Segmental enteritis associated with Pythium insidiosum infection in a horse

Background: Pythiosis is an infectious disease caused by the oomycete Pythium insidiosum, with higher occurrence in wetlands and hot climate regions. This microorganism develops its cycle in aquatic plants, and most cases happen because of the contact of animals or people with water containing the motile zoospores (infectious form). Horses are the principal species affected and develop principally cutaneous and subcutaneous lesions, but the gastrointestinal tract is seldom affected. Humans develop various forms of pythiosis, such as a vascular form. The objectives of the current study are to describe an unusual case of intestinal pythiosis, its clinical signs, aspects of pathogenesis, and diagnosis. Case: A 13-year-old Crioula mare, from Santa Maria, RS, Brazil, presented with reduced food and water intake, apathy, restlessness, rolling, nasal reflux, firm abdomen upon palpation, and tachypnea during 2 days. The horses of this farm were fed native pasture and horse feed, and they had access to a nearby pond. Two days following the start of the clinical signs, the horse died and was necropsied on the farm. During necropsy, there was around 400 mL of reddish effusion in the abdominal cavity (modified transudate). A 15 cm segment of jejunum was firm upon palpation and had a severe transmural thickening. The wall of the affected area was up to 3 cm in thickness and firm, with small yellowish and irregular masses that stood out and looked friable, interpreted as kunkers. Microscopically, the yellowish masses (kunkers) were characterized by dense accumulations of intact and degenerate eosinophils (eosinophilic necrosis). Within these kunkers, and also on their periphery, there were multiple negatively stained hyphal profiles. Hyphae were also seen on the wall of small arteries inside the kunkers. These hyphae had nearly parallel walls and were occasionally...

Segmental enteritis associated with Pythium insidiosum infection in a horse

Background: Pythiosis is an infectious disease caused by the oomycete Pythium insidiosum, with higher occurrence in wetlands and hot climate regions. This microorganism develops its cycle in aquatic plants, and most cases happen because of the contact of animals or people with water containing the motile zoospores (infectious form). Horses are the principal species affected and develop principally cutaneous and subcutaneous lesions, but the gastrointestinal tract is seldom affected. Humans develop various forms of pythiosis, such as a vascular form. The objectives of the current study are to describe an unusual case of intestinal pythiosis, its clinical signs, aspects of pathogenesis, and diagnosis. Case: A 13-year-old Crioula mare, from Santa Maria, RS, Brazil, presented with reduced food and water intake, apathy, restlessness, rolling, nasal reflux, firm abdomen upon palpation, and tachypnea during 2 days. The horses of this farm were fed native pasture and horse feed, and they had access to a nearby pond. Two days following the start of the clinical signs, the horse died and was necropsied on the farm. During necropsy, there was around 400 mL of reddish effusion in the abdominal cavity (modified transudate). A 15 cm segment of jejunum was firm upon palpation and had a severe transmural thickening. The wall of the affected area was up to 3 cm in thickness and firm, with small yellowish and irregular masses that stood out and looked friable, interpreted as kunkers. Microscopically, the yellowish masses (kunkers) were characterized by dense accumulations of intact and degenerate eosinophils (eosinophilic necrosis). Within these kunkers, and also on their periphery, there were multiple negatively stained hyphal profiles. Hyphae were also seen on the wall of small arteries inside the kunkers. These hyphae had nearly parallel walls and were occasionally...(AU)

Culture medium and inoculation methodology for the study of soft root rot caused by Phytopythium sp / Meio de cultura e metodologia de inoculação para o estudo da podridão mole de raízes causada por Phytopythium sp

Cassava (Manihot esculenta Crantz) is an important crop in Brazil and Pará is the major producer of roots. High temperature and humidity of tropical regions favor the development of various diseases, among them the cassava root rot. The objective of this study was to evaluate the effect of luminosity and culture medium on the mycelial growth and sporulation of Phytopythium sp. associated with different methods of inoculation on cassava roots. In vitro tests for pathogen growth were established in a 2 x 6 factorial design (luminosity x culture medium) with five replicates and the means were compared by t test (P0.05). The culture medium containing sweet cassava root produced greater mycelial development and higher pathogen sporulation and it was the most suitable medium for pathogen culture. The culture under absence of light generated better mycelial growth than culture under 12 hour of light. Regarding the type of inoculation, the response was better when deeper injuries were induced.(AU)

