A molecular survey reveals high occurrence of co-infections in intensive pork production farms with increased rates of mummified swine fetuses in Southern Brazil / [Pesquisa molecular revela alta ocorrência de coinfecções em granjas de produção intensiva de suínos com altas taxas de mumificação fetal no sul do Brasil]

Neste estudo, 308 amostras de fetos mumificados foram testadas para parvovírus suíno (PPV), circovírus suíno tipos 2 e 3 (PCV2 e PCV3) e leptospiras patogênicas. A idade gestacional no momento da perda gestacional e a frequência da mumificação fetal de acordo com a ordem de parto também foram investigadas. As amostras foram coletadas em granjas comerciais de criação de suínos da região sul do Brasil que apresentassem taxas de mumificação fetal igual ou maiores a 2,5%. Fragmentos de pulmão, rim, fígado e coração de fetos suínos mumificados foram coletados para análise molecular. Resultados da PCR foram classificados de acordo com a região de origem das amostras, tendo Santa Catarina, Paraná e Rio Grande do Sul contabilizado 87 (28,25%), 89 (28,90%) e 132 (42,86%) do total de amostras de fetos suínos mumificados, respectivamente. Coinfecções foram observadas na maioria dos casos e PCV3 foi o agente mais prevalente detectado, encontrado em 298 amostras (96,75%). A maioria das perdas gestacionais foi observada entre 50 e 70 dias de gestação (168; 54,5%) e a mumificação fetal não foi associada à ordem de parto das matrizes. Os achados sugerem que as altas taxas de fetos suínos mumificados na região Sul do Brasil podem ser explicadas pela infecção com esses agentes virais.(AU)

High prevalence of porcine circovirus 2, porcine parvovirus, and pathogenic leptospires in mummified swine fetuses in Southern Brazil / Alta prevalência de parvovírus suíno, circovírus suíno 2 e leptospiras patogênicas em fetos suínos mumificados na região Sul do Brasil

Modern swine production employs a high degree of technology and is organized in various production stages, in which reproduction is one of the most significant. However, reproductive losses associated to fetal death are still high. Fetal losses, including fetal mummification, may occur at a rate below 1.5% in a sound herd. The causes of fetal death can be very diverse, and include various infectious agents. Therefore, investigating the causes of fetal losses is important in the decision-making process related to the control and prophylaxis of the herd. The goal of this study was to carry out a molecular survey, analyzing porcine circovirus 2 (PCV2), porcine parvovirus (PPV), and pathogenic Leptospira as potential agents related to fetal death in swine farms in Southern Brazil. We collected samples from three farms with a mummified index ≥ 2.5%. Fragments of brain, lung, kidney, liver, and heart were sampled for PCR analysis. Out of 100 samples examined, 87, 68, and 22 were positive for PCV2, PPV, and Leptospira spp., respectively. Moreover, we also identified coinfections with two and three pathogens in the same sample. Our findings contribute to the spreading of scientific knowledge related to infectious causes (PPV, PCV2, and pathogenic leptospires) of fetal losses in swine, as evidenced by the high frequencies of the investigated agents.(AU)

A produção moderna de suínos emprega um alto grau de tecnologia e é organizada em várias etapas de produção, nas quais a reprodução é uma das mais importantes. No entanto, as perdas reprodutivas associadas à morte fetal ainda são altas. Perdas fetais, incluindo mumificação, podem ocorrer em taxa abaixo de 1,5% em rebanhos sadios. As causas da morte fetal podem ser diversas, incluindo causas infecciosas. Portanto, a investigação de causas relacionadas à ocorrência de perdas fetais é importante no processo relacionado ao controle e profilaxia do rebanho. O objetivo deste estudo foi realizar um levantamento molecular, incluindo circovírus suíno 2 (PCV2), parvovírus suíno (PPV), e leptospiras patogênicas como potenciais agentes relacionados à morte fetal em suínos no sul do Brasil. Foram coletadas amostras de três granjas com índice de fetos mumificados ≥ 2,5%. Fragmentos de cérebro, pulmão, rim, fígado e coração foram amostrados para análise por PCR. Das 100 amostras examinadas, 87 foram positivas para PCV2, 68 foram positivas para PPV e 22 foram positivas para Leptospira spp. Além disso, também identificamos co-infecções com dois e três patógenos em uma mesma amostra. Os resultados encontrados contribuem para a disseminação do conhecimento científico relacionado às causas infecciosas (PCV2, PPV e Leptospiras patogênicas) relacionadas às perdas fetais em suínos, assim como evidenciam a alta frequência dos agentes pesquisados.(AU)

Intermittent elimination of Porcine Parvovirus 4 (PPV4) in naturally infected swine semen: first report / Primeiro relato de eliminação intermitente de Parvovírus suíno 4 (PPV4) em sêmen de suíno infectado naturalmente

Porcine parvovirus 4 (PPV4) has been reported in several countries and the high rate of concurrent PCV2 infection with PPV4 may trigger the "porcine circovirus disease" (PCVD). This has awakened the interest in how PPV4 virus behaves. The aim of this study was to show that, like other swine viruses, the elimination of PPV4 in semen is intermittent. The study was conducted in the Unidade de Pesquisa e Desenvolvimento de Itapeva da Agência Paulista de Tecnologia dos Agronegócios Regional (Apta Regional). Over a period of six months, four boars were monitored and the semen was collected every 10 days, totalizing 74 semen samples. Through PCR testing, PPV4 was detected in 32/74 (43.2%) semen samples. Three sequences of 284 nt, showed identity varying from 98.2% to 100%, confirming the detection of the virus in all boars. Semen volume and sperm motility did not indicate significant difference between PPV4 positive or negative semen samples (p > 0.05). There was no significant difference between the monthly distributions of positive and negative samples. This is the first study showing intermittent shedding of PPV4 in naturally infected boars. Absence of typical clinical signs and/or influence in semen quantity was also observed.(AU)

O Parvovírus suíno 4 (PPV4) foi descrito em vários países e a alta taxa de infecção simultânea entre PCV2 e PPV4 está associada ao desencadeamento da Circovirose. Isso despertou o interesse em estudar o comportamento do PPV4. O objetivo deste estudo foi mostrar que, assim como outros vírus suínos, a eliminação de PPV4 no sêmen é intermitente. O estudo foi realizado na Unidade de Pesquisa e Desenvolvimento de Itapeva da Agência Paulista de Tecnologia dos Agronegócios Regionais. Durante um período de seis meses, quatro cachaços foram monitorados e o sêmen foi coletado a cada 10 dias, totalizando 74 amostras de sêmen. Através de testes de PCR, o PPV4 foi detectado em 43,2% (32/74) das amostras de sêmen. Três sequências de 284 nt apresentaram 100% de identidade entre si, e quando, comparadas com sequências de PPV4 disponíveis no GenBank, mostraram uma identidade de 98.2% a 100%, confirmando a detecção do PPV4 nas amostras de sêmen dos cachaços. O volume de sêmen e a motilidade espermática não mostraram diferença significativa entre amostras positivas ou negativas de PPV4 (p > 0,05). Não houve diferença significativa entre as distribuições mensais de amostras positivas e negativas. Este é o primeiro estudo que mostra a eliminação intermitente de PPV4 em cachaços infectados naturalmente. Ausência de sinais clínicos típicos e / ou influência na quantidade de sêmen também foi observada.(AU)

