Antifungal activity of nanoemulsions encapsulating oregano (Origanum vulgare) essential oil: in vitro study and application in Minas Padrão cheese

The objective of this study was to evaluate the antifungal activity of nanoemulsions encapsulating essential oil of oregano (Origanum vulgare), both in vitro and after application on Minas Padrão cheese. Nanodispersions were obtained by the phase inversion temperature method. Cladosporium sp., Fusarium sp., and Penicillium sp. genera were isolated from cheese samples and used to evaluate antifungal activity. Minimal inhibitory concentrations of non-encapsulated and encapsulated oregano essential oil were determined, and they were influenced by the encapsulation of the essential oil depending on the type of fungus. The antifungal activity of the nanoencapsulated oregano essential oil in cheese slices showed no evidence of an effect of the MICs, when applied in the matrix. On the other hand, an influence of contact time of the nanoemulsion with the cheese was observed, due to the increase in water activity. It was concluded that nanoencapsulated oregano essential oil presented an inhibitory effect against the three genera of fungi evaluated. If environmental parameters, such as storage temperature and water activity, were controlled, the inhibitory effect of nanoemulsions of oregano oil could possibly be greatly improved, and they could be presented as a potential alternative for the preservation of Minas Padrão cheese against fungal contamination.(AU)

Anti-equine arteritis virus activity of ethanolic extract and compounds from Origanum vulgare / Atividade do extrato etanólico e compostos de Origanum vulgare contra o virus da arterite equina

The equine arteritis virus (EAV) is responsible by an important respiratory and reproductive disease in equine populations and there is no specific antiviral treatment available. The objective of this study was to investigate the activity of an ethanolic crude extract of Origanum vulgare (EEO) and of isolated compound caffeic acid, p-coumaric acid, rosmarinic acid, quercetin, luteolin, carnosol, carnosic acid, kaempferol and apigenin against EAV. The assays were performed using non-cytotoxic concentrations. The antiviral activity was monitored initially by cytopathic effect inhibition (CPE) assay in RK13 cells in the presence or absence of EEO. Pre-incubated cells with EEO were also examined to show prophylactic effect. Direct viral inactivation by EEO and isolated compounds was evaluated by incubation at 37C or 20C. After the incubation period, the infectivity was immediately determined by virus titrations on cell cultures and expressed as 50% tissue culture infective dose (TCID50)/100 µL. There was significant virucidal activity of EEO and of the compounds caffeic acid, p-coumaric acid, quercetin, carnosic acid and kaempferol. When EEO was added after infection, EEO inhibited the virus growth in infected cells, as evidenced by significant reduction of the viral titre. The results provide evidence that the EEO exhibit an inhibitory effect anti-EAV. Among the main compounds evaluated, caffeic acid, p-coumaric acid,carnosic acid, kaempferol and mainly quercetin, contributed to the activity of EEO. EEO may represent a good prototype for the development of a new antiviral agent, presenting promising for combating arteriviruses infections.(AU)

O virus da arterite equine (EAV) é responsável por uma importante doença respiratória e reprodutiva na população de equinos e não há tratamento antiviral específico disponível. O objetivo desse estudo foi investigar a atividade de um extrato etanólico de Origanum vulgare (EEO) e dos compostos isolados ácido caféico, ácido p-cumarico, ácido rosmarínico, quercetina, luteolina, carnosol, ácido carnósico, campferol e apigenina contra o EAV. Os ensaios foram realizados com concentrações não citotóxicas. A atividade antiviral foi monitorada inicialmente por um ensaio de inibição de efeito citopático (CPE) em células RK13 na presença ou ausência do EEO. Células pré-incubadas com o EEO foram também examinadas para a presença de efeito profilático. Inativação direta do EAV pelo EEO e pelos compostos isolados foi avaliada mediante incubação a 37C ou 20C. Após o período de incubação, a infectividade foi imediatamente determinada por titulação viral em cultivo celular sendo expresso como dose infectiva a 50% (TCID50)/100 µL. Houve significativa atividade virucida do EEO e dos compostos ácido caféico, ácido p-cumarico, quercetina, ácido carnósico e campferol. Quando o EEO foi adicionado após a infecção, o EEO inibiu a replicação do vírus nas células infectadas, o que foi evidenciado pela redução significativa do título viral. Os resultados fornecem evidências de que o EEO possui efeito anti-EAV.Entre os principais compostos presentes avaliados, ácido caféico, ácido p-cumarico, ácido carnósico, campferol e, principalmente, quercetina, contribuíram para a atividade antiviral do extrato. O EEO pode representar um bom protótipo para o desenvolvimento de um novo agente antiviral, sendo promissor para combater infecções por arterivírus.(AU)

Evaluation of oregano essential oil as a growth promoter and resistance stimulator against Ichthyophthirius multifiliis (Protozoa, Ciliophora) in silver catfish juveniles, Rhamdia sp. (Siluriformes, Heptapteridae) / Avaliação de óleo essencial de orégano como promotor de crescimento e resistência ao ectoparasita Ichthyophthirius multifiliis (Protozoa, Ciliophora) em juvenis de jundiá, Rhamdia sp. (Siluriformes, Heptapteridae)

Agroecology-based aquaculture emerges as a particularly interesting production alternative for rural family farmers. In such systems, it is desirable to use means for enhancing the zootechnical performance and improving fish immune responses from natural products. Thus, the present study aimed to evaluate the effect of organic diet supplementation with oregano essential oil, Origanum vulgare, on zootechnical performance, hematological parameters, and resistance to the ectoparasite Ichthyophthirius multifiliis (ich) in silver catfish juveniles, Rhamdia sp. A completely randomized design with five treatments (concentrations 0, 0.5, 1.0, 1.5, and 2.0 g oregano essential oil kg-1 diet) and four replicates was adopted. Groups of 20 silver catfish juveniles (initial weight 12.5 ± 0.5g) were stocked in 20 polyethylene tanks (54 L usable volume) connected to a water recirculation system with individual aeration. The diets were prepared with certified organic ingredients and offered for 89 days in two meals a day. At the end of the experimental period, survival, zootechnical performance, hematological parameters, and fish body composition were evaluated. After the final biometry, an experimental challenge with ich infection was performed. Dietary concentrations of oregano essential oil had no effects on growth, hematology, and body composition of silver catfish juveniles (p > 0.05).

