Ozonioterapia, PRP, fitoterapia, misoprostol e imunomodulação: Novas abordagens terapêuticas para a solução de velhos problemas / Ozone therapy, PRP, phytotherapy, misoprostol and immunomodulation: New therapeutic approaches to solving old problems

A resistência aos antimicrobianos representa uma ameaça sanitária global crescente, que deve ser abordada com urgência na saúde pública, na produção animal, agrícola e no meio ambiente. Essa circunstância põe em risco a eficiência do tratamento e diminui a eficácia contra infecções causadas pelos mais diversos agentes etiológicos, resultando em enfermidades mais prolongadas afetando diretamente os índices de fertilidade. Dessa forma, o objetivo dessa revisão foi abordar diferentes formas terapêuticas para sub/infertilidade em equinos, com o intuito de minimizar os problemas acarretados pelo uso indiscriminado de fármacos, relatando novas terapias alternativas, tais como ozonioterapia, plasma rico em plaquetas, uso de prostaglandina E1 e imunomoduladores na tentativa de solucionar velhos problemas.(AU)

Antimicrobial resistance represents a growing global health threat that must be urgently addressed in public health, animal production, agriculture and the environment. This circumstance jeopardizes the efficiency of the treatment and decreases the effectiveness against infections caused by the most diverse etiological agents, resulting in more prolonged illnesses, directly affecting fertility rates. Thus, the objective of this review was to address different therapeutic forms for sub/infertility in horses, with the aim of minimizing the problems caused by the indiscriminate use of drugs, reporting new alternative therapies, such as ozone therapy, platelet-rich plasma, use of prostaglandin E1 and immunomodulators in an attempt to solve old problems.(AU)

Effects of breed, age and gender on equine platelet rich plasma and correlation of platelet count with its physical aspect / [Efeitos de raça, idade e gênero sobre o plasma rico em plaquetas em equinos e correlação da contagem plaquetária com seu aspecto físico]

Platelet rich plasma samples from 50 healthy horses of five different breeds (Thoroughbreds - TB, Brazilian Criollo Horses - BCH, Brazilian Sport Horses - BSH, Miniature Horses - MH and Crossbred Horses - CB), were investigated as to breed, age, and gender effect for platelet concentration. Moreover, a score for physical analysis was established to correlate PRP physical aspect with platelet count. Platelet count was performed by an automatic hematology analyzer and by manual count. PRP physical analysis was based on color, aspect, and capacity to separate blood components. MH showed significant higher platelet concentration than BSH (p<0.05), while the other breed comparisons showed no significant difference. There was no significant difference for gender but there was a weak correlation of age with PRP platelet concentrations (rs = -0.24). Most of the PRP presented yellow color, the separation of blood components showed no correlation, but the aspect showed a moderate correlation (rs = 0.30) with platelet count. Results suggest that PRP platelet concentration can be influenced by intrinsic factors such as breed. Additionally, the analysis of PRP aspect can help to evaluate the quality of the product when there is no access to platelet counts.

Amostras de plasma rico em plaquetas de 50 cavalos saudáveis, de cinco raças diferentes (Puro Sangue de Corrida, Crioula, Brasileiro de Hipismo, Pônei Brasileiro e sem raça definida), foram investigadas quanto à concentração plaquetária em relação à raça, à idade e ao sexo. Além disso, um escore foi estabelecido para correlacionar o aspecto físico do PRP com a contagem plaquetária. A contagem celular foi realizada por um analisador hematológico automático e pelo método manual. A análise física baseou-se na cor, no aspecto e na capacidade de separar hemocomponentes. Pôneis tiveram concentração plaquetária significativamente maior que os Brasileiros de Hipismo (P<0,05), mas as demais comparações entre raças não apresentaram diferença quanto à contagem plaquetária. Não houve diferença para o gênero, mas a idade demonstrou correlação fraca com as concentrações plaquetárias do PRP (rs = -0,24). A maioria dos PRPs apresentaram coloração amarela, e a separação dos hemocomponentes não mostrou correlação com a contagem plaquetária, mas o aspecto apresentou uma correlação moderada (rs = 0,30). Os resultados deste estudo sugerem que a concentração plaquetária do PRP pode ser influenciada por fatores intrínsecos, como a raça. Além disso, a análise do aspecto do PRP pode ajudar na avaliação da qualidade do produto quando não há acesso à contagem plaquetária.

Cellular components and TGF-beta1 content of a closed Tube system for Platelet Rich Plasma acquisition in horse] / [Componentes celulares e TGF-beta1 do plasma rico em plaquetas obtido por sistema fechado em equinos]

Platelet-rich plasma (PRP) has been proposed as an agent to accelerate the healing process and stimulate the regenerative capacity of tissues due to its abundance of growth factors. A large variety of kits and protocols are available to obtain PRP by different cell-separation systems. However, the lack of standardization may lead to inconsistent results. The aim of this study was to characterize cellular composition, platelet parameters using the ADVIA 120 flow cytometer, and TGF-ß1 concentration from the PRP product obtained through a closed system, using simple centrifugation. Six clinically healthy horses were used in this study. The protocol in the closed system resulted in approximately 1.6-fold higher platelet and approximately 2.0-fold lower white blood cell concentrations in comparison with whole blood values. The evaluated system was efficient in concentrating platelets and in retrieving a small number of leukocytes, using a protocol of single centrifugation at low speed.

O plasma rico em plaquetas (PRP) tem sido proposto como um agente para acelerar o processo de cicatrização e estimular a capacidade regenerativa dos tecidos, devido à sua abundância de fatores de crescimento. Uma grande variedade de kits e de protocolos está disponível para obtenção de PRP, utilizando-se diferentes sistemas de separação de células. No entanto, a falta de padronização pode levar a resultados inconsistentes. O objetivo deste estudo foi caracterizar a composição celular, os parâmetros plaquetários pelo citômetro de fluxo ADVIA 120 e a concentração de TGF-ß1 do PRP obtido em sistema fechado, por centrifugação simples. Seis cavalos clinicamente saudáveis ​​foram usados ​​neste estudo. O protocolo no sistema fechado resultou em concentrações de plaquetas aproximadamente 1,6 vez maior e concentrações de leucócitos aproximadamente 2,0 vezes menores em comparação com os valores do sangue total. O sistema avaliado foi eficiente na concentração de plaquetas e na recuperação de um pequeno número de leucócitos, utilizando um protocolo de centrifugação única em baixa velocidade.