DIAGNÓSTICO DE VÍRUS DE IMPACTO REPRODUTIVO EM SUÍNOS: APLICABILIDADE DA ESPECTROSCOPIA RAMAN

De grande relevância para a medicina veterinária preventiva, o parvovírus suíno (PPV) é uma das principais causas infecciosas de falha reprodutiva em granjas suínas, responsável por importantes perdas econômicas, principalmente em co-infecção com o circovírus suíno tipo 2 (PCV2). Até o momento, as ferramentas de detecção mais utilizadas são baseadas na Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), bastante sensível e específica, porém complexa, com altos custos associados, além de exigir de horas a dias para oferecer os resultados. Além disso, a recente pandemia mostrou o quanto a saúde pública demanda estratégias diagnósticas inovadoras e simples, mais adequadas para aplicações em larga escala. O objetivo do presente estudo foi identificar biomarcadores moleculares de infecção de PPV ou PCV2 através da Microespectroscopia Raman (RMS), a fim de fortalecer a base de dados da literatura científica, contribuindo para sua aplicação no diagnóstico em virologia no mundo todo. Para tanto, células de testículo de suíno (ST) foram inoculadas com PPV ou PCV2 e cultivadas in vitro (37 ºC, 5% CO2) por quatro dias. As células fixadas foram então submetidas à investigação RMS usando um laser de 633 nm. Um total de 225 espectros foi obtido para cada grupo experimental: PPV+, PCV2+ e controle negativo (NC). O ajuste teórico dos espectros obtidos foi realizado para o cálculo da Razão de Intensidade de Pico (PIR), a partir da qual os biomarcadores foram identificados. Os biomarcadores que separaram com precisão os três grupos foram, dos mais impactantes aos menos: ácidos nucleicos, proteínas e Arginina, enquanto os biomarcadores de infecção, i. e., picos capazes de diferenciar o controle negativo (NC) contra outros grupos foram principalmente proteínas. Curiosamente, o PPV apresentou resultados de assinaturas específicas, sendo lipídios e ácidos nucleicos os mais impactantes, embora também proteínas. Esses resultados contribuíram para a construção de bases promissoras para a aplicação de RMS em ciências biomédicas, como uma abordagem diagnóstica alternativa.

Of great relevance for preventive veterinary medicine, porcine parvovirus (PPV) is one of the major infectious causes of reproductive failure in swine, responsible for important economic losses, specially along with Porcine Circovirus type 2 (PCV2). To date, the most useful detection tool is PCR-based, which is quite sensitive and specific, but laborious, costly and time-demanding. Moreover, the recent pandemic has shown how much public health demands innovative and simple diagnostic strategies that are more suitable for large scale applications. Our goal was to identify molecular biomarkers of PPV or PCV2 infection by Raman Microspectroscopy (RMS), in order to strength the Raman database and to contribute to its application on viral diagnostic worldwide. For this intent, swine testis (ST) cells were inoculated with PPV or PCV2 and in vitro cultured (37 ºC, 5% CO2) for four days. Fixed cells were then subdjected to RMS investigation using a 633 nm laser. A total of 225 spectra was obtained for each experimental group (PPV+, PCV2+ and negative control). Theoretical fitting of obtained spectra was performed for Peak Intensity Ratios (PIR) calculation, from which biomarkers were derived. Biomarkers which accurately separated all three groups were, from the most to the least impactful: nucleic acids, proteins and Arginine, while infection biomarkers, i. e., peaks able to differentiate negative control (NC) against other groups were mostly proteins. Interestingly, PPV show specific biomarkers assignments, being lipids and nucleic acids the most impactful ones, although proteins too. These results built a promising bases for RMS, as an alternative diagnostic approach for biomedical applications.

Aplicações de Metagenômica Viral em Medicina Veterinária: Análise de Viromas

As novas abordagens metagenômicas virais permitem a detecção imparcial de uma ampla gama de agentes infecciosos de maneira independente da cultura, facilitando o diagnóstico e, consequentemente, o monitoramento de doenças, o que está intimamente atrelado ao conceito One World, One Health. Além disso, abrem possibilidades para análises genéticas comparativas e enriquecimento de bancos de dados genômicos. O gênero Hepacivirus (família Flaviviridae) é um exemplo expressivo de gênero viral que cresceu rapidamente com o advento da metagenômica. Desde 1996, quando o gênero Hepacivirus foi criado, o vírus da hepatite C (HCV) era a única espécie conhecida. No entanto, os hepacivírus (HVs) têm sido detectados em diversos animais domésticos e selvagens, incluindo, equinos, cães, roedores, morcegos, bovinos, tubarões, entre outros. O objetivo geral desta tese foi aprofundar o conhecimento acerca da ecologia viral em diferentes hospedeiros, através da metagenômica na ciência veterinária, destacando diferentes subáreas em que a mesma pode ser empregada. O Capitulo 1 aborda a detecção de um hepacivírus bovino (HNV) através da plataforma de sequenciamento de alto desempenho, Illumina MiSeq. As análises revelaram uma sequência com alta divergência nucleotídica quando comparada aos demais HNVs conhecidos mundialmente. Além disso, baseado na classificação proposta na literatura, trata-se de um provável novo genótipo. Esse estudo, intitulado Highly Divergent Cattle Hepacivirus N in Southern Brazil foi publicado em 2019, na revista científica Archives of Virology. O Capítulo 2 trata-se de dois estudos de metagenômica realizados para análise de viroma. O primeiro intitulado "New Polyomavirus in Nutria, Myocastor coypus Polyomavirus 1" no qual obtivemos o sequenciamento de genoma completo de uma nova espécie de PyVs em ratão-do-banhado, pertencente ao gênero Alphapolyomavirus, que foi publicado na revista científica Archives of Virology. No segundo estudo, "Liver Virome of Healthy Pigs Reveals Diverse Small ssDNA Viral Genomes", foi analisado o viroma de figados de suínos de um abatedouro. Nesse estudo detectamos, pela primeira vez no Brasil, a presença de alguns vírus como Porcine Circovirus 1 e Porcine Parvovirus 6 e 7, além da ausência de vírus potencialmente zoonóticos. A pesquisa foi publicada na revista científica Infection, Genetics and Evolution em 2020. Concluindo, a metagenômica viral foi aplicada com sucesso na investigação de três importantes estudos para a ciência veterinária. Os resultados contribuíram com a expansão do conhecimento na área, através da descrição e caracterização de novos e conhecidos vírus, além de enriquecer os bancos de dados genômicos, provendo informação para futuras pesquisas

The viral metagenomic approaches, a culture-independent technique, allow the impartial detection of a wide range of pathogens, improving the diagnosis and, consequently, the monitoring of diseases, which is closely linked to the One World, One Health concept. Furthermore, open possibilities for comparative genetic analysis and genomic databases enrichment. Hepacivirus genus (family Flaviviridae) is an expressive example of a viral genus that grew with the advent of metagenomics. Since 1996, when the genus Hepacivirus was created, the hepatitis C virus (HCV) was the only known species. However, hepaciviruses (HVs) have been detected in several domestic and wild animals, including, horses, dogs, rodents, bats, cattle, sharks, among others. The main objective of this thesis was improving the knowledge of different hosts viral ecology through metagenomics in veterinary science, highlighting different sub-areas in which it can be applied. Chapter 1 addresses bovine hepacivirus (HNV) detection through the high-throughput sequencing (HTS), using Illumina MiSeq. The analyzes revealed a sequence with high nucleotide divergence when compared to HNVs worldwide known. In addition, based on the ICTV classification, it is a putative new genotype. This study, entitled Highly Divergent Cattle Hepacivirus N in Southern Brazil was published in 2019, in the scientific journal Archives of Virology. Chapter 2 is about two metagenomics studies performed for virome analysis. The first one entitled "New Polyomavirus in Nutria, Myocastor coypus Polyomavirus 1" in which we obtained a new PyVs complete genome species of in nutria, belonging to the genus Alphapolyomavirus, which was published in the scientific journal Archives of Virology. In the second research, "Liver Virome of Healthy Pigs Reveals Diverse Small ssDNA Viral Genomes", the swine liver virome of a slaughterhouse was analyzed. In this study, we detected, for the first time in Brazil, the presence of some viruses such as Porcine Circovirus 1 and Porcine Parvovirus 6 and 7, in addition to the absence of potentially zoonotic viruses. In conclusion, viral metagenomics has been successfully applied in important veterinary science studies. The results contributed to the knowledge expansion in the area, through the description and characterization of new and known viruses, in addition to enriching the genomic databases, providing information for future research.

