First molecular detection of Haemoproteus spp. and Plasmodium spp. in eared doves (Zenaida auriculata) in Brazil / Primeira detecção molecular de Haemoproteus spp. e Plasmodium spp. em pombos (Zenaida auriculata) no Brasil

The aim of this study was to verify the presence and identify the species of haemosporidian parasites in eared doves (Zenaida auriculata) in Brazil. Two hundred and eleven male and female eared doves were trap-captured in four different regions of Londrina city, in southern Brazil. Whole blood was collected in EDTA tubes through heart puncture after euthanasia in a CO2 chamber. A nested PCR targeting the mitochondrial cytochrome b gene (cyt b) of Haemoproteus spp./Plasmodium spp. was performed, followed by an enzymatic digestion to identify the genus. Phylogenetic trees were constructed to determine the closely related species. Out of 211 eared doves, 209 (99.05%) were positive for Haemoproteus spp. and/or Plasmodium spp. RFLP analysis showed that 72.72% (152/209) of eared doves were positive only for Haemoproteus spp., 6.22% (13/209) were positive only for Plasmodium spp., and 21.05% (44/209) of eared doves had mixed infections. Genetic analysis found four samples that were homologous with Haemoproteus multipigmentatus and one that was homologous with Plasmodium sp. This is the first molecular study of hemoparasites from eared doves in Brazil, and it is also the first description of H. multipigmentatus and Plasmodium spp. infection in eared doves in Brazil.(AU)

O objetivo deste estudo foi verificar a presença e a identificação espécies de parasitas hemosporídeos em pombos (Zenaida auriculata) no Brasil. Duzentos e onze pombos machos e fêmeas foram capturados em quatro regiões diferentes de Londrina, sul do Brasil. Amostra de sangue foi coletada em tubos contendo EDTA por meio de punção cardíaca, após eutanásia em câmara de CO2. Uma nested PCR com alvo no gene mitocondrial citocromo b (cyt b) de Haemoproteus spp./Plasmodium spp. foi realizada, seguida de digestão enzimática para identificar o gênero. A árvore filogenética foi construída para determinar a relação com outras espécies. Das 211 pombas, 209 (99,05%) foram positivas para Haemoproteus spp./Plasmodium spp. A análise RFLP demonstrou que 72,72% (152/209) das pombas foram positivas somente para Haemoproteus spp.; 6,22% (13/209) foram positivas somente para Plasmodium e 21,05% (44/209) das pombas tiveram infecções mistas. A análise genética mostrou quatro amostras homólogas com H. multipigmentatus e uma com Plasmodium spp. Este é o primeiro estudo molecular de hemoparasitas em pombos no Brasil. E é também a primeira descrição da infecção por H. multipigmentatus e Plasmodium spp. em pombos Z. auriculata no Brasil.(AU)

Comparative morphometric evaluation of hepatic hemosiderosis in wild Magellanic penguins (Spheniscus magellanicus) infected with different Plasmodium spp. subgenera / Avaliação morfométrica comparativa da hemossiderose hepática em pinguins-de-Magalhães (Spheniscus magellanicus) de vida livre infectados por diferentes subgêneros de Plasmodium spp

Avian malaria is one of the most important diseases of captive penguins. We employed morphometric techniques to evaluate hepatic hemosiderosis in rehabilitating wild Magellanic penguins (Spheniscus magellanicus) that were negative (n = 9) or naturally infected by different subgenera of Plasmodium spp. (n = 24), according with: Plasmodium subgenera (Haemamoeba, Huffia, Other lineages, and Unidentified lineages), severity of Plasmodium histopathological lesions, and concurrent diseases, age class (juvenile or adult plumage), sex (male, female or not determined), body score (emaciated, thin, good, excellent, not available), molt, presence or absence of oil contamination upon admission, iron supplementation, and rehabilitation center. The percentage of the area occupied by hemosiderin was called Index of Hepatic Hemosiderosis (IHH). Plasmodium-positive females presented significantly higher IHH values (17.53 ± 12.95%) than males (7.20 ± 4.25%; p = 0.041). We observed higher levels of congestion (p = 0.0182) and pneumonia (p = 0.0250) severity between Unidentified lineages vs. Huffia. We believe that the hepatic hemosiderosis observed in this study was multifactorial, the result of pathological processes caused by malaria, molting, hemoglobin and myoglobin catabolism during migration, anemia, concomitant diseases, and iron supplementation, all possibly potentiated by decreased liver mass. Further studies are needed to clarify the mechanisms of these hypotheses.(AU)

Malária aviária é uma das mais relevantes doenças em pinguins cativos. Foram aplicadas técnicas morfométricas para avaliar a hemossiderose hepática em pinguins-de-Magalhães (Spheniscus magellanicus ) de vida livre em reabilitação negativos (n = 9) e naturalmente infectados por diferentes subgêneros de Plasmodium spp. (n = 24), quanto a: subgênero de Plasmodium (Haemamoeba , Huffia, Outras Linhagens, e Linhagens não identificadas), severidade das lesões histopatológicas causadas por Plasmodium e doenças concomitantes, faixa etária (plumagem juvenil ou adulta), sexo (macho, fêmea, indeterminado), condição corporal (emaciado, magro, bom, excelente, indisponível), muda, presença/ausência de óleo a admissão, suplementação de ferro, e centro de reabilitação. A porcentagem da área ocupada por hemossiderina foi denominada Índice de Hemossiderose Hepática (IHH). Fêmeas Plasmodium -positivas apresentaram IHH significativamente mais elevado que machos, respectivamente, 17,53 ± 12,95% e 7,20 ± 4,25% (p = 0,041). Níveis mais elevados de congestão (p = 0,0182) e pneumonia (p = 0,0250) foram observados entre Linhagens não identificadas vs. Huffia. Possivelmente, a hemossiderose hepática observada nesse estudo seja multifatorial, resultado de processos patológicos causados por malária, muda, catabolismo de hemoglobina e mioglobina durante a migração, anemia, doenças concomitantes e suplementação de ferro, potencialmente intensificados por massa hepática reduzida. Estudos complementares são necessários para esclarecer os mecanismos de tais hipóteses.(AU)

Serological and molecular techniques applied for identification of Plasmodium spp. in blood samples from nonhuman primates / Técnicas sorológicas e moleculares aplicadas na identificação de Plasmodium spp. em amostras de primatas não humanos

The aim of this study was to identify Plasmodium spp. in blood samples from nonhuman primates (NHPs) in the state of Maranhão, using classical and alternative techniques for examination of human malaria. A total of 161 blood samples from NHPs were analyzed: 141 from captive animals at a Wildlife Screening Center (CETAS) and 20 from free-living animals in a private reserve. The techniques used were microscopy, rapid diagnostic test (RDT), Indirect fluorescent antibody test (IFAT) and molecular techniques (semi-nested PCR, quantitative real-time PCR and LAMP). Two serological methods (dot-ELISA and indirect ELISA) were also standardized with rhoptry protein-soluble antigen of P. falciparum and P. berghei. Trophozoite forms of Plasmodium sp. were identified on slides from five different animals. No samples were positive through RDT and LAMP. Four samples were seropositive for P. malariae through IFAT. The samples showed low reactivity to ELISA. Plasmodium sp. was detected in 34.16% (55/161) of the samples using qPCR based on the 18S rRNA gene. After sequencing, two samples showed 100% identityl to P. malariae, one showed 97% identity to Plasmodium sp. ZOOBH and one showed 99% identity to P. falciparum . PCR was shown to be the most sensitive technique for diagnosing Plasmodium in NHP samples.(AU)

Neste estudo objetivamos identificar Plasmodium spp. em amostras sangue de primatas não humanos (PNH) do estado do Maranhão, utilizando técnicas clássicas e alternativas para o exame da malária humana. Foram analisadas 161 amostras de sangue de PNH, sendo 141 de CETAS (cativeiro) e 20 de reserva particular (vida livre), utilizando microscopia, teste de diagnóstico rápido (RDT), imunofluorescência indireta (IFI) e técnicas moleculares (semi-nested PCR, PCR em tempo real quantitativo e LAMP). Dois métodos sorológicos (dot-ELISA e ELISA indireto) também foram padronizados com antígenos solúveis de roptrias de P. falciparum e P. berghei. Formas trofozoíticas de Plasmodium sp. foram identificadas em lâminas de cinco animais diferentes. Nenhuma amostra foi positiva em TDR e LAMP. Quatro amostras foram soropositivas para P. malariae na IFI. Os soros de PNH mostraram baixa reatividade pelo ELISA indireto. Plasmodium sp. foi detectado em 34,16% (55/161) das amostras utilizando a qPCR baseada no gene 18S rRNA. No sequenciamento, duas amostras mostraram identidade com P. malariae (100%), uma com Plasmodium sp. ZOOBH (97%) e uma com P. falciparum (99%). A PCR mostrou ser a técnica mais sensível para diagnósticos de Plasmodium em amostras de PNH.(AU)

OCORRÊNCIA E DIVERSIDADE DE HEMOSPORÍDEOS (Apicomplexa: Haemosporida) EM AVES SILVESTRES BRASILEIRAS