In-vitro production and pre-validation of lyophilized canine platelet-rich plasma for therapeutic use

ABSTRACT: Platelet-rich plasma (PRP) has been considered a promising therapeutic alternative, since platelets are rich in growth factors that are used in the Regenerative Medicine field. However, fresh PRP cannot be stored for long periods. This study aimed to develop a protocol for obtaining lyophilized canine PRP capable of maintaining viability after its reconstitution. For that purpose, canine PRP extraction and lyophilization protocols were initially tested. Subsequently, assays were carried out to quantify the growth factors VEGF and TGF-, before and after the lyophilization process, gelation test and the three-dimensional gel structure analysis of the reconstituted lyophilized PRP by electron microscopy, as well as in vitro cell proliferation test in lyophilized PRP gel. Additionally, the immunogenicity test was performed, using allogeneic samples of lyophilized PRP. The results showed that the lyophilized PRP had adequate therapeutic concentrations of growth factors VEGF and TGF- (9.1pg/mL and 6161.6pg/mL, respectively). The reconstituted PRP gel after lyophilization showed an in vitro durability of 10 days. Its electron microscopy structure was similar to that of fresh PRP. In the cell proliferation test, an intense division process was verified in mesenchymal stem cells (MSCs) through the three-dimensional mesh structure of the lyophilized PRP gel. The immunogenicity test showed no evidence of an immune reaction. The findings were promising, suggesting the possibility of having a lyophilized canine PRP that can be marketed. New in vivo and in vitro studies must be carried out for therapeutic confirmation.

RESUMO: O plasma rico em plaquetas (PRP) é uma alternativa terapêutica promissora, pois as plaquetas são ricas em fatores de crescimento com ação na regeneração de tecidos. No entanto, o PRP fresco não pode ser armazenado por longos períodos. Esse trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo de obtenção de PRP liofilizado canino capaz de manter a viabilidade pós reconstituição. Portanto, foram testados diversos protocolos de extração e liofilização. Para validação do PRP canino liofilizado foi analisada a concentração dos fatores de crescimento VEGF e TGF- antes e após o processo de liofilização, a estrutura tridimensional do PRP liofilizado reconstituído em forma de gel por microscopia eletrônica e seu efeito in vitro na proliferação de células-tronco mesenquimais. Os resultados demonstraram que o PRP liofilizado apresentou concentrações terapêuticas adequadas dos fatores de crescimento VEGF e TGF- (9,1pg/ml e 6161,6pg/ml, respectivamente). O gel de PRP reconstituído após liofilização apresentou uma durabilidade in vitro de 10 dias, sua estrutura tridimensional mostrou-se semelhante ao PRP fresco e proporcionou intensa proliferação de células-tronco mesenquimais durante o cultivo. O teste de imunogenicidade não demonstrou evidências de reação imune. Os achados foram promissores, sugerindo a possibilidade de uso de PRP canino liofilizado para o mercado. Novos estudos in vivo e in vitro deverão ser conduzidos para comprovação terapêutica.

Influencing factors for preparation of platelet-rich plasma in horses / Fatores que influenciam o preparo do plasma rico em plaquetas na espécie equina

There is no consensus in the literature as to the best platelet-rich plasma (PRP) acquisition method or the ideal platelet concentration to stimulate tissue repair. Besides that, most studies do not provide a clear and replicable description of the methods used, which makes standardization and result comparison difficult. Thus, this study aimed to accurately describe the method and evaluate factors influencing PRP preparation in equines. In this regard, two protocols were used, P1 and P2, based on two centrifugation methods, which differed in blood volume, speed and time, and platelet pipetting and resuspension. In conclusion, factors such as centrifugation strength and time are essential to obtain PRP with adequate platelet count. However, other factors such as tube type and plasma pipetting and resuspension methods directly interfere with the replicability of the technique, and hence influencing PRP applicability.(AU)

Não há consenso na literatura quanto ao melhor método de obtenção do plasma rico em plaquetas (PRP) ou à concentração plaquetária ideal com o objetivo de estimular o reparo tecidual. Além disso, grande parte dos trabalhos não faz descrição clara e reprodutível dos métodos utilizados, o que dificulta a padronização e a comparação dos resultados. Dessa forma, este trabalho teve por objetivo descrever detalhadamente a metodologia e avaliar fatores que influenciam o preparo do PRP em equinos. Para isso, foram utilizados dois protocolos, P1 e P2, baseados em duas centrifugações, que diferiram quanto ao volume de sangue colhido, velocidade e tempo das centrifugações e método de pipetagem e ressuspensão das plaquetas. Conclui-se que fatores como força e tempo de centrifugação são essenciais à obtenção de um PRP com concentração plaquetária adequada. Contudo, fatores adicionais como tipo de tubo e métodos de pipetagem e ressuspensão do plasma interferem diretamente na repetibilidade da técnica, influenciando a aplicabilidade prática do PRP.(AU)

In-vitro production and pre-validation of lyophilized canine platelet-rich plasma for therapeutic use / Produção e validação de plasma rico em plaquetas canino liofilizado para fins de utilização terapêutica

Platelet-rich plasma (PRP) has been considered a promising therapeutic alternative, since platelets are rich in growth factors that are used in the Regenerative Medicine field. However, fresh PRP cannot be stored for long periods. This study aimed to develop a protocol for obtaining lyophilized canine PRP capable of maintaining viability after its reconstitution. For that purpose, canine PRP extraction and lyophilization protocols were initially tested. Subsequently, assays were carried out to quantify the growth factors VEGF and TGF-β, before and after the lyophilization process, gelation test and the three-dimensional gel structure analysis of the reconstituted lyophilized PRP by electron microscopy, as well as in vitro cell proliferation test in lyophilized PRP gel. Additionally, the immunogenicity test was performed, using allogeneic samples of lyophilized PRP. The results showed that the lyophilized PRP had adequate therapeutic concentrations of growth factors VEGF and TGF-β (9.1pg/mL and 6161.6pg/mL, respectively). The reconstituted PRP gel after lyophilization showed an in vitro durability of 10 days. Its electron microscopy structure was similar to that of fresh PRP. In the cell proliferation test, an intense division process was verified in mesenchymal stem cells (MSCs) through the three-dimensional mesh structure of the lyophilized PRP gel. The immunogenicity test showed no evidence of an immune reaction. The findings were promising, suggesting the possibility of having a lyophilized canine PRP that can be marketed. New in vivo and in vitro studies must be carried out for therapeutic confirmation.(AU)