A mandioca (Manihot esculenta Crantz) é uma importante cultura para o Brasil, onde o Pará é o principal produtor de raízes. Regiões tropicais com alta umidade e temperatura favorecem o desenvolvimento de diversas doenças, como as podridões de raiz. O presente estudo tem como objetivo avaliar o efeito da luminosidade e de meios de cultura no crescimento micelial e na esporulação de Phytopythium sp. e analisar métodos de inoculação do patógeno em raízes de mandioca destacadas. Os ensaios in vitro foram instalados em esquema fatorial 2x6 (luminosidade x meio de cultura), com cinco repetições e as médias comparadas pelo teste t (p0,05). O meio de cultura contendo raiz de mandioca mansa proporcionou maior desenvolvimento micelial e maior esporulação do patógeno e é o mais adequado para o cultivo do patógeno. O cultivo sob ausência de luz gerou melhor crescimento micelial do que o cultivo sob 12 horas de luz. Quanto ao tipo de inoculação, a resposta foi melhor nas raízes que obtiveram ferimentos mais profundos.(AU)

Mastite por Pythium insidiosum em éguas / Mastitis by Pythium insidiosum in mares

Background: Pythiosis is a chronic inflammatory disease caused by the oomycete Pythium insidiosum. This disease hasbeen reported in several species, but most cases occur in horses. In this species, the cutaneous form is more prevalent,with occasional involvement of adjacent lymph nodes and bone tissue. The involvement of the mammary glands was notproperly characterized. Therefore, the aim of this study is to describe cases of pythiosis with the involvement of the mammary glands in mares.Case: A retrospective study of all biopsy samples and necropsy examinations of horses, performed at the Animal PathologyLaboratory of the Federal University of Campina Grande from January 2000 to December 2018, was carried out. During thestudy period, 142 cases of cutaneous pythiosis were identified. Of these, in three the lesions extended to the mammary glands.Mares with 3-, 7- and 12-year-old, mongrel, from the backlands of the Paraiba were affected. On physical examination, themares presented swollen mammary glands and multifocal wounds, which discharge serosanguinolent secretion. Clinicalevolution ranged from 15 to 30 days. The animals had been medicated, but the wounds did not heal and mastectomies wereperformed. Macroscopically, the mammary glands were enlarged and with multifocal areas of ulceration measuring 1 to 3.5cm in diameter. At the cut surface, they exhibited fistulous tracts containing kunkers. In the histopathological evaluation,was observed diffuse and marked inflammatory infiltrate of eosinophils extending through the deep dermis and interlobularmammary stroma; and multifocal areas, sometimes focally extensive, of eosinophilic necrosis with intralesional negativeimages of hyphae. In histological sections stained by periodic acid-Schiff, the walls of the hyphae were weakly stained inblue; but when impregnated by Grocott methenamine silver, they were strongly marked in black...(AU)

Mastite por Pythium insidiosum em éguas / Mastitis by Pythium insidiosum in mares

Background: Pythiosis is a chronic inflammatory disease caused by the oomycete Pythium insidiosum. This disease hasbeen reported in several species, but most cases occur in horses. In this species, the cutaneous form is more prevalent,with occasional involvement of adjacent lymph nodes and bone tissue. The involvement of the mammary glands was notproperly characterized. Therefore, the aim of this study is to describe cases of pythiosis with the involvement of the mammary glands in mares.Case: A retrospective study of all biopsy samples and necropsy examinations of horses, performed at the Animal PathologyLaboratory of the Federal University of Campina Grande from January 2000 to December 2018, was carried out. During thestudy period, 142 cases of cutaneous pythiosis were identified. Of these, in three the lesions extended to the mammary glands.Mares with 3-, 7- and 12-year-old, mongrel, from the backlands of the Paraiba were affected. On physical examination, themares presented swollen mammary glands and multifocal wounds, which discharge serosanguinolent secretion. Clinicalevolution ranged from 15 to 30 days. The animals had been medicated, but the wounds did not heal and mastectomies wereperformed. Macroscopically, the mammary glands were enlarged and with multifocal areas of ulceration measuring 1 to 3.5cm in diameter. At the cut surface, they exhibited fistulous tracts containing kunkers. In the histopathological evaluation,was observed diffuse and marked inflammatory infiltrate of eosinophils extending through the deep dermis and interlobularmammary stroma; and multifocal areas, sometimes focally extensive, of eosinophilic necrosis with intralesional negativeimages of hyphae. In histological sections stained by periodic acid-Schiff, the walls of the hyphae were weakly stained inblue; but when impregnated by Grocott methenamine silver, they were strongly marked in black...

