Avaliação da atividade funcional dos neutrófilos sanguíneos em ovelhas primíparas e pluríparas da raça Lacaune / [Functional evaluation of blood neutrophils in primiparous and pluriparous Lacaune ewes]

This study aimed to evaluate the neutrophil oxidative metabolism and phagocytosis of Zymonsan particles of primiparous and pluriparous Lacaune ewes during the first 30 days after lambing. A total of 20 ewes were evaluated, 10 primiparous (GPR) and 10 pluriparous (GPL). Evaluation of basal oxidative metabolism was performed using the nitroblue tetrazolium (NBT) technique, stimulating neutrophil phagocytosis with Zymosan particles. Blood samples were collected at parturition day (M1) and 1, 3, 7, 15 and 30 days after parturition, corresponding to M2, M3, M4, M5 and M6, respectively. In relation to the groups, GPR presented lower oxidative basal metabolism neutrophils in M1 compared to M4, in M3 with M1, M2, M4 and M5. In M4 and M5 differences were found at all times and in M6 with M4 and M5. Higher percentage of neutrophils than phagocytes were found in M4, M5 and M6 than in M1 and M2 in GPL animals. At all times GPR presented a lower percentage of phagocytosis than GPL. Thus it is concluded that the immune response in pluriparous sheep was more efficient than in primiparous sheep.(AU)

Efeito do Enterococcus faecium e Saccharomyces cerevisiae na resposta imunológica, parâmetros hematológicos e ganho de peso de bezerros alimentados com silagem de milho / Effect of the Enterococcus faecium and Saccharomyces cerevisiae in the immunological response, hematological parameters and body weight of calves fed with corn silage / Efecto de Enterococcus faecium y Saccharomyces cerevisiae en la respuesta inmunológica, parámetros hematológicos y ganancia de peso de terneros alimentados con ensilaje de maíz

O uso de probióticos a base de leveduras melhora o ganho de peso e o sistema imunológico de bovinos frente a grandes desafios imunológicos, no entanto permanece a dúvida se seu uso também apresentaria efeito em desafios mais tênues. Desta maneira, o presente trabalho verificou se o uso de probiótico a base de Enterococcus faecium e Saccaromyces cerevisiae via oral interfere na imunidade inata e no peso de bezerros sadios, em fase de crescimento, alimentados principalmente com silagem de milho. Para tanto, 12 bezerros da raça Jersey (120 kg ±50 kg e 4-7 meses de idade), foram alocados nos grupos controle (n=6) ou tratamento (n=6), de acordo com a oferta de probiótico (2g/dia, via oral) durante 45 dias. Nos dias 0, 15, 30 e 45, os animais foram submetidos a pesagens, exames clínicos, e colheita de sangue para realização de hemograma e mensuração do metabolismo oxidativo neutrofílico. Observou-se que, o probiótico promoveu pequeno e pontual incremento na função neutrofilica sanguínea (P=0,10, D15), incremento nos valores de hematócrito e hemoglobina (P=0,03 e 0,05, D45), além de maior ganho de peso nas fases iniciais da administração do suplemento (P=0,05), permitindo concluir que o suplemento é benéfico para animais em fase de adaptação de trocas de dieta e de manejo, mesmo quando estes desafios são tênues.(AU)

The use of yeast probiotics improves body weight gain and the immune system of cattle submitted to husbandry challenges, however the question remains whether the probiotics could have an effect on more tenuous challenges. In this way, the present study verified if the use of probiotic (Enterococcus faecium and Saccharomyces cerevisiae) provided orally, interferes with the innate immunity and body weight of calves fed mainly with corn silage. Twelve Jersey calves (120 kg ± 50 kg and 4-7 months of age) were allocated to the control (n = 6) or treatment (n = 6) group according to the probiotic supply (2 g / day, orally) for 45 days. On days 0, 15, 30 and 45, the animals were weighted, and submitted to clinical examinations, and blood collection for hemogram and measurement of neutrophil oxidative metabolism. It was observed that the probiotic promoted a slight and punctual increase in blood neutrophilic function (P = 0.10, D15), increased hematocrit and hemoglobin values P = 0.03 and 0.05, D45) and increased the body weight gain in the initial phases of supplementation (P = 0.08), allowing to conclude that the probiotic is beneficial for animals in the adaptation phase of diet changes and management, even when these challenges are mild.(AU)

El uso de probióticos de levadura mejora el aumento de peso corporal y el sistema inmunológico del ganado sometido a los desafíos de la cría, sin embargo, la pregunta sigue siendo si los probióticos podrían tener un efecto en desafíos más tenues. De esta manera, el presente estudio verificó si el uso de probióticos (Enterococcus faecium y Saccharomyces cerevisiae) proporcionado por vía oral interfiere con la inmunidad innata y el peso corporal de los terneros alimentados principalmente con ensilaje de maíz. Doce terneros de Jersey (120 kg ± 50 kg y 4-7 meses de edad) se asignaron al grupo control (n = 6) o tratamiento (n = 6) según el suministro de probióticos (2 g / día, por vía oral) para 45 dias. En los días 0, 15, 30 y 45, los animales se pesaron y se sometieron a exámenes clínicos y se recogieron muestras de sangre para el hemograma y la medición del metabolismo oxidativo de los neutrófilos. Se observó que el probiótico promovió un aumento leve y puntual de la función neutrofílica en sangre (P = 0,10, D15), aumento de los valores de hematocrito y hemoglobina (P = 0,03 y 0,05, D45) y aumento de la ganancia de peso corporal en las fases iniciales de la suplementación. (P = 0.08), lo que permite concluir que el probiótico es beneficioso para los animales en la fase de adaptación de los cambios y el manejo de la dieta, incluso cuando estos desafíos son leves.(AU)

Efeito do Enterococcus faecium e Saccharomyces cerevisiae na resposta imunológica, parâmetros hematológicos e ganho de peso de bezerros alimentados com silagem de milho / Effect of the Enterococcus faecium and Saccharomyces cerevisiae in the immunological response, hematological parameters and body weight of calves fed with corn silage / Efecto de Enterococcus faecium y Saccharomyces cerevisiae en la respuesta inmunológica, parámetros hematológicos y ganancia de peso de terneros alimentados con ensilaje de maíz

O uso de probióticos a base de leveduras melhora o ganho de peso e o sistema imunológico de bovinos frente a grandes desafios imunológicos, no entanto permanece a dúvida se seu uso também apresentaria efeito em desafios mais tênues. Desta maneira, o presente trabalho verificou se o uso de probiótico a base de Enterococcus faecium e Saccaromyces cerevisiae via oral interfere na imunidade inata e no peso de bezerros sadios, em fase de crescimento, alimentados principalmente com silagem de milho. Para tanto, 12 bezerros da raça Jersey (120 kg ±50 kg e 4-7 meses de idade), foram alocados nos grupos controle (n=6) ou tratamento (n=6), de acordo com a oferta de probiótico (2g/dia, via oral) durante 45 dias. Nos dias 0, 15, 30 e 45, os animais foram submetidos a pesagens, exames clínicos, e colheita de sangue para realização de hemograma e mensuração do metabolismo oxidativo neutrofílico. Observou-se que, o probiótico promoveu pequeno e pontual incremento na função neutrofilica sanguínea (P=0,10, D15), incremento nos valores de hematócrito e hemoglobina (P=0,03 e 0,05, D45), além de maior ganho de peso nas fases iniciais da administração do suplemento (P=0,05), permitindo concluir que o suplemento é benéfico para animais em fase de adaptação de trocas de dieta e de manejo, mesmo quando estes desafios são tênues.

