Anatomical and histological traits of Brycon amazonicus liver cultivated in a semi-intensive system

Abstract The work aimed to evaluate the weight-length relationship and the condition factor, characterizing the biometry, anatomy, histology and volumetric density of the liver of Brycon amazonicus, in different stages of body growth. The experiment used twenty specimens in four stages of body growth (PI, PII, PIII and PIV) harvested every 90 days, containing five specimens, each group. The livers were dissected, weighed (g) and processed routinely using the hematoxylin and eosin technique. The data were submitted to analysis of variance, Pearsons correlation test and linear regression. The equation that represented the weight-length relation was W = 0.05902 x L2.63, with negative allometric growth, but with a relative condition factor equal to 1.0. The liver was divided into three lobes with the gallbladder close to the right lobe and its color varied from light red to dark red, not varying in relation to other fish species. The hepatosomatic relationship followed body growth until the PII group stage and then declined, demonstrating the behavior of its development in Brycon amazonicus. The organ consists predominantly of hepatocytes, followed by sinusoidal vessels and capillaries, with histological morphology similar to that of many species of fish. Melanomacrophage centers were found only in the most developed animals, but in small quantities, prompting the development of new research on this cell, in this species. In this way, research of this nature allows the characterization of fish species, helping to improve breeding methods, understanding pathological processes caused by diseases, and obtaining better productive capacity, serving an increasingly demanding and prosperous market.

Resumo O trabalho objetivou avaliar a relação peso-comprimento e o fator de condição, caracterizando a biometria, anatomia, histologia e densidade volumétrica do fígado de Brycon amazonicus, em diferentes estágios de crescimento corporal. O experimento utilizou vinte espécimes em quatro fases de crescimento corporal (PI, PII, PIII e PIV) colhidos a cada 90 dias, contendo cinco espécimes, cada grupo. Os fígados foram dissecados, pesados (g) e processados rotineiramente pela técnica da hematoxilina e eosina. Os dados foram submetidos à análise de variância, teste de correlação de Pearson e regressão linear. A equação que representou a relação peso-comprimento foi W = 0,05902 x L2,63, com crescimento alométrico negativo, mas com fator de condição relativo igual a 1,0. O fígado apresentou-se dividido em três lobos com a vesícula biliar próxima ao lobo direito e sua cor variou de vermelho claro a vermelho escuro, não variando em relação a outras espécies de peixes. A relação hepatossomática acompanhou o crescimento corporal até a fase do grupo PII e então declinou, demonstrando o comportamento de seu desenvolvimento em Brycon amazonicus. O órgão constitui-se predominantemente por hepatócitos, seguido de vasos e capilares sinusoidais, com a morfologia histológica semelhante ao de muitas espécies de peixes. Centros melanomacrófagos foram encontrados apenas nos animais mais desenvolvidos, mas em pequena quantidade, instigando o desenvolvimento de novas pesquisas sobre esta célula, nesta espécie. Desta forma, pesquisas desta natureza permitem a caracterização de espécies de peixes, auxiliando no aperfeiçoamento de métodos de criação, compreensão de processos patológicos provocados por enfermidades, e obtenção de melhor capacidade produtiva, atendendo um mercado cada vez mais exigente e próspero.

Anatomical and histological traits of Brycon amazonicus liver cultivated in a semi-intensive system / Características anatômicas e histológicas do fígado de Brycon amazonicus cultivado em sistema semi-intensivo

Abstract The work aimed to evaluate the weight-length relationship and the condition factor, characterizing the biometry, anatomy, histology and volumetric density of the liver of Brycon amazonicus, in different stages of body growth. The experiment used twenty specimens in four stages of body growth (PI, PII, PIII and PIV) harvested every 90 days, containing five specimens, each group. The livers were dissected, weighed (g) and processed routinely using the hematoxylin and eosin technique. The data were submitted to analysis of variance, Pearson's correlation test and linear regression. The equation that represented the weight-length relation was W = 0.05902 x L2.63, with negative allometric growth, but with a relative condition factor equal to 1.0. The liver was divided into three lobes with the gallbladder close to the right lobe and its color varied from light red to dark red, not varying in relation to other fish species. The hepatosomatic relationship followed body growth until the PII group stage and then declined, demonstrating the behavior of its development in Brycon amazonicus. The organ consists predominantly of hepatocytes, followed by sinusoidal vessels and capillaries, with histological morphology similar to that of many species of fish. Melanomacrophage centers were found only in the most developed animals, but in small quantities, prompting the development of new research on this cell, in this species. In this way, research of this nature allows the characterization of fish species, helping to improve breeding methods, understanding pathological processes caused by diseases, and obtaining better productive capacity, serving an increasingly demanding and prosperous market.

Resumo O trabalho objetivou avaliar a relação peso-comprimento e o fator de condição, caracterizando a biometria, anatomia, histologia e densidade volumétrica do fígado de Brycon amazonicus, em diferentes estágios de crescimento corporal. O experimento utilizou vinte espécimes em quatro fases de crescimento corporal (PI, PII, PIII e PIV) colhidos a cada 90 dias, contendo cinco espécimes, cada grupo. Os fígados foram dissecados, pesados (g) e processados rotineiramente pela técnica da hematoxilina e eosina. Os dados foram submetidos à análise de variância, teste de correlação de Pearson e regressão linear. A equação que representou a relação peso-comprimento foi W = 0,05902 x L2,63, com crescimento alométrico negativo, mas com fator de condição relativo igual a 1,0. O fígado apresentou-se dividido em três lobos com a vesícula biliar próxima ao lobo direito e sua cor variou de vermelho claro a vermelho escuro, não variando em relação a outras espécies de peixes. A relação hepatossomática acompanhou o crescimento corporal até a fase do grupo PII e então declinou, demonstrando o comportamento de seu desenvolvimento em Brycon amazonicus. O órgão constitui-se predominantemente por hepatócitos, seguido de vasos e capilares sinusoidais, com a morfologia histológica semelhante ao de muitas espécies de peixes. Centros melanomacrófagos foram encontrados apenas nos animais mais desenvolvidos, mas em pequena quantidade, instigando o desenvolvimento de novas pesquisas sobre esta célula, nesta espécie. Desta forma, pesquisas desta natureza permitem a caracterização de espécies de peixes, auxiliando no aperfeiçoamento de métodos de criação, compreensão de processos patológicos provocados por enfermidades, e obtenção de melhor capacidade produtiva, atendendo um mercado cada vez mais exigente e próspero.

