Microscopic sperm head damage and abnormalities as heat stress indicators in Australian Merino rams (Ovis aries) in Northern Patagonia, Argentina / Danos e anormalidades microscópicas das cabeças espermáticas como indicadores de estresse por calor em carneiros Merino Australiano (Ovis aries) da Patagônia Norte, Argentina

In Northern Patagonia, the mating season starts on March 15th, when rams are submitted to summer temperatures. Exposure of rams to heat stress increases the prevalence of microscopic damage to spermatozoa, morphological abnormalities, and reductions in fertility. This study assesses the adaptive capabilities of six unshorn and six shorn Australian Merino rams, half of which were treated in a heat chamber for eight hours for five days, gradually reaching a temperature of up to 40 °C. Microscopic damage, abnormalities and ultramicroscopic alterations of the plasma membrane and the acrosome of sperm head were analysed. There were significant differences in the percentage of tailless spermatozoa and proximal cytoplasmic droplets between post-treatment periods. Temperature primarily affected the shorn rams and the sperm heads during spermiogenesis. Submicroscopic alterations were observed when the plasma membrane was present in the anterior segment. These alterations can be intact, waved, or dilated. When the plasma membrane was absent, the acrosome might be intact, dilated, and waved. In addition, the outer acrosomal membrane may completely lose its contents or have a nude nucleus. The plasma membrane assumes a waved shape as a result of the effect of temperature on the epididymis. According to this study, the tailless head, proximal cytoplasmic droplets, and the ultramicroscopic categories studied were robust indicators of semen heat stress. After ten weeks, the sperm head recovered its normal shape. Unshorn rams are better adapted to summer heat stress than shorn ones. Microscopy and transmission electron microscopy alterations have been shown to be excellent indicators of thermal stress in Australian Merino rams and may be useful tools to help sheep farmers choose when to begin the mating season, which will vary depending on the environmental conditions of the summer.(AU)

Na Patagônia Norte, os ovinos têm sua estação de acasalamento iniciada em 15 de março, portanto, ficam sujeitos às temperaturas do verão. A exposição de carneiros a estresse térmico aumenta a prevalência de danos microscópicos e anomalias morfológicas nos espermatozoides, que implica uma redução na fertilidade. Este trabalho avaliou a capacidade adaptativa de carneiros Merino Australiano com lã (N = 6) e tosquiados (N = 6): metade ficou ao ar livre e outra metade foi mantida em uma câmara climática por oito horas, durante cinco dias, chegando gradualmente a uma temperatura máxima de 40 °C. Foram analisados danos microscópicos, anormalidades e alterações ultramicroscópicas da membrana plasmática e do acrossoma da cabeça dos espermatozoides. Os resultados microscópicos confirmaram a existência de diferença significativa na porcentagem de espermatozoides sem cauda e com gota citoplasmática proximal, entre os ejaculados pós-tratamento. A temperatura afetou os carneiros tosquiados, principalmente a cabeça de seus espermatozoides, durante a espermatogênese. Alterações submicroscópicas foram observados na membrana plasmática quando ela estava presente no segmento anterior: quando não intacta, ficava ondulada ou dilatada. Quando a membrana plasmática estava ausente, o acrossoma podia se apresentar ondulado ou dilatado. Além disso, sob efeito do calor, a membrana acrossomal externa pode perder completamente seu conteúdo ou apresentar núcleo desnudo. A membrana plasmática assume uma forma ondulada pelo efeito da temperatura no epidídimo. Depois de dez semanas, a cabeça dos espermatozoides recuperou sua forma normal. Como demonstrado neste estudo, a cabeça sem cauda, as gotas citoplasmáticas proximais e as categorias ultramicroscópicas estudadas são indicadores do efeito do estresse térmico no sêmen, e os carneiros com maior cobertura de lã se adaptam melhor ao estresse por calor. Alterações de microscopia e de microscopia eletrônica de transmissão têm se mostrado excelentes indicadores de estresse por calor em carneiros Merino Australiano e podem ser ferramentas úteis para ajudar criadores de ovelhas a escolher quando começar a época de acasalamento, o que irá variar de acordo com as condições ambientais do verão.(AU)

Microscopic sperm head damage and abnormalities as heat stress indicators in Australian Merino rams (Ovis aries) in Northern Patagonia, Argentina / Danos e anormalidades microscópicas das cabeças espermáticas como indicadores de estresse por calor em carneiros Merino Australiano (Ovis aries) da Patagônia Norte, Argentina

In Northern Patagonia, the mating season starts on March 15th, when rams are submitted to summer temperatures. Exposure of rams to heat stress increases the prevalence of microscopic damage to spermatozoa, morphological abnormalities, and reductions in fertility. This study assesses the adaptive capabilities of six unshorn and six shorn Australian Merino rams, half of which were treated in a heat chamber for eight hours for five days, gradually reaching a temperature of up to 40 °C. Microscopic damage, abnormalities and ultramicroscopic alterations of the plasma membrane and the acrosome of sperm head were analysed. There were significant differences in the percentage of tailless spermatozoa and proximal cytoplasmic droplets between post-treatment periods. Temperature primarily affected the shorn rams and the sperm heads during spermiogenesis. Submicroscopic alterations were observed when the plasma membrane was present in the anterior segment. These alterations can be intact, waved, or dilated. When the plasma membrane was absent, the acrosome might be intact, dilated, and waved. In addition, the outer acrosomal membrane may completely lose its contents or have a nude nucleus. The plasma membrane assumes a waved shape as a result of the effect of temperature on the epididymis. According to this study, the tailless head, proximal cytoplasmic droplets, and the ultramicroscopic categories studied were robust indicators of semen heat stress. After ten weeks, the sperm head recovered its normal shape. Unshorn rams are better adapted to summer heat stress than shorn ones. Microscopy and transmission electron microscopy alterations have been shown to be excellent indicators of thermal stress in Australian Merino rams and may be useful tools to help sheep farmers choose when to begin the mating season, which will vary depending on the environmental conditions of the summer.(AU)

Na Patagônia Norte, os ovinos têm sua estação de acasalamento iniciada em 15 de março, portanto, ficam sujeitos às temperaturas do verão. A exposição de carneiros a estresse térmico aumenta a prevalência de danos microscópicos e anomalias morfológicas nos espermatozoides, que implica uma redução na fertilidade. Este trabalho avaliou a capacidade adaptativa de carneiros Merino Australiano com lã (N = 6) e tosquiados (N = 6): metade ficou ao ar livre e outra metade foi mantida em uma câmara climática por oito horas, durante cinco dias, chegando gradualmente a uma temperatura máxima de 40 °C. Foram analisados danos microscópicos, anormalidades e alterações ultramicroscópicas da membrana plasmática e do acrossoma da cabeça dos espermatozoides. Os resultados microscópicos confirmaram a existência de diferença significativa na porcentagem de espermatozoides sem cauda e com gota citoplasmática proximal, entre os ejaculados pós-tratamento. A temperatura afetou os carneiros tosquiados, principalmente a cabeça de seus espermatozoides, durante a espermatogênese. Alterações submicroscópicas foram observados na membrana plasmática quando ela estava presente no segmento anterior: quando não intacta, ficava ondulada ou dilatada. Quando a membrana plasmática estava ausente, o acrossoma podia se apresentar ondulado ou dilatado. Além disso, sob efeito do calor, a membrana acrossomal externa pode perder completamente seu conteúdo ou apresentar núcleo desnudo. A membrana plasmática assume uma forma ondulada pelo efeito da temperatura no epidídimo. Depois de dez semanas, a cabeça dos espermatozoides recuperou sua forma normal. Como demonstrado neste estudo, a cabeça sem cauda, as gotas citoplasmáticas proximais e as categorias ultramicroscópicas estudadas são indicadores do efeito do estresse térmico no sêmen, e os carneiros com maior cobertura de lã se adaptam melhor ao estresse por calor. Alterações de microscopia e de microscopia eletrônica de transmissão têm se mostrado excelentes indicadores de estresse por calor em carneiros Merino Australiano e podem ser ferramentas úteis para ajudar criadores de ovelhas a escolher quando começar a época de acasalamento, o que irá variar de acordo com as condições ambientais do verão.(AU)