The use of yeast probiotics improves body weight gain and the immune system of cattle submitted to husbandry challenges, however the question remains whether the probiotics could have an effect on more tenuous challenges. In this way, the present study verified if the use of probiotic (Enterococcus faecium and Saccharomyces cerevisiae) provided orally, interferes with the innate immunity and body weight of calves fed mainly with corn silage. Twelve Jersey calves (120 kg ± 50 kg and 4-7 months of age) were allocated to the control (n = 6) or treatment (n = 6) group according to the probiotic supply (2 g / day, orally) for 45 days. On days 0, 15, 30 and 45, the animals were weighted, and submitted to clinical examinations, and blood collection for hemogram and measurement of neutrophil oxidative metabolism. It was observed that the probiotic promoted a slight and punctual increase in blood neutrophilic function (P = 0.10, D15), increased hematocrit and hemoglobin values P = 0.03 and 0.05, D45) and increased the body weight gain in the initial phases of supplementation (P = 0.08), allowing to conclude that the probiotic is beneficial for animals in the adaptation phase of diet changes and management, even when these challenges are mild.

El uso de probióticos de levadura mejora el aumento de peso corporal y el sistema inmunológico del ganado sometido a los desafíos de la cría, sin embargo, la pregunta sigue siendo si los probióticos podrían tener un efecto en desafíos más tenues. De esta manera, el presente estudio verificó si el uso de probióticos (Enterococcus faecium y Saccharomyces cerevisiae) proporcionado por vía oral interfiere con la inmunidad innata y el peso corporal de los terneros alimentados principalmente con ensilaje de maíz. Doce terneros de Jersey (120 kg ± 50 kg y 4-7 meses de edad) se asignaron al grupo control (n = 6) o tratamiento (n = 6) según el suministro de probióticos (2 g / día, por vía oral) para 45 dias. En los días 0, 15, 30 y 45, los animales se pesaron y se sometieron a exámenes clínicos y se recogieron muestras de sangre para el hemograma y la medición del metabolismo oxidativo de los neutrófilos. Se observó que el probiótico promovió un aumento leve y puntual de la función neutrofílica en sangre (P = 0,10, D15), aumento de los valores de hematocrito y hemoglobina (P = 0,03 y 0,05, D45) y aumento de la ganancia de peso corporal en las fases iniciales de la suplementación. (P = 0.08), lo que permite concluir que el probiótico es beneficioso para los animales en la fase de adaptación de los cambios y el manejo de la dieta, incluso cuando estos desafíos son leves.

Effects of treatment with quercetin on the quality of cryopreserved bovine semen

Background: Semen cryopreservation is one of the most common biotechnologies in the reproduction of animals ofagricultural interest, especially bulls. However, cryopreservation can be harmful to sperm cells, with susceptibility tooxidative stress being one of the causes. The addition of antioxidants such as quercetin may inhibit and/or reduce suchdamage, reducing fertility. Quercetin can increasing sperm motility and interaction capacity between spermatozoa-oocyte,to increase cellular metabolism and reduced DNA fragmentation and oxidation following thawing. Therefore, the objective of this study was to evaluate the protective effect of quercetin on the metabolism of bovine semen following thawing.Materials, Methods & Results: Three Brahman bulls in reproduction age and previously considered fit for reproductionwere used. The semen samples were collected via the electroejaculation method, and the samples were homogenized toform pooled semen from three ejaculates, which was diluted in Tris-yolk egg-glicerol diluent medium. Quercetin was addedto diluent, to final concentrations of 0, 5, 10, 15 and 20 μg.mL-1 in each group. The samples were kept frozen in strawsof 500 μL, with concentration of 40,000,000 spermatozoid / mL for 15 days and were thawed in water at 36°C for 30 s.All the tests was performed in five replicates. The cell metabolism status was evaluated by quantification of superoxideradical production with a nitroblue tetrazolium test (NBT) and scanning spectrophotometry. By spermatic evaluation, thefollowing parameters were evaluated via the computerized system of sperm analysis (CASA): total motility (TM, %),progressive motility (PM, %), velocity curved line (VCL, mm/s), velocity straight line (VSL, mm/s), velocity averagepath (VAP, mm/s), distance curved line (DCL, mm), distance straight line (DSL, mm), distance average path (DAP, mm),amplitude of lateral head displacement (ALH, mm), beat cross frequency (BCF, Hz), wobble...

Effects of treatment with quercetin on the quality of cryopreserved bovine semen

Background: Semen cryopreservation is one of the most common biotechnologies in the reproduction of animals ofagricultural interest, especially bulls. However, cryopreservation can be harmful to sperm cells, with susceptibility tooxidative stress being one of the causes. The addition of antioxidants such as quercetin may inhibit and/or reduce suchdamage, reducing fertility. Quercetin can increasing sperm motility and interaction capacity between spermatozoa-oocyte,to increase cellular metabolism and reduced DNA fragmentation and oxidation following thawing. Therefore, the objective of this study was to evaluate the protective effect of quercetin on the metabolism of bovine semen following thawing.Materials, Methods & Results: Three Brahman bulls in reproduction age and previously considered fit for reproductionwere used. The semen samples were collected via the electroejaculation method, and the samples were homogenized toform pooled semen from three ejaculates, which was diluted in Tris-yolk egg-glicerol diluent medium. Quercetin was addedto diluent, to final concentrations of 0, 5, 10, 15 and 20 μg.mL-1 in each group. The samples were kept frozen in strawsof 500 μL, with concentration of 40,000,000 spermatozoid / mL for 15 days and were thawed in water at 36°C for 30 s.All the tests was performed in five replicates. The cell metabolism status was evaluated by quantification of superoxideradical production with a nitroblue tetrazolium test (NBT) and scanning spectrophotometry. By spermatic evaluation, thefollowing parameters were evaluated via the computerized system of sperm analysis (CASA): total motility (TM, %),progressive motility (PM, %), velocity curved line (VCL, mm/s), velocity straight line (VSL, mm/s), velocity averagepath (VAP, mm/s), distance curved line (DCL, mm), distance straight line (DSL, mm), distance average path (DAP, mm),amplitude of lateral head displacement (ALH, mm), beat cross frequency (BCF, Hz), wobble...(AU)

Assessment of the oxidative metabolism of calves' bronchoalveolar cells: comparison between NBT and fluorimetric techniques / Mensuração do metabolismo oxidativo de células broncoalveolares de bezerros: comparação entre as técnicas de NBT e fluorimétrica

Evaluation of alveolar macrophage functions of cattle is an important tool in order to assess whether measures taken during the cattle husbandry can decrease the respiratory tract defense. The aim of this study was to determine whether dexamethasone used at therapeutic dose can affect the oxidative metabolism of alveolar macrophages of cattle. This was evaluated by two tests, the fluorometric and colorimetric. The similarity of the results was studied, using alveolar macrophages of six healthy cattle, obtained from bronchoalveolar lavage on a basal and an immunosuppressant moment after the application of dexamethasone. For the fluorometric test, alveolar macrophages were incubated with Staphylococcus aureus and 2'-7'dichlorohidroflurescein, and analyzed by flow cytometer. For the colorimetric test, alveolar macrophages were incubated with Phorbol 12- miristate-13 acetate and nitroblue tetrazolium, dissolved and analyzed in a spectrophotometer. It was noted that dexamethasone therapeutic dose (0.05 mg/kg) reduced the functions of alveolar macrophages from healthy bovine. This result was observed by both tests with the difference that the flow cytometry assay was more informative for identifying which specific cellular function has been compromised.(AU)

A avaliação das funções de macrófagos alveolares de bovinos é uma ferramenta importante no intuito de analisar se medidas adotadas durante a criação desses animais diminuem a defesa do trato respiratório, aumentando a susceptibilidade à pneumonia. O objetivo deste trabalho foi verificar se a dexametasona em dose terapêutica afeta o metabolismo oxidativo de macrófagos alveolares de bovinos por meio de duas provas, a fluorimétrica e a colorimétrica, avaliando a similaridade dos resultados. Para tanto, utilizaram-se macrófagos alveolares de seis bovinos sadios, obtidos por meio de lavados broncoalveolares em um momento basal e em um momento imunossupressor, após a aplicação da dexametasona. Na prova fluorimétrica, os macrófagos alveolares foram incubados com Staphylococcus aureus e o fluorófilo 2'-7' diclorohidrofluresceína e analisados por citometria de fluxo. Na prova colorimétrica, os macrófagos alveolares foram incubados com Phorbol 12- miristate-13 acetate e nitroazul de tetrazolium, dissolvidos e analisados em espectofotômetro. Observou-se que a dexametasona em dose terapêutica (0,05 mg/kg) reduziu as funções dos macrófagos alveolares de bovinos sadios, sendo este resultado obtido em ambas as provas, com a diferença de que o teste de citometria de fluxo foi mais esclarecedor por identificar qual função celular específica foi comprometida.(AU)