A aquicultura de base agroecológica surge como alternativa de produção especialmente interessante para os agricultores familiares rurais. Em tais sistemas, é desejável a utilização de meios que possibilitem melhorar o desempenho zootécnico e fortalecimento do sistema imune dos peixes, a partir de produtos naturais. Neste sentido, objetivou-se com o presente estudo avaliar o efeito da suplementação de dieta orgânica com óleo essencial de orégano, Origanum vulgare, sobre o desempenho zootécnico, parâmetros hematológicos e resistência ao ectoparasita ictio, Ichthyophthirius multifiliis, em juvenis de jundiá, Rhamdia sp. Foi adotado um delineamento inteiramente ao acaso, com 5 tratamentos (concentrações 0; 0,5; 1,0; 1,5 e 2,0 g de óleo essencial de orégano kg-1 de dieta) e 4 repetições. Grupos de 20 juvenis de jundiá (peso inicial 12,5±0,5g) foram estocados em 20 tanques de polietileno (54 L volume útil) conectados a um sistema de recirculação de água, com aeração individual. As dietas foram preparadas com ingredientes orgânicos certificados e ofertadas durante 89 dias, em duas refeições diárias. Ao final do período experimental, foram avaliados a sobrevivência, desempenho zootécnico, parâmetros hematológicos e composição corporal dos peixes. Após a biometria final, realizou-se o desafio com infestação experimental por ictio. Não houve efeito (p > 0,05) das concentrações de óleo essencial de orégano na dieta sobre o crescimento, hematologia e composição corporal dos juvenis de jundiá. Tampouco foi verificada influência sobre o grau de infestação e mortalidade acumulada dos peixes submetidos ao desafio com ictio.

Evaluation of oregano essential oil as a growth promoter and resistance stimulator against Ichthyophthirius multifiliis (Protozoa, Ciliophora) in silver catfish juveniles, Rhamdia sp. (Siluriformes, Heptapteridae) / Avaliação de óleo essencial de orégano como promotor de crescimento e resistência ao ectoparasita Ichthyophthirius multifiliis (Protozoa, Ciliophora) em juvenis de jundiá, Rhamdia sp. (Siluriformes, Heptapteridae)

Agroecology-based aquaculture emerges as a particularly interesting production alternative for rural family farmers. In such systems, it is desirable to use means for enhancing the zootechnical performance and improving fish immune responses from natural products. Thus, the present study aimed to evaluate the effect of organic diet supplementation with oregano essential oil, Origanum vulgare, on zootechnical performance, hematological parameters, and resistance to the ectoparasite Ichthyophthirius multifiliis (ich) in silver catfish juveniles, Rhamdia sp. A completely randomized design with five treatments (concentrations 0, 0.5, 1.0, 1.5, and 2.0 g oregano essential oil kg-1 diet) and four replicates was adopted. Groups of 20 silver catfish juveniles (initial weight 12.5 ± 0.5g) were stocked in 20 polyethylene tanks (54 L usable volume) connected to a water recirculation system with individual aeration. The diets were prepared with certified organic ingredients and offered for 89 days in two meals a day. At the end of the experimental period, survival, zootechnical performance, hematological parameters, and fish body composition were evaluated. After the final biometry, an experimental challenge with ich infection was performed. Dietary concentrations of oregano essential oil had no effects on growth, hematology, and body composition of silver catfish juveniles (p > 0.05).(AU)

A aquicultura de base agroecológica surge como alternativa de produção especialmente interessante para os agricultores familiares rurais. Em tais sistemas, é desejável a utilização de meios que possibilitem melhorar o desempenho zootécnico e fortalecimento do sistema imune dos peixes, a partir de produtos naturais. Neste sentido, objetivou-se com o presente estudo avaliar o efeito da suplementação de dieta orgânica com óleo essencial de orégano, Origanum vulgare, sobre o desempenho zootécnico, parâmetros hematológicos e resistência ao ectoparasita ictio, Ichthyophthirius multifiliis, em juvenis de jundiá, Rhamdia sp. Foi adotado um delineamento inteiramente ao acaso, com 5 tratamentos (concentrações 0; 0,5; 1,0; 1,5 e 2,0 g de óleo essencial de orégano kg-1 de dieta) e 4 repetições. Grupos de 20 juvenis de jundiá (peso inicial 12,5±0,5g) foram estocados em 20 tanques de polietileno (54 L volume útil) conectados a um sistema de recirculação de água, com aeração individual. As dietas foram preparadas com ingredientes orgânicos certificados e ofertadas durante 89 dias, em duas refeições diárias. Ao final do período experimental, foram avaliados a sobrevivência, desempenho zootécnico, parâmetros hematológicos e composição corporal dos peixes. Após a biometria final, realizou-se o desafio com infestação experimental por ictio. Não houve efeito (p > 0,05) das concentrações de óleo essencial de orégano na dieta sobre o crescimento, hematologia e composição corporal dos juvenis de jundiá. Tampouco foi verificada influência sobre o grau de infestação e mortalidade acumulada dos peixes submetidos ao desafio com ictio.(AU)

