Apicomplexa: Eugregarinida) em Mytella guyanensis na Reserva Extrativista Marinha Baía do Iguape, Bahia, Brasil

Several studies show the presence of protozoa of the genus Nematopsis Schneider, 1892, in many species of bivalves. The pathogenicity of this Apicomplexa is still much debated, which is possibly related to the parasitism degree and host habitat. In this context, this study investigated parasitism by Nematopsis sp. in Mytella guyanensis (Bivalvia: Mytilidae) in a mangrove of the Marine Extractive Reserve Baía do Iguape, Bahia, Brazil. The collections were made monthly, from March 2014 to March 2015, consisting of 30 adults with shell height above 40 mm per month, totaling 360 specimens. The specimens were measured, weighed, opened, and macroscopically examined for identifying parasites and/or signs of morphological changes. After that, they were fixed in Davidsons solution and processed according to classical histological techniques, with inclusion in paraffin, obtaining 5 m-thick sections by microtomy, and stained by Harris Hematoxylin and Eosin (HE). The water temperature ranged from 25.5 to 33.6 ºC and the salinity from 21.1 to 34.3 Practical Salinity Units (PSU). The specimens measured between 41.1 and 68.6 mm and had an average weight of 7.24 g. Macroscopically, there was no presence of the parasite or any morphological changes related its presence. The frequency percentage of Nematopsis sp. was 99.45%. The mantle was the organ with the highest frequency of infection(AU)

Diversos estudos evidenciam a presença de protozoários do gênero Nematopsis Schneider, 1892 em várias espécies de bivalves. A patogenicidade desse apicomplexo ainda é bastante debatida, a qual possivelmente relaciona-se ao grau de parasitismo e habitat do hospedeiro. Nesse contexto, este estudo investigou o parasitismo por Nematopsis sp. em Mytella guyanensis (Bivalvia: Mytilidae) em um manguezal da Reserva Extrativista Marinha Baía do Iguape, Bahia, Brasil. As coletas foram efetuadas mensalmente, de março de 2014 a março de 2015, constando 30 adultos com altura da concha acima de 40 mm, totalizando 360 espécimens. Os espécimens foram medidos, pesados, abertos e examinados macroscopicamente para a identificação de parasitos e/ou sinais de alterações morfológicas, em seguida fixados em solução de Davidson e processados segundo técnica histológica clássica, com inclusão em parafina, obtenção de cortes de 5 m de espessura por microtomia e coloração por hematoxilina de Harris e Eosina (HE). A temperatura da água variou de 25,5 a 33,6 ºC e a salinidade de 21,1 a 34,3 Unidades Práticas de Salinidade (UPS). Os espécimens mediram entre 41,1 e 68,6 mm e tiveram um peso médio de 7,24 g. Macroscopicamente, não se observou presença do parasito ou qualquer alteração morfológica relacionada à presença do mesmo. A frequência percentual de Nematopsis sp. foi de 99,45%. O manto foi o órgão(AU)

Parasitism by Nematopsis sp. (Apicomplexa: Eugregarinida) in Mytella guyanensis at the Marine Extractive Reserve Baía do Iguape, Bahia, Brazil / Parasitismo por Nematopsis sp. (Apicomplexa: Eugregarinida) em Mytella guyanensis na Reserva Extrativista Marinha Baía do Iguape, Bahia, Brasil

Several studies show the presence of protozoa of the genus Nematopsis Schneider, 1892, in many species of bivalves. The pathogenicity of this Apicomplexa is still much debated, which is possibly related to the parasitism degree and host habitat. In this context, this study investigated parasitism by Nematopsis sp. in Mytella guyanensis (Bivalvia: Mytilidae) in a mangrove of the Marine Extractive Reserve Baía do Iguape, Bahia, Brazil. The collections were made monthly, from March 2014 to March 2015, consisting of 30 adults with shell height above 40 mm per month, totaling 360 specimens. The specimens were measured, weighed, opened, and macroscopically examined for identifying parasites and/or signs of morphological changes. After that, they were fixed in Davidson's solution and processed according to classical histological techniques, with inclusion in paraffin, obtaining 5 µm-thick sections by microtomy, and stained by Harris' Hematoxylin and Eosin (HE). The water temperature ranged from 25.5 to 33.6 ºC and the salinity from 21.1 to 34.3 Practical Salinity Units (PSU). The specimens measured between 41.1 and 68.6 mm and had an average weight of 7.24 g. Macroscopically, there was no presence of the parasite or any morphological changes related its presence. The frequency percentage of Nematopsis sp. was 99.45%. The mantle was the organ with the highest frequency of infection (46.26%), followed by the gonads (18.36%). Among the analyzed organs, all presented the parasite and, in a few severely infected cases, microscopical changes were observed in the mantle conformation. The infection intensity for most of the sessions analyzed was 1 to 3 oocysts/phagocyte; however, in one of the sessions, 9 oocysts/phagocytes were recorded. The parasite had a negative correlation with salinity. The high frequency of Nematopsis sp. should be considered for the sustainability of natural stocks, especially if such parasitism occurs simultaneously with other pathogens and stressful environmental conditions.(AU)

Diversos estudos evidenciam a presença de protozoários do gênero Nematopsis Schneider, 1892 em várias espécies de bivalves. A patogenicidade desse apicomplexo ainda é bastante debatida, a qual possivelmente relaciona-se ao grau de parasitismo e habitat do hospedeiro. Nesse contexto, este estudo investigou o parasitismo por Nematopsis sp. em Mytellaguyanensis(Bivalvia: Mytilidae) em um manguezal da Reserva Extrativista Marinha Baía do Iguape, Bahia, Brasil. As coletas foram efetuadas mensalmente, de março de 2014 a março de 2015, constando 30 adultos com altura da concha acima de 40 mm, totalizando 360 espécimens. Os espécimens foram medidos, pesados, abertos e examinados macroscopicamente para a identificação de parasitos e/ou sinais de alterações morfológicas, em seguida fixados em solução de Davidson e processados segundo técnica histológica clássica, com inclusão em parafina, obtenção de cortes de 5 µm de espessura por microtomia e coloração por hematoxilina de Harris e Eosina (HE). A temperatura da água variou de 25,5 a 33,6 ºC e a salinidade de 21,1 a 34,3 Unidades Práticas de Salinidade (UPS). Os espécimens mediram entre 41,1 e 68,6 mm e tiveram um peso médio de 7,24g. Macroscopicamente, não se observou presença do parasito ou qualquer alteração morfológica relacionada à presença do mesmo. A frequência percentual de Nematopsis sp. foi de 99,45%. O manto foi o órgão de maior frequência de infecção (46,26%), seguido das gônadas (18,36%). Entre os órgãos analisados, todos apresentaram o parasito, sendo que, para poucos casos severamente infectados, observaram-se microscopicamente modificações na conformação do manto. A intensidade de infecção para a maioria das sessões analisadas foi de 1 a 3 oocistos/fagócitos, contudo em uma das sessões foram registrados 9 oocistos/fagócitos. O parasito apresentou correlação negativa com a salinidade. A elevada frequência do Nematopsis sp. deve ser levada em consideração para a sustentabilidade dos estoques naturais, principalmente se tal parasitismo ocorrer simultaneamente a outros patógenos e condições ambientais estressantes.(AU)

Pathological study in mussels from culture of Santa Catarina, Brazil / Estudo patológico em mexilhões cultivados em Santa Catarina, Brasil

This study evaluated the presence of pathogens in Perna perna mussels farmed on the coast of state of Santa Catarina, southern Brazil. 2,880 specimens of P. perna were collected from the main mussel-producing municipalities of state, between July 2010 and June 2011. Analyses of hemocytes monolayers, tissue imprint, thioglycollate culture method (RFTM) and histology showed the absence of World Organisation for Animal Health (OIE) listed pathogens. Trematoda Bucephalus margaritae, the cestoda Tylocephalum sp. as well as the protozoans Ancistrocoma sp. and Nematopsis sp. were identified by light microscopy. The turbellarian Urastoma sp. and the copepods Pseudomyicola and Monstrilla were identified by stereomicroscopy. Parasitic castration was observed in mussels with high B. margaritae infestation.(AU)