Assessment of the oxidative metabolism of calves' bronchoalveolar cells: comparison between NBT and fluorimetric techniques / Mensuração do metabolismo oxidativo de células broncoalveolares de bezerros: comparação entre as técnicas de NBT e fluorimétrica

Evaluation of alveolar macrophage functions of cattle is an important tool in order to assess whether measures taken during the cattle husbandry can decrease the respiratory tract defense. The aim of this study was to determine whether dexamethasone used at therapeutic dose can affect the oxidative metabolism of alveolar macrophages of cattle. This was evaluated by two tests, the fluorometric and colorimetric. The similarity of the results was studied, using alveolar macrophages of six healthy cattle, obtained from bronchoalveolar lavage on a basal and an immunosuppressant moment after the application of dexamethasone. For the fluorometric test, alveolar macrophages were incubated with Staphylococcus aureus and 2'-7'dichlorohidroflurescein, and analyzed by flow cytometer. For the colorimetric test, alveolar macrophages were incubated with Phorbol 12- miristate-13 acetate and nitroblue tetrazolium, dissolved and analyzed in a spectrophotometer. It was noted that dexamethasone therapeutic dose (0.05 mg/kg) reduced the functions of alveolar macrophages from healthy bovine. This result was observed by both tests with the difference that the flow cytometry assay was more informative for identifying which specific cellular function has been compromised.(AU)

A avaliação das funções de macrófagos alveolares de bovinos é uma ferramenta importante no intuito de analisar se medidas adotadas durante a criação desses animais diminuem a defesa do trato respiratório, aumentando a susceptibilidade à pneumonia. O objetivo deste trabalho foi verificar se a dexametasona em dose terapêutica afeta o metabolismo oxidativo de macrófagos alveolares de bovinos por meio de duas provas, a fluorimétrica e a colorimétrica, avaliando a similaridade dos resultados. Para tanto, utilizaram-se macrófagos alveolares de seis bovinos sadios, obtidos por meio de lavados broncoalveolares em um momento basal e em um momento imunossupressor, após a aplicação da dexametasona. Na prova fluorimétrica, os macrófagos alveolares foram incubados com Staphylococcus aureus e o fluorófilo 2'-7' diclorohidrofluresceína e analisados por citometria de fluxo. Na prova colorimétrica, os macrófagos alveolares foram incubados com Phorbol 12- miristate-13 acetate e nitroazul de tetrazolium, dissolvidos e analisados em espectofotômetro. Observou-se que a dexametasona em dose terapêutica (0,05 mg/kg) reduziu as funções dos macrófagos alveolares de bovinos sadios, sendo este resultado obtido em ambas as provas, com a diferença de que o teste de citometria de fluxo foi mais esclarecedor por identificar qual função celular específica foi comprometida.(AU)

Estresse oxidativo em cães com doença periodontal: comparação dos biomarcadores plasmáticos e salivares / Oxidative stress in dogs with periodontal disease: comparison of plasmatic and salivary biomarkers

A doença periodontal (DP) é a enfermidade inflamatória mais comum da cavidade oral dos cães. A quantificação de biomarcadores do plasma e da saliva tem sido utilizada para avaliar o estresse oxidativo sistêmico (EOS) e local (EOL) da DP humana. Na DP canina, os mecanismos do estresse oxidativo não estão bem caracterizados e estabelecidos. O objetivo do presente estudo foi investigar a hipótese de que o EOS ocorre na DP canina e de que a saliva pode ser utilizada para avaliar o EOL. Analisou-se, também, a hipótese de que a ativação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos contribui para EOS na DP dos cães. Para tal, foram selecionados 20 cães adultos portadores de DP, agrupados de acordo com o grau de lesão: gengivite (n=6), periodontites leve (n=8) e avançada (n=6). O grupo controle foi composto pelos mesmos 20 cães, 30 dias após o tratamento periodontal. Para avaliar o metabolismo oxidativo dos neutrófilos circulantes foi quantificada a produção de superóxido pelo teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT). As concentrações de oxidante total (TOC) e de espécies reativas ao ácido tiobartbitúrico (TBARS) no plasma foram quantificadas para avaliar o EOS. Para a avaliação do estresse oxidativo local, foi quantificado o TOC salivar e a concentração dos principais antioxidantes da saliva (albumina, ácido úrico e bilirrubina total). O EOS na DP foi confirmado pelo aumento da produção de superóxido dos neutrófilos circulantes, TOC e TBARS plasmático. Foi possível quantificar todos os biomarcadores na saliva de cães, porém nenhum foi capaz de expressar o EOL da DP canina. Esta é uma das primeiras evidências de que o EOS ocorre em cães com DP e que a ativação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos pode contribuir para desequilíbrio entre antioxidantes e oxidantes. Este estudo ressalta a importância da higiene bucal dos cães para a prevenção da DP e de lesões degenerativas crônicas de diversos tecidos causadas pelo EOS.(AU)

Periodontal disease (PD) is the most common inflammatory disease of the oral cavity of dogs. Quantitation of plasma and salivary biomarkers have been used to assess the systemic oxidative stress (SOS) and local (LOS) of human PD. In canine PD, oxidative stress mechanisms are not well characterized and established. Our objective was to investigate the hypothesis that SOS occurs in dog PD and saliva can be used to evaluate the LOS. We also investigated the hypothesis that the activation of neutrophil oxidative metabolism contributes to SOS in dog SD. For this purpose, 20 adult dogs were selected PD patients, grouped according to the degree of injury: gingivitis (n=6), light periodontitis (n=8) and advanced periodontitis (n=6). The control group was composed of the same 20 dogs, 30 days after periodontal treatment. To assess oxidative metabolism of circulating neutrophils superoxide production was measured by test nitroblue tetrazolium reduction (NBT). The total oxidant concentrations (TOC) and reactive species to tiobartbitúrico acid (TBARS) in plasma were quantified to evaluate SOS. For the evaluation of local oxidative stress were quantified salivary TOC and concentration of the main antioxidant in saliva (albumin, uric acid, and total bilirubin). EOS in dogs with PD was confirmed by increased superoxide production of circulating neutrophils, TOC, and plasma TBARS. It was possible to quantify all the biomarkers in the saliva of dogs, but none was able to express the LOS canine PD. This is the first evidence that SOS occurs in dogs with PD and that activation of the oxidative metabolism of neutrophils may contribute to an imbalance between oxidants and antioxidants. This study highlights the importance of oral hygiene of dogs to prevent PD and chronic degenerative lesions of various tissues caused by SOS.(AU)

Estresse oxidativo em cães com doença periodontal: comparação dos biomarcadores plasmáticos e salivares / Oxidative stress in dogs with periodontal disease: comparison of plasmatic and salivary biomarkers