Isolation of Saprolegnia aenigmatica oomycetes and protocol for experimental infection of pacu (Piaractus mesopotamicus) / Isolamento do oomiceto Saprolegnia aenigmatica e protocolo de infecção experimental em pacu (Piaractus mesopotamicus)

Successful disease treatment depends on molecular studies under indoor conditions with experimental infection protocols that facilitate understanding the disease and the drug`s efficacy. The internal transcribed spacer (ITS) region was sequenced from three isolates, which were identified as Saprolegnia aenigmatica. Subsequently, healthy fish were immunosuppressed with dexamethasone (1.2 mg kg-1) and descaled to the skin using a sharp scalpel. These individuals were isolated in individual aquariums maintained at 22°C. Individuals in one group were subcutaneously inoculated with 9,000 zoospores (DDZ treatment), a second group was exposed to oomycetes in water with three colonized baits (DDB), a third group was maintained in water without zoospores (DD), and a control group (C) consisted of healthy animals. After 48 and 96 hours, two animals from each group were euthanized for fungal reisolation. The fish from groups DD and C did not show clinical signs, and no oomycetes were isolated. The animals from the DDZ and DDB groups showed cotton-wool-like masses on the skin, and S. aenigmatica was re-isolated. Thus, for infection using zoospores or baits parasitized by S. aenigmatica, an immunosuppressor (dexamethasone) and a sharp scalpel can be used effectively to establish an experimental infection in P. mesopotamicus.

O sucesso do tratamento de uma enfermidade depende do estudo de moléculas em condições de laboratório por meio de protocolos de infecção experimental que viabilizam a compreensão da doença e da eficácia dos fármacos. Pela sequência ITS foram identificadas três cepas de Saprolegnia aenigmatica. Dessa forma, pacus sadios foram submetidos à imunossupressão com dexametasona (1,2 mg kg-1), esfoliados com auxílio de bisturi e distribuídos em aquários a 22ºC. Após este procedimento, um grupo de animais foi inoculado com 9.000 zoósporos/peixe subcutâneo (DEZ), a outro foram adicionadas três iscas colonizadas com o oomiceto na água (DEI), um terceiro grupo foi mantido sem contato com o oomiceto (DE) e um quarto grupo, de animais sadios, representaram o controle (C). Após 48 e 96h deste procedimento, foram eutanaziados animais de cada grupo para reisolamento. Os animais do grupo DE e C não apresentaram sinais clínicos e não foi reisolado o oomiceto. Porém, tanto os animais do grupo DEZ quanto como os animais do grupo DEI apresentaram micélio branco na pele e foi reisolado Saprolegnia aenigmatica. Assim, a infecção com zoósporos ou com iscas colonizadas por S. aenigmatica, com o uso de dexametasona e abrasivo epitelial são formas eficazes de infecção experimental em P. mesopotamicus.

Isolation of Saprolegnia aenigmatica oomycetes and protocol for experimental infection of pacu (Piaractus mesopotamicus) / Isolamento do oomiceto Saprolegnia aenigmatica e protocolo de infecção experimental em pacu (Piaractus mesopotamicus)

Successful disease treatment depends on molecular studies under indoor conditions with experimental infection protocols that facilitate understanding the disease and the drug`s efficacy. The internal transcribed spacer (ITS) region was sequenced from three isolates, which were identified as Saprolegnia aenigmatica. Subsequently, healthy fish were immunosuppressed with dexamethasone (1.2 mg kg-1) and descaled to the skin using a sharp scalpel. These individuals were isolated in individual aquariums maintained at 22°C. Individuals in one group were subcutaneously inoculated with 9,000 zoospores (DDZ treatment), a second group was exposed to oomycetes in water with three colonized baits (DDB), a third group was maintained in water without zoospores (DD), and a control group (C) consisted of healthy animals. After 48 and 96 hours, two animals from each group were euthanized for fungal reisolation. The fish from groups DD and C did not show clinical signs, and no oomycetes were isolated. The animals from the DDZ and DDB groups showed cotton-wool-like masses on the skin, and S. aenigmatica was re-isolated. Thus, for infection using zoospores or baits parasitized by S. aenigmatica, an immunosuppressor (dexamethasone) and a sharp scalpel can be used effectively to establish an experimental infection in P. mesopotamicus.(AU)