Hemosporídeos aviários estão amplamente distribuídos nos continentes com exceção da Antártida. O gênero mais patogênico, o Plasmodium, é um parasito generalista associado à infecção em aves translocadas entre diferentes localidades, sendo reportados surtos e perda da biodiversidade em decorrência da infecção por este parasito. Os gêneros Haemoproteus e o Leucocytozoon, considerados parasitos especialistas, são relatados em infecções interespecíficas, associados a doença clínica e mortalidade em algumas espécies hospedeiras. Pesquisas em aves silvestres brasileiras registram ocorrência variada de Plasmodium e Haemoproteus enquanto o gênero Leucocytozoon, se limita a poucos relatos em aves na Floresta Amazônica, Pantanal e Mata Atlântica. O ciclo dos hemosporídeos são alterados tanto pela modificação de habitats, como pela introdução de aves e vetores infectados, por isso, a soltura de aves pode originar surtos bem como a introdução de novas linhagens em um dado ecossistema. Assim, a fim de investigar a presença de hemosporídeos (Plasmodium, Haemoproteus e Leucocytozoon) nas aves do Centro de Triagem de Animais Silvestres (CETAS) no Distrito Federal e estado de Goiás, amostras de 375 aves foram analisadas por diagnóstico molecular. A infecção por Leucocytozoon spp. foi observada em três indivíduos de seriema (Cariama cristata) (0,63% - 03/375) e por Plasmodium e/ou Haemoproteus em 18 espécies de aves silvestres (14,9% - 56/375). As ordens Psittaciformes (6,93% -26/375), Passeriformes (4,5% - 17/375) e Strigiformes (2,4% -9/375), apresentaram maior ocorrência de amostras positivas, no entanto não ocorreu diferença significativa entre as mesmas. Do total de 15 sequências genéticas obtidas, seis corresponderam ao Haemoproteus e nove ao Plasmodium. Sete aves estavam parasitadas com linhagens do gênero Plasmodium e oito do gênero Haemoproteus. Foram identificadas linhagens generalistas (P. nucleophilum linhagem DENPET03), linhagens especialistas de Haemoproteus registradas sobretudo em rapinantes (TYTAL3 KU421 e H3 KL2014) e linhagens consideradas filogeneticamente mais patogênicas como o Plasmodium sp. CRAM2876. Os dados do presente estudo sugerem que aves destinadas à soltura devem ser investigadas quanto a ii presença de hemosporídeos, evitando assim, a introdução de espécimes infectados no ambiente. A presença do Leucocytozoon em aves não-migratórias (C. cristata) confirma a ocorrência da transmissão do parasito no Cerrado. Contudo, como não foi possível identificar o parasito em esfregaços sanguíneos, novos estudos são necessários para esclarecer o parasitismo por Leucocytozoon em seriemas e certificar que as infecções não foram abortivas.

Avian Haemosporidian have a wide distribution except in Antarctica. The most pathogenic genus, Plasmodium, is a generalist parasite associated with infections in translocated birds, which have resulted in outbreaks and loss of biodiversity. The genera Haemoproteus and Leucocytozoon, are considered specialist parasites that have been reported in interspecific infections, associated with clinical disease and mortality in some host species. Research on Brazilian wild birds have recorded varying occurrences of Plasmodium and Haemoproteus while Leucocytozoon is limited to a few reports on birds in the Amazon, Pantanal and Atlantic Forest. The Haemosporidian cycle is affected by habitat modification and the introduction of infected birds and vectors, the reason why the release of birds can cause outbreaks as the local parasitic pressure increases when introducing new strains in an ecosystem. In order to investigate the presence of haemosporidians (Plasmodium, Haemoproteus and Leucocytozoon) in birds at the Centro de Triagem de Animais Silvestres (CETAS) in the Federal District and state of Goiás, we analyzed samples from 375 birds with molecular diagnosis. Infection of Leucocytozoon spp. was observed in three individuals of seriema (Cariama cristata) (0.63% - 03/375); Plasmodium and/or Haemoproteus occurred in 18 species of wild birds (14.9% - 56/375). The orders Psittaciformes (6.93% -26/375), Passeriformes (4.5% -17/375) and Strigiformes (2.4% -9/375), presented a higher occurrence of positive samples, however there was no significant difference between them. Of the total of 15 genetic sequences obtained, six corresponded to Haemoproteus and nine to Plasmodium. Seven birds were parasitized with lineages of the genus Plasmodium and eight of the genus Haemoproteus. We identified generalist strains (P. nucleophilum strain DENPET03), and specialist strains Haemoproteus, which were registered mainly in predators (TYTAL3 KU421 and H3 KL-2014); we also found strains considered phylogenetically more pathogenic such as Plasmodium sp. CRAM2876. The data from the present study suggest that birds destined for release should be examined for the presence of haemosporidians, which would minimize the introduction of infected specimens into the environment. The iv presence of Leucocytozoon in non-migratory birds (C. cristata) confirms the occurrence of parasite transmission in the Cerrado biome. However, as it was not possible to identify the parasite in blood smears, further studies are needed to clarify Leucocytozoon parasitism in seriemas and to certify that infections were not abortive.

ESTUDO HEMATOLÓGICO E MOLECULAR DA INFECÇÃO POR HEMOSPORÍDEOS E AGENTES ANAPLASMATACEAE EM ARARA-CANINDÉ (Ara ararauna) E PAPAGAIO-VERDADEIRO (Amazona aestiva) MANTIDOS NO CENTRO DE TRIAGEM DE ANIMAIS SILVESTRES (CETAS-RJ)

Agentes da ordem Haemosporida e Rickettsiales são importantes patógenos transmitidos por artrópodes invertebrados capazes de acometerem diversos grupos de animais, incluindo as aves, podendo causar consequências à saúde animal e até mesmo à saúde humana. As aves representam um papel relevante na transmissão dos agentes etiológicos, sobretudo, devido seus hábitos de migração, nidificação e alimentação. Os Centros de Triagens do IBAMA, albergam considerável número de aves de diversas espécies. Estes indivíduos advêm de apreensão do tráfico, ou criação ilegal e chegam constantemente debilitados nestas instituições, estando propensos a doenças e a disseminação de patógenos. Estas afecções podem apresentar-se de maneira subclínica, impactando na suspeita e no diagnóstico e elevando sua transmissibilidade, como de forma clínica, o que vai depender da resposta imunológica do hospedeiro. No presente estudo foram examinadas 44 aves, 19 Araras-canindé (Ara ararauna) e 25 Papagaios-verdadeiros (Amazona aestiva) amostradas do Centro de Triagem de Animais Silvestres do Rio de Janeiro (CETAS), localizado no município de Seropédica. Foram realizados métodos diagnósticos (detecção direta em esfregaço sanguíneo, PCR convencional e análise filogenética) a fim de constatar a presença de agentes da Família Anaplasmataceae (Ehrlichia spp., Anaplasma spp.) e Ordem Haemosporida (Plasmodium spp., Haemoproteus spp.). Apenas as araras (Ara ararauna) mostraram-se positivas para os agentes pesquisados. Na avaliação de esfregaços sanguíneos corados pelo Giemsa, foram encontradas estruturas compatíveis com hemoparasitas em 2 (4.54%) aves, sugestivas de Plasmodium spp./Haemoproteus spp. Na PCR convencional baseada no gene 16SrRNA para Anaplasmataceae e no gene citocromo b para hemosporídeos, 3 (6.81%) indivíduos apresentaram positividade, sendo 1 (2.27%) ave positiva para o gene 16SrRNA e 2 (4.54%) para o gene citocromo b. Entre os indivíduos positivos, uma amostra referente ao gene citocromo b foi sequenciada e realizada a análise dos alinhamentos e produção da árvore filogenética, demonstrando positividade para Plasmodium intimamente relacionado a linhagem nucleophilum, não registrada até o momento na espécie Ara ararauna. Quanto aos resultados dos hemogramas, embora as alterações hematológicas apresentadas por esses animais possam não ter sido conclusivas, um indivíduo infectado apresentou leucocitose (n=1; 33.33%), enquanto outro desenvolveu anemia associado a leucopenia (n=1; 33.33%). Os demais parâmetros não diferiram da literatura. Os resultados salientam que as aves do CETAS/RJ estão expostas aos agentes e podem ser afetadas pela infecção, evidenciando a importância diagnóstica antes da realocação destes indivíduos, a fim de evitar a transmissão destes patógenos e impactos à fauna.

Agents of the order Haemosporida and Rickettsiales can affect different groups of animals, including birds, and cause relevant consequences to animal and/or human health. Birds play an important role in the transmission of etiological agents, mainly due to their migration, nesting and feeding habits. IBAMA's Triage Centers house a considerable number of birds of different species. These individuals come from the apprehension of trafficking, or illegal creation and arrive constantly weakened in these institutions, being prone to diseases and the spread of pathogens. These conditions can present themselves in a subclinical manner, impacting suspicion and diagnosis and increasing their transmissibility, as well as clinically, which will depend on the host's immune response. In the present study, 44 birds, 19 Gray Macaws (Ara ararauna) and 25 Gray Parrots (Amazona aestiva) sampled from the Wild Animal Screening Center of Rio de Janeiro (CETAS), located in the municipality of Seropédica, were examined. Diagnostic methods (direct detection in blood smears, conventional PCR and phylogenetic analysis) were performed in order to verify the presence of agents of the Anaplasmataceae family (Ehrlichia spp., Anaplasma spp.) and Order Haemosporida (Plasmodium spp., Haemoproteus spp.). Only the macaws (Ara ararauna) were positive for the agents surveyed. In the evaluation of blood smears stained by Giemsa, structures compatible with hemoparasites were found in 2 (4.54%) birds, suggestive of Plasmodium spp./Haemoproteus spp. In the conventional PCR based on the 16SrRNA gene for Anaplasmataceae and on the cytochrome b gene for hemoporids, 3 (6.81%) individuals were positive, being 1 (2.27%) bird positive for the 16SrRNA gene and 2 (4.54%) for the cytochrome b gene. Among the positive individuals, one sample referring to the cytochrome b gene, was sequenced and the analysis of alignments and production of the phylogenetic tree was performed, demonstrating positivity for Plasmodium, closely related to the nucleophilum lineage, not registered so far in the Ara ararauna species. As for the results of the blood counts, although the hematological alterations presented by these animals may not have been conclusive, one infected individual presented leukocytosis (n=1; 33.33%), while another developed anemia associated with leukopenia (n=1; 33.33%). The other parameters did not differ from the literature. Although the study has shown a low prevalence of infection by these pathogens, the results highlight that birds from CETAS/RJ are exposed to the agents and can be affected by the infection, highlighting the diagnostic importance before the relocation of these individuals, in order to prevent transmission of these pathogens and impacts on fauna.

