An RT-rtPCR assay for detection of rabies virus in bovine specimens / Um ensaio RT-rtPCR para detecção de vírus da raiva em espécimes bovinos

ABSTRACT: Bovine rabies is endemic in most Brazilian States, including Rio Grande do Sul (RS), which has faced an unprecedented rabies outbreak between 2011 and 2018. We described a real-time reverse transcription quantitative PCR (RT-rtPCR) for detection of rabies virus (RABV) in bovine samples. The primers were designed targeting a highly conserved region of the nucleoprotein (N) gene of RABV obtained from cattle. The detection limit corresponded to 13 DNA copies and the intra- and inter-run repeatability was adequate (CV<9%) in all dilutions tested. Amplification of other pathogens associated with neurological disease in cattle or cross-contamination was not observed. Brain samples from cattle suspicious of rabies (n=21) were tested in triplicate by the RT-rtPCR and by the gold-standard direct fluorescent antibody test (DFAT), resulting in 100% of sensitivity and specificity of the RT-rtPCR. Testing of additional 41 bovine brain samples submitted to the routine DFAT testing yielded 37 (90.2%) concordant results (30 positive/7 negative) and 4 (9.7%) inconclusive in DFAT and RT-rtPCR positive. These results showed a good concordance between the tests and a higher sensitivity of the RT-rtPCR. This assay represents an alternative for RABV detection, either as a confirmatory test or for large-scale diagnosis in endemic regions.

RESUMO: A raiva bovina é endêmica na maioria dos estados brasileiros, inclusive no Rio Grande do Sul (RS), que enfrentou um surto de raiva sem precedentes entre 2011 e 2018. Descrevemos um PCR quantitativo de transcrição reversa em tempo real (RT-rtPCR) para detecção do vírus da raiva (RABV) em bovinos. Os primers foram desenhados visando uma região altamente conservada do gene da nucleoproteína (N) de RABV obtido de bovinos. O limite de detecção correspondeu a 13 cópias de DNA e a repetibilidade intra e inter-ensaios foi adequada (CV <9%) em todas as diluições testadas. Não foi observada amplificação de outros patógenos associados a doenças neurológicas em bovinos ou contaminação cruzada. Amostras de cérebro de bovinos com suspeita de raiva (n = 21) foram testadas em triplicata no RT-rtPCR e pelo teste de anticorpo fluorescente padrão ouro (DFAT), resultando em 100% de sensibilidade e especificidade do RT-rtPCR. O teste de 41 amostras de cérebro bovino adicionais submetidas ao teste de DFAT de rotina rendeu 37 (90,2%) resultados concordantes (30 positivos / sete negativos) e quatro (9,7%) inconclusivos em DFAT e RT-rtPCR positivo. Esses resultados mostraram boa concordância entre os testes e maior sensibilidade do RT-rtPCR. Este ensaio representa uma alternativa para a detecção do vírus da raiva, seja como teste confirmatório ou para diagnóstico em larga escala em regiões endêmicas.

An RT-rtPCR assay for detection of rabies virus in bovine specimens / Um ensaio RT-rtPCR para detecção de vírus da raiva em espécimes bovinos

Bovine rabies is endemic in most Brazilian States, including Rio Grande do Sul (RS), which has faced an unprecedented rabies outbreak between 2011 and 2018. We described a real-time reverse transcription quantitative PCR (RT-rtPCR) for detection of rabies virus (RABV) in bovine samples. The primers were designed targeting a highly conserved region of the nucleoprotein (N) gene of RABV obtained from cattle. The detection limit corresponded to 13 DNA copies and the intra- and inter-run repeatability was adequate (CV<9%) in all dilutions tested. Amplification of other pathogens associated with neurological disease in cattle or cross-contamination was not observed. Brain samples from cattle suspicious of rabies (n=21) were tested in triplicate by the RT-rtPCR and by the gold-standard direct fluorescent antibody test (DFAT), resulting in 100% of sensitivity and specificity of the RT-rtPCR. Testing of additional 41 bovine brain samples submitted to the routine DFAT testing yielded 37 (90.2%) concordant results (30 positive/7 negative) and 4 (9.7%) inconclusive in DFAT and RT-rtPCR positive. These results showed a good concordance between the tests and a higher sensitivity of the RT-rtPCR. This assay represents an alternative for RABV detection, either as a confirmatory test or for large-scale diagnosis in endemic regions.

A raiva bovina é endêmica na maioria dos estados brasileiros, inclusive no Rio Grande do Sul (RS), que enfrentou um surto de raiva sem precedentes entre 2011 e 2018. Descrevemos um PCR quantitativo de transcrição reversa em tempo real (RT-rtPCR) para detecção do vírus da raiva (RABV) em bovinos. Os primers foram desenhados visando uma região altamente conservada do gene da nucleoproteína (N) de RABV obtido de bovinos. O limite de detecção correspondeu a 13 cópias de DNA e a repetibilidade intra e inter-ensaios foi adequada (CV <9%) em todas as diluições testadas. Não foi observada amplificação de outros patógenos associados a doenças neurológicas em bovinos ou contaminação cruzada. Amostras de cérebro de bovinos com suspeita de raiva (n = 21) foram testadas em triplicata no RT-rtPCR e pelo teste de anticorpo fluorescente padrão ouro (DFAT), resultando em 100% de sensibilidade e especificidade do RT-rtPCR. O teste de 41 amostras de cérebro bovino adicionais submetidas ao teste de DFAT de rotina rendeu 37 (90,2%) resultados concordantes (30 positivos / sete negativos) e quatro (9,7%) inconclusivos em DFAT e RT-rtPCR positivo. Esses resultados mostraram boa concordância entre os testes e maior sensibilidade do RT-rtPCR. Este ensaio representa uma alternativa para a detecção do vírus da raiva, seja como teste confirmatório ou para diagnóstico em larga escala em regiões endêmicas.

Main diseases of cattle in the midwestern region of São Paulo state / Principais doenças de bovinos na região centro-oeste do estado de São Paulo

São Paulo state is one of the country's largest producers of beef and milk, and the midwestern region plays a key role in this production, as half of São Paulo's cattle herd is found in this region. These numbers alone demonstrate the importance of livestock in this region. Therefore, this study aimed to describe the main epidemiological and clinical signs in cattle cases at the Large Animal Hospital at FMVZ-Unesp, located in the midwestern region of São Paulo state. The present retrospective study assessed 638 clinical cases of cattle treated from January 2010 to December 2019 (10 years). Digestive system diseases were the most prevalent, diagnosed in 30.3% of patients, followed by neurological diseases (19.1%) and respiratory diseases (10.5%). The other diseases were distributed in decreasing order as follows: musculoskeletal (7.8%), hematopoietic (6.1%), genitourinary (5.6%), metabolic and nutritional (5.5%), neonatal (4.7%), cutaneous (2.6%), poisoning (2.5%), lymphatic (2.2%), cardiovascular (1.6%) and other diseases (1.4%). Rabies, a fatal zoonotic disease, was the main cause of death in this study and the main disease associated with neurological signs (23.7%). Recognizing the main diseases of cattle in this region will promote the adoption of prophylactic measures to minimize their occurrence and manage treatment to avoid economic losses and decreased productivity of herds.

O estado de São Paulo é um dos maiores produtores de carne e leite bovino do país e a região centro-oeste do estado tem papel fundamental nessa produção, pois possui a metade do rebanho de bovinos do estado. Portanto, este estudo descreve os principais achados clínicos e epidemiológicos de bovinos atendidos no Hospital de Grandes Animais da FMVZ/Unesp, localizado na região centro-oeste paulista. Foi realizado um levantamento nos arquivos da Clínica de Grandes Animais do Hospital Veterinário da FMVZ-Unesp, Botucatu/SP, dos 638 casos clínicos de bovinos atendidos de janeiro de 2010 a dezembro de 2019. Enfermidades do sistema digestório foram as mais prevalentes (30,3%), seguidas das doenças neurológicas (19,1%) e respiratórias (10,5%). As demais enfermidades foram distribuídas, em ordem decrescente, em: musculoesquelético (7,8%), haematopoiético (6,1%), geniturinário (5,6%), cutânea (2,6%), linfático (2,2%) e cardiovascular (1,6%) ou foram classificadas em doenças metabólicas e nutricionais (5,5%), neonatais (4,7%), tóxicas (2,5%) ou outros distúrbios (1,4%). A raiva, uma zoonose fatal, foi a principal causa de óbito neste estudo e a principal doença neurológica (23,7%). O reconhecimento das principais doenças dos bovinos desta região permite a adoção de medidas profiláticas e de manejo para minimizar sua ocorrência e evitar perdas econômicas com o tratamento e menor produtividade do rebanho.

