Levedura antagonista no controle de fungos filamentosos deteriorantes de alimentos / Antagonistic yeast against deteriorating mold of food

Este trabalho avaliou o efeito antifúngico in vitro de toxina killer de Hansenula wingei contra Aspergillus ochraceus e Penicillium expansum deteriorantes de alimentos. O extrato livre de células-ELC contendo a toxina killer (obtido a partir do cultivo da levedura em Caldo MPL a 25ºC/96 horas) foi submetido ao ensaio antifúngico por meio de análise microscópica, determinando-se a porcentagem de germinação conidial e o desenvolvimento de hifas dos fungos testados. H. wingei inibiu a germinação conidial de A. ochraceus e P. expansum em 98,91% e 96,49%, respectivamente, bem como a inibição do desenvolvimento micelial de ambos os fungos foi maior que 78%. O composto antifúngico mostrou-se estável ao tratamento térmico de 90ºC/30 min., indicando a possibilidade de aplicação no biocontrole in situ de frutos pós-colheita.(AU)

Levedura antagonista no controle de fungos filamentosos deteriorantes de alimentos / Antagonistic yeast against deteriorating mold of food

Este trabalho avaliou o efeito antifúngico in vitro de toxina killer de Hansenula wingei contra Aspergillus ochraceus e Penicillium expansum deteriorantes de alimentos. O extrato livre de células-ELC contendo a toxina killer (obtido a partir do cultivo da levedura em Caldo MPL a 25ºC/96 horas) foi submetido ao ensaio antifúngico por meio de análise microscópica, determinando-se a porcentagem de germinação conidial e o desenvolvimento de hifas dos fungos testados. H. wingei inibiu a germinação conidial de A. ochraceus e P. expansum em 98,91% e 96,49%, respectivamente, bem como a inibição do desenvolvimento micelial de ambos os fungos foi maior que 78%. O composto antifúngico mostrou-se estável ao tratamento térmico de 90ºC/30 min., indicando a possibilidade de aplicação no biocontrole in situ de frutos pós-colheita.

Effects of the protective, curative, and eradicative applications of chitosan against Penicillium expansum in apples

Apple is one of the most important temperate fruit to Brazil economy, and the use of synthetic chemicals has been the main method for reducing postharvest diseases, such as the blue mold, caused by Penicillium expansum. This work intends to evaluate the practical utilization of chitosan for blue mold control. For this purpose, fruits were treated in a preventive and curative way, immersing the fruits in chitosan solution (5 or 10 mg mL-1), or adding a single drop of this solution (10 mg mL-1) directly into the injuries. The eradicative effect of the polysaccharide was also evaluated in vitro and in vivo. Chitosan did not show a curative effect against the blue mold, and its eradicative effect was only evidenced on the higher concentration (10 mg mL-1). On the other hand, preventively, without the addition of adjuvants, chitosan reduced blue mold incidence in fruits by 24% and 93%, through the immersion or the single drop methods, respectively. Thus, it was found that, for long scale utilization, some improvements in the physico-chemical properties of the chitosan are needed, since it was only capable to prevent the infection by P. expansum when directly added on the fruit injury.(AU)

Survey of molds, yeast and Alicyclobacillus spp. from a concentrated apple juice productive process

Bacteria and molds may spoil and/or contaminate apple juice either by direct microbial action or indirectly by the uptake of metabolites as off-flavours and toxins. Some of these microorganisms and/or metabolites may remain in the food even after extensive procedures. This study aim to identify the presence of molds (including heat resistant species) and Alicyclobacillus spp., during concentrated apple juice processing. Molds were isolated at different steps and then identified by their macroscopic and microscopic characteristics after cultivation on standard media at 5, 25 and 37ºC, during 7 days. Among the 19 isolated found, 63% were identified as Penicillium with 50% belonging to the P. expansum specie. With regards to heat resistant molds, the species Neosartorya fischeri, Byssochlamys fulva and also the genus Eupenicillium sp., Talaromyces sp. and Eurotium sp. were isolated. The thermoacidophilic spore-forming bacteria were identified as A. acidoterrestris by a further investigation based on 16S rRNA sequence similarity. The large contamination found indicates the need for methods to eliminate or prevent the presence of these microorganisms in the processing plants in order to avoid both spoilage of apple juice and toxin production.(AU)