OCORRÊNCIA DE PLASMODIUM SPP. E HAEMOPROTEUS SPP. EM AVES NO ESTADO DO PIAUÍ.

As infecções por hemosporídeos aviários especialmente Haemoproteus spp. e Plasmodium spp são consideradas importantes fatores de declínio populacional e extinção de espécies, os estudos destas infecções em aves podem levar ao entendimento de relações entre parasitas, hospedeiros e ambiente. O Brasil apresenta a maior avifauna no mundo e vários estudos foram realizados no país para entender fatores ecológicos e epidemiológicos destas infecções. O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de hemosporídeos em aves no Estado do Piauí. Foram capturadas aves nos seguintes municípios do Estado: Água Branca, Amarante, Lagoa Alegre, Parnaíba, Piripirí e Teresina. As capturas foram realizadas utilizando rede de neblina e pulsar;As aves foram avaliadas morfometricamente e realizou-se coleta de sangue para avaliação hematológica e amostras para realização de análise molecular. Hemosporídeos foram detectados em 6,71% (51/371) na avaliação por microscopia de luz e 24,4% (24/102) na avaliação molecular. A Reação em Cadeia da Polimerase foi mais eficiente que a microscopia na detecção de hemosporíodeos pelo teste qui quadrado (P0,05). A infecção foi relatada pela primeira vez em cinco hospedeiros Certhiaxis cinnamomeus (Curutié), Agelaioides fringillarius (Asa de Telha Pálido), Furnarius figulos (Casaco de Couro na Lama), Calidris minutilla (Maçariquinho) e Conirostrum bicolor (Figuinha do Mangue). Os resultados demonstram que as infecções por hemosporídeos ocorrem em aves do Estado do Piauí, o diagnóstico molecular é mais eficiente que o diagnóstico microscópico nestas infecções e novos hospedeiros participam do ciclo destas infecções no estado.

Avian hemoporid infections, especially Haemoproteus spp. and Plasmodium spp are considered important factors of population decline and species extinction, studies carried out in birds can lead to an understanding of the relationships between parasites, hosts and environment. Brazil has the largest birds diversity in the world and several studies have been carried out in the country for ecological and epidemiological factors. The aim of this study was to evaluate the occurrence of this hemoporidae in birds in the state of Piauí. Birds were captured in the municipalities of Água Branca, Amarante, Lagoa Alegre, Parnaíba, Piripirí and Teresina in the State of Piauí. The captures were carried out using the mist net and pulsar, the birds were evaluated morphometrically and blood was collected for hematological evaluation and carried out for molecular analysis. Hemosporidia were detected in 6.71% (51/371) in the light microscopy evaluation and 24.4% (24/102) in the molecular evaluation. (P0.05). Infection was reported for the first time in five hosts Certhiaxis cinnamomeus, Agelaioides fringillarius, Furnarius figulos, Calidris minutilla and Conirostrum bicolor. The results demonstrate that alterations caused by hemoporids occur in birds in the state of Piauí, molecular diagnosis is more efficient than microscopic diagnosis, and new hosts participate in the disease cycle in the state.

Natural Plasmodium infection in neotropical primates in the island of São Luís, state of Maranhão, Brazil / Infecção natural de Plasmodium em primatas neotropicais da Ilha de São Luís, Estado do Maranhão, Brasil

The states that make up the Legal Amazon Region, which include the state of Maranhão, account for 99% of registered cases of human malaria in Brazil. It is also believed that transmission of malaria from nonhuman primates (NHP) to humans occurs in this region, because of current reports of seroepidemiological results from samples from humans and NHP coexisting in the same areas. This study aimed to make morphological, serological and molecular diagnoses of Plasmodium spp. in neotropical primates on the island of São Luís, state of Maranhão, Brazil. The diagnostic techniques used were optical microscopy, the polymerase chain reaction (PCR) and the indirect immunofluorescence assay (IFA). From June 2009 to April 2010, 70 NHP were sampled: 50 at the Wild Animal Screening Center (CETAS), located in the municipality of São Luís and 20 free-living individuals that were caught in a private reserve located in the municipality of São Jose de Ribamar, state of Maranhão. Under an optical microscope, 140 slides (two from each animal) were evaluated and five animals (7.1%) were found to be positive. IFA did not detect anti-Plasmodium spp. From PCR on the 70 animals sampled, amplified Plasmodium spp. products were observed in 13 samples, of which eight (61.5%) were from free-living animals and five (38.5%) were from animals at CETAS.(AU)

Os Estados que compõem a Amazônia Legal, entre eles o Estado do Maranhão, respondem a 99% dos casos registrados de malária humana no Brasil. Também se acredita que nessa região ocorra a transmissão de malária de primatas não humanos (PNH) para humanos, devido a relatos atuais de resultados soroepidemiológicos de amostras de humanos e PNH que coexistem nas mesmas áreas. O presente estudo objetivou realizar o diagnóstico morfológico, sorológico e molecular de Plasmodium spp. em primatas neotropicais na Ilha de São Luís, Estado do Maranhão, Brasil. Foram utilizadas como técnicas de diagnóstico: a microscopia de luz, a reação em cadeia pela polimerase (PCR) e a imunofluorescência indireta (RIFI). No período de junho de 2009 a abril de 2010, foram amostrados 70 PNH, sendo 50 provenientes do Centro de Triagem de Animais Silvestres (CETAS), localizado no município de São Luís, e 20 de vida livre, capturados em reserva particular localizada no município de São José de Ribamar, Estado do Maranhão. Foram avaliadas pela microscopia de luz 140 lâminas (duas de cada animal), das quais cinco animais (7,1%) foram positivos. Pela RIFI não se detectou anticorpos anti-Plasmodium spp. Pela PCR, dos 70 animais amostrados, foi possível observar produtos amplificados para Plasmodium spp. em 13 amostras, das quais oito (61,5%) eram de animais de vida livre e cinco (38,5%) de CETAS.(AU)

Plasmodium spp. and Haemoproteus spp. infection in birds of the Brazilian Atlantic Forest detected by microscopy and polymerase chain reaction / Infecção por Plasmodium spp. e Haemoproteus spp. em aves da Mata Atlântica brasileira detectada por microscopia e reação em cadeia da polimerase

In recent years haemosporidian infection by protozoa of the genus Plasmodium and Haemoproteus, has been considered one of the most important factors related to the extinction and/or population decline of several species of birds worldwide. In Brazil, despite the large avian biodiversity, few studies have been designed to detect this infection, especially among wild birds in captivity. Thus, the objective of this study was to analyze the prevalence of Plasmodium spp. and Haemoproteus spp. infection in wild birds in captivity in the Atlantic Forest of southeastern Brazil using microscopy and the polymerase chain reaction. Blood samples of 119 different species of birds kept in captivity at IBAMA during the period of July 2011 to July 2012 were collected. The parasite density was determined based only on readings of blood smears by light microscopy. The mean prevalence of Plasmodium spp. and Haemoproteus spp. infection obtained through the microscopic examination of blood smears and PCR were similar (83.19% and 81.3%, respectively), with Caracara plancus and Saltator similis being the most parasitized. The mean parasitemia determined by the microscopic counting of evolutionary forms of Plasmodium spp. and Haemoproteus spp. was 1.51%. The results obtained from this study reinforce the importance of the handling of captive birds, especially when they will be reintroduced into the wild.(AU)

Nos últimos anos infecção por protozoários hemosporídeos dos gêneros Plasmodium e Haemoproteus, tem sido considerada um dos fatores mais importantes relacionados com a extinção e / ou declínio da população de várias espécies de aves em todo o mundo. No Brasil, apesar da grande biodiversidade aviária, poucos estudos foram desenvolvidos para detectar a infecção, especialmente entre as aves silvestres mantidas em cativeiro. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar a prevalência de infecção por Plasmodium spp. e Haemoproteus spp. em aves silvestres em cativeiro na Mata Atlântica do sudeste do Brasil, utilizando microscopia convencional e reação em cadeia da polimerase. Amostras de sangue de 119 aves mantidas em cativeiro no Ibama durante o período de julho de 2011 a julho de 2012, foram coletadas. A densidade parasitária foi determinada com base apenas em leituras de esfregaços de sangue por microscopia fotônica. A prevalência média de infecção por Plasmodium spp. e Haemoproteus spp. obtida por exame microscópico de esfregaços sanguíneos e PCR foi semelhante (83,19% e 81,3%, respectivamente), com Caracara plancus e Saltator similis sendo as espécies mais parasitadas. A parasitemia média determinada pela contagem microscópica de formas evolutivas de Plasmodium spp. e Haemoproteus spp. foi de 1,51%. Os resultados obtidos neste estudo reforçam a importância do manejo de aves em cativeiro, especialmente quando serão reintroduzidas na natureza.(AU)

Analysis of hematologic and serum chemistry values of Spheniscus magellanicus with molecular detection of avian malarial parasites (Plasmodium spp) / Análise dos valores hematológicos e bioquímicos de Spheniscus magellanicus com detecção molecular de parasitos maláricos aviários (Plasmodium spp)