Neurological diseases of viral origin in cattle in the state of Pernambuco, Brazil: clinical and anatomopathological study / Enfermidades neurológicas de origem viral em bovinos no estado de Pernambuco, Brasil: estudo clínico e anatomopatológico

Studies related to neurological diseases are of great importance in Veterinary Medicine, particularly those involving production animals, such as cattle, due to their wide sanitary and public health significance. Therefore, the current study aims to describe the frequency of occurrence of the main clinical, laboratory, and anatomopathological findings of cattle diagnosed with neurological diseases of viral origin. Screening was performed in the general register of patients diagnosed through anatomopathological and/or complementary examination with illnesses of viral origin, admitted (live or dead) to the Clínica de Bovinos de Garanhuns-UFRPE from January 2009 to December 2019. The information recovered was entered in a database created in the computer program Microsoft Excel 2010®, distributed into clinical, laboratory, and anatomopathological data. The clinical findings on neurological diseases of viral etiology were very varied and non-specific, and the anatomopathological findings, together with laboratory methods, were of fundamental importance for the establishment of the diagnosis. The high frequency of rabies cases in this study demonstrates the importance of this disease for cattle rearing, as well as for Public Health. We emphasize the importance of including malignant catarrhal fever and herpes meningoencephalitis in the differential diagnosis of neurological diseases in the region, as well as the adoption of sanitary measures.

Os estudos relacionados as doenças neurológicas assumem grande importância na Medicina Veterinária, particularmente os que envolvem animais de produção como os bovinos, em virtude da grande importância sanitária e de saúde pública. Nesse contexto, este trabalho teve como objetivo descrever a frequência de ocorrência dos principais achados clínicos, laboratoriais e anatomopatológicos dos bovinos diagnosticados com doenças neurológicas de origem viral. Realizou-se a triagem no livro de registro geral dos pacientes com enfermidades que cursaram com sintomatologia neurológica e que foram diagnosticados através de exame anatomopatológico e/ou complementares com enfermidades de origem viral, os quais deram entrada (vivos ou mortos) na Clínica de Bovinos de Garanhuns-UFRPE no período de janeiro de 2009 a dezembro de 2019. As informações obtidas foram inseridas em um banco de dados elaborado no programa de computador Microsoft Excel 2010® distribuídas em dados clínicos, laboratoriais e anatomopatológicos. Os achados clínicos das enfermidades neurológicas de etiologia viral foram muito variados e inespecíficos, sendo os achados anatomopatológicos, aliados aos métodos laboratoriais, de importância fundamental para o estabelecimento do diagnóstico. A elevada frequência dos casos de raiva neste estudo demonstra a importância sanitária desta enfermidade para a pecuária bovina, como também para a saúde pública. Ressalta-se a importância da inclusão da febre catarral maligna e da meningoencefalite herpética no diagnóstico diferencial das doenças neurológicas na região, assim como a adoção de medidas sanitárias.

Descriptive cross-sectional study on major bovine diseases and associated risk factors in north-eastern Ecuadorian Amazon / Estudo transversal descritivo sobre as principais doenças bovinas e fatores de risco associados no nordeste da Amazônia equatoriana

Cattle raising is a crucial element of production systems in the tropics and subtropics. However, in recent years, global public health security has been threatened by disease emergence. In Orellana Province, livestock is the most important activity to generate economic income. Nevertheless, there is no available data about Animal Health status. With this objective, a study was performed to describe the major Bovine diseases recorded between 2011 to 2019, and the main Risk factors associated. Data on main Bovine diseases were retrieved from the World Animal Health Information System database. Whereas Bovine population data used to calculate the prevalence rates and confidence intervals were obtained from Ecuador's Ministry of Agriculture. By contrast, the Risk factors identified with an epidemiological questionnaire were applied to 300 livestock farmers. As a result, from 2011 to 2019 in Orellana has been confirmed: 90 cases of Infectious Bovine Rhinotracheitis (31.58%), Bovine Rabies by hematophagous bats (Desmodus rotundus), 83 cases (29.12%), Bovine viral diarrhea with 43 cases (15.10%), Brucellosis by Brucella abortus 35 cases, which was (12.28%), and 34 cases related to Enzootic bovine leukosis (11.92%). Overall, the prevalence rates ranged from (0.24 to 15.37%). In addition, farm size, presence of forest, herd, and paddock sizes, cutting frequency of forages, and other animal species were involved as Risk factors (OR = 3.15 to 11.75; 95% CI, 0.01 to 0.69). In conclusion, there are animal diseases with reproductive and neurologic symptomology and high-Risk factors implicated in the transmission. Consequently, space-temporal and seroprevalence epidemiological studies should be performed in Orellana.

A criação de gado é um elemento crucial dos sistemas de produção nos trópicos e subtrópicos. No entanto, nos últimos anos, a segurança da saúde pública global tem sido ameaçada pelo surgimento de doenças. Na província de Orellana, a pecuária é a atividade mais importante para gerar renda econômica. Contudo, não há dados disponíveis sobre o estado de saúde animal. Com este objetivo, foi realizado um estudo para descrever as principais doenças dos bovinos registradas entre 2011 e 2019, além dos principais fatores de risco associados. Os dados sobre as principais doenças bovinas foram recuperados do banco de dados do World Animal Health Information System. Os dados da população bovina usados para calcular as taxas de prevalência e os intervalos de confiança foram obtidos do Ministério da Agricultura do Equador. Por outro lado, os fatores de risco identificados com um questionário epidemiológico foram aplicados a 300 criadores de gado. Como resultado, de 2011 a 2019 em Orellana foram confirmados: 90 casos (31,58%) de rinotraqueíte infecciosa bovina, 83 casos (29,12%) de raiva bovina por morcegos hematófagos (Desmodus rotundus), 43 casos (15,10%) de diarreia viral bovina, 35 casos (12,28%) de brucelose por Brucella abortus e 34 casos relacionados à leucose enzoótica bovina (11,92%). No geral, as taxas de prevalência variaram de 0,24 a 15,37%. Além disso, tamanho da fazenda, presença de floresta, tamanho do rebanho e dos piquetes, frequência de corte de forragens e outras espécies animais estiveram envolvidos como fatores de risco (OR = 3,15-11,75; IC 95% 0,01-0,69). Em conclusão, existem doenças animais com sintomatologia reprodutiva e neurológica e fatores de alto risco implicados na transmissão. Portanto, estudos epidemiológicos espaço-temporais e de soroprevalência devem ser realizados em Orellana.

Análise da correlação dos índices de estrutura e recursos humanos do serviço veterinário oficial em 2019 e as incidências acumuladas (2017 ­ 2019) de doenças de notificação obrigatória em bovinos e equinos no Brasil / Analysis of the correlation between the structure and human resources indexes of the official veterinary service in 2019 and the accumulated incidences (2017 ­ 2019) of notifiable diseases in cattle and horses in Brazil

As doenças de notificação obrigatória em bovinos podem gerar impactos sociais e econômicos significativos na cadeia pecuária brasileira, além de consequências negativas no mercado internacional devido a embargos sanitários. Para auxiliar no entendimento de como um sistema de vigilância epidemiológica com mais recursos pode gerar mais credibilidade para o país, foram realizadas análises de correlação entre a notificação de doenças e a estrutura veterinária disponível nos Órgãos Executores de Sanidade Agropecuária (OESAs), a partir dos dados contidos no Sistema Nacional de Informação Zoossanitária (SIZ), entre os anos de 2017 e 2019. Com base nos dados do serviço veterinário, foram produzidos o Índice de Estrutura Física Oficial (IEFO) e o Índice de Recursos Humanos do Serviço Oficial (IRHSO). Foi realizada análise de correlação entre a notificação de doenças de bovinos com a capacidade de estrutura física e recursos humanos de vigilância epidemiológica disponíveis no Serviço Veterinário brasileiro. Os estados AP, RR e SC foram os que mais notificaram brucelose e tuberculose no período e estão entre os melhores índices de estrutura e recursos humanos do país. A análise dos índices mostrou que a raiva não possui correlação significativa com estrutura e recursos humanos do serviço, entretanto, brucelose e tuberculose possuem correlação positiva com estrutura veterinária oficial disponível para a vigilância em bovinos. Portanto, melhorias na estrutura podem refletir no incremento dos índices de notificação das doenças de bovinos, assim como na qualidade de suas informações.