CARACTERIZAÇÃO DO VIROMA DE SORO DE SUÍNOS, EQUINOS E BOVINOS

Os suínos, equinos e bovinos possuem uma histórica importância econômica e social. A criação de suínos de exposição para participar em eventos agrícolas é uma atividade relevante na região Centro-Oeste dos Estados Unidos. Os equinos são utilizados para o lazer, esporte, equoterapia e força de tração no trabalho rural. Os bovinos apresentam um papel essencial na indústria de carne e leite. Além disso, equinos e bovinos são fontes de soro, um produto biológico utilizado na pesquisa e para à fabricação de vacinas. Dessa forma, o conhecimento do status sanitário de suínos, equinos e bovinos é um ponto estratégico para à epidemiologia molecular de agentes virais que causam prejuízos econômicos à saúde animal. O conhecimento limitado da comunidade viral presente no soro desses animais dificulta o esclarecimento das possíveis causas de doenças de etiologia infecciosa. O emprego do sequenciamento de alto desempenho (high-throughput sequencing, HTS) tem permitido a detecção de agentes virais em amostras biológicas de muitas espécies animais. Porém, os soros de suínos de exposição, e lotes de soros equinos e bovinos comerciais de diferentes países ainda carecem de investigação da presença de vírus adventícios através da metagenômica viral. Nesse sentido, o presente estudo visa ampliar o conhecimento sobre a diversidade do viroma do soros desses animais utilizando o HTS. No Capítulo 1, foram analisadas 400 amostras de soros de suínos, divididas em dois pools de 200 amostras cada. Foram obtidas sequências de genomas das famílias Arteriviridae, Circoviridae, Flaviviridae, Herpesviridae, Parvoviridae e Retroviridae. Vinte e três espécies virais foram detectadas, incluindo o primeiro bufavírus suíno nos Estados Unidos. Assim como, o vírus da síndrome respiratória e reprodutiva suína, pestivírus atípico de suíno e circovírus suíno. Além disso, 17 genomas completos foram recuperados e os dois primeiros bocaparvovirus ungulado 3 dos Estados Unidos. No Capítulo 2, foram investigados cinco lotes de soros comerciais de equinos com origem na Nova Zelândia (três lotes), Brasil e dos Estados Unidos (um lote cada). Nestes soros foram detectadas sequências genomicas das famílias Flaviviridae, Herpesviridae e Parvoviridae. Particularmente, hepacivírus e pegivírus equinos foram os mais frequentes. No Capítulo 3, foram sequenciados sete lotes de soros comerciais de bovinos com origem na Nova Zelândia (dois lotes), México (um lote) e dos Estados Unidos (quatro lotes). Os soros de bovinos apresentaram genomas das famílias Adenoviridae, Flaviviridae, Parvoviridae, Picornaviridae, Pneumoviridae, Polyomaviridae, Poxviridae, Reoviridae, Retroviridae e vírus circulares DNA fita simples codificantes de replicase (circular rep-encoding single-stranded, CRESS) (Genomoviridae, Circoviridae e Smacoviridae). Doze genomas completos de parvovírus bovino 2 e 3, bosavírus, hokovírus bovino e poliomavírus bovino 1 foram recuperados. Além disso, foram detectadas sequências relacionadas à crAssphage, um bacteriófago associado a contaminação fecal humana. Portanto, o estudo ilustra os agentes virais presentes nos soros de suínos, equinos e bovinos, buscando contribuir para o conhecimento do viroma presente nos soros desses animias e auxiliar no esclarecimento de possíveis causas de doenças de etiologia infecciosa.

Pigs, horses, and cattle have historical economic and social importance. Raising show pigs to participate in agricultural events is a major activity in the Midwest region of the United States. Horses are used for leisure, sport, hippotherapy and traction force in rural work. Cattle play an essential role in the meat and milk industry. In addition, horses and cattle are sources of serum, a biological product used in research and for the manufacture of vaccines. Thus, knowledge of the health status of pigs, horses and cattle is a strategic point for the molecular epidemiology of viral agents that cause economic damage to animal health. The limited knowledge of the viral community present in the serum of these animals makes it difficult to clarify the possible causes of diseases of infectious etiology. The use of high-throughput sequencing (HTS) has allowed the detection of viral agents in biological samples of many animal species. However, the sera from show pigs, and batches of commercial equine and bovine sera from different countries still need to be investigated for the presence of adventitious viruses through viral metagenomics. In this sense, the present study aims to expand the knowledge about the diversity of the sera virome of these animals using the HTS. In Chapter 1, 400 swine serum samples were analyzed, divided into two pools of 200 samples each. Genome sequences were obtained from the Arteriviridae, Circoviridae, Flaviviridae, Herpesviridae, Parvoviridae and Retroviridae families. Twenty-three viral species were detected, including the first porcine bufavirus in the United States. As well as the porcine reproductive and respiratory syndrome virus, porcine atypical pestivirus and porcine circovirus. In addition, 17 complete genomes were retrieved and the first two ungulate bocaparvovirus 3 from the United States. In Chapter 2, five batches of commercial equine sera originating in New Zealand (three batches), Brazil and the United States (one batch each) were investigated. In these sera, genomic sequences of the Flaviviridae, Herpesviridae and Parvoviridae families were detected. In particular, equine hepacivirus and pegivirus were the most frequent. In Chapter 3, seven batches of commercial bovine sera from New Zealand (two batches), Mexico (one batch) and the United States (four batches) were sequenced. Bovine sera showed genomes of the Adenoviridae, Flaviviridae, Parvoviridae, Picornaviridae, Pneumoviridae, Polyomaviridae, Poxviridae, Reoviridae, Retroviridae and circular Rep-encoding single-stranded (CRESS) DNA virus (Genomoviridae, Circoviridae e Smacoviridae). Twelve complete genomes of bovine parvovirus 2 and 3, bosavirus, bovine hokovirus and bovine polyomavirus 1 were recovered. Furthermore, sequences related to crAssphage, a bacteriophage associated with human fecal contamination, were detected. Therefore, the study illustrates the viral agents present in the pigs, horses, and cattle sera, seeking to contribute to the knowledge of the virome present in these animals sera and to help clarify possible causes of infectious etiology diseases.

IDENTIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE PARVOVÍRUS CANINO, FELINO E SUÍNO EM AMOSTRAS AMBIENTAIS, BACIA HIDROGRÁFICA DO RIO DOS SINOS, RIO GRANDE DO SUL

Matrizes de água superficiais e subterrâneas estão propensas a alterações em suas características físicas, químicas e biológicas, devido ao aporte de substâncias oriundas de atividades antrópicas, industriais e da pecuária. Os vírus pertencentes à família Parvoviridae são vírus pequenos e sem envelope o que confere resistência ambiental possuem como genoma uma fita simples de DNA, o qual apresenta taxas de mutações semelhantes aos vírus com genoma de RNA. Os parvovírus de interesse veterinário são classificados na subfamília Parvovirinae do gênero Protoparvovirus, recentemente denominado Protoparvovirus Ungulado 1 (Porcine parvovirus type 1/PPV-1) e o parvovírus de importância clínica em cães e gatos Carnivore protoparvovirus 1 (CPV e FPV). Estes vírus são responsáveis por síndromes reprodutivas nos suínos; e em cães enterite hemorrágica grave e nos felinos leucopenia severa, vômitos e diarreia; e são transmitidos entre hospedeiros infectados através da via oral-fecal. A partir disso, o objetivo do presente trabalho foi detectar a presença do PPV-1, CPV e FPV em amostras de água coletadas na região da Bacia Hidrográfica do Rio dos Sinos (BHRS), Rio Grande do Sul. Inicialmente a padronização da polymerase chain reaction (PCR) para detecção destas espécies foi realizada. O controle positivo usado para detecção do DNA viral do PPV-1 e do CPV/FPV foi extraído da cepa caracterizada 27a e da vacina Vanguard HTLP5/CV, respectivamente. Os primers utilizados para a amplificação genômica tinham como alvo o gene da VP2 do CPV/FPV e PPV-1. O amplicon resultante da PCR para o CPV/FPV foi de 583 pares de base (bp) e para PPV 661bp. Após a padronização, 183 amostras de águas coletadas entre o período de 2015 a 2017 foram analisadas, sendo um total de 124 de águas superficiais e subterrâneas e 59 de águas recreacionais. A extração das amostras foi realizada utilizando o Kit Mini Spin Plus (BioPur®) e submetida à PCR. Todas as amostras foram negativas para CPV e FPV, e para PPV-1 uma amostra proveniente de água subterrânea (poço) foi positiva, sendo purificada e submetida ao sequenciamento. A partir do resultado do sequenciamento da amostra positiva para PPV-1, observou-se 99,7 % de identidade coma cepa 27A. A baixa detecção do PPV-1 e a ausência de CPV e FPV nas amostras analisadas podem estar atribuídas a fatores como: viabilidade viral, inibidores (matéria orgânica) e sensibilidade da técnica, esta é a primeira detecção do genoma do PPV em amostras de água subterrâneas descritas no Brasil. Estes achados indicam que uma avaliação contínua e mais detalhada da presença de parvovírus no ambiente é de suma importância, pois permitirá avaliar o real potencial de contaminação e disseminação dos parvovírus através dos recursos hídricos.

Surface and groundwater matrices are prone to changes in their physical, chemical and biological characteristics, due to the input of substances from anthropic, industrial and livestock activities. Viruses belonging to the Parvoviridae family are small, non-enveloped viruses - which confer environmental resistance - and have a single strand of DNA as their genome, which has mutation rates similar to viruses with RNA genomes. Parvoviruses of veterinary interest are classified in the subfamily Parvovirinae of the genus Protoparvovirus, recently named Protoparvovirus Ungulate 1 (Porcine parvovirus type 1 / PPV-1) and the clinically important parvovirus in dogs and cats Carnivore protoparvovirus 1 (CPV and FPV). These viruses are responsible for reproductive syndromes in swine; severe hemorrhagic enteritis in dogs and severe leukopenia, vomiting and diarrhea in felines; being transmitted between infected hosts through the oral-fecal route. From this, the objective of the present study was to detect the presence of PPV-1, CPV and FPV in water samples collected in the Rio do Sinos River Basin (BHRS) region, Rio Grande do Sul. Initially the standardization of the polymerase chain reaction (PCR) to detect these species was performed. The positive control used for detection of PPV-1 and CPV / FPV viral DNA was extracted from strain 27a and Vanguard HTLP5 / CV vaccine, respectively. Primers used for genomic amplification targeted the CPV / FPV and PPV-1 VP2 gene. The resulting PCR amplicon for CPV / FPV was 583 base pairs (bp) and for PPV 661bp. After standardization, 183 water samples collected from 2015 to 2017 were analyzed, with a total of 124 surface and groundwater and 59 recreational waters. Sample extraction was performed using the Mini Spin Plus Kit (BioPur®) and submitted to PCR. All samples were negative for CPV and FPV, and for PPV-1 a sample from groundwater (well) was positive, being purified and subjected to sequencing. From the result of the sequencing of the PPV-1 positive sample, 99.7% identity with strain 27A was observed. The low detection of PPV-1 and the absence of CPV and FPV in the analyzed samples may be attributed to factors such as viral viability, inhibitors (organic matter) and sensitivity of the technique. This is the first detection of PPV genome in water samples described in Brazil. These findings indicate that a continuous and more detailed assessment of the presence of parvoviruses in the environment is of paramount importance, as it will allow to assess the real potential of parvovirus contamination and dissemination through water resources.

DETECÇÃO MOLECULAR DE PARVOVÍRUS SUÍNO, CIRCOVÍRUS SUÍNO TIPO 2 E 3, E Leptospira sp. EM FETOS SUÍNOS MUMIFICADOS NA REGIÃO SUL DO BRASIL

A suinocultura representa uma atividade com grande impacto nacional, contudo alguns pontos ainda carecem melhorias, dentre estes, as questões reprodutivas. As causas das perdas fetais, incluindo mumificação, podem ser diversas, incluindo causas infecciosas. Portanto, os objetivos deste estudo foram identificar a presença de Parvovírus suíno, Circovírus suíno tipo 2 e 3 e de Leptospira patogênica em fetos suínos mumificados no sul do Brasil, estimar a idade da perda gestacional e determinar se há maior ocorrência de mumificados de acordo com a ordem de parto. As amostras provieram de granjas produtoras de leitões com taxas de mumificação fetal 2,5%. Os mumificados foram pesados, medidos e necropsiados, coletando-se fragmentos de pulmão, rim, fígado e coração. Os resultados das PCRs das 308 amostras foram classificados de acordo com a região de origem, onde Santa Catarina, Paraná e Rio Grande do Sul totalizaram 87 (28,25%), 89 (28,9%) e 132 (42,86%) mumificados, respectivamente. A coinfecção foi observada na maioria das amostras, sendo o PCV3 o principal agente encontrado: 298 (96,75%) amostras. Houve maior incidência de perdas gestacionais entre 50 e 60 dias de gestação (85; 27,6%) e entre 60 e 70 dias (83; 26,9%), e a ordem de parto não demonstrou relação significativa com a ocorrência de mumificação fetal. Estas descobertas podem elucidar as altas taxas de mumificados no sul do Brasil devido à alta prevalência de PCV3 e coinfecções. Além disso, a alta positividade do PCV2 sugere-se uma melhor investigação, podendo resultar em uma mudança nos protocolos vacinais existentes.

Pig farming represents an activity that has a great domestic impact, however, there is still need for improvement in some areas, one of which is reproduction. The causes of fetal losses, including mummification, may be numerous, comprising infectious causes. Therefore, the objectives of this study were to identify the presence of porcine Parvovirus, porcine Circovirus type 2 and 3, and pathogenic Leptospira in mummified swine fetuses in southern Brazil, estimate the gestational age when pregnancy loss occurred and determine whether there is a higher occurrence of mummified swine fetuses according to birth order. The samples were collected at commercial pig farms with fetal mummification rates 2.5%. The mummified swine fetuses were weighed, measured and necropsied, and fragments of the lungs, kidneys, livers and hearts were extracted. Results of PCR from 308 samples were classified according to the region of origin, in which Santa Catarina, Paraná and Rio Grande do Sul totalized 87 (28.25%), 89 (28.9%) and 132 (42.86%) mummified swine fetuses, respectively. Coinfection was observed in most cases and PCV3 was the main agent, found in 298 (96.75%) samples. There was a higher incidence of fetal mummification between 50 and 60 days (85; 27.6%) and between 60 and 70 days of gestation (83; 26.9%) and the birth order did not show a significant relation with the occurrence of gestational loss. These findings can elucidate the high rates of mummified swine fetuses in southern Brazil because to the high prevalence of PCV3 and co-infections. In addition, the high positivity of PCV2 suggests a better investigation and may result in a change in existing vaccine protocols.