O plasma rico em plaquetas (PRP) é uma alternativa terapêutica promissora, pois as plaquetas são ricas em fatores de crescimento com ação na regeneração de tecidos. No entanto, o PRP fresco não pode ser armazenado por longos períodos. Esse trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo de obtenção de PRP liofilizado canino capaz de manter a viabilidade pós reconstituição. Portanto, foram testados diversos protocolos de extração e liofilização. Para validação do PRP canino liofilizado foi analisada a concentração dos fatores de crescimento VEGF e TGF-β antes e após o processo de liofilização, a estrutura tridimensional do PRP liofilizado reconstituído em forma de gel por microscopia eletrônica e seu efeito in vitro na proliferação de células-tronco mesenquimais. Os resultados demonstraram que o PRP liofilizado apresentou concentrações terapêuticas adequadas dos fatores de crescimento VEGF e TGF- β (9,1pg/ml e 6161,6pg/ml, respectivamente). O gel de PRP reconstituído após liofilização apresentou uma durabilidade in vitro de 10 dias, sua estrutura tridimensional mostrou-se semelhante ao PRP fresco e proporcionou intensa proliferação de células-tronco mesenquimais durante o cultivo. O teste de imunogenicidade não demonstrou evidências de reação imune. Os achados foram promissores, sugerindo a possibilidade de uso de PRP canino liofilizado para o mercado. Novos estudos in vivo e in vitro deverão ser conduzidos para comprovação terapêutica.(AU)

In-vitro production and pre-validation of lyophilized canine platelet-rich plasma for therapeutic use / Produção e validação de plasma rico em plaquetas canino liofilizado para fins de utilização terapêutica

Platelet-rich plasma (PRP) has been considered a promising therapeutic alternative, since platelets are rich in growth factors that are used in the Regenerative Medicine field. However, fresh PRP cannot be stored for long periods. This study aimed to develop a protocol for obtaining lyophilized canine PRP capable of maintaining viability after its reconstitution. For that purpose, canine PRP extraction and lyophilization protocols were initially tested. Subsequently, assays were carried out to quantify the growth factors VEGF and TGF-β, before and after the lyophilization process, gelation test and the three-dimensional gel structure analysis of the reconstituted lyophilized PRP by electron microscopy, as well as in vitro cell proliferation test in lyophilized PRP gel. Additionally, the immunogenicity test was performed, using allogeneic samples of lyophilized PRP. The results showed that the lyophilized PRP had adequate therapeutic concentrations of growth factors VEGF and TGF-β (9.1pg/mL and 6161.6pg/mL, respectively). The reconstituted PRP gel after lyophilization showed an in vitro durability of 10 days. Its electron microscopy structure was similar to that of fresh PRP. In the cell proliferation test, an intense division process was verified in mesenchymal stem cells (MSCs) through the three-dimensional mesh structure of the lyophilized PRP gel. The immunogenicity test showed no evidence of an immune reaction. The findings were promising, suggesting the possibility of having a lyophilized canine PRP that can be marketed. New in vivo and in vitro studies must be carried out for therapeutic confirmation.(AU)

O plasma rico em plaquetas (PRP) é uma alternativa terapêutica promissora, pois as plaquetas são ricas em fatores de crescimento com ação na regeneração de tecidos. No entanto, o PRP fresco não pode ser armazenado por longos períodos. Esse trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo de obtenção de PRP liofilizado canino capaz de manter a viabilidade pós reconstituição. Portanto, foram testados diversos protocolos de extração e liofilização. Para validação do PRP canino liofilizado foi analisada a concentração dos fatores de crescimento VEGF e TGF-β antes e após o processo de liofilização, a estrutura tridimensional do PRP liofilizado reconstituído em forma de gel por microscopia eletrônica e seu efeito in vitro na proliferação de células-tronco mesenquimais. Os resultados demonstraram que o PRP liofilizado apresentou concentrações terapêuticas adequadas dos fatores de crescimento VEGF e TGF- β (9,1pg/ml e 6161,6pg/ml, respectivamente). O gel de PRP reconstituído após liofilização apresentou uma durabilidade in vitro de 10 dias, sua estrutura tridimensional mostrou-se semelhante ao PRP fresco e proporcionou intensa proliferação de células-tronco mesenquimais durante o cultivo. O teste de imunogenicidade não demonstrou evidências de reação imune. Os achados foram promissores, sugerindo a possibilidade de uso de PRP canino liofilizado para o mercado. Novos estudos in vivo e in vitro deverão ser conduzidos para comprovação terapêutica.(AU)

Autologous platelet-rich plasma action on skin autografts in horses / Ação do plasma rico em plaquetas autólogo em autoenxertos de pele em equinos

This study evaluated the action of autologous platelet-rich plasma (PRP) on cutaneous wounds, containing skin autografts, in the gluteal region of horses. Seven healthy horses were used. Two 6 x 6cm cutaneous wounds were produced on each side of the gluteal region. Eight days after wound induction, grafts were performed with skin fragments harvested from the neck, as well as the application of PRP, prepared by double-centrifugation protocol. Wounds with autografts on the left side received PRP (group T), and those with autografts on the right side did not receive treatment (group C). Macroscopic and microscopic evaluations were performed, considering the integration of autografts and retraction of wound edges, as well as neovascularization, inflammatory infiltrate, young fibroblasts, collagenization, reepithelization and autografts integration. There was no difference between the groups (P > 0.05) in relation to most macroscopic and microscopic variables. However, neovascularization was significantly greater (p = 0.0191) in group T, on the 14th day after grafting. It is concluded that PRP favors the process of skin repair with autografts in horses, since it increases the neovascularization in the initial phase of wound healing. Furthermore, the PRP seems to positively influence the integration of the skin autografts and the retraction of the wound edges.