Head morphometry and chromatin instability in normal boar spermatozoa and in spermatozoa with cytoplasmic droplets

In boar studs, morphological analyses are used to evaluate sperm quality and there by categorize ejaculates as either approved or rejected. Normally, morphological characteristics correlate with chromatin disorders, but studies to date have only considered the average of abnormalities; cells were not segregated as normal or abnormal. The aim of this study was to assess whether the presence of cytoplasmic droplets was associated with morphometric characteristics and chromatin instability of spermatozoa heads. Morphological analyses were performed on semen from 11 boars using phase contrast microscopy (200 cells per sample). Normal cells were differentiated from those with cytoplasmic droplets and both types were evaluated separately. Photomicrographs were acquired ofnormal spermatozoa (Group NOR, N = 1,207) as well as spermatozoa with proximal and distal cytoplasmic droplets (Group DROP, N = 725). Sperm-head morphometry and chromatin structure were evaluated using the toluidine blue technique. Spermatozoa heads in the DROP group were longer (8.37 ± 0.60 × 8.31 ± 0.53; P = 0.025), narrower (4.16 ± 0.21 × 4.19 ± 0.19; P = 0.03), And more symmetric on the sides (0.973 ± 0.012 × 0.971 ± 0.011; P = 0.007) than were spermatozoa heads of the NOR group. The DROP group also had a greater average ellipticity (0.335 ± 0.034 × 0.329 ± 0.031; P= 0.0004),a greater percentage of decondensed chromatin (2.71 ± 3.87 × 2.28 ± 1.38; P < 0.0008), and a greater chromatin heterogeneity (4.66 ± 1.40 × 4.40 ± 1.42;P < 0.0001). A greater frequency of semen collection results in a shorter period of cell maturation and this probably affected the degree of chromatin condensation and the cytoplasmic droplet migration, with concomitant effect onthe head morphometry measurements.

Head morphometry and chromatin instability in normal boar spermatozoa and in spermatozoa with cytoplasmic droplets

In boar studs, morphological analyses are used to evaluate sperm quality and there by categorize ejaculates as either approved or rejected. Normally, morphological characteristics correlate with chromatin disorders, but studies to date have only considered the average of abnormalities; cells were not segregated as normal or abnormal. The aim of this study was to assess whether the presence of cytoplasmic droplets was associated with morphometric characteristics and chromatin instability of spermatozoa heads. Morphological analyses were performed on semen from 11 boars using phase contrast microscopy (200 cells per sample). Normal cells were differentiated from those with cytoplasmic droplets and both types were evaluated separately. Photomicrographs were acquired ofnormal spermatozoa (Group NOR, N = 1,207) as well as spermatozoa with proximal and distal cytoplasmic droplets (Group DROP, N = 725). Sperm-head morphometry and chromatin structure were evaluated using the toluidine blue technique. Spermatozoa heads in the DROP group were longer (8.37 ± 0.60 × 8.31 ± 0.53; P = 0.025), narrower (4.16 ± 0.21 × 4.19 ± 0.19; P = 0.03), And more symmetric on the sides (0.973 ± 0.012 × 0.971 ± 0.011; P = 0.007) than were spermatozoa heads of the NOR group. The DROP group also had a greater average ellipticity (0.335 ± 0.034 × 0.329 ± 0.031; P= 0.0004),a greater percentage of decondensed chromatin (2.71 ± 3.87 × 2.28 ± 1.38; P < 0.0008), and a greater chromatin heterogeneity (4.66 ± 1.40 × 4.40 ± 1.42;P < 0.0001). A greater frequency of semen collection results in a shorter period of cell maturation and this probably affected the degree of chromatin condensation and the cytoplasmic droplet migration, with concomitant effect onthe head morphometry measurements.(AU)

Physical and morphological characteristics of the first three jets of Pêga jackasses sperm-rich fraction / Características físicas e morfológicas dos três primeiros jatos da fração rica do ejaculado de jumentos da raça Pêga

The first three jets of the sperm-rich fraction of Pêga jackasses were collected and assessed separately. Five fertile Pêga jackasses were used as semen donors and underwent fractionated semen collection, using an open model artificial vagina. The first three jets of the semen were collected separately and assessed for volume, sperm motility, vigor, concentration/mL of semen, and sperm morphology. These characteristics were compared between first, second and third jets and between jackasses. It was observed that the jet volume differed (P<0.05) between jackasses, although it was similar (P>0.05) between first, second and third jets. Sperm motility did not differ (P>0.05) between jets and jackasses. Vigor was similar (P>0.05) between jets of the same jackass, and only the first jet differed (P<0.05) between jackasses. The first, second and third jets of the sperm-rich fraction had decreased sperm concentrations (P<0.05) of 955.56, 725.56 and 280.56x 106 sperm/mL of semen, respectively. Sperm morphology differed between the first three jets only for the incidence of mid-piece defect, higher in the third one (4.26%), compared to the first (3.36%) and second (3.38%) ones. When comparing the morphological characteristics of the sperm-rich fraction between five jackasses, regardless of the jet, there were differences in the percentage of normal sperm, proximal cytoplasmic droplet, mid-piece and head defects.(AU)

Objetivou-se, no presente experimento, caracterizar os três primeiros jatos da fração rica do ejaculado de jumentos da raça Pêga. Para tal, cinco jumentos foram submetidos à coleta fracionada do sêmen, utilizando-se vagina artificial modelo aberta. Os três primeiros jatos da fração rica do ejaculado foram coletados separadamente e avaliados quanto ao volume, à motilidade e ao vigor espermáticos, à concentração espermática/mL de sêmen e à morfologia espermática. Comparações foram realizadas entre jatos e entre jumentos. Observou-se que o volume do jato diferiu (P<0,05) entre os jumentos, embora fosse similar (P>0,05) entre os jatos. A motilidade espermática não diferiu (P>0,05) entre jatos nem entre jumentos. O vigor espermático foi similar (P>0,05) entre os jatos de um mesmo jumento, e apenas o vigor do jato 1 diferiu (P<0,05) entre os jumentos. Independentemente do jumento, a fração rica do ejaculado foi composta por três jatos apresentando concentrações espermáticas decrescentes (P<0,05), com 955,56; 725,56 e 280,56 x 106 espermatozoides/mL de sêmen. A morfologia espermática diferiu entre os três jatos avaliados apenas para a incidência de defeitos de peça intermediária, sendo maior no jato três (4,26%), em relação aos jatos um (3,36%) e dois (3,38%). Comparando-se as características morfológicas do sêmen entre os cinco jumentos avaliados, independentemente do jato, observaram-se diferenças entre os reprodutores quanto ao percentual de espermatozoides normais, com gota citoplasmática proximal, com defeitos de peça intermediária e de cabeça.(AU)