Cytotoxicity and anti-Sporothrix brasiliensis activity of the Origanum majorana Linn. oil

The study aimed to evaluate the anti-Sporothrix sp. activity of the essential oil of Origanum majorana Linn. (marjoram), its chemical analysis, and its cytotoxic activity. A total of 18 fungal isolates of Sporothrix brasiliensis (n: 17) from humans, dogs and cats, and a standard strain of Sporothrix schenckii (n: 1) were tested using the broth microdilution technique (Clinical and Laboratory Standard Institute - CLSI M27-A3) and the results were expressed in minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal fungicidal concentration (MFC). The MIC50 and MIC90 of itraconazole against S. brasiliensis were 2 µg/mL and 8 µg/mL, respectively, and the MFC50 and MFC90 were 2 µg/mL and >16 µg/mL, respectively, with three S. brasiliensis isolates resistant to antifungal. S. schenckii was sensitive at MIC of 1 µg/mL and MFC of 8 µg/mL. For the oil of O. majorana L., all isolates were susceptible to MIC of 2.25-9 mg/mL and MFC of 2.25-18 mg/mL. The MIC50 and MIC90 were 2.25 mg/mL and 4.5 mg/mL, respectively, and the MFC50/90 values were twice more than the MIC. Twenty-two compounds were identified by gas chromatography with a flame ionization detector (CG-FID) and 1,8-cineole and 4-terpineol were the majority. Through the colorimetric (MTT) assay, the toxicity was observed in 70-80% of VERO cells between 0.078 and 5 mg/mL. For the first time, the study demonstrated the satisfactory in vitro anti-Sporothrix sp. activity of marjoram oil and further studies are needed to ensure its safe and effective use.(AU)

Óleo Essencial de Canela (Cinnamomum verum) e Orégano (Origanum vulgare) em Dietas de Frangos de Corte

A busca de um substituto ao antibiótico promotor de crescimento (APC) é de grande interesse científico e comercial. Sendo os óleos essenciais (OE), promissores substitutos, em função dos efeitos antimicrobianos auxiliando diversas ações benéficas que ajuda a alcançar o máximo desempenho produtivo. Objetivou-se avaliar a ação neste estudo o óleo de canela e de orégano, em associação na dieta de frangos de corte e sua influência nos parâmetros bioquímicos, biometria do aparelho digestivo, perfil bioquímico do fígado, histomorfometria do intestino delgado e análise de microbioma do intestino delgado. Foram utilizados 385 pintinhos de um dia, machos, da linhagem Cobb alojados em gaiolas. O delineamento experimental foi inteiramente ao acaso, com cinco tratamentos e sete repetições de 11 animais cada. Os tratamentos consistiram em ração controle, um controle positivo com antibiótico e os demais tratamentos com níveis crescentes de óleo essencial em 0,050; 0,100 e 0,150 kg/t. Foram verificados resultados significativos ao desempenho no 21 e 42 dias e na histomorfometria das vilosidades no intestino delgado. No teste de componentes principais, dois grupos, foram formados, um correspondente aos tratamentos controle e aos níveis de 0,1 e 0,15 com predominância de Lactobacillus sp. e outro pelo tratamento de 0,05 com predominância de Enterococcus sp. Sendo já o grupo majoritário de lactobacillus, podendo ser subdivido em dois, pela presença de Clostridium ruminococcus nos tratamentos com OE e a sua ausência nos tratamentos controle. Conclui-se que o óleo essencial pode ser recomendado como substituto ao antibiótico promotor, por não demostrar alterações prejudiciais, melhorar características produtivas e preservar a microflora intestinal com bactérias benéfica.

The search of a replacement for growth-promoting antibiotic (APC) is of great scientific and commercial interest. Being essential oils (OE), a promising substitute, due to the antimicrobial effects, helping several beneficial actions that allow to achieve maximum productive performance. The objective of this study is to evaluate the action of cinnamon and oregano essential oil in association in diet of broiler chickens and their influence on biochemical parameters, biometry of the digestive system, liver biochemical profile, the small intestine histomorphometry and microbiome analysis. In this experiment 385 day-old male Cobb chicks housed in cages were used. The experimental design was completely randomized, with five treatments and seven replications of 11 animals each. The treatments consisted of control ration, a positive control with antibiotics and the other treatments with increasing levels of essential oil in 0.050; 0.100 and 0.150 kg / t. The results were subjected to analysis of variance and polynomial regression analysis, at 5% probability and Dunnet's test as a positive control construct. To microbiome analysis it was performed a test of main components. Significant results were obtained for performance on the 21st and 42th days and on the villi histomorphometry in the small intestine. In the main component test, 2 groups were formed, one corresponding to the control treatments and the levels of 1.0 and 1.5 with a predominance of Lactobacillus sp. and another for treatment of 0.05 with predominance of Enterococcus sp. Being the majority group of lactobacillus, it can be divided into 2, due to the presence of Clostridium ruminococcus in treatments with OE and its absence in control treatments. It is concluded that essential oil can be recommended as a substitute for promoting antibiotic, as it does not show harmful changes, improves productive characteristics and preserves the intestinal microflora with beneficial bacteria.