Magellanic penguins (Spheniscus magellanicus) routinely migrate from their breeding colonies to Southern Brazil often contracting diseases during this migration, notably avian malaria, which has been already reported in Brazil and throughout the world. Detection of Plasmodium spp. in blood smears is the routine diagnostic method of avian malaria, however it has a low sensitivity rate when compared to molecular methods. Considering the negative impact of avian malaria on penguins, the aim of this study was to detect the presence of Plasmodium spp. in Magellanic penguins using Polymerase Chain Reaction (PCR) and by verifying clinical, hematological, and biochemical alterations in blood samples as well as to verify the likely prognosis in response to infection. Blood samples were obtained from 75 penguins to determine packed cell volume (PCV), red blood cell (RBC) and white blood cell (WBC) counts, mean corpuscular volume (MCV), uric acid, total protein, albumin, globulin and aspartate aminotransferase (AST) activity levels. Whole blood samples were used for PCR assays. Plasmodium spp. was detected in 32.0% of the specimens using PCR and in 29.3% using microscopic analyses. Anorexia, diarrhea and neurological disorders were more frequent in penguins with malaria and a significant weight difference between infected and non-infected penguins was detected. PCV and MCV rates showed no significant difference. RBC and WBC counts were lower in animals with avian malaria and leukopenia was present in some penguins. Basophil and lymphocyte counts were lower in infected penguins along with high monocyte counts. There was no significant difference in AST activities between infected and non-infected animals. There was a significant increase in uric acid values, however a decrease in albumin values was observed in infected penguins. Based on this study, we concluded that Plasmodium spp. occurs in Magellanic penguins of rehabilitation centers in Southeastern Brazil, compromising the weight of infected animals with clinical alterations appearing in severe cases of this disease. It was also noted that, although the hematological abnormalities presented by these animals may not have been conclusive, leukopenia, monocytosis and the decrease of basophils and lymphocytes revealed an unfavorable prognosis, and Plasmodium spp. infections may progress with elevated uric acid concentration and low albumin levels.(AU)

O pinguim-de-Magalhães (Spheniscus magellanicus) migra das suas colônias reprodutivas até o extremo sul do Brasil. Esses pinguins frequentemente são acometidos por doenças, notavelmente a malária aviária, que é relatada no Brasil e no mundo. A detecção de Plasmodium spp. no esfregaço sanguíneo é o método de rotina mas apresenta baixa sensibilidade quando comparado aos métodos moleculares. Considerando o impacto negativo da malária aviária nos pinguins, o objetivo deste estudo foi detectar a presença de Plasmodium spp. em pinguins-de-Magalhães usando a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), verificar as alterações clínicas, hematológicas e bioquímicas e o provável prognóstico em resposta à infecção. Amostras de sangue foram obtidas de 75 pinguins para determinar o hematócrito (Ht), contagens totais de eritrócitos e leucócitos, volume globular médio (VGM), concentração de ácido úrico, proteínas totais, albumina, globulinas e atividade da aspartato aminotransferase (AST). O sangue total foi usado para ensaios de PCR. A detecção de Plasmodium spp. foi obtida em 32,0% dos indivíduos pela PCR e em 29,3% pela análise microscópica. Anorexia, diarreia e alterações neurológicas foram mais frequentes nos pinguins com malária, e uma diferença significativa no peso entre pinguins infetados e não infectados foi detectada. Ht e VGM não mostraram diferença significativa. A contagem de eritrócitos e leucócitos foi menor nos animais com a malária aviária e leucopenia esteve presente em alguns pinguins. Contagens de basófilos e linfócitos foram mais baixas nos pinguins infectados, bem como elevadas contagens de monócitos estavam presentes. Não houve diferença significativa para a atividade da AST entre os animais infectados e não infectados. Houve um aumento significativo nos valores de ácido úrico, entretanto houve redução nos valores da albumina entre os pinguins infectados avaliados. Concluiu-se que Plasmodium spp. ocorre em pinguins-de-Magalhães de centros de reabilitação no sudeste brasileiro, comprometendo o peso dos animais infectados e com alterações clínicas aparecendo em casos graves da doença. Percebeu-se que embora alterações hematológicas possam não ser conclusivas, leucopenia, monocitose e diminuição de basófilos e linfócitos revelaram prognóstico desfavorável. A infecção por Plasmodium spp. pode cursar com aumento da concentração de ácido úrico e baixos valores de albumina.(AU)

Caracterização fenotípica e genotípica de animais da raça Hereford criados na região sul do estado do RS durante surtos de ceratoconjuntivite infecciosa bovina

Esta dissertação foi dividida em quatro capítulos, tendo como principais objetivos: i) realizar a identificação bacteriológica dos agentes envolvidos na Ceratoconjuntivite Infecciosa Bovina (CIB), por meio de diferentes técnicas: análise morfo-tintorial e bioquímica, Espectrometria de massas com fonte de ionização e dessorção a laser assistida por matriz e analisador de massas do tipo tempo-de-voo (MALDI-TOF), Reação em cadeia da polimerase (PCR) e sequenciamento. ii) avaliar a diversidade genética de bactérias das espécies Moraxella bovis e Moraxella bovoculi isoladas de surtos de CIB entre 2015 e 2017, utilizando as técnicas de ERIC-PCR (enterobacterial repetitive intergenic consensus), RAPD-PCR (random amplification of polymorphic DNA) e uma variação do RAPD-PCR com os primers JWP1 e JWOPA07. iii) estimar os parâmetros e valores genéticos por meio da avaliação tradicional pelo modelo animal para a incidência de CIB. iv) realizar estudo de associação ampla do genoma (GWAS) para identificação de regiões genômicas e SNPs mais representativos para susceptibilidade à CIB. Logo no início do surto de CIB amostras de secreções oculares e nasais foram coletadas de bovinos da raça Hereford para possibilitar a identificação do agente bacteriológico causador da enfermidade, com isso confirmar o surto de CIB. Os animais eram provenientes de cinco fazendas, criados no sul do estado do Rio Grande do Sul. Foram realizadas quatro avaliações, com intervalo médio de 30 dias. O monitoramento teve como finalidade a realização da fenotipagem com relação à susceptibilidade à doença, por meio do acompanhamento da evolução dos surtos de CIB nas propriedades, a partir da atribuição de escores de lesão ocular. Foram atribuídos escores para as lesões de CIB, para cada um dos olhos, em uma escala de zero a quatro, na qual zero indicava o olho normal e quatro o estágio mais avançado da doença, implicando em perda ocular. As melhores concordâncias obtidas entre os métodos de identificação bacteriológica estudada foram à identificação por MALDI-TOF e a identificação molecular (PCR), confirmadas por sequenciamento, a partir do DNA extraído das colônias de Moraxella spp. Ademais, foi confirmada a existência de variabilidade genética entre as cepas de Moraxella bovis e Moraxella bovoculi isoladas de bovinos da raça Hereford, acometidos por CIB, pertencentes a cinco diferentes municípios situados no estado do Rio Grande do Sul. Os coeficientes de herdabilidade preditos foram de 0,14, 0,096 e 0,099 para as categorias (c_2, c_3 e c_9) para incidência a CIB. Os estudos de GWAS apontaram janelas genômicas significativas nos cromossomos 3, 11, 14, 18, 26 e 27 associados à CIB. As análises de enriquecimento funcional revelaram oito termos significativos (p<0,05) associados com a susceptibilidade a CIB: Babesia, Plasmodium vivax, Babesiosis, Bood bactericidal activity, Retinal cone photorecptor cells, Animal nutritional physiological phenomena, COS cells e 5 Flanking region. Os termos MeSH, apontam para importantes processos biológicos que estão relacionados com a expressão fenotípica das lesões ocorridas pela CIB. Concluindo, as análises fenotípicas e genômicas realizada ao longo deste estudo podem auxiliar na concepção de estratégias de prevenção e tratamento contra o CIB, podendo colaborar com estratégias de seleção por animais resistentes a CIB.

This dissertation was divided into four chapters, with the following main objectives: i) to carry out the bacteriological identification of the agents involved in Infectious Bovine Keratoconjunctivitis (IBK) by means of different techniques: morpho-tintorial and biochemical analysis, mass spectrometry with ionization source and matrixassisted laser desorption and time-of-flight mass analyzer (MALDI-TOF), polymerase chain reaction (PCR) and sequencing. ii) to evaluate the genetic diversity of Moraxella bovis and Moraxella bovoculi bacteria isolated from IBK outbreaks between 2015 and 2017, using ERIC-PCR (enterobacterial repetitive intergenic consensus), RAPD-PCR (random amplification of polymorphic DNA) and a variation of the RAPD-PCR with primers JWP1 and JWOPA07. iii) to estimate the genetic parameters and values through the traditional evaluation by the animal model for the incidence of IBK. iv) carry out genome association study (GWAS) to identify genomic regions and most representative SNPs for susceptibility to IBK. At the beginning of the outbreak of IBK samples of ocular and nasal secretions were collected from Hereford cattle to enable the identification of the bacteriological agent causing the disease, thus confirming the IBK outbreak. The animals came from five farms, located in the southern of Rio Grande do Sul state. Four evaluations were performed, with an average interval of 30 days. The purpose of the monitoring was to perform the phenotyping with regard to susceptibility to the disease, by monitoring the evolution of IBK outbreaks in the properties, from the attribution of ocular lesion scores. Scores were assigned to IBK lesions for each eye on a scale of zero to four, in which zero indicated the normal eye and four the most advanced stage of the disease, implying ocular loss. The best concordances obtained between the methods of bacteriological identification studied were the identification by MALDI-TOF and the molecular identification (PCR), confirmed by sequencing, from the DNA extracted from the colonies of Moraxella spp. In addition, the existence of genetic variability between Moraxella bovis and Moraxella bovoculi strains isolated from Hereford cattle, affected by IBK, belonging to five different municipalities located in the state of Rio Grande do Sul was confirmed. The predicted heritability coefficients were 0.14, 0.096 and 0.099 for the categories (c2, c3 and c9) for incidence at IBK. GWAS studies showed significant genomic windows on chromosomes 3, 11, 14, 18, 26 and 27 associated with IBK. Functional enrichment analyzes revealed eight significant (p <0.05) terms associated with IBK susceptibility: Babesia, Plasmodium vivax, Babesiosis, Bood bactericidal activity, Retinal cone photorecptor cells, Animal nutritional physiological phenomena, COS cells e 5 Flanking region. The terms MeSH, point to important biological processes that are related to the phenotypic expression of the lesions occurred by IBC. In conclusion, the phenotypic and genomic analyzes carried out throughout this study may help in the design of strategies for prevention and treatment against CIB, and may collaborate with selection strategies for CIB resistant animals.