Anatomical and histological traits of Brycon amazonicus liver cultivated in a semi-intensive system / Características anatômicas e histológicas do fígado de Brycon amazonicus cultivado em sistema semi-intensivo

The work aimed to evaluate the weight-length relationship and the condition factor, characterizing the biometry, anatomy, histology and volumetric density of the liver of Brycon amazonicus, in different stages of body growth. The experiment used twenty specimens in four stages of body growth (PI, PII, PIII and PIV) harvested every 90 days, containing five specimens, each group. The livers were dissected, weighed (g) and processed routinely using the hematoxylin and eosin technique. The data were submitted to analysis of variance, Pearson's correlation test and linear regression. The equation that represented the weight-length relation was W = 0.05902 x L2.63, with negative allometric growth, but with a relative condition factor equal to 1.0. The liver was divided into three lobes with the gallbladder close to the right lobe and its color varied from light red to dark red, not varying in relation to other fish species. The hepatosomatic relationship followed body growth until the PII group stage and then declined, demonstrating the behavior of its development in Brycon amazonicus. The organ consists predominantly of hepatocytes, followed by sinusoidal vessels and capillaries, with histological morphology similar to that of many species of fish. Melanomacrophage centers were found only in the most developed animals, but in small quantities, prompting the development of new research on this cell, in this species. In this way, research of this nature allows the characterization of fish species, helping to improve breeding methods, understanding pathological processes caused by diseases, and obtaining better productive capacity, serving an increasingly demanding and prosperous market.

O trabalho objetivou avaliar a relação peso-comprimento e o fator de condição, caracterizando a biometria, anatomia, histologia e densidade volumétrica do fígado de Brycon amazonicus, em diferentes estágios de crescimento corporal. O experimento utilizou vinte espécimes em quatro fases de crescimento corporal (PI, PII, PIII e PIV) colhidos a cada 90 dias, contendo cinco espécimes, cada grupo. Os fígados foram dissecados, pesados (g) e processados rotineiramente pela técnica da hematoxilina e eosina. Os dados foram submetidos à análise de variância, teste de correlação de Pearson e regressão linear. A equação que representou a relação peso-comprimento foi W = 0,05902 x L2,63, com crescimento alométrico negativo, mas com fator de condição relativo igual a 1,0. O fígado apresentou-se dividido em três lobos com a vesícula biliar próxima ao lobo direito e sua cor variou de vermelho claro a vermelho escuro, não variando em relação a outras espécies de peixes. A relação hepatossomática acompanhou o crescimento corporal até a fase do grupo PII e então declinou, demonstrando o comportamento de seu desenvolvimento em Brycon amazonicus. O órgão constitui-se predominantemente por hepatócitos, seguido de vasos e capilares sinusoidais, com a morfologia histológica semelhante ao de muitas espécies de peixes. Centros melanomacrófagos foram encontrados apenas nos animais mais desenvolvidos, mas em pequena quantidade, instigando o desenvolvimento de novas pesquisas sobre esta célula, nesta espécie. Desta forma, pesquisas desta natureza permitem a caracterização de espécies de peixes, auxiliando no aperfeiçoamento de métodos de criação, compreensão de processos patológicos provocados por enfermidades, e obtenção de melhor capacidade produtiva, atendendo um mercado cada vez mais exigente e próspero.

Anatomical and histological traits of Brycon amazonicus liver cultivated in a semi-intensive system / Características anatômicas e histológicas do fígado de Brycon amazonicus cultivado em sistema semi-intensivo

The work aimed to evaluate the weight-length relationship and the condition factor, characterizing the biometry, anatomy, histology and volumetric density of the liver of Brycon amazonicus, in different stages of body growth. The experiment used twenty specimens in four stages of body growth (PI, PII, PIII and PIV) harvested every 90 days, containing five specimens, each group. The livers were dissected, weighed (g) and processed routinely using the hematoxylin and eosin technique. The data were submitted to analysis of variance, Pearson's correlation test and linear regression. The equation that represented the weight-length relation was W = 0.05902 x L2.63, with negative allometric growth, but with a relative condition factor equal to 1.0. The liver was divided into three lobes with the gallbladder close to the right lobe and its color varied from light red to dark red, not varying in relation to other fish species. The hepatosomatic relationship followed body growth until the PII group stage and then declined, demonstrating the behavior of its development in Brycon amazonicus. The organ consists predominantly of hepatocytes, followed by sinusoidal vessels and capillaries, with histological morphology similar to that of many species of fish. Melanomacrophage centers were found only in the most developed animals, but in small quantities, prompting the development of new research on this cell, in this species. In this way, research of this nature allows the characterization of fish species, helping to improve breeding methods, understanding pathological processes caused by diseases, and obtaining better productive capacity, serving an increasingly demanding and prosperous market.(AU)

O trabalho objetivou avaliar a relação peso-comprimento e o fator de condição, caracterizando a biometria, anatomia, histologia e densidade volumétrica do fígado de Brycon amazonicus, em diferentes estágios de crescimento corporal. O experimento utilizou vinte espécimes em quatro fases de crescimento corporal (PI, PII, PIII e PIV) colhidos a cada 90 dias, contendo cinco espécimes, cada grupo. Os fígados foram dissecados, pesados (g) e processados rotineiramente pela técnica da hematoxilina e eosina. Os dados foram submetidos à análise de variância, teste de correlação de Pearson e regressão linear. A equação que representou a relação peso-comprimento foi W = 0,05902 x L2,63, com crescimento alométrico negativo, mas com fator de condição relativo igual a 1,0. O fígado apresentou-se dividido em três lobos com a vesícula biliar próxima ao lobo direito e sua cor variou de vermelho claro a vermelho escuro, não variando em relação a outras espécies de peixes. A relação hepatossomática acompanhou o crescimento corporal até a fase do grupo PII e então declinou, demonstrando o comportamento de seu desenvolvimento em Brycon amazonicus. O órgão constitui-se predominantemente por hepatócitos, seguido de vasos e capilares sinusoidais, com a morfologia histológica semelhante ao de muitas espécies de peixes. Centros melanomacrófagos foram encontrados apenas nos animais mais desenvolvidos, mas em pequena quantidade, instigando o desenvolvimento de novas pesquisas sobre esta célula, nesta espécie. Desta forma, pesquisas desta natureza permitem a caracterização de espécies de peixes, auxiliando no aperfeiçoamento de métodos de criação, compreensão de processos patológicos provocados por enfermidades, e obtenção de melhor capacidade produtiva, atendendo um mercado cada vez mais exigente e próspero.(AU)

Assisted Reproductive Technologies (ART) and genome editing to support a sustainable livestock