Conservação de lingüiça frescal de frango adicionada de óleos essenciais

A linguiça frescal contêm aditivos químicos utilizados em sua formulação com o objetivo de aumentar a vida de prateleira, inibir a ação de microrganismos e a oxidação lipídica. No entanto, além das propriedades antimicrobianas e antioxidantes, o emprego dos sais de cura, nitrato e nitrito, podem provocar danos à saúde do consumidor. Nesse contexto, os aditivos naturais à base de óleos essenciais (OEs) consistem em uma alternativa para atender à demanda por produtos sem adição de conservantes e aditivos químicos. Esse estudo tem como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana e antioxidante dos OEs de Origanum vulgare L. e Lippia origanoides Kunth. aplicados em linguiça frescal de frango. A avaliação da atividade antimicrobiana in vitro dos OEs frente a estirpes de Staphylococcus aureus ATCC 25923, Salmonella Choleraesuis ATCC 10708 e Escherichia coli ATCC 25923 foi realizada pela CIM (Concentração Inibitória Mínima) e CBM (Concentração Bactericida Mínima) pela técnica de macrodiluição. A atividade antioxidante foi determinada pelo ensaio com radical DPPH para determinação da CE50 (concentração eficiente 50%) e Índice de Atividade Antioxidante (IAA). A composição química dos OE foi determinada por meio da cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM). O OE de orégano apresentou CIM e CBM de 5 g mL-1 para as estirpes de S. coagulase positiva e E. coli e CIM de 20 g mL-1 e CBM de 40 L/mL para Salmonella. O óleo essencial (OE) de alecrim-pimenta apresentou valores de CIM de 10 g mL-1 para as estirpes de S. coagulase positiva e E. coli e de 40 g mL-1 para Salmonella, os valores de CBM foram de 40 L mL-1 para S. coagulase positiva e Salmonella e de 10 L mL-1 para E. coli.. O OE de alfavaca não apresentou inibição dos microrganismos testados, no entanto, apresentou a melhor atividade antioxidante com CE50 de 3,25 g mL-1 e IAA=12,3. Foram identificados como compostos majoritários: o carvacrol para o OE de alecrim-pimenta, 4-terpineol para o OE de orégano e o-cimeno para a alfavaca. A determinação do efeito antimicrobiano dos OE na matriz alimentar foi realizada por meio das análises de coliformes a 45 ºC, Staphylococcus coagulase positiva e Salmonella sp. As análises físico-quimicas de determinação do pH, oxidação lipídica pelo método de reação ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e a análise dos voláteis via HS-CG/EM foram realizadas com o intuito de verificar a permanência dos OEs e a estabilidade do produto final. As linguiças frescais adicionadas de OE de orégano e alecrim-pimenta apresentaram-se aptas para o consumo e com qualidade microbiológica adequada durante o armazenamento. Não foram detectadas alterações nos valores de pH proveniente da adição de OE. Todas as amostras permaneceram estáveis sem o desenvolvimento de oxidação lipídica e foi possível identificar a presença dos principais marcadores químicos ao final do período de armazenamento. Os resultados observados demonstram alto potencial para a aplicação de OEs como agentes antioxidantes e antimicrobianos em alimentos.

The fresh sausage contains chemical additives used in its formulation with the aim of increase the shelf life, inhibit the action of microorganisms and lipid oxidation. However, beyond the antimicrobial and antioxidant properties, the use of curing salts, nitrate and nitrite, may cause harm to the health of the consumer. In this context, natural essential oil additives (EOs) consist of an alternative to attend the demand for products without the addition of preservatives and chemical additives.The objective of this study was to evaluate the antimicrobial and antioxidant activity of EOs of Origanum vulgare L. and Lippia origanoides Kunth. applied in fresh chicken sausage. The evaluation of the in vitro antimicrobial activity of EOs against the strains of S. coagulase positive ATCC 25923, Salmonella Choleraesuis ATCC 10708 and Escherichia coli ATCC 25923 were performed by MIC (Minimum Inhibitory Concentration) and MBC (Minimum Bactericidal Concentration) by the macrodilution method. The antioxidant activity was determined by the DPPH radical assay for determination of EC50 (50% efficient concentration) and Antioxidant Activity Index (AAI). The chemical composition of EO was determined by gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC-MS). The EO of oregano showed MIC and MBC of 5 g mL-1 to the strains of S. coagulase positive and E. coli and MIC of the 20 g mL-1 and MBC of the 40 g mL-1 for Salmonella. The EO of alecrim-pimenta showed values of MIC of the 10 g mL-1 for the strains of S. coagulase positive and E. coli and 40 g mL-1 for Salmonella, the values of MBC were 40 g mL-1 for S. coagulase positive and Salmonella and 10 g mL-1 for E. coli. The EO of basil did not showed inhibition of the tested microorganisms, however, it presented the best antioxidant activity with EC50 of 3.25 g mL-1 and AAI = 12.3. Carvacrol was identified as major compound for EO of alecrim-pimenta, 4-terpineol for EO of oregano and o-cymene for alfavaca. The determination of the antimicrobial effect of EO in the food matrix was realized by Coliforms at 45 ºC, S. coagulase positive and Salmonella sp. Physical-chemical analyses of pH, lipid oxidation by the thiobarbituric acid reaction (TBARS) and the analysis of the volatiles via HS-CG/MS were realized with the purpose of verifying the permanence of the oils and the stability on the final product. The fresh sausages added with EO of oregano and alecrim-pimenta were suitable to be consumed with adequate microbiological quality during storage. Changes were not detected in the pH values from the addition of OE. All samples remained stable without the development of lipid oxidation and it was possible to identify the presence of the main chemical markers at the end of the storage period. The results demonstrate high potential for the application of EOs as antioxidant and antimicrobial agents in food.