Este estudo avaliou a presença de patógenos em mexilhões Perna perna cultivados no litoral do estado de Santa Catarina, sul do Brasil. 2.880 indivíduos de P. perna foram coletados nos principais municípios produtores do estado, entre julho 2010 e junho 2011. As análises de monocamadas de hemócitos, imprint de tecidos, cultivo em meio tioglicolato (RFTM) e histologia evidenciaram a ausência de patógenos causadores de enfermidades de notificação obrigatória, listados pela Organização Mundial de Sanidade Animal (OIE). O trematoda Bucephalus margaritae, o cestoda Tylocephalum sp. e os protozoários Ancistrocoma sp. e Nematopsis sp. foram identificados através de microscopia de luz. O turbelário Urastoma sp. e os copépodes dos gêneros Pseudomyicola e Monstrilla foram identificados através de estereomicroscopia. Castração parasitária foi observada em mexilhões com alta infestação de B. margaritae.(AU)

Pathological study in mussels from culture of Santa Catarina, Brazil / Estudo patológico em mexilhões cultivados em Santa Catarina, Brasil

This study evaluated the presence of pathogens in Perna perna mussels farmed on the coast of state of Santa Catarina, southern Brazil. 2,880 specimens of P. perna were collected from the main mussel-producing municipalities of state, between July 2010 and June 2011. Analyses of hemocytes monolayers, tissue imprint, thioglycollate culture method (RFTM) and histology showed the absence of World Organisation for Animal Health (OIE) listed pathogens. Trematoda Bucephalus margaritae, the cestoda Tylocephalum sp. as well as the protozoans Ancistrocoma sp. and Nematopsis sp. were identified by light microscopy. The turbellarian Urastoma sp. and the copepods Pseudomyicola and Monstrilla were identified by stereomicroscopy. Parasitic castration was observed in mussels with high B. margaritae infestation.

Este estudo avaliou a presença de patógenos em mexilhões Perna perna cultivados no litoral do estado de Santa Catarina, sul do Brasil. 2.880 indivíduos de P. perna foram coletados nos principais municípios produtores do estado, entre julho 2010 e junho 2011. As análises de monocamadas de hemócitos, imprint de tecidos, cultivo em meio tioglicolato (RFTM) e histologia evidenciaram a ausência de patógenos causadores de enfermidades de notificação obrigatória, listados pela Organização Mundial de Sanidade Animal (OIE). O trematoda Bucephalus margaritae, o cestoda Tylocephalum sp. e os protozoários Ancistrocoma sp. e Nematopsis sp. foram identificados através de microscopia de luz. O turbelário Urastoma sp. e os copépodes dos gêneros Pseudomyicola e Monstrilla foram identificados através de estereomicroscopia. Castração parasitária foi observada em mexilhões com alta infestação de B. margaritae.

QUALIDADE AMBIENTAL DOS ESTUÁRIOS DO SUL DA BAHIA: UMA ABORDAGEM QUÍMICA, NUTRICIONAL E PARASITOLÓGICA

Estuários recebem entradas diárias de elementos químicos, que podem impactar a qualidade da água e do sedimento e consequentemente da biota desses ambientes. O objetivo deste estudo foi analisar os elementos metálicos de cinco estuários do litoral sul do estado da Bahia, o teor de micronutrientes em moluscos bivalves da região e a relação entre metais e parasitoses. Investigou-se os elementos químicos As, Ba, Cd, Co, Cr, Cu, Fe, Mn, Ni, Pb e Zn no sedimento e em bivalves (Crassostrea gasar, C. rhizophorae e Mytella guyanensis) dos municípios de Valença, Taperoá, Ilhéus, Belmonte e Santa Cruz Cabrália (Capítulo 1). Exceto Santa Cruz Cabrália, os demais estuários foram escolhidos para um estudo de micronutrientes (Cu, Fe, Mn e Zn) em C. rhizophorae e em M. guyanensis (Capítulo 2). A ostra C. gasar de dois estuários (Ilhéus e Santa Cruz Cabrália) foi avaliada quanto a parâmetros parasitológicos (Capítulo 3). As amostras de moluscos e sedimento foram submetidas à digestão ácida e analisadas por espectrometria de emissão óptica de plasma indutivamente acoplado (ICP OES) quanto a metais e mediante análises macro e microscópicas (histologia) quanto a parasitos. As comparações entre locais e espécies foram feitas por análise de variância, seguidas por testes de Tukey (=0,05). Os estuários de Valença, Taperoá, Ilhéus e Belmonte mostraram níveis de metais compatíveis com os estabelecidos pela legislação brasileira, porém, em Santa Cruz Cabrália, além da presença do As, verificou-se alto nível de Pb, o que foi atribuído aos impactos por atividades náuticas nesse local. Ostras (C. rhizophorae e C. gasar) mostraram alto teor de Zn e M. guyanensis alta concentração de Fe, evidenciando o valor nutricional desses bivalves quanto a esses e outros micronutrientes. Na análise parasitária, foram encontradas três espécies de ciliados (Ancistrocoma Chatton e Lwoff, 1926, Sphenophrya Chatton e Lwoff, 1921 e Trichodina Ehrenberg, 1830), um apicomplexo (Nematopsis Schneider, 1892) e três espécies de metazoários, sendo: Urastoma cyprinae (Graff, 1882) (Turbellaria), um Digenea não identificado e Tylocephalum Linton, 1890 (Cestoda). Em C. gasar de Santa Cruz Cabrália verificou-se carga parasitária mais alta de Nematopsis sp. e também maior número de células marrons, de ação detoxificante, assim como a presença de um tumor (xenoma). Os resultados apontam para uma possível correlação entre poluentes metálicos com células marrons, xenomas, condição de peso das ostras e expressão de Nematopsis sp.

Estuaries receive daily inputs of chemical elements, which can impact the quality of water and sediment and consequently the biota of these environments. The aim of this study was to analyze the metallic elements of five estuaries on the southern coast of Bahia State, the micronutrient content in bivalve mollusks from this region and the relationship between metals and parasite diseases. The chemical elements As, Ba, Cd, Co, Cr, Cu, Fe, Mn, Ni, Pb and Zn were investigated in the sediment and in bivalves (Crassostrea gasar, C. rhizophorae and Mytella guyanensis) from the counties of Valença, Taperoá, Ilhéus, Belmonte and Santa Cruz Cabrália (Chapter 1). Except in Santa Cruz Cabrália, the other estuaries were chosen for a study of micronutrients (Cu, Fe, Mn and Zn) in C. rhizophorae and in M. guyanensis (Chapter 2). The oyster C. gasar from two estuaries (Ilhéus and Santa Cruz Cabrália) was evaluated for parasitological parameters (Chapter 3). Mollusks and sediment samples were subjected to acid digestion and analyzed by inductively coupled plasma optical emission spectrometry (ICP OES) for metals, and by macro and microscopic analysis (histology) for the evaluation of parasites. Comparisons among places and species were made by analysis of variance, followed by Tukey tests (=0.05). The estuaries of Valença, Taperoá, Ilhéus and Belmonte showed metal levels compatible with those established by Brazilian legislation, however, in Santa Cruz Cabrália, in addition to the presence of As, there was a high level of Pb, which was attributed to impacts by nautical activities in that estuary. Oysters (C. rhizophorae and C. gasar) showed high content of Zn and M. guyanensis high concentration of Fe, evidencing the nutritional value of these bivalves regarding these and other micronutrients. In the parasitic analysis, were found three species of ciliates (Ancistrocoma Chatton and Lwoff, 1926, Sphenophrya Chatton and Lwoff, 1921 and Trichodina Ehrenberg, 1830), one Apicomplexa (Nematopsis Schneider, 1892) and three species of metazoans, being: Urastoma cyprinae (Graff, 1882) (Turbellaria), one unidentified Digenea and Tylocephalum Linton, 1890 (Cestoda). In C. gasar of Santa Cruz Cabrália, there was a higher parasite load of Nematopsis sp. and also a greater number of brown cells (with detoxifying action), as well as the presence of a tumor (xenoma). The results point to a possible correlation among metallic pollutants with brown cells, xenomas, oyster weight condition and expression of Nematopsis sp.

Parasites in the mangrove oyster Crassostrea rhizophorae cultivated in the estuary of the Graciosa River in Taperoá, Bahia

In this work, parasites associated with the mangrove oyster Crassostrea rhizophorae were studied at a cultivation unit in the estuary of the Graciosa River in Taperoá, Bahia. On a monthly basis, between April 2011 and March 2012, 20 oysters were collected, measured and fixed in 10% formaldehyde. In order to identify the parasites, routine histological techniques were used. The specimens were embedded in paraffin and sections, 7 µm thick, were cut. These were then stained with Harris hematoxylin and eosin and were examined using an optical microscope. The parameters analyzed to investigate water quality showed that the temperature ranged from 23.9 °C to 29.3 °C, water salinity from 0.4 to 24.2 Practical Salinity Units PSU and recorded rainfall from 80 mm to 406.4 mm/month. During the parasitological analyses, infestation of the polychaete Neanthes succinea was observed in 41% of the oysters. Through histological techniques, the following parasites were identified: colonies of Rickettsia-like organisms (RLOs); the protozoa Nematopsis sp. and Ancistrocoma sp.; the turbellarian Urastoma sp.; the metacestode Tylocephalum sp. and an unidentified tapeworm. The data collected showed that there was low-intensity infection with and prevalence of parasites, except for Nematopsis sp., thus attesting that these cultivated oysters were in a healthy condition.