Este estudo avaliou a ação do plasma rico em plaquetas (PRP) autólogo em feridas cutâneas, contendo autoenxertos de pele em equinos. Foram utilizados sete equinos hígidos, nos quais foram produzidas duas feridas cutâneas de 6 x 6cm, em cada um dos lados da região glútea. Oito dias após a indução das feridas, foram realizados enxertos com fragmentos de pele colhidos do pescoço, assim como a aplicação do PRP, preparado através de protocolo de dupla centrifugação. As feridas com autoenxertos do lado esquerdo receberam PRP (grupo T), e as com autoenxertos do lado direito não receberam tratamento (grupo C). Foram realizadas avaliações macroscópica e microscópica, considerando as variáveis integração dos autoenxertos e retração das bordas da ferida, além de neovascularização, infiltrado inflamatório, fibroblastos jovens, colagenização, reepitelização e integração dos autoenxertos. Não houve diferença entre os grupos (p > 0,05) em relação à maioria das variáveis macroscópicas e microscópicas. Contudo, a neovascularização foi significativamente maior (P = 0,0191) no grupo T, no 14º dia após a realização da enxertia. Conclui-se que o PRP favorece o processo de reparo da pele com autoenxertos em equinos, já que aumenta a neovascularização na fase inicial da cicatrização da ferida. Ainda, o PRP parece influenciar positivamente a integração dos autoenxertos de pele e a retração das bordas da ferida.

Autologous platelet-rich plasma action on skin autografts in horses / Ação do plasma rico em plaquetas autólogo em autoenxertos de pele em equinos

This study evaluated the action of autologous platelet-rich plasma (PRP) on cutaneous wounds, containing skin autografts, in the gluteal region of horses. Seven healthy horses were used. Two 6 x 6cm cutaneous wounds were produced on each side of the gluteal region. Eight days after wound induction, grafts were performed with skin fragments harvested from the neck, as well as the application of PRP, prepared by double-centrifugation protocol. Wounds with autografts on the left side received PRP (group T), and those with autografts on the right side did not receive treatment (group C). Macroscopic and microscopic evaluations were performed, considering the integration of autografts and retraction of wound edges, as well as neovascularization, inflammatory infiltrate, young fibroblasts, collagenization, reepithelization and autografts integration. There was no difference between the groups (P > 0.05) in relation to most macroscopic and microscopic variables. However, neovascularization was significantly greater (p = 0.0191) in group T, on the 14th day after grafting. It is concluded that PRP favors the process of skin repair with autografts in horses, since it increases the neovascularization in the initial phase of wound healing. Furthermore, the PRP seems to positively influence the integration of the skin autografts and the retraction of the wound edges.(AU)

Este estudo avaliou a ação do plasma rico em plaquetas (PRP) autólogo em feridas cutâneas, contendo autoenxertos de pele em equinos. Foram utilizados sete equinos hígidos, nos quais foram produzidas duas feridas cutâneas de 6 x 6cm, em cada um dos lados da região glútea. Oito dias após a indução das feridas, foram realizados enxertos com fragmentos de pele colhidos do pescoço, assim como a aplicação do PRP, preparado através de protocolo de dupla centrifugação. As feridas com autoenxertos do lado esquerdo receberam PRP (grupo T), e as com autoenxertos do lado direito não receberam tratamento (grupo C). Foram realizadas avaliações macroscópica e microscópica, considerando as variáveis integração dos autoenxertos e retração das bordas da ferida, além de neovascularização, infiltrado inflamatório, fibroblastos jovens, colagenização, reepitelização e integração dos autoenxertos. Não houve diferença entre os grupos (p > 0,05) em relação à maioria das variáveis macroscópicas e microscópicas. Contudo, a neovascularização foi significativamente maior (P = 0,0191) no grupo T, no 14º dia após a realização da enxertia. Conclui-se que o PRP favorece o processo de reparo da pele com autoenxertos em equinos, já que aumenta a neovascularização na fase inicial da cicatrização da ferida. Ainda, o PRP parece influenciar positivamente a integração dos autoenxertos de pele e a retração das bordas da ferida.(AU)

Effect of intrabronchial platelet rich plasma on the exercise-induced pulmonary hemorrhage endoscopic score in thoroughbred racehorses using furosemide: a preliminary study / [Efeito da instilação intrabronquial de plasma rico em plaquetas no escore endoscópico da hemorragia pulmonar induzida por exercício em cavalos Puro-Sangue Inglês de corrida e usuários de furosemida: um estudo preliminar]

The high prevalence of exercise-induced pulmonary hemorrhage (EIPH) in athletic horses constitutes to be a challenge to the racing industry and a source of major concern to animal welfare. Both experimental and clinical evidence indicate that the use of autologous platelet-rich plasma (PRP) is a promising effector of repair in a variety of pulmonary conditions. The present study evaluated the effect of intrabronchial instillation of PRP on EIPH endoscopic scores from 37 Thoroughbred racehorses. Inclusion criteria were for animals to be EIPH-positive in, at least, two consecutive post-exercise endoscopic exams and to receive 250mg of furosemide IV four hours before racing. Animals were randomly assigned into 3 groups: placebo, control, and PRP instillation. All 37 Thoroughbred racehorses included had EIPH endoscopic scores pre- and post- treatment compared by statistical analysis. The bleeding score from the group receiving PRP was significantly lower than in the control and placebo groups. No adverse effects were observed in any animal during or after the experiment. It was possible to conclude that the intrabronchial instillation of autologous PRP was effective in reducing EIPH scores in racehorses receiving furosemide and that this bioproduct can be considered as a promising coadjuvant in controlling EIPH in athletic horses.(AU)

A alta prevalência de hemorragia pulmonar induzida por exercício (HPIE) em cavalos atletas é um desafio de longa data para a indústria de corridas, além de figurar como grande preocupação sobre o bem-estar animal. As evidências experimentais e clínicas indicam que o uso do plasma rico em plaquetas (PRP) de fonte autógena é promissor na terapêutica de diversas lesões pulmonares. O presente estudo objetivou avaliar as mudanças após corrida no escore endoscópico de HPIE de 37 cavalos Puro-Sangue Inglês que receberam instilação intrabronquial de PRP autólogo. Os animais selecionados eram HPIE-positivos em, ao menos, dois exames endoscópicos consecutivos e recebiam 250mg de furosemida IV administrado quatro horas antes de cada corrida. Na comparação dos escores endoscópicos pré e pós-tratamento, verificou-se que o escore de HPIE do grupo tratado com PRP foi significantemente menor que o dos grupos controle e placebo. Nenhum efeito adverso foi observado nos animais durante ou após o experimento. Concluiu-se que a instilação intrabronquial de PRP autólogo foi efetiva na redução do escore de HPIE de cavalos de corrida usuários de furosemida e que este bioproduto pode ser considerado uma alternativa promissora no controle de HPIE em cavalos atletas.(AU)