INDUÇÃO DE EXCREÇÃO DE OOCISTOS E ESTUDO DO EFEITO DE ÓLEOS ESSENCIAIS EM OOCISTOS ESPORULADOS DE Toxoplasma gondii E OUTROS COCCÍDEOS CORRELATOS

Toxoplasma gondii e Hammondia heydorni são protozoários coccídeos pertencentes ao filo Apicomplexa. Toxoplasma gondii é um dos agentes infecciosos mais estudados no mundo, pois é causador de uma zoonose cosmopolita, sendo capaz de acometer a maioria dos animais homeotérmicos. H. heydorni pode infectar canídeos, ruminantes e roedores, mas apesar de não ser considerado patogênico, este microrganismo demonstra relevância devido às semelhanças biológica, molecular e antigênica com Neospora caninum, reconhecido mundialmente por causar abortamento em bovinos. Doenças parasitárias causadas por coccídeos formadores de cistos teciduais apresentam grande importância epidemiológica devido a fácil transmissão pela água e alimentos quando contaminados com oocistos. Hammondia heydorni pode desenvolver cistos em cultivo celular, porém é desconhecida a atividade biológica de cistos produzidas in vitro, ou seja, se tais estruturas geradas são capazes de induzir a formação de oocistos no hospedeiro definitivo. Os oocistos esporulados de T. gondii são estágios resistentes no meio ambiente, permanecendo viáveis por longos períodos de tempo, na dependência de condições favoráveis de temperatura e umidade. Óleos essenciais de plantas aromáticas apresentam atividades antimicrobianas, e por não serem tóxicos, poderiam ser utilizados no controle e prevenção da infecção ou contaminação por T. gondii. Neste trabalho, objetivou-se testar o efeito de óleos essenciais de absinto (Artemisia absinthium), marjoram (Origanum majorana), davana, (Artemisia pallens) árvore do chá (Melaleuca alternifolia) e cravo (Syzygium aromaticum) em oocistos esporulados de T. gondii e outros protozoários próximos filogeneticamente (Hammondia hammondi, H. heydorni e Cystoisospora sp.). As amostras com oocistos foram tratadas com os óleos descritos acima mencionados, diluídos anteriormente em soluções emulsificantes (ágar 0,2% em água pura, ágar 0,2% em Laury Broth, Tween 80 em 0,02%, 0,2% e 3% e DMSO nas concentrações de 1,2 e 3%). Os oocistos foram quantificados antes e após o tratamento com os respectivos óleos, assim como os controles contendo somente oocistos, água destilada e soluções emulsificantes. A diminuição das contagens dos oocistos testados foi obtida principalmente após tratamento com óleos de M. alternifolia diluídos em DMSO a 2%, comprovando assim o efeito lítico deste composto sobre essas formas resistentes de T. gondii e Isospora sp. Adicionalmente, testou-se a capacidade de cistos de H. heydorni gerados in vitro em induzir a excreção de oocistos do parasito em cães. Cistos de H. heydorni cultivados em células embrionárias de miocárdio bovino (KH-R) foram administrados oralmente para dois filhotes de cães, os quais eliminaram oocistos a partir do 4° dia após a ingestão dos cistos, confirmando assim a viabilidade cistos de H. heydorni produzidos in vitro.

Toxoplasma gondii and Hammondia heydorni are coccidian protozoa that belong to the phylum Apicomplexa. Toxoplasma gondii is one of the most studied infectious agents in the world, because it causes a cosmopolitan zoonosis and may infect the majority of homeothermic animals. Hammondia heydorni can infect canids, ruminants and rodents. Despite the fact that H. heydorni is not pathogenic to animals, it is similar in many ways to N. caninum, which is a known cause of bovine abortion. This similarity makes the differentiation between H. heydorni and N. caninum necessary. Diseases caused by cyst-forming coccidian are of great epidemiologic importance, as the environmental resistant oocysts of these parasites are easily transmitted by contaminated water or food. H. heydorni can grow as parasite cysts in cell culture, but the biological activity of in vitro generated cysts in inducing oocyst shedding in the definitive hosts is unknown. T. gondii oocysts can remain infective in the environment for long periods of time in favorable conditions of temperature and humidity. Essential oils from aromatic plants have been used as microbicide agents, and due to the absence of toxicity, they may be potentially employed to control or prevent T. gondii infection. The aim this study was to test the effect of the essential oils from artemisia (Artemisia absinthium), marjoram (Origanum majorana), davana, (Artemisia pallens) tee tree (Melaleuca alternifolia) and clove (Syzygium aromaticum) on sporulated oocysts of T. gondii and related coccidia (Hammondia hammondi, H. heydorni and Cystoisospora sp.). Oocysts were diluted in 0.2% agar in pure water, 0.2% agar in Laury Broth, Tween 80 in 0.02%, and DMSO (1, 2 and 3%), and then, treated with the essential oils in various dilutions. Oocysts were quantified prior and after treatment with each oil, as well as with the control samples containing only oocysts in water or oocyst in the emulsifying solutions. The decreasing numbers of oocysts was observed primarily following a treatment with M. alternifolia oil diluted in 2% of DMSO. This showed the lytic effect that this compound has on resistant strains of T. gondii and Isospora sp. Additionally, we tested the capacity of H. heydorni cysts (from in vitro cultures) to induce the excretion of oocysts in dogs. H. heydorni cysts cultivated in embryonic cells of myocardial bovine (KH-R) were administered orally to two puppies dogs. The infected puppies started to excrete oocysts since day 4th following the cyst ingestion, confirming the viability of H. heydorni cysts grown in-vitro.