No presente trabalho, parasitos associados à ostra-do-mangue Crassostrea rhizophorae foram estudados em uma unidade de cultivo no estuário do rio Graciosa em Taperoá, Bahia. Mensalmente, entre abril de 2011 e março de 2012, 20 ostras foram coletadas, mensuradas e fixadas em formol a 10%. Para a identificação dos parasitos, foram utilizadas técnicas histológicas de rotina, com inclusão em parafina e obtenção de cortes com 7µm, corados com hematoxilina de Harris e eosina e examinados em microscopia de luz. Os parâmetros analisados para a qualidade da água mostraram que a temperatura variou de 23,9 °C a 29,3 °C, a salinidade de 0,4 a 24,2 PSU e a pluviometria de 80 mm a 406,4 mm/mês. Nas análises parasitológicas foram observadas infestações do poliqueta Neanthes succinea em 41% das ostras. A partir das técnicas histológicas foram identificados os seguintes parasitos: colônias de organismos assemelhados a Rickettsiae (RLOs); os protozoários Nematopsis sp. e Ancistrocoma sp.; o turbelário Urastoma sp.; o metacestóide Tylocephalum sp. e um platelminto não identificado. Os dados obtidos mostraram baixa intensidade de infecção e prevalência de parasitos, exceto para Nematopsis sp., atestando a boa condição de saúde das ostras no cultivo.

Parasites in the mangrove oyster Crassostrea rhizophorae cultivated in the estuary of the Graciosa River in Taperoá, Bahia / Parasitos na ostra-do-mangue Crassostrea rhizophorae cultivada no estuário do rio Graciosa em Taperoá, Bahia

In this work, parasites associated with the mangrove oyster Crassostrea rhizophorae were studied at a cultivation unit in the estuary of the Graciosa River in Taperoá, Bahia. On a monthly basis, between April 2011 and March 2012, 20 oysters were collected, measured and fixed in 10% formaldehyde. In order to identify the parasites, routine histological techniques were used. The specimens were embedded in paraffin and sections, 7 µm thick, were cut. These were then stained with Harris hematoxylin and eosin and were examined using an optical microscope. The parameters analyzed to investigate water quality showed that the temperature ranged from 23.9 °C to 29.3 °C, water salinity from 0.4 to 24.2 Practical Salinity Units PSU and recorded rainfall from 80 mm to 406.4 mm/month. During the parasitological analyses, infestation of the polychaete Neanthes succinea was observed in 41% of the oysters. Through histological techniques, the following parasites were identified: colonies of Rickettsia-like organisms (RLOs); the protozoa Nematopsis sp. and Ancistrocoma sp.; the turbellarian Urastoma sp.; the metacestode Tylocephalum sp. and an unidentified tapeworm. The data collected showed that there was low-intensity infection with and prevalence of parasites, except for Nematopsis sp., thus attesting that these cultivated oysters were in a healthy condition.(AU)

No presente trabalho, parasitos associados à ostra-do-mangue Crassostrea rhizophorae foram estudados em uma unidade de cultivo no estuário do rio Graciosa em Taperoá, Bahia. Mensalmente, entre abril de 2011 e março de 2012, 20 ostras foram coletadas, mensuradas e fixadas em formol a 10%. Para a identificação dos parasitos, foram utilizadas técnicas histológicas de rotina, com inclusão em parafina e obtenção de cortes com 7µm, corados com hematoxilina de Harris e eosina e examinados em microscopia de luz. Os parâmetros analisados para a qualidade da água mostraram que a temperatura variou de 23,9 °C a 29,3 °C, a salinidade de 0,4 a 24,2 PSU e a pluviometria de 80 mm a 406,4 mm/mês. Nas análises parasitológicas foram observadas infestações do poliqueta Neanthes succinea em 41% das ostras. A partir das técnicas histológicas foram identificados os seguintes parasitos: colônias de organismos assemelhados a Rickettsiae (RLOs); os protozoários Nematopsis sp. e Ancistrocoma sp.; o turbelário Urastoma sp.; o metacestóide Tylocephalum sp. e um platelminto não identificado. Os dados obtidos mostraram baixa intensidade de infecção e prevalência de parasitos, exceto para Nematopsis sp., atestando a boa condição de saúde das ostras no cultivo.(AU)

SISTEMAS DE CULTIVO, DENSIDADE E PARASITOLOGIA EM OSTRAS (Crassotrea gasar) CULTIVADAS NA AMAZÔNIA ORIENTAL

O objetivo do estudo foi avaliar os efeitos dos sistemas de cultivo, da densidade de estocagem e a parasitologia em ostra nativa (Crassotrea gasar) cultivadas na Amazônia, Brasil. Quatro experimentos foram conduzidos. No primeiro, foi utilizado 2000 sementes de ostras (altura de 20 mm), dispostas em dois sistemas de cultivo (SFLU - sistema flutuante e SFI - sistema fixo), com capacidade de 1000 ostras em cada. O delineamento foi inteiramente casualizado (DIC) com dois tratamentos (constituído em SFLU e SFI), no período de dezembro de 2016 a março de 2018. O crescimento (ALTmm), a sobrevivência (S%) dos animais e os custos de produção, foram determinados ao final da criação. No segundo, um total de 24.000 sementes (altura de 22,6±1,12 mm) foram distribuídas em dois sistemas de criação (SFLU e SFI), de novembro de 2018 a maio de 2019. O delineamento foi inteiramente ao acaso em esquema fatorial 2 x 3, com quatro repetições. Sendo o primeiro fator, o sistema de criação (SFLU e SFI) e o segundo, as diferentes densidades de estocagem para a fase semente (500, 1000 e 1500 indivíduos/travesseiro) e juvenis ( 216, 432 e 648 ostras/travesseiro). Mensalmente, a temperatura e a salinidade foram aferidos, assim como a biometria em cada densidade e sistema. Os dados foram utilizados para estimar altura (ALTmm), taxa de crescimento diário (TCD) e a sobrevivência (S%). No terceiro, 12 mil sementes (altura de 22 mm), foram distribuídas em 12 unidades experimentais, em delineamento inteiramente (DIC), entre novembro de 2018 e outubro de 2019, em SFI. Três densidades de estocagem de ostras foram avaliadas, divididas em três etapas independentes de criação: semente (4 meses de cultivo, 500, 1000 e 1500 ostras/travesseiro), juvenil (3 meses de cultivo, 216, 432 e 648 ostras/travesseiro) e engorda (4 meses de cultivo, 120, 240 e 360 ostras/travesseiro). A altura: (ALTmm), o comprimento (COMmm), a largura (LARmm), o peso (Pg), o índice de condição (IC), a taxa de crescimento diário em altura (TC/Alt), a taxa de crescimento diário em peso (TC/P) e a sobrevivência (S %), foram avaliados ao final de cada fase. Para a pesquisa parasitológica , 4 coletas de ostras foram conduzidas na comunidade de Nova Olinda, Augusto Corrêa, Pará; no período de maio de 2018 a fevereiro de 2019, constatando 30 em tamanho comercial (acima de 70 mm de altura), totalizando 120 espécimes. A ALTmm das ostras foi maior no SFLU (p<0,05) em relação ao SFI. O custo de implantação foi menor no SFI em relação ao SFLU. Não houve interação entre os sistemas de criação (SFLU e SFI) com as densidades de estocagem para as ostras na fase semente e juvenil, porém, somente para as sementes observou-se maior crescimento (45,56±2,00 mm) no SFLU em relação ao SFI (42,56±1,91 mm). A sobrevivência apresentou interação nas ostras na fase semente (acima de 96% na densidade de 500) e juvenil (acima de 98% independe da densidade) no SFI. Para taxa de crescimento diário, observamos uma correlação positiva com a temperatura e salinidade nas densidades de 500 e 1000 ostras/travesseiro para as sementes, já para a fase juvenil só foi observado esta correlação com a temperatura nas densidades de 216 e 462 ostras/travesseiro para os dois sistemas de criação. Na fase de semente, houve diferença (p< 0,05) para a ALT, LARG, P, TC/Alt, TC/P e S, entre as densidades de 500 e 1500, com maiores médias para a densidade de 500. Para a fase juvenil, observamos diferença (p< 0,05) para a S%, entre as densidades de estocagem de 216 e 648, com maior S% para a menor densidade. Na engorda, diferenças (p< 0,05) foram encontradas para as variáveis P e TC/P entre as densidades de 120 e 240, sendo maior para a densidade 120. Observamos diferença (p< 0,05) para a S% entre as densidades de 240 e 360, sendo melhor para a última densidade. A temperatura da água variou de 27,8 a 29,5 ºC, a salinidade de 4 a 23 UPS e a pluviosidade entre 13,4 e 654,5 mm. Observamos que as ostras variaram de tamanho em altura entre as coletas: I (79,6±8,2mm), II (70,3±5,2mm), III (97,6±7,3mm) e IV (97,6±9,9mm). Por meio das análises histológicas das ostras registramos 62 fêmeas, 47 machos e 11 espécimes de sexo indefinido7,24. Nematopsis foi o parasita de ocorrência na ostras atuando no divertículo digestivo, com maior intensidade de infestação (16,1) durante a coleta II e menor (4,2) na coleta IV. Observamos maior prevalência de Nematopsis na coleta I (83%) e menor na coleta IV (50%). Concluímos que o SFI pode ser adotado por ser um sistema difundindo na região e de baixo custo de implantação. Recomendamos para a fase semente a densidade de 500 ostras/travesseiro no sistema flutuante e a fase juvenil a densidade de até 462 ostras/travesserio independentemente do sistema de cultivo. A densidade de 1000 proporcionou o crescimento (ALT, COMP e LARG), P e S% superior a 70% em ostras na fase de semente, quando comparado as densidades de 500 e 1500. Nas fases juvenil e engorda, recomenda-se as densidades de 648 e 360, respectivamente, por não afetar o desempenho zootécnico de ostras cultivadas em SFI do tipo mesa. A ALTmm das ostras foi maior no SFLU (p<0,05) em relação ao SFI. O custo de implantação foi menor no SFI em relação ao SFLU. Houve maior prevalência (83%) do Nematopsis durante a coleta I, porém não houve alteração nos tecidos da ostra, que configure perdas econômicas. Contudo, recomendamos o monitoramento desse patógeno de ostras em cultivos da Amazônia.