Growth rate inhibition of phytopathogenic fungi by characterized chitosans

The inhibitory effects of fifteen chitosans with different degrees of polymerization (DP) and different degrees of acetylation (F A) on the growth rates (GR) of four phytopathogenic fungi (Alternaria alternata, Botrytis cinerea, Penicillium expansum, and Rhizopus stolonifer) were examined using a 96-well microtiter plate and a microplate reader. The minimum inhibitory concentrations (MICs) of the chitosans ranged from 100 µg × mL-1 to 1,000 µg × mL-1 depending on the fungus tested and the DP and F A of the chitosan. The antifungal activity of the chitosans increased with decreasing F A. Chitosans with low F A and high DP showed the highest inhibitory activity against all four fungi. P. expansum and B. cinerea were relatively less susceptible while A. alternata and R. stolonifer were relatively more sensitive to the chitosan polymers. Scanning electron microscopy of fungi grown on culture media amended with chitosan revealed morphological changes.

Efeito inibitório de óleos essenciais do gênero Citrus sobre o crescimento de micro-organismos / Inhibitory effect of essential oils from the genus Citrus on the microorganisms growth

Os óleos essenciais encontrados em plantas medicinais, aromáticas e condimentares têm interessado às indústrias alimentícias, pelas suas propriedades antimicrobianas contra bactérias deteriorantes e/ou patogênicas. No intuito de avaliar o efeito inibitório dos óleos essenciais da casca e da folha de Citruslimonia Osbeck (limão-cravo), Citrus aurantifolia (Chrst.) Swingle (limão-galego) e Citrus latifolia Tanaka(limão-tahiti), foram realizados experimentos, utilizando-se a técnica de cultura de difusão em placa de ágar com as bactérias Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa e levedura Candida utilis. Para o fungo Penicillium expansum, foram realizadas culturas em placas-padrão com e sem a presença dos óleos. Nos ensaios in vitro, os óleos essenciais testados promoveram inibição de todos os micro-organismos testados, e os maiores halos ocorreram sobre a levedura C. utilis. Nas bactérias, os óleos induziram melhor inibição sobre S. aureus do que em E. coli e P. aeruginosa. O efeito inibitório dos óleos de citros foi eficaz sobre o fungo P. expansum, exceto o óleo de limão-cravo, que mostrou efeito estimulante de crescimento. Os óleos essenciais analisados demonstraram efeito inibitório sobre os microorganismos avaliados. (AU)

Evaluation of potential antagonistism in yeasts, seeking biocontrol of spoilage by Penicillium expansum / Avaliação do potencial antagônico de leveduras, visando biocontrole de deterioração por Penicillium expansum

Considerable losses during apple fruit storage occur due to microbiological diseases, mainly caused by Penicillium expansum, which in addition to fruit pulp deterioration produces patulin, a mycotoxin with carcinogenic and teratogenic activity. Biological control of post-harvest disease by antagonist yeasts focused on killer toxins is an appreciable alternative to the chemical fungicides, due to the low possibility of toxic residues demonstrated during fermentative processes. Twenty out of 44 yeasts (16 isolated from fruits, 10 from corn silage and 18 from laboratory anthill), showed antagonism against spores of P. expansum. The assay in solid medium pointed the strongest nutrient competition antagonism by D. hansenii strain C1 (31 mm inhibition diameter), while D. hansenii strain C7 (15 mm) showed higher antibiosis and parasitism pattern. In the following step the extracellular activity was tested performing the assay with culture supernatant in Yeast Medium agar, where C. guilliermondii P3 was more effective against conidia germination (inhibition rate of 58.15%) while P. ohmeri showed better inhibition on micelial growth (66.17%). The antibiosis showed by both yeasts could suggest probable mechanism associated with killer phenomenon, once both strains were killer positive against sensitive reference strains (S. cerevisiae NCYC 1006 and P. kluyveri CAY-15). In order to enhanc

As perdas consideráveis no armazenamento de maçãs decorrem principalmente de desordens microbiológicas, causadas por Penicillium expansum, que além de colonizar o fruto e causar dano à polpa, produz a patulina, micotoxina teratogênica e cancerígena. Entre as alternativas ao tradicional tratamento químico de doenças pós-colheita de frutos, enfoca-se o biocontrole por leveduras antagonistas, com ênfase em linhagens killer, em função da baixa possibilidade de resíduos tóxicos e com ampla inocuidade demonstrada nos processos fermentativos. O objetivo deste trabalho foi analisar o potencial antagônico de leveduras no controle de P. expansum, mediante antifungigrama em meio sólido e líquido. Do total de 44 leveduras isoladas (16 de frutas, 10 de silagem de milho e 18 de formigueiro de laboratório), 20 apresentaram antagonismo perante esporos de P. expansum em ágar Meio Para Levedura, sendo Debaryomyces hansenii C1 responsável por maior atividade associada à competição por nutrientes (zona de inibição de 31 mm) e D. hansenii C7 por antibiose/hiperparasitismo (15 mm). Entretanto, o ensaio realizado com o sobrenadante de cultivo reduziu o número de cepas ativas em cinco, sendo Pichia ohmeri 158 e Candida guilliermondii P3 as de maior atividade antagônica. No antifungigrama em meio líquido (caldo MPL) o sobrenadante do cultivo de C. guilliermondii (25ºC/72 horas) inibiu 58,15% da germina