Plasma rico em plaquetas e células tronco no tratamento de desmopatia dos ligamentos colaterais distais em equino / Platelet-rich plasma and stem cells in the treatment of desmopathy of the distal collateral ligaments in equine

Os equinos são animais muito utilizados em eventos esportivos, sendo, desta forma, propensos a sofrer acidentes que podem levar a lesões articulares e ósseas. Na rotina clínica, artifícios como o uso de raio X e ultrassonografia são de grande importância para que o correto diagnóstico seja feito e a conduta clínica possa ser melhor planejada. Além disso, alguns biomateriais, como o plasma rico em plaquetas (PRP) e células-tronco mesenquimais (CTMs), têm se inserido nos protocolos terapêuticos, demonstrando grande efetividade no tratamento desse tipo de lesão, devido à grande quantidade de fatores de crescimento presentes em ambos os biomateriais. O PRP é um derivado sanguíneo, caracterizado pela alta concentração plaquetária. Foi produzido a partir de duas centrifugações, a primeira para separar o plasma das hemácias e a segunda para concentrar as plaquetas. As CTMs foram isoladas de tecido adiposo, cultivadas, transportadas e aplicadas de forma autóloga, assim como o PRP. No presente relato, um equino, fêmea, Brasileiro de Hipismo com 8 anos, foi diagnosticado com desmopatia nos ligamentos colaterais da articulação interfalângica distal e foi tratado com PRP e CTMs, de forma associada e sequencial. Foi encontrada uma melhora do quadro clínico, significativa, em comparação aos dados encontrados na literatura, demonstrando grande potencialidade do uso associado de PRP e CTMs no tratamento de lesões ligamentares.

Horses are animals widely used in sporting events and are therefore prone to accidents that can lead to joint and bone injuries. In the clinical routine, devices such as the use of X-ray and ultrasound are of great importance for the correct diagnosis to be made and the clinical conduct can be better planned. In addition, some biomaterials such as platelet-rich plasma (PRP) and mesenchymal stem cells (MSCs) have been included in the therapeutic protocols, demonstrating great effectiveness in the treatment of this type of injury due to the large amount of growth factors present in both biomaterials. PRP is a blood derivative, characterized by high platelet concentration. It is produced from two centrifugations, the first to separate plasma from red blood cells and the second to concentrate platelets. MSCs were isolated from adipose tissue, cultured, transported and applied autologously, as well as PRP. In the present report, an 8-year-old female Brazilian equestrian horse was diagnosed with desmopathy in the collateral ligaments of the distal interphalangeal joint and was treated with PRP and MSCs in an associated and sequential manner. A significant improvement in the clinical picture was found in comparison to the data found in the literature, demonstrating great potential of the associated use of PRP and MSCs in the treatment of ligament injuries.

Skin graft associated with platelet-rich plasma in correcting extensive injuries resulting from the resection of skin cancer chemically induced in rats

ABSTRACT Purpose: To evaluate whether using platelet-rich plasma (PRP) in the graft recipient bed after the resection of a neoplasia can influence its recurrence because this product stimulates angiogenesis, mitogenesis and chemotaxis. Methods: A study with 30 rats Wistar (Rattus norvegicus albinus), which were separated into group A (induction of carcinogenesis, PRP in the postoperative period) and group B (induction of carcinogenesis, absence of PRP in the postoperative period), with 15 animals in each. Carcinogenesis was induced on the skin of the animals' chest by the topical application of 0.5% dimethylbenzantracene (DMBA) diluted in acetone. After surgical resection of the induced neoplasia, PRP was used to stimulate angiogenesis before surgical wound synthesis. Data on the control and experimental groups and macroscopic and microscopic variables were evaluated using analysis of variance and the Tukey's test (5%). Results: It was possible to determine that the use of PRP is good in reconstructive surgeries, but it is contraindicated in patients during tumor resection, as it can cause changes in the surgical bed, in addition to stimulating recurrences and metastases. Conclusions: PRP may interact with tumour cells that were in the recipient site of the surgical wound during the resection of a neoplasia, and a local recurrence process can be triggered by applying this product.

Allogenic platelet-rich plasma in induced ulcers in rat's cornea / [Plasma rico em plaquetas alogênico em úlceras de córnea induzidas em ratos]

The objective in this study was to evaluate the clinic effect of applying allogenic platelet-rich plasma (PRP) heated or not, for treating cornea ulcers, including the dosage of PDGF-BB in the cornea. The ulcers were induced, standardizing the left eye from 81 rats (Ratus norvegicus, albinus variety), assigned randomly into three groups (N=27): control group (CG) which did not receive any topic treatment; heated PRP group (GA) and PRP group (GP), which received topical treatment every eight hours for five days. Each group underwent evaluation at 24 hours (M1), three days (M3) and five days (M5). The clinical exam evaluated the opacity, vascularization and corneal repair. The corneal PDGF-BB was dosed through the ELISA method. The corneal opacity was decreased in PRP-treated animals (GA and GP) and corneal repair time reduced when compared to CG at M1 and M5. Furthermore, GP showed greater vascularization at M3 compared to M1. Applied allogenic PRP eye drops, heated or not, speed up corneal healing, and reduce corneal repair time. However, the corneal PDGF concentration was not altered in any of the treatments.(AU)

Objetivou-se avaliar o efeito clínico da aplicação de plasma rico em plaquetas alogênico (PRP) aquecido ou não, no tratamento de úlceras de córnea, como a dosagem de PDGF-BB na córnea. As úlceras foram induzidas, padronizando-se o olho esquerdo de 81 ratos (Rattus norvegicus, variedade albinus), aleatoriamente, nos três grupos (N = 27): grupo controle (CG), que não recebeu nenhum tratamento tópico; grupo PRP aquecido (GA) e grupo PRP (GP), que receberam tratamento tópico a cada oito horas, durante cinco dias. Cada grupo foi subdividido em 24 horas (M1), três dias (M3) e cinco dias (M5). O exame clínico avaliou a opacidade, a vascularização e o reparo corneano. O PDGF-BB corneano foi dosado pelo método Elisa. Houve diminuição da opacidade da córnea nos animais tratados com PRP (GA e GP) e diminuição do tempo de reparo da córnea em comparação com CG, M1 e M5. Além disso, foi observada maior vascularização no GP no momento M3 em relação ao M1. A aplicação de colírios de PRP alogênico, aquecidos ou não, acelera a cicatrização da córnea, além de reduzir o tempo de reparo da córnea. No entanto, a concentração de PDGF na córnea não se alterou em nenhum dos tratamentos.(AU)