O sucesso do tratamento de uma enfermidade depende do estudo de moléculas em condições de laboratório por meio de protocolos de infecção experimental que viabilizam a compreensão da doença e da eficácia dos fármacos. Pela sequência ITS foram identificadas três cepas de Saprolegnia aenigmatica. Dessa forma, pacus sadios foram submetidos à imunossupressão com dexametasona (1,2 mg kg-1), esfoliados com auxílio de bisturi e distribuídos em aquários a 22ºC. Após este procedimento, um grupo de animais foi inoculado com 9.000 zoósporos/peixe subcutâneo (DEZ), a outro foram adicionadas três iscas colonizadas com o oomiceto na água (DEI), um terceiro grupo foi mantido sem contato com o oomiceto (DE) e um quarto grupo, de animais sadios, representaram o controle (C). Após 48 e 96h deste procedimento, foram eutanaziados animais de cada grupo para reisolamento. Os animais do grupo DE e C não apresentaram sinais clínicos e não foi reisolado o oomiceto. Porém, tanto os animais do grupo DEZ quanto como os animais do grupo DEI apresentaram micélio branco na pele e foi reisolado Saprolegnia aenigmatica. Assim, a infecção com zoósporos ou com iscas colonizadas por S. aenigmatica, com o uso de dexametasona e abrasivo epitelial são formas eficazes de infecção experimental em P. mesopotamicus.(AU)

Utilização de imunoterápico no tratamento da pitiose equina / Use of immunotherapy in equine pythiosis treatment / El uso de la inmunoterapia en tratamiento de pitiosis equina

A pitiose equina é uma infecção micótica proliferativa, invasiva e ulcerativa, causada por um pseudofungo aquático denominado Pythium insidiosum pertencente ao reino Stramenopila, filo Oomycota, família Pythiaceae, gênero Pythium e espécie P. insidiosum, que atinge pele e subcutâneo, sendo responsável por formar feridas com massas granulomatosas ulcerativas acompanhada por secreções serossanguinolentas e massas necróticas denominadas kunkers. A pitiose pode atingir outras espécies além dos equinos como caninos, bovinos, ovinos, felinos e humanos, porém os equinos são os mamíferos mais atingidos. Vários protocolos para o tratamento têm sido utilizados, como métodos químicos, cirúrgico e mais recentemente imunoterápico. O presente artigo relata um caso de pitiose equina no norte do Paraná, submetido ao tratamento com imunoterapia (Pitium-vac)®, apresentando resultados positivos.(AU)

Equine Pythiosis is a fungal proliferative, invasive and ulcerative infection caused by a water pseudofungus known as Pythium insidiosum belonging to the Stramenopila kingdom, phylum Oomycota, Pythiaceae family, Pythium insidiosum genus and species, which affects the skin and subcutaneous layer, responsible for the formation of wounds with ulcerative granulomatous masses accompanied by serum-bloody secretions and necrotic masses referred to as kunkers. Pythiosis can affect species other than horses, such as dogs, cattle, sheep, cats and humans, but horses are the most widely affected mammals. Several treatment protocols have been used, such as chemical, surgical methods and more recently immunotherapy. This article reports a case of equine Pythiosis in northern Parana undergoing immunotherapy (Pitium-vac)®, with positive results.(AU)

La pitiosis equina es una infección proliferativa fúngica, invasiva y ulcerosa causada por un pseudofungo acuático llamado Pythium insidiosum perteneciente al reino Stramenopila, phylum Oomycota, familia Pythiaceae, género Pythium y especie P. insidiosum, que afecta la piel y subcutáneo, siendo responsable por formar heridas con masas granulomatosas ulcerosas acompañados de secreciones serosangrientas y masas necróticas llamadas kunkers. La pitiosis puede ocurrir en otras especies además de los equinos, como perros, ganados, ovejas, gatos y seres humanos, pero los equinos son los mamíferos más afectados. Varios protocolos para el tratamiento ya se han utilizado como métodos químicos, quirúrgicos y más recientemente la inmunoterapia. En este artículo se reporta un caso de pitiosis equina en el norte de Paraná, sometido al tratamiento con inmunoterapia (Pitium-vac) ®, con resultados positivos.(AU)

Utilização de imunoterápico no tratamento da pitiose equina / Use of immunotherapy in equine pythiosis treatment / El uso de la inmunoterapia en tratamiento de pitiosis equina

A pitiose equina é uma infecção micótica proliferativa, invasiva e ulcerativa, causada por um pseudofungo aquático denominado Pythium insidiosum pertencente ao reino Stramenopila, filo Oomycota, família Pythiaceae, gênero Pythium e espécie P. insidiosum, que atinge pele e subcutâneo, sendo responsável por formar feridas com massas granulomatosas ulcerativas acompanhada por secreções serossanguinolentas e massas necróticas denominadas kunkers. A pitiose pode atingir outras espécies além dos equinos como caninos, bovinos, ovinos, felinos e humanos, porém os equinos são os mamíferos mais atingidos. Vários protocolos para o tratamento têm sido utilizados, como métodos químicos, cirúrgico e mais recentemente imunoterápico. O presente artigo relata um caso de pitiose equina no norte do Paraná, submetido ao tratamento com imunoterapia (Pitium-vac)®, apresentando resultados positivos.