This article provides an overview of assisted reproductive technologies (ART) and genome engineering to improve livestock production systems for the contribution of global sustainability. Most ruminant production systems are conducted on grassland conditions, as is the case of South American countries that are leaders in meat and milk production worldwide with a well-established grass-feed livestock. These systems have many strengths from an environmental perspective and consumer preferences but requires certain improvements to enhance resource efficiency. Reproductive performance is one of the main challenges particularly in cow-calf operations that usually are conducted under adverse conditions and thus ART can make a great contribution. Fixed-time artificial insemination is applied in South America in large scale programs as 20 to 30% of cows receive this technology every year in each country, with greater calving rate and significant herd genetic gain occurred in this region. Sexed semen has also been increasingly implemented, enhancing resource efficiency by a) obtaining desired female replacement and improving animal welfare by avoiding newborn male sacrifice in dairy industry, or b) alternatively producing male calves for beef industry. In vitro embryo production has been massively applied, with this region showing the greatest number of embryos produced worldwide leading to significant improvement in herd genetics and productivity. Although the contribution of these technologies is considerable, further improvements will be required for a significant livestock transformation and novel biotechnologies such as genome editing are already available. Through the CRISPR/Cas-based system it is possible to enhance food yield and quality, avoid animal welfare concerns, overcome animal health threats, and control pests and invasive species harming food production. In summary, a significant enhancement in livestock productivity and resource efficiency can be made through reproductive technologies and genome editing, improving at the same time profitability for farmers, and global food security and sustainability.(AU)

Particle image velocimetry and digital image correlation for determining the elasticity modulus in wood

Several non-destructive testing techniques have been improved and tested in recent years. The non-destructive testing techniques using particle image velocimetry (PIV) and digital image correlation (DIC) differ from conventional testing techniques, as they allow making measurements indirectly. In this study, the elastic modulus in wood beams of Eucalyptus grandis and Pinus oocarpa were determined using PIV and DIC. The application of PIV and DIC techniques occurred during the static bending tests, when the displacements were also measured by the conventional method. The applied load values allowed calculating the elasticity modulus. In all regions of analysis, the mean values of the elasticity modulus found by the DIC, PIV and conventional method are statistically equivalent. It is concluded that the PIV and DIC testing techniques can be used to determine mechanical properties of wood.

Infuence of heat stress on in vitro oocyte and embryo production in high-yielding Holstein cows / Influência do estresse calórico na produção in vitro de oócitos e embriões de vacas Holandesas de alta produtividade

The objective of this study was to evaluate the influence of thermal shock on oocytes used in the production of in vitro embryos (IVP) of high productivity Holstein cows on the day of follicular aspiration (OPU; 0), 30, 60 and 90 days before the OPU. From the mean temperature on day 0 and on the previous 30, 60 and 90 days, they were classifed into comfort group (TC; up to 15°C) and heat stress (HS; above 15°C) groups.Anegative influence was observed on oocytes and viable embryos (total and grade I). The heat stress in the periods of 30 and 60 days prior to OPU resulted in lower production of viable oocytes (P=0.0028; P=0.0092, respectively). Under stress, on the day of OPU (HS-OPU), cows showed no reduction in the amount of viable oocytes (P=0.5497) and there was no influence of temperature for the group stressed 90 days before OPU (P=0.8287). For total embryos, the difference occurred only in the HS-30 group (P=0.0317), where the groups HS-OPU, HS-60, HS-90 presented, respectively, P=0. 1987, P=0.0596 and P=0.4580. Regarding the production of embryos of grade 1, there was no difference for the groups HS-OPU (P=0.2291) and HS-90 (P=0.2868), but there was a reduction for HS-30 (P=0.0143) and HS-60 (P=0.0253). In summary, heat stress had a negative impact when it occurred 30 or 60 days before follicular aspiration. In addition, 30 days seems to be the period of more susceptibility and that causes the greatest deleterious effects on oocyte viability and IVP.(AU)

Objetivou-se avaliar a infuência do estresse térmico em oócitos utilizados na produção in vitro de embriões (PIV) bovinos da raça Holandesa de alta produtividade no dia da aspiração folicular (OPU; 0), 30, 60 e 90 dias antes da OPU. A partir da temperatura média no dia 0 e aos 30, 60 e 90 dias anteriores, foram classificados nos grupos conforto (CT; até 15°C) e estresse por calor (ET -acima de 15°C). Observou-se infuência negativa em oócitos e embriões viáveis (total e grau I). A submissão ao estresse térmico nos períodos de 30 e 60 dias anteriores à OPU resultou em menor produção de oócitos viáveis (P=0,0028; P=0,0092, respectivamente). Sob estresse, no dia da OPU (ET-OPU), as vacas não apresentaram redução na quantidade de oócitos viáveis (P=0,5497) e não houve infuência da temperatura para o grupo estressado 90 dias antes da OPU (P=0,8287). Para embriões totais, a diferença ocorreu apenas no grupo ET-30 (P=0,0317), onde os grupos ET-OPU, ET-60, ET-90 apresentaram, respectivamente, P=0,1987, P=0,0596 e P=0,4580. Em relação à produção de embriões grau 1, não houve diferença para os grupos ET-OPU (P=0,2291) e ET-90 (P=0,2868), porém houve redução para ET-30 (P=0,0143) e ET- 60 (P=0,0253). Em resumo, o estresse por calor teve impacto negativo quando ocorreu 30 ou 60 dias antes da aspiração folicular. Além disso, 30 dias parece ser o período de maior suscetibilidade e que causa os maiores efeitos deletérios na viabilidade oocitária e na PIV.(AU)

Use of melatonin in the in vitro production of bovine embryos / Uso da melatonina na produção in vitro de embriões bovinos

We aimed to assess the effects of melatonin in the in vitro production of bovine embryos. Our experiment was conducted at the Laboratório de Reprodução Animal of the Universidade Estadual do Maranhão. The cumulus-oocyte complexes (COCs) were distributed among treatments at concentrations of 0, 10-1, 10-3 and 10-5 µMol/L melatonin. Our experiment was further divided into two: the first was to assess the effect of different concentrations of melatonin (treatments) on the maturation rate of COCs, and the second was to assess the effects of melatonin treatments on the in vitro production of bovine embryos. The results from the first experiment demonstrated no significant difference between the in vitro maturation rate of the cultivated COCs in treatments with melatonin. In the second experiment, however, melatonin treatments yielded statistically higher cleavage, morula and blastocyst rates in the 10-5 µM group (52.9%, 52.9%, and 35.3%, respectively), and lower rates in the 10-1 µM group (19.5%, 19.5% and 7.8%, respectively), compared to the others. The control group (no melatonin) and the 10-3 µM group showed similar results. We concluded that supplementation of melatonin in the in vitro maturation medium resulted in no improvement in the oocyte maturation rate, but in the in vitro production of embryos at different concentrations, the 10-5 µM group displayed better results, but with no improvement in the variables (P < 0.05).(AU)