Patulin accumulation in apples during storage by Penicillium expansum and Penicillium griseofulvum strains

A part of apples destined to juice production is generally of poor quality. Apples from cold storage or recently harvest (ground harvested or low quality apples) are stored under ambient conditions until they are processed. Since Penicillium expansum and P. griseofulvum are the principal fungal species isolated from stored apples in Brazil, the objective of this study was to investigate the ability of these strains to produce patulin in apples and report the consequences of this type of storage in loss of quality. The toxin was quantified using thin layer chromatography and charge-coupled device camera (TLC-CCD). The rate and quantities that P. expansum and P. griseofulvum can grow and produce patulin are highly dependent on the fungal strain and time. Lesion diameter resulted to be independent of the strain considered. The maximum period of time which apples were kept at cold storage (4 ºC) without patulin accumulation was 27 days. When these apples were kept at 25 ºC during 3 days, both factors lesion diameter and patulin production increased significantly. These results confirm that time in which apples are taken out from cold storage room before juice production is critical in order to prevent patulin accumulation.

Patulin accumulation in apples during storage by Penicillium expansum and Penicillium griseofulvum strains

A part of apples destined to juice production is generally of poor quality. Apples from cold storage or recently harvest (ground harvested or low quality apples) are stored under ambient conditions until they are processed. Since Penicillium expansum and P. griseofulvum are the principal fungal species isolated from stored apples in Brazil, the objective of this study was to investigate the ability of these strains to produce patulin in apples and report the consequences of this type of storage in loss of quality. The toxin was quantified using thin layer chromatography and charge-coupled device camera (TLC-CCD). The rate and quantities that P. expansum and P. griseofulvum can grow and produce patulin are highly dependent on the fungal strain and time. Lesion diameter resulted to be independent of the strain considered. The maximum period of time which apples were kept at cold storage (4 ºC) without patulin accumulation was 27 days. When these apples were kept at 25 ºC during 3 days, both factors lesion diameter and patulin production increased significantly. These results confirm that time in which apples are taken out from cold storage room before juice production is critical in order to prevent patulin accumulation.

Biological control of Penicillium italicum, P. digitatum and P. expansum by the predacious yeast Saccharomycopsis schoenii on oranges

In this study we evaluated the ability of Saccharomycopsis schoenii Nadson and Krassiln (UWO-PS 80-91) as biocontrol agent against plant pathogenic filamentous fungi P. expansum Link (UFMG 01-2002), P. italicum Wehmer (LCP 61.1199), and P. digitatum (Pers.: Fr.) (LCP 984263, LCP 68175 and LCP 4354). S. schoenii was able to reduce disease severity in oranges inoculated with all fungi. Among the phytopathogens, P. digitatum LCP4354 was the most virulent whereas P. digitatum LCP 68175 was the most susceptible to predation. The yeast was able to survive for 21 days on the fruit surface and did not produce lesions on oranges. Production of antagonistic substances by S. schoenii was not detected using standard techniques. Our results point to the potential use of S. schoenii to control postharvest phytopathogens in fruits.

Este estudo avaliou a capacidade de levedura Saccharomycopsis schoenii Nadson & Krassiln (UWO-PS 80-91) em controlar o crescimento dos fungos fitopatogênicos Penicillium expansum Link (UFMG 01-2002), P. italicum Wehmer (LCP 61.1199), e P. digitatum (Pers.: Fr.) (LCP 984263, LCP 68175 e LCP 4354). S. schoenii reduziu a severidade da doença em laranjas inoculadas com todos os fitopatógenos testados. Entre estes fitopatógenos, P. digitatum LCP4354 apresentou a maior virulência enquanto que P. digitatum LCP 68175 foi o mais suscetível à predação. A levedura foi capaz de permanecer viável, sem produzir lesões na superfície dos frutos por 21 dias. Outra característica desejável observada foi a ausência de produção de substâncias antagonistas. Sendo assim, este trabalho evidência o potencial de utilização da levedura S. schoenii em protocolos de controle biológico de doenças pós-colheita em laranjas.