Avaliação da atividade antifúngica de óleo essencial de orégano (Origanum vulgare) nanoemulsionado e estudo de caso em queijo Minas Padrão

Este trabalho de Mestrado teve por objetivo avaliar a atividade antifúngica in vitro e em queijo Minas Padrão de duas formulações (A e B) de nanoemulsões encapsulando óleo essencial de orégano (Origanum vulgare) produzidas pelo método da temperatura de inversão de fases (método PIT). Cladosporium sp., Fusarium sp. e Penicillium sp. foram os fungos identificados nas amostras de queijo Minas Padrão deteriorados. Tais cepas foram utilizadas na avaliação da atividade antifúngica in vitro e em queijo Minas Padrão do óleo de orégano nanoemulsionado. Nos testes in vitro foram determinadas as concentrações mínimas inibitórias (CMI) do óleo essencial de orégano puro e nanoemulsionado sobre o Cladosporium sp., Fusarium sp. e Penicillium sp. Foram utilizadas fatias de queijo Minas Padrão para avaliar o efeito inibitório das nanoemulsões contendo óleo essencial de orégano. Por último foi avaliado o efeito inibitório das nanoemulsões durante o processo de maturação de queijos Minas Padrão. Determinaram-se valores de CMI para óleo essencial puro de 0,2; 0,3 g/ml para Fusarium sp. e Penicillium sp., respectivamente. Enquanto para as duas formulações de nanoemulsão; os valores de CMI dependeram da quantidade de óleo essencial de orégano que estava contido nelas, obtendo-se valores de 0,26; 0,11 e 1,62 g/ml para a formulação A de óleo de orégano nanoemulsionado sobre Cladosporium sp., Fusarium sp. e Penicillium sp., respectivamente, e CMIs de 0,32; 0,1 e 0,8 g/ml para a formulação B de nanoemulsão sobre os mesmos gêneros de fungos. Os ensaios nas fatias de queijo evidenciaram que o efeito das CMIs, quando aplicadas na matriz alimentícia, foi nulo, permitindo o desenvolvimento normal dos fungos avaliados, da mesma forma se determinou a importância da atividade de água no crescimento fúngico. Já nos queijos em ambiente de maturação o efeito inibitório do óleo de orégano foi pouco satisfatório, o que indicou a importância do controle dosdemais parâmetros ambientais no ambiente de maturação. Pode-se concluir que o óleo essencial de orégano nanoemulsionado apresentou efeito inibitório contra os gêneros de fungos avaliados. Quando controlados parâmetros ambientais como temperatura de armazenamento e atividade deágua, seu efeito inibitório pode ser amplamente melhorado, apresentando-o como potencial alternativa na conservação dos alimentos

This Master Thesis aimed to evaluate the in vitro antifungal activity and in Minas Padrão cheese of two formulations (A and B) of nanoemulsions encapsulating essential oil of oregano (Origanum vulgare) produced by the method of phase inversion temperature (PIT method). Cladosporium sp., Fusarium sp. and Penicillium sp. fungi were identified in deteriorated cheese samples. These strains were used in the evaluation of antifungal activity of oregano essential oil nanoemulsions, both in vitro and in cheese. Minimum inhibitory concentrations (MIC) of essential oil of pure oregano oil and nanoemulsions were determined. Cheese slices were used to evaluate the inhibitory effect of nanoemulsions containing essential oil of oregano. Finally the inhibitory effect of encapsulated oregano oil was tested during cheese ripening. MIC values determined for pure essential oil were 0.20 and 0.3 g/ml for Fusarium sp. and Penicillium sp., respectively. As for the two nanoemulsion formulations, MIC values depended on the amount of essential oil of oregano which was contained therein, and the values for formulation A were 0.26, 0.11 and 1.62 g / ml for Cladosporium sp., Fusarium sp. and Penicillium sp, respectively. For formulation B, the values of MIC were 0.32, 0.10 and 0.80 g/ml. The tests on the cheese slices showed that the effect of MIC when applied in the food matrix was null, as the fungi growth was not avoided. As for the tests during cheese ripening, the inhibitory effect of oregano oil in nanoemulsions was unsatisfactory, which indicated the importance of controlling other environmental parameters in the maturation chamber. It can be concluded that the nanoemulsions of essential oil presented inhibitory effect against the genera of fungi evaluated. Controlled environmental parameters such as storage temperature and water activity, its inhibitory effect can be highly improved, and the nanoemulsions of oregano oil can be seen as a potential system for food preservation.

Crescimento, produção de óleo essencial e trocas gasosas em orégano influenciados por diferentes lâminas de irrigação

The oregano is an aromatic plant of the Lamiaceae family, very common in the Mediterranean region, rich in essential oil and very used as spice in food preparation. Knowledge about the species behavior with respect to the region climatic characteristics of planting is essential to the cultivation success. Thus, one experiment was carried out to analyze the effect of five different depth irrigations under field conditions in the production of essential oil and gas exchange in the oregano plant. The water depths were estimated based on the CPE (Class A pan evaporation): 0 (without water replacement); 25; 50; 75 and 100% CPE. The experiment was carried out in Presidente Prudente, SP, Brazil, from February to May 2006. A linear positive relation was observed to depths irrigations increment in the fresh matter for aerial plant parts, dry matter for aerial and root zone plant parts; the root/aerial ratio; content and yield of essential oil. The use of 100% ECA showed the best oregano growth and essential oil production. The different depths irrigation did not affect the plant gas exchange.

O orégano é uma planta aromática da família Lamiaceae muito comum na região do mediterrâneo. Ele é rico em óleo essencial e muito usado como tempero na preparação de alimentos. Conhecer o comportamento da espécie em relação às características climáticas da região de plantio é essencial para o sucesso do cultivo. Assim, um experimento foi conduzido com o objetivo de analisar o efeito de cinco lâminas de irrigação em condições de campo, na produção de óleo essencial e nas trocas gasosas da planta de orégano. As lâminas calculadas com base na ECA (Evaporação do Tanque Classe A) foram 0 (sem reposição de água); 25; 50; 75 e 100% ECA. O experimento foi instalado em Presidente Prudente, em São Paulo (SP), no período de fevereiro a maio de 2006. Observou-se uma relação linear positiva com o incremento das lâminas de irrigação para as variáveis matéria fresca da parte aérea, matéria seca da parte aérea e da raiz; relação raiz/parte aérea, teor e rendimento do óleo essencial. O uso da lâmina de 100% ECA apresentou os melhores resultados de crescimento das plantas de orégano e de produção de óleo essencial. As diferentes lâminas de irrigação não afetaram as trocas gasosas da planta.