The aim of the study was to evaluate the effects of cultivation systems, stocking density and parasitology on native oysters (Crassotrea gasar) grown in the Amazon, Brazil. Four experiments were conducted. In the first, 2000 oyster seeds (20 mm high) were used, arranged in two cultivation systems (SFLU - floating system and SFI - fixed system), with a capacity of 1000 oysters in each. The design was completely randomized (DIC) with two treatments (consisting of SFLU and SFI), from December 2016 to March 2018. The growth (ALTmm), the survival (S%) of the animals and the production costs, were determined at the end of creation. In the second, a total of 24,000 seeds (height of 22.6 ± 1.12 mm) were distributed in two rearing systems (SFLU and SFI), from November 2018 to May 2019. The design was entirely randomized in a scheme factorial 2 x 3, with four repetitions. Being the first factor, the breeding system (SFLU and SFI) and the second, the different stocking densities for the seed phase (500, 1000 and 1500 individuals / pillow) and juveniles (216, 432 and 648 oysters / pillow). Monthly, temperature and salinity were measured, as well as biometrics in each density and system. The data were used to estimate height (ALTmm), daily growth rate (TCD) and survival (S%). In the third, 12 thousand seeds (height of 22 mm) were distributed in 12 experimental units, in a completely delineated design (DIC), between November 2018 and October 2019, in SFI. Three stocking densities of oysters were evaluated, divided into three independent stages of creation: seed (4 months of cultivation, 500, 1000 and 1500 oysters / pillow), juvenile (3 months of cultivation, 216, 432 and 648 oysters / pillow) and fattening (4 months of cultivation, 120, 240 and 360 oysters / pillow). The height: (ALTmm), the length (COMmm), the width (LARmm), the weight (Pg), the condition index (IC), the daily growth rate in height (TC / Alt), the growth rate daily weight (TC / P) and survival (S%), were assessed at the end of each phase. For parasitological research, 4 oyster collections were conducted in the community of Nova Olinda, Augusto Corrêa, Pará; in the period from May 2018 to February 2019, verifying 30 in commercial size (above 70 mm in height), totaling 120 specimens. The ALTmm of the oysters was higher in the SFLU (p <0.05) compared to the SFI. The cost of implementation was lower at SFI compared to SFLU. There was no interaction between the rearing systems (SFLU and SFI) with the stocking densities for oysters in the seed and juvenile phase, however, only for the seeds there was greater growth (45.56 ± 2.00 mm) in the SFLU in relation to the SFI (42.56 ± 1.91 mm). Survival showed interaction in oysters in the seed phase (above 96% at density of 500) and juvenile (above 98% regardless of density) at SFI. For daily growth rate, we observed a positive correlation with temperature and salinity at densities of 500 and 1000 oysters / pillow for seeds, whereas for the juvenile phase, this correlation was only observed with temperature at densities of 216 and 462 oysters / pillow for both breeding systems. In the seed phase, there was a difference (p <0.05) for ALT, LARG, P, TC / Alt, TC / P and S, between the densities of 500 and 1500, with higher averages for the density of 500. For the juvenile phase, we observed a difference (p <0.05) for the S%, between the stocking densities of 216 and 648, with a higher S% for the lowest density. In fattening, differences (p <0.05) were found for the variables P and TC / P between the densities of 120 and 240, being greater for the density 120. We observed a difference (p <0.05) for the S% between the densities of 240 and 360, being better for the last density. The water temperature varied from 27.8 to 29.5 ºC, the salinity from 4 to 23 UPS and the rainfall between 13.4 and 654.5 mm. We observed that oysters varied in size and height between collections: I (79.6 ± 8.2mm), II (70.3 ± 5.2mm), III (97.6 ± 7.3mm) and IV (97, 6 ± 9.9mm). Through histological analysis of oysters, 62 females, 47 males and 11 specimens of undefined sex were registered7,24. Nematopsis was the parasite of occurrence in oysters acting in the digestive diverticulum, with the highest infestation intensity (16.1) during collection II and the lowest (4.2) in collection IV. We observed a higher prevalence of Nematopsis in collection I (83%) and lower in collection IV (50%). We conclude that SFI can be adopted because it is a system spreading in the region and with low implementation cost. We recommend for the seed phase the density of 500 oysters / pillow in the floating system and the juvenile phase the density of up to 462 oysters / pillow regardless of the cultivation system. The density of 1000 provided the growth (ALT, COMP and LARG), P and S% above 70% in oysters in the seed phase, when compared to densities of 500 and 1500. In the juvenile and fattening phases, the densities are recommended 648 and 360, respectively

Health assessment of the oyster Crassostrea rhizophorae on the southern coast of Bahia, northeastern Brazil

This study investigated the health of natural stocks of the oysterCrassostrea rhizophorae on the southern coast of Bahia in northeastern Brazil, during summer and winter 2010, at three localities (sampling points) in the estuaries of the Maraú (Camamu Bay) and Graciosa rivers. A total of 180 oysters (30/sampling point/season) were examined macroscopically for the presence of pathogens and anatomical changes. The specimens were subsequently fixed in Davidson solution, processed for paraffin embedding, sectioned and stained with Harris' hematoxylin and eosin. Histological analysis revealed the presence of Rickettsia-like organisms (RLOs), Ancistrocoma,Trichodina, Sphenophrya,Nematopsis, Urastoma,Bucephalus in the sporocyst phase, a nonspecific metacercaria, and a metacestode of genus Tylocephalum. The prevalence of infection was low except for parasitism byNematopsis sp. which also caused histopathological changes. The presence of Bucephalus sp. caused parasitic castration. These two pathogens significantly affect the health of C. rhizophorae.

Este estudo investigou a saúde de ostras da espécieCrassostrea rhizophorae de estoques naturais do Litoral Sul do Estado da Bahia, Nordeste do Brasil, durante o verão e o inverno de 2010, em três pontos amostrais distribuídos nos estuários dos rios Maraú (Baía de Camamu) e Graciosa. Um total de 180 ostras (30/ponto amostral/período) foram examinadas macroscopicamente para a presença de patógenos e alterações anatômicas e posteriormente fixadas em solução de Davidson, processadas para inclusão em parafina, seccionadas e coradas com hematoxilina de Harris e eosina. A análise histológica evidenciou a presença de organismos com características similares a Rickettsia(RLOs), Ancistrocoma, Trichodina,Sphenophrya, Nematopsis,Urastoma, Bucephalus em fase esporocística, metacercária inespecífica e metacestóide de Tylocephalum. As prevalências de infecção foram baixas, com exceção do parasitismo por Nematopsis sp., o qual também causou alterações histopatológicas. A presença deBucephalus sp. causou castração parasitária. Esses dois patógenos têm interferência significativa na saúde de C. rhizophorae.