Objetivou-se avaliar os efeitos da melatonina na produção in vitro de embriões bovinos. O experimento foi conduzido no Laboratório de Reprodução Animal da Universidade Estadual do Maranhão. Os complexos cumulus-oócitos (CCOs) foram distribuídos entre os tratamentos 0, 10-1, 10-3 e 10-5 µmol/L de melatonina. A avaliação foi dividida em dois experimentos, onde o primeiro avaliou o efeito dessas diferentes concentrações de melatonina (tratamentos) sobre a taxa de maturação dos CCOs e o segundo, o efeito desses tratamentos com melatonina sobre a produção in vitro de embriões bovinos. Os resultados no primeiro experimento demonstraram não haver diferença significativa na taxa de maturação in vitro dos CCOs cultivados no tratamento com melatonina. No entanto, o tratamento com melatonina no segundo experimento, as taxas de clivagens, mórulas e blastocistos, o grupo 10-5 µM foi estatisticamente superior (52,9%, 52,9% e 35,3%, respectivamente) e o grupo 10-1 µM inferior (19,5%, 19,5% e 7,8%, respectivamente) aos outros grupos. O grupo controle (sem melatonina) e o grupo 10-3 µM obtiveram resultados semelhantes. Concluiu-se que a suplementação da melatonina no meio de maturação in vitro não evidenciou melhoras na taxa de maturação dos oócitos, porém na produção in vitro de embriões em diferentes concentrações, o grupo 10-5 µM apresentou melhores resultados mesmo não havendo melhorias nas variáveis (P<0,05).(AU)

Use of melatonin in the in vitro production of bovine embryos / Uso da melatonina na produção in vitro de embriões bovinos

We aimed to assess the effects of melatonin in the in vitro production of bovine embryos. Our experiment was conducted at the Laboratório de Reprodução Animal of the Universidade Estadual do Maranhão. The cumulus-oocyte complexes (COCs) were distributed among treatments at concentrations of 0, 10-1, 10-3 and 10-5 µMol/L melatonin. Our experiment was further divided into two: the first was to assess the effect of different concentrations of melatonin (treatments) on the maturation rate of COCs, and the second was to assess the effects of melatonin treatments on the in vitro production of bovine embryos. The results from the first experiment demonstrated no significant difference between the in vitro maturation rate of the cultivated COCs in treatments with melatonin. In the second experiment, however, melatonin treatments yielded statistically higher cleavage, morula and blastocyst rates in the 10-5 µM group (52.9%, 52.9%, and 35.3%, respectively), and lower rates in the 10-1 µM group (19.5%, 19.5% and 7.8%, respectively), compared to the others. The control group (no melatonin) and the 10-3 µM group showed similar results. We concluded that supplementation of melatonin in the in vitro maturation medium resulted in no improvement in the oocyte maturation rate, but in the in vitro production of embryos at different concentrations, the 10-5 µM group displayed better results, but with no improvement in the variables (P < 0.05).

Objetivou-se avaliar os efeitos da melatonina na produção in vitro de embriões bovinos. O experimento foi conduzido no Laboratório de Reprodução Animal da Universidade Estadual do Maranhão. Os complexos cumulus-oócitos (CCOs) foram distribuídos entre os tratamentos 0, 10-1, 10-3 e 10-5 µmol/L de melatonina. A avaliação foi dividida em dois experimentos, onde o primeiro avaliou o efeito dessas diferentes concentrações de melatonina (tratamentos) sobre a taxa de maturação dos CCOs e o segundo, o efeito desses tratamentos com melatonina sobre a produção in vitro de embriões bovinos. Os resultados no primeiro experimento demonstraram não haver diferença significativa na taxa de maturação in vitro dos CCOs cultivados no tratamento com melatonina. No entanto, o tratamento com melatonina no segundo experimento, as taxas de clivagens, mórulas e blastocistos, o grupo 10-5 µM foi estatisticamente superior (52,9%, 52,9% e 35,3%, respectivamente) e o grupo 10-1 µM inferior (19,5%, 19,5% e 7,8%, respectivamente) aos outros grupos. O grupo controle (sem melatonina) e o grupo 10-3 µM obtiveram resultados semelhantes. Concluiu-se que a suplementação da melatonina no meio de maturação in vitro não evidenciou melhoras na taxa de maturação dos oócitos, porém na produção in vitro de embriões em diferentes concentrações, o grupo 10-5 µM apresentou melhores resultados mesmo não havendo melhorias nas variáveis (P<0,05).

Substituição parcial do soro fetal bovino durante cultivo in vitro reduz a concentração de fosfolipídios em embriões bovinos produzidos in vitro / Partial replacement of fetal bovine serum during in vitro culture decreases phospholipid content in in vitro produced bovine embryos

Soro fetal bovino (SFB) e albumina sérica bovina (BSA) são componentes importantes do cultivo in vitro (CIV) de embriões bovinos, porém são frequentemente associados ao acúmulo excessivo de lipídios, podendo prejudicar o desenvolvimento embrionário. Este estudo teve como objetivo substituir parcialmente o SFB por BSA V FAF durante o CIV de embriões bovinos, avaliar a produção embrionária e quantificar os lipídios dos embriões, SFB e dos meios de cultivo. Para isto, os embriões desenvolveram em meios de cultivo suplementados com 10% de SFB (SFB10%) ou 5% de SFB e 0.03g de BSA V FAF (SFB5%/BSA). O conteúdo lipídico foi avaliado por UHPLC-MS/MS. A análise estatística foi feita utilizando teste t e ANOVA. A substituição parcial de SFB por BSA V FAF não alterou a produção embrionária. Nos dois grupos foram identificados 10 fosfolipídios e três deles, DOPC (p=0,037), POPG (p=0,046) e C24: 1-SM (p=0,009), apresentaram menores concentrações no meio SFB5%/BSA. Os fosfolipídios identificados nos embriões coincidem com os encontrados no SFB e meios de cultivo e quatro deles DOPC (p=0,013), DPPC (p=0,004), POPG (p=0,05) e C24:1-SM (p=0,003) diminuíram a concentração com a redução do SFB. A substituição parcial do SFB diminui a concentração de fosfolipídios sem prejudicar a produção embrionária, sugerindo uma melhora nas técnicas relacionadas ao cultivo in vitro.(AU)

Fetal bovine serum (FBS) and bovine serum albumin (BSA) are important components during bovine embryo in vitro culture (IVC), but they are associated with excess of embryonic lipid, which might impair embryo development. This study aimed to partially replace FBS by BSA V FAF during bovine IVC, evaluate embryo production and quantify the phospholipid content in produced embryos, SFB and IVC medium. The embryos were in vitro cultured in medium supplied with 10% of FBS (FBS10%) or with 5% of FBS plus 0.03 g BSA V FAF (FBS5%/BSA). The lipid content was evaluated using UHPLC-MS/MS and statistical analysis was performed using t-test and ANOVA. The partial replacement of FBS by BSA V FAF did not alter embryo production. Ten phospholipids were identified in both groups and three of them, DOPC (p=0.037), POPG (p=0.046) and C24: 1-SM (p=0.009) presented lower concentration in FBS5%/BSA culture medium. The phospholipids identified on embryos matches with those found on SFB and culture medium and four of them DOPC (p=0.013), DPPC (p=0.004), POPG (p=0.05) and C24:1- SM (p=0.003) reduced its concentration when FBS was reduced. Theses founds shown that the FBS partial replacement reduces phospholipids content in embryos but do not decrease embryo production, suggesting a technical improvement.(AU)