Notifiable diseases in cattle can generate significant social and economic impacts on the Brazilian livestock chain, in addition to impacts on the international market due to sanitary embargoes. To help understand how an epidemiological surveillance system with more resources can generate more credibility for the country, correlation analyzes were carried out between the notification of diseases and the veterinary structure available in the Executing Bodies of Agricultural Health (OESAs), based on the data contained in the National System of Zoosanitary Information (SIZ), between the years 2017 to 2019. Based on public data from the veterinary service, the Official Physical Structure Index (IEFO) and the Official Service Human Resources Index (IRHSO) were produced. Correlation analysis was performed between the notification of bovine diseases with the capacity of physical structure and human resources for epidemiological surveillance available in the Brazilian Veterinary Service. AP, RR and SC were the states that most notified brucellosis and tuberculosis in the period and are among the best indices of structure and human resources in the country. The analysis of correlation indices showed that the rabies disease does not have a significant correlation with the structure and the human resources of the service, however, brucellosis and tuberculosis does have a positive correlation with the official veterinary structure available for surveillance in cattle. Therefore, Improvements in the structure can reflect in the increase of the notification rates, as well as in the quality of its information.

Bovine rabies in Rio Grande do Sul: positivity rates, geographical distribution, and seasonal occurrence / Raiva bovina no Rio Grande do Sul: taxas de positividade, distribuição geográfica e ocorrência sazonal

Rabies is a zoonotic disease characterized by acute viral encephalitis. It is almost 100% fatal for infected animals. While cases of human rabies have still been registered in Brazil, in the state of Rio Grande do Sul rabies is considered a controlled disease in urban areas. However, the transmission of bovine rabies – which has been largely associated with the Desmodus rotundus bat – is endemic. Additionally, there are estimates that only 10% of rabies cases are reported. Therefore, this study aimed to describe the positivity rates, geographical distribution, and seasonal occurrence of bovine rabies in RS, as well as the sampling practices in rabies surveillance. Using samples submitted for laboratory diagnosis from 2016 to 2019, we conducted a retrospective study of the sample results, positivity rates, and seasonal occurrence of rabies in cattle. Throughout these four years, less than a third of state municipalities sent samples for diagnosis, suggesting that the occurrence of rabies might still be underestimated in non-sampled areas. A higher number of rabies cases were reported in 2019, a year in which the most diagnosed samples and the highest positivity percentages were recorded. However, the case numbers registered between 2016 and 2019 were not significantly different. We found that the summer and autumn months presented statistically different positivity rates. Besides this, we did not find any positive D. rotundus samples, despite the positivity rates for bovine rabies. Active surveillance, especially of bat populations and under-sampled regions, must be strengthened to correctly estimate the impact of rabies.

A raiva é uma zoonose caracterizada por uma encefalite viral aguda, sendo fatal em quase 100% das infecções em animais. Ainda que casos humanos ainda sejam registrados no Brasil, no Rio Grande do Sul (RS) a raiva é considerada uma doença controlada em áreas urbanas. Entretanto, a transmissão da raiva bovina, que tem sido frequentemente associada ao morcego Desmodus rotundus, é endêmica. Ademais, estima-se que apenas 10% de todos os casos de raiva são notificados. Assim, este estudo buscou descrever as taxas de positividade, distribuição geográfica e a ocorrência sazonal da raiva bovina no RS, bem como as práticas de amostragem na vigilância da raiva. Utilizando amostras submetidas a diagnóstico laboratorial de 2016 a 2019, foi realizado um estudo retrospectivo dos resultados laboratoriais, taxas de positividade e ocorrência sazonal da raiva em bovinos. Ao longo dos quatro anos, menos de um terço dos municípios enviou amostras para diagnóstico, sugerindo que a ocorrência da raiva pode ainda ser subestimada em áreas sem amostragem. O maior número de casos de raiva foi notifi-cado em 2019, ano com o maior número de amostras enviadas para diagnóstico e maior taxa de positividade. Apesar disso, o número de casos registrados entre 2016 e 2019 não foram significativamente diferentes. Foram encontrados valores estatisti-camente diferentes nas taxas de positividade dos meses de verão e outono. Além disso, não foram detectadas amostras positivas de D. rotundus, apesar das taxas de positividade da raiva bovina. A vigilância ativa, especialmente das populações de morcegos e regiões não amostradas, deve ser fortalecida para mensurar adequadamente o impacto da raiva.

Bovine rabies in Rio Grande do Sul: positivity rates, geographical distribution, and seasonal occurrence / Raiva bovina no Rio Grande do Sul: taxas de positividade, distribuição geográfica e ocorrência sazonal

Rabies is a zoonotic disease characterized by acute viral encephalitis. It is almost 100% fatal for infected animals. While cases of human rabies have still been registered in Brazil, in the state of Rio Grande do Sul rabies is considered a controlled disease in urban areas. However, the transmission of bovine rabies which has been largely associated with the Desmodus rotundus bat is endemic. Additionally, there are estimates that only 10% of rabies cases are reported. Therefore, this study aimed to describe the positivity rates, geographical distribution, and seasonal occurrence of bovine rabies in RS, as well as the sampling practices in rabies surveillance. Using samples submitted for laboratory diagnosis from 2016 to 2019, we conducted a retrospective study of the sample results, positivity rates, and seasonal occurrence of rabies in cattle. Throughout these four years, less than a third of state municipalities sent samples for diagnosis, suggesting that the occurrence of rabies might still be underestimated in non-sampled areas. A higher number of rabies cases were reported in 2019, a year in which the most diagnosed samples and the highest positivity percentages were recorded. However, the case numbers registered between 2016 and 2019 were not significantly different. We found that the summer and autumn months presented statistically different positivity rates. Besides this, we did not find any positive D. rotundus samples, despite the positivity rates for bovine rabies. Active surveillance, especially of bat populations and under-sampled regions, must be strengthened to correctly estimate the impact of rabies.(AU)

A raiva é uma zoonose caracterizada por uma encefalite viral aguda, sendo fatal em quase 100% das infecções em animais. Ainda que casos humanos ainda sejam registrados no Brasil, no Rio Grande do Sul (RS) a raiva é considerada uma doença controlada em áreas urbanas. Entretanto, a transmissão da raiva bovina, que tem sido frequentemente associada ao morcego Desmodus rotundus, é endêmica. Ademais, estima-se que apenas 10% de todos os casos de raiva são notificados. Assim, este estudo buscou descrever as taxas de positividade, distribuição geográfica e a ocorrência sazonal da raiva bovina no RS, bem como as práticas de amostragem na vigilância da raiva. Utilizando amostras submetidas a diagnóstico laboratorial de 2016 a 2019, foi realizado um estudo retrospectivo dos resultados laboratoriais, taxas de positividade e ocorrência sazonal da raiva em bovinos. Ao longo dos quatro anos, menos de um terço dos municípios enviou amostras para diagnóstico, sugerindo que a ocorrência da raiva pode ainda ser subestimada em áreas sem amostragem. O maior número de casos de raiva foi notifi-cado em 2019, ano com o maior número de amostras enviadas para diagnóstico e maior taxa de positividade. Apesar disso, o número de casos registrados entre 2016 e 2019 não foram significativamente diferentes. Foram encontrados valores estatisti-camente diferentes nas taxas de positividade dos meses de verão e outono. Além disso, não foram detectadas amostras positivas de D. rotundus, apesar das taxas de positividade da raiva bovina. A vigilância ativa, especialmente das populações de morcegos e regiões não amostradas, deve ser fortalecida para mensurar adequadamente o impacto da raiva.(AU)

Influence of euthanasia, the intensity of inflammatory lesion and viral load in the laboratory diagnosis of rabies in cattle / Influência da eutanásia, intensidade da lesão inflamatória e carga viral no diagnóstico laboratorial da raiva em bovinos