A doença periodontal (DP) é a enfermidade inflamatória mais comum da cavidade oral dos cães. A quantificação de biomarcadores do plasma e da saliva tem sido utilizada para avaliar o estresse oxidativo sistêmico (EOS) e local (EOL) da DP humana. Na DP canina, os mecanismos do estresse oxidativo não estão bem caracterizados e estabelecidos. O objetivo do presente estudo foi investigar a hipótese de que o EOS ocorre na DP canina e de que a saliva pode ser utilizada para avaliar o EOL. Analisou-se, também, a hipótese de que a ativação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos contribui para EOS na DP dos cães. Para tal, foram selecionados 20 cães adultos portadores de DP, agrupados de acordo com o grau de lesão: gengivite (n=6), periodontites leve (n=8) e avançada (n=6). O grupo controle foi composto pelos mesmos 20 cães, 30 dias após o tratamento periodontal. Para avaliar o metabolismo oxidativo dos neutrófilos circulantes foi quantificada a produção de superóxido pelo teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT). As concentrações de oxidante total (TOC) e de espécies reativas ao ácido tiobartbitúrico (TBARS) no plasma foram quantificadas para avaliar o EOS. Para a avaliação do estresse oxidativo local, foi quantificado o TOC salivar e a concentração dos principais antioxidantes da saliva (albumina, ácido úrico e bilirrubina total). O EOS na DP foi confirmado pelo aumento da produção de superóxido dos neutrófilos circulantes, TOC e TBARS plasmático. Foi possível quantificar todos os biomarcadores na saliva de cães, porém nenhum foi capaz de expressar o EOL da DP canina. Esta é uma das primeiras evidências de que o EOS ocorre em cães com DP e que a ativação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos pode contribuir para desequilíbrio entre antioxidantes e oxidantes. Este estudo ressalta a importância da higiene bucal dos cães para a prevenção da DP e de lesões degenerativas crônicas de diversos tecidos causadas pelo EOS.(AU)

Periodontal disease (PD) is the most common inflammatory disease of the oral cavity of dogs. Quantitation of plasma and salivary biomarkers have been used to assess the systemic oxidative stress (SOS) and local (LOS) of human PD. In canine PD, oxidative stress mechanisms are not well characterized and established. Our objective was to investigate the hypothesis that SOS occurs in dog PD and saliva can be used to evaluate the LOS. We also investigated the hypothesis that the activation of neutrophil oxidative metabolism contributes to SOS in dog SD. For this purpose, 20 adult dogs were selected PD patients, grouped according to the degree of injury: gingivitis (n=6), light periodontitis (n=8) and advanced periodontitis (n=6). The control group was composed of the same 20 dogs, 30 days after periodontal treatment. To assess oxidative metabolism of circulating neutrophils superoxide production was measured by test nitroblue tetrazolium reduction (NBT). The total oxidant concentrations (TOC) and reactive species to tiobartbitúrico acid (TBARS) in plasma were quantified to evaluate SOS. For the evaluation of local oxidative stress were quantified salivary TOC and concentration of the main antioxidant in saliva (albumin, uric acid, and total bilirubin). EOS in dogs with PD was confirmed by increased superoxide production of circulating neutrophils, TOC, and plasma TBARS. It was possible to quantify all the biomarkers in the saliva of dogs, but none was able to express the LOS canine PD. This is the first evidence that SOS occurs in dogs with PD and that activation of the oxidative metabolism of neutrophils may contribute to an imbalance between oxidants and antioxidants. This study highlights the importance of oral hygiene of dogs to prevent PD and chronic degenerative lesions of various tissues caused by SOS.(AU)

AVALIAÇÃO DA DEGRANULAÇÃO DE NEUTRÓFILOS DE CÃES IN VITRO POR AÇÃO DE FILME POLIMÉRICO DE GELATINA EXTRAÍDA DA ESCAMAS DE TILÁPIA DO NILO (Oreochromis niloticus)

Estímulos à pesquisa de novos materiais impulsionam o setor das ciências biomédicas na procura de compostos aplicados à medicina regenerativa. A gelatina apresenta boas propriedades em processos cicatriciais além de ser biocompatível com a maioria das estruturas celulares sendo possível sua aplicação em diversas especialidades médicas. Assim como a gelatina, filmes poliméricos obtidos a partir deste precursor apresentam boas propriedades mecânicas e biocompatibilidade, ampliando a sua gama de aplicações. Este trabalho tem como objetivo aplicar um biomaterial de gelatina extraído das escamas de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus), e avaliar a atuação in vitro pela porcentagem de degranulação de neutrófilos de cães, comparando os resultados com grupos de amostras de neutrófilos estimulados pela N-formil-metionil-leucil-fenilalanina (fMLP). Para execução desse estudo foram coletadas amostras de sangue de cães clinicamente hígidos e divididas em oito grupos, sendo um controle negativo (fMLP sem a presença de polímero); três condições com a adição de polímero de gelatina de massas diferentes, e outras três condições com adição do polímero de gelatina com fMLP. Para avaliar o estresse oxidativo dos neutrófilos gerado pelo polímero foi utilizado o método de redução do corante tetrazólio nitroazul (NBT) e a sua quantificação deu-se pela técnica de espectrofotometria na região do ultravioleta e do visível (UV/VIS). Os resultados mostraram que na maioria das condições apresentadas a diferentes concentrações de polímero de gelatina avaliado não produziram estresse oxidativo demonstrando assim baixo potencial de citotoxicidade.

Incentives for the search for new materials drive the biomedical sciences sector to search for compounds applied to regenerative medicine. Gelatin has good properties in healing process as well as being biocompatible with most cell structures, making it possible to be applied in several medical specialties. Like gelatin, the polymeric films obtained from this precursor present good mechanical properties and biocompatibility, expanding its range of applications. This project aims to apply a gelatins biomaterial extracted from Nile tilapia (Oreochromis niloticus) scales and evaluate in vitro performance by the percentage of neutrophil degranulation in dogs comparing the results with samples groups neutrophils stimulated by N-Formylmethionineleucyl-phenylalanine (fMLP). To qualify this study, blood samples were collected from dogs and divided into eight groups, being a negative control (fMLP - without the presence of polymer); three conditions with the addition of gelatin polymer of different masses, and three other conditions with the addition of gelatin polymer with fMLP. To evaluate the neutrophils oxidative stress generated by the polymer, the method of reduction of the nitro-blue tetrazolium (NBT) dye will be used and its quantification will be done using the spectrophotometry method in the ultraviolet and visible (UV / Vis) region. The results showed that in most of the conditions presented to different concentrations of gelatin polymer evaluated, they did not produce oxidative stress, thus demonstrating low potential for cytotoxicity

Comparação entre duas metodologias para a realização do teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) em caprinos / Comparison among two methodologys at realization nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) in caprines

O teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) é um dos métodos mais utilizados para a avaliação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos. Porém, o custo por amostra e o tempo de utilização do corante são desvantagens do método. O objetivo deste trabalho foi comparar duas metodologias para realização do teste do NBT a fim de maximizar a sua utilização e diminuir o custo por amostra processada. Foram utilizadas 10 cabras, adultas clinicamente sadias e colhidas amostras de sangue por meio de venipunção jugular em tubos de 10mL sendo retirada uma alíquota de 500µL em tubo "eppendorff" contendo 2µL de heparina. Através desta alíquota foram realizadas três metodologias para o teste do NBT: A) técnica original Park & Good (1970); B) redução de 50% do volume do corante; C) redução de 50% e armazenamento do corante a -20°C por 180 dias. Foram confeccionados e corados esfregaços sanguíneos (May Grünwald-Giemsa) das amostras com as metodologias propostas e realizada contagem de 100 neutrófilos em microscopia óptica para determinar o percentual de neutrófilos reativos ao NBT. A análise estatística pelo método de Análise de Medidas Repetida (ANOVA) demonstrou diferenças significativas (P<0,05) entre os dois métodos e o original (A=14,4±4,6; B=1,9±1,4; C=1,1±0,9), porém apresentou alta correlação pelo teste de Spearman entre os métodos (rs=0,82 (AxB), rs=0,75 (BxC) e rs=0,93 (AxC)). Conclui-se que o teste de Redução do Tetrazólio Nitroazul (NBT) segundo a metodologia descrita por Park & Good (1970) e a redução do corante em 50% do seu volume e a sua redução associada ao congelamento por 180 dias a -20ºC podem ser realizadas em caprinos, porém os valores devem ser comparados com as respectivas metodologias utilizadas.(AU)

The nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) is one of the most used methods to evaluate the oxidative metabolism of neutrophils. However, the cost for each sample and dye's life-time are disadvantages of the method. This paper aim was to compare two NBT test methodologies in order to maximize its use and decrease the cost for each sample. It was made using 10 adult and healthy goats and blood samples were taken through venipuncion in jugular vein, using 10mL tubes, and then a 500µL sample was taken in eppendoff tubes with 2µL of heparin. Using this sample were made three methodologies for the NBT test: A) Park & Good (1970) original technique; B) dye reduction in 50% of the volume; C) 50% reduction and dye storage at -20°C for 180 days. It was made and dyed the blood smear (May Grünwald-Giemsa) from the samples, using the proposed methodologies and then made the counting of 100 neutrophils in optic microscopy, to determinate the percentage of NBT reactive neutrophils. The statistic analysis by the method of Repeated Measuring Analysis (ANOVA) evinced significant differences (P<0,05) between the two methods and the original (A=14.4±4.6; B=1.9±1.4; C=1.1±0.9), however it showed high correlation by the Spearman test between the methods (rs=0,82 (AxB), rs=0,75 (BxC) e rs=0.93 (AxC)). It was concluded that the original Park & Good (1970) method and two methodologies for dye reduction in 50% and it's reduction associated with NBT dye freezing for 180 days can be used in caprines, but the values should be compared with their respective methodologies.(AU)

ESTRESSE OXIDATIVO E FUNÇÃO FAGOCÍTICA DE NEUTRÓFILOS EM CADELAS ANESTESIADAS COM ISOFLUORANO OU PROPOFOL E SUBMETIDAS À OVARIOHISTERECTOMIA ELETIVA

Devido à anestesia geral e o estresse cirúrgico serem considerados indutores de imunossupressão, o presente estudo teve como objetivo avaliar o metabolismo oxidativo e a função fagocítica de neutrófilos em cadelas anestesiadas com Isofluorano ou Propofol e submetidas à ovariohisterectomia eletiva. Foram utilizadas 18 cadelas, hígidas, com 9,9±2,6 kg, entre um e cinco anos, submetidas à ovariohisterectomia eletiva. Após a administração de medicação pré-anestésica (MPA) com metadona (0,4 mg/kg) via intramuscular, os animais foram alocados em dois grupos experimentais: Grupo Isofluorano (ISO), onde nove cadelas foram submetidas à cirurgia de ovariohisterectomia sob anestesia geral inalatória com isofluorano. Grupo Propofol (PROPO), onde nove cadelas foram submetidas à mesma cirurgia sob anestesia geral intravenosa com propofol (0,4 mg/kg/minuto). As cirurgias foram realizadas no mesmo tempo cirúrgico e pela mesma equipe de trabalho. Foi colhido 8 mL de sangue nos tempos 0 (antes) e 2, 12, 24 horas e 7 e 15 dias após a administração da MPA, para a avaliação de hemograma e bioquímica sérica renal e hepática, além do metabolismo oxidativo e da função fagocítica dos neutrófilos, avaliados por meio do teste de Nitroblue Tetrazolium (NBT) e da adição de um liofilizado de Saccharomyces cerevisae no sangue. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística para verificação dos níveis de significância (p<0,05), com avaliações intragrupo e intergrupos para cada um dos tempos. A avaliação de dor foi realizada com a Escala Visual Analógica (EVA) e a Escala compacta de Glasgow. Não foram observadas diferenças significativas nos parâmetros fisiológicos pós-operatório entre os dois grupos. A analgesia de resgate foi utilizada em duas pacientes do ISO e uma paciente do PROPO. Houve aumento dos neutrófilos positivos para NBT não estimulados nos momentos M2, M12 e M24 horas após anestesia sugerem que o propofol possa ter elevado o metabolismo oxidativo de neutrófilos no pós-operatório imediato do presente estudo.

Because general anesthesia and surgical stress are considered to induce immunosuppression, the present study aimed to assess oxidative metabolism and the phagocytic function of neutrophils in bitches anesthetized with Isofluorane or Propofol and submitted to elective ovariohysterectomy. Eighteen healthy bitches, weighing 9.9 ± 2.6 kg, between one and five years old, submitted to elective ovariohysterectomy were used. After the administration of preanesthetic medication (MPA) with methadone (0.4 mg / kg) intramuscularly, the animals were allocated to two experimental groups: Isofluorane Group (ISO), where nine dogs were submitted to ovariohysterectomy surgery under anesthesia general inhalation with isofluorane. Propofol Group (PROPO), where nine dogs were submitted to the same surgery under general intravenous anesthesia with propofol (0.4 mg / kg / minute). The surgeries were performed at the same surgical time and by the same work team. 8 mL of blood was collected at times 0 (before) and 2, 12, 24 hours and 7 and 15 days after the administration of MPA, for the assessment of blood count and serum renal and hepatic biochemistry, in addition to oxidative metabolism and phagocytic function neutrophils, assessed by the Nitroblue Tetrazolium (NBT) test and the addition of a freeze-dried Saccharomyces cerevisae in the blood. The data obtained were submitted to statistical analysis to verify the levels of significance (p <0.05), with intragroup and intergroup assessments for each of the times. Pain assessment was performed using the Visual Analogue Scale (VAS) and the Glasgow Compact Scale. There were no significant differences in postoperative physiological parameters between the two groups. Rescue analgesia was used in two patients from ISO and one patient from PROPO. There was an increase in non-stimulated NBT positive neutrophils at M2, M12 and M24 hours after anesthesia suggest that propofol may have increased the oxidative metabolism of neutrophils in the immediate postoperative period of the present study.

Comparação entre duas metodologias para a realização do teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) em caprinos

Abstract: The nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) is one of the most used methods to evaluate the oxidative metabolism of neutrophils. However, the cost for each sample and dye's life-time are disadvantages of the method. This paper aim was to compare two NBT test methodologies in order to maximize its use and decrease the cost for each sample. It was made using 10 adult and healthy goats and blood samples were taken through venipuncion in jugular vein, using 10mL tubes, and then a 500L sample was taken in eppendoff tubes with 2L of heparin. Using this sample were made three methodologies for the NBT test: A) Park & Good (1970) original technique; B) dye reduction in 50% of the volume; C) 50% reduction and dye storage at -20°C for 180 days. It was made and dyed the blood smear (May Grünwald-Giemsa) from the samples, using the proposed methodologies and then made the counting of 100 neutrophils in optic microscopy, to determinate the percentage of NBT reactive neutrophils. The statistic analysis by the method of Repeated Measuring Analysis (ANOVA) evinced significant differences (P 0,05) between the two methods and the original (A=14.4±4.6; B=1.9±1.4; C=1.1±0.9), however it showed high correlation by the Spearman test between the methods (rs=0,82 (AxB), rs=0,75 (BxC) e rs=0.93 (AxC)). It was concluded that the original Park & Good (1970) method and two methodologies for dye reduction in 50% and it's reduction associated with NBT dye freezing for 180 days can be used in caprines, but the values should be compared with their respective methodologies.

Resumo: O teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) é um dos métodos mais utilizados para a avaliação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos. Porém, o custo por amostra e o tempo de utilização do corante são desvantagens do método. O objetivo deste trabalho foi comparar duas metodologias para realização do teste do NBT a fim de maximizar a sua utilização e diminuir o custo por amostra processada. Foram utilizadas 10 cabras, adultas clinicamente sadias e colhidas amostras de sangue por meio de venipunção jugular em tubos de 10mL sendo retirada uma alíquota de 500L em tubo "eppendorff" contendo 2L de heparina. Através desta alíquota foram realizadas três metodologias para o teste do NBT: A) técnica original Park & Good (1970); B) redução de 50% do volume do corante; C) redução de 50% e armazenamento do corante a -20°C por 180 dias. Foram confeccionados e corados esfregaços sanguíneos (May Grünwald-Giemsa) das amostras com as metodologias propostas e realizada contagem de 100 neutrófilos em microscopia óptica para determinar o percentual de neutrófilos reativos ao NBT. A análise estatística pelo método de Análise de Medidas Repetida (ANOVA) demonstrou diferenças significativas (P 0,05) entre os dois métodos e o original (A=14,4±4,6; B=1,9±1,4; C=1,1±0,9), porém apresentou alta correlação pelo teste de Spearman entre os métodos (rs=0,82 (AxB), rs=0,75 (BxC) e rs=0,93 (AxC)). Conclui-se que o teste de Redução do Tetrazólio Nitroazul (NBT) segundo a metodologia descrita por Park & Good (1970) e a redução do corante em 50% do seu volume e a sua redução associada ao congelamento por 180 dias a -20ºC podem ser realizadas em caprinos, porém os valores devem ser comparados com as respectivas metodologias utilizadas.