Substituição parcial do soro fetal bovino durante cultivo in vitro reduz a concentração de fosfolipídios em embriões bovinos produzidos in vitro / Partial replacement of fetal bovine serum during in vitro culture decreases phospholipid content in in vitro produced bovine embryos

Soro fetal bovino (SFB) e albumina sérica bovina (BSA) são componentes importantes do cultivo in vitro (CIV) de embriões bovinos, porém são frequentemente associados ao acúmulo excessivo de lipídios, podendo prejudicar o desenvolvimento embrionário. Este estudo teve como objetivo substituir parcialmente o SFB por BSA V FAF durante o CIV de embriões bovinos, avaliar a produção embrionária e quantificar os lipídios dos embriões, SFB e dos meios de cultivo. Para isto, os embriões desenvolveram em meios de cultivo suplementados com 10% de SFB (SFB10%) ou 5% de SFB e 0.03g de BSA V FAF (SFB5%/BSA). O conteúdo lipídico foi avaliado por UHPLC-MS/MS. A análise estatística foi feita utilizando teste t e ANOVA. A substituição parcial de SFB por BSA V FAF não alterou a produção embrionária. Nos dois grupos foram identificados 10 fosfolipídios e três deles, DOPC (p=0,037), POPG (p=0,046) e C24: 1-SM (p=0,009), apresentaram menores concentrações no meio SFB5%/BSA. Os fosfolipídios identificados nos embriões coincidem com os encontrados no SFB e meios de cultivo e quatro deles DOPC (p=0,013), DPPC (p=0,004), POPG (p=0,05) e C24:1-SM (p=0,003) diminuíram a concentração com a redução do SFB. A substituição parcial do SFB diminui a concentração de fosfolipídios sem prejudicar a produção embrionária, sugerindo uma melhora nas técnicas relacionadas ao cultivo in vitro.

Fetal bovine serum (FBS) and bovine serum albumin (BSA) are important components during bovine embryo in vitro culture (IVC), but they are associated with excess of embryonic lipid, which might impair embryo development. This study aimed to partially replace FBS by BSA V FAF during bovine IVC, evaluate embryo production and quantify the phospholipid content in produced embryos, SFB and IVC medium. The embryos were in vitro cultured in medium supplied with 10% of FBS (FBS10%) or with 5% of FBS plus 0.03 g BSA V FAF (FBS5%/BSA). The lipid content was evaluated using UHPLC-MS/MS and statistical analysis was performed using t-test and ANOVA. The partial replacement of FBS by BSA V FAF did not alter embryo production. Ten phospholipids were identified in both groups and three of them, DOPC (p=0.037), POPG (p=0.046) and C24: 1-SM (p=0.009) presented lower concentration in FBS5%/BSA culture medium. The phospholipids identified on embryos matches with those found on SFB and culture medium and four of them DOPC (p=0.013), DPPC (p=0.004), POPG (p=0.05) and C24:1- SM (p=0.003) reduced its concentration when FBS was reduced. Theses founds shown that the FBS partial replacement reduces phospholipids content in embryos but do not decrease embryo production, suggesting a technical improvement.

Use of a colloid to optimize centrifugation in the selection of bovine sperm for IVF / Uso de um coloide para otimizar a centrifugação na seleção de espermatozoides bovinos para FIV

This study aimed to evaluate the effect of the force and duration of centrifugation and the impact of cushioned centrifugation on sperm selection by Percoll gradient, on sperm quality and development kinetics of in vitro produced bovine embryos. Two experiments were performed. In Experiment I, a pool of semen was selected by Percoll gradients and the pellet was divided into four groups and distributed in a 2 × 2 factorial, with two forces (2200 × g or 9000 × g) and two durations (1 min or 3 min) of centrifugation. In Experiment II, semen was divided into two groups and selected by Percoll gradient with Cushion Fluid (CF) or without CF (Control) in the second centrifugation. The morphofunctionality, biochemical characteristics and fertilizing capacity of the selected sperms were evaluated. In addition, the development of the resulting bovine embryos was monitored for 48 h post-insemination. Duncan and Chi-square tests (P < 0.05) were used to compare the means. In Experiment I, there was a significant increase in sperm vigor (P < 0.05) after sperm selection in all treatments. The force and duration of centrifugation did not have any effect on sperm motility, vigor, and recovery rate among the different treatments (P > 0.05). In Experiment II, the recovery rate and reactive oxygen species (ROS) production in semen were similar among treatments (P > 0.05) although a higher ROS production was observed in the CF fertilization medium. Total fertilization rate was superior in the CF group (65.4 ± 5.3%) compared to that in Control (39.6 ± 4.9%). However, the normal fertilization and cleavage rate did not differ between the Control (94 ± 6.3% and 58.3 ± 8.3%) and CF (89 ± 7.1% and 75.0 ± 7.3%) groups. The reduction in the force and duration of centrifugation did not decrease the sperm recovery during selection by the Percoll gradient and the use of CF in the second centrifugation did not affect the normal fertilization and development of bovine IVF embryos up to 48 h.(AU)

Esse estudo objetivou avaliar o efeito da força e duração da centrifugação, e o impacto da centrifugação amortecida na seleção espermática por gradientes de Percoll, na qualidade espermática e cinética do desenvolvimento de embriões bovinos produzidos in vitro. Dois experimentos foram realizados. No experimento I, um pool de sêmen foi selecionado por gradientes de Percoll e o pellet dividido em quatro grupos e distribuído em um fatorial 2 x 2, com duas forças (2200 e 9000 X g) e dois tempos (1 e 3 min) de centrifugação. No Experimento II, o sêmen foi dividido em dois grupos e selecionado com (CF) ou sem CushionFluid (Controle) na segunda centrifugação. A morfofuncionalidade, características bioquímicas e capacidade fecundante dos espermatozoides selecionados foram avaliadas. Além disso, o desenvolvimento dos embriões bovinos resultantes foi monitorado por 48 horas pós-inseminação. Os testes Duncan e Qui-quadrado (P<0,05) foram usados para comparar as médias. No Experimento I, houve um aumento significativo no vigor após a seleção espermática para todos os tratamentos. A força e a duração da centrifugação não tiveram nenhum efeito na motilidade, vigor e recuperação espermática entre os diferentes tratamentos (P > 0.05). No Experimento II, a taxa de recuperação e a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) no sêmen foram similares entre os tratamentos (P>0,05), embora a maior produção de EROs foi observada no meio de fecundação do grupo CF. A taxa de fecundação total, foi superior no grupo CF (65.4±5.3%) comparada com o Controle (39.6±4.9%). Entretanto a fecundação normal e a taxa de clivagem não diferiram entre os grupos Controle (94±6.3% e 58.3±8.3%) e CF (89±7.1% and 75.0±7.3%). A redução na força e duração da centrifugação não diminuiu a recuperação espermática durante a seleção por gradientes de Percoll e o uso de CF na segunda centrifugação não influenciou a fecundação normal e o desenvolvimento de embriões bovinos PIV até 48 horas.(AU)

Change in energy metabolism of in vitro produced embryos: an alternative to make them more cryoresistant? / Alteração no metabolismo energético de embriões produzidos in vitro: uma alternativa para torná-los mais criotolerantes?