Infecção e potencial zoonótico de Perkinsus beihaiensis e Nematopsis sp. em ostras Crassostrea spp. no litoral da Bahia

O estado da Bahia apresenta uma extensa faixa litorânea, com vários estuários e baías, que favorecem o estabelecimento de cultivos de moluscos bivalves. Para essa atividade, é necessário conhecer a biologia e a ecologia das espécies, assim como de organismos associados a estes, alguns dos quais podem causar enfermidades e consequentemente prejuízos à atividade de cultivo. Dentre os patógenos de moluscos bivalves estão os protozoários dos gêneros Perkinsus Levine, 1978 (Perkinsozoa) e Nematopsis Schneider, 1892 (Apicomplexa), sendo que o primeiro pode causar mortalidades em massa. Neste estudo teve-se por objetivos: (1) identificar as espécies nativas de ostras no estado da Bahia; (2) verificar a presença de Perkinsus em cada espécie, assim como a sua prevalência, intensidade de infecção e a correlação com a salinidade e (3) avaliar as alterações causadas por Perkinsus beihaiensis e Nematopsis sp. em camundongos Swiss (Mus musculus), via infecção experimental, para avaliação do potencial zoonótico desses protozoários. Para o primeiro objetivo, foram coletadas 320 ostras em 12 estações amostrais no centro-sul da Bahia, em bancos naturais de ostras, estruturas artificiais e em cultivos. A identificação foi feita com uso das ferramentas moleculares PCR, PCR-RFLP, sequenciamento de DNA e análise filogenética. Exceto pelo tamanho, não foram observadas diferenças morfológicas entre as espécies. As análises genéticas evidenciaram a presença de duas espécies de ostras na região: Crassostrea rhizophorae e C. gasar (= C. brasiliana). Para o segundo objetivo, 240 ostras Crassostrea spp. foram coletadas em oito locais do litoral sul da Bahia. As amostras foram submetidas ao cultivo Meio Fluido de Tioglicolato de Ray (RFTM), técnica histológica, PCR e sequenciamento de DNA. Perkinsus beihaiensis foi detectada nas duas espécies de ostras, com prevalência média de 82,8% via análise histológica e de 65,2% via RFTM em C. rhizophorae e de 70,5% e 35,7%, respectivamente, em C. gasar. A prevalência mais baixa foi observada em C. gasar e esta pode ter sido influenciada pelo hábitat e pela salinidade. Em ambas as espécies, este patógeno localizou-se principalmente no epitélio gástrico e intestinal, onde ocasionou, em casos de infecção severa, reação hemocitária. Tanto a prevalência quanto o nível de infecção estiveram positivamente correlacionados com a salinidade (r = > 0,8; p<0,05), que variou de 18 a 36, considerando-se todos os locais. Para avaliar os possíveis efeitos de P. beihaiensis e de Nematopsis sp. no humano, foi realizado um bioensaio com camundongos Swiss. Foram preparados pools da ostra C. rhizophorae, que foram submetidos à digestão péptica e depois inoculados nos camundongos por via intraperitoneal. Foram utilizados três grupos (G1-G3) com oito animais cada, que foram eutanasiados em intervalos de 15 (G1), 30 (G2) e 45 (G3) dias após a inoculação, sendo que do total, 6 animais eram o controle. Os camundongos foram monitorados durante todo o experimento quanto a sinais clínicos. Foram coletadas amostras de tecidos de vários órgãos, que foram analisados via histologia, RFTM e por ferramentas moleculares. Nos animais inoculados observou-se alteração de peso do baço e do fígado, além da presença de nódulos, principalmente no fígado. Na análise microscópica por RFTM evidenciou-se P. beihaiensis, com prevalência de até 100% em alguns animais. Esse patógeno foi associado a alterações nos nódulos linfoides do intestino (Placas de Peyer). Oocistos de Nematopsis sp. foram observados no fígado, causando infiltrado inflamatório. Os resultados sugerem um potencial zoonótico de ambos os patógenos. Com base nisso, recomenda-se monitoramentos costeiros mais frequentes e atenção para a qualidade sanitária das ostras para o consumo humano.

The State of Bahia has an extensive coastline, with several estuaries and bays, which favor the establishment of cultivation of bivalve molluscs. For this activity, it is necessary to know the biology and ecology of the species, as well as organisms associated with them, some of which can cause diseases and consequently damage to the cultivation activity. Among the bivalve mollusc´s pathogens is the protozoan Perkinsus Levine, 1978 (Perkinsozoa) and Nematopsis Schneider, 1892 (Apicomplexa), being that the former can cause mass mortalities. In Brazil, four species of this genus have already been recorded. In this study, the objectives were: (a) to identify native oyster species in the state of Bahia; (2) to verify the presence of Perkinsus in each species, as well as their prevalence, infection intensity and correlation with salinity; and (3) to evaluate the changes caused by Perkinsus beihaiensis and Nematopsis sp. in Swiss mice (Mus musculus), via experimental infection, in order to evaluate the zoonotic potential of these protozoa. For the first objective, 320 oysters were collected in 12 sampling stations, in natural oyster beds, in artificial structures and in crops. Identification was made using the molecular tools PCR, PCR-RFLP, DNA sequencing and phylogenetic analysis. Except for size, no morphological differences were observed between species. Genetic analysis revealed the presence of two species of oysters: Crassostrea rhizophorae and C. gasar (= C. brasiliana). For the second objective, 240 oysters Crassostrea spp. were collected from eight sites on the south coast of Bahia. Samples were submitted to Ray thioglycollate culture (RFTM), histological technique, PCR and DNA sequencing. Perkinsus beihaiensis was detected in both species of oysters, with a mean prevalence of 82.8% via histological analysis and of 65.2% via RFTM in C. rhizophorae and 70.5% and 35.7%, respectively, in C. gasar. The lowest prevalence was observed in C. gasar and this may have been influenced by habitat and by salinity. In both species, the pathogen was mainly located in the gastric and intestinal epithelium, where it caused, in cases of severe infection, hemocyte response. Both the prevalence and the level of infection were positively correlated with salinity (r => 0.8, p <0.05), which ranged from 18 to 36, considering all sites. To evaluate the possible effects of P. beihaiensis and Nematopsis sp. on humans, a bioassay was performed with Swiss mice. Pools of the C. rhizophorae were prepared, which were subjected to peptic digestion and then inoculated into the mice by intraperitoneal route. Three groups (G1-G3) with eight animals each were used, which were euthanized at intervals of 15 (G1), 30 (G2) and 45 (G3) days after inoculation, of which 6 animals were the control. Mice were monitored throughout the experiment for clinical signs. Samples of tissues from various organs were collected, which were analyzed by histology, RFTM and by molecular tools. In the inoculated animals, it was observed a change in spleen and liver weight, besides the presence of nodules, mainly in the liver. Microscopic analysis by RFTM revealed P. beihaiensis, with prevalence of up to 100% in some animals. This pathogen was associated with changes in intestinal lymphoid nodules (Peyer's patches). Oocysts of Nematopsis sp. were observed in the liver, causing inflammatory infiltrate. Therefore, the results suggest a zoonotic potential of both pathogens. Based on this, more frequent coastal monitoring and attention to the sanitary quality of oysters for human consumption is recommended.

Health assessment of the oyster Crassostrea rhizophorae on the southern coast of Bahia, northeastern Brazil / Avaliação da saúde da ostra Crassostrea rhizophorae no litoral sul da Bahia, nordeste do Brasil

This study investigated the health of natural stocks of the oyster Crassostrea rhizophorae on the southern coast of Bahia in northeastern Brazil, during summer and winter 2010, at three localities (sampling points) in the estuaries of the Maraú (Camamu Bay) and Graciosa rivers. A total of 180 oysters (30/sampling point/season) were examined macroscopically for the presence of pathogens and anatomical changes. The specimens were subsequently fixed in Davidson solution, processed for paraffin embedding, sectioned and stained with Harris' hematoxylin and eosin. Histological analysis revealed the presence of Rickettsia-like organisms (RLOs), Ancistrocoma, Trichodina, Sphenophrya, Nematopsis, Urastoma, Bucephalus in the sporocyst phase, a nonspecific metacercaria, and a metacestode of genus Tylocephalum. The prevalence of infection was low except for parasitism by Nematopsis sp. which also caused histopathological changes. The presence of Bucephalus sp. caused parasitic castration. These two pathogens significantly affect the health of C. rhizophorae.