Morphological and molecular differentiation of the pectinase producing fungi Penicillium expansum and Penicillium griseoroseum

Two species from the genus Penicillium, Penicillium expansum and P. griseoroseum (Brasilian isolates) were characterized morphologic and molecularlly. Morphological variability was detected among isolates in regard to colony morphology and to conidia coloration. The molecular characterization was based on the RAPD markers, telomeric fingerprinting and ITS sequencing. A total of 78 RAPD primers were used and 8 presented differences in band patterns with 54% of the amplified polymorphic fragments. The monomorphic fragments of 600 bp (P. expansum) and 594 bp (P. griseoroseum) were amplified. The only internal transcribed spacer region variation detected between the two species was the additional six initial nucleotides. The analysis by telomeric fingerprinting showed polymorphism between both species and the chromosome minimal numbers estimated were three. The polymorphism observed in the organization of the subtelomeric region in the genome of two Penicillium species within the high homogeneous Penicillium subgenus is for the first time reported and perhaps can be employed in future phylogenetic studies.

Penicillium expansum e P. griseoroseum foram caracterizados morfológica e molecularmente. Variações na morfologia das colônias e coloração dos conídeos foram observadas entre os isolados. A caracterização molecular foi baseada em marcadores RAPD, sequenciamento da região do espaçador interno transcrito do DNA ribossomal e "fingerprinting" telomérico. Foi usado um total de 78 primers RAPD, sendo que 8 apresentaram 54% de fragmentos de DNA polimórficos. Os produtos da amplificação da região ITS de P. expansum e P. griseoroseum foram de 600 e 594 pb, respectivamente. Não foi detectada nenhuma variação na seqüência de nucleotídeos dessa região, comparando-se P. expansum e P. griseoroseum, exceto em relação aos seis nucleotídeos iniciais adicionais. Observou-se a ocorrência de polimorfismo na organização da região subtelomérica no genoma destes fungos e estimou-se um número mínimo de três cromossomos para estas espécies. Este é o primeiro trabalho que descreve a existência de polimorfismo na organização da região subtelomérica do genoma de espécies de fungos pertencentes ao gênero Penicillium, altamente homogêneo, indicando uma possível utilização da abordagem empregada neste estudo para pesquisas filogenéticas futuras.

Efeito dos extratos aquoso e oleoso de Nim [Azadirachta indica A. Juss (Meliaceae)] na produção de patulina em maçãs contaminadas por Penicillium expansum

The South region of Brazil is a major apple producer, where 80% is destined to the "in natura" consumption. The mycotoxins are fungal secondary metabolites present as contaminants in the food chain, causing several toxicological and immunological effect. Patulin is a mycotoxin mainly produced by Penicillium expansum and well known as the main contaminant in apples. Due to this contamination, the aim of this work was to access the effect of Neem extract (Azadirachta indica) on artificially contaminated apples. Two types of Neem extracts were tested: the aqueous extracts of Neem leafs at 5, 10, 20 and 30% concentrations, and commercial seed oil of Neem (DalNeem®) at 0.125, 0.25, 0.5, 1, 2 and 5% in water. Although the addition of Neem aqueous extracts in artificially contaminated apples with P. expansum was unable to affect the patulin production, the Neem seed oil extract at concentrations as lower as 0.5%, caused a pronounced diminution over patulin production.

A Região Sul do Brasil é grande produtora de maçã, sendo 80% destinada ao consumo in natura. As micotoxinas são metabólitos secundários de fungos presentes na cadeia alimentar como contaminantes, causando diversos efeitos toxicológicos e imunológicos. Considerando que a patulina seja uma micotoxina produzida por Penicillium expansum, principal contaminante da maçã propôs-se investigar a ação de extratos aquoso e oleoso de Nim (Azadirachta indica) em maçã artificialmente contaminada. Foram testados dois tipos de extratos: o extrato aquoso obtido de maceração de folhas de Nim nas concentrações de 5, 10, 20 e 30%, e o extrato oleoso comercial (DalNeem®), obtido de sementes de Nim, nas concentrações de 0,125, 0,25, 0,5, 1, 2 e 5%. Os extratos aquosos não alteram a produção da patulina em maçãs contaminadas artificialmente por P. expansum, mas o extrato oleoso obtido das sementes da planta diminuiu acentuadamente a produção de patulina, inclusive em concentrações inferiores a 0,5%.