INFECÇÃO POR Plasmodium spp. EM PRIMATAS NEOTROPICAIS NA AMAZÔNIA OCIDENTAL

No Brasil, infecções naturais por Plasmodium spp. foram diagnosticadas em primatas não humanos em todas as regiões. Apesar da existência de uma grande diversidade de primatas neotropicais na Amazônia brasileira, estudos sobre infecções por esses agentes ainda são incipientes. Portanto, o objetivo do estudo foi pesquisar a frequência da infecção natural por Plasmodium spp. em primatas não humanos nascidos em vida livre e mantidos em cativeiro na Amazônia Ocidental. Amostras de sangue total foram coletadas de 98 primatas não humanos pertencentes às famílias Aotidae (n=1), Atelidae (n=40), Callitrichidae (n=3), Cebidae (n=49) e Pitheciidae (n=5). A extração de DNA genômico das amostras foi realizada com um kit comercial. A detecção de DNA de Plasmodium vivax e Plasmodium falciparum foi realizada por Semi-Nested PCR. Os produtos amplificados foram purificados e sequenciados. As sequências consenso foram submetidas ao BLASTn para determinação da identidade das sequências obtidas em relação as sequências armazenadas no GenBank. Para confirmar a identidade das sequência de DNA, múltiplos alinhamentos foram realizados para construção de uma árvore filogenética. DNA de Plasmodium spp. foi detectado em 6,12% (6/98) dos primatas examinados, sendo que em 4,08% (4/98) foi detectado DNA de P. falciparum e 2,04% (2/98) de P. vivax. As maiores frequências de infecções por P. falciparum foram detectadas em calitriquídeos (33,33%), seguido por cebídeos (4,08%) e atelídeos (2,5%), enquanto que DNA de P. vivax foi observado somente em atelídeos (5%). Não foram diagnosticadas co-infecções nos primatas examinados. A busca por homologia utilizando o algoritmo BLASTn revelou 99% de identidade entre as sequências parciais do gene 18S rRNA dos dois isolados de P. vivax de Lagothrix cana do Amazonas e as sequências de isolados de P. vivax disponíveis no GenBank. As sequências parciais do gene 18S rRNA dos isolados de P. falciparum de Saimiri ustus, Saguinus bicolor, Sapajus sp. e L. cana revelaram identidades de 100%, 99%, 99% e 97%, respectivamente, com as sequências de isolados de P. falciparum disponíveis no GenBank. A análise filogenética demonstrou a homologia das sequências de P. vivax obtidas dos dois L. cana do Amazonas que foram agrupadas em um clado juntamente com outras sequências de P. vivax. As quatro sequências de P. falciparum obtidas no estudo agruparam em um mesmo clado com outros três isolados de P. falciparum. Pode-se concluir que os primatas não humanos estão infectados por Plasmodium spp. nas áreas estudadas, sendo relatada pela primeira vez a infecção por P. vivax em um primata não humano (L. cana) na Amazônia brasileira e a infecção por P. falciparum em S. bicolor. Estudos sobre os agentes etiológicos da malária são importantes não somente para a saúde pública, mas também para a conservação de espécies de primatas não humanos.

In Brazil, natural infections by Plasmodium spp. were diagnosed in non-human primates in all regions. Despite the existence of a great diversity of neotropical primates in the Brazilian Amazon, studies on infections by these agents are still incipient. However, the objective of the study was to search the frequency of natural infection by Plasmodium spp. in non-human primates born in free-living and kept in captivity in the Western Amazon. Total blood samples were collected from 98 non-human primates belonging to the families Aotidae (n=1), Atelidae (n=40), Callitrichidae (n=3), Cebidae (n=49) and Pitheciidae (n=5). DNA extraction from the samples was performed with a commercial kit. DNA detection of Plasmodium vivax and Plasmodium falciparum was performed by Semi-Nested PCR. The amplified products were purified and sequenced. The consensus sequences were subjected to BLASTn to determine the identity of the sequences obtained with respect to the sequences stored in GenBank. To confirm the identity of the DNA sequences, multiple alignments were made to construct a phylogenetic tree. DNA of Plasmodium spp. was detected in 6,12% (6/98) of the primates examined, being detected in 4.08% (4/98) of these animals DNA of P. falciparum and in 2.04% (2/98) DNA of P. vivax. The highest frequencies of infections by P. falciparum were detected in callitrichids (33.33%), followed by cebids (4.08%) and atelids (2.5%), whereas P. vivax DNA was observed only in atelids (5%). No co-infections were detected in the examined primates. The search by homology using the BLASTn algorithm revealed 99% identity between the 18S rRNA gene partial sequences of the two isolates of P. vivax in Lagothrix cana from the Amazonas and the sequences of the isolates of P. vivax available from GenBank. The 18S rRNA gene partial sequences of P. falciparum isolates from Saimiri ustus, Saguinus bicolor, Sapajus sp. and L. cana showed identities of 100%, 99%, 99% and 97%, respectively, with the sequences of P. falciparum isolates available from GenBank. Phylogenetic analysis demonstrated the homology of P. vivax sequences obtained of two L. cana from the Amazonas that were clustered together with others P. vivax sequences. The four P. falciparum sequences obtained in the study grouped in the same clade with three other P. falciparum isolates. It can be concluded that non-human primates are infected by Plasmodium spp. in the studied areas, being reported for the first time the infection by P. vivax in a non-human primate (L. cana) in the Brazilian Amazon and P. falciparum infection in S. bicolor. Studies about the etiological agents of malaria are important not only for public health but also for the conservation of species of non-human primates.

Caracterização morfológica e molecular de Plasmodium spp. (Apicomplexa, Haemosporida) em aves de fragmentos da Mata Atlântica

Plasmodium spp. são protozoários hemosporídeos causadores da malária aviária que alternam seu ciclo de vida entre mosquitos hematófagos da família Culicidae e hospedeiros vertebrados. Esses parasitos tem sido registrados em aves do mundo todo, entretanto, no Brasil, apesar da grande diversidade de avifauna e de vetores, poucos estudos ainda são realizados com hemosporídeos em espécies da Mata Atlântica. Neste estudo, amostras de sangue de 90 aves de quatro espécies do gênero Turdus coletadas em fragmentos da Mata Atlântica de Minas Gerais e de 80 aves de 15 espécies mantidas em cativeiro no sudeste do Brasil foram analisadas para a presença de Plasmodium spp. por análises microscópicas e sequenciamento do gene mitocondrial citocromo oxidase b (cyt b). No total, 58 aves do gênero Turdus foram positivamente infectadas com Plasmodium unalis, identificada com base em ambos os métodos, morfológico e molecular, sendo registrados quatro novos hospedeiros para esse parasito. A descrição desse hemosporídeo foi ampliada e algumas características diferiram da descrição original. Sete novas linhagens de P. unalis do gene citocromo b foram adicionadas a bancos de dados. As linhagens TLJB34 e TLSB1096 agruparam-se em um clado separado juntamente com sequências de Plasmodium spp., sendo mais distantes em relação as outras obtidas no presente estudo, apresentando 3% de divergência genética. Quanto às aves mantidas em cativeiro, dentre as 61 amostradas, em nove foi encontrada a espécie Plasmodium paranucleophilum (prevalência de 14,75% e parasitemia média de 0,58%), sendo as descrições morfológica e morfométrica desse parasito ampliadas. E dentre as 19 aves do gênero Ramphastos amostradas, em cinco foi identificada a espécie Plasmodium nucleophilum (prevalência de 26,31%e parasitemia média de 0,04%). Nas análises filogenéticas, as duas espécies formaram clados separados com alto valor de suporte, sendo que a divergência genética média de P. paranucleophilum em relação à P. nucleophilum foi de 2,48%. A revisão de literatura e os dados do presente estudo demonstraram que a espécie P. nucleophilum possui maior número de registros no continente americano e parece apresentar baixa especificidade quanto aos hospedeiros. Este estudo contribui com novos dados morfológicos e moleculares acerca dos hemosporídeos de aves do Brasil, confirma a importância da taxonomia integrativa e o uso de abordagens moleculares e morfológicas combinadas para identificar e caracterizar espécies de hemosporídeos aviários e ainda destaca a necessidade de ampliação de estudos no país, uma vez que, a verdadeira diversidade de hemosporídeos aviários ainda é pouco conhecida e dada à enorme diversidade de vetores e espécies de aves brasileiras, pode haver grande número de espécies desses hemoparasitos ainda não descritas.

Plasmodium spp. are haemosporidian protozoa that cause avian malaria. These parasites alternate between dipteran bloodsucking of Culicidae family and vertebrate hosts in their life cycle and have been recorded in birds in many parts of the world. In Brazil, despite the great diversity of birds and vectors species, few studies are conducted with haemosporidian in the Atlantic Forest region. In this study, blood samples from 90 birds of four species of Turdus genus, collected in Atlantic Forest fragments of Minas Gerais and 80 birds of 15 species kept in captivity in southeastern Brazil were analyzed for the presence of Plasmodium spp. by microscopic analysis and sequencing of the mitochondrial gene cytochrome oxidase b (cyt b). In total, 58 birds of genus Turdus were positively infected with Plasmodium unalis, identified based on both methods, morphological and molecular, being recorded four new hosts for this parasite. The description of this haemosporidian was expanded and some features differ from the original description. Seven new lineages of P. unalis were added to databases. The TLJB34 and TLSB1096 lineages grouped in a separate clade with sequences of Plasmodium spp., being more distant in relation to the other obtained in the present study, with 3% of genetic divergence. Regarding the birds kept in captivity, among the 61 sampled, in nine were found the species Plasmodium paranucleophilum (prevalence 14.75% and mean parasitemia 0.58%), and the morphological and morphometric descriptions of this parasite were extended. And among the 19 birds of the genus Ramphastos sampled, in five was identified the species Plasmodium nucleophilum (prevalence 26.31% and mean parasitemia 0.04%). In phylogenetic analyzes, the two species formed separate clades with high support value, and the mean genetic divergence of P. paranucleophilum regarding P. nucleophilum was 2.48%. The literature review and the results of this study showed that P. nucleophilum species have a higher number of records in the Americas and appear to have low specificity as the hosts. This study provides new morphological and molecular data on birds haemosporidian of Brazil, confirms the importance of integrative taxonomy and the use of molecular and morphological approaches combined to identify and characterize species of avian haemosporidian and also emphasizes the need to expand studies in country, since the true diversity of haemosporidian aviaries is still little known and given the enormous diversity of vectors and species of Brazilian birds, there may be many species of these blood parasites not described yet.