Physical and morphological characteristics of the first three jets of Pêga jackasses sperm-rich fraction / Características físicas e morfológicas dos três primeiros jatos da fração rica do ejaculado de jumentos da raça Pêga

The first three jets of the sperm-rich fraction of Pêga jackasses were collected and assessed separately. Five fertile Pêga jackasses were used as semen donors and underwent fractionated semen collection, using an open model artificial vagina. The first three jets of the semen were collected separately and assessed for volume, sperm motility, vigor, concentration/mL of semen, and sperm morphology. These characteristics were compared between first, second and third jets and between jackasses. It was observed that the jet volume differed (P 0.05) between jackasses, although it was similar (P>0.05) between first, second and third jets. Sperm motility did not differ (P>0.05) between jets and jackasses. Vigor was similar (P>0.05) between jets of the same jackass, and only the first jet differed (P 0.05) between jackasses. The first, second and third jets of the sperm-rich fraction had decreased sperm concentrations (P 0.05) of 955.56, 725.56 and 280.56x 106 sperm/mL of semen, respectively. Sperm morphology differed between the first three jets only for the incidence of mid-piece defect, higher in the third one (4.26%), compared to the first (3.36%) and second (3.38%) ones. When comparing the morphological characteristics of the sperm-rich fraction between five jackasses, regardless of the jet, there were differences in the percentage of normal sperm, proximal cytoplasmic droplet, mid-piece and head defects.(AU)

Objetivou-se, no presente experimento, caracterizar os três primeiros jatos da fração rica do ejaculado de jumentos da raça Pêga. Para tal, cinco jumentos foram submetidos à coleta fracionada do sêmen, utilizando-se vagina artificial modelo aberta. Os três primeiros jatos da fração rica do ejaculado foram coletados separadamente e avaliados quanto ao volume, à motilidade e ao vigor espermáticos, à concentração espermática/mL de sêmen e à morfologia espermática. Comparações foram realizadas entre jatos e entre jumentos. Observou-se que o volume do jato diferiu (P 0,05) entre os jumentos, embora fosse similar (P>0,05) entre os jatos. A motilidade espermática não diferiu (P>0,05) entre jatos nem entre jumentos. O vigor espermático foi similar (P>0,05) entre os jatos de um mesmo jumento, e apenas o vigor do jato 1 diferiu (P 0,05) entre os jumentos. Independentemente do jumento, a fração rica do ejaculado foi composta por três jatos apresentando concentrações espermáticas decrescentes (P 0,05), com 955,56; 725,56 e 280,56 x 106 espermatozoides/mL de sêmen. A morfologia espermática diferiu entre os três jatos avaliados apenas para a incidência de defeitos de peça intermediária, sendo maior no jato três (4,26%), em relação aos jatos um (3,36%) e dois (3,38%). Comparando-se as características morfológicas do sêmen entre os cinco jumentos avaliados, independentemente do jato, observaram-se diferenças entre os reprodutores quanto ao percentual de espermatozoides normais, com gota citoplasmática proximal, com defeitos de peça intermediária e de cabeça.(AU)

Evaluation of two different boar semen freezing protocols and their effects on semen quality after thawing

The aim of this study was to evaluate the quality of boar sperm using two different freezing techniques. The protocols were proposed by Westendorf and Paquignon. In both methods the seminal plasma is removed. In the protocol Paquignon the seminal plasma is removed at environmental temperature and the Westendorf protocol suggests that the plasma withdrawal should be made at 15ºC. The sperm suspension was performed using a cooling extender comprised of egg yolk and sugar (glucose - Paquignon and lactose - Westendorf). The freezing extender was added to the presence of glycerol for both methods and Orvus ES Paste on the methodology of Westendorf. The freezing curve comprised cooling from 5 to -5ºC at 3ºC per min and then from -5 to -140ºC at 40ºC per min. The sperm motility and vitality, viability, osmotic resistance, total morphological abnormalities, abnormal tail, head and acrosome, the presence of proximal cytoplasmic droplet and motility degradation rate were evaluated. The method proposed by Westendorf showed greater sperm viability (P < 0.05) and fewer changes in midpiece. There was no difference (P > 0.05) between the techniques for the other parameters. It was concluded that the method proposed by Westendorf could be indicated in future research for frozen boar semen.(AU)

Evaluation of two different boar semen freezing protocols and their effects on semen quality after thawing

The aim of this study was to evaluate the quality of boar sperm using two different freezing techniques. The protocols were proposed by Westendorf and Paquignon. In both methods the seminal plasma is removed. In the protocol Paquignon the seminal plasma is removed at environmental temperature and the Westendorf protocol suggests that the plasma withdrawal should be made at 15ºC. The sperm suspension was performed using a cooling extender comprised of egg yolk and sugar (glucose - Paquignon and lactose - Westendorf). The freezing extender was added to the presence of glycerol for both methods and Orvus ES Paste on the methodology of Westendorf. The freezing curve comprised cooling from 5 to -5ºC at 3ºC per min and then from -5 to -140ºC at 40ºC per min. The sperm motility and vitality, viability, osmotic resistance, total morphological abnormalities, abnormal tail, head and acrosome, the presence of proximal cytoplasmic droplet and motility degradation rate were evaluated. The method proposed by Westendorf showed greater sperm viability (P 0.05) between the techniques for the other parameters. It was concluded that the method proposed by Westendorf could be indicated in future research for frozen boar semen.

Efeitos da vitamina B12 e ômega 3 na temperatura do escroto, concentração de testosterona, qualidade espermática e histologia testicular de ratos Wistar submetidos à dose tóxica de ciclofosfamida

