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1.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 74(4): 563-575, July-Aug. 2022. tab, graf
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: biblio-1393895

Resumo

This study aimed to identify the Staphylococcus species responsible for bovine mastitis in dairy herds in northern Brazil, to investigate the capacity of biofilm production, and to analyze the association of biofilm production with multiresistance and intensity of California Mastitis Tests (CMT) reactions that can make treatment more difficult and cause misdiagnoses, respectively. Milk samples were collected from 23 dairy farms located in five municipalities in the state of Acre. A total of 339 crossbred cows were tested by CMT, with 109 animals (229 udder ceilings) reacting to the test. After bacterial isolation in blood agar, the catalase-positive and gram-positive cocci were submitted for identification by MALDI-TOF MS. Of 103 strains identified as staphylococci, Staphylococcus chromogenes (58.3%) and Staphylococcus aureus (19.4%) were the most prevalent species. Biofilm production was quantitatively evaluated using a microplate adherence test. Among the Staphylococcus strains, 71.8% were biofilm producers. Most strains of S. chromogenes (68.3%) had the capacity to produce biofilms, ranging from weak (43.3%), moderate (13.3%), and strong (11.7%) producers. Among S. aureus strains, 50% were non-biofilm producers, and none were strong producers. Our data showed an association between biofilm production capacity and multidrug resistance. In addition, there was a reduction in the response to the CMT test, which can mask the diagnosis.


O presente estudo teve como objetivos identificar as espécies de estafilococos envolvidas com mastite em rebanhos leiteiros no norte do Brasil, investigar a capacidade de produção de biofilme e analisar a associação da produção de biofilme com multirresistência e intensidade de reações de CMT que podem dificultar o tratamento e causar erros de diagnósticos, respectivamente. Amostras de leite foram coletadas em 23 propriedades leiteiras, situadas em cinco municípios do estado do Acre. Um total de 339 vacas mestiças foram testadas pelo CMT, sendo detectados 109 animais (229 tetos) reagentes ao teste. Após isolamento em ágar sangue, os cocos Gram positivos produtores de catalase foram submetidos à identificação por MALDI TOF MS. Um total de 103 estirpes foram identificadas como estafilococos, sendo mais prevalentes as espécies Staphylococcus chromogenes (58,3%) e S. aureus (19,4%). A produção de biofilme foi avaliada quantitativamente pelo teste de aderência em microplaca. Dentre todas as amostras de estafilococos, 71,8% foram produtoras de biofilme. A maioria das amostras de S. chromogenes (68,3%) apresentou capacidade de produzir biofilme, variando de fraco (43,3%), moderado (13,3%) a forte (11,7%) produtor. Entre as amostras de S. aureus, 50% não foram produtoras e nenhuma foi produtora forte. Essa capacidade de produção de biofilme mostrou-se associada à multirresistência a antimicrobianos, além de diminuir a intensidade no teste CMT, podendo mascarar o diagnóstico.


Assuntos
Animais , Bovinos , Staphylococcus aureus , Resistência a Múltiplos Medicamentos , Biofilmes , Mastite Bovina
2.
Pesqui. vet. bras ; 42: e06958, 2022. tab, ilus
Artigo em Inglês | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1487702