Malária em mamíferos silvestres / Malaria in wild mammals / Malaria en mamíferos silvestres

Muito do conhecimento sobre a biologia do parasita da malária foi obtido de estudos de campo e de laboratório em modelos experimentais primatas e murinos. Essa revisão faz uma síntese das espécies de Plasmodium spp. descritas no mundo que infectam mamíferos não humanos e discute a importância e aplicações em estudos experimentais de algumas espécies. Em primatas, existem 29 espécies conhecidas de Plasmodium spp. que parasitam grandes símios, macacos e lêmures. Além da importância da utilização dos primatas em estudos experimentais, foi demonstrado que existe transmissão natural de malárias de seres humanos para outros primatas e vice-versa, merecendo destaque um grande de foco de infecção por malária de macacos em seres humanos na Ásia. Em roedores murinos, são descritas cinco espécies que infectam ratos silvestres na África central e Egito. Em outros mamíferos, são conhecidos como hospedeiros o porco espinho africano, morcegos, esquilos e ungulados. A malária é uma doença de impacto mundial histórico e recente e os modelos animais, tanto roedores quanto primatas, tiveram e terão um crucial papel na realização de estudos experimentais. Porém, a malária em mamíferos é ainda carente de esclarecimentos, sendo ainda necessários estudos para se definir as espécies de Plamodium existentes, seus respectivos hospedeiros silvestres e distribuição geográfica, assim como a importância e as consequências do parasitismo nesses animais.(AU)

Most of the knowledge of malaria parasite biology was obtained from field and laboratory studies on murine and primate experimental models. This review summarizes Plasmodium spp. species that are described infecting non-human mammals and discusses the importance and applications in experimental studies of some species. In primates, there are 29 known described Plasmodium spp. species infecting simian, macaques and lemurs. Besides the importance of the utilization of primates in experimental studies, it was demonstrated that there are natural transmissions of human malaria to other primates and vice versa, and a great focus of macaque malaria infection in human beings in Asia is of great concern. In murine rodents, there are five species which infect wild rats in Central Africa and Egypt. In other mammals, the African porcupine, bats, squirrels and ungulates are known as hosts. Malaria is a disease with worldwide recent impact history, and animal models, rodents and primates had and will have a crucial role on experimental studies. However, mammalian malaria still needs clarification, and studies are necessary to define the existing Plasmodium species, their wild hosts and geographical distribution, as well as the parasitism importance and consequence in these animals.(AU)

Gran parte del conocimiento sobre la biología del parásito de la malaria se ha obtenido a partir de estudios de campo y de laboratorio en modelos experimentales murinos y primates. Esa revisión hace una síntesis de las especies de Plasmodium spp. descriptas en el mundo que infectan mamíferos no humanos, también se analiza la importancia y las aplicaciones en estudios experimentales de algunas especies. En primates, hay 29 especies conocidas de Plasmodium spp. que parasitan grandes simios, monos y lémures. Además de la importancia del uso de primates en estudios experimentales, se ha demostrado que existe transmisión natural de malarias de seres humanos para otros primates y viceversa, mereciendo destaque un gran foco de infección por malaria de monos en humanos en Asia. En roedores murinos, se describen cinco especies que infectan ratas silvestres en África Central y Egipto. En otros mamíferos, son conocidos como hospederos el puercoespín africano, murciélagos, ardillas y ungulados. La malaria es una enfermedad de impacto mundial histórico y reciente y los modelos animales, tanto roedores como primates, tuvieron y tendrán un papel crucial en la realización de estudios experimentales. Sin embargo, la malaria en mamíferos es aún carente de aclaraciones, siendo necesarios estudios para definir las especies de Plasmodium existentes, sus respectivos hospederos silvestres y distribución geográfica, así como la importancia y las consecuencias de parasitismo en esos animales.(AU)

Avaliação morfométrica da hemossiderose e necrose hepática em pinguins-de-Magalhães (Spheniscus magellanicus) naturalmente infectados por Plasmodium spp

Durante sua migração invernal, pinguins-de-Magalhães permanecem na plataforma continental brasileira. Neste este período, animal debilitados e/ou doentes são encaminhados a centros de reabilitação ao longo da costa do Brasil. Durante a estadia nesses centros, essas aves podem desenvolver malária aviária, doença causada por protozoários do gênero Plasmodium e transmitida por mosquitos vetores. Hemossiderose e necrose hepáticas já foram descritas em casos de malária aviária. Nesse estudo foram utilizadas técnicas morfométricas para avaliar a hemossiderose e necrose em lâminas de cortes histológicos de fígado de pinguins-de-Magalhães naturalmente infectados por Plasmodium spp. e nove pinguins-de-Magalhães comprovadamente negativos para Plasmodium spp. (grupo Plasmodium-negative), utilizando as colorações de Perls e reticulina. Todos os animais utilizados nesse estudo foram mantidos sob as mesmas condições de manejo. Linhagens de Plasmodium spp. haviam sido previamente identificadas por esfregaço sanguíneo e/ou análise filogenética do gene cyt-b mitocondrial.O objetivo desse estudo foi avaliar a significância dos quadros de hemossiderose e necrose em pinguins-de-Magalhães infectados por Plasmodium spp. e entre as linhagens/espécies de Plasmodium spp. Fragmentos histológicos foram analisados sob microscópio equipado com um sistema digital de análise de imagens. Foi realizada captura fotográfica do centro de cada fragmento hepático, seguido por 8 capturas adicionais a 50 µm do centro da lâmina, a intervalos de 45°, sob as mesmas condições de luminosidade. Áreas de hemossiderose e necrose foram semi-automaticamente delineadas, sob zoom máximo de 50%. A porcentagem das áreas ocupadas pela hemossiderina e fibras reticulares foram consideradas, respectivamente, como Índice de Hemossiderose Hepática (IHH) e Índice de Necrose Hepática (IHN). O IHN do grupo Plasmodium-negative foi significativamente maior que o IHN do grupo positivo (p>0.001). Entretanto, não foi observada diferença entre o IHH dos dois grupos. Diferenças significativas também não foram observadas no IHH e IHN em relação a instituição, idade, sexo, contaminação por óleo, ou linhagem/espécie de Plasmodium (p>0,05). Não foram observadas correlações significativas entre o IHH e o IHN quanto ao período total de estadia em centro de reabilitação ou período de estadia em centro de reabilitação durante o verão (período de maior densidade do mosquito/vetor) (p>0.05). Hemossiderose hepática possivelmente foi causada por outros fatores, tais como alterações fisiológicas sazonais, ações antropogênicas e alterações climáticas levando a anorexia/caquexia e técnicas de manejo e suplementação durante a reabilitação. Necrose hepática foi significativa entre ambos os grupos, o que pode ter ocorrido devido a uma possível relação entre esta patologia e Plasmodium spp. (por ex: hipóxia causada por obstrução mecânica da vascularização hepática, vasculite parasitária ou presença de nematódeos gastrointestinais) ou à presença de autólise hepática, levando a quadro histológico semelhante à necrose quando avaliada sob coloração de reticulina. A malária aviária é uma das mais importantes afecções de cativeiro em pinguins, podendo comprometer seriamente a reabilitação de pinguins-de-Magalhães. Estudos futuros são necessários para esclarecer os mecanismos dessas hipóteses.

While foraging on the Brazilian continental shelf during winter migration, sick and/or debilitated Magellanic Penguins (Spheniscus magellanicus) found ashore are directed to rehabilitation centers along the coast. While under care, these birds may develop avian malaria, a mosquito-transmitted disease caused by protozoans of the genus Plasmodium. Hepatic hemosiderosis and necrosis have been previously described in avian malaria. We used morphometric techniques to evaluate hemosiderosis and necrosis in Perls- and reticulin-stained liver samples from 24 Magellanic penguins naturally infected by Plasmodium spp. and nine Plasmodium-negative Magellanic penguins (Plasmodium-negative group). All birds were kept under similar housing and husbandry regimens. Plasmodium lineages had been identified through blood smear morphology and/or phylogenetic analysis of the mitochondrial cyt-b gene. Our goal was to evaluate the significance of hepatic hemosiderosis and necrosis in Magellanic penguins infected with Plasmodium sp. and between Plasmodium lineages/species. Histological sections were analyzed under a microscope equipped with a digital system for image analysis. A high power-field of the center of each sample was captured, and eight additional images were captured 50 µm from this point, at 45°intervals, under the same lighting conditions. Areas of hemosiderin and reticulin fibers were semi-automatically outlined, under a maximum zoom of 50%. The percentage of the area occupied by hemosiderin and reticular fibers were respectively considered the index of hepatic hemosiderosis (IHH) and index of hepatic necrosis (IHN). IHN was significantly higher in the Plasmodium-negative group in comparison with the positive group (p<0.001), however, no difference was detected between the IHH of both groups. Significant differences were not detected between IHH and INH regarding institution, age, sex, oil contamination, and Plasmodium lineages/species (p>0.05). There were also no correlation between IHH and IHN regarding the total period of stay in the rehabilitation center or period of stay in the rehabilitation center during summer (period of highest mosquito/vector density) (p>0.05). Hepatic hemosiderosis was possibly related to other causes, such as seasonal physiological changes, anthropogenic disturbance and climatic changes leading to starvation, and husbandry and iron supplementation while under care. Hepatic necrosis was significant between both groups, suggesting a possible relationship between this pathology and Plasmodium spp. (e.g., hypoxia due to mechanic obstruction of the hepatic vasculature, parasitic vasculitis leading to hepatic necrosis, or presence of gastrointestinal nematodes) or the presence of hepatic autolysis, leading to histopathologic changes similar to hepatic necrosis whaen evaluated with reticulin staining. Avian malaria is one of the most important diseases of captive penguins, and may seriously compromise the rehabilitation of Magellanic penguins. Further studies are still needed to clarify the mechanisms of these hypotheses