O dano aos túbulos seminíferos e aos espermatozoides causados pelo fármaco ciclofosfamida é um dos fatores limitantes para seu uso, podendo levar a infertilidade, devido a toxicidade marcante nos órgãos associada ao estresse oxidativo, sendo necessário o uso de substâncias antioxidantes como é o caso do ômega 3 e da vitamina B12. Objetivou-se estudar a influência da vitamina B12 e ômega 3, na histologia e funções dos testículos de ratos tratados com ciclofosfamida. Foram utilizados 96 ratos Wistar, divididos em oito grupos; controle, ômega 3, ciclofosfamida, ômega 3 e ciclofosfamida, vitamina B12, ômega 3 e vitamina B12, vitamina B12 e ciclofosfamida, ômega 3 com vitamina B12 e ciclofosfamida; recebendo alimentação padrão, e os respectivos tratamentos e suplementações durante 30, 45 e 60 dias, a dose tóxica de ciclofosfamida foi aplicada no 59º dia. Foram realizadas análises histológica e morfométrica, dos túbulos seminíferos, determinando-se o diâmetro, diâmetro da luz, altura do epitélio, motilidade e morfologia espermática, com leituras em microscópio óptico considerando o número de espermatozoides normais, com patologia de cabeça e cauda, com gota distal e proximal e o número total de defeitos, concentração de testosterona, e imagens termográficas do escroto para mensurar a temperatura. Os resultados foram submetidos a análise de variância, seguido de teste de Tukey, com significância de 5% (P0,05). Foram obtidos valores de diferenças significativas para diâmetro da luz do túbulo seminífero e ciclofosfamida (valores médios de 155,40 ± 19,45 µm no grupo controle sem a ciclofosfamida, 112,00 ± 24,29 µm no grupo controle com a ciclofosfamida); diâmetro da luz do túbulo seminífero e suplementações (valores médios de 136,90 ± 11,96 µm no grupo vitamina B12 sem ciclofosfamida, 104,80 ± 8,10 µm no grupo ômega 3 sem ciclofosfamida, 119,00 ± 7,17 µm no grupo vitamina B12 e ômega 3 sem ciclofosfamida); diâmetro da luz do túbulo seminífero e suplementações com ciclofosfamida (valores médios de 116,30 ± 20,48 µm no grupo vitamina B12 com ciclofosfamida, 119,80 ± 11,69 µm no grupo ômega 3 com ciclofosfamida, 119,90 ± 9,58 µm no grupo vitamina B12 e ômega 3 com ciclofosfamida); altura do epitélio do túbulo seminífero e suplementações (valores médios de 77,08 ± 3,43 µm no grupo vitamina B12 sem ciclofosfamida, 81,8 ± 14,01 µm no grupo ômega 3 sem ciclofosfamida, 82,15 ± 4,58 µm no grupo vitamina B12 e ômega 3 sem ciclofosfamida); altura do epitélio do túbulo seminífero e suplementações com ciclofosfamida (valores médios de 75,58 ± 6,60 µm no grupo vitamina B12 com ciclofosfamida, 70,14 ± 4,15 µm no grupo ômega 3 com ciclofosfamida, 73,72 ± 4,92 µm no grupo vitamina B12 e ômega 3 com ciclofosfamida); motilidade espermática e ciclofosfamida; espermatozoides com gota distal e suplementação; e espermatozoides com gota distal e suplementação com ciclofosfamida. A suplementação realizada com ômega 3 demonstra eficiência para diminuir o número de espermatozoides com gota distal (12,50 ± 11,30%) dos grupos tratados com a ciclofosfamida. E a vitamina B12 tem melhor influência para baixar a incidência de espermatozoides com gota proximal (0,25 ± 0,46%) e com patologia de cauda (11,40 ± 4,70%), demonstrou ser a melhor para os níveis de testosterona no sangue dos ratos, quando comparados com as demais suplementações, se destacou na manutenção da altura do epitélio do túbulo seminífero (77,08 ± 3,43 µm, ciclofosfamida ausente, e 75,58 ± 6,60 µm, ciclofosfamida presente), a temperatura do escroto no 60º dia. A vitamina B12 e ômega 3 em conjunto geraram um efeito positivo para o diâmetro da luz do túbulo seminífero (119,00 ± 7,17 µm, ciclofosfamida ausente, e 119,90 ± 9,58 µm, ciclofosfamida presente), e para a temperatura do escroto. Pode-se concluir que a suplementação realizada com ômega 3 demonstra eficiência para diminuir o número de espermatozoides com gota distal dos grupos tratados com a ciclofosfamida. Observa-se que a vitamina B12 influenciou de forma benéfica na qualidade do sêmen por reduzir a porcentagem de gota citoplasmática proximal. Observou-se também que a presente suplementação com vitamina B12 e ômega 3, não influenciou para melhoria da qualidade do sêmen com relação a patologia de cauda, patologia de cabeça e concentração sérica de testosterona nos animais tratados ou não com ciclofosfamida. Para as temperaturas do escroto houve influência negativa da ciclofosfamida associada ao ômega 3 na temperatura do escroto aos 60 dias do experimento. O diâmetro do túbulo seminífero sofreu influência positiva da associação do ômega 3 com a vitamina B12 aos 45 dias do experimento em relação a esse mesmo momento para os demais grupos experimentais.

The damage to the seminiferous tubules and to the spermatozoa caused by the drug cyclophosphamide is one of the limiting factors for its use, which can lead to infertility due to marked toxicity in the organs associated with oxidative stress, being necessary the use of antioxidant substances as is the case of the omega 3 and vitamin B12. The aim of this study was to study the influence of vitamin B12 and omega 3 on the histology and functions of the testes of rats treated with cyclophosphamide. Wistar rats were divided into eight groups; control, omega 3, cyclophosphamide, omega 3 and cyclophosphamide, vitamin B12, omega 3 and vitamin B12, vitamin B12 and cyclophosphamide, omega 3 with vitamin B12 and cyclophosphamide; receiving standard feeding, and the respective treatments and supplements during 30, 45 and 60 days, the toxic dose of cyclophosphamide was applied on the 59th day. Histological and morphometric analyzes of the seminiferous tubules were performed, determining the diameter, light diameter, height of the epithelium, motility and sperm morphology, with optical microscope readings considering the number of normal spermatozoa with head and tail pathology, with distal and proximal drop and the total number of defects, testosterone concentration, and thermographic images of the scrotum to measure the temperature. The results were submitted to analysis of variance, followed by Tukey test, with significance of 5% (P0.05). Significant differences were obtained for the diameter of the seminiferous tubule and cyclophosphamide (mean values of 155.40 ± 19.45 m in the control group without cyclophosphamide, 112.00 ± 24.29 m in the control group with cyclophosphamide); seminiferous tubule light and supplements (mean values of 136.90 ± 11.96 m in the vitamin B12 group without cyclophosphamide, 104.80 ± 8.10 m in the omega 3 group without cyclophosphamide, 119.00 ± 7.17 m in the vitamin B12 and omega 3 group without cyclophosphamide); diameter of seminiferous tubule lumen and supplementation with cyclophosphamide (mean values of 116.30 ± 20.48 m in the vitamin B12 group with cyclophosphamide, 119.80 ± 11.69 m in the omega 3 group with cyclophosphamide, 119.90 ± 9, 58 m in the vitamin B12 and omega 3 group with cyclophosphamide); (mean values of 77.08 ± 3.43 m in the vitamin B12 group without cyclophosphamide, 81.8 ± 14.01 m in the omega-3 group without cyclophosphamide, 82.15 ± 4.58 m in the vitamin B12 and omega 3 group without cyclophosphamide); height of seminiferous tubule epithelium and supplementation with cyclophosphamide (mean values of 75.58 ± 6.60 m in the vitamin B12 group with cyclophosphamide, 70.14 ± 4.15 m in the omega 3 group with cyclophosphamide, 73.72 ± 4, 92 m in the vitamin B12 and omega 3 group with cyclophosphamide); sperm motility and cyclophosphamide; spermatozoa with distal gout and supplementation; and spermatozoa with distal gout and cyclophosphamide supplementation. Omega 3 supplementation demonstrates efficiency in decreasing the number of spermatozoa with distal gout (12.50 ± 11.30%) in the groups treated with cyclophosphamide. And vitamin B12 has a better influence in lowering the incidence of spermatozoa with proximal gout (0.25 ± 0.46%) and with tail pathology (11.40 ± 4.70%), has been shown to be the best for testosterone in the rats compared to the other supplements was observed in maintaining the height of the seminiferous tubule epithelium (77.08 ± 3.43 m, absent cyclophosphamide and 75.58 ± 6.60 m, cyclophosphamide present) , the temperature of the scrotum on the 60th day. Vitamin B12 and omega 3 together generated a positive effect on the diameter of the lumen of the seminiferous tubule (119.00 ± 7.17 m, absent cyclophosphamide, and 119.90 ± 9.58 m, cyclophosphamide present), and for the temperature of the scrotum. It can be concluded that the supplementation performed with omega 3 demonstrates efficiency to decrease the number of spermatozoa with distal gout in the groups treated with cyclophosphamide. It is observed that vitamin B12 had a beneficial influence on semen quality by reducing the percentage of proximal cytoplasmic droplet. It was also observed that the present supplementation with vitamin B12 and omega 3 did not influence the improvement of semen quality in relation to tail pathology, head pathology and serum testosterone concentration in animals treated with cyclophosphamide or not. For the scrotal temperatures, there was a negative influence of omega-3-associated cyclophosphamide at the temperature of the scrotum at 60 days of the experiment. The diameter of the seminiferous tubule was positively influenced by the association of omega 3 with vitamin B12 at 45 days of the experiment in relation to this same moment for the other experimental groups.