Efeito dos extratos aquoso e oleoso de Nim [Azadirachta indica A. Juss (Meliaceae)] na produção de patulina em maçãs contaminadas por Penicillium expansum

The South region of Brazil is a major apple producer, where 80% is destined to the "in natura" consumption. The mycotoxins are fungal secondary metabolites present as contaminants in the food chain, causing several toxicological and immunological effect. Patulin is a mycotoxin mainly produced by Penicillium expansum and well known as the main contaminant in apples. Due to this contamination, the aim of this work was to access the effect of Neem extract (Azadirachta indica) on artificially contaminated apples. Two types of Neem extracts were tested: the aqueous extracts of Neem leafs at 5, 10, 20 and 30% concentrations, and commercial seed oil of Neem (DalNeem®) at 0.125, 0.25, 0.5, 1, 2 and 5% in water. Although the addition of Neem aqueous extracts in artificially contaminated apples with P. expansum was unable to affect the patulin production, the Neem seed oil extract at concentrations as lower as 0.5%, caused a pronounced diminution over patulin production.

A Região Sul do Brasil é grande produtora de maçã, sendo 80% destinada ao consumo in natura. As micotoxinas são metabólitos secundários de fungos presentes na cadeia alimentar como contaminantes, causando diversos efeitos toxicológicos e imunológicos. Considerando que a patulina seja uma micotoxina produzida por Penicillium expansum, principal contaminante da maçã propôs-se investigar a ação de extratos aquoso e oleoso de Nim (Azadirachta indica) em maçã artificialmente contaminada. Foram testados dois tipos de extratos: o extrato aquoso obtido de maceração de folhas de Nim nas concentrações de 5, 10, 20 e 30%, e o extrato oleoso comercial (DalNeem®), obtido de sementes de Nim, nas concentrações de 0,125, 0,25, 0,5, 1, 2 e 5%. Os extratos aquosos não alteram a produção da patulina em maçãs contaminadas artificialmente por P. expansum, mas o extrato oleoso obtido das sementes da planta diminuiu acentuadamente a produção de patulina, inclusive em concentrações inferiores a 0,5%.

Isolation of recombinant strains with enhanced pectinase production by protoplast fusion between Penicillium expansum and Penicillium griseoroseum

Protoplast fusion between complementary auxotrophic and morphological mutant strains of Penicillium griseoroseum and P. expansum was induced by polyethylene glycol and calcium ions (Ca2+). Fusant strains were obtained in minimal medium and a prototrophic strain, possibly diploid, was chosen for haplodization with the fungicide benomyl. Different recombinant strains were isolated and characterized for occurrence of auxotrophic mutations and pectinolytic enzyme production. The fusant prototrophic did not present higher pectinase production than the parental strains, but among 29 recombinants analyzed, four presented enhanced enzyme activities. The recombinant RGE27, which possesses the same auxotrophic and morphologic mutations as the P. griseoroseum parental strain, presented a considerable increase in polygalacturonase (3-fold) and pectin lyase production (1.2-fold).

Fusões de protoplastos entre linhagens mutantes auxotróficas e morfológicas complementares de Penicillium griseoroseum e P. expansum foram induzidas por polietilenoglicol e íons cálcio (Ca2+). Fusionantes foram obtidos em meio mínimo e uma linhagem prototrófica, possivelmente diplóide, foi selecionada para a haploidização com o fungicida benomil. Diferentes linhagens recombinantes foram isoladas e caracterizadas quanto à presença de mutações auxotróficas e a produção de enzimas pectinolíticas. O fusionante prototrófico não apresentou maior atividade de pectinases em relação às linhagens parentais, entretanto, entre 29 recombinantes analisados, quatro apresentaram maiores atividades enzimáticas. O recombinante RGE27, o qual possui as mesmas mutações auxotróficas e morfológicas que a linhagem parental de P. griseoroseum, apresentou um aumento considerável na produção de poligalacturonase (3 vezes) e de pectina liase (1,2 vezes).