Crescimento, produção de óleo essencial e trocas gasosas em orégano influenciados por diferentes lâminas de irrigação

The oregano is an aromatic plant of the Lamiaceae family, very common in the Mediterranean region, rich in essential oil and very used as spice in food preparation. Knowledge about the species behavior with respect to the region climatic characteristics of planting is essential to the cultivation success. Thus, one experiment was carried out to analyze the effect of five different depth irrigations under field conditions in the production of essential oil and gas exchange in the oregano plant. The water depths were estimated based on the CPE (Class A pan evaporation): 0 (without water replacement); 25; 50; 75 and 100% CPE. The experiment was carried out in Presidente Prudente, SP, Brazil, from February to May 2006. A linear positive relation was observed to depths irrigations increment in the fresh matter for aerial plant parts, dry matter for aerial and root zone plant parts; the root/aerial ratio; content and yield of essential oil. The use of 100% ECA showed the best oregano growth and essential oil production. The different depths irrigation did not affect the plant gas exchange.

O orégano é uma planta aromática da família Lamiaceae muito comum na região do mediterrâneo. Ele é rico em óleo essencial e muito usado como tempero na preparação de alimentos. Conhecer o comportamento da espécie em relação às características climáticas da região de plantio é essencial para o sucesso do cultivo. Assim, um experimento foi conduzido com o objetivo de analisar o efeito de cinco lâminas de irrigação em condições de campo, na produção de óleo essencial e nas trocas gasosas da planta de orégano. As lâminas calculadas com base na ECA (Evaporação do Tanque Classe A) foram 0 (sem reposição de água); 25; 50; 75 e 100% ECA. O experimento foi instalado em Presidente Prudente, em São Paulo (SP), no período de fevereiro a maio de 2006. Observou-se uma relação linear positiva com o incremento das lâminas de irrigação para as variáveis matéria fresca da parte aérea, matéria seca da parte aérea e da raiz; relação raiz/parte aérea, teor e rendimento do óleo essencial. O uso da lâmina de 100% ECA apresentou os melhores resultados de crescimento das plantas de orégano e de produção de óleo essencial. As diferentes lâminas de irrigação não afetaram as trocas gasosas da planta.

Atividade antimicrobiana dos óleos essenciais de orégano, tomilho e canela frente a sorovares de Salmonella enterica de origem avícola

Essential oils from oregano (Origanum vulgare), thyme (Thymus vulgaris) and cinnamom (Cinnamomum zeylanicum) were tested for their inhibitory activity against sixty Salmonella sp. isolates. These microorganisms were distributed in 20 serovars, all of them isolated from broiler chickens. Based on microdilution technique, the minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) were determined. The strongest antibacterial activity was obtained for oregano (MIC mean = 529mug ml-1 and MBCmean = 661mug ml-1), followed by a moderate activity for thyme (MICmean=961mug ml-1 and MBCmean=1074mug ml-1) and the lowest obtained activity observed for cinnamon (MICmean= 1335mug ml-1 and MBCmean= 1979mug ml-1). Despite of this activity pattern, the serovars of Salmonella enterica showed significant susceptibility variations. However none of them could be classified as sensitive or resistant to the three essential oils tested. At the moment, when the antibiotics, as growth promoters, are being replaced, the essential oils from spices could be a very reasonable choice and the present results show us two points: the essential oils from oregano and thyme are effective against Salmonella isolates but the variations among the serovars must be considered.

Avaliou-se a atividade antimicrobiana dos óleos essenciais de orégano (Origanum vulgare), tomilho (Thymus vulgaris) e canela (Cinnamomum zeylanicum) frente a 60 amostras de Salmonella enterica distribuídas entre 20 sorovares, todos isolados de carcaças de aves. A concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida mínima (CBM) foram determinadas para cada isolado, utilizando-se a técnica de microdiluição em caldo. O óleo essencial de orégano evidenciou forte atividade antibacteriana (CIM média = 529mig ml-1 e CBM média= 661mig ml-1), seguido do tomilho (CIM média=961mig ml-1 e CBM média= 1074mig ml-1), com atividade moderada, enquanto que a menor atividade foi observada com o óleo essencial de canela (CIM média= 1335mig ml-1 e CBM média = 1979mig ml-1). Apesar deste claro padrão de atividade, os sorovares de Salmonella enterica evidenciaram significativas variações de suscetibilidade, embora nenhuma, em particular, pudesse ser classificada como totalmente sensível ou resistente aos três óleos essenciais avaliados. Assim, no momento em que os antibacterianos utilizados como promotores de crescimento estão sendo substituídos. E os óleos essenciais de temperos e condimentos se constituem numa alternativa importante, os resultados aqui apresentados sinalizam dois pontos: os óleos essenciais de orégano e tomilho são efetivos contra Salmonella, mas as variações de suscetibilidade entre os sorovares deverão também ser consideradas.