Equine Pythiosis is a fungal proliferative, invasive and ulcerative infection caused by a water pseudofungus known as Pythium insidiosum belonging to the Stramenopila kingdom, phylum Oomycota, Pythiaceae family, Pythium insidiosum genus and species, which affects the skin and subcutaneous layer, responsible for the formation of wounds with ulcerative granulomatous masses accompanied by serum-bloody secretions and necrotic masses referred to as kunkers. Pythiosis can affect species other than horses, such as dogs, cattle, sheep, cats and humans, but horses are the most widely affected mammals. Several treatment protocols have been used, such as chemical, surgical methods and more recently immunotherapy. This article reports a case of equine Pythiosis in northern Parana undergoing immunotherapy (Pitium-vac)®, with positive results.

La pitiosis equina es una infección proliferativa fúngica, invasiva y ulcerosa causada por un pseudofungo acuático llamado Pythium insidiosum perteneciente al reino Stramenopila, phylum Oomycota, familia Pythiaceae, género Pythium y especie P. insidiosum, que afecta la piel y subcutáneo, siendo responsable por formar heridas con masas granulomatosas ulcerosas acompañados de secreciones serosangrientas y masas necróticas llamadas kunkers. La pitiosis puede ocurrir en otras especies además de los equinos, como perros, ganados, ovejas, gatos y seres humanos, pero los equinos son los mamíferos más afectados. Varios protocolos para el tratamiento ya se han utilizado como métodos químicos, quirúrgicos y más recientemente la inmunoterapia. En este artículo se reporta un caso de pitiosis equina en el norte de Paraná, sometido al tratamiento con inmunoterapia (Pitium-vac) ®, con resultados positivos.

Óleo de girassol ozonizado: atividade anti-Pythium insidiosum / Ozonated sunflower seed oil: anti-Pythium insidiosum activity / Aceite de girasol ozonizado: actividad anti-Pythium incidiosum

Pythium insidiosum é um oomiceto aquático e agente etiológico da pitiose, uma doença de prognóstico desfavorável que acomete mamíferos. Apesar dos avanços nas pesquisas em protocolos terapêuticos, a pitiose continua sendo uma enfermidade de difícil tratamento. Neste trabalho verificou-se a atividade antimicrobiana in vitro do óleo de girassol ozonizado (OGO) frente a P.insidiosum, bem como foi avaliada a inibição do crescimento do oomiceto a partir de kunkers submetidos ao tratamento com OGO. O inóculo utilizado no teste de suscetibilidade in vitro foi preparado a partir de cultura micelial de P.insidiosum (n=30) e os ensaios foram realizados de acordo com o protocolo M38-A2 (CLSI). O OGO foi obtido comercialmente e as concentrações testadas variaram de 56.000 119/mL a 0,05119/mL. A leitura foi realizada em 48h de incubação e a presença ou ausência de hifas foi levada em consideração. Os resultados dos testes de suscetibilidade demonstraram que a CIM50 e CIM90 foram de 3500 119/mL e 28000 119/mL, respectivamente. Nos ensaios de inibição do crescimento de P. insidiosum a partir de kunkers observou-se que o OGO inibiu completamente o crescimento do oomiceto. Os resultados obtidos permitem inferir que o OGO apresenta relevante atividade anti-P. insidiosum podendo ser um potente aliado nos protocolos terapêuticos da pitiose.

Pythium insidiosum is an aquatic oomycete and etiologic agent of pythiosis. This disease has an unfavorable prognosis and affecting mammals. Despite advances in treatment, pythiosis remains a difficult disease to treat. In this work, the in vitro ozonated sunflower seed oil (OGO) antimicrobial activity was verified against P.insidiosum isolates. Additionally, we evaluated the oomycete growth inhibition from kunkers submitted to OGO treatment. The inoculum was prepared from P. insidiosum mycelial culture (n=30) and susceptibility tests were performed according to CLSIM38-A2 protocol. OGO was obtained commercially and the concentrations tested ranged from 56,000 119/mL to 0.05119/mL. The reading of results was done at 48h of incubation, and the visual presence or absence of hyphae was taken into consideration. The susceptibility test results showed that the MIC50 and MIC90were 3,500 119/mL and 28,000 119/mL, respectively. In the growth inhibition assays from kunkers it was observed that OGO completely inhibited the oomycete growth. The results allow us to infer that OGO has relevant anti-P. insidiosum activity and may be a potent assistant in the therapeutic protocols of pythiosis.