Microaspersion of phosphites during cold storage of Fuji apples fruit cv. aiming to control postharvest decay / Microaspersão de fosfitos durante a frigoconservação de maçãs cv. Fuji visando o controle de podridões pós-colheita

The objective of this work was to evaluate the effect of microaspersion of potassium phosphite, during cold storage, on the control of postharvest decay in cv. Fuji apple fruit. The evaluated treatments were: [1] water (control); [2] potassium phosphite A 00 40- 20; [3] potassium phosphite B 00-40-20; [4] potassium phosphite B 00-30-20; [5] potassium phosphite B 00-28-26. Fruits were stored at - 0.5C and 94 ± 2% of air relative humidity. Microaspersions were performed in the cold chamber free space at the beginning of storage and each 30 days during two months. Microaspersion of phosphites did not control postharvest decay after two and three months of cold storage of cv. Fuji apple fruit.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência da microaspersão de fosfitos de potássio, durante o armazenamento refrigerado, sobre o controle de podridões pós-colheita em maçãs cv. Fuji. Os tratamentos foram: [1] água (controle); [2] fosfito de potássio (FP) A 00-40-20; [3] fosfito de potássio B 00- 40-20; [4] fosfito de potássio B 00-30-20; e [5] fosfito de potássio B 00-28-26. Os frutos foram armazenados a 0,5C e 94 ± 2% de umidade relativa do ar. As microaspersões das soluções no espaço livre da câmara foram realizadas no início do armazenamento e a cada 30 dias durante dois meses. A microaspersão de fosfitos de potássio não controlou podridões póscolheita, após dois e três meses de armazenamento da maçã cv. Fuji.

Potencial antagônico de levedura sobre fitopatógenos micotoxigênicos em frutas / Potential antagonistic yeast pathogens on fruits in mycotoxigenic

As exportações brasileiras defrutas frescas têm sido pauta de destaquenas discussões de alternativasna geração de divisas para o país nocomércio internacional. O consumode frutas no Brasil e no mundo temcrescido a taxas elevadas. Os gênerosAspergillus, Penicillium, Fusariume Alternaria são os principais representantesfúngicos responsáveispela produção de micotoxinas numaampla variedade de produtos agrícolas.A aplicação indiscriminadade fungicidas sintéticos vem sendodesencorajada por afetar a saúde humanae o ecossistema, aliada ao aumentoda resistência antimicrobiana,com surgimento de cepas fúngicasresistentes. Em vista da situação,abre-se perspectiva para o biocontroleempregando leveduras, devidoà baixa possibilidade micotoxigênicadeste grupo eleito para os processos fermentativos, não tendo sido relatado casos de micotoxicose. Deacordo com o exposto, este trabalhoapresentou como objetivo verificaro potencial antagônico da leveduraDekkera bruxellensis sobre os fungosAspergillus ochraceus e Penicilliumexpansum. Para constatação da atividadeantifúngica in vivo, maçãs davariedade Fuji foram submetidas aostratamentos: células de leveduras (108células/mL), células de leveduras comfungicida em baixa dosagem, fungicidaem baixa dosagem e fungicida emdosagem completa; sendo incubadasa 21°C por 21 dias. Finalizados 21dias de estocagem a melhor eficáciade controle foi evidenciada pelostratamentos C e E para ambos A.ochraceus e P. expansum. Os valoresobtidos foram de, respectivamente,100 e 100; 87,5 e 100. (AU)

The Brazilian exports of freshfruits have been prominent agendain the discussions on alternativesin the conceiving of borders for thecountry in the international trade.The consumption of fruits in Braziland around the world has increasedat high taxes. The genera Aspergillusochraceus, Fusarium verticillioidesand Penicillium expansum are themain fungal representatives responsiblefor the mycotoxin productionin a variety of agricultural products.The indiscriminate application ofsynthetic fungicides is being discouragedbecause it affects human healthand the ecosystem, associated withthe increase of microbial resistance;with appearing of resistant fungalspecies. Due to this situation a newperspective appears for the biocontrolusing yeasts because of the lowmycotoxigenic possibility of this group choosed for the fermentativeprocesses, and it was not mentionedcases of mycotoxicose. According tothis, this work presented as objectiveto verify the antagonic potential ofthe yeast D. bruxellensis PF583 on themolds A. ochraceus and P expansum.To verify the antifungal activity invivo, Fuji apples were submitted todifferent treatments: yeast cells (108cells/mL), yeast cells in a low dose ofthe fungicide Tecto SC®, low dose ofthe fungicide and full label dos of thefungicide; being the apples incubatedat 21°C for 21 days. After 21 days ofstorage the best control efficacy wasshowed by the treatment C (30 µl. ofantagonist cell suspension in a lowdose of the fungicide Tecto SC® - 10%of the full label dose) and E (30 µl of fungicide at the full label dose - 400 mL/100L) for A. ochraceus andP. expansum. The values obtainedwere 100 and 100%,87.5 and 100%,respectively. (AU)