Hematological and parasitological health conditions of the Pale-breasted Thrush (Turdus leucomelas) (Passeriformes: Turdidae) in southeastern Brazil

From an ecological point of view, parasites are considered important selective forces that influence all aspects of a host's life. The purpose of this study was to assess the health state of Turdus leucomelas Vieillot, 1818 (Turdidae: Passeriformes) inhabiting a Brazilian Cerrado in the breeding and molting seasons through a hematological parameter analysis and an evaluation of infection by blood parasites. The birds were collected with mist-nets, ringed and blood sampled to assess hematological parameters (hematocrit, hemoglobin concentration and white blood cells) and blood parasites. We detected blood parasites through optical microscopy and subsequently used PCR (amplification of the 18sRNA gene) to verify the presence of Plasmodium spp. (avian malaria). During the breeding season, the hemoglobin level and CHGM percentage were greater. Global leukocyte count was positively related to hemoglobin level, CHGM percentage and body weight. Of the total 31 T. leucomelas individuals examined, 18 presented Plasmodium parasites (58% of prevalence). There was a significant relationship between the presence of Plasmodium spp. and decreased CHGM. These results suggest a connection between the health parameters of wild birds and the physiological stress associated with the breeding season.

Hematological and parasitological health conditions of the Pale-breasted Thrush (Turdus leucomelas) (Passeriformes: Turdidae) in southeastern Brazil

From an ecological point of view, parasites are considered important selective forces that influence all aspects of a host's life. The purpose of this study was to assess the health state of Turdus leucomelas Vieillot, 1818 (Turdidae: Passeriformes) inhabiting a Brazilian Cerrado in the breeding and molting seasons through a hematological parameter analysis and an evaluation of infection by blood parasites. The birds were collected with mist-nets, ringed and blood sampled to assess hematological parameters (hematocrit, hemoglobin concentration and white blood cells) and blood parasites. We detected blood parasites through optical microscopy and subsequently used PCR (amplification of the 18sRNA gene) to verify the presence of Plasmodium spp. (avian malaria). During the breeding season, the hemoglobin level and CHGM percentage were greater. Global leukocyte count was positively related to hemoglobin level, CHGM percentage and body weight. Of the total 31 T. leucomelas individuals examined, 18 presented Plasmodium parasites (58% of prevalence). There was a significant relationship between the presence of Plasmodium spp. and decreased CHGM. These results suggest a connection between the health parameters of wild birds and the physiological stress associated with the breeding season.

Hematological and parasitological health conditions of the Pale-breasted Thrush (Turdus leucomelas) (Passeriformes: Turdidae) in southeastern Brazil

From an ecological point of view, parasites are considered important selective forces that influence all aspects of a host's life. The purpose of this study was to assess the health state of Turdus leucomelas Vieillot, 1818 (Turdidae: Passeriformes) inhabiting a Brazilian Cerrado in the breeding and molting seasons through a hematological parameter analysis and an evaluation of infection by blood parasites. The birds were collected with mist-nets, ringed and blood sampled to assess hematological parameters (hematocrit, hemoglobin concentration and white blood cells) and blood parasites. We detected blood parasites through optical microscopy and subsequently used PCR (amplification of the 18sRNA gene) to verify the presence of Plasmodium spp. (avian malaria). During the breeding season, the hemoglobin level and CHGM percentage were greater. Global leukocyte count was positively related to hemoglobin level, CHGM percentage and body weight. Of the total 31 T. leucomelas individuals examined, 18 presented Plasmodium parasites (58% of prevalence). There was a significant relationship between the presence of Plasmodium spp. and decreased CHGM. These results suggest a connection between the health parameters of wild birds and the physiological stress associated with the breeding season.

HEMOPARASITOS EM AVES DE RAPINA DA MESORREGIÃO DO TRIÂNGULO MINEIRO

RESUMO As hemoparasitoses são comuns em aves de rapina e ocasionam alterações no sistema reprodutivo, além de torná-las mais susceptíveis a ataques de predadores. Assim, o presente trabalho da mesorregião objetivou avaliar a prevalência dos principais hemoparasitos que acometem aves de rapinas do Triângulo Mineiro-Brasil. Foram analisadas 55 aves das ordens Accipitriformes (n=12), Falconiformes (n=11), Strigiformes (n=21) e Cathartiformes (n=11) provenientes de recolha, entrega voluntária e apreensão ao Laboratório de Pesquisa em Animais Silvestres da Universidade Federal de Uberlândia e ao Hospital Veterinário de Uberaba. Amostras de sangue (0,5mL) foram colhidas por punção venosa da veia braquial para a confecção de esfregaços sanguíneos e pesquisa parasitológica em 200 campos microscópicos, no aumento de 100x. O parasitismo foi observado em 78,18% (43/55) das aves avaliadas. Entre os Accipitriformes, o parasitismo foi estatísticamente inferior (33,3% - 4/12) aos Falconiformes (90,9% - 10/11), Strigiformes (85,71% - 18/21) e Cathartiformes (100% - 11/11). Observou-se que 43 aves (78,18%) estavam infectadas por Plasmodium spp., mas com baixa parasitemia e uma (2,32%) apresentou infecção mista por Babesia spp. e Plasmodium spp. Dentre as ordens analisadas accipitriforme foi a que apresentou menor parasitemia. Este é o primeiro registro de Babesia spp. infectando Caracara plancus. Não foram observados hemoparasitos somente em duas espécies Elanus leucurus e Falco peregrinus. Assim, pode-se concluir que as aves das ordens estudadas apresentam alto índice de parasitismo por Plasmodium spp. e que o Caracara plancus é susceptível a infecção por Babesia spp. O presente estudo é uma contribuição para o conhecimento das hemoparasitoses que acometem rapinas no bioma Cerrado do Brasil. Novos estudos devem ser realizados com novas técnicas de identificação dos hemoparasitos, a fim de se detalhar a classificação taxonômica e a epidemiologia dos agentes envolvidos.

Hemoparasitosis are common in birds of prey and cause alterations in reproductive status, sexual intercourse besides making them more susceptible to predators attack. Thereby, the present study aimed to evaluate the prevalence of the main hemoparasites that affects birds of prey in the region of Triângulo Mineiro-Brazil. Were evaluated 55 birds of the orders Accipitiforme (n=12), Falconiforme (n=11), Stringiforme (n=21) and Cathartiforme (n=11), obtained from picking, voluntary surrender and apprehension at the Laboratory of Research in Wild Animals from Universidade de Uberlândia and Hospital Veterinário de Uberaba. Blood samples (0,5mL) were collected by venipuncture of the brachial vein for making the blood smears and parasitological search in 200 microscopic fields, 100 times magnificence. Parasitism was observed in 78,18% (43/55) of the evaluated birds. Among the Accipitriformes, parasitism was statistically lower (33,3% - 4/12), than Falconiformes (90,9% - 10/11), Stringiformes (85,71% - 18/21) and Cathartiformes (100% - 11/11). It was observed that that among Cathartiformes, 43 birds (78,18%) were infected by Plasmodium spp., showing low parasitemia, and one bird (2,32%) had mixed infection caused by Babesia spp. and Plasmodium spp. This is the first report of Babesia spp. infecting Caracara plancus. In two species, Elanus leucurus and Falco peregrinus, parasitism was not observed. Thus, it can be concluded that the birds of the studied orders presented high rates of parasitism by Plasmodium spp. and Caracara plancus showed infection caused by Babesia spp. The present study is a contribution to the knowledge of hemoparasitosis that affects birds of prey in the biome of Brazilian Cerrado. News studies should be performed using new techniques of identification of hemoparasites, aiming to detail the taxonomic classification and epidemiology of the involved agents.