Comparação entre duas metodologias para a realização do teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) em caprinos

Abstract: The nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) is one of the most used methods to evaluate the oxidative metabolism of neutrophils. However, the cost for each sample and dye's life-time are disadvantages of the method. This paper aim was to compare two NBT test methodologies in order to maximize its use and decrease the cost for each sample. It was made using 10 adult and healthy goats and blood samples were taken through venipuncion in jugular vein, using 10mL tubes, and then a 500L sample was taken in eppendoff tubes with 2L of heparin. Using this sample were made three methodologies for the NBT test: A) Park & Good (1970) original technique; B) dye reduction in 50% of the volume; C) 50% reduction and dye storage at -20°C for 180 days. It was made and dyed the blood smear (May Grünwald-Giemsa) from the samples, using the proposed methodologies and then made the counting of 100 neutrophils in optic microscopy, to determinate the percentage of NBT reactive neutrophils. The statistic analysis by the method of Repeated Measuring Analysis (ANOVA) evinced significant differences (P 0,05) between the two methods and the original (A=14.4±4.6; B=1.9±1.4; C=1.1±0.9), however it showed high correlation by the Spearman test between the methods (rs=0,82 (AxB), rs=0,75 (BxC) e rs=0.93 (AxC)). It was concluded that the original Park & Good (1970) method and two methodologies for dye reduction in 50% and it's reduction associated with NBT dye freezing for 180 days can be used in caprines, but the values should be compared with their respective methodologies.

Resumo: O teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) é um dos métodos mais utilizados para a avaliação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos. Porém, o custo por amostra e o tempo de utilização do corante são desvantagens do método. O objetivo deste trabalho foi comparar duas metodologias para realização do teste do NBT a fim de maximizar a sua utilização e diminuir o custo por amostra processada. Foram utilizadas 10 cabras, adultas clinicamente sadias e colhidas amostras de sangue por meio de venipunção jugular em tubos de 10mL sendo retirada uma alíquota de 500L em tubo "eppendorff" contendo 2L de heparina. Através desta alíquota foram realizadas três metodologias para o teste do NBT: A) técnica original Park & Good (1970); B) redução de 50% do volume do corante; C) redução de 50% e armazenamento do corante a -20°C por 180 dias. Foram confeccionados e corados esfregaços sanguíneos (May Grünwald-Giemsa) das amostras com as metodologias propostas e realizada contagem de 100 neutrófilos em microscopia óptica para determinar o percentual de neutrófilos reativos ao NBT. A análise estatística pelo método de Análise de Medidas Repetida (ANOVA) demonstrou diferenças significativas (P 0,05) entre os dois métodos e o original (A=14,4±4,6; B=1,9±1,4; C=1,1±0,9), porém apresentou alta correlação pelo teste de Spearman entre os métodos (rs=0,82 (AxB), rs=0,75 (BxC) e rs=0,93 (AxC)). Conclui-se que o teste de Redução do Tetrazólio Nitroazul (NBT) segundo a metodologia descrita por Park & Good (1970) e a redução do corante em 50% do seu volume e a sua redução associada ao congelamento por 180 dias a -20ºC podem ser realizadas em caprinos, porém os valores devem ser comparados com as respectivas metodologias utilizadas.

MODELO HEPÁTICO EX VIVO EM SUÍNOS: EFEITO DO ACETAMINOFENO, DA FUMONISINA E DO ÁCIDO FÍTICO

Devido à similaridade orgânica ao homem, suínos são utilizados como modelos 8 experimentais. Os explantes ex vivo são promissores na avaliação de xenobióticos no 9 organismo. Assim, objetivou-se avaliar os efeitos da fumonisina (FB1), acetaminofeno 10 e do ácido fítico (IP6) utilizando-se o modelo de explante hepático de suínos. Foram 11 realizados dois experimentos, nos quais foram analisados: resposta ao estresse 12 oxidativo, morfologia e biomarcadores hepáticos. O experimento (E1) avaliou o efeito 13 de IP6 (5mM) nos explantes expostos ao acetaminofeno (20mM). Utilizou-se nove 14 suínos de terminação provenientes de frigoríficos (grupo experimental 1 - GE1) e seis 15 suínos com 40 dias (grupo experimental 2 - GE2), estes eutanasiados. Os explantes 16 (8 mm) passaram pelos seguintes tratamentos durante quatro horas: controle 4h 17 (somente meio); IP6 (5mM); acetaminofeno (20mM) e IP6 + acetaminofeno. Explantes 18 não incubados (Ctrl 0h) foram colhidos para comparação com incubados (Ctrl 4h). Os 19 sobrenadantes foram colhidos após 1/2h, 2h e 4h de incubação para análise de 20 biomarcadores (ALT, AST, FA, GGT, proteína e colesterol). Após 4h, (3/tratamento) 21 foram fixados, processados para análise histológica ou congelados (2/tratamento) a - 22 80ºC, para avaliação do estresse oxidativo: substâncias reativas ao ácido 23 tiobarbitúrico (TBARS), tetrazólio de nitroazul (NBT), capacidade antioxidante por 24 meio da glutationa reduzida (GSH), potencial de redução do ferro (FRAP) e 25 capacidade de eliminação de radicais livres (ABTS). Para GE1 e GE2, na presença 26 de IP6, observou-se atividade enzimática menor de GGT e FA em relação ao controle. 27 Com acetaminofeno, a atividade enzimática (FA, AST, ALT), PT e colesterol reduziram 28 comparado ao controle. Para o GE2, notou-se queda de FA e ALT para acetaminofeno 29 mais IP6 em relação ao controle. Os explantes incubados apenas com meio de cultura 30 (Ctrl 4h) apresentaram aspectos histológicos similares aos não incubados (Ctrl 0h). 31 Assim, a incubação não interferiu na integridade do tecido. Para o ensaio TBARS 32 (GE1), ocorreu diferença entre controle 4h e acetaminofeno, menor para este último. 33 Estes achados indicam que provavelmente não houve peroxidação lipídica nos 34 explantes expostos ao acetaminofeno. Houve redução da GSH no grupo exposto ao 35 IP6. Para o GE2, houve aumento da capacidade antioxidante (GSH, FRAP e ABTS) 36 do grupo acetaminofeno comparado com controle 4h, IP6 e acetaminofeno acrescido 37 de IP6 e para o NBT diferença entre controle 4h e acetaminofeno, maior para este 38 último, indicando possível lesão oxidativa. No segundo experimento (E2), a 39 metodologia foi similar ao primeiro, sendo os explantes submetidos aos tratamentos: 40 controle 0h; controle 4h; IP6 (5mM); FB1 (100 M); FB1 + IP6. Não houve diferença no 41 escore da lesão entre GE1 e GE2. Para o GE1 e GE2, os tratamentos IP6 e FB1 + IP6 42 diminuíram a atividade de FA em relação ao controle e FB1. Quando o IP6 foi 43 adicionado ao FB1, reduziu a atividade de ALT e PT comparado ao FB1 e ao controle. 44 Para o GE1 e GE2, a FB1 induziu ao aumento de GSH comparado ao IP6 e controle, 45 respectivamente, enquanto a incubação com FB1 + IP6 dimininui GSH em 46 comparação ao FB1. Os resultados obtidos evidenciaram uma ação protetora do IP6. 47