This research reports the use of different diagnostic tests in cattle, naturally infected by Rabies lyssavirus (RABV), and correlates the positivity of the tests with the clinical moment of euthanasia, the intensity of the inflammatory lesion and viral load. It also highlights the possibility of euthanasia in early stages of the disease as a way to improve animal welfare. For that, samples of 34 bovine brains were collected for analysis, preserved in 10% buffered formaline and refrigerated with subsequent freezing. The samples were subjected to direct immunofluorescence antibody technique (DFAT) tests, viral isolation in cell culture (VICC), histopathology with hematoxylin and eosin staining (HE), immunohistochemistry (IHC), Shorr stainied neural tissue smears (DSS), Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and polymerase chain reaction by quantitative reverse transcriptase (qRT-PCR). The areas used for analysis were the cerebellum, parietal telencephalon and thalamus. Samples with Negri bodies (NBs) or immunostaining in at least one of the analyzed areas were considered positive. For the study of the intensity of histological lesions, the lesions were classified into grades 0, 1, 2 and 3 and the positivity of the test in the presence or absence of NBs in one of the three areas analyzed. To verify the influence of the disease clinical evolution, 4-four groups of analysis were created according to the animal's clinical status at moment of the euthanasia, being: M1 = animal euthanized while standing, M2 = euthanized when in sternal recumbence, M3 = euthanized when in lateral recumbence, M4 = animal with natural death. Of the 34 brains evaluated, IHC was positive in 100% of cases, DFAT was positive in 97.05% of them, and in this negative sample the presence of RABV was confirmed by VICC. NBs ere seen in 88.23% of the cases, and the DSS test was positive in 82.35% of them.(AU)

Esta pesquisa relata a utilização de diferentes testes de diagnóstico em bovinos, naturalmente infectados pelo Rabies lyssavirus (RABV), e correlaciona a positividade dos testes com o momento clínico da eutanásia, a intensidade da lesão inflamatória, e a carga viral. Salienta também a possibilidade da eutanásia em estágios precoces da doença como forma de melhorar o bem-estar animal. Para isso amostras de 34 encéfalos bovinos foram coletados para análise, conservadas em formol tamponado 10% e sob refrigeração com posterior congelamento. As amostras foram submetidas aos testes de imunofluorescência direta (IFD), isolamento viral em cultivo de células (IVCC), histopatologia com coloração de hematoxilina e eosina (HE), imuno-histoquímica (IHQ), esfregaço direto com coloração de Shorr (EDS), reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa (RT-PCR) e reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa quantitativo (qRT-PCR). As áreas utilizadas para análise foram o cerebelo, telencéfalo parietal e tálamo. Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram Corpúsculo de Negri (CNs) ou imuno-marcação em ao menos uma das áreas analisadas. Para o estudo da intensidade das lesões histológicas, as lesões foram classificadas em graus 0, 1, 2 e 3 e a positividade do teste na presença ou ausência de CN em uma das três áreas analisadas.(AU)

Influence of euthanasia, the intensity of inflammatory lesion and viral load in the laboratory diagnosis of rabies in cattle / Influência da eutanásia, intensidade da lesão inflamatória e carga viral no diagnóstico laboratorial da raiva em bovinos

This research reports the use of different diagnostic tests in cattle, naturally infected by Rabies lyssavirus (RABV), and correlates the positivity of the tests with the clinical moment of euthanasia, the intensity of the inflammatory lesion and viral load. It also highlights the possibility of euthanasia in early stages of the disease as a way to improve animal welfare. For that, samples of 34 bovine brains were collected for analysis, preserved in 10% buffered formaline and refrigerated with subsequent freezing. The samples were subjected to direct immunofluorescence antibody technique (DFAT) tests, viral isolation in cell culture (VICC), histopathology with hematoxylin and eosin staining (HE), immunohistochemistry (IHC), Shorr stainied neural tissue smears (DSS), Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and polymerase chain reaction by quantitative reverse transcriptase (qRT-PCR). The areas used for analysis were the cerebellum, parietal telencephalon and thalamus. Samples with Negri bodies (NBs) or immunostaining in at least one of the analyzed areas were considered positive. For the study of the intensity of histological lesions, the lesions were classified into grades 0, 1, 2 and 3 and the positivity of the test in the presence or absence of NBs in one of the three areas analyzed. To verify the influence of the disease clinical evolution, 4-four groups of analysis were created according to the animal's clinical status at moment of the euthanasia, being: M1 = animal euthanized while standing, M2 = euthanized when in sternal recumbence, M3 = euthanized when in lateral recumbence, M4 = animal with natural death. Of the 34 brains evaluated, IHC was positive in 100% of cases, DFAT was positive in 97.05% of them, and in this negative sample the presence of RABV was confirmed by VICC. NBs ere seen in 88.23% of the cases, and the DSS test was positive in 82.35% of them. All diagnostic techniques showed positive cases in all groups analyzed. Each case was positive in at least two diagnostic methods. All cases that contained NBs were positive for rabies in the other tests. In this study, it was observed that the variables analyzed (intensity of injury and clinical evolution at the moment of euthanasia) had an influence only on HE and DSS techniques, which are based on NB research to form the diagnosis, but did not interfere with the effectiveness of the diagnosis performed by detecting the viral antigen performed by DFAT and IHC. All isolated RABV samples included in the present study have a genetic lineage characteristic of hematophagous bats Desmodus rotundus. The evaluation of qRT-PCR showed that the amount of virus did not interfere in the positivity of the tests. This work shows that IHC and DFAT are safe diagnostic techniques. They are capable of detecting RABV even in euthanized animals in the early stages of clinical evolution with mild intensities of histological lesions.(AU)

Esta pesquisa relata a utilização de diferentes testes de diagnóstico em bovinos, naturalmente infectados pelo Rabies lyssavirus (RABV), e correlaciona a positividade dos testes com o momento clínico da eutanásia, a intensidade da lesão inflamatória, e a carga viral. Salienta também a possibilidade da eutanásia em estágios precoces da doença como forma de melhorar o bem-estar animal. Para isso amostras de 34 encéfalos bovinos foram coletados para análise, conservadas em formol tamponado 10% e sob refrigeração com posterior congelamento. As amostras foram submetidas aos testes de imunofluorescência direta (IFD), isolamento viral em cultivo de células (IVCC), histopatologia com coloração de hematoxilina e eosina (HE), imuno-histoquímica (IHQ), esfregaço direto com coloração de Shorr (EDS), reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa (RT-PCR) e reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa quantitativo (qRT-PCR). As áreas utilizadas para análise foram o cerebelo, telencéfalo parietal e tálamo. Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram Corpúsculo de Negri (CNs) ou imuno-marcação em ao menos uma das áreas analisadas. Para o estudo da intensidade das lesões histológicas, as lesões foram classificadas em graus 0, 1, 2 e 3 e a positividade do teste na presença ou ausência de CN em uma das três áreas analisadas. Para verificar a influência da evolução clínica da doença foram criados 4 grupos de análise conforme o estado clínico do animal no momento da eutanásia, sendo: M1 = animal eutanasiado em estação, M2 = eutanasiado em decúbito esternal, M3 = eutanasiado em decúbito lateral, M4 = animal com morte natural. Dos 34 encéfalos avaliados a IHQ foi positiva em 100% dos casos, a IFD foi positiva em 97,05%, sendo que na amostra negativa a presença de RABV foi confirmada por IVCC. A histologia com HE, através da visualização das CNs, foi positiva em 88,23 % dos casos, e o teste de EDS, foi positivo em 82,35%. Todas as técnicas de diagnóstico apresentaram casos positivos em todos os grupos analisados. Cada caso foi positivo em, pelo menos, dois métodos de diagnóstico. Todos os casos que continham CN foram positivos para raiva nos demais testes. Nesse estudo observou-se que as variáveis analisadas intensidade de lesão e evolução clínica no momento da eutanásia tiveram influência somente nas técnicas de HE e EDS, que se baseiam na pesquisa do CN para formação do diagnóstico, mas não interferiram na eficácia do diagnóstico realizado através da detecção do antígeno viral realizado por IFD e IHQ. Todas as amostras RABV isoladas incluídas no presente estudo apresentam linhagem genética característica de morcegos hematófagos Desmodus rotundus. A avaliação de qRT-PCR demostrou que a quantidade de vírus não interferiu na positividade dos testes. Esse trabalho mostra que a IHQ e a IFD são técnicas seguras de diagnóstico e que mesmo em animais eutanasiados em estágios iniciais de evolução clínica com intensidades leve de lesões histológicas, são capazes de detectar o RABV.(AU)

Influence of euthanasia, the intensity of inflammatory lesion and viral load in the laboratory diagnosis of rabies in cattle