Este estudo investigou a saúde de ostras da espécie Crassostrea rhizophorae de estoques naturais do Litoral Sul do Estado da Bahia, Nordeste do Brasil, durante o verão e o inverno de 2010, em três pontos amostrais distribuídos nos estuários dos rios Maraú (Baía de Camamu) e Graciosa. Um total de 180 ostras (30/ponto amostral/período) foram examinadas macroscopicamente para a presença de patógenos e alterações anatômicas e posteriormente fixadas em solução de Davidson, processadas para inclusão em parafina, seccionadas e coradas com hematoxilina de Harris e eosina. A análise histológica evidenciou a presença de organismos com características similares a Rickettsia (RLOs), Ancistrocoma, Trichodina, Sphenophrya, Nematopsis, Urastoma, Bucephalus em fase esporocística, metacercária inespecífica e metacestóide de Tylocephalum. As prevalências de infecção foram baixas, com exceção do parasitismo por Nematopsis sp., o qual também causou alterações histopatológicas. A presença de Bucephalus sp. causou castração parasitária. Esses dois patógenos têm interferência significativa na saúde de C. rhizophorae.

Parasites of the mangrove mussel Mytella guyanensis (Bivalvia: Mytilidae) in Camamu Bay, Bahia, Brazil

This contribution reports the parasites found in the mangrove mussel Mytella guyanensis in Camamu Bay, Bahia, Brazil. Samples were collected monthly from September 2006 through October 2007. A total of 460 individuals were collected, fixed in Davidson's solution, and processed by standard histological techniques, and the sections were stained with Harris hematoxylin and eosin (H&E). The water temperature ranged from 23.5 to 31.6 ºC, and the salinity from 25 to 37‰. Microscopic analysis showed Rickettsia-like organisms (RLOs), Nematopsis sp. (Apicomplexa), and Platyhelminthes, including a turbellarian, sporocysts of Bucephalus sp., metacercariae, and metacestodes of Tylocephalum sp. Parasites were observed mainly in the gills, mantle, and digestive gland. The prevalence of Nematopsis sp. was 100%, and in heavily infected mussels the tissues of the labial palps were damaged. RLOs occurred in high prevalence and intensity of infection in some periods. The digenean sporocysts showed moderate prevalence but high intensity of infection, and caused parasitic castration. In general, there was no significant spatial or temporal variation (p > 0.05) of the parasites, which is probably attributable to the small variations of temperature and salinity in the region.

Neste estudo, foram investigados os parasitos de Mytella guyanensis da Baía de Camamu (BA). As amostragens foram feitas mensalmente entre setembro de 2006 e outubro de 2007 e totalizaram 460 animais, que foram fixados em solução de Davidson e processados por técnica rotineira de histologia, com inclusão em parafina e coloração por hematoxilina de Harris e eosina. Foram evidenciados organismos assemelhados a Rickettsia (RLOs); Nematopsis sp. (Apicomplexa) e Platyhelminthes, incluindo um turbelário, esporocistos de Bucephalus sp. e o cestoide Tylocephalum sp. Os parasitos foram encontrados principalmente nas brânquias, no manto e na glândula digestiva. Todos os animais apresentaram Nematopsis sp., o que causou alteração nos palpos labiais em exemplares com alta infecção. RLOs ocorreram em alta prevalência e intensidade de infecção em alguns períodos. Esporocistos de trematódeos digenéticos, com prevalência moderada, mostraram-se em alta intensidade de infecção e causaram castração parasitária. Não houve variação temporal e espacial significativa (p > 0,05) dos parasitos, o que provavelmente se deveu à pequena amplitude de variação da temperatura e da salinidade na região.

Parasites of economically important bivalves from the southern coast of Bahia State, Brazil

This study investigated the parasites of three commercially important bivalve species (Crassostrea rhizophorae, Mytella guyanensis and Lucina pectinata) from the southern coast of Bahia, Brazil. A total of 540 specimens were collected in August 2009 and February 2010, at three localities. The bivalve specimens were measured on their longest axis, opened, and macroscopically examined for the presence of parasites or signs of disease. They were then fixed in Davidson' solution and subjected to routine histological processing, with paraffin embedding and H&E staining; next, the specimens were examined under a light microscope. No parasites were observed associated with L. pectinata. Rickettsia-like organisms (RLOs), Sphenophrya sp. (Ciliophora), Nematopsis sp. (Apicomplexa), Urastoma sp. (Turbellaria) and Bucephalus sp. (Digenea) were observed in both C. rhizophorae and M. guyanensis, as well as Ancistrocoma sp. (Ciliophora) and Tylocephalum sp. (Cestoda) in the former. A high prevalence of Nematopsis sp. was seen, but caused no apparent damage to the host. Bucephalus sp. caused the destruction of tissues, with castration, but showed low prevalence. The other parasites occurred in low prevalence and intensity, without causing significant damage.

Neste estudo foram investigados os parasitos de três espécies de bivalves de interesse econômico (Crassostrea rhizophorae, Mytella guyanensis e Lucina pectinata) da Bahia. Foram analisados 540 exemplares, obtidos em duas coletas (agosto-2009 e fevereiro-2010), em três localidades. Os bivalves foram medidos quanto ao seu maior eixo, abertos e examinados macroscopicamente quanto à presença de parasitos ou sinais de enfermidades. Depois disso, foram fixados em solução de Davidson e processados por rotina de histologia, com inclusão em parafina e coloração com H&E. O material foi examinado ao microscópio de luz. Nenhum parasito esteve associado a L. pectinata. Bactérias do tipo RLOs (organismos assemelhados a Rickettsia), Sphenophrya sp. (Ciliophora), Nematopsis sp. (Apicomplexa), Urastoma sp. (Turbellaria) e Bucephalus sp. (Digenea) foram observados tanto em C. rhizophorae quanto em M. guyanensis, sendo que a primeira apresentou ainda Ancistrocoma sp. (Ciliophora) e Tylocephalum sp. (Cestoda). Nematopsis sp. ocorreu em alta prevalência, porém, aparentemente, não causou danos aos bivalves. Bucephalus sp. causou destruição de tecidos, com castração, mas foi pouco prevalente. Os demais parasitos ocorreram em baixa prevalência e intensidade de infecção e sem causar danos.

Bucefalose e outras parasitoses associadas a bivalves de interesse econômico do Litoral e Baixo Sul da Bahia

Ostras e sururus estão entre os principais bivalves consumidos ao longo da costa da Bahia. Esses moluscos representam um importante recurso econômico, principalmente para as comunidades litorâneas. Por serem organismos filtradores, bivalves são especialmente suscetíveis a várias associações com outros organismos presentes nas águas circundantes. Neste estudo, realizou-se o diagnóstico de parasitos associados a três espécies de bivalves, às ostras Crassostrea rhizophorae e C. brasiliana e ao sururu Mytella guyanensis, do Litoral e Baixo Sul da Bahia, tendo sido a primeira espécie coletada no manguezal e as demais em um cultivo em sistema espinhel. As coletas de C. rhizophorae (n = 75) foram feitas de abril a junho de 2016 nas localidades de Ilhéus e Camamu e as de C. brasiliana (n = 30) e de M. guyanensis (n = 40) em julho de 2016 em Taperoá. Os exemplares foram processados nos laboratórios da Universidade Estadual de Santa Cruz (UESC). Todos foram submetidos à análise macroscópica e histológica e quando houve diagnóstico presuntivo para bucefalose, foi feita análise molecular, incluindo extração de DNA, PCR (Reação em Cadeia de Polimerase) e sequenciamento de DNA. A análise macroscópica evidenciou: (a) a presença do caranguejo pinoterídeo Pinnotheres ostreum em C. rhizophorae, com prevalência de 12% e (b) alterações na cor e textura de tecidos, típicas de bucefalose, em um exemplar de M. guyanensis. A análise histológica evidenciou associação parasitária com os protozoários: Sphenophrya sp., Ancistrocoma sp., Perkinsus sp., e Nematopsis sp. e com os metazoários Urastoma sp. e um Bucephalidae. Nematopsis sp. foi a única espécie comum a todos os hospedeiros, com prevalências de até 96% em C. rhizophorae, 90% em C. brasiliana e 85% em M. guyanensis, no qual causou destruição de tecidos. Perkinsus sp. foi comum às duas espécies de ostras, com prevalência de até 26,1% em C. rhizophorae e de 10% em C. brasiliana, sendo que este causou desorganização tecidual na glândula digestiva. Já o Bucephalidae, confirmado por análise molecular, ocorreu apenas em M. guyanensis, com prevalência de 5%, sendo que houve castração parasitária e destruição de tecidos. A salinidade, a temperatura, o habitat e as espécies hospedeiras influenciaram, de modo específico, na ocorrência e prevalência das parasitoses. Conclui-se que apesar dos danos causados por alguns parasitos, nenhuma das espécies investigadas encontra-se severamente ameaçada na região.