Domestic cat testicular aromatase activity as assessed by the tritiated water-release assay

Lower testicular tetosterone:17β-estradiol (T:E2) ratio was found in teratospermic domestic cats (<40% morphologically normal sperm). The aim of this study was to assess the reliability of the tritiated water-release assay (TWRA) to measure aromatase activity in domestic cat testes. Testicular T and E2 concentrations, measured by enzyme immunoassay, and sperm morphology were evaluated to verify the relationship between them. Aromatase activity was measured in microsomal fraction and in homogenates of cat testes. Rat ovaries and piglet testes were used for assay validation. Aromatase activity was not detected in cat testes microsomal fraction (n = 8), not even when the protein amount added to the assay was increased from 50 to 200 μg. In homogenates, however, it was detected (3.5 ± 0.5 pmol.g-1.h-1; n = 7), although in such low levels that no activity inhibition was detectedwhen homogenates were incubated with increasing fadrazole concentrations. Although none of the cats in this study were classified as teratospermic, some sperm defects were correlated with testicular T:E2 ratio (abnormal acrosome, r = -0.76) and with E2 concentration (proximal cytoplasmic droplet, r = 0.77). However, we did not find any correlation between aromatase activity and hormonalor sperm morphology data. To our knowledge this is the first demonstration of testicular aromatase activity in domestic cats. Despite that, due to the low aromatase activity measured and the lack of correlation with other reproductive data, we could not infer that TWRA is a reliable method to detect differences in testicular aromatase activity in normospermic cats. Perhaps this method could be used in teratospermic individuals that probably havean increased aromatase activity. As an alternative, we suggest that more sensitive techniques should be used to compare aromatase activity between normospermic and teratospermic cats.

Domestic cat testicular aromatase activity as assessed by the tritiated water-release assay

Lower testicular tetosterone:17β-estradiol (T:E2) ratio was found in teratospermic domestic cats (<40% morphologically normal sperm). The aim of this study was to assess the reliability of the tritiated water-release assay (TWRA) to measure aromatase activity in domestic cat testes. Testicular T and E2 concentrations, measured by enzyme immunoassay, and sperm morphology were evaluated to verify the relationship between them. Aromatase activity was measured in microsomal fraction and in homogenates of cat testes. Rat ovaries and piglet testes were used for assay validation. Aromatase activity was not detected in cat testes microsomal fraction (n = 8), not even when the protein amount added to the assay was increased from 50 to 200 μg. In homogenates, however, it was detected (3.5 ± 0.5 pmol.g-1.h-1; n = 7), although in such low levels that no activity inhibition was detectedwhen homogenates were incubated with increasing fadrazole concentrations. Although none of the cats in this study were classified as teratospermic, some sperm defects were correlated with testicular T:E2 ratio (abnormal acrosome, r = -0.76) and with E2 concentration (proximal cytoplasmic droplet, r = 0.77). However, we did not find any correlation between aromatase activity and hormonalor sperm morphology data. To our knowledge this is the first demonstration of testicular aromatase activity in domestic cats. Despite that, due to the low aromatase activity measured and the lack of correlation with other reproductive data, we could not infer that TWRA is a reliable method to detect differences in testicular aromatase activity in normospermic cats. Perhaps this method could be used in teratospermic individuals that probably havean increased aromatase activity. As an alternative, we suggest that more sensitive techniques should be used to compare aromatase activity between normospermic and teratospermic cats.(AU)

Estudo do metabolismo energético durante a maturação espermática em bovinos.

A espermatogênese é um processo orquestrado e coordenado pelo qual os espermatozoides são produzidos. Ao final deste processo, o excesso de citoplasma presente nas espermátides é fagocitado, permanecendo um resíduo denominado de gota citoplasmática. Os espermatozoides em fase de maturação apresentam gota, que migra da região proximal para regiões mais distais da célula espermática. Estudos relacionam o remanescente citoplasmático à proteção antioxidante e à ativação metabólica de espermatozoides imaturos. Os mecanimos fisiológicos da maturação e os status oxidativo e metabólico em células epididimárias de bovinos são pobremente elucidados. Desta forma, foram realizados dois experimentos com o objetivo de caracterizar o status oxidativo e metabólico de espermatozoides bovinos durante a maturação espermática, e os possíveis papéis da gota citoplasmática envolvidas nesse processo. Para tal, amostras espermáticas foram recuperadas dos três segmentos epididimários (Cabeça, corpo e cauda) e submetidas às avaliações de cinética espermática (CASA) e testes morfofuncionais. Foram avaliadas as atividades das enzimas antioxidantes SOD e GPx e mensurados os níveis de ATP em cada amostra epididimária. Espermatozoides recuperados da cauda do epidídimo apresentaram maior porcentagem de células móveis e progressivas e elevados níveis de ATP em comparação aos demais grupos. As células provenientes do corpo apresentaram maior susceptibilidade à peroxidação lipídica e membranas plasmática e acrossomal lesionadas. Foi nesse segmento que também observamos a migração da gota e o início da aquisição da motilidade, e correlação negativa entre gota distal e susceptibilidade à peroxidação. Em amostras da cabeça, houve correlação positiva entre produção de EROs e níveis de ATP, e alto PMM; e correlação negativa entre atividade da SOD e susceptibilidade à peroxidação lipídica em amostras da cabeça. Não foram observadas diferenças significativas em relação ao potencial de membrana mitocondrial (PMM) e a atividade da SOD e da GPx entre os diferentes segmentos. Por meio dos principais resultados, pudemos sugerir que as células presentes na cauda do epidídimo apresentam o aparato energético ativo, devido à alta porcentagem de células móveis e níveis de ATP. As amostras provenientes do corpo evidenciam que é neste segmento em que a motilidade se inicia e que ocorre os principais remodelamentos de membrana. As correlações observadas nos permitem inferir que as mitocôndrias de espermatozoides bovinos imaturos já estivessem ativas desde o início da maturação, produzindo energia e EROs. Além disso, a correlação nos mostra o papel protetor da SOD contra à peroxidação lipídica. Paralelamente, sugerimos que a gota participe firmemente da ativação da motilidade e desempenhe papel antioxidante contra as EROs. Assim, concluímos que as modificações celulares inerentes ao processo de maturação e a presença da gota citoplasmática sejam cruciais no status oxidativo e metabólico de espermatozoides bovinos imaturos, afim desenvolver a capacidade fecundante do espermatozoide.