ABSTRACT: This research reports the use of different diagnostic tests in cattle, naturally infected by Rabies lyssavirus (RABV), and correlates the positivity of the tests with the clinical moment of euthanasia, the intensity of the inflammatory lesion and viral load. It also highlights the possibility of euthanasia in early stages of the disease as a way to improve animal welfare. For that, samples of 34 bovine brains were collected for analysis, preserved in 10% buffered formaline and refrigerated with subsequent freezing. The samples were subjected to direct immunofluorescence antibody technique (DFAT) tests, viral isolation in cell culture (VICC), histopathology with hematoxylin and eosin staining (HE), immunohistochemistry (IHC), Shorr stainied neural tissue smears (DSS), Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and polymerase chain reaction by quantitative reverse transcriptase (qRT-PCR). The areas used for analysis were the cerebellum, parietal telencephalon and thalamus. Samples with Negri bodies (NBs) or immunostaining in at least one of the analyzed areas were considered positive. For the study of the intensity of histological lesions, the lesions were classified into grades 0, 1, 2 and 3 and the positivity of the test in the presence or absence of NBs in one of the three areas analyzed. To verify the influence of the disease clinical evolution, 4-four groups of analysis were created according to the animals clinical status at moment of the euthanasia, being: M1 = animal euthanized while standing, M2 = euthanized when in sternal recumbence, M3 = euthanized when in lateral recumbence, M4 = animal with natural death. Of the 34 brains evaluated, IHC was positive in 100% of cases, DFAT was positive in 97.05% of them, and in this negative sample the presence of RABV was confirmed by VICC. NBs ere seen in 88.23% of the cases, and the DSS test was positive in 82.35% of them. All diagnostic techniques showed positive cases in all groups analyzed. Each case was positive in at least two diagnostic methods. All cases that contained NBs were positive for rabies in the other tests. In this study, it was observed that the variables analyzed (intensity of injury and clinical evolution at the moment of euthanasia) had an influence only on HE and DSS techniques, which are based on NB research to form the diagnosis, but did not interfere with the effectiveness of the diagnosis performed by detecting the viral antigen performed by DFAT and IHC. All isolated RABV samples included in the present study have a genetic lineage characteristic of hematophagous bats Desmodus rotundus. The evaluation of qRT-PCR showed that the amount of virus did not interfere in the positivity of the tests. This work shows that IHC and DFAT are safe diagnostic techniques. They are capable of detecting RABV even in euthanized animals in the early stages of clinical evolution with mild intensities of histological lesions.

RESUMO: Esta pesquisa relata a utilização de diferentes testes de diagnóstico em bovinos, naturalmente infectados pelo Rabies lyssavirus (RABV), e correlaciona a positividade dos testes com o momento clínico da eutanásia, a intensidade da lesão inflamatória, e a carga viral. Salienta também a possibilidade da eutanásia em estágios precoces da doença como forma de melhorar o bem-estar animal. Para isso amostras de 34 encéfalos bovinos foram coletados para análise, conservadas em formol tamponado 10% e sob refrigeração com posterior congelamento. As amostras foram submetidas aos testes de imunofluorescência direta (IFD), isolamento viral em cultivo de células (IVCC), histopatologia com coloração de hematoxilina e eosina (HE), imuno-histoquímica (IHQ), esfregaço direto com coloração de Shorr (EDS), reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa (RT-PCR) e reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa quantitativo (qRT-PCR). As áreas utilizadas para análise foram o cerebelo, telencéfalo parietal e tálamo. Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram Corpúsculo de Negri (CNs) ou imuno-marcação em ao menos uma das áreas analisadas. Para o estudo da intensidade das lesões histológicas, as lesões foram classificadas em graus 0, 1, 2 e 3 e a positividade do teste na presença ou ausência de CN em uma das três áreas analisadas. Para verificar a influência da evolução clínica da doença foram criados 4 grupos de análise conforme o estado clínico do animal no momento da eutanásia, sendo: M1 = animal eutanasiado em estação, M2 = eutanasiado em decúbito esternal, M3 = eutanasiado em decúbito lateral, M4 = animal com morte natural. Dos 34 encéfalos avaliados a IHQ foi positiva em 100% dos casos, a IFD foi positiva em 97,05%, sendo que na amostra negativa a presença de RABV foi confirmada por IVCC. A histologia com HE, através da visualização das CNs, foi positiva em 88,23 % dos casos, e o teste de EDS, foi positivo em 82,35%. Todas as técnicas de diagnóstico apresentaram casos positivos em todos os grupos analisados. Cada caso foi positivo em, pelo menos, dois métodos de diagnóstico. Todos os casos que continham CN foram positivos para raiva nos demais testes. Nesse estudo observou-se que as variáveis analisadas intensidade de lesão e evolução clínica no momento da eutanásia tiveram influência somente nas técnicas de HE e EDS, que se baseiam na pesquisa do CN para formação do diagnóstico, mas não interferiram na eficácia do diagnóstico realizado através da detecção do antígeno viral realizado por IFD e IHQ. Todas as amostras RABV isoladas incluídas no presente estudo apresentam linhagem genética característica de morcegos hematófagos Desmodus rotundus. A avaliação de qRT-PCR demostrou que a quantidade de vírus não interferiu na positividade dos testes. Esse trabalho mostra que a IHQ e a IFD são técnicas seguras de diagnóstico e que mesmo em animais eutanasiados em estágios iniciais de evolução clínica com intensidades leve de lesões histológicas, são capazes de detectar o RABV.

Meningoencephalitis caused by Bovine alphaherpesvirus 5 in Pernambuco, Brazil / [Meningoencefalite causada pelo Bovine alphaherpesvirus 5 em Pernambuco, Brasil]

Objetivou-se descrever a ocorrência do Bovine alphaherpesvirus 5 (BoHV5) como causa de meningoencefalite não supurativa em bovinos do estado de Pernambuco, Brasil. Para tanto, 32 amostras de sistema nervoso embebidas em parafina foram obtidas de animais acometidos por doenças neurológicas atendidos na Clínica de Bovinos de Garanhuns da Universidade Federal Rural de Pernambuco (CBG-UFRPE), entre 2012 e 2016. As amostras foram analisadas quanto à presença do gene da glicoproteína C do BoHV5 por reação em cadeia da polimerase (PCR). Dois animais (6,25%) tiveram resultado positivo à PCR, e sua análise de sequenciamento indicou 100% de similaridade para o BoHV5. Os resultados histopatológicos desses dois animais revelaram lesões multifocais de meningoencefalite não supurativa associada à polioencefalomalácia, presença de corpúsculos de inclusão basofílicos, infiltração de células de Gitter e presença de manguitos perivasculares. A PCR se mostra uma importante ferramenta para diferenciação das infecções por BoHV5 de outras enfermidades neurológicas de bovinos, especialmente a raiva.(AU)

Cattle rabies: the effect of clinical evolution, viral genetic lineage, and viral load on the severity of histological lesions / Raiva bovina: relação do curso clínico, da linhagem genética do vírus e carga viral com a intensidade de lesões histológicas

Our objective was the characterization and staging of histological lesions in different anatomical sites of the central nervous system (CNS) of rabid cattle. The severity of the lesions was compared with the clinical stages of the disease, the variants of viral isolates, and with the load of virus. Thirty-one spontaneously affected rabid cattle the state of Santa Catarina underwent clinical follow-up and were eventually necropsied. CNS tissues were sampled and submitted to direct fluorescent antibody technique (DFAT), immunohistochemistry (IHC), routine histopathology with hematoxylin and eosin stain (HE), reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR), and polymerase chain reaction in quantitative reverse transcriptase in real time (qRT-PCR). Affected cattle were allotted in four groups according to their clinical stage when euthanized: G1, euthanized while standing; G2, euthanized when in sternal recumbence; G3, euthanized when in lateral recumbence; and G4, affected cattle with natural death. In order to evaluate the degree of severity of the lesions and the presence of Negri bodies (NBs), the brain was sectioned at 9 sites. Additionally, spinal cord and trigeminal ganglion sections were examined. The intensity of the lesions was graded as either absent, mild, moderate, or marked, and the presence or absence of the NBs was noted. Histological lesions were characterized by lymphocytic and monocytic meningoencephalitis with NBs in 28 cases. In all analyzed groups, intensities of histological lesions ranging from mild to severe were observed. Brain regions with the highest inflammatory lesion intensity were the medulla at the level of obex, followed by the colliculus and thalamus. NBs were observed in a higher percentage in the cerebellum, followed by medulla at the obex level, striatum complex, and frontal telencephalon. The duration of the clinical course of the disease did not influence the intensity of the inflammatory lesion, but it did influence the presence of NBs, with a higher percentage of these inclusions in cattle that died naturally than in euthanized cattle. All isolated rhabdovirus included in this study were genetically compatible with samples from hematophagous bats Desmodus rotundus. The evaluation by qRT-PCR did not demonstrate a correlation between lesion intensity and the amount of virus.(AU)