Resumo

Bovine mastitis is the most common disease in dairy cattle and responsible for economic losses in the milk industry. The present study aimed to identify the main species and to evaluate the antimicrobial susceptibility of bacterial isolates from cow herds with mastitis in dairy farms from southern Brazil. A total of 107 milk samples were collected from different cow herds in one important dairy producing region in southern Brazil, including farms located in ten cities from the Northeast region in the Rio Grande do Sul state. Bacterial strains were isolated and submitted to presumptive identification by classical bacteriological methods. Bacterial species were also identified by MALDI-TOF MS and antimicrobial susceptibility testing was performed with 12 antimicrobials commonly used in dairy farms. Fifty-one bacterial strains were isolated and the presumptive identification demonstrated the occurrence of Staphylococcus spp. (82.3%), Bacillus spp. (3.9%), Klebsiella spp. (3.9%), Streptococcus spp. (3.9%), Corynebacterium sp. (2%), Enterococcus sp. (2%) and Serratia sp. (2%). Forty-one isolates were successfully identified in the MALDI-TOF analysis, including 35 isolates from eleven different bacterial species. Importantly, there were eight different Staphylococcus species, with a high frequency of Staphylococcus chromogenes (48.6%) and Staphylococcus aureus (20%). Overall, bacterial isolates demonstrated resistance to penicillin (46.3%), tetracycline (39%), amoxicillin (36.6%), ampicillin (34.1%) and sulfamethoxazole/trimethoprim (31.7%). Enrofloxacin was the unique antimicrobial that all isolates were susceptible. In addition, there were six multidrug resistant isolates (five S. chromogenes and one S. aureus). This study highlights that bacterial pathogens with resistance to several antimicrobials were identified in cows from dairy farms in a very important milk producing region located in southern Brazil. Microbial identification of the bovine mastitis pathogens and determination of the antimicrobial profile is necessary for the rational use of the medicines.


A mastite bovina é a doença mais comum em gado leiteiro e responsável por perdas econômicas na indústria de laticínios. O presente estudo teve como objetivo identificar as principais espécies e avaliar a suscetibilidade antimicrobiana de isolados bacterianos de rebanhos bovinos com mastite em fazendas leiteiras no sul do Brasil. Um total de 107 amostras de leite foram coletadas em diferentes rebanhos bovinos em uma importante região produtora de leite do sul do Brasil, incluindo fazendas localizadas em 10 cidades da região Nordeste do estado do Rio Grande do Sul. As cepas bacterianas foram isoladas e submetidas à identificação presuntiva por métodos bacteriológicos clássicos. A identificação bacteriana foi confirmada por MALDI-TOF MS e o teste de sensibilidade antimicrobiana foi realizado com antimicrobianos comumente usados em fazendas leiteiras. Cinquenta e uma cepas bacterianas foram isoladas e a identificação presuntiva demonstrou a ocorrência de Staphylococcus spp. (82,3%), Bacillus spp. (3,9%), Klebsiella spp. (3,9%), Streptococcus spp. (3,9%), Corynebacterium sp. (2%), Enterococcus sp. (2%) e Serratia sp. (2%). Os 41 isolados foram identificados com sucesso na análise MALDI-TOF, incluindo 35 isolados de onze espécies bacterianas diferentes. É importante ressaltar que houve a ocorrência de oito espécies diferentes de Staphylococcus, com alta frequência de Staphylococcus chromogenes (48,6%) e Staphylococcus aureus (20%). No geral, os isolados bacterianos tiveram alta resistência à penicilina (46,3%), tetraciclina (39%), amoxicilina (36,6%), ampicilina (34,1%) e sulfametoxazol/trimetoprima (31,7%). A enrofloxacina foi o único antimicrobiano que todos os isolados foram suscetíveis. Além disso, havia seis isolados multirresistentes (cinco S. chromogenes e um S. aureus). Este estudo destaca que os patógenos bacterianos com resistência aos antimicrobianos estão presentes em fazendas leiteiras de subsistência em uma importante região produtora no sul do Brasil. É necessário o monitoramento constante dos patógenos da mastite bovina e a determinação de seu perfil antimicrobiano para o uso racional dos medicamentos.


Assuntos
Feminino , Animais , Bovinos , Leite/microbiologia , Mastite Bovina , Resistência Microbiana a Medicamentos , Staphylococcus/isolamento & purificação , Espectrometria de Massas por Ionização e Dessorção a Laser Assistida por Matriz
3.
Pesqui. vet. bras ; 42: e06958, 2022. tab, ilus
Artigo em Inglês | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1360626