Oysters and mussels are among the main bivalves consumed along the coast of Bahia state. These molluscs represent an important economic resource, especially for the coastal communities. Because they are filtering organisms, bivalves are especially susceptible to various associations with other organisms present in the surrounding waters. In the present study, were diagnosed the parasites associated with three bivalve species, the oysters Crassostrea rhizophorae and C. brasiliana and the swamp mussel Mytella guyanensis, all from the Litoral and Baixo Sul of Bahia state, northeast of Brazil. The first species was collected in the mangrove and the others in a longline oyster farming system. The samples of C. rhizophorae (n = 75) were obtained from April to June of 2016, in the localities of Ilhéus and Camamu and those of C. brasiliana (n = 30) and M. guyanensis (n = 40) were collected in July 2016 at the locality of Graciosa. The specimens were processed in the laboratories of the State University of Santa Cruz (UESC). All were submitted to macroscopic and histological analysis and when there was a presumptive diagnosis for bucephalosis, molecular analysis including DNA extraction, PCR (Polymerase Chain Reaction) and DNA sequencing were performed. Macroscopically, was evidenced (a) the presence of the crab Pinnotheres ostreum in C. rhizophorae, with a prevalence of 12%, and (b) alterations in the color and texture of tissues, typical of bucephalosis, in M. guyanensis. Histological analysis showed parasitic association with the protozoa: Sphenophrya sp., Ancistrocoma sp., Perkinsus sp., and Nematopsis sp. and with the metazoa Urastoma sp. and a Bucephalidae. Nematopsis sp. was the only species common to all hosts, with prevalences of up to 96% in C. rhizophorae, 90% in C. brasiliana and 85% in M. guyanensis, in which it caused tissue destruction. Perkinsus sp. was common to both species of oysters, with a prevalence of up to 26.1% in C. rhizophorae and 10% in C. brasiliana, which caused tissue disorganization in the digestive gland. The Bucephalidae, confirmed by molecular analysis, occurred only in M. guyanensis, with a prevalence of 5%, with parasitic castration and tissue destruction. Salinity, temperature, habitat and host species had a specific influence on the occurrence and prevalence of parasites. We concluded that despite the damages caused by some parasites, none of the species investigated is severely threatened in the region.

Parasites of economically important bivalves from the southern coast of Bahia State, Brazil / Parasitos de bivalves de interesse econômico no Litoral Sul do Estado da Bahia, Brasil

This study investigated the parasites of three commercially important bivalve species (Crassostrea rhizophorae, Mytella guyanensis and Lucina pectinata) from the southern coast of Bahia, Brazil. A total of 540 specimens were collected in August 2009 and February 2010, at three localities. The bivalve specimens were measured on their longest axis, opened, and macroscopically examined for the presence of parasites or signs of disease. They were then fixed in Davidson' solution and subjected to routine histological processing, with paraffin embedding and H&E staining; next, the specimens were examined under a light microscope. No parasites were observed associated with L. pectinata. Rickettsia-like organisms (RLOs), Sphenophrya sp. (Ciliophora), Nematopsis sp. (Apicomplexa), Urastoma sp. (Turbellaria) and Bucephalus sp. (Digenea) were observed in both C. rhizophorae and M. guyanensis, as well as Ancistrocoma sp. (Ciliophora) and Tylocephalum sp. (Cestoda) in the former. A high prevalence of Nematopsis sp. was seen, but caused no apparent damage to the host. Bucephalus sp. caused the destruction of tissues, with castration, but showed low prevalence. The other parasites occurred in low prevalence and intensity, without causing significant damage.(AU)

Neste estudo foram investigados os parasitos de três espécies de bivalves de interesse econômico (Crassostrea rhizophorae, Mytella guyanensis e Lucina pectinata) da Bahia. Foram analisados 540 exemplares, obtidos em duas coletas (agosto-2009 e fevereiro-2010), em três localidades. Os bivalves foram medidos quanto ao seu maior eixo, abertos e examinados macroscopicamente quanto à presença de parasitos ou sinais de enfermidades. Depois disso, foram fixados em solução de Davidson e processados por rotina de histologia, com inclusão em parafina e coloração com H&E. O material foi examinado ao microscópio de luz. Nenhum parasito esteve associado a L. pectinata. Bactérias do tipo RLOs (organismos assemelhados a Rickettsia), Sphenophrya sp. (Ciliophora), Nematopsis sp. (Apicomplexa), Urastoma sp. (Turbellaria) e Bucephalus sp. (Digenea) foram observados tanto em C. rhizophorae quanto em M. guyanensis, sendo que a primeira apresentou ainda Ancistrocoma sp. (Ciliophora) e Tylocephalum sp. (Cestoda). Nematopsis sp. ocorreu em alta prevalência, porém, aparentemente, não causou danos aos bivalves. Bucephalus sp. causou destruição de tecidos, com castração, mas foi pouco prevalente. Os demais parasitos ocorreram em baixa prevalência e intensidade de infecção e sem causar danos.(AU)

Macro e micropatógenos em mexilhões Perna perna (Linnaeus, 1758) e implicações na mitilicultura catarinense

O incremento da mitilicultura catarinense gerou a necessidade da identificação dos patógenos que acometem o cultivo de Perna perna nos municípios de Palhoça, Florianópolis, Governador Celso Ramos e Penha. Durante o período de julho de 2010 a junho de 2011 foram coletados 720 animais em cada local de cultivo, totalizando 2.880 mexilhões. Do total coletado, a metade (1.440) foi observada ao estereomicroscópio onde foram realizadas as coletas do turbelário Urastoma cyprinae e dos copépodes Pseudomyicola spinosus e Monstrilla sp., que após serem tratados através dos protocolos de Microscopia Eletrônica de Varredura e clarificação com Polyvinil-Lactophenol foram medidos e fotografados ao microscópio de contraste diferencial de fase (DIC) e tratados para histologia de cortes seriados, que auxiliaram nas identificações das espécies e gênero. Os outros mexilhões (1.440) tiveram seus tecidos processados conforme os protocolos de Histologia Clássica e da OIE: Monocamadas de hemócitos, Imprint e Cultivo em Meio de Tioglicolato de Ray. Através das análises dos cortes histológicos foi identificada a presença dos protozoários Ancistrocoma sp. e Nematopsis sp. e dos metazoários Tylocephalum sp., Urastoma cyprinae, Pseudomyicola spinosus, Monstrilla sp. e Bucephalus margaritae, já através dos protocolos da OIE, foi verificado que as doenças de notificação obrigatória não estão presentes nos cultivos de mexilhão de Santa Catarina. Dos patógenos registrados por esta pesquisa, o Cestoda Tylocephalum sp. é responsável pela ocorrência de infiltração hemocitária e o Trematoda Bucephalus margaritae, pelo alto índice de mexilhões de sexo indeterminado e castração parasitária

The increment of mytiliculture in the municipalities of Santa Catarina, Palhoça, Florianópolis, Governador Celso Ramos e Penha, generated the demand for pathogens identification in Perna perna. During the period July 2010 to June 2011 were collected 720 animals in each studied local, totaling 2,880 mussels. From the total collected, half (1,440) was observed under a microscope stereoscope, where was collected the tuberllary Urastoma cyprinae and the copepods Pseudomyicola spinosus and Monstrilla sp.. After sampling, the parasites were analyzed by scanning electron microscopy differential contrast microscope (DIC), and processed for histological serial sections for species identification. Other mussels (1,440) had their tissues processed according to classical histology protocols and OIE: Monolayers of hemocytes, Imprint and Cultivation Ray's Fluid Thioglycollate Medium. Through the analysis of histological sections showed the presence of protozoa Ancistrocoma sp. and Nematopsis sp. and metazoan Tylocephalum sp., Urastoma cyprinae, Pseudomyicola spinosus, Monstrilla sp. and Bucephalus margaritae, already through the OIE protocols, it was found that the notifiable diseases are not present in mussel cultivated in the studied location of Santa Catarina. Pathogens recorded by this survey, the Cestoda Tylocephalum sp. is responsible for the occurrence of hemocyte infiltration and the Trematoda Bucephalus margaritae, the high rate of indeterminate sex and parasitic castration mussels