Spermatogenesis is an orchestrated and coordinated process by which sperm are produced. In the end of this process, the excess cytoplasm present in the spermatids is phagocytosed, remaining a called cytoplasmic droplet. Spermatozoa in the stage of maturation present cytoplasmic droplet, which migrates from the proximal region to more distal regions in sperm cell. Studies relate the cytoplasmic remnant to the antioxidant protection and to metabolic activation of immature sperma. The physiological mechanisms of maturation and the oxidative and metabolic status of bovine epididymal cells are poorly elucidated. Thus, two experiments aimed to characterize the oxidative and metabolic status of bovine sperm during epididymal maturation, and the possible cytoplasmic droplet roles involved in this process. For this, sperm samples were recovered from the three epididymal segments (Caput, corpus and cauda) and submitted to spermatic kinetics analysis (CASA) and morphofunctional tests. The activities of the antioxidant enzymes SOD and GPx were evaluated and the levels of ATP in each epididymal sample. Sperm cells recovered from the cauda of the epididymis showed a higher percentage of motile and progressive cells and high levels of ATP compared to the other groups. Cells from the corpus showed elevated susceptibility to lipid peroxidation and lesioned plasma and acrosomal membranes. It was in this segment that we also observed the migration of cytoplasmic droplet and the beginning of the acquisition of motility, and negative correlation between distal droplet and susceptibility to peroxidation. In samples from the caput, there was a positive correlation between ROS production and ATP levels, and high PMM; and negative correlation between SOD activity and susceptibility to lipid peroxidation in caput samples. No significant differences were observed in relation to mitochondrial membrane potential (PMM) and SOD and GPx activity among the different segments.By means of the main results, we could suggest that cells present in the cauda of the epididymis present the active energy apparatus, due to the high percentage of mobile cells. Samples from the corpus show that is in this segment that the motility begins and the main membrane remodeling occurs. The observed correlations allow us to infer that mitochondria of immature bovine sperm are already active since the beginning of maturation, producing energy and ROS. In addition, the correlation shows us the protective role of SOD against lipid peroxidation. In parallel, we suggest that cytoplasmic droplet participates firmly in the activation of motility and plays an antioxidant role against ROS. Thus, we conclude that the cellular modifications inherent in the sperm maturation process and the presence of cytoplasmic droplet are crucial in the oxidative and metabolic status of immature bovine spermatozoa, in order to develop fecundant capacity.

TERMOGRAFIA DIGITAL POR INFRAVERMELHO DO ESCROTO E PARÂMETROS SEMINAIS DE GARANHÕES MANGALARGA MARCHADOR DENTRO DA ESTAÇÃO REPRODUTIVA

Objetiva-se com esse estudo avaliar o uso da termografia digital por infravermelho para descrever o perfil termográfico do escroto de garanhões da raça Mangalarga Marchador de diferentes idades, dentro da estação reprodutiva. Foram avaliados 43 garanhões, com idades entre 3 e 18 anos que tiveram seus perfis termográficos das zonas proximal, medial e distal dos testículos e a temperatura superficial total registrados pela técnica de termografia digital por infravermelho. O sêmen dos 43 animais foram coletados após avaliação termográfica e repetidos com aproximadamente 60 dias em oitos animais. Todos os garanhões foram avaliados quanto: aferição da temperatura retal, biometria testicular e os ejaculados foram avaliados quanto ao volume, aspecto, coloração, motilidade total, motilidade progressiva, vigor, concentração, avaliação da morfologia e a integridade funcional da membrana dos espermatozoides. O perfil termográfico dos garanhões se caracterizou com uma temperatura testicular média da zona proximal de 34°C, medial 34°C e distal 34,1°C e da temperatura superficial total dos testículos de 34°C. Os parâmetros seminais e espermáticos apresentaram uma média para o volume de 55,3 e 36,3 mL; motilidade total 65,6% e 72,5%; motilidade progressiva 59,2 e 62,5; vigor 3,3 e 3,4; concentração de espermatozoides por mL 196,1 x 106 e 211,8 x 106; células com integridade funcional ao HOST; defeitos de acrossoma 0,3% e 0,8%; defeitos cabeça 1,5% e 2,1%; gota citoplasmática proximal 4,5% e 5,9%; gota citoplasmática distal 7,0% e 4,6%; defeito de peça intermediaria 4,3% e 3,8%; defeito de peça proximal 3,0% e 3,2%; defeito de peça terminal 5,3% e 3,0%; defeito de cauda geral 1,9% e 3,1%; defeitos totais 27,7% e 26,5% e número de células normais de 72,3% e 73,5% na 1ª e 2ª coleta de sêmen, respectivamente. Foram verificadas correlações entre o perfil termográfico dos garanhões e alguns parâmetros seminais. Esse IX estudo demonstrou que garanhões Mangalarga Marchador se mostraram eficientes em manter a temperatura testicular dentro das condições favoráveis a espermatogênese, demonstrando a eficiência dos mecanismos de termorregulação testicular.

This study aims to evaluate the use of infrared digital thermography to describe the thermographic profile of the escroto of Mangalarga Marchador stallions of different ages, within the reproductive season. A total of 43 stallions, aged between 3 and 18 years, had their thermographic profiles from the proximal, medial and distal areas of the testicles and the total surface temperature recorded by infrared digital thermography. The semen of the 43 animals were collected after thermographic evaluation and repeated with approximately 60 days in eight animals. All stallions were evaluated: rectal temperature measurement, testicular biometry and ejaculates were evaluated for volume, appearance, staining, total motility, progressive motility, vigor, concentration, morphology evaluation and functional integrity of the spermatozoa membrane. The thermographic profile of the stallions was characterized with a mean testicular temperature of the proximal zone of 34 ° C, medial 34 °C and distal 34.1 °C and total surface temperature of the testicles of 34 °C. Seminal and spermatic parameters presented a mean for the volume of 55.3 and 36.3 mL; total motility 65.6% and 72.5%; progressive motility 59.2 and 62.5; vigor 3.3 and 3.4; sperm concentration per mL 196.1 x 106 and 211.8 x 106; cells with HOST functional integrity; acrosome defects 0.3% and 0.8%; head defects 1.5% and 2.1%;proximal cytoplasmic droplet 4.5% and 5.9%; distal cytoplasmic droplet 7.0% and 4.6%; intermediate part defect 4.3% and 3.8%; proximal part defect 3.0% and 3.2%; terminal part defect 5.3% and 3.0%; general tail defect 1.9% and 3.1%; total defects of 27.7% and 26.5% and number of normal cells of 72.3% and 73.5% in the 1st and 2nd collection of semen, respectively. Correlations were verified between the thermographic profile of the stallions and some seminal parameters. This study demonstrated that Mangalarga Marchador stallions were efficient in maintaining the testicular temperature within conditions favorable to spermatogenesis, demonstrating the efficiency of testicular thermoregulation mechanisms.