Resumo

Bovine mastitis is the most common disease in dairy cattle and responsible for economic losses in the milk industry. The present study aimed to identify the main species and to evaluate the antimicrobial susceptibility of bacterial isolates from cow herds with mastitis in dairy farms from southern Brazil. A total of 107 milk samples were collected from different cow herds in one important dairy producing region in southern Brazil, including farms located in ten cities from the Northeast region in the Rio Grande do Sul state. Bacterial strains were isolated and submitted to presumptive identification by classical bacteriological methods. Bacterial species were also identified by MALDI-TOF MS and antimicrobial susceptibility testing was performed with 12 antimicrobials commonly used in dairy farms. Fifty-one bacterial strains were isolated and the presumptive identification demonstrated the occurrence of Staphylococcus spp. (82.3%), Bacillus spp. (3.9%), Klebsiella spp. (3.9%), Streptococcus spp. (3.9%), Corynebacterium sp. (2%), Enterococcus sp. (2%) and Serratia sp. (2%). Forty-one isolates were successfully identified in the MALDI-TOF analysis, including 35 isolates from eleven different bacterial species. Importantly, there were eight different Staphylococcus species, with a high frequency of Staphylococcus chromogenes (48.6%) and Staphylococcus aureus (20%). Overall, bacterial isolates demonstrated resistance to penicillin (46.3%), tetracycline (39%), amoxicillin (36.6%), ampicillin (34.1%) and sulfamethoxazole/trimethoprim (31.7%). Enrofloxacin was the unique antimicrobial that all isolates were susceptible. In addition, there were six multidrug resistant isolates (five S. chromogenes and one S. aureus). This study highlights that bacterial pathogens with resistance to several antimicrobials were identified in cows from dairy farms in a very important milk producing region located in southern Brazil. Microbial identification of the bovine mastitis pathogens and determination of the antimicrobial profile is necessary for the rational use of the medicines.(AU)


A mastite bovina é a doença mais comum em gado leiteiro e responsável por perdas econômicas na indústria de laticínios. O presente estudo teve como objetivo identificar as principais espécies e avaliar a suscetibilidade antimicrobiana de isolados bacterianos de rebanhos bovinos com mastite em fazendas leiteiras no sul do Brasil. Um total de 107 amostras de leite foram coletadas em diferentes rebanhos bovinos em uma importante região produtora de leite do sul do Brasil, incluindo fazendas localizadas em 10 cidades da região Nordeste do estado do Rio Grande do Sul. As cepas bacterianas foram isoladas e submetidas à identificação presuntiva por métodos bacteriológicos clássicos. A identificação bacteriana foi confirmada por MALDI-TOF MS e o teste de sensibilidade antimicrobiana foi realizado com antimicrobianos comumente usados em fazendas leiteiras. Cinquenta e uma cepas bacterianas foram isoladas e a identificação presuntiva demonstrou a ocorrência de Staphylococcus spp. (82,3%), Bacillus spp. (3,9%), Klebsiella spp. (3,9%), Streptococcus spp. (3,9%), Corynebacterium sp. (2%), Enterococcus sp. (2%) e Serratia sp. (2%). Os 41 isolados foram identificados com sucesso na análise MALDI-TOF, incluindo 35 isolados de onze espécies bacterianas diferentes. É importante ressaltar que houve a ocorrência de oito espécies diferentes de Staphylococcus, com alta frequência de Staphylococcus chromogenes (48,6%) e Staphylococcus aureus (20%). No geral, os isolados bacterianos tiveram alta resistência à penicilina (46,3%), tetraciclina (39%), amoxicilina (36,6%), ampicilina (34,1%) e sulfametoxazol/trimetoprima (31,7%). A enrofloxacina foi o único antimicrobiano que todos os isolados foram suscetíveis. Além disso, havia seis isolados multirresistentes (cinco S. chromogenes e um S. aureus). Este estudo destaca que os patógenos bacterianos com resistência aos antimicrobianos estão presentes em fazendas leiteiras de subsistência em uma importante região produtora no sul do Brasil. É necessário o monitoramento constante dos patógenos da mastite bovina e a determinação de seu perfil antimicrobiano para o uso racional dos medicamentos.(AU)


Assuntos
Animais , Feminino , Bovinos , Staphylococcus/isolamento & purificação , Resistência Microbiana a Medicamentos , Leite/microbiologia , Mastite Bovina , Espectrometria de Massas por Ionização e Dessorção a Laser Assistida por Matriz
4.
Ci. Rural ; 49(6): e20190168, 2019. ilus
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-22737