Patologias que afetam o marisco branco Mesodesma mactroides (Bivalvia: Mesodesmatidae)

O presente trabalho analisou o estado de saúde do molusco de areia Mesodesma mactroides do litoral do Estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Foram feitas análises histopatológicas de moluscos adultos coletados durante as quatro estações do ano de 2012 na praia do Cassino (Capítulo 1). No Capítulo 2 foram analisados amostras teciduais, com a utilização de microscopia óptica e microscopia eletrônica de transmissão, de juvenis de M. mactroides moribundos durante um evento de mortalidade massiva ocorrido no ano de 2011. No Capítulo 3 foi feito um screening de doenças de notificação obrigatória pela Organização Mundial de Sanidade Animal (OIE) (marteiliose, perkinsose, bonamiose, mikrocitose e infecção pelo vírus herpes de ostreídeos - OsHV -var) com a utilização de análise molecular utilizando a técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) em M. mactroides coletados desde Capão da Canoa (litoral norte do Rio Grande do Sul) até o Chuí (fronteira sul do Estado). No Capítulo 4 foi analisado o efeito de baixas salinidades na sobrevivência de juvenis e adultos de M. mactroides e o quadro patológico associado. Por fim, no Capítulo 5, foi realizado um experimento avaliando a capacidade do marisco branco de reagir a presença de um corpo estranho (partículas de carbono) injetado no pé muscular. Os parasitos mais comuns foram os ciliados Trichodina sp. localizados na brânquia e turbelários Paravortex mesodesma na luz do intestino. Apesar de nenhum registro de dano aos hospedeiros, tricodinos quando em elevada densidade podem obstruir as brânquias e os turbelários podem causar a oclusão da luz do tubo intestinal. Parasitos de importância intermediária, como coccídeos semelhantes à Pseudoklossia e gregarinas Nematopsis sp. foram encontrados raramente e em baixa intensidade, causando baixa resposta inflamatória nos hospedeiros. Metacercárias indeterminadas de Digenea localizadas na ponta dos sifões causando a ruptura das fibras musculares e leve infiltração hemocitária foram observados em baixa prevalência e intensidade. Esporocistos indeterminados de Digenea foram registrados raramente entre os túbulos digestivos causando resposta hemocitária severa. Procariontes do gênero Rickettsia foram observados raramente nos mariscos adultos, entretanto estes organismos foram registrados em 100% dos juvenis moribundos, logo sendo associado ao evento de mortalidade. Através das analises de PCR, não foi registrada nenhuma doença de notificação obrigatória pela OIE em M. mactroides. A salinidade média letal para 48h de exposição foi de 6,5 e 5,7 para adultos e juvenis, respectivamente. Já para 96h de 10 exposição, a salinidade média letal foi de 10,5 e 8,8 para adultos e juvenis, respectivamente. Os mariscos expostos a salinidades abaixo de 15 apresentaram edema intracelular e focos necróticos no epitélio dos túbulos digestivos e oclusão da luz dos túbulos digestivos. Através do experimento realizado no Capítulo 5, foi possível demonstrar importantes mudanças morfológicas relacionadas a inflamação e morte celular resultante da injeção de tinta nanquim no marisco branco, que foram eficientes em eliminar o material estranho através de fagocitose pelos hemócitos, diapedese pelo epitélio intestinal e também através das brânquias e rim. Analise de microscopia eletrônica evidenciou apoptose e estresse do retículo endoplasmático em células nas quais se acumularam as partículas de carbono injetadas.

This work reports on the health state of the yellow clam Mesodesma mactroides from the coast of the Rio Grande State, southern Brazil. Histopathological analyses were held using adult clams sampled in Cassino beach in four seasons in 2012 (Chapter 1). In the Chapter 2 it was analyzed, through light microscopy and transmission electronic microscopy, moribund juveniles M. mactroides during a mortality episode occurred in 2011. In the Chapter 3, it was realized a screening of notifiable diseases by the World Organization of Animal Health (OIE) (marteiliosis, perkinsosis, bonamiosis, mikrocitosis and the infection of the micro variant of the Ostreid herpes virus - OsHV -var) through molecular tools using the polimerase chain reaction (PCR) in yellow clams collected since Capão da Canoa (north shore of the Rio Grande do Sul State) to Chuí (most meridional point of Brazil). In the Chapter 4, it was analyzed the effect of low salinities in the survival of juveniles and adults yellow clams, and the associated pathological alterations. Finally, in the Chapter 5, it was realized an experiment to evaluate the yellow clam capacity to react to presence of a foreign particle (India ink = carbon particles) artificially injected in the muscular foot. The most common parasites recorded were ciliates Trichodina sp. in the gills and turbellarians Paravortex mesodesma in the intestinal lumen. Despite no evidence of damage to the hosts, trichodines when in high intensity can obtrude the gill and the turbellarians can obtrude the intestinal lumen. Parasites with intermediate importance, resembling the coccidian Pseudoklossia and gregarines Nematopsis sp. were rarely found, causing low inflammatory response to the hosts. Undeterminate metacercariae (Digenea) located in the siphons causing disruption of the muscle and light infiltration of hemocytes were found in low prevalence and intensity. Undeterminated sporocysts (Digenea) were rarely recorded in the hemocoele of the digestive gland causing severe hemocyte response. Procaryotes of the Rickettsia genus were rarelly found in the adult clams, however, these prokaryotes were found in 100% of moribund juveniles, and therefore associated to the mortality event. Through the PCR analyses, it was not recorded any notifiable diseases by OIE in the yellow clam. The lethal salinity for 48h of exposition were 6.5 and 5.7 to adults and juveniles, respectively. For 96h of exposition, the mean lethal salinity were 10.5 e 8.8 to adults and juveniles, respectively. The clams exposed to salinities < 15 presented intracellular edema and necrotic focus in the epithelium of digestive tubules and the occlusion of the digestive tubules. Through the experiment 12 realized in the Chapter 5, it was possible to demonstrate important morphological alterations related to inflammation and cell death resulting from the India ink injections in the yellow clam, which were efficient in eliminate the ink particles through phagocytosis by the hemocytes, diapedesis across the epithelia of the intestine, gills and kidney. Electron microscopy analyses revealed apoptosis and endoplasmic reticulum stress in the cells where the ink particles accumulated.

Nematopsis sp. (Apicomplexa: Eugregarinida) em Mytella guyanensis (Lamarck, 1819) (Bivalvia:Mytilidae) da Região Estuarina do Rio Cachoeira, Ilhéus, Bahia, Brasil / Nematopsis sp. (Apicomplexa: Eugregarinida) in Mytella guyanensis (Lamarck, 1819) (Bivalvia: Mytilidae) from estuarine region of the Cachoeira river, Ilhéus, Bahia, Brazil

Exemplares do molusco Mytella guyanensis (Bivalvia: Mytilidae) da região estuarina do Rio Cachoeira (Ilhéus, Bahia) foram investigados quanto à freqüência de ocorrência e sítios de infecção por protozoários do gênero Nematopsis Schneider, 1892 (Apicomplexa: Eugregarinida: Porosporidae), no período entre agosto de 2005 e julho de 2006. Em 480 animais analisados, medindo entre 34,5 e 74,9 mm de altura (Média: 55,4 mm; DP ± 6,7), 387 apresentaram em seus tecidos o parasito e nestes, os locais com maior freqüência de ocorrência do Nematopsis foram as brânquias (298 animais) e o manto (248). O parasito foi também observado na glândula digestiva e na musculatura. Alguns indivíduos gravemente infectados apresentaram modificações na conformação das brânquias e do manto.(AU)

Individuals of the clam Mytella guyanensis (Bivalvia: Mytilidae) from the estuarine region of the Cachoeira river (Ilhéus, Bahia) have been analyzed to detect the frequency of occurrence and infected sites by protozoans of the genus Nematopsis Schneider, 1892 (Apicomplexa: Eugregarinida: Porosporidae), in the period between August 2005 and May 2006. A total of 480 individuals were analyzed, measuring between 34.5 and 74.9 mm of height (Average: 55.4 mm; DP ± 6.7). Nematopsis were found in 387 of them, occurring more frequently within the gills (298 animals) and the mantle (248). The parasite was also observed in the digestive gland and the musculature. Some severely infected individuals presented modifications in the conformation of the gills and the mantle.(AU)