Avaliação da qualidade espermática de suínos através da consistência testicular e exame ultrassonográfico

A morfologia espermática está entre as maiores causas de descarte de reprodutores nas centrais de difusão genética e, quando identificada precocemente, significa uma redução nos custos com reprodutores ociosos. O estudo objetivou avaliar a possibilidade de utilização de características testiculares (consistência à palpação manual, consistência à tonometria tônus, ecogenicidade da imagem ultrassonográfica - em pixels, e heterogeneidade da ecogenicidade em pixels) na identificação de reprodutores suínos com baixa qualidade de morfologia espermática. Foram avaliados 402 machos com idade média de 18,5 ± 8,8 meses, de cinco centrais de difusão genética. A avaliação espermática foi utilizada como critério de aptidão, sendo considerados aptos os reprodutores com menos de 20% de defeitos espermáticos, não ultrapassando o limite de 5% para defeitos de cabeça, acrossoma, colo e peça intermediária e 10% para defeitos de cauda (dobrada ou enrolada) e gota citoplasmática proximal. A porcentagem de animais aptos segundo a morfologia espermática foi de 71,9%. O tônus teve correlação positiva (P 0,05) moderada com a consistência à palpação manual (r= 0,64). A heterogeneidade testicular foi fracamente correlacionada com a ecogenicidade (r= 0,39; P 0,05) e com o percentual de anormalidades espermáticas (r= 0,11). Foram comparados os valores das características testiculares entre machos considerados aptos e inaptos, sendo a média de tônus inferior nos machos aptos (P= 0,04). A possível associação das características testiculares com o percentual de defeitos espermáticos foi analisada por regressão logística, incluindo as características (consistência à palpação manual, tônus, ecogenicidade e heterogeneidade do parênquima testicular) como variáveis contínuas ou classificatórias. A partir dos valores obtidos, foram criadas 4 classes de consistência à palpação e de tônus e 5 classes de ecogenicidade e heterogeneidade do parênquima testicular. Foi obtido um ponto de corte de 5,03mm, baseado no tônus testicular, para discriminar animais aptos e inaptos e maiores valores de tônus (variável contínua) diminuíram a chance dos machos serem aptos, no entanto, com baixo poder discriminatório (AUC= 0,66). A probabilidade de ocorrência de aptidão tendeu a ser menor na classe de tônus 4 (P= 0,07). Menores valores de tônus estão associados à maior porcentagem de normalidades espermáticas em suínos, auxiliando na identificação de animais com alta qualidade espermática.

Sperm morphology is an important cause of male culling in boar studs and if early detected may lead to a reduction on costs of exceeded males. The study aimed to evaluate the possibility for using testicular traits (testicular consistency by manual palpation and consistency by tonometry tone, echogenicity by ultrasonography - pixels and heterogeneity of the echogenicity pixels) on the identification of boars with high sperm morphology quality. Sperm evaluation was used as criteria for breeding soundness, being considered as satisfactory boars with less than 20% of total sperm abnormalities, with an upper limit of 5% head, acrosome, neck and mid piece defects and 10% of tail (coiled and bent) e proximal cytoplasmic droplet. The percentage of satisfactory boars was 71.9%. Tone was positively correlated (P 0.05) with consistency by manual palpation (r= 0.64). Testicular heterogeneity was weakly correlated (P 0.05) with echogenicity (r= 0.39) and with percentage of sperm abnormalities (r= 0.11). It was compared the values of testicular traits between satisfactory and unsatisfactory boars, and a lower mean of tone was found on satisfactory boars (P= 0.04). The possible association of testicular traits with the percentage of sperm defects was analyzed by logistic regression, including the traits (consistency by manual palpation, tone, echogenicity and heterogeneity) as continuous and categorical variables. Considering the values obtained, 4 classes were created for consistency by manual palpation and tone and 5 classes were created for echogenicity and heterogeneity of the testicular parenchyma. It was obtained a cut-off value of 5.03mm, based on testicular tone, to discriminate satisfactory and unsatisfactory boars and higher values of tone (as continuous variable) decreased the chance of boars to be satisfactory, however with low discriminatory power (AUC= 0.66). The probability of occurrence of satisfactory boars tended to be lower on class 4 of tone (P= 0.07). Lower values of tone are associated with higher percentage of sperm normality, contributing to the identification of boars with high sperm quality.

Efeito da senescência reprodutiva sobre aspectos morfológicos, funcionais e de estresse oxidativo do sêmen fresco e criopreservado de cães

O presente estudo teve como objetivos comparar o sêmen de cães jovens e senis, por avaliação morfo-funcional, estresse oxidativo e quantificação de produtos avançados de glicação (AGEs); comparar a congelabilidade seminal de cães jovens e senis e verificar a ação dos produtos avançados de glicação, oxidação proteica e estresse oxidativo na criopreservação seminal de cães senis. Foram selecionados 22 cães, alocados em dois grupos experimentais de acordo com a idade: Grupo Jovem (n=11) e Grupo Senil (n=11). Os grupos foram adicionalmente subdivididos em Grupo Sêmen Fresco e Grupo Sêmen Criopreservado. A divisão etária foi realizada de acordo com o porte dos animais, sendo porte pequeno considerado senil a partir de 8 anos de idade, porte médio a partir de 7 anos de idade e porte grande acima de 6 anos de idade. Independentemente do porte, os cães jovens em idade reprodutiva foram considerados entre 1 e 5 anos de idade. O Grupo Fresco foi submetido a avaliações seminais imediatas, incluindo volume, cor, aspecto do ejaculado, concentração espermática e análise computadorizada da motilidade (CASA). Logo após, foram realizadas avaliações morfo-funcionais, incluindo atividade mitocondrial dos espermatozoides, estresse oxidativo lipídico, estresse oxidativo proteico, dosagem de produtos avançados de glicação e dosagem de concentração proteica, citometria de fluxo utilizando as sondas fluorescentes para a avaliação espermática da integridade de membrana plasmática e acrossomal e de potencial de membrana mitocondrial e análise de fragmentação de DNA. O Grupo Congelado foi submetido ao protocolo de congelação em uma etapa e após, no mínimo uma semana, as amostras foram descongeladas a 37ºC por 30 segundos e, então, avaliadas quanto à concentração espermática, análise computadorizada da motilidade (CASA) e as mesmas avaliações morfo-funcionais realizadas para o Grupo Jovem. Como resultados, os machos do Grupo Jovem apresentaram maior escore de libido, parâmetros da motilidade espermática, alta atividade mitocondrial dos espermatozoides e menores valores de atividade mitocondrial média, defeitos espermáticos totais, defeitos espermáticos maiores e gota citoplasmática proximal. No sêmen fresco, o Grupo Jovem obteve maiores valores de integridade da membrana acrossomal dos espermatozoides e baixo potencial de membrana mitocondrial, assim como menores valores de integridade da membrana plasmática e acrossomal e alto potencial de membrana mitocondrial. No sêmen descongelado, o Grupo Jovem apresentou maiores valores de integridade de membrana acrossomal dos espermatozoides. No sêmen de cães jovens, o Sub-grupo Fresco obteve maiores valores de integridade de membrana acrossomal e integridade de membrana acrossomal com lesão de membrana plasmática. No sêmen de cães senis, o Sub-grupo Fresco apresentou maiores valores de integridade de membrana acrossomal, integridade de membrana plasmática e acrossomal e alto potencial de membrana mitocondrial, assim como menor porcentagem de espermatozoides com baixo potencial de membrana mitocondrial. Na comparação entre os sub-grupos, houve maiores valores para parâmetros da motilidade espermática, integridade de membrana plasmática com lesão de acrossomo, médio potencial de membrana mitocondrial, integridade de membrana plasmática, alta atividade mitocondrial e estresse oxidativo no Sub-grupo Descongelado, além de maiores valores de amplitude de deslocamento lateral da cabeça, espermatozoides estáticos, lesão de membrana acrossomal e plasmática, média atividade mitocondrial e concentração de proteínas no pellet de espermatozoides. A partir de tais resultados, é possível concluir que o sêmen de cães senis apresenta qualidade inferior ao de cães jovens, bem como reduzida congelabilidade. Nos cães senis, possivelmente, a falha na eliminação da gota citoplasmática dos espermatozoides promova disfunções mitocondriais, culminando na alteração da motilidade espermática. Por fim, as avaliações de parâmetros oxidativos não se mostram acuradas para a avaliação do impacto da senescência reprodutiva.