Resumo

We compared the potential of routine techniques used for the identification of Staphylococcus species, aiming to evaluate their accuracy in the detection of 43 Staphylococcus chromogenes strains isolated from bovine mastitis that, despite being a coagulase-negative species, are able to clot plasma. These strains could be mistakenly suspected to be S. aureus and lead to an unappropriated treatment of the disease. MALDI-TOF, PCR-RFLP of the chaperonine gene groEL, and sequencing of the 16S rRNA and elongation factor Tu gene tuf were employed. Results from the four methods were coincident for only half of the strains because of the low accuracy of the groEL PCR-RFLP (51.2% accuracy). Even though all the sequencing results were identical, the high accuracy of the MALDI-TOF results (97.7% accuracy, with only one strain misidentified) encourage the use of this technique, since it does not require laborious sample preparation, being fast and simple to perform.(AU)


Nós comparamos o potencial de técnicas rotineiras utilizadas para a identificação de espécies de Staphylococcus, com o objetivo de avaliar a acurácia delas na detecção de 43 isolados de Staphylococcus chromogenes envolvidos com mastite bovina que, apesar de ser uma espécie coagulase-negativa, são capazes de coagular o plasma. Essas cepas poderiam ser erroneamente suspeitas de serem S. aureus e levarem a um tratamento não adequado da doença. MALDI-TOF, PCR-RFLP do gene da chaperonina groEL e sequenciamento do gene do rRNA 16S e do gene do fator de elongação Tu, tuf, foram avaliados. Os resultados dos quatro métodos foram coincidentes para apenas metade das cepas, devido à baixa precisão da PCR-RFLP com groEL (51,2% de acurácia). Apesar de todos os resultados do sequenciamento serem idênticos, a alta precisão dos resultados do MALDI-TOF (97,7% de acurácia, com apenas uma cepa identificada incorretamente) encoraja o uso dessa técnica, pois, não requer preparação laboriosa de amostras, sendo rápida e simples de executar.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Staphylococcus , Mastite Bovina/diagnóstico , Mastite Bovina/sangue , Testes de Coagulação Sanguínea
5.
Hig. aliment ; 33(288/289): 1878-1882, abr.-maio 2019. tab
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-26209

Resumo

Espécies de Staphylococcus coagulase negativa também são encontradas como contaminantes em alimentos de origem animal. Este estudo teve como objetivo identificar espécies do grupo Staphylococcus coagulase negativa, isoladas de queijos Mussarela fatiados e fatiadores de frios. Foram identificadas nove espécies bacterianas, sendo as mais frequentes: Staphylococcus (S.) saprophyticus, representando 25,9% dos isolados, S. xylosus 18,4% e S. cohnii subsp. urealyticum 12,6%. As demais espécies identificadas foram: S. epidermidis, S. warneri, S. captis subsp. ureolyticus, S. chromogenes, S. caprae e S. simulans. É necessário salientar a importância das Boas Práticas de Manipulação e Higienização dos equipamentos fracionadores de queijo Mussarela, a fim de diminuir o risco de intoxicações alimentares causadas por microrganismos desse grupo.(AU)


Assuntos
Queijo/microbiologia , Staphylococcus/classificação , Staphylococcus/isolamento & purificação , Microbiologia de Alimentos , Contaminação de Alimentos , Contaminação de Equipamentos
6.
Hig. aliment ; 33(288/289): 1878-1882, abr.-maio 2019. tab
Artigo em Português | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1482424

Resumo

Espécies de Staphylococcus coagulase negativa também são encontradas como contaminantes em alimentos de origem animal. Este estudo teve como objetivo identificar espécies do grupo Staphylococcus coagulase negativa, isoladas de queijos Mussarela fatiados e fatiadores de frios. Foram identificadas nove espécies bacterianas, sendo as mais frequentes: Staphylococcus (S.) saprophyticus, representando 25,9% dos isolados, S. xylosus 18,4% e S. cohnii subsp. urealyticum 12,6%. As demais espécies identificadas foram: S. epidermidis, S. warneri, S. captis subsp. ureolyticus, S. chromogenes, S. caprae e S. simulans. É necessário salientar a importância das Boas Práticas de Manipulação e Higienização dos equipamentos fracionadores de queijo Mussarela, a fim de diminuir o risco de intoxicações alimentares causadas por microrganismos desse grupo.