Retorno de cavalos da raça Puro-Sangue Inglês às corridas após tratamento de fraturas slab do osso terceiro carpiano com PRP e células-tronco / Return of Thoroughbred racing horses to the races after treating slab fractures of the third carpal bone with PRP and stem cells

Background: Despite the fact that slab fracture of the third carpal bone is an event of great worldwide relevance in racehorses, the third carpal fracture doesn’t have data on treatments and return to racing in Brazil. The search for efficient treatments and which provide recovery providing horses return to racing is an objective of sports equine medicine. Regenerative therapies like Platelet Rich Plasma (PRP) and Stem Cells (MSc) have demonstrated a great potential in the treatment of several injuries. For the treatment of three Thoroughbred racing horses at Brazilian Jockey Club, with sagittal plane slab fractures of the third carpal bone, we used the association of PRP and Stem Cells for reduction of the rest and good return to conditions athletics of these horses. Cases: Three Thoroughbred racing horses, males, 4 and 5 years old, showed slab fracture third carpal bone in different moments of their activity at Brazilian Jockey Club. Usually, the treatment for this type of fracture is the arthroscopic repair and the conservative management. We performed after initial radiographic evaluation dorsoproximal-dorsodistal oblique (DPr-DDiO) “skyline”, intra-articular applications of PRP and MSCs. The treatments were performed according to the radiographic follow-up of the lesion evolution. No other treatment was performed concomitantly with cell therapy in the 3 treated patients. Three treatments were performed in the first patient and 2 in the second and third patients. Before each treatment for all patients, we performed radiography dorsoproximal-dorsodistal oblique (DPr-DDiO) ‘skyline’ of the carpus. After this step, the animal was sedated with 10% xylazine hydrochloride at a dose of 0.5 mg/kg intravenously. Antisepsis of the carpus was performed and applied with radiographic monitoring of the needle positioning, first the PRP in the volume of 2 mL and in sequence, 20 million cells MSCs suspended in autologous...

Optimized broad-range real-time PCR-based method for bacterial screening of platelet concentrates / Otimização de um método baseado em PCR em tempo real para rastreamento de bactérias em concentrados de plaquetas

Bacterial contamination of blood components remains a major challenge in transfusion medicine, particularly, platelet concentrates (PCs) due to the storage conditions that support bacterial proliferation. In this study, we develop a rapid, sensitive and specific real-time PCR protocol for bacterial screening of PCs. An internally controlled real-time PCR-based method was optimized and validated with our proprietary 16S Universal PCR Master Mix (IBMP/Fiocruz), which targets a conserved region of the bacterial 16S rRNA gene. Nonspecific background DNA was completely eliminated by treating the PCR Master Mix with ethidium monoazide (EMA). A lower limit of detection was observed for 10 genome equivalents with an observed Ct value of 34±1.07 in calibration curve generated with 10-fold serial dilutions of E. coli DNA. The turnaround time for processing, including microbial DNA purification, was approximately 4 hours. The developed method showed a high sensitivity with no non-specific amplification and a lower time-to-detection than traditional microbiological methods, demonstrating it to be an efficient means of screening pre-transfusion PCs.(AU)

A contaminação bacteriana dos componentes sanguíneos é um grande desafio na medicina transfusional, principalmente nos concentrados de plaquetas (PCs) devido às condições de armazenamento que favorecem a proliferação bacteriana. Neste estudo, desenvolvemos um protocolo de PCR em tempo real rápido, sensível e específico para a triagem bacteriana de PCs. Um método baseado em PCR em tempo real, controlado internamente, foi otimizado e validado com um Master Mix Universal PCR 16S (IBMP / Fiocruz), que detecta uma região conservada do gene 16S rRNA bacteriano. O background de DNA não específico foi completamente eliminado tratando a PCR Master Mix com monoazida de etídio (EMA). O limite de detecção inferior observado foi de 10 cópias equivalentes do genoma com um valor de Ct 34 ± 1,07, a curva de calibração foi gerada com diluições seriada de 10 vezes do DNA de E. coli. O tempo de processamento, incluindo a purificação microbiana do DNA, foi de aproximadamente 4 horas. O método desenvolvido mostrou alta sensibilidade sem amplificação inespecífica e menor tempo de detecção do que os métodos microbiológicos tradicionais, demonstrando ser um meio eficiente de triagem de PCs pré-transfusionais.(AU)

Comparação de diferentes protocolos para obtenção de plasma rico em plaquetas canino / Comparison of different protocols to obtain canine platelets rich plasma

O plasma rico em plaquetas (PRP) é um hemocomponente produzindo a partir do plasma, visando a obtenção de citocinas e fatores do crescimento com fins terapêuticos, como a cicatrização e reparação de diferentes tecidos. Esse estudo quantificou a concentração plaquetária obtida utilizando-se de três diferentes protocolos de obtenção do PRP de 13 amostras de sangue de 7 cães hígidos. As velocidades de centrifugação utilizadas no protocolo I foram de 1ª centrifugação de 1.500 rpm e 2ª centrifugação de 3.000 rpm; no protocolo II, de 2.000 rpm e 3.000 rpm; e o protocolo III com 3.000 rpm e 4.000 rpm, respectivamente. O melhor resultado para a produção de PRP autólogo foi obtido no protocolo 1, seguido do protocolo 2, com aumentos de 116% e 83,05% após a 2ª centrifugação, respectivamente. Entretanto, os resultados obtidos na 1ª centrifugação foram superiores aos apresentados após a 2ª. centrifugação, observando elevações de 203,66% e 210,20% comparados aos valores basais.