Nosso objetivo foi a caracterização e estadiamento de lesões histológicas em diferentes locais anatômicos do sistema nervoso central (SNC) de bovinos raivosos. A gravidade das lesões foi comparada com os estágios clínicos da doença, as variantes dos isolados virais e com a quantidade de vírus. Trinta e um bovinos do estado de Santa Catarina, afetados naturalmente por raiva, foram acompanhados clinicalmente e, ao final, necropsiados. Os tecidos do SNC foram amostrados e submetidos a imunofluorescência direta, imunohistoquímica, histopatologia de rotina, reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa (RT-PCR) e reação em cadeia da polimerase em transcriptase reversa quantitativa em tempo real (qRT-PCR). Os bovinos afetados foram distribuídos em quatro grupos, de acordo com sua fase clínica: G1, eutanasiados quando ainda se mantinham em pé; G2, eutanasiados quando em decúbito esternal; G3, eutanasiados quando em decúbito lateral; e G4, bovinos afetados com morte natural. Para avaliar o grau de gravidade das lesões e a presença de corpúsculos de Negri (CNs), o cérebro foi seccionado em 9 locais. Além disso, seções da medula espinhal e do gânglio trigêmeo foram examinadas. A intensidade das lesões foi graduada como ausente, leve, moderada ou acentuada, e a presença ou ausência dos CNs foi anotada. Lesões histológicas foram caracterizadas por meningoencefalite linfocítica e monocítica com CNs em 28 casos. Em todos os grupos analisados foram observadas intensidades de lesões histológicas variando de leve a grave. As regiões cerebrais com maior intensidade de lesão inflamatória foram o bulbo no nível do obex, seguido do colículo e tálamo. CNs foram mais prevalentes no cerebelo, seguido pelo bulbo ao nível do óbex, corpo estriado e telencéfalo frontal. A duração do curso clínico da raiva não influenciou a intensidade da lesão inflamatória, mas influenciou a presença de CNs, com maior porcentagem dessas inclusões em bovinos que morreram naturalmente do que em bovinos sacrificados. Todos os isolados rabdovírus obtidos neste estudo eram geneticamente compatíveis com amostras provenientes de morcegos hematófagos Desmodus rotundus.(AU)

Cattle rabies: the effect of clinical evolution, viral genetic lineage, and viral load on the severity of histological lesions / Raiva bovina: relação do curso clínico, da linhagem genética do vírus e carga viral com a intensidade de lesões histológicas

Our objective was the characterization and staging of histological lesions in different anatomical sites of the central nervous system (CNS) of rabid cattle. The severity of the lesions was compared with the clinical stages of the disease, the variants of viral isolates, and with the load of virus. Thirty-one spontaneously affected rabid cattle the state of Santa Catarina underwent clinical follow-up and were eventually necropsied. CNS tissues were sampled and submitted to direct fluorescent antibody technique (DFAT), immunohistochemistry (IHC), routine histopathology with hematoxylin and eosin stain (HE), reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR), and polymerase chain reaction in quantitative reverse transcriptase in real time (qRT-PCR). Affected cattle were allotted in four groups according to their clinical stage when euthanized: G1, euthanized while standing; G2, euthanized when in sternal recumbence; G3, euthanized when in lateral recumbence; and G4, affected cattle with natural death. In order to evaluate the degree of severity of the lesions and the presence of Negri bodies (NBs), the brain was sectioned at 9 sites. Additionally, spinal cord and trigeminal ganglion sections were examined. The intensity of the lesions was graded as either absent, mild, moderate, or marked, and the presence or absence of the NBs was noted. Histological lesions were characterized by lymphocytic and monocytic meningoencephalitis with NBs in 28 cases. In all analyzed groups, intensities of histological lesions ranging from mild to severe were observed. Brain regions with the highest inflammatory lesion intensity were the medulla at the level of obex, followed by the colliculus and thalamus. NBs were observed in a higher percentage in the cerebellum, followed by medulla at the obex level, striatum complex, and frontal telencephalon. The duration of the clinical course of the disease did not influence the intensity of the inflammatory lesion, but it did influence the presence of NBs, with a higher percentage of these inclusions in cattle that died naturally than in euthanized cattle. All isolated rhabdovirus included in this study were genetically compatible with samples from hematophagous bats Desmodus rotundus. The evaluation by qRT-PCR did not demonstrate a correlation between lesion intensity and the amount of virus.(AU)

Nosso objetivo foi a caracterização e estadiamento de lesões histológicas em diferentes locais anatômicos do sistema nervoso central (SNC) de bovinos raivosos. A gravidade das lesões foi comparada com os estágios clínicos da doença, as variantes dos isolados virais e com a quantidade de vírus. Trinta e um bovinos do estado de Santa Catarina, afetados naturalmente por raiva, foram acompanhados clinicalmente e, ao final, necropsiados. Os tecidos do SNC foram amostrados e submetidos a imunofluorescência direta, imunohistoquímica, histopatologia de rotina, reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa (RT-PCR) e reação em cadeia da polimerase em transcriptase reversa quantitativa em tempo real (qRT-PCR). Os bovinos afetados foram distribuídos em quatro grupos, de acordo com sua fase clínica: G1, eutanasiados quando ainda se mantinham em pé; G2, eutanasiados quando em decúbito esternal; G3, eutanasiados quando em decúbito lateral; e G4, bovinos afetados com morte natural. Para avaliar o grau de gravidade das lesões e a presença de corpúsculos de Negri (CNs), o cérebro foi seccionado em 9 locais. Além disso, seções da medula espinhal e do gânglio trigêmeo foram examinadas. A intensidade das lesões foi graduada como ausente, leve, moderada ou acentuada, e a presença ou ausência dos CNs foi anotada. Lesões histológicas foram caracterizadas por meningoencefalite linfocítica e monocítica com CNs em 28 casos. Em todos os grupos analisados foram observadas intensidades de lesões histológicas variando de leve a grave. As regiões cerebrais com maior intensidade de lesão inflamatória foram o bulbo no nível do obex, seguido do colículo e tálamo. CNs foram mais prevalentes no cerebelo, seguido pelo bulbo ao nível do óbex, corpo estriado e telencéfalo frontal. A duração do curso clínico da raiva não influenciou a intensidade da lesão inflamatória, mas influenciou a presença de CNs, com maior porcentagem dessas inclusões em bovinos que morreram naturalmente do que em bovinos sacrificados. Todos os isolados rabdovírus obtidos neste estudo eram geneticamente compatíveis com amostras provenientes de morcegos hematófagos Desmodus rotundus.(AU)

Livestock rabies in Pará state, Brazil: a descriptive study (2004 to 2013) / Raiva em herbívoros no estado do Pará, Brasil: estudo descritivo (2004 a 2013)

Rabies is an important zoonosis to public health associated with lethal encephalitis and economic losses. Analysis of its spatial distribution is a meaningful tool in understanding its dispersion, which may contribute to the control and prophylaxis of the disease. This study analyzed the spatial-temporal distribution of rabies outbreaks in livestock in Pará state, Brazil, from 2004 to 2013. We used records of neurological syndromes obtained from the state's livestock authority (Adepará). The analysis recorded 711 neurological syndromes reports in livestock, of which 32.8% were positive for rabies. In 8% of the neurological syndromes (n=57) was not possible to perform the analysis because of bad-packaging conditions of the samples sent. Outbreaks involved at least 1,179 animals and cattle were the most affected animal species (76.8%). The numbers of reported neurological syndromes and of rabies outbreak shad strong positive correlation and exhibited decreasing linear trend. Spatially, most outbreaks occurred in two mesoregions in Pará (Northeast and Southeast). One of the justifications for this spatial distribution may be related with the distribution of the animals in the state, since these mesoregions are the largest cattle producers in Pará and have most of their territory deforested for pasture implementation.(AU)