Atividade antimicrobiana dos óleos essenciais de orégano, tomilho e canela frente a sorovares de Salmonella enterica de origem avícola

Essential oils from oregano (Origanum vulgare), thyme (Thymus vulgaris) and cinnamom (Cinnamomum zeylanicum) were tested for their inhibitory activity against sixty Salmonella sp. isolates. These microorganisms were distributed in 20 serovars, all of them isolated from broiler chickens. Based on microdilution technique, the minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) were determined. The strongest antibacterial activity was obtained for oregano (MIC mean = 529mug ml-1 and MBCmean = 661mug ml-1), followed by a moderate activity for thyme (MICmean=961mug ml-1 and MBCmean=1074mug ml-1) and the lowest obtained activity observed for cinnamon (MICmean= 1335mug ml-1 and MBCmean= 1979mug ml-1). Despite of this activity pattern, the serovars of Salmonella enterica showed significant susceptibility variations. However none of them could be classified as sensitive or resistant to the three essential oils tested. At the moment, when the antibiotics, as growth promoters, are being replaced, the essential oils from spices could be a very reasonable choice and the present results show us two points: the essential oils from oregano and thyme are effective against Salmonella isolates but the variations among the serovars must be considered.

Avaliou-se a atividade antimicrobiana dos óleos essenciais de orégano (Origanum vulgare), tomilho (Thymus vulgaris) e canela (Cinnamomum zeylanicum) frente a 60 amostras de Salmonella enterica distribuídas entre 20 sorovares, todos isolados de carcaças de aves. A concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida mínima (CBM) foram determinadas para cada isolado, utilizando-se a técnica de microdiluição em caldo. O óleo essencial de orégano evidenciou forte atividade antibacteriana (CIM média = 529mig ml-1 e CBM média= 661mig ml-1), seguido do tomilho (CIM média=961mig ml-1 e CBM média= 1074mig ml-1), com atividade moderada, enquanto que a menor atividade foi observada com o óleo essencial de canela (CIM média= 1335mig ml-1 e CBM média = 1979mig ml-1). Apesar deste claro padrão de atividade, os sorovares de Salmonella enterica evidenciaram significativas variações de suscetibilidade, embora nenhuma, em particular, pudesse ser classificada como totalmente sensível ou resistente aos três óleos essenciais avaliados. Assim, no momento em que os antibacterianos utilizados como promotores de crescimento estão sendo substituídos. E os óleos essenciais de temperos e condimentos se constituem numa alternativa importante, os resultados aqui apresentados sinalizam dois pontos: os óleos essenciais de orégano e tomilho são efetivos contra Salmonella, mas as variações de suscetibilidade entre os sorovares deverão também ser consideradas.

Anti-equine arteritis virus activity of ethanolic extract and compounds from Origanum vulgare / Atividade do extrato etanólico e compostos de Origanum vulgare contra o virus da arterite equina

The equine arteritis virus (EAV) is responsible by an important respiratory and reproductive disease in equine populations and there is no specific antiviral treatment available. The objective of this study was to investigate the activity of an ethanolic crude extract of Origanum vulgare (EEO) and of isolated compound caffeic acid, p-coumaric acid, rosmarinic acid, quercetin, luteolin, carnosol, carnosic acid, kaempferol and apigenin against EAV. The assays were performed using non-cytotoxic concentrations. The antiviral activity was monitored initially by cytopathic effect inhibition (CPE) assay in RK13 cells in the presence or absence of EEO. Pre-incubated cells with EEO were also examined to show prophylactic effect. Direct viral inactivation by EEO and isolated compounds was evaluated by incubation at 37C or 20C. After the incubation period, the infectivity was immediately determined by virus titrations on cell cultures and expressed as 50% tissue culture infective dose (TCID50)/100 µL. There was significant virucidal activity of EEO and of the compounds caffeic acid, p-coumaric acid, quercetin, carnosic acid and kaempferol. When EEO was added after infection, EEO inhibited the virus growth in infected cells, as evidenced by significant reduction of the viral titre. The results provide evidence that the EEO exhibit an inhibitory effect anti-EAV. Among the main compounds evaluated, caffeic acid, p-coumaric acid,carnosic acid, kaempferol and mainly quercetin, contributed to the activity of EEO. EEO may represent a good prototype for the development of a new antiviral agent, presenting promising for combating arteriviruses infections.

O virus da arterite equine (EAV) é responsável por uma importante doença respiratória e reprodutiva na população de equinos e não há tratamento antiviral específico disponível. O objetivo desse estudo foi investigar a atividade de um extrato etanólico de Origanum vulgare (EEO) e dos compostos isolados ácido caféico, ácido p-cumarico, ácido rosmarínico, quercetina, luteolina, carnosol, ácido carnósico, campferol e apigenina contra o EAV. Os ensaios foram realizados com concentrações não citotóxicas. A atividade antiviral foi monitorada inicialmente por um ensaio de inibição de efeito citopático (CPE) em células RK13 na presença ou ausência do EEO. Células pré-incubadas com o EEO foram também examinadas para a presença de efeito profilático. Inativação direta do EAV pelo EEO e pelos compostos isolados foi avaliada mediante incubação a 37C ou 20C. Após o período de incubação, a infectividade foi imediatamente determinada por titulação viral em cultivo celular sendo expresso como dose infectiva a 50% (TCID50)/100 µL. Houve significativa atividade virucida do EEO e dos compostos ácido caféico, ácido p-cumarico, quercetina, ácido carnósico e campferol. Quando o EEO foi adicionado após a infecção, o EEO inibiu a replicação do vírus nas células infectadas, o que foi evidenciado pela redução significativa do título viral. Os resultados fornecem evidências de que o EEO possui efeito anti-EAV.Entre os principais compostos presentes avaliados, ácido caféico, ácido p-cumarico, ácido carnósico, campferol e, principalmente, quercetina, contribuíram para a atividade antiviral do extrato. O EEO pode representar um bom protótipo para o desenvolvimento de um novo agente antiviral, sendo promissor para combater infecções por arterivírus.