Principais causas de problemas reprodutivos em porcas / Main causes of reproduction disorders in sows

Esta revisão de literatura visa abordar os principais problemas reprodutivos dentro de uma granja suína. O aborto pode ser categorizado em dois tipos: oriundo de causas infecciosas e oriundo de causas não infecciosas. O percentual de aborto aceitável na suinocultura tecnificada encontra-se entre 1 a 1,5%, entretanto, alguns estudos relatam taxa um pouco maiores em alguns rebanhos suínos. Existem diversos fatores predisponentes, tais como abortos sazonais, stress calórico e ambiental, baixo nível de higiene, deficiências nutricionais, entre outros. Entre as causas infecciosas, podemos destacar: doença de Aujeszky, parvovirose, leptospirose, circovirose, peste suína clássica, brucelose e PRRS. Observando todos esses fatores de influência no sucesso reprodutivo de uma granja, devemos sempre estar atentos a suas causas, de modo a prevenir sua ocorrência. (AU)

The literature review focused on the main reproductive disorders in pig herds, Abortion are general divided into two categories: abortions caused by infectious agents and caused by non-infectious agents. The acceptable rate of abortion in intensive pig farming is between 1 and 1,5%, however, studies shows higher rates are common in breeding farms. Several predisponent factors such as: seasonal abortion, caloric and environmental stress, sunburns, low level of hygiene, nutritional deficiency, and others, help to raise those rates. Among the infectious agents, which can cause abortion, there are Aujeszky disease virus, parvovirus, leptospirosis, circovirus, classic swine fever virus, brucellosis, PRRS virus and others. Looking through all those factors that have broad influence on the reproductive success of a pig herd, we it is recommended always being aware of the causes so it is possible to prevent them. (AU)

Principais causas de problemas reprodutivos em porcas / Main causes of reproduction disorders in sows

Esta revisão de literatura visa abordar os principais problemas reprodutivos dentro de uma granja suína. O aborto pode ser categorizado em dois tipos: oriundo de causas infecciosas e oriundo de causas não infecciosas. O percentual de aborto aceitável na suinocultura tecnificada encontra-se entre 1 a 1,5%, entretanto, alguns estudos relatam taxa um pouco maiores em alguns rebanhos suínos. Existem diversos fatores predisponentes, tais como abortos sazonais, stress calórico e ambiental, baixo nível de higiene, deficiências nutricionais, entre outros. Entre as causas infecciosas, podemos destacar: doença de Aujeszky, parvovirose, leptospirose, circovirose, peste suína clássica, brucelose e PRRS. Observando todos esses fatores de influência no sucesso reprodutivo de uma granja, devemos sempre estar atentos a suas causas, de modo a prevenir sua ocorrência.

The literature review focused on the main reproductive disorders in pig herds, Abortion are general divided into two categories: abortions caused by infectious agents and caused by non-infectious agents. The acceptable rate of abortion in intensive pig farming is between 1 and 1,5%, however, studies shows higher rates are common in breeding farms. Several predisponent factors such as: seasonal abortion, caloric and environmental stress, sunburns, low level of hygiene, nutritional deficiency, and others, help to raise those rates. Among the infectious agents, which can cause abortion, there are Aujeszky disease virus, parvovirus, leptospirosis, circovirus, classic swine fever virus, brucellosis, PRRS virus and others. Looking through all those factors that have broad influence on the reproductive success of a pig herd, we it is recommended always being aware of the causes so it is possible to prevent them.

Detecção de patógenos de suínos em javalis (Sus scrofa) de vida livre no Rio Grande do Sul

A presença de suídeos asselvajados, bem como seu rápido crescimento populacional e dispersão no Brasil é motivo de preocupação devido a seu impacto negativo na natureza. Esses animais têm sido considerados potenciais reservatórios de patógenos e podem estar relacionados à disseminação e manutenção desses agentes para outras espécies animais, incluindo seres humanos. O objetivo deste estudo foi testar a hipótese de que javalis de vida livre são portadores de patógenos de importância para a suinocultura e investigar os fatores de risco associados à ocorrência dos mesmos. Para isso, foram analisadas amostras de tecidos de javalis para identificarpatógenos bacterianos: Actinobacillus pleuropneumoniae, Haemophilus parasuis e Mycoplasma hyopneumoniae; patógenos virais: Circovírus Suíno Tipo 2(PCV2),Circovírus Suíno Tipo 3 (PCV3), Protoparvovírus de ungulados 1 (antigo Parvovírus suíno UPV), Torque teno Susvirus suíno 1a e 1b (TTSuV1a e TTSuV1b); e um patógeno parasitário: Metastrongylus spp. Foi realizada reação em cadeia de polimerase (PCR) em tempo real de 79 amostras de tecido pulmonar para os patógenos bacterianos, pools de linfonodos de 80 animais para os patógenos virais, e a avaliação histológica de 45 lâminas de tecido pulmonar para o patógeno parasitário. Dessas avaliações, 1,27% das amostras foram positivas para A. pleuropneumoniae, 3,80% para H. parasuis, 0,0% para M. hyopneumoniae, 2,50% para PCV2, 36,25% para PCV3, 8,75% para UPV1, 53,75% para TTSuV1a, 5% para TTSuV1b e 60% para Metastrongylusspp.Para avaliação dos fatores de risco foi utilizada uma análise logística univariada entre as variáveis: sexo, peso, idade, local de caça, estação do ano e positividade para patógenos descritos. As variáveis com P<0,2 nesta análise foram selecionadas pararegressão logística multivariada, na qual variáveis com P<0,05 foram consideradas fatores de risco. O fator de risco para ocorrência deH. parasuis foi o local de caça; para PCV3, o fator de riscofoi idade (adultos) e o sexo (fêmeas) foi fator de proteção; paraUPV1, foram fatores de risco a idade (jovem), o local de caça e maior peso; para TTSuV1aa estação do ano (primavera) foi fator de proteção; para TTSuV1b o menor peso foi fator de risco e paraMetastrongylusspp.a idade adulta fator de proteção. Os dados deste estudo evidenciam a presença dos patógenos circulando nos javalis de vida livre no Rio Grande do Sul e indicam a possibilidade desses animais servirem de reservatório tendo o risco de infectar outros animais.

The presence of wild boars as well as their rapid population growth and dispersion in Brazil is cause for concern due to their negative impact on nature. These animals have been considered potential reservoirs of pathogens and may be related to the dissemination and maintenance of these agents to other animal species, including humans. The objective of this study was to test the hypothesis that free-living wild boars are carriersof pathogens important for pig production and to investigate the risk factors associated to their occurrence. For this, wild boar tissue samples were analyzed to identify bacterial pathogens: Actinobacillus pleuropneumoniae, Haemophilus parasuis and Mycoplasma hyopneumoniae; viral pathogens: Swine Circovirus Type 2 (PCV2), Swine Circovirus Type 3 (PCV3), Protoparvovírus of ungulates 1 (formerly Porcine Parvovirus - UPV), Torque tenoSusvirus 1a and 1b (TTSuV1a and TTSuV1b); and a parasitic pathogen: Metastrongylus spp.. Real-time polymerase chain reaction (PCR) was performed in 79 lung tissue samples for bacterial pathogens detection; lymph nodes pools of 80 animals for viral pathogens; and histological evaluation of 45 lung tissue for the parasite detection. From these evaluations, 1.27% of the samples were positive for A. pleuropneumoniae, 3.80% for H. parasuis, 0.0% for M. hyopneumoniae, 2.50% for PCV2, 36.25% for PCV3, 8.75% for UPV1, 53.75% for TTSuV1a, 5% for TTSuV1b and 60% for Metastrongylus spp.. To evaluate the risk factors, univariate logistic analysis was used between the variables: sex, weight, age, hunting location, season and positivity for described pathogens. The variables with P <0.2 in this analysis were selected for multivariate logistic regression, in which variables with P <0.05 were considered risk factors. The risk factor for H. parasuis occurrence was the hunting site; for PCV3, the risk factor was age (adults) and sex (females) was a protection factor; for UPV1, age (young), the place of hunting and greater weight were risk factors; for TTSuV1a the season (spring) was protective factor; for TTSuV1b the lowest weight was a risk factor and for Metastrongylus spp. the adult age was a protection factor.The data of this study evidence the presence of pathogens important for swine industry circulating in wild boars in Rio Grande do Sul and indicate the possibility of these animals to serve as reservoirs with the risk of infecting other animals.