For the development of in vitro produced (IVP) as well as in vivo produced bovine embryos, it is extremely important that their energy metabolism works properly because the embryo must be able to metabolize energy substrates that are necessary for producing energy. Lipids play an important role in early embryonic development, acting as source of energy for oocytes and embryos. However, it is known that oocytes and embryos, mainly IVP, accumulate large amounts of lipids in the cytoplasm. Although they are extremely important in embryonic development, lipids have been associated with the reduced survival of bovine embryos following cryopreservation. There is evidence that at least four different categories of lipids affect embryo survival after cryopreservation, including triglycerides (TAG), free fatty acids, cholesterol and phospholipids. Thus, many studies are being conducted to improve the resistance of IVP embryos to the cryopreservation process by reducing the concentration or removing the source of serum from the medium or by reducing oocyte/embryo lipids using mechanical or chemical means. Regarding the use of delipidating agents that reduce the uptake and synthesis of fatty acids (FA) by cells, substances such as phenazine ethosulfate (PES), forskolin, L-carnitine and isomers of conjugated linoleic acid (CLA) have been utilized. This review aims to address important issues related to embryonic energy metabolism, the importance of lipid metabolism and its relation tothe cryopreservation of IVP bovine embryos by summarizing the latest research in this field.(AU)

Para o desenvolvimento de embriões bovinos produzidos in vitro (PIV) e in vivo, é extremamente importante que o metabolismo energético funcione de maneira adequada, pois o embrião precisa ser capaz de metabolizar os substratos energéticos necessários para a produção de energia. Os lipídios desempenham papel importante no desenvolvimento embrionário inicial, atuando como fonte de energia para oócitos e embriões. Entretanto, sabe-se que oócitos e embriões bovinos, principalmente os PIV, acumulam grande quantidade de lipídios no citoplasma. Apesar de serem extremamente importantes no desenvolvimento embrionário, os lipídios têm sido associados com a reduzida sobrevivência após a criopreservação de embriões bovinos. Existem evidências de que pelo menos quatro classes de lipídios afetam a sobrevivência embrionária pós-criopreservação, sendo os triglicerídeos (TAG), ácidos graxos livres, colesterol e os fosfolipídios. Sendo assim, vários estudos estão sendo realizados com o intuito de melhorar a resistência dos embriões PIV ao processo de criopreservação, realizando a redução ou retirada do soro do meio ou a redução mecânica ou química de lipídios. Com relação ao uso de agentes delipidantes que diminuam a captação e síntese de ácidos graxos (AG) pelas células, substâncias como fenazina etossulfato (PES), forskolin, L-carnitina e isômeros do ácido linoleico conjugado (CLA) tem sido utilizadas. O objetivo desta revisão foi abordar aspectos importantes relacionados ao metabolismoenergético embrionário, a importância dos lipídios no metabolismo e sua relação com a criopreservaçãode embriões bovinos PIV sumarizando os estudos mais recentes nessa área.(AU)

Characterization of Vibrio cholerae isolates from 1976 to 2013 in Shandong Province, China

Cholera continues to be a serious public health issue in developing countries. We analyzed the epidemiological data of cholera from 1976 to 2013 in Shandong Province, an eastern coastal area of China. A total of 250 Vibrio cholerae isolates were selected for PCR analysis of virulence genes and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). The analysis of the virulence genes showed that the positive rates for tcpA and tcpI were the highest among strains from the southwest region, which had the highest incidence rate of cholera. Low positive rates for tcpA, tcpI and ctxAB among isolates from after 2000 may be an influencing factor contributing to the contemporary decline in cholera incidence rates. Spatiotemporal serotype shifts (Ogawa, Inaba, Ogawa, Inaba and O139) generally correlated with the variations in the PFGE patterns (PIV, PIIIc, PIa, PIIIb, PIIIa, PIb, and PII). O1 strains from different years or regions also had similar PFGE patterns, while O139 strains exclusively formed one cluster and differed from all other O1 strains. These data indicate that V. cholerae isolates in Shandong Province have continually undergone spatiotemporal changes. The serotype switching between Ogawa and Inaba originated from indigenous strains, while the emergence of serogroup O139 appeared to be unrelated to endemic V. cholerae O1 strains.(AU)

Efeitos da suplementação com anetol durante a MIV e CIV na maturação oocitária e na produção e qualidade de embriões bovinos