A raiva é uma zoonose importante para a saúde pública associada à encefalite letal e às perdas econômicas. A análise de sua distribuição espacial é uma ferramenta importante no entendimento de sua dispersão, o que pode contribuir para o controle e a profilaxia da doença. Este estudo analisou a distribuição espaço-temporal do surto de raiva em rebanhos no estado do Pará, Brasil, entre 2004 e 2013. Foram utilizados registros de síndromes neurológicas obtidas junto à agência de defesa agropecuária do estado (Adepará). A análise revelou 711 notificações de síndromes neurológicas em herbívoros, das quais 32,8% foram positivas para raiva. Em 8% das síndromes neurológicas (n=57) não foi possível realizar as análises devido às más condições das amostras enviadas. Surtos envolveram pelo menos 1.179 animais e os bovinos foram a espécie animal mais afetada (76,8%). Os números de síndromes neurológicas relatadas e de surtos de raiva apresentam forte correlação positiva e exibem tendência linear decrescente. Espacialmente, a maioria dos surtos ocorreu em duas mesorregiões no Pará (Nordeste e Sudeste). Uma das justificativas para essa distribuição espacial pode estar relacionada à distribuição dos animais no estado, uma vez que essas mesorregiões são os maiores produtores de gado do Pará e possuem grande parte do seu território desflorestado para implantação de pastagens.(AU)

Livestock rabies in Pará state, Brazil: a descriptive study (2004 to 2013) / Raiva em herbívoros no estado do Pará, Brasil: estudo descritivo (2004 a 2013)

Rabies is an important zoonosis to public health associated with lethal encephalitis and economic losses. Analysis of its spatial distribution is a meaningful tool in understanding its dispersion, which may contribute to the control and prophylaxis of the disease. This study analyzed the spatial-temporal distribution of rabies outbreaks in livestock in Pará state, Brazil, from 2004 to 2013. We used records of neurological syndromes obtained from the state's livestock authority (Adepará). The analysis recorded 711 neurological syndromes reports in livestock, of which 32.8% were positive for rabies. In 8% of the neurological syndromes (n=57) was not possible to perform the analysis because of bad-packaging conditions of the samples sent. Outbreaks involved at least 1,179 animals and cattle were the most affected animal species (76.8%). The numbers of reported neurological syndromes and of rabies outbreak shad strong positive correlation and exhibited decreasing linear trend. Spatially, most outbreaks occurred in two mesoregions in Pará (Northeast and Southeast). One of the justifications for this spatial distribution may be related with the distribution of the animals in the state, since these mesoregions are the largest cattle producers in Pará and have most of their territory deforested for pasture implementation.(AU)

A raiva é uma zoonose importante para a saúde pública associada à encefalite letal e às perdas econômicas. A análise de sua distribuição espacial é uma ferramenta importante no entendimento de sua dispersão, o que pode contribuir para o controle e a profilaxia da doença. Este estudo analisou a distribuição espaço-temporal do surto de raiva em rebanhos no estado do Pará, Brasil, entre 2004 e 2013. Foram utilizados registros de síndromes neurológicas obtidas junto à agência de defesa agropecuária do estado (Adepará). A análise revelou 711 notificações de síndromes neurológicas em herbívoros, das quais 32,8% foram positivas para raiva. Em 8% das síndromes neurológicas (n=57) não foi possível realizar as análises devido às más condições das amostras enviadas. Surtos envolveram pelo menos 1.179 animais e os bovinos foram a espécie animal mais afetada (76,8%). Os números de síndromes neurológicas relatadas e de surtos de raiva apresentam forte correlação positiva e exibem tendência linear decrescente. Espacialmente, a maioria dos surtos ocorreu em duas mesorregiões no Pará (Nordeste e Sudeste). Uma das justificativas para essa distribuição espacial pode estar relacionada à distribuição dos animais no estado, uma vez que essas mesorregiões são os maiores produtores de gado do Pará e possuem grande parte do seu território desflorestado para implantação de pastagens.(AU)

Evaluation of data input in a rabies testing request form for herbivores / Avaliação da entrada de dados em um formulário de requisição de exame de raiva para herbívoros

Bovines and equines are the domestic animals with the highest incidence of rabies in Brazil. This study evaluated the data input in testing request forms for rabies in herbivores accompanying samples sent to a certified laboratory of rabies diagnosis in the state of Rio Grande do Sul, Brazil. Information was obtained systematically from all forms sent to the laboratory in 2013 and 2014 using a collection instrument that listed variables about the kind of form used, municipality of origin, description of the suspected animal, clinical signs, sample collection, and conservation procedure. The 11 most relevant variables (municipality of origin, geographic coordinates, species, gender, breed, age, herd size, clinical signs, persistence of clinical signs, biological material, and sample conservation) were assessed for the quality of the data entered, and percentage data input was calculated per form. In total, 603 forms were sent to the laboratory. The most used form was the FORM SN, (82.0%, 497/603). "Excellent" and "good" data inputs were observed only for one variable describing the location of suspected rabies cases or outbreaks and animals (species, gender, biological material). Quality of data input of variables describing geographic coordinates, age, breed, herd size, clinical signs, persistence of signs, and sample conservation method varied between "average" and "poor". The data input in testing request forms for herbivores are not dully supplied in suspected cases neurological syndromes, pointing to the need to increase awareness and improve training of field staff.(AU)

Bovinos e equinos são os animais domésticos com maior incidência de raiva no Brasil. Este estudo avaliou formulários de solicitação de testes para raiva em herbívoros acompanhando amostras enviadas a um laboratório certificado de diagnóstico de raiva no estado do Rio Grande do Sul, Brasil. As informações foram obtidas sistematicamente de todos os formulários enviados ao laboratório em 2013 e 2014 utilizando um instrumento de coleta que selecionou variáveis sobre o tipo de formulário utilizado, município de origem, descrição do animal suspeito, sinais clínicos, coleta de amostra e procedimento de conservação. As 11 variáveis mais relevantes (município de origem, coordenadas geográficas, espécie, gênero, raça, idade, tamanho do rebanho, sinais clínicos, persistência de sinais clínicos, material biológico e conservação da amostra) foram avaliadas quanto à qualidade dos dados inseridos, e os dados percentuais foram calculados por formulário. No total, 603 formulários foram enviados para o laboratório. O formulário mais utilizado foi o FORM SN, (82,0%, 497/603). Dados classificados como "excelentes" e "bons" foram observados apenas para uma variável que descreve a localização de casos suspeitos de raiva ou surtos e animais (espécie, gênero, material biológico). A qualidade da entrada dos dados das variáveis que descrevem coordenadas geográficas, idade, raça, tamanho do rebanho, sinais clínicos, persistência de sinais e método de conservação da amostra variou entre "regular" e "ruim". A qualidade dos dados dos formulários de solicitação de testes para herbívoros não foi devidamente fornecida em casos suspeitos de síndromes neurológicas, apontando para a necessidade de aumentar a conscientização e melhorar o treinamento do pessoal de campo.(AU)

Evaluation of data input in a rabies testing request form for herbivores / Avaliação da entrada de dados em um formulário de requisição de exame de raiva para herbívoros

Bovines and equines are the domestic animals with the highest incidence of rabies in Brazil. This study evaluated the data input in testing request forms for rabies in herbivores accompanying samples sent to a certified laboratory of rabies diagnosis in the state of Rio Grande do Sul, Brazil. Information was obtained systematically from all forms sent to the laboratory in 2013 and 2014 using a collection instrument that listed variables about the kind of form used, municipality of origin, description of the suspected animal, clinical signs, sample collection, and conservation procedure. The 11 most relevant variables (municipality of origin, geographic coordinates, species, gender, breed, age, herd size, clinical signs, persistence of clinical signs, biological material, and sample conservation) were assessed for the quality of the data entered, and percentage data input was calculated per form. In total, 603 forms were sent to the laboratory. The most used form was the FORM SN, (82.0%, 497/603). "Excellent" and "good" data inputs were observed only for one variable describing the location of suspected rabies cases or outbreaks and animals (species, gender, biological material). Quality of data input of variables describing geographic coordinates, age, breed, herd size, clinical signs, persistence of signs, and sample conservation method varied between "average" and "poor". The data input in testing request forms for herbivores are not dully supplied in suspected cases neurological syndromes, pointing to the need to increase awareness and improve training of field staff.(AU)