Assuntos
Microbiologia de Alimentos , Queijo/microbiologia , Staphylococcus/classificação , Staphylococcus/isolamento & purificação , Contaminação de Alimentos , Contaminação de Equipamentos
7.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 71(5): 1745-1749, set.-out. 2019. tab
Artigo em Inglês | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1038677

Resumo

O objetivo do presente estudo foi avaliar a capacidade de estafilococos não aureus (NAS) isolados de diferentes nichos ecológicos (leite, ambiente e ápice do teto), associados a vacas leiteiras, de inibir os principais agentes etiológicos da mastite bovina (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus uberis e Escherichia coli). Neste estudo, 38 isolados NAS de diferentes nichos ecológicos foram avaliados quanto à capacidade de inibir o crescimento in vitro de importantes patógenos causadores de mastite pelo método cross-streaking. No total, 19 (50%) isolados de NAS (oito isolados de S. chromogenes, 10 de S. fleurettii e um de S. haemolyticus) apresentaram inibição contra os principais patógenos causadores de mastite. No entanto, a inibição dos patógenos causadores da mastite bovina por isolados de NAS foi maior contra bactérias Gram-positivas. Além disso, o presente estudo não sugeriu que os nichos ecológicos influenciam a capacidade do NAS de inibir os principais patógenos causadores da mastite bovina. Com base nesses resultados, concluiu-se que certos isolados de NAS apresentam potencial efeito protetor contra os principais patógenos da mastite, pelo menos in vitro.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Staphylococcus , Mastite Bovina/etiologia , Mastite Bovina/patologia , Técnicas In Vitro/métodos
8.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 71(5): 1745-1749, set.-out. 2019. tab
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-25246

Resumo

O objetivo do presente estudo foi avaliar a capacidade de estafilococos não aureus (NAS) isolados de diferentes nichos ecológicos (leite, ambiente e ápice do teto), associados a vacas leiteiras, de inibir os principais agentes etiológicos da mastite bovina (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus uberis e Escherichia coli). Neste estudo, 38 isolados NAS de diferentes nichos ecológicos foram avaliados quanto à capacidade de inibir o crescimento in vitro de importantes patógenos causadores de mastite pelo método cross-streaking. No total, 19 (50%) isolados de NAS (oito isolados de S. chromogenes, 10 de S. fleurettii e um de S. haemolyticus) apresentaram inibição contra os principais patógenos causadores de mastite. No entanto, a inibição dos patógenos causadores da mastite bovina por isolados de NAS foi maior contra bactérias Gram-positivas. Além disso, o presente estudo não sugeriu que os nichos ecológicos influenciam a capacidade do NAS de inibir os principais patógenos causadores da mastite bovina. Com base nesses resultados, concluiu-se que certos isolados de NAS apresentam potencial efeito protetor contra os principais patógenos da mastite, pelo menos in vitro.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Staphylococcus , Mastite Bovina/etiologia , Mastite Bovina/patologia , Técnicas In Vitro/métodos
9.
Hig. aliment ; 33(288/289): 2411-2414, abr.-maio 2019. tab
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-23879

Resumo

O objetivo deste trabalho foi identificar espécies de Staphylococcus coagulase negativa em leite de vacas leiteiras com mastite por testes fenotípicos e pela técnica de MALDI-TOF MS. Foram utilizadas 85 isolados de estafilococos provenientes de leite de vacas com mastite. Todos os isolados foram caracterizados fenotipicamente por avaliação da morfologia das colônias, coloração de Gram, testes de oxidase, catalase e coagulase. Posteriormente, foram analisados os espectros de proteínas gerados no MALDI-TOF MS, seguida pela separação e detecção de íons pelo tempo de voo (TOF).Foram identificadas sete espécies, sendo a de maior ocorrência S. chromogenes 65 (76%), seguida por, S. hyicus 5 (6%), S. epidermidis 4 (5%).A técnica de MALDI-TOF demonstrou-se efetiva na caracterização de espécies de Staphylococcus causadores de mastite bovina.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Leite/microbiologia , Mastite Bovina/etiologia , Mastite Bovina/genética , Staphylococcus/genética , Staphylococcus/isolamento & purificação , Staphylococcus/patogenicidade , Técnicas Bacteriológicas , Espectrometria de Massas por Ionização e Dessorção a Laser Assistida por Matriz/veterinária
10.
Hig. aliment ; 33(288/289): 2411-2414, abr.-maio 2019. tab
Artigo em Português | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1482230