Pythium insidiosum es un oomiceto acuático y agente etiológico de la pitiosis, una enfermedad con un pronóstico desfavorable que afecta a los mamíferos. Apesar de los avances en la investigación en tratamientos, la pitiosis sigue una enfermedad difícil de tratar. En este trabajo, se verificó la actividad antimicrobiana in vitro del aceite de girasol ozonizado (OGO) contra P.insidiosum, y se evaluó la inhibición del crecimiento del oomiceto en kunkers sometidos al tratamiento con OGO. El inóculo utilizado en la prueba de susceptibilidad se preparó a partir del cultivo micelial de P.insidiosum (n=30) y los ensayos se realizaron de acuerdo con el protocolo M38-A2 (CLSI). El OGO se obtuvo comercialmente y las concentraciones variaron de 56.000 119/mL a 0,05119/mL. La lectura se realizó a las 48h de incubación y se tuvo en cuenta la presencia o ausencia de hifas. Los resultados de los ensayos de susceptibilidad mostraron que CIM50 y CIM90 fueron 3.500 119/mL y 28.000 119/mL, respectivamente. En los ensayos de inhibición del crecimiento de P. insidiosum de los kunkers se observó que OGO inhibía completamente el crecimiento del oomiceto. Los resultados nos permiten inferir que OGO tiene una relevante actividad anti-P. insidiosum y puede ser un poderoso aliado de los protocolos terapéuticos en la pitiosis.

Óleo de girassol ozonizado: atividade anti-Pythium insidiosum / Ozonated sunflower seed oil: anti-Pythium insidiosum activity / Aceite de girasol ozonizado: actividad anti-Pythium incidiosum

Pythium insidiosum é um oomiceto aquático e agente etiológico da pitiose, uma doença de prognóstico desfavorável que acomete mamíferos. Apesar dos avanços nas pesquisas em protocolos terapêuticos, a pitiose continua sendo uma enfermidade de difícil tratamento. Neste trabalho verificou-se a atividade antimicrobiana in vitro do óleo de girassol ozonizado (OGO) frente a P.insidiosum, bem como foi avaliada a inibição do crescimento do oomiceto a partir de kunkers submetidos ao tratamento com OGO. O inóculo utilizado no teste de suscetibilidade in vitro foi preparado a partir de cultura micelial de P.insidiosum (n=30) e os ensaios foram realizados de acordo com o protocolo M38-A2 (CLSI). O OGO foi obtido comercialmente e as concentrações testadas variaram de 56.000 119/mL a 0,05119/mL. A leitura foi realizada em 48h de incubação e a presença ou ausência de hifas foi levada em consideração. Os resultados dos testes de suscetibilidade demonstraram que a CIM50 e CIM90 foram de 3500 119/mL e 28000 119/mL, respectivamente. Nos ensaios de inibição do crescimento de P. insidiosum a partir de kunkers observou-se que o OGO inibiu completamente o crescimento do oomiceto. Os resultados obtidos permitem inferir que o OGO apresenta relevante atividade anti-P. insidiosum podendo ser um potente aliado nos protocolos terapêuticos da pitiose.(AU)

Pythium insidiosum is an aquatic oomycete and etiologic agent of pythiosis. This disease has an unfavorable prognosis and affecting mammals. Despite advances in treatment, pythiosis remains a difficult disease to treat. In this work, the in vitro ozonated sunflower seed oil (OGO) antimicrobial activity was verified against P.insidiosum isolates. Additionally, we evaluated the oomycete growth inhibition from kunkers submitted to OGO treatment. The inoculum was prepared from P. insidiosum mycelial culture (n=30) and susceptibility tests were performed according to CLSIM38-A2 protocol. OGO was obtained commercially and the concentrations tested ranged from 56,000 119/mL to 0.05119/mL. The reading of results was done at 48h of incubation, and the visual presence or absence of hyphae was taken into consideration. The susceptibility test results showed that the MIC50 and MIC90were 3,500 119/mL and 28,000 119/mL, respectively. In the growth inhibition assays from kunkers it was observed that OGO completely inhibited the oomycete growth. The results allow us to infer that OGO has relevant anti-P. insidiosum activity and may be a potent assistant in the therapeutic protocols of pythiosis.(AU)