Plasmodium spp. em aves silvestres na Fundação Parque Zoológico de São Paulo: identificação de espécies por microscopia e amplificação do gene mitocondrial citocromo b

O papel dos Zoológicos nos programas de conservação aumentou significantemente nas últimas décadas e a manutenção da saúde dos animais cativos é essencial para garantir o sucesso desses programas. Entretanto, aves mantidas em zoos sofrem de infecções por parasitas, principalmente hemosporídeos, e podem perecer em quase todo o mundo. Estudos para determinar a ocorrência e diversidade desses parasitas, com o objetivo de entender melhor sua influência na condição física das aves em cativeiro, são necessários. Em um estudo de quase quatro anos, nós investigamos a positividade de Plasmodium spp. e Haemoproteus spp. nas aves cativas do Parque Zoológico de São Paulo, o maior zoológico da América Latina e o quarto do mundo. Métodos moleculares e morfológicos foram usados para detectar e identificar esses parasitas. A positividade geral de hemosporídeos nos indivíduos examinados foi 12,6%. Os parasitas foram detectados, sobretudo, através do diagnóstico molecular, indicando que muitas espécies podem abrigar infecções subclínicas. Em um estudo bastante amplo, nós testamos animais de 17 Ordens, 29 Famílias, e 123 espécies, detectando indivíduos positivos em 64,7%, 48,3% e 26,8%, respectivamente. Aves da Família Anatidae foram as mais frequentemente infectadas. As infecções com parasitas do gênero Plasmodium foram predominantes quando comparadas aquelas com parasitas do gênero Haemoproteus. No total, 14 linhagens de cytb de Plasmodium spp., incluindo P. nucleophilum e P. elongatum, e 2 linhagens de cytb de Haemoproteus spp., foram registradas. Dessas linhagens, 8 foram descritas pela primeira vez. Uma dessas linhagens foi notavelmente generalista quanto às espécies hospedeiras, enquanto outras se restringiram a parasitar espécies de uma mesma Família. Estes resultados mostram que entre os animais cativos dos zoos, além dos pinguins, existem várias espécies em risco de contrair malária. A presença de Haemosporida pode ser difícil de eliminar, mas é possível reduzir a taxa de infecção tratando os animais positivos, enquanto os mantêm em instalações livres de mosquitos. Protocolos de quarentena precisam ser utilizados se o animal for transferido entre instituições. O presente estudo é o primeiro inquérito de hemosporídeos realizado em aves cativas de diferentes Ordens, e enfatiza a necessidade de incluir, na gestão e criação desses animais no cativeiro, práticas para o controle desses parasitas.

The role of Zoos in conservation programs has increased significantly in last decades and maintenance of the health of captive animals is essential to guarantee the success of these programs. However, birds kept in zoos suffer from infections by parasites, mainly haemosporidians, and can perish almost everywhere in the world. Studies to determine the occurrence and diversity of these parasites, aiming to better understand its influence in the fitness of the captive birds, are necessary. In a study over four years, we investigated the positivity of Plasmodium spp. and Haemoproteus spp. in the captive birds from the São Paulo Zoo, the largest zoo in Latin America and the fourth in the world. Molecular and morphological methods were used for detecting and identifying these parasites. The overall positivity of haemosporidians in the examined birds was 12.6%. Parasites were mostly detected by the molecular diagnosis, indicating that many species may harbour subclinical infections. In a very wide study, we tested animals from 17 Orders, 29 Families, and 123 different species, detecting positive individuals in 64.7%, 48.3% and 26.8%, respectively. Birds from the Anatidae Family were the most commonly infected animals. Infections with parasites of the genus Plasmodium were predominant when compared to those of the genus Haemoproteus. In total, 14 cytb lineages of Plasmodium spp., including P. nucleophilum and P. elongatum, and 2 cytb lineages of Haemoproteus spp., were recorded in this study. From these lineages, 8 were described for the first time. One of these lineages was markedly generalist regarding the host species while others infected just species within the same Family. These results show that among the captive animals in the zoos, besides the penguins, there are many species at risk of acquiring malaria. The presence of Haemosporida could be difficult to eliminate, but it is possible to reduce the infection rate by treating the positive animals, while keeping them in facilities free from mosquitoes. Protocols of quarantine must be implemented whenever an animal is transferred between institutions. The present study is the first survey of haemosporidians carried out with captive birds from different Orders, and emphasizes the necessity of applying, in management and husbandry of animals in captivity, practices to control these parasites.

Prevalência, riqueza e sazonalidade de hemosporídeos aviários em diferentes estágios de sucessão ecológica no Parque Estadual da Mata Seca, Minas Gerais, Brasil

Prevalência, riqueza e sazonalidade de hemosporídeos aviários em diferentes estágios de sucessão ecológica no Parque Estadual da Mata Seca, Minas Gerais, Brasil Resumo: Alterações ambientais, como a conversão de habitat para a pecuária, constituem umas das principais causas da perda de biodiversidade. Estes dois fatores em conjunto podem aumentar a exposição de populações animais e humanas a agentes infecto-parasitários. A hemosporidiose aviária, infecção causada por protozoários dos gêneros Plasmodium e Haemoproteus, possui distribuição cosmopolita e provoca diferentes efeitos deletérios em aves de vida livre. Tem sido revelada grande diversidade destes parasitos no Brasil, apontando este sistema parasito-vetor-hospedeiro como um importante modelo para estudos sobre ecologia e evolução de parasitos de relevância conservacionista. A prevalência e diversidade destes parasitos apresentam variações entre ambientes com diferentes níveis de integridade florestal, no entanto, estes parâmetros parasitológicos ainda não haviam sido avaliados em um gradiente de sucessão ecológica no Brasil. O efeito da sazonalidade na prevalência e na distribuição de hemosporídeos não é amplamente explorado em ambientes tropicais. Além disso, pouco se sabe sobre vetores de hemosporídeos no mundo, e menos ainda é conhecido no Brasil. Com isso, o presente trabalho avaliou o efeito da sucessão ecológica e da sazonalidade sobre a comunidade de aves e sobre a prevalência e diversidade de hemosporídeos em aves e em mosquitos no Parque Estadual da Mata Seca, Minas Gerais. Aves foram capturadas com redes de neblina em quatro diferentes estágios sucessionais: pastagem, e estágios inicial, intermediário e tardio. Os três primeiros constituíam áreas de pastagem abandonadas há 8, 13 e 30 anos, respectivamente, e o estágio tardio não apresentava histórico de intervenção humana há mais de 50 anos. O efeito da sazonalidade da Mata Seca na distribuição das aves, mosquitos e de seus parasitos foi avaliado a partir de coletas realizadas em quatro épocas: final do período de chuvas, início e final da estação seca, e pico da estação chuvosa subsequente. Um total de 461 aves foram capturadas, cujas comunidades apresentaram diferenças entre áreas de pastagem e os demais estágios sucessionais. A prevalência de hemosporídeos foi maior entre aves de pastagem em relação às aves dos demais estágios sucessionais considerando toda a comunidade de aves avaliadas. A prevalência também foi maior em aves de espécies exclusivas de áreas de pastagem quando comparadas com espécies que não foram capturadas nesse estágio. Isso revela que espécies exclusivas de áreas de pastagem podem aumentar o risco de infecção por hemosporídeos para espécies que frequentam diversos estágios sucessionais. A prevalência de infecção por hemosporídeos aumentou entre a metade e o final da época seca, podendo indicar um fenômeno conhecido como recaída de primavera, frequente em climas temperados, mas nunca reportado em locais de clima tropical. Também observamos uma distribuição sazonal dos parasitos do subgênero H. (Parahaemoproteus), que só foram detectados durante as épocas de chuva. Identificamos mosquitos das espécies Mansonia titillans e Ma. pseudotitillans como potenciais vetores de Plasmodium spp. após análise por PCR de pools de abdomens. O presente estudo evidencia o papel da sucessão ecológica na estrutura das comunidades das aves. Espécies habitantes de estágios avançados de sucessão são beneficiadas por apresentarem menores taxas de infecção por parasitos patogênicos. Estudos futuros envolvendo coletas periódicas de aves ao longo de vários anos em outros ambientes tropicais sazonais podem revelar se os resultados aqui demonstrados são decorrentes de variações aleatórias ou se realmente refletem alterações sazonais das interações entre hemosporídeos e aves tropicais.

Prevalence, richness and seasonality of avian haemosporidians at different successional stages in Mata Seca State Park, Minas Gerais, Brasil. Abstract: Environmental changes, such as land conversion for livestock farming, constitute the main causes of loss of biodiversity. These effects together can increase parasitic diseases risk in human and wildlife populations. Avian haemosporidian is a worldwide protozoan disease caused by parasites in the genera Plasmodium and Haemoproteus that has varying deleterious effects on free-living birds. Recent studies have revealed a considerable diversity of haemosporidians in Brazil, depicting this parasite-vector-host system as an important model for ecological and evolutionary studies of parasites of conservational value. Patterns in haemosporidian prevalence and diversity change between habitats with different levels of forest integrity. However, such parameters had not been accessed in forest fragments under different stages of ecological succession in Brazil. Little is known about haemosporidian vectors in the world, and even less is understood in Brazil. With that, we accessed the effects of the ecological succession in bird communities and in the prevalence and diversity of haemosporidians in birds and in mosquitos captured in Mata Seca State Park, Minas Gerais, which ecosystem is dominated by Seasonally Dry Tropical Forest. We mist-netted birds in four different successional stages: pasture areas, and early, intermediate, and late stages. The first three stages consisted in pasture areas abandoned 8, 12 and 30 years ago, respectively, and the late stage does not have reports of human intervention for more than 50 years. Seasonal effects on birds, mosquitos and parasite distribution were evaluated by conducting bird and mosquito captures at four periods: end of the rainy season, beginning and end of the dry season, and peak of the following rainy season. We captured 461 birds, which communities changed between pasture areas and the remaining successional stages. Haemosporidian prevalence, as detected by PCR, was higher within birds in pasture compared with birds captured in non-pasture areas when we considered whole communities. Prevalence also was higher within bird species captured exclusively in pasture areas then within species exclusive from non-pasture areas. Our results reveal that species exclusive from pasture areas increase haemosporidian infection risks for species that inhabit different successional stages when they include pasture areas in their range. Haemosporidian prevalence increased between the beginning and the end of the dry season, suggesting a phenomenon known as spring relapse, which has been reported in temperate latitudes, but that has never been detected in tropical areas. We also found seasonal changes in the distribution of Parahaemoproteus parasites. This subgenus was detected only during the rainy seasons. We used PCR and detected Plasmodium parasites in abdomen pools from the mosquito species Mansonia titillans and Ma. pseudotitillans, pointing them as putative vectors of avian malaria. The present study shows effects of ecological succession on the structure of bird communities. Species and individuals that inhabit advanced stages are benefited by presenting lower rates of infection by pathogenic parasites. Future studies targeting periodic and long-term samplings in other seasonal tropical environments will reveal if our results are due to random variation or if they reflect seasonal changes in haemosporidian infection in tropical birds.