Bovinos e equinos são os animais domésticos com maior incidência de raiva no Brasil. Este estudo avaliou formulários de solicitação de testes para raiva em herbívoros acompanhando amostras enviadas a um laboratório certificado de diagnóstico de raiva no estado do Rio Grande do Sul, Brasil. As informações foram obtidas sistematicamente de todos os formulários enviados ao laboratório em 2013 e 2014 utilizando um instrumento de coleta que selecionou variáveis sobre o tipo de formulário utilizado, município de origem, descrição do animal suspeito, sinais clínicos, coleta de amostra e procedimento de conservação. As 11 variáveis mais relevantes (município de origem, coordenadas geográficas, espécie, gênero, raça, idade, tamanho do rebanho, sinais clínicos, persistência de sinais clínicos, material biológico e conservação da amostra) foram avaliadas quanto à qualidade dos dados inseridos, e os dados percentuais foram calculados por formulário. No total, 603 formulários foram enviados para o laboratório. O formulário mais utilizado foi o FORM SN, (82,0%, 497/603). Dados classificados como "excelentes" e "bons" foram observados apenas para uma variável que descreve a localização de casos suspeitos de raiva ou surtos e animais (espécie, gênero, material biológico). A qualidade da entrada dos dados das variáveis que descrevem coordenadas geográficas, idade, raça, tamanho do rebanho, sinais clínicos, persistência de sinais e método de conservação da amostra variou entre "regular" e "ruim". A qualidade dos dados dos formulários de solicitação de testes para herbívoros não foi devidamente fornecida em casos suspeitos de síndromes neurológicas, apontando para a necessidade de aumentar a conscientização e melhorar o treinamento do pessoal de campo.(AU)

Cerebrospinal fluid analysis in 58 ruminants showing neurological disorders / Análise do líquido cefalorraquidiano em 58 ruminantes com distúrbios neurológicos

Ruminants may be affected by a wide variety of central nervous system (CNS) diseases. Cerebrospinal fluid (CSF) analysis forms the basis for ante mortem diagnostic evaluation of ruminants with clinical signs involving the CNS. Despite its importance as a tool to aid diagnosis, data regarding CSF examinations in spontaneous cases of CNS diseases in ruminants from Brazil are limited, and most reports involve experimental studies. Therefore, this study aimed to report the results of CSF analysis in 58 ruminants showing signs of neurological disorders. CSF samples for analysis were obtained from 32 cattle, 20 sheep, and 6 goats by cerebello-medullary cistern (n=54) or lumbosacral space (n=4) puncture. These ruminants showed neurological signs related to viral (n=13), mycotic (n=3), or bacterial (n=15) infections, and toxic (n=21), traumatic (n=4), or congenital disorders (n=2). CSF analysis from ruminants with viral infections presented lymphocytic pleocytosis, even though CSF showed no changes in several cases of rabies. Neutrophilic pleocytosis, cloudiness, presence of fibrin clots, and abnormal coloration were evident in the CSF of most cases of CNS bacterial infection, such as meningoencephalitis, meningitis, abscesses, myelitis, and a case of conidiobolomycosis. On the other hand, CSF was unchanged in most cases of toxic disorders, as botulism and hepatic encephalopathy. Elevated CSF density was observed in 60% of ruminants diagnosed with polioencephalomalacia. Our findings show that evaluation of CSF is a valuable diagnostic tool when used in association with epidemiological, clinical and pathological findings for diagnosis of CNS diseases in ruminants.(AU)

Os ruminantes podem ser afetados por uma grande variedade de doenças do sistema nervoso central (SNC). A análise do líquido cefalorraquidiano (LCR) constitui a base da avaliação diagnóstica ante mortem de ruminantes com sinais clínicos envolvendo o SNC. Apesar de sua importância como ferramenta para auxiliar no diagnóstico, os dados referentes aos exames do LCR em casos espontâneos de doenças do SNC em ruminantes no Brasil são limitados, e, a maioria dos relatos envolve estudos experimentais. Portanto, este trabalho teve como objetivo relatar os resultados da análise do LCR em 58 ruminantes com distúrbios neurológicos. Amostras do LCR foram obtidas de 32 bovinos, 20 ovinos e 6 caprinos por punção da cisterna cerebelo-medular (n=54) ou espaço lombossacro (n=4) para posterior análise. Esses ruminantes apresentaram sinais neurológicos relacionados a infecções virais (n=13), micóticas (n=3) ou bacterianas (n=15), e desordens tóxicas (n=21), traumáticas (n=4) ou congênitas (n=2) A análise do LCR de ruminantes com infecções virais apresentou pleocitose linfocítica, embora, em vários casos de raiva, o LCR não tenha apresentado alterações. Pleocitose neutrofílica, turbidez, presença de coágulos de fibrina e coloração anormal foram evidentes no LCR da maioria dos casos de infecções bacterianas do SNC, como meningoencefalites, meningites, abscessos, mielite e um caso de conidiobolomicose. Por outro lado, o LCR não foi alterado na maioria dos casos dos distúrbios tóxicos, como botulismo e encefalopatia hepática. A densidade elevada no LCR foi observada em 60% dos ruminantes diagnosticados com polioencefalomalácia. Nossos resultados mostram que a avaliação do LCR é uma valiosa ferramenta de diagnóstico, quando usada em associação com os achados epidemiológicos, clínicos e patológicos para o diagnóstico de doenças do SNC em ruminantes.(AU)

Cerebrospinal fluid analysis in 58 ruminants showing neurological disorders / Análise do líquido cefalorraquidiano em 58 ruminantes com distúrbios neurológicos

Ruminants may be affected by a wide variety of central nervous system (CNS) diseases. Cerebrospinal fluid (CSF) analysis forms the basis for ante mortem diagnostic evaluation of ruminants with clinical signs involving the CNS. Despite its importance as a tool to aid diagnosis, data regarding CSF examinations in spontaneous cases of CNS diseases in ruminants from Brazil are limited, and most reports involve experimental studies. Therefore, this study aimed to report the results of CSF analysis in 58 ruminants showing signs of neurological disorders. CSF samples for analysis were obtained from 32 cattle, 20 sheep, and 6 goats by cerebello-medullary cistern (n=54) or lumbosacral space (n=4) puncture. These ruminants showed neurological signs related to viral (n=13), mycotic (n=3), or bacterial (n=15) infections, and toxic (n=21), traumatic (n=4), or congenital disorders (n=2). CSF analysis from ruminants with viral infections presented lymphocytic pleocytosis, even though CSF showed no changes in several cases of rabies. Neutrophilic pleocytosis, cloudiness, presence of fibrin clots, and abnormal coloration were evident in the CSF of most cases of CNS bacterial infection, such as meningoencephalitis, meningitis, abscesses, myelitis, and a case of conidiobolomycosis. On the other hand, CSF was unchanged in most cases of toxic disorders, as botulism and hepatic encephalopathy. Elevated CSF density was observed in 60% of ruminants diagnosed with polioencephalomalacia. Our findings show that evaluation of CSF is a valuable diagnostic tool when used in association with epidemiological, clinical and pathological findings for diagnosis of CNS diseases in ruminants.(AU)

Os ruminantes podem ser afetados por uma grande variedade de doenças do sistema nervoso central (SNC). A análise do líquido cefalorraquidiano (LCR) constitui a base da avaliação diagnóstica ante mortem de ruminantes com sinais clínicos envolvendo o SNC. Apesar de sua importância como ferramenta para auxiliar no diagnóstico, os dados referentes aos exames do LCR em casos espontâneos de doenças do SNC em ruminantes no Brasil são limitados, e, a maioria dos relatos envolve estudos experimentais. Portanto, este trabalho teve como objetivo relatar os resultados da análise do LCR em 58 ruminantes com distúrbios neurológicos. Amostras do LCR foram obtidas de 32 bovinos, 20 ovinos e 6 caprinos por punção da cisterna cerebelo-medular (n=54) ou espaço lombossacro (n=4) para posterior análise. Esses ruminantes apresentaram sinais neurológicos relacionados a infecções virais (n=13), micóticas (n=3) ou bacterianas (n=15), e desordens tóxicas (n=21), traumáticas (n=4) ou congênitas (n=2) A análise do LCR de ruminantes com infecções virais apresentou pleocitose linfocítica, embora, em vários casos de raiva, o LCR não tenha apresentado alterações. Pleocitose neutrofílica, turbidez, presença de coágulos de fibrina e coloração anormal foram evidentes no LCR da maioria dos casos de infecções bacterianas do SNC, como meningoencefalites, meningites, abscessos, mielite e um caso de conidiobolomicose. Por outro lado, o LCR não foi alterado na maioria dos casos dos distúrbios tóxicos, como botulismo e encefalopatia hepática. A densidade elevada no LCR foi observada em 60% dos ruminantes diagnosticados com polioencefalomalácia. Nossos resultados mostram que a avaliação do LCR é uma valiosa ferramenta de diagnóstico, quando usada em associação com os achados epidemiológicos, clínicos e patológicos para o diagnóstico de doenças do SNC em ruminantes.(AU)