Pythium insidiosum es un oomiceto acuático y agente etiológico de la pitiosis, una enfermedad con un pronóstico desfavorable que afecta a los mamíferos. Apesar de los avances en la investigación en tratamientos, la pitiosis sigue una enfermedad difícil de tratar. En este trabajo, se verificó la actividad antimicrobiana in vitro del aceite de girasol ozonizado (OGO) contra P.insidiosum, y se evaluó la inhibición del crecimiento del oomiceto en kunkers sometidos al tratamiento con OGO. El inóculo utilizado en la prueba de susceptibilidad se preparó a partir del cultivo micelial de P.insidiosum (n=30) y los ensayos se realizaron de acuerdo con el protocolo M38-A2 (CLSI). El OGO se obtuvo comercialmente y las concentraciones variaron de 56.000 119/mL a 0,05119/mL. La lectura se realizó a las 48h de incubación y se tuvo en cuenta la presencia o ausencia de hifas. Los resultados de los ensayos de susceptibilidad mostraron que CIM50 y CIM90 fueron 3.500 119/mL y 28.000 119/mL, respectivamente. En los ensayos de inhibición del crecimiento de P. insidiosum de los kunkers se observó que OGO inhibía completamente el crecimiento del oomiceto. Los resultados nos permiten inferir que OGO tiene una relevante actividad anti-P. insidiosum y puede ser un poderoso aliado de los protocolos terapéuticos en la pitiosis.(AU)

Occurrence of white rust (Albugo ipomoeae-panduratae) on Ipomoea acuminata in the brazilian mid-west

Spontaneous plants of Ipomoea acuminata ("morning glory") exhibiting white rust pustules were found in a field crop area of Planaltina, DF, in the fall season of 2010 and the disease causal agent was identified as Albugo ipomoea-panduratae (Oomycota). No reports of the association between A. ipomoea-panduratae and I. acuminata were known in Brazil previously to 2010. A reference specimen was deposited at the University of Brasilia Mycological Reference Collection.

Pythium insidiosum: morphological and molecular identification of Brazilian isolates / Pythium insidiosum: identificação morfológica e molecular de isolados brasileiros

Pythium insidiosum is an oomycete belonging to the kingdom Stramenipila and it is the etiologic agent of pythiosis. Pythiosis is a life-threatening infectious disease characterized by the development of chronic lesions on cutaneous and subcutaneous, intestinal, and bone tissues in humans and many species of animals. The identification of P. insidiosum is important in order to implement a rapid and definitive diagnosis and an effective treatment. This study reports the identification of 54 isolates of P. insidiosum of horses, dogs and sheep that presented suspicious clinical lesions of pythiosis from different regions in Brazil, by using morphological and molecular assays. Throughout the PCR it was possible to confirm the identity of all Brazilian isolates as being P. insidiosum.(AU)

Pythium insidiosum é um oomiceto pertencente ao Reino Stramenopila e agente etiológico da pitiose, uma doença infecciosa com riscos de morte. A pitiose é caracterizada pelo desenvolvimento de lesões crônicas sobre os tecidos cutâneos, subcutâneas, intestinal e ósseo em humanos e muitas espécies de animais. A identificação de P. insidiosum é importante, a fim de se obter um diagnóstico rápido e definitivo, bem como um tratamento eficaz. Este estudo relata a identificação de 54 isolados de P. insidiosum de cavalos, cães e ovelhas que apresentavam lesões compatíveis e suspeita clínicas de pitiose, provenientes de diferentes regiões do Brasil, através de métodos morfológicos e moleculares. Através da PCR foi possível confirmar a identidade de todos os isolados brasileiros como sendo P. insidiosum.(AU)

Pitiose cutânea em bovinos na região Sul do Rio Grande do Sul / Cutaneous pythiosis in cattle in the Southern region of Rio Grande do Sul, Brazil

Descreve-se a ocorrência de pitiose cutânea em bovinos de corte na região sul do Rio Grande do Sul. Os animais foram introduzidos em área alagada e desenvolveram lesões cutâneas ulcerativas e úmidas, de tamanhos variados, localizadas na região distal dos membros e no chanfro nasal. Histologicamente, as lesões eram caracterizadas por múltiplos granulomas com hifas intralesionais, melhor observadas pela coloração de metenamina nitrato de prata de Gomori, e circundadas por abundante tecido conjuntivo fibroso. O diagnóstico foi realizado com base na epidemiologia, lesões macroscópicas e histológicas e pela reação imuno-histoquímica positiva com anticorpo policlonal anti-Pythium insidiosum. A morbidade foi de 23,8 por cento e os animais adoeceram 15-90 dias após a introdução na área alagada. Em todos os casos as lesões evoluíram para a cura sem tratamento. Sugere-se que a doença possa ser mais frequente em bovinos do que se supõe, principalmente em áreas alagadas da região Sul do Rio Grande do Sul.(AU)