Interstitial nephritis of slaughtered pigs in the State of Mato Grosso, Brazil / Nefrite intersticial em suínos abatidos no Estado de Mato Grosso

This study evaluated histological lesions in kidney samples from pigs with nephritis in two slaughterhouses in the State of Mato Grosso, Brazil. Four hundred samples were subjected to histology, anti-porcine circovirus type 2 (PCV2) immunohistochemistry (IHC), anti-Leptospira sp. immunofluorescence (IF), and polymerase chain reaction (PCR) for PCV2, porcine parvovirus (PPV), and Torque teno virus type 1 and 2 (TTV1, TTV2) detection. Histological lesions were found in 81% of the samples, and mononuclear interstitial nephritis was the most frequent lesion (77.50%). A follicular pattern was observed in 40.97% of the interstitial nephritis lesions. PCV2, PPV, TTV1, and TTV2 were identified in the kidneys by PCR in 27.25%, 28.50%, 94%, and 87.5% of the samples, respectively. Leptospira sp. was not detected through IF. Infection by PCV2 (PCR) and the presence of histological lesions (P=0.008) and giant cells (P=0.0016) were significantly associated. An association was observed between the TTV2-TTV1 co-infection (P<0.0001) and the risk for pathogenesis. These findings indicated that PCV2, PPV, TTV1, and TTV2 were widely distributed among pigs in the local farms and that the presence of these agents should be considered in the differential diagnosis of kidneys with interstitial nephritis in pigs.(AU)

O propósito desse estudo foi avaliar as lesões histológicas observadas em rins condenados por nefrite pelo Serviço de Inspeção Federal, em dois frigoríficos de Mato Grosso, Brasil. Foram coletados 400 rins condenados por nefrite e submetidos aos exames de histologia, imuno-histoquímica (IHC) para Circovirus suíno Tipo 2 (PCV2), imunofluorescência direta (IF) para Leptospira sp. e reação em cadeia pela polimerase (PCR) para detecção de PCV2, Parvovirus suíno (PPV) e Torque teno vírus Tipo 1 e 2 (TTV1 e TTV2). Foram observadas lesões histológicas em 81% das amostras, sendo nefrite intersticial mononuclear a mais freqüente (77,50%). Das lesões de nefrite intersticial encontradas, 40,97% apresentaram padrão folicular. Através da PCR foi observada ampla distribuição dos agentes (PCV2, PPV, TTV1 e TTV2) nas propriedades e municípios, com ocorrência de 27,25%, 28,50%, 94% e 87,50%, respectivamente. Leptospira sp. não foi detectada através da IF. Houve associação significativa da infecção do PCV2 com presença de lesão histológica (P=0,008) e de células gigantes (P=0,0016). Também houve associação entre a co-infecção TTV2 e TTV1 (P<0,0001). Esses achados indicam que os vírus PCV2, PPV, TTV1 e TTV2 devem ser considerados no diagnóstico diferencial de rins com nefrite intersticial em suínos.(AU)

GENOMAS DE VÍRUS DE DNA DE FITA SIMPLES DETECTADOS EM SOROS DE SUÍNOS COM SÍNDROME MULTISSISTÊMICA DO DEFINHAMENTO DO SUÍNO ATRAVÉS DE METAGENÔMICA

As doenças associadas ao circovírus suíno (DACS) causam impacto econômico negativo nos sistemas de criação de suínos no mundo todo. As perdas incluem tratamento da doença, mortalidade, bem como diminuição no desempenho dos animais. Uma das manifestações mais relevantes das DACS é a síndrome multissistêmica do definhamento dos suínos (SMDS). O principal agente patogênico na causa da SMDS é o circovírus suíno tipo 2 (PCV2), no entanto, estudos observacionais e experimentais demonstraram que outros agentes estão envolvidos na patogênese e manifestação dos sinais clínicos. O sequenciamento de alto desempenho aliado a metagenômica são ferramentas que tornam possível a identificação da microbiota total de uma determinada amostra, independentemente de cultivo dos microrganismos. Visando contribuir para o conhecimento dos possíveis vírus envolvidos na SMDS, o presente trabalho realizou o sequenciamento genético de alto desempenho de soros de suínos e posterior análise do metagenoma resultante. Foram utilizadas amostras de soro coletadas em 2008, de 16 suínos com sinais clínicos da SMDS, entre 80 e 100 dias de idade, em uma granja no interior do Rio Grande do Sul. Os dados revelaram sequências virais de PCV2, parvovírus suíno tipo 1 a 6 (PPV1-6), torque teno vírus de suínos (TTSuV) tipo 1b, k2a e k2b e vírus de DNA circular de fita simples codificador de proteína associada a replicação (CRESS). A ocorrência de PCV2, PPV1-5 e TTSuV já foi descrita em suínos com SMDS, portanto este estudo reforça resultados anteriores. O PPV6 foi recentemente descrito na China, Europa e Estados Unidos, e os estudos não relacionaram o vírus com nenhuma doença específica de suínos. Os CRESS já foram identificados em todos os continentes, em vários tipos de amostras, incluindo fezes de suínos, mas sem nenhuma conexão com doenças de animais. Portanto, este é o primeiro relato de PPV6 e CRESS em suínos apresentando sinais de SMDS. Porém estudos posteriores são necessários para poder atribuir relação entre PPV6 e CRESS no desenvolvimento da SMDS.

Porcine circovirus associated disease (PCVAD) is one of the causes of negative economic impact on pig farming systems described worldwide. Losses include expenditures with treatment, increased mortality rates, and decreased productivity. One of the most relevant manifestations of PCVAD is the post-weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). The main pathogen present in PMWS is porcine circovirus type 2 (PCV2). However, observational and experimental studies have shown that other agents may be involved in the pathogenesis and clinical manifestation. High-throughput sequencing combined with metagenomics analyses make it possible to identify the total microbiota in a given sample, regardless of microorganism culture. In order to contribute to the knowledge of the viruses involved in PMWS, the present study carried out the high-throughput sequencing of swine sera and subsequent analysis of the resulting metagenome. Sixteen serum samples collected in 2008 on a farm in Rio Grande do Sul, from 80 and 100 days old pigs with clinical signs of PMWS, were examined. Data revealed viral sequences of PCV2, porcine parvovirus type 1 through 6 (PPV1-6), torque teno sus virus (TTSuV) types 1b, k2a and k2b and circular replication-associated protein (Rep) encoding single-stranded (CRESS) DNA viruses. The occurrences of PCV2, PPV1-5 and TTSuV have already been described in pigs with PMWS, so this study reinforces previous results. PPV6 was recently described in China, Europe and the United States, and the studies did not correlate the virus to any specific disease. CRESS DNA viruses have been identified on all continents in various types of samples, including swine feces, but without any connection to animal diseases. The present study is the first report of PPV6 and CRESS in pigs presenting PMWS signals. However, further studies are necessary to be able to attribute the relationship between PPV6 and CRESS in the development of SMDS.