Citrininotoxinogenicity of Penicillium spp. isolated from decaying apples

A study on the occurrence of citrinin and citrinin production ability of Penicillium spp. isolated from decaying apples collected from households in Croatia was carried out. Among 100 samples of apples, 37 strains of Penicillium spp. were found, including P. expansum, P. roqueforti, P. implicatum and P. purpurogenum. Citrinin production in liquid yeast medium by 11 strains of P. expansum varied in a range of 0.07 to 9.00 mg.kg-1. Citrinin was isolated from 19% of apple samples in range of 0.05 to 0.24 mg.kg-1. Antimicrobial activity of isolated citrinin, evaluated through tests on Bacillus subtilis, presented inhibitory zones varying from 5 mm to 1 cm. Minimal inhibitory concentrations (MIC) were 0.0072 µg.mL-1 for bacteriostatic effect, and 0.0144 µg.mL-1 for bactericidal effect.

Nesse estudo, foi examinada a ocorrência de citrinina e a capacidade de produção do citrinina por cepas de Penicillum spp. isoladas de maçãs deterioradas, recolhidas em pomares domésticos no território da Croácia. De 100 amostras de maçãs examinadas, foram isoladas 37 cepas de Penicillium spp. incluindo P. expansum, P. roqueforti, P. impicatum e P. purpurogenum. A capacidade de produção de citrinina por 11 cepas de P. expansun foi determinada em meio líquido obtendo-se concentrações variando entre 0,07 e 9,00 mg.kg-¹. A citrinina foi detectada em 19% das amostras de maçãs, com concentração variando entre 0,05 e 0,24 mg.kg-¹. O efeito antimicrobiano da citrinina foi determinado em testes com Bacillus subtilis, com zona de inibição variando entre 5 mm e 1 cm. A concentração mínima inibitória (CMI) foi 0,0072 µg.mL-1 para o efeito bacteriostático e 0,0144 µg.mL-1 para o efeito bactericida.

Evaluation of potential antagonistism in yeasts, seeking biocontrol of spoilage by Penicillium expansum / Avaliação do potencial antagônico de leveduras, visando biocontrole de deterioração por Penicillium expansum

Considerable losses during apple fruit storage occur due to microbiological diseases, mainly caused by Penicillium expansum, which in addition to fruit pulp deterioration produces patulin, a mycotoxin with carcinogenic and teratogenic activity. Biological control of post-harvest disease by antagonist yeasts focused on killer toxins is an appreciable alternative to the chemical fungicides, due to the low possibility of toxic residues demonstrated during fermentative processes. Twenty out of 44 yeasts (16 isolated from fruits, 10 from corn silage and 18 from laboratory anthill), showed antagonism against spores of P. expansum. The assay in solid medium pointed the strongest nutrient competition antagonism by D. hansenii strain C1 (31 mm inhibition diameter), while D. hansenii strain C7 (15 mm) showed higher antibiosis and parasitism pattern. In the following step the extracellular activity was tested performing the assay with culture supernatant in Yeast Medium agar, where C. guilliermondii P3 was more effective against conidia germination (inhibition rate of 58.15%) while P. ohmeri showed better inhibition on micelial growth (66.17%). The antibiosis showed by both yeasts could suggest probable mechanism associated with killer phenomenon, once both strains were killer positive against sensitive reference strains (S. cerevisiae NCYC 1006 and P. kluyveri CAY-15). In order to enhanc

As perdas consideráveis no armazenamento de maçãs decorrem principalmente de desordens microbiológicas, causadas por Penicillium expansum, que além de colonizar o fruto e causar dano à polpa, produz a patulina, micotoxina teratogênica e cancerígena. Entre as alternativas ao tradicional tratamento químico de doenças pós-colheita de frutos, enfoca-se o biocontrole por leveduras antagonistas, com ênfase em linhagens killer, em função da baixa possibilidade de resíduos tóxicos e com ampla inocuidade demonstrada nos processos fermentativos. O objetivo deste trabalho foi analisar o potencial antagônico de leveduras no controle de P. expansum, mediante antifungigrama em meio sólido e líquido. Do total de 44 leveduras isoladas (16 de frutas, 10 de silagem de milho e 18 de formigueiro de laboratório), 20 apresentaram antagonismo perante esporos de P. expansum em ágar Meio Para Levedura, sendo Debaryomyces hansenii C1 responsável por maior atividade associada à competição por nutrientes (zona de inibição de 31 mm) e D. hansenii C7 por antibiose/hiperparasitismo (15 mm). Entretanto, o ensaio realizado com o sobrenadante de cultivo reduziu o número de cepas ativas em cinco, sendo Pichia ohmeri 158 e Candida guilliermondii P3 as de maior atividade antagônica. No antifungigrama em meio líquido (caldo MPL) o sobrenadante do cultivo de C. guilliermondii (25ºC/72 horas) inibiu 58,15% da germina