Due to the organic similarity to man, pigs are used as experimental models. Ex 6 vivo explants are promising in the evaluation of xenobiotics in the body. Thus, the 7 objective was to evaluate the effects of fumonisin (FB1), acetaminophen and phytic 8 acid (IP6) using the swine liver explant model. Two experiments were carried out, in 9 which it where analyzed: response to oxidative stress, liver morphology and 10 biomarkers. The experiment (E1) evaluated the effect of IP6 (5mM) on explants 11 exposed to acetaminophen (20mM). Nine finishing pigs were used from 12 slaughterhouses (experimental group 1 - GE1) and six 40-day-old pigs (experimental 13 group 2 - GE2) were used, euthanized. The explants (8 mm) underwent the following 14 treatments for four hours: control 4h (media only); IP6 (5mM); acetaminophen (20mM) 15 and IP6 + acetaminophen. Un incubated explants (Ctrl 0h) were collected for 16 comparison with incubated. Supernatants were collected after 1 / 2h, 2h and 4h of 17 incubation for analysis of biomarkers (ALT, AST, FA, GGT, protein and cholesterol). 18 After 4h, (3 / treatment) were fixed, processed for histological analysis or frozen (2 / 19 treatment) at -80ºC, to assess oxidative stress: substances reactive to thiobarbituric 20 acid (TBARS), nitro-blue tetrazolium (NBT) and capacity antioxidant by means of 21 reduced glutathione (GSH), iron reduction potential (FRAP) and ability to eliminate free 22 radicals (ABTS). For GE1 and GE2, in the presence of IP6, less GGT and FA enzyme 23 activity was observed compared to the control. With acetaminophen, the enzymatic 24 activity (FA, AST, ALT), PT ando cholesterol decreased compared to the control. For 25 GE2, there was a decrease in FA and ALT for acetaminophen plus IP6 compared to 26 control. The explants incubated only with culture media (Ctrl 4h) presented similar 27 histological aspects to those not incubated (Ctrl 0h). Thus, incubation did not interfere 28 with tissue integrity. For the TBARS trial (GE1), there was a difference between the 4h 29 control and acetaminophen, which was smaller for the latter. These findings indicate 30 that there was probably no lipid peroxidation in the explants exposed to 31 acetaminophen. There was a reduction in GSH in the group exposed to IP6. For GE2, 32 there was an increase in the antioxidant capacity (GSH, FRAP and ABTS) of the 33 acetaminophen group compared to the 4h control, IP6 and acetaminophen plus IP6 34 and for the NBT, the difference between the 4h control and acetaminophen, greater for 35 the latter, indicating possible oxidative damage. In the second experiment (E2), the 36 methodology was similar to the first, with the explants subjected to treatments: control 37 0h; control 4h; IP6 (5mM); FB1 (100 M); FB1 + IP6. There was no difference in the 38 injury score between GE1 and GE2. For GE1 and GE2, treatments IP6 and FB1 + IP6 39 decreased the activity of AF in relation to control and FB1. When IP6 was added to 40 FB1, it reduced the activity of ALT and PT compared to FB1 and the control. For GE1 41 and GE2, FB1 induced an increase in GSH compared to IP6 and control, respectively, 42 while incubation with FB1 + IP6 decreased GSH compared to FB1. The results 43 obtained showed a protective action of IP6.

Leucograma e metabolismo oxidativo de neutrófilos em cabras da raça Saanen nos períodos de gestação, parto e pós-parto / Leukocyte count and neutrophil oxidative burst in Saanen goats in the pregnancy, parturition and postpartum periods

O presente estudo teve como objetivo a avaliação do leucograma e do metabolismo oxidativo de neutrófilos em fêmeas caprinas da raça Saanen, nos períodos de gestação, parto e pós-parto. Amostras de sangue foram colhidas de 20 fêmeas nulíparas da raça Saanen, clinicamente sadias por venipunção jugular aos 49 (M1), 42 (M2), 35 (M3), 28 (M4), 21 (M5), 14 (M6), sete (M7), três (M8) dias antes do parto, no dia do parto (M9), três (M10) e sete (M11) dias após o parto, para a realização do leucograma e dosagens séricas de cortisol, estradiol e progesterona. A partir de 28 dias (M4) antes do parto até sete dias do pós-parto (M11) foram colhidas amostras de sangue para a avaliação do metabolismo oxidativo de neutrófilos por meio do teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT). Os resultados demonstraram que no dia do parto houve aumento nas concentrações séricas de cortisol e estradiol, e diminuição da progesterona, leucocitose por neutrofilia e desvio à esquerda leve, diminuição dos linfócitos, aumento da relação neutrófilo:linfócito, eosinopenia, monocitose e basofilia. No sétimo dia do pós-parto houve leucocitose por neutrofilia e aumento da relação neutrófilo:linfócito. Não houve nos períodos de gestação, parto e pós-parto alterações significativas no metabolismo oxidativo dos neutrófilos. Conclui-se que o parto determina elevação da concentração sérica de cortisol e estradiol, e diminuição da progesterona determinando quadro de leucocitose por neutrofilia e desvio à esquerda leve, com diminuição dos linfócitos, aumento da relação neutróflo:linfócito, eosinopenia, monocitose e basofilia. Ao sétimo dia do pós-parto há leucocitose por neutrofilia, aumento da relação neutrófilo:linfócito e do fibrinogênio. A gestação, o parto e o período do pós-parto não alteram o metabolismo oxidativo de neutrófilos avaliado por meio do teste de redução do NBT.(AU)

The purpose of this study was to evaluate the leukocyte count and the oxidative metabolism of neutrophil in Saanen goats during periods of pregnancy, parturition and postpartum. Were used 20 Saanen goats, clinically healthy and serologically negative for caprine arthritis encephalitis virus (CAEV). Blood samples were collected by jugular venipuncture 49 (M1), 42 (M2), 35 (M3), 28 (M4), 21 (M5), 14 (M6), seven (M7), three (M8) days before the parturition, on the day of birth (M9), three (M10) and seven (M11) days postpartum, for the leukocyte count, and serum for cortisol, estradiol and progesterone determination. From 28 days (M4) before parturition until seven days postpartum (M11) blood samples were collected for evaluation of oxidative metabolism of neutrophils by the nitroblue tetrazolium reduction test (NBT). The results showed that at parturition day there were an increase in cortisol and estradiol levels and a decrease in progesterone serum, neutrophilic leukocytosis and left shift slight, decrease of lymphocytes, increase in the neutrophil: lymphocyte, eosinopenia, monocytosis and basophilia. There was a neutrophilic leukocytosis and an increase in the neutrophil: lymphocyte on the seventh day postpartum. There were not significant alterations in oxidative metabolism of neutrophils during pregnancy, parturition and postpartum. It was concluded that parturition causes an elevation in cortisol and estradiol levels and a decrease in progesterone serum determining a neutrophilic leukocytosis and left shift slight, with a reduction of lymphocytes, increase in the neutrophil:lymphocyte, eosinopenia, monocytosis and basophilia. Neutrophilic leukocytosis, increase in the neutrophil: lymphocyte and fibrinogen are detected on the seventh day postpartum. Pregnancy, parturition and the postpartum do not change the oxidative metabolism of neutrophils evaluated by NBT reduction test.(AU)

Capacidade antioxidante da quercetina na qualidade seminal de bovinos

Avanços na área da reprodução animal estão ocorrendo frequentemente. Sendo assim, os profissionais desta área otimizam as biotecnologias reprodutivas utilizando sêmen geralmente congelado, principalmente da espécie bovina. Entretanto, sabe-se que a criopreservação é um procedimento que pode ser prejudicial para as células espermáticas, tendo como uma das causas o estresse oxidativo. Sendo assim, muitos autores têm se dedicado a estudar o efeito da adição de antioxidantes nos diluidores seminais das diversas espécies, tendo como objetivo inibir e/ou reduzir os danos causados pelas espécies reativas de oxigênio. A quercetina é um dos antioxidantes que demonstrou redução dos danos espermáticos e aumento significativo da motilidade e da capacidade de interação entre espermatozoide-oócito. Portanto, o objetivo desse trabalho foi utilizar a quercetina como antioxidante no sêmen bovino, buscando melhorias na qualidade espermática em sêmen congelado. Para isso, foram realizados cinco grupos: controle, 5g, 10g, 15g e 20g/mL de quercetina em amostras seminais. Após isso, foram realizados vários testes de avaliação pós descongelação, tais como avaliação espermática pelo método CASA, formação de radicais superóxidos pelo teste nitroblue-tetrazólio e análise de microscopia eletrônica de varredura.