Resumo

O objetivo deste trabalho foi identificar espécies de Staphylococcus coagulase negativa em leite de vacas leiteiras com mastite por testes fenotípicos e pela técnica de MALDI-TOF MS. Foram utilizadas 85 isolados de estafilococos provenientes de leite de vacas com mastite. Todos os isolados foram caracterizados fenotipicamente por avaliação da morfologia das colônias, coloração de Gram, testes de oxidase, catalase e coagulase. Posteriormente, foram analisados os espectros de proteínas gerados no MALDI-TOF MS, seguida pela separação e detecção de íons pelo tempo de voo (TOF).Foram identificadas sete espécies, sendo a de maior ocorrência S. chromogenes 65 (76%), seguida por, S. hyicus 5 (6%), S. epidermidis 4 (5%).A técnica de MALDI-TOF demonstrou-se efetiva na caracterização de espécies de Staphylococcus causadores de mastite bovina.


Assuntos
Animais , Bovinos , Espectrometria de Massas por Ionização e Dessorção a Laser Assistida por Matriz , Leite/microbiologia , Mastite Bovina/etiologia , Mastite Bovina/genética , Staphylococcus/genética , Staphylococcus/isolamento & purificação , Staphylococcus/patogenicidade , Técnicas Bacteriológicas
11.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 70(6): 1943-1949, nov.-dez. 2018. tab, graf
Artigo em Português | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-970712

Resumo

Foram estudadas 135 vacas mestiças, provenientes de 10 rebanhos leiteiros no estado do Acre. O objetivo foi identificar espécies de Staphylococcus isoladas dos quartos mamários de vacas com mastite e, posteriormente, avaliar a capacidade de produção de biofilme pela espécie Staphylococcus chromogenes. A caracterização dos isolados presentes nas amostras encontradas, correspondentes a Staphylococcus sp., foi realizada utilizando-se a técnica do MALDI TOF MS (Matrix Associated Laser Desorption-Ionization - Time of Flight - Mass Spectrometry). Foram identificados: S. chromogenes (36), Staphylococcus saprophyticus (5), S. chromogenes ou Staphylococcus hycus (5), Staphylococcus haemolyticus (4), Staphylococcus epidermidis (3), Staphylococcus hycus (3), Staphylococcus aureus (1), Staphylococcus auriculares (1), Staphylococcus kloosii (1) e Staphylococcus xylosus (1). A espécie S. chromogenes correspondeu a 60% dos isolados do gênero (17 isolados coagularam o plasma de coelho no teste da coagulase em tubo), sendo 83,3% dos isolados (30/36) produtores de biofilme, não estando esse fator de virulência associado ao fenótipo de coagulação do plasma. A identificação desses microrganismos é importante para a elucidação da etiologia da mastite bovina. O alto percentual de S. chromogenes, produtores de biofilme, isolados de vacas com mastite é um achado relevante e pode revelar uma mudança de perfil na colonização de agentes etiológicos causadores dessa enfermidade.(AU)