A produção in vitro de embriões (PIV) vem apresentando um crescimento significativo, representando 73,7% dos embriões produzidos mundialmente em 2019. Apesar de sua viabilidade comercial, a PIV necessita de aprimoramento para expandir ainda mais seu potencial. Desta forma, o aumento nas taxas de produção e qualidade embrionária proporcionaria ganhos substanciais na pecuária. Objetivou-se avaliar o efeito do anetol na MIV, nas doses de 300 e 3000µg/mL (Experimento 1) e avaliar o efeito do anetol na MIV e/ou CIV, na dose de 300µg/mL, na produção e qualidade de embriões bovinos (Experimento 2). Foram coletados ovários provenientes de frigoríficos utilizados nos dois experimentos. Folículos de 2 a 8mm foram puncionados e submetidos à maturação com meio maturação in vitro (MIV) suplementado com SFB 10%. No experimento 1, foram divididos em 3 grupos experimentais, sendo o Grupo Controle composto por (meio base); Grupo M300 (meio base suplementado com 300 µg/ml de anetol) e Grupo M3000 (3000 µg/ml). Após a MIV, a maturação nuclear foi avaliada por meio da técnica de análise da configuração da cromatina para obtenção dos resultados de metáfase II. No experimento 2, a MIV foi realizada com meio base (Grupo Controle) ou suplementado com (300 µg/ml de anetol). Posteriormente, os oócitos foram submetidos à fecundação in vitro (FIV) e cultivo in vitro (CIV), sendo divididos em 04 grupos: Grupo Controle M0-C0 maturados e cultivados em meio sem adição de anetol, Grupo M0-C300 maturados sem anetol e cultivados em meio com 300 µg/ml, Grupo M300-C0 µg/ml maturados com 300 µg/ml de anetol e cultivados sem anetol e o Grupo M300-C300 com meio contendo 300 µg/ml de anetol na maturação e no cultivo. No 3º dia do cultivo (D3), após a FIV foi avaliado a clivagem, no 7º dia após a FIV (D7), foi avaliado a produção de blastocistos e no 8º dia (D8) foi avaliado e classificado os blastocistos por meio de analise morfológica em estereomicroscópico. Como análise estatística foi utilizado a análise de variância, com on way ANOVA, utilizando o software GraphPad Prism versão 6.0 (GraphPad Software Inc, La Jolla, CA, USA), e testes de Tukey (dados paramétricos). Observou-se que 300 µg/mL de anetol no meio MIV não promoveu diferença nas taxas de MII quando comparado ao grupo controle. Entretanto, a adição de 3000 µg/mL de anetol reduziu significativamente a porcentagem de CCOs que chegaram à metáfase II em relação aos demais grupos (P0,05). Em relação ao índice de clivagem, observamos que a adição de 300 µg/ml de anetol durante a MIV e a CIV aumentou a porcentagem de embriões clivados quando comparado aos demais grupos experimentais (P 0,05). Entretanto, nenhuma diferença foi encontrada entre os grupos quanto a produção embrionária, avaliada pela taxa de formação de blastocistos no D8 (P>0,05), nem sobre a qualidade embrionária, obtida por meio da contagem do número total de células embrionárias (P>0,05). Apesar das evidencias dos efeitos antioxidantes do anetol, encontradas na literatura, neste estudo o teste de TBARS realizado no meio de produção de embriões não apresentou significância estatística. Os genes SOD 1, CAT e GST relacionados a resistência ao estresse oxidativo, apresentaram aumento em sua abundancia nas células da granulosa quando foi utilizado o anetol. Alem disso, os genes COX2 e HAS também se apresentaram elevados, ressaltando o efeito benéfico do anetol sobre o metabolismo das CCs. Os embriões produzidos com ócitos maturados em presença de anetol também apresentaram elevação de transcritos do gene GPX1 que está envolvido na metabolização do peróxido de hidrogenio. A elevação da abundancia destes transcritos demonstra a contribuição do anetol para a neutralização do efeito das EROS. Por outro lado, apesar do alto número de embriões produzido no grupo maturado e cultivado com anetol, os genes IFNT2 e HASPA1A se encontravam diminuídos. Conclui se que a adição de 300 µg/mL de anetol durante a MIV e a CIV melhora a clivagem embrionária sem comprometer o desenvolvimento posterior do blastocisto.

INTRODUCTION: In vitro embryo production (IVP) has shown significant rise, reaching 68.7% of the embryos produced worldwide in 2018. Despite its commercial viability, IVP needs improvement to further expand its potential. Thus, livestock would benefit with substantial gains from increased production rates and embryo quality. OBJECTIVE: The objective was to evaluate the effect of anethole on in vitro maturation (IVM) at doses of 300 µg/mL and 3,000 µg/mL (Experiment 1) and to evaluate the effect of anethole on IVM and/or in vitro culture (IVC) at a dose of 300 µg/mL on the production and quality of bovine embryos (Experiment 2). MATERIAL AND METHODS: A total of 700 oocytes from ovaries from slaughterhouses were collected to be used in the two experiments. The 2 to 8 mm follicles were punctured and submitted to maturation with IVM medium supplemented with 10 % fetal bovine serum (FBS). In Experiment 1, a total of 300 oocytes were used and divided into 3 experimental groups: the Control Group, composed of basal medium; Group M300 (basal medium supplemented with 300 µg/ml anethole); and Group M3000 (basal medium supplemented with 3,000 µg/ml). After IVM, nuclear maturation was evaluated using chromatin configuration analysis technique to obtain the results of metaphase II (MII) with the best concentration, which was used in Experiment 2. In Experiment 2, IVM was performed either with basal medium only (Control Group) or with supplementation (Group M300 300 µg/ml anethole). Subsequently, 400 oocytes were subjected to in vitro fertilization (IVF) and IVC, and then divided into four groups: Control Group M0-C0: matured and cultivated in medium without addition of anethole; Group M0-C300: matured without anethole and cultivated in medium with 300 µg/ml anethole; Group M300-C0: matured with 300 µg/ml anethole and cultivated without anethole; and Group M300-C300: matured and cultivated in medium containing 300 µg/ml anethole. On the 3rd day of culture (D3), cleavage was evaluated after IVF; on the 7th day after IVF (D7), blastocyst production was evaluated; and on the 8th day (D8), blastocysts were evaluated and classified through morphological analysis in a stereomicroscope. Statistical analysis was carried out by using the one-way analysis of variance (one-way ANOVA), as well as Tukey tests for parametric data. RESULTS: When 300 µg/mL anethole were added to the MIV medium, there was no difference in MII rates in comparison to the control group. However, the addition of 3,000 µg/mL anethole significantly reduced the percentage of cumulus-oocyte complex (COC) that reached MII in relation to the other groups (P 0.05). Regarding the cleavage index, the addition of 300 µg/ml anethole during IVM and IVC was observed to increase the percentage of cleaved embryos when compared to the other experimental groups (P 0.05). Nevertheless, no difference was found between the groups regarding embryo production, which was assessed by blastocyst formation rate on D8 (P > 0.05), nor related to embryo quality, which was obtained by counting the total number of embryonic cells (P > 0.05). In spite of the evidence of antioxidant effects of anethole pointed out in the literature, the TBARS test performed in this study in the embryo production medium did not show any statistical significance. The SOD1, CAT, and GST genes related to resistance to oxidative stress presented increased abundance in granulosa cells when anethole was used. In addition, the COX2 and HAS genes were also elevated, highlighting the beneficial effect of anethole on the metabolism of COCs. Similar to in embryos produced with cells matured in the presence of anethole, a rise was detected in transcripts of the GPX1 gene, which is involved in the metabolization of hydrogen peroxide. The increased abundance of these transcripts demonstrates the role of anethole in neutralizing the effect of ROS. On the other hand, regardless of the large number of embryos produced in the group matured and cultivated with anethole, the IFNT2 and HASPA1A genes were decreased. CONCLUSION: The addition of 300 µg/mL anethole during IVM and IVC improves embryonic cleavage without compromising blastocyst development.