Identificação do circovírus suíno tipo 2 e do parvovírus suíno em fetos suínos natimortos e mumificados provenientes de granjas no Brasil / Identification of porcine circovirus type 2 and porcine parvovirus in porcine stillbirths and mummified fetuses from swine farms in Brazil

Investigou-se a presença de sequências genômicas do circovírus suíno tipo 2 (PCV2) e do parvovírus suíno (PPV) em 147 fetos suínos natimortos e mumificados. Estas amostras, provenientes de 39 granjas localizadas em oito estados brasileiros, foram coletadas entre os anos de 2006 e 2008. Utilizaram-se fragmentos de coração e pulmão para extração do DNA total e posterior amplificação de fragmentos correspondentes aos patógenos virais pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). Entre as 147 amostras, 74 (50,3%) foram positivas ao PCV2 enquanto nove amostras (6,2%) apresentaram coinfecção com o PCV2 e o PPV. Nenhuma amostra foi positiva apenas para PPV. Entre as 39 granjas estudadas, 21 (53,8%) apresentaram fetos positivos ao PCV2, sendo detectada coinfecção com o PCV2 e o PPV em três (7,7%). Esses resultados indicam que o PCV2 pode ser um importante agente infeccioso causador de morte embrionária e fetal em suínos no Brasil e deve ser incluído na lista de diagnóstico diferencial.

This study investigated the presence of genome sequences of the porcine circovirus type 2 (PCV2) and porcine parvovirus (PPV) in 147 porcine stillbirths and mummified fetuses. These samples, originated from 39 farms located in eight Brazilian states, were collected between 2006 and 2008. Heart and lung fragments were used for extraction of total DNA and later amplification of correspondent fragments of the virus pathogens through polymerase chain reaction (PCR) technique. Out of 147 samples, 74 (50.3%) were positive for PCV2 while nine samples (6.2%) were positive for PCV2 and PPV. None of the samples were positive just for PPV. Out of 39 investigated farms, 21 (53.8%) had fetuses positive for PCV2 while co-infection with PCV2 and PPV was detected in 3 farms (7.7%). These results indicate that PCV2 could be an important infection agent in cases of porcine stillbirths and mummified fetuses in Brazil and must be included at differential diagnostic list.

Identificação do circovírus suíno tipo 2 e do parvovírus suíno em fetos suínos natimortos e mumificados provenientes de granjas no Brasil / Identification of porcine circovirus type 2 and porcine parvovirus in porcine stillbirths and mummified fetuses from swine farms in Brazil

Investigou-se a presença de sequências genômicas do circovírus suíno tipo 2 (PCV2) e do parvovírus suíno (PPV) em 147 fetos suínos natimortos e mumificados. Estas amostras, provenientes de 39 granjas localizadas em oito estados brasileiros, foram coletadas entre os anos de 2006 e 2008. Utilizaram-se fragmentos de coração e pulmão para extração do DNA total e posterior amplificação de fragmentos correspondentes aos patógenos virais pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). Entre as 147 amostras, 74 (50,3%) foram positivas ao PCV2 enquanto nove amostras (6,2%) apresentaram coinfecção com o PCV2 e o PPV. Nenhuma amostra foi positiva apenas para PPV. Entre as 39 granjas estudadas, 21 (53,8%) apresentaram fetos positivos ao PCV2, sendo detectada coinfecção com o PCV2 e o PPV em três (7,7%). Esses resultados indicam que o PCV2 pode ser um importante agente infeccioso causador de morte embrionária e fetal em suínos no Brasil e deve ser incluído na lista de diagnóstico diferencial.(AU)

This study investigated the presence of genome sequences of the porcine circovirus type 2 (PCV2) and porcine parvovirus (PPV) in 147 porcine stillbirths and mummified fetuses. These samples, originated from 39 farms located in eight Brazilian states, were collected between 2006 and 2008. Heart and lung fragments were used for extraction of total DNA and later amplification of correspondent fragments of the virus pathogens through polymerase chain reaction (PCR) technique. Out of 147 samples, 74 (50.3%) were positive for PCV2 while nine samples (6.2%) were positive for PCV2 and PPV. None of the samples were positive just for PPV. Out of 39 investigated farms, 21 (53.8%) had fetuses positive for PCV2 while co-infection with PCV2 and PPV was detected in 3 farms (7.7%). These results indicate that PCV2 could be an important infection agent in cases of porcine stillbirths and mummified fetuses in Brazil and must be included at differential diagnostic list.(AU)

Ocorrência de infecção por parvovírus suíno e gastrenterite transmissível em suínos, criados de forma extensiva, em Goiás / Occurrence of porcine parvoviral infection and transmissible gastroenteritis virus infection in swine from extensive raising systems in the state of Goiás, Brazil

The serological status of porcine parvovirus (PPV) infection and transmissible gastroenteritis virus (TGEV) infection were determined in swine from extensive raising systems in the state of Goiás, Brazil. Ninety-seven serum samples were collected from animals in 12 extensive farms distributed in six cities located nearby Goiânia, GO, and 74 samples were collected from animals in a slaughterhouse in Goiânia, GO. For the PPV-specific antibody detection, the hemaglutination inhibition test (HI) was used; and for TGE antibody detection, the serum neutralization test was performed. Results showed that 25 out of the total 171 (14.4%) analyzed sera were positive for PPV antibodies, and the HI titers varied between 256 to 4,096. None of the 136 serum samples analyzed for TGEV was positive. This is probably the first study that detected PPV and TGEV-specific antibodies in swine herd in the state of Goiás. Data suggest that PPV but not TGEV circulated between and among this population of swine in that state.(AU)

Identification of Porcine parvovirus from wild boars by partial sequencing of the VP-2 coding gene / Identificação de parvovírus suíno em javalis a partir do sequenciamento parcial do gene VP-2

Este estudo descreve a detecção e a identificação de DNA de parvovírus suíno (PVS) em amostras de órgãos de dois javalis, por PCR e sequenciamento direcionado ao gene VP-2. Pools de órgãos (baço, rins, fígado, linfonodos e tonsila) de três javalis adultos e assintomáticos de Paraguaçu Paulista, SP, criados com propósitos comerciais, foram submetidos à detecção de PVS, resultando em duas amostras positivas após reações de nested-PCR direcionadas aos genes NS-1 e VP-2. Os fragmentos parciais de VP-2 foram sequenciados e comparados a sequências homólogas de cepas NADL-2 e Kresse, demonstrando identidade nucleotídica de 100%. Com relação a 29 cepas de PVS previamente isoladas no Brasil, o grau de identidade nucleotídica variou de 99 a 100% (uma a três substituições de nucleotídeos). Estes resultados demonstram, pela primeira vez, a detecção direta por PCR de parvovírus suíno em javalis, confirmada por análise de sequenciamento genético.(AU)

Intestinal lesions in pigs affected with postweaning multisystemic wasting syndrome / Lesões entéricas em suínos afetados por síndrome multissistêmica do definhamento dos suínos

Samples of mesenteric lymph nodes and intestines from 79 unthrifty 3- to 5-month-old postweaning pigs, confirmed as naturally affected with postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS), were studied. Pigs originated from 12 farms in southern Brazil and were selected on the basis of clinical signs and/or gross lesions suggestive of enteric disorder. Lymphohistiocytic infiltrates of varying intensity were associated with anti-porcine circovirus type 2 (anti-PCV2) immunostaining (IS) in samples of intestines and mesenteric lymph nodes from all pigs. Although most findings were similar to those described in PCV2-associated enteritis, anti-PCV2 IS in association with depletion of the goblet cell mucin stores (24 pigs), diffuse ileal villous atrophy and fusion (18 pigs), and dilatation of the lymphatic vessels (11 pigs) combined or not with lymphangitis were also observed. PCV2 antigen was immunohistochemically demonstrated in the cytoplasm and nuclei from intralesional epithelial cells, histiocytes, and endothelial-like cells in intestinal tissues. Together these findings imply an association with PCV2. The presence of co-infections by Lawsonia intracellularis, Brachyspira spp., Mycobacterium spp., Salmonella spp., rotavirus, parvovirus, coronavirus and enteric calicivirus with PCV2 in the intestinal lesions was investigated.(AU)