Inibição do desenvolvimento de Penicillium expansum (Link) Thom. por fungicidas, in vitro

This experiment was conducted to evaluate lhe effïciency of four fungicides in the development inhibition of Penicillium expansum. A laboratory experiment was carried out in 1993, at Federal University of Santa Maria, RS. The fungicides Thiabendazol, Methyl Tiophanate, Iprodione and Imazalil, infive concentrations of active ingredients (0.1; 0.5; 1.0; 5.0 and 10mg/ml) on two isolates of the fungus were tested. The diametersof pathogen colonies were measured at 0; 48; 96, 144 and 192 hours after pathogen plating. There were no statistical differences in the inhibitions of benzimidazols compounds to sensible isolate among fungicides. There were significant difference for the resistant isolate, with less effïcience for Thiabendazol and Methyl Tiophanate fungicides. The Iprodione showed effïcience on the two isolates, and only Imazalil demonstrated complete inhibition of Penicillium expansum colonies. with 5.0 and 10mg/ml concentration at a time of 192 hours, after pathogen plating.

Para avaliar a eficiência de quatro fungicidas sobre a inibição do desenvolvimento de Penicillium expansum, foi desenvolvido um experimento em laboratório na Universidade Federal de Santa Maria, RS, durante o ano de 1992. Foram testados os princípios alivos Tiabendazole, Tiofanato Metílico, Iprodione e Imazalil, em cinco concentrações sobre dois isolados do fungo, sendo um resistente e outro sensível aos benzimidazóis. Foram testadas as concentrações de 0,1; 0,5; 1,0; 5,0 e l0.0mg/ml dos princípios ativos, e as avaliações/oram realizadas com 0; 48;96, 144 e 192 horas após as repicagens. Os resultados demonstraram que não houve diferença na inibição do desenvolvimento entre os fungicidas sobre o isolado sensível, porém ocorreu diferença entre os produtos para o isolado resistente, sendo o Tiabendazole e o Tiofanato Metílico os que apresentaram a menor eficiência. O Iprodione mostrou-se eficiente sobre os dois isolados e, o Imazalil inibiu completamente o desenvolvimento do fungo nas concentrações de 5,0 e 10mg/ml até as 192 horas.

Inibição do desenvolvimento de Penicillium expansum (Link) Thom. por fungicidas, in vitro

This experiment was conducted to evaluate lhe effïciency of four fungicides in the development inhibition of Penicillium expansum. A laboratory experiment was carried out in 1993, at Federal University of Santa Maria, RS. The fungicides Thiabendazol, Methyl Tiophanate, Iprodione and Imazalil, infive concentrations of active ingredients (0.1; 0.5; 1.0; 5.0 and 10mg/ml) on two isolates of the fungus were tested. The diametersof pathogen colonies were measured at 0; 48; 96, 144 and 192 hours after pathogen plating. There were no statistical differences in the inhibitions of benzimidazols compounds to sensible isolate among fungicides. There were significant difference for the resistant isolate, with less effïcience for Thiabendazol and Methyl Tiophanate fungicides. The Iprodione showed effïcience on the two isolates, and only Imazalil demonstrated complete inhibition of Penicillium expansum colonies. with 5.0 and 10mg/ml concentration at a time of 192 hours, after pathogen plating.

Para avaliar a eficiência de quatro fungicidas sobre a inibição do desenvolvimento de Penicillium expansum, foi desenvolvido um experimento em laboratório na Universidade Federal de Santa Maria, RS, durante o ano de 1992. Foram testados os princípios alivos Tiabendazole, Tiofanato Metílico, Iprodione e Imazalil, em cinco concentrações sobre dois isolados do fungo, sendo um resistente e outro sensível aos benzimidazóis. Foram testadas as concentrações de 0,1; 0,5; 1,0; 5,0 e l0.0mg/ml dos princípios ativos, e as avaliações/oram realizadas com 0; 48;96, 144 e 192 horas após as repicagens. Os resultados demonstraram que não houve diferença na inibição do desenvolvimento entre os fungicidas sobre o isolado sensível, porém ocorreu diferença entre os produtos para o isolado resistente, sendo o Tiabendazole e o Tiofanato Metílico os que apresentaram a menor eficiência. O Iprodione mostrou-se eficiente sobre os dois isolados e, o Imazalil inibiu completamente o desenvolvimento do fungo nas concentrações de 5,0 e 10mg/ml até as 192 horas.