Platelet-rich plasma (PRP) is a blood component produced0 from plasma, aiming at obtaining cytokines and growth factors for therapeutic purposes, such as healing and repair of different tissues. This study quantified the platelet concentration resulting from three different protocols for obtaining PRP from 13 blood samples from 8 healthy dogs. The centrifugation speeds used in protocol I was 1,500 rpm in the first centrifugation and 3,000 rpm in the second centrifugation; in protocol II, 2,000 rpm and 3,000 rpm; and protocol III with 3,000 rpm and 4,000 rpm, respectively. The best result for autologous PRP production was obtained in protocol 1, followed by protocol 2, with increases of 116% and 83.05% after the 2nd centrifugation, respectively. However, the results obtained in the 1st centrifugation were superior to those presented after the 2nd. centrifugation, observing increases of 203.66% in protocol 1 and 210.20% in protocol 2, when compared to baseline.

Comparação de diferentes protocolos para obtenção de plasma rico em plaquetas canino / Comparison of different protocols to obtain canine platelets rich plasma

O plasma rico em plaquetas (PRP) é um hemocomponente produzindo a partir do plasma, visando a obtenção de citocinas e fatores do crescimento com fins terapêuticos, como a cicatrização e reparação de diferentes tecidos. Esse estudo quantificou a concentração plaquetária obtida utilizando-se de três diferentes protocolos de obtenção do PRP de 13 amostras de sangue de 7 cães hígidos. As velocidades de centrifugação utilizadas no protocolo I foram de 1ª centrifugação de 1.500 rpm e 2ª centrifugação de 3.000 rpm; no protocolo II, de 2.000 rpm e 3.000 rpm; e o protocolo III com 3.000 rpm e 4.000 rpm, respectivamente. O melhor resultado para a produção de PRP autólogo foi obtido no protocolo 1, seguido do protocolo 2, com aumentos de 116% e 83,05% após a 2ª centrifugação, respectivamente. Entretanto, os resultados obtidos na 1ª centrifugação foram superiores aos apresentados após a 2ª. centrifugação, observando elevações de 203,66% e 210,20% comparados aos valores basais.(AU)

Platelet-rich plasma (PRP) is a blood component produced0 from plasma, aiming at obtaining cytokines and growth factors for therapeutic purposes, such as healing and repair of different tissues. This study quantified the platelet concentration resulting from three different protocols for obtaining PRP from 13 blood samples from 8 healthy dogs. The centrifugation speeds used in protocol I was 1,500 rpm in the first centrifugation and 3,000 rpm in the second centrifugation; in protocol II, 2,000 rpm and 3,000 rpm; and protocol III with 3,000 rpm and 4,000 rpm, respectively. The best result for autologous PRP production was obtained in protocol 1, followed by protocol 2, with increases of 116% and 83.05% after the 2nd centrifugation, respectively. However, the results obtained in the 1st centrifugation were superior to those presented after the 2nd. centrifugation, observing increases of 203.66% in protocol 1 and 210.20% in protocol 2, when compared to baseline.(AU)

The influence of platelet-rich plasma (PRP) on colonic anastomosis healing impaired by intraperitoneal 5-flourouracil application: an experimental study

Purpose 5-flourourasil (5-FU) is commonly used for early intraperitoneal chemotherapy in colorectal or appendiceal cancer patients with peritoneal carcinomatosis. Due to its effect, anastomosis healing can be impaired and leads to anastomotic leakage. In this study, we aimed to investigate the potential healing effect of platelet-rich plasma (PRP) on colonic anastomosis impaired by intraperitoneal 5-flourouracil application. Methods After ten rats were sacrificed for preparing PRP, forty Wistar-albino rats were subjected to colonic anastomosis, and randomly allocated into four groups including 10 rats each. According to receiving PRP and/or 5-FU application, the groups were formed as control (C), 5-FU without PRP (CT), anastomosis with PRP (C-PRP), and 5-FU with PRP (CT-PRP). CT and CT-PRP groups also received 5-FU intraperitoneally on postoperative day 1 (POD 1). All animals were euthanized on pod 7. The body weight change, anastomotic bursting pressure (ABP), tissue hydroxiprolin (TH) and histopathological examination of each group were analyzed. Results 5-FU application significantly reduced ABP levels when compared with group C, C-PRP and CT-PRP (for each comparison, p 0,01). PRP application in CT-PRP group raised the measure of ABP up to the levels of C group. Although tissue hydroxyproline levels (THL) levels of CT-PRP group were found higher than CT group, it was not significant (p=0.112). Microscopically, comparing with CT group, PRP application significantly promoted the healing of colonic anastomosis subjected to 5-FU application by improving tissue edema, necrosis, submucosal bridging and collagen formation (p 0.05). Tissue healing in CT-PRP group was observed as good as the control groups. (C, C-PRP, p=0.181, p=0.134; respectively). Conclusion PRP administration on colonic anastomosis significantly promotes the healing process of anastomosis in rats receiving 5-FU. This result encourages further clinical use of PRP to reduce the frequency of AL in patients receiving EPIC.(AU)

Uso do plasma rico em plaquetas como adjuvante no tratamento de lesão meniscal e tendinose de calcâneo em um cão / Use of platelet-rich plasma as an adjuvant on treatment of meniscal lesion and tendinosis of calcaneus in a dog

O objetivo deste trabalho é relatar o caso de um cão com lesão meniscal associado à tendinose de calcâneo tratado com aplicação única de plasma rico em plaquetas (PRP) intraarticular e intratendínea. Foi atendido um cão da raça Boxer com dificuldade de deambulação há três meses. Observou-se claudicação grau II/IV em ambos os membros pélvicos, atrofia muscular bilateral, dor e leve crepitação em joelho esquerdo, discreta instabilidade aos testes de gaveta e tibial cranial, com intensa fibrose medial à articulação e espessamento/rigidez do tendão calcâneo direito. O estudo radiográfico demonstrou artrose moderada no joelho esquerdo e, ao exame ultrassonográfico, constatou-se áreas de hipoecogenicidade em menisco medial esquerdo e ruptura de fibras musculares do tendão calcâneo direito. Sendo assim, o paciente foi diagnosticado com insuficiência do ligamento cruzado cranial crônica, com estabilidade fibrótica periarticular, e lesão meniscal em joelho esquerdo e tendinose de calcâneo direito. Foram prescritos condroprotetores, diacereína, fisioterapia e uma aplicação de PRP intra-articular e intratendínea. Para a concentração do PRP, foram coletados 50mL de sangue autólogo, os quais foram depositados em frascos contendo citrato de sódio. Foi realizada dupla centrifugação, sendo a primeira com força de120g e a segunda 240g, ambas por dez minutos. Ao final, obteve-se 2mL de PRP com246.000 plaquetas/µL (antes da concentração o sangue tinha 141.000 plaquetas/µL). A aplicação ocorreu de forma asséptica, sob anestesia geral e guiada por ultrassom. Foram injetados 1ml intra-articular em joelho esquerdo, 0,25mL em região perilesional e 0,75mLintralesional em tendão calcâneo direito. Após 14 dias, notou-se grau de claudicação I/IV e discreto fortalecimento muscular. Foi mantido o tratamento clínico com fisioterapia e condroprotetores com retornos periódicos para acompanhamento da evolução. Conclui-se que o uso do PRP foi importante adjuvante na terapia clínica empregada.