Amostras de linfonodos mesentéricos e intestinos de 79 leitões desmamados refugos, entre 3 e 5 meses de idade e confirmados como naturalmente afetados pela síndrome multissistêmica do definhamento foram estudadas. Os suínos eram oriundos de 12 criações no sul do país e foram selecionados em função dos sinais clínicos e/ou lesões macroscópicas sugestivos de doença entérica. Infiltrados linfoistiocíticos de intensidades variáveis foram associados com marcação positiva anti-circovirus suíno tipo 2 (anti-PCV2) em amostras de intestinos e linfonodos mesentéricos de todos os 79 animais. Embora a maioria dos achados fossem semelhantes aos descritos em enterite associada com PCV2, marcação imuno-histoquímica anti-PCV2 foi associada com depleção de células caliciformes (24 suínos), atrofia e fusão de vilosidades do íleo (18 suínos) e dilatação de vasos linfáticos (11 suínos) combinada ou não com linfangite. Antígenos de PCV2 foram demonstrados por imuno-histoquímica no citoplasma e núcleo de células epiteliais intralesionais, histiócitos e células tipo endotelial em tecidos intestinais. Em conjunto, esses resultados sugerem que as lesões estavam associadas com PCV2. A presença de co-infecções por Lawsonia intracellularis, Brachyspira spp., Mycobacterium spp., Salmonella spp., rotavírus, parvovírus, coronavírus e calicivírus entérico com PCV2 nas lesões intestinais foi investigada.(AU)

Co-infection by porcine circovirus type 2 and porcine parvovirus in aborted fetuses and stillborn piglets in southern Brazil / Co-infecção por circovírus suíno tipo 2 e parvo-vírus suíno em fetos abortados e natimortos suínos no Sul do Brasil

Porcine circovirus types 1 and 2 (PCV1, PCV2) and porcine parvovirus (PPV) are widespread in pig populations around the world. Nevertheless, only PCV2 has been associated with different clinical syndromes, thus representing a major problem to the pig industry. The association of cases of swine abortions and stillborns with PCV1 and PCV2 and PPV was studied retrospectively (2005-2007). Additional pathogens were also investigated in lesioned fetuses. The studied litters included stillborn piglets and several mummified fetuses of varied sizes. Ventricular dilatation, myocardial pale areas, and mesocolic edema were the gross lesions. Escherichia coli was detected as co-infecting with PCV2 the cases in which mesocolic edema was seen. Microscopic lesions included non-suppurative myocarditis, myocardial necrosis and fibrosis, mineralization foci and intranuclear inclusion bodies in cardiomyocytes, and interstitial mononuclear pneumonia. Samples from 7 (5.78 per cent) of 121 aborted fetuses and stillborn piglets had lesions consistent with a viral cause and showed both positive anti-PCV2 immunostaining as well as PCV2-PCR. In samples from 3 (2.47 per cent) of these 7 fetuses, co-infection with PPV was confirmed by Nested-PCR. Both viruses were detected in fetuses at different stages of gestation. Viral antigens of PCV2 were detected by immunohistochemistry mainly in macrophages and myocytes. PCV1 individually was not detected in any of these affected fetuses, but it was associated with PCV2 and/or PPV in some of them. These findings indicate that PCV2 alone or in association with PPV should be kept in mind when investigating causes of infectious abortion in pigs in Brazil.(AU)

Estudou-se retrospectivamente (2005-2007) a associação de casos de abortos e natimortos suínos com infecções por circovírus suíno (PCV) tipos 1 e 2 e parvovírus suíno (PPV). Outros agentes patogênicos foram pesquisados em amostras de fetos com lesões. O estudo incluiu natimortos e fetos mumificados de tamanhos variados. Dilatação ventricular, áreas pálidas miocárdicas e edema de mesocólon foram as lesões macroscópicas observadas. Escherichia coli co-infectou com PCV2 as amostras dos casos com edema de mesocólon. Lesões microscópicas incluíram miocardite não supurativa, necrose e fibrose miocárdicas, focos de mineralização e corpúsculos de inclusão em cardiomiócitos e pneumonia intersticial mononuclear. Entre os 121 fetos suínos abortados ou natimortos analisados, sete (5,78 por cento) tinham lesões compatíveis com origem viral e foram positivos pelas técnicas de imunoistoquímica e PCR para PCV2. Além disso, três (2.47 por cento) desses sete casos também foram confirmados como co-infectados com PPV através da PCR. Antígenos de PCV2 foram observados principalmente em macrógafos e no interior de miócitos dos fetos suínos abortados e natimortos. PCV2 e PPV foram detectados em diferentes estágios de gestação. PCV1 não foi associado isoladamente com feto ou natimorto afetado, mas estava presente em associação com PCV2 e/ou PPV em alguns desses produtos. Esses achados indicam que a infecção por PCV2, isoladamente ou em associação com PPV, deve ser considerada no diagnóstico de aborto infeccioso suíno no Brasil.(AU)

Coinfecção experimental de circovírus suíno tipo 2 isolado no Brasil e parvovírus suíno em suínos SPF / Experimental coinfection of SPF pigs with porcine circovirus type 2 isolated in Brazil and porcine parvovirus

Avaliou-se a patogenicidade do circovírus suíno tipo 2 (PCV2) isolado no estado de Santa Catarina mediante coinfecção experimental com parvovírus suíno (PPV). Foram utilizados 24 leitões specific pathogen free (SPF) com cinco dias de idade, distribuídos em quatro grupos (G), alojados em salas independentes e inoculados por via intranasal: G1 - controle (n=4); G2 - inoculados com PCV2 (n=7); G3 - inoculados com PPV (n=6); G4 - inoculados com PCV2 e PPV (n=7). Os animais foram monitorados diariamente para avaliação clínica e necropsiados 48 dias após a infecção. As principais lesões anatomopatológicas observadas nos suínos do G2 e G4 foram: aumento do volume dos linfonodos, depleção linfocitária com redução dos folículos linfóides nos órgãos linfocitários e presença de infiltrado eosinofílico nos linfonodos. A técnica de nested-PCR para PCV2 foi utilizada detectando DNA viral em órgãos de todos os animais do G2 e G4. O PCV2 infectou suínos SPF por via intranasal e foi detectado em outros órgãos, com mais lesões histopatológicas e em maior proporção nos animais coinfectados com PPV (G4), quando comparados aos infectados somente com PCV2 (G2).(AU)

The virulence of porcine circovirus type 2 (PCV2) isolated in Santa Catarina State by coinfection with porcine parvovirus (PPV) was investigated. Twenty-four, 5-day-old SPF pigs were distributed into four groups, housed in separate rooms and inoculated by intranasal route: G1 - control (n=4); G2 - inoculated with PCV2 (n=7); G3 - inoculated with PPV (n=6); G4 - inoculated with PCV2 and PPV (n=7). The animals were monitored daily for clinical evaluation and were necropsied 48 days after the infection. The pathological lesions seen in G2 and G4 pigs were: enlargement of lymph nodes, mild to moderate lymphoid cell depletion, affecting lymphoid follicles in lymphoid organs and presence of infiltration by eosinophils in lymph nodes. PCV2 DNA was detected by a nested-PCR in all pigs of G2 and G4. These findings confirmed that pigs were successfully infected intranasally with PCV2. The presence of PCV2 DNA in tissue samples and the pathological lesions were more evident in pigs infected with both PCV2 and PPV than in pigs infected with PCV2 alone.(AU)