Produção in vitro (PIV) de embriões em bovinos / In vitro embryo production in cattle

A produção in vitro de embriões (PIV) é uma biotécnica importante para exploração do potencialgenético de fêmeas bovinas e tem sido utilizada em escala comercial no Brasil e no mundo. A PIV envolve asetapas de coleta, maturação, fecundação e cultivo in vitro sendo que a eficiência das etapas de maturação efecundação in vitro não difere daquela obtida in vivo. No entanto, o cultivo in vitro continua sendo a etapa queapresenta a menor eficiência sendo que, em média, apenas 30% dos oócitos maturados in vitro se desenvolvemao estádio de blastocisto. Adicionalmente, os blastocistos produzidos in vitro diferem daqueles produzidos invivo, apresentando menores taxas de prenhez e sendo menos tolerantes à criopreservação. Portanto, o objetivo destarevisão é realizar uma abordagem atualizada das principais etapas da produção in vitro de embriões bovinos.(AU)

The in vitro embryo production (IVP) is a major tool for exploration of the genetic potential of cowsand has been used in commercial scale in Brazil and worldwide. The IVP technique involves the steps ofcollecting, maturation, fertilization and in vitro culture and the efficiency of the steps of maturation andfertilization in vitro does not differ from that obtained in vivo. However, the in vitro culture continues to be thestep that has the lowest efficiency and, on average, only 30% of in vitro matured oocytes develop to blastocyststage. In addition, in vitro produced blastocysts differ from those produced in vivo, with lower pregnancy ratesand are less tolerant to cryopreservation. Therefore, the aim of this review is to perform an updated approach tothe main steps of in vitro production of bovine embryos.(AU)

Produção in vitro (PIV) de embriões em bovinos / In vitro embryo production in cattle

A produção in vitro de embriões (PIV) é uma biotécnica importante para exploração do potencialgenético de fêmeas bovinas e tem sido utilizada em escala comercial no Brasil e no mundo. A PIV envolve asetapas de coleta, maturação, fecundação e cultivo in vitro sendo que a eficiência das etapas de maturação efecundação in vitro não difere daquela obtida in vivo. No entanto, o cultivo in vitro continua sendo a etapa queapresenta a menor eficiência sendo que, em média, apenas 30% dos oócitos maturados in vitro se desenvolvemao estádio de blastocisto. Adicionalmente, os blastocistos produzidos in vitro diferem daqueles produzidos invivo, apresentando menores taxas de prenhez e sendo menos tolerantes à criopreservação. Portanto, o objetivo destarevisão é realizar uma abordagem atualizada das principais etapas da produção in vitro de embriões bovinos.

The in vitro embryo production (IVP) is a major tool for exploration of the genetic potential of cowsand has been used in commercial scale in Brazil and worldwide. The IVP technique involves the steps ofcollecting, maturation, fertilization and in vitro culture and the efficiency of the steps of maturation andfertilization in vitro does not differ from that obtained in vivo. However, the in vitro culture continues to be thestep that has the lowest efficiency and, on average, only 30% of in vitro matured oocytes develop to blastocyststage. In addition, in vitro produced blastocysts differ from those produced in vivo, with lower pregnancy ratesand are less tolerant to cryopreservation. Therefore, the aim of this review is to perform an updated approach tothe main steps of in vitro production of bovine embryos.

Produção in vitro de embriões bovinos oriundos de fêmeas previamente tratadas com somatotropina recombinante bovina (rbST) / In vitro production of bovine embryos derived from females previously treated with recombinant bovine somatotropin (rbST)

This study aimed to evaluate the effect of rbST on in vitro production of Girolanda female embryos.Ovum Pick-Up (OPU) was performed to obtain the cumulus-oocyte complexes (COCs) were subjected to thePIV. Pretreatment of rbST in cows Girolando did not influence the embryo development rate in vitro production.(AU)

Pre-incubation of porcine semen reduces the incidence of polyspermy on embryos derived from low quality oocytes / Pré-incubação dos espermatozoides suínos diminui polispermia e aumenta a produção embrionária em oócitos de baixa qualidade

The main cause of low efficiency of in vitro produced porcine embryos is the high polyspermic penetration rates at fertilization, which is aggravated in low quality oocytes. Experiment 1 evaluated the embryo development in high and low quality oocytes. Experiment 2 evaluated the embryo development and quality of low quality oocytes fertilized with sperm pre-incubated during 0h (control), 0.5h, 1h and 1.5h. Experiment 3 investigated fertilization and monospermic rates of the same groups of Experiment 2. Experiment 4 evaluated embryo development, cell density, fertilization and monospermic rates of high quality oocytes using semen pre incubated during the best time observed in the previous experiments. Cleavage and blastocyst rates were analyzed by chi-square test, and remaining data by ANOVA and Tukey test (P0.05). The cleavage (74.8 vs 51.7%) and blastocyst (33.7 vs 9.8%) rates were greater in oocytes of high versus low quality, with no differences in cell density. Fertilization rates (65.6 to 79.5%) were not influenced by pre-incubation time. However, semen pre-incubation during 1.5h increased monospermic penetration (53.3%) and cleavage rates (92.5%) in low quality oocytes. Blastocyst rate was improved with 1.5h of semen pre incubation; however they were still lower than that observed with high quality control oocytes. Ultimately, pre-incubation did not influence fertilization, monospermic penetration, embryo development rates, nor cell density in oocytes of high quality. Low-quality porcine oocytes resulted in better rates of embryo development if in vitro fertilized with sperm pre-incubated for 1.5 hour.(AU)

A principal causa da baixa eficiência na PIV de embriões suínos é a elevada taxa de polispermia, que é exacerbada em oócitos de baixa qualidade. O experimento 1 avaliou o desenvolvimento embrionário de oócitos de baixa e alta qualidade. O experimento 2 avaliou a qualidade e o desenvolvimento embrionário de oócitos de baixa qualidade fecundados com sêmen pré-incubado por 0h (controle), 0,5h, 1h e 1,5h. O experimento 3 investigou a fecundação e as taxas de monospermia dos mesmos grupos do experimento 2. O experimento 4 avaliou o desenvolvimento embrionário, a densidade celular, a fecundação e as taxas de monospermia de oócitos de alta qualidade, fecundados com sêmen pre-incubado com o melhor tempo observado nos experimentos anteriores. As taxas de clivagem e de blastocistos foram submetidas ao teste de Qui-quadrado e os demais dados submetidos à ANOVA e teste de Tukey (P0,05). As taxas de clivagem (74,8 vs 51,7%) e de blastocistos (33,7 vs 9,8%) foram superiores nos oócitos de alta qualidade, comparados aos de baixa qualidade, não havendo diferenças na quantidade de células embrionárias. As taxas de fecundação (65,6 vs 79,5%) não foram influenciadas pelo tempo de pré-incubação. Todavia, a pré-incubação do sêmen por 1,5h aumentou a penetração monospérmica (53,3%) e a taxa de clivagem (92,5%), nos oócitos de baixa qualidade. As taxas de blastocisto aumentaram com sêmen pré-incubado por 1,5h, que foram ainda inferiores às obtidas dos oócitos de alta qualidade do grupo controle. Finalmente, a pré-incubação do sêmen não influencia na fecundação, na penetração monospérmica, no desenvolvimento embrionário, nem na quantidade de células embrionárias com oócitos de alta qualidade. Oócitos suínos de baixa qualidade produzem melhores taxas de desenvolvimento embrionário se fecundados in vitro com sêmen pré-incubado por 1,5 horas.(AU)