The aim of this paper is to report the case of a dog with meniscal lesion associated with calcaneal tendinosis treated with single application of intra-articular and intratendinous platelet rich plasma (PRP). A dog of the Boxer racer with difficulty walking was treated three months ago. Grade II/IV lameness was observed in both pelvic limbs, bilateral muscle atrophy, pain and slight crepitation in the left knee, slight instability to the drawer and cranial tibial tests, with intense medial fibrosis to the joint and right calcaneal tendon thickening/stiffness. The radiographic study showed moderate arthrosis in the left knee, and ultrasound examination revealed areas of hypoechogenicity in the left medial meniscus and rupture of the right calcaneal tendon muscle fibers. Thus, the patient was diagnosed with chronic cranial cruciate ligament insufficiency, periarticular fibrotic stability, and left meniscal injury and right calcaneal tendinosis. Chondroprotectors, diacerein, physiotherapyand an application of intra-articular and intratendinous PRP were prescribed. For the PRP concentration, 50mL of autologous blood were collected and deposited in vials containing sodium citrate. A double centrifugation was performed, the first strength of 120g and the second 240g, both for ten minutes. At the end, 2mL of PRP was obtained with 246.000platelets/µL (before concentration the blood had 141.000 platelets/µL). The application occurred aseptically, under general anesthesia and guided by ultrasound. We injected 1mlintra-articular in the left knee, 0.25mL in the perilesional region and 0.75mL intralesional in the right calcaneal tendon. After 14 days, I/IV lameness and slight muscle strengthening were noted. Clinical treatment with physiotherapy and chondroprotectors was maintained, with periodic returns to follow the evolution. It was concluded that the use of PRP was an important adjuvant in the clinical therapy employed.

Uso do plasma rico em plaquetas como adjuvante no tratamento de lesão meniscal e tendinose de calcâneo em um cão / Use of platelet-rich plasma as an adjuvant on treatment of meniscal lesion and tendinosis of calcaneus in a dog

O objetivo deste trabalho é relatar o caso de um cão com lesão meniscal associado à tendinose de calcâneo tratado com aplicação única de plasma rico em plaquetas (PRP) intraarticular e intratendínea. Foi atendido um cão da raça Boxer com dificuldade de deambulação há três meses. Observou-se claudicação grau II/IV em ambos os membros pélvicos, atrofia muscular bilateral, dor e leve crepitação em joelho esquerdo, discreta instabilidade aos testes de gaveta e tibial cranial, com intensa fibrose medial à articulação e espessamento/rigidez do tendão calcâneo direito. O estudo radiográfico demonstrou artrose moderada no joelho esquerdo e, ao exame ultrassonográfico, constatou-se áreas de hipoecogenicidade em menisco medial esquerdo e ruptura de fibras musculares do tendão calcâneo direito. Sendo assim, o paciente foi diagnosticado com insuficiência do ligamento cruzado cranial crônica, com estabilidade fibrótica periarticular, e lesão meniscal em joelho esquerdo e tendinose de calcâneo direito. Foram prescritos condroprotetores, diacereína, fisioterapia e uma aplicação de PRP intra-articular e intratendínea. Para a concentração do PRP, foram coletados 50mL de sangue autólogo, os quais foram depositados em frascos contendo citrato de sódio. Foi realizada dupla centrifugação, sendo a primeira com força de120g e a segunda 240g, ambas por dez minutos. Ao final, obteve-se 2mL de PRP com246.000 plaquetas/µL (antes da concentração o sangue tinha 141.000 plaquetas/µL). A aplicação ocorreu de forma asséptica, sob anestesia geral e guiada por ultrassom. Foram injetados 1ml intra-articular em joelho esquerdo, 0,25mL em região perilesional e 0,75mLintralesional em tendão calcâneo direito. Após 14 dias, notou-se grau de claudicação I/IV e discreto fortalecimento muscular. Foi mantido o tratamento clínico com fisioterapia e condroprotetores com retornos periódicos para acompanhamento da evolução. Conclui-se que o uso do PRP foi importante adjuvante na terapia clínica empregada.(AU)

The aim of this paper is to report the case of a dog with meniscal lesion associated with calcaneal tendinosis treated with single application of intra-articular and intratendinous platelet rich plasma (PRP). A dog of the Boxer racer with difficulty walking was treated three months ago. Grade II/IV lameness was observed in both pelvic limbs, bilateral muscle atrophy, pain and slight crepitation in the left knee, slight instability to the drawer and cranial tibial tests, with intense medial fibrosis to the joint and right calcaneal tendon thickening/stiffness. The radiographic study showed moderate arthrosis in the left knee, and ultrasound examination revealed areas of hypoechogenicity in the left medial meniscus and rupture of the right calcaneal tendon muscle fibers. Thus, the patient was diagnosed with chronic cranial cruciate ligament insufficiency, periarticular fibrotic stability, and left meniscal injury and right calcaneal tendinosis. Chondroprotectors, diacerein, physiotherapyand an application of intra-articular and intratendinous PRP were prescribed. For the PRP concentration, 50mL of autologous blood were collected and deposited in vials containing sodium citrate. A double centrifugation was performed, the first strength of 120g and the second 240g, both for ten minutes. At the end, 2mL of PRP was obtained with 246.000platelets/µL (before concentration the blood had 141.000 platelets/µL). The application occurred aseptically, under general anesthesia and guided by ultrasound. We injected 1mlintra-articular in the left knee, 0.25mL in the perilesional region and 0.75mL intralesional in the right calcaneal tendon. After 14 days, I/IV lameness and slight muscle strengthening were noted. Clinical treatment with physiotherapy and chondroprotectors was maintained, with periodic returns to follow the evolution. It was concluded that the use of PRP was an important adjuvant in the clinical therapy employed.(AU)