This study aimed to compare the semen of young and senile dogs, through the evaluation of morphological and functional attributes, oxidative stress and quantification of advanced glycation ending products (AGEs); compare the seminal freezability of young and senile dogs and evaluate the effects of advanced glycation ending products, oxidation protein and oxidative stress on seminal cryopreservation of senile dogs. Twenty two dogs were selected and allocated into two experimental groups according to their age: Young Group (n=11) and Senile Group (n=11). These groups were additionally divided into Fresh Semen Group and Frozen Semen Group. Age distribution was performed according to the size of the animals, being small animals considered senile from 8 years of age onwards, medium size from 7 years old and large size over 6 years old. Regardless of the body size, dogs were considered young if they were at reproductive maturity from 1 to 5 years old. The Fresh Group was subjected to immediate seminal assessments, including volume, color, aspect of the ejaculate, sperm concentration and computer analysis of sperm motility (CASA). Then morpho-functional assessments were carried out, including sperm mitochondrial activity, lipid oxidative stress, protein oxidative stress, dosage of advanced glycation ending products and of protein concentration, flow cytometry using fluorescent probes to evaluate plasmatic and acrosomal membrane integrity and mitochondrial membrane potential and DNA fragmentation analysis. The semen from the Frozen Group was submitted to one step freezing protocol and samples were thawed after not less than 1 week at 37°C for 30 seconds and evaluated for sperm concentration, motility computerized analysis (CASA) and same the morpho-functional analysis performed for the Young Group. Male dogs from the Young Group presented higher libido score, parameters of sperm motility, percentage of sperm with high mitochondrial activity and lower percentage of sperm of medium mitochondrial activity, total spermatic defects, major spermatic defects and proximal cytoplasmic droplet. For the fresh semen of the Young Group, higher values of acrosomal membrane integrity and low mitochondrial membrane potential, as well as lower values of plasma and acrosomal membrane integrity and high mitochondrial membrane potential were noticed. In the post-thaw semen, the Young Group showed higher values of spermatic acrosomal membrane integrity. For the semen of young dogs, the Fresh Group had higher values of acrosomal membrane integrity and acrosomal membrane integrity with plasma membrane damage. In the semen of senile dogs, the Fresh Group presented higher values of acrosomal membrane integrity, plasma and acrosomal membrane integrity and high mitochondrial membrane potential, as well as lower percentage of sperm with low mitochondrial membrane potential. Comparing sub-groups, higher values for sperm motility parameters, plasma membrane integrity with acrosome injury, medium mitochondrial membrane potential, plasmatic membrane integrity, high mitochondrial activity and oxidative stress was noticed for the Thawed group, as well as greater values of lateral displacement amplitude of the sperm head, static spermatozoa, acrosomal and plasmatic membrane lesions, medium mitochondrial activity and protein concentration in the spermatozoa pellet. Based on the present results, it is possible to conclude that the semen of senile dogs presents inferior quality compared to young dogs, as well as less freezability. The possible failure to eliminate the sperm cytoplasmic droplet in senile dogs sperm promotes mitochondrial dysfunctions, culminating to alterations on sperm motility. Finally, the evaluation of oxidative parameters is not feasible for the impact evaluation of reproductive senescence.

Avaliação do espermograma de leões africanos (Panthera leo, Linnaeus, 1758), mantidos na Fundação Parque Zoológico de São Paulo / Spermogram of african lions (Panthera leo, Linnaeus, 1758) housed at Fundação Parque Zoológico de São Paulo

O presente estudo teve por objetivo avaliar o espermograma de um grupo de leões africanos mantidos em cativeiro na Fundação Parque Zoológico de São Paulo, como um aspecto a ser considerado na avaliação do potencial reprodutivo para a aplicação de técnicas de reprodução assistida. Foram submetidos a eletroejaculação 14 exemplares machos, adultos de Leão Africano, utilizando-se o método da eletroejaculação. Logo após a colheita, cada uma das 13 amostras obtidas foi examinada quanto ao volume, pH e aspecto geral, seguida pela avaliação da motilidade, movimento progressivo, índice de motilidade espermática e concentração. Uma alíquota do ejaculado foi fixada em solução de formol-salina a 10% e analisado em câmara úmida ao microscópio de interferência de fase, para o estudo dos aspectos morfológicos, classificando as alterações dos espermatozóides em defeitos maiores e menores. Os resultados foram: volume 5,83 ±3,35 ml; concentração 11,62 ± 14,51 x 106 espermatozóides/ml; motilidade total 73,85 ± 11,02 %; motilidade progressiva 3,35 ±0,63; índice de motilidade espermática 70,42 %, pH 8,1 ± 0,5; defeitos maiores 38,12 ± 19,41 %; defeitos menores 17,43 ± 10,36 %; defeitos totais 55,55 ± 19,30 %. Os defeitos maiores mais freqüentes foram gota citoplasmática proximal, peça intermediária dobrada com gota citoplasmática e peça intermediária dobrada. A cauda dobrada foi o defeito menor mais encontrado.(AU)

The aim of this study was to analyse the spermogram of a group of captive African lions (Panthera leo), housed at the Fundação Parque Zoológico de São Paulo, as a subject to avaluate the reproductive potential of the animals, an important aspect to apply artificial reproductive techniques. After chemical restraining, semen from 14 adult male lions was obtained by electroejaculation and the samples were examined right after the collection. The characteristics analyzed were: volume, pH, general aspect, motility, progressive motility, spermatic motility index and concentration. One aliquot of the samples were fixed in saline-formol solution 10% and examined under Phase Contrast Microscopy for morphological evaluation, classifying in minor and major defects. The results were: volume 5,83+/-3,35 ml; concentration11, 62 +/- 14,51 x 106 sperm cells/ml; total motility 73,85 +/- 11,02 % ; progressive motility 3,35 +/- 0,63; spermatic motility index 70,42 %, pH 8,1 +/- 0,5; major defects 38,12+/- 19,41 %; minor defects 17,43 +/- 10,36 %; total defects 55,55 +/- 19,30 %. The more frequent major defects were: proximal droplet, bent midpiece with cytoplasmic droplet and bent midpiece. Bent tail was the most frequent minor defect observed.(AU)