Advances in animal breeding are occurring frequently. And then, professionals in this area optimize reproductive biotechnology using generally frozen semen, mainly in the bovine specie. However, it is known that cryopreservation is a procedure that can be harmful to sperm cells, with one of the causes of oxidative stress. Thus, many authors have studied the effect of the addition of antioxidants on the seminal diluents of several species, aiming to inhibit and / or reduce the damage caused by reactive oxygen species. Quercetin is one of the antioxidants that demonstrates reduction of sperm damage and significant increase of motility and interaction capacity between spermatozoa-oocyte. Therefore, the objective of this experiment was to use quercetin as an antioxidant in bovine semen, seeking improvements in sperm quality in frozen semen. For this, 5 groups were performed: control, 5, 10g, 15g and 20g/mL of quercetin in different seminal samples. After that, several post-thaw evaluation tests were performed, such as spermatic evaluation by the CASA method, formation of superoxide radicals by the nitroblue-tetrazolium test and analysis of scanning electron microscopy.

Leukocytes respiratory burst activity as indicator of innate immunity of pacu Piaractus mesopotamicus / Atividade respiratória de leucócitos como indicador de imunidade inata de pacu (Piaractus mesopotamicus)

The present study evaluated the assay to quantify the respiratory burst activity of blood leukocytes of pacu as an indicator of the innate immune system, using the reduction of nitroblue tetrazolium (NBT) to formazan as a measure of the production of reactive oxygen species (ROS). In order to assess the accuracy of the assay, fish were challenged by Aeromonas hydrophila and sampled one week after challenge. The A. hydrophila infection increased the leukocyte respiratory burst activity. The protocol showed a reliable and easy assay, appropriate to determine the respiratory burst activity of blood leukocytes of pacu, a neotropical fish, in the present experimental conditions.(AU)

O presente estudo avaliou o ensaio para quantificar a atividade respiratória dos leucócitos do sangue de pacu como um indicador do sistema imune inato, usando a redução do nitroazul tetrazólio (NBT) a formazan como medida da produção de espécies reativas de oxigênio (EROs). Para avaliar a precisão do ensaio, peixes foram desafiados por Aeromonas hydrophila e amostrados uma semana após o desafio. A infecção com A. hydrophila aumentou a atividade respiratória dos leucócitos. O protocolo se mostrou confiável e de fácil aplicação, apropriado para determinar a atividade respiratória de leucócitos do sangue do pacu, peixe neotropical, nas condições experimentais apresentadas.(AU)

Valor do teste de redução do tetrazólio nitroazul (nbt) no diagnóstico de processos inflamatórios caninos / Clinical value of nitroblue tetrazolium test (nbt) in the diagnosis of canine inflammatory processes

Objetivou-se estimar o valor clínico do teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) no diagnóstico dos processos inflamatórios de cães, comparando-o com o leucograma e a concentração plasmática de fibrinogênio. Para tal, determinou-se a porcentagem de neutrófilos redutores de NBT, a concentração plasmática de fibrinogênio e o leucograma de 242 cães, incluindo animais sadios e com quadro inflamatório, portadores ou não de hepatopatias, azotemia ou hipogamaglobulinemias. O uso do teste de redução do NBT permitiu confirmar 30,43% dos processos inflamatórios em cães. O uso associado do teste de redução do NBT com a determinação do fibrinogênio plasmático e leucograma possibilitou uma maior eficiência diagnóstica, identificando-se 84,35% dos processos inflamatórios. Não foi verificado um efeito significativo da hipogamaglobulinemia e da hepatopatia sobre a capacidade do neutrófilo reduzir o NBT em cães com doenças inflamatórias, porém os resultados obtidos sugerem que a azotemia possa afetar a capacidade do neutrófilo em reduzir o NBT. Conclui-se que o teste de redução de NBT é pouco sensível para o diagnóstico dos processos inflamatórios em cães, porém útil nos casos em que o fibrinogênio e o leucograma não são capazes de detectar a inflamação.

The purpose of the present study is to determine the clinical value of nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) to diagnose inflammatory processes in dogs, and compare to white blood cell count (WBC) and concentration of plasma fibrinogen. To this end, we determined the percentage of NBT reducing neutrophils, concentration of plasma fibrinogen and WBC of 242 dogs, including both healthy dogs and animals with inflammation processes, with or without liver disease, azotemia or hypogammaglobulinemias. The NBT reduction test confirmed 30.43% of inflammatory diseases in dogs. The combined use of NBT reduction test, plasma fibrinogen and WBC was more efficient and identified 84.35% of inflammatory processes. Hypogammaglobulinemia and liver disease did not alter the ability of neutrophils to reduce NBT in dogs with inflammatory diseases, but results suggest that azotemia may affect the ability of neutrophils to reduce NBT. It can be concluded that NBT reduction test has low sensitivity for the diagnosis of inflammatory diseases in dogs, but it is useful in cases where the fibrinogen and WBC are not able to detect inflammation.

Valor do teste de redução do tetrazólio nitroazul (nbt) no diagnóstico de processos inflamatórios caninos / Clinical value of nitroblue tetrazolium test (nbt) in the diagnosis of canine inflammatory processes

Objetivou-se estimar o valor clínico do teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) no diagnóstico dos processos inflamatórios de cães, comparando-o com o leucograma e a concentração plasmática de fibrinogênio. Para tal, determinou-se a porcentagem de neutrófilos redutores de NBT, a concentração plasmática de fibrinogênio e o leucograma de 242 cães, incluindo animais sadios e com quadro inflamatório, portadores ou não de hepatopatias, azotemia ou hipogamaglobulinemias. O uso do teste de redução do NBT permitiu confirmar 30,43% dos processos inflamatórios em cães. O uso associado do teste de redução do NBT com a determinação do fibrinogênio plasmático e leucograma possibilitou uma maior eficiência diagnóstica, identificando-se 84,35% dos processos inflamatórios. Não foi verificado um efeito significativo da hipogamaglobulinemia e da hepatopatia sobre a capacidade do neutrófilo reduzir o NBT em cães com doenças inflamatórias, porém os resultados obtidos sugerem que a azotemia possa afetar a capacidade do neutrófilo em reduzir o NBT. Conclui-se que o teste de redução de NBT é pouco sensível para o diagnóstico dos processos inflamatórios em cães, porém útil nos casos em que o fibrinogênio e o leucograma não são capazes de detectar a inflamação.(AU)

The purpose of the present study is to determine the clinical value of nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) to diagnose inflammatory processes in dogs, and compare to white blood cell count (WBC) and concentration of plasma fibrinogen. To this end, we determined the percentage of NBT reducing neutrophils, concentration of plasma fibrinogen and WBC of 242 dogs, including both healthy dogs and animals with inflammation processes, with or without liver disease, azotemia or hypogammaglobulinemias. The NBT reduction test confirmed 30.43% of inflammatory diseases in dogs. The combined use of NBT reduction test, plasma fibrinogen and WBC was more efficient and identified 84.35% of inflammatory processes. Hypogammaglobulinemia and liver disease did not alter the ability of neutrophils to reduce NBT in dogs with inflammatory diseases, but results suggest that azotemia may affect the ability of neutrophils to reduce NBT. It can be concluded that NBT reduction test has low sensitivity for the diagnosis of inflammatory diseases in dogs, but it is useful in cases where the fibrinogen and WBC are not able to detect inflammation.(AU)