An outbreak of cutaneous pythiosis is described in cattle from southern Rio Grande do Sul, Brazil. Cattle were introduced into flooded pastures and developed ulcerative and wet cutaneous lesions on distal limbs and Planum nasale. Histologically, the lesions were characterized by multiple granulomas with intralesional hyphae, better seen in the methenamine silver stain, and surrounded by abundant fibrous tissue. Diagnosis was based on epidemiology, gross and histological lesions, and by positive immuno-histochemical reaction with anti-Pythium insidiosum polyclonal antibody. Morbidity was 23.8 percent and lesions were observed 15-90 days after cattle were introduced in the flooded area. Affected cattle had spontaneous healing without treatment. It is suggested that the disease is more frequent than what was earlier thought, mainly in flooded areas of the Southern region of the Rio Grande do Sul State.(AU)

Zoosporogênese in vitro entre isolados do oomiceto Pythium insidiosum / In vitro zoosporogenesis among oomycetes Pythium insidiosum isolates

Pythium insidiosum é um oomiceto aquático, responsável pela etiologia da pitiose, uma enfermidade crônica, observada freqüentemente em eqüinos. A produção de zoósporos móveis por este microrganismo se constitui no fator determinante da ocorrência da enfermidade. Este estudo avaliou a zoosporogênese e quantificou a produção de zoósporos de 32 amostras de Pythium insidiosum isoladas de eqüinos naturalmente infectados. Pythium insidiosum foi cultivado em meio Corn Meal Agar acrescido de fragmentos de grama, durante 5 dias, a 37ºC. Posteriormente, os fragmentos de grama parasitados foram incubados em Meio de Indução a 37ºC, por 24 horas. Observou-se que 16 amostras (50 por cento) produziram 20.000 zoósporos mL-1, 12 isolados (37,5 por cento) produziram acima de 20.000 zoósporos mL-1, enquanto quatro amostras (12,5 por cento) produziram menos de 20.000 zoósporos mL-1. O período de maior produção de zoósporos foi entre 6 e 8 horas de incubação. O protocolo utilizado na indução da zoosporogênese mostrou-se eficiente e representa uma importante ferramenta, tanto para a identificação do Pythium insidiosum, como para a obtenção de zoósporos em quantidades suficientes para a inoculação em animais experimentais e aplicação no desenvolvimento de testes de suscetibilidade.(AU)

Pythium insidiosum is an aquatic oomycete and the etiology of a chronic disease called pythiosis, commonly found in the skin of horses. The production of mobile zoospores by this microorganism is the determinant factor of this disease. This study evaluated the zoosporogenesis and quantification of zoospores in 32 samples of Pythium insidiosum isolated from horses with pythiosis. The assay used culture of the Pythium insidiosum in Corn Meal Agar plus grass blades for 5 days at 37ºC. The grass blades were incubated in Induction Medium at 37ºC for 24 hours. The findings showed 16 samples (50 percent) yielded 20,000 zoospores mL-1, 12 (37.5 percent) samples yielded over 20,000 zoospores mL-1 and 4 samples (12.5 percent) yielded less than 20,000 zoospores mL-1. The zoospores production was higher between 6 and 8 hours of incubation. The protocol used in the zoosporogenesis induction was efficient and represents an important tool for Pythium insidiosum identification and the attainment of zoospores in adequate amounts for inoculation in experimental animals and application in the development of susceptibility tests.(AU)

Pitiose: uma micose emergente

A pitiose é uma enfermidade piogranulomatosa do tecido subcutâneo causada pelo  Pythium insidiosum, microrganismo classificado no Reino Straminipila, Classe Oomycetes, Ordem Pythiales, Família Pythiaceae, Gênero Pythium e espécie P. insidiosum. Acomete várias espécies animais, porém a doença é mais freqüentemente observada em equinos, podendo, também, afetar os humanos. Epidemiologicamente a pitiose está intimamente relacionada com o contato dos animais e humanos com águas contaminadas pelo agente, onde produz zoosporos móveis que constituem-se na forma infectante do Pythium insidiosum. A enfermidade em eqüinos caracteriza-se principalmente pelo desenvolvimento de lesões subcutâneas ulcerativas e granulomatosas de aparência tumoral com presença de massas branco-amareladas, chamadas internacionalmente de kunkers. Já nas outras espécies a formação dos kunkers não é observada. O diagnóstico de pitiose é realizado pelos sinais clínicos, histopatologia, isolamento e identificação do agente, técnicas sorológicas como imunodifusão, ELISA e imunohistoquímica e mais recentemente por PCR. A doença destaca-se pela dificuldade no tratamento, uma vez que as drogas antifúngicas disponíveis não mostram eficiência contra o Pythium insidiosum. Atualmente a utilização de imunoterápicos constitui-se na alternativa de terapia em eqüinos, com resulatados animadores. Este trabalho tem por objeti