A total of 135 crossbred cows was studied, from ten dairy herds on the state of Acre. The purpose was to identify species of Staphylococcus isolated from the mammary quarters of cows with mastitis. Additionally, the capacity of biofilm production by the species Staphylococcus chromogenes was evaluated. The sample characterization of the isolates was performed using the MALDI TOF MS (Matrix Associated Laser Desorption-Ionization - Time of Flight - Mass Spectrometry). The following species were identified by MALDI TOFF MS: S. chromogenes (36), Staphylococcus saprophyticus (5), S. chromogenes or Staphylococcus hycus (5), Staphylococcus haemolyticus (4), Staphylococcus epidermidis (3), Staphylococcus hycus (3), Staphylococcus aureus (1), Staphylococcus auriculares (1), Staphylococcus kloosii (1) and Staphylococcus xylosus (1). S. chromogenes corresponded to 60% of the Staphylococcus isolates (17 isolates positive on tube coagulase test). From those, 83.33% (30/36) of them were biofilm producers. This virulence factor had no association with the plasma coagulation phenotype. The identification of these microorganisms is important for the elucidation of the bovine mastitis etiology. The high percentage of S. chromogenes, biofilm producers, isolated from cows with mastitis is an important finding. This may reveal a profile change on the colonization of etiologic agents that cause this disease.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Staphylococcus/isolamento & purificação , Biofilmes/classificação , Leite/microbiologia , Mastite Bovina/microbiologia , Bovinos/microbiologia
12.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 70(6): 1943-1949, nov.-dez. 2018. tab, graf
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-21288

Resumo

Foram estudadas 135 vacas mestiças, provenientes de 10 rebanhos leiteiros no estado do Acre. O objetivo foi identificar espécies de Staphylococcus isoladas dos quartos mamários de vacas com mastite e, posteriormente, avaliar a capacidade de produção de biofilme pela espécie Staphylococcus chromogenes. A caracterização dos isolados presentes nas amostras encontradas, correspondentes a Staphylococcus sp., foi realizada utilizando-se a técnica do MALDI TOF MS (Matrix Associated Laser Desorption-Ionization - Time of Flight - Mass Spectrometry). Foram identificados: S. chromogenes (36), Staphylococcus saprophyticus (5), S. chromogenes ou Staphylococcus hycus (5), Staphylococcus haemolyticus (4), Staphylococcus epidermidis (3), Staphylococcus hycus (3), Staphylococcus aureus (1), Staphylococcus auriculares (1), Staphylococcus kloosii (1) e Staphylococcus xylosus (1). A espécie S. chromogenes correspondeu a 60% dos isolados do gênero (17 isolados coagularam o plasma de coelho no teste da coagulase em tubo), sendo 83,3% dos isolados (30/36) produtores de biofilme, não estando esse fator de virulência associado ao fenótipo de coagulação do plasma. A identificação desses microrganismos é importante para a elucidação da etiologia da mastite bovina. O alto percentual de S. chromogenes, produtores de biofilme, isolados de vacas com mastite é um achado relevante e pode revelar uma mudança de perfil na colonização de agentes etiológicos causadores dessa enfermidade.(AU)


A total of 135 crossbred cows was studied, from ten dairy herds on the state of Acre. The purpose was to identify species of Staphylococcus isolated from the mammary quarters of cows with mastitis. Additionally, the capacity of biofilm production by the species Staphylococcus chromogenes was evaluated. The sample characterization of the isolates was performed using the MALDI TOF MS (Matrix Associated Laser Desorption-Ionization - Time of Flight - Mass Spectrometry). The following species were identified by MALDI TOFF MS: S. chromogenes (36), Staphylococcus saprophyticus (5), S. chromogenes or Staphylococcus hycus (5), Staphylococcus haemolyticus (4), Staphylococcus epidermidis (3), Staphylococcus hycus (3), Staphylococcus aureus (1), Staphylococcus auriculares (1), Staphylococcus kloosii (1) and Staphylococcus xylosus (1). S. chromogenes corresponded to 60% of the Staphylococcus isolates (17 isolates positive on tube coagulase test). From those, 83.33% (30/36) of them were biofilm producers. This virulence factor had no association with the plasma coagulation phenotype. The identification of these microorganisms is important for the elucidation of the bovine mastitis etiology. The high percentage of S. chromogenes, biofilm producers, isolated from cows with mastitis is an important finding. This may reveal a profile change on the colonization of etiologic agents that cause this disease.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Staphylococcus/isolamento & purificação , Biofilmes/classificação , Leite/microbiologia , Mastite Bovina/microbiologia , Bovinos/microbiologia
13.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 70(2): 368-374, mar.-abr. 2018. tab, graf
Artigo em Inglês | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-910363

Resumo

This study aimed to identify Coagulase-Negative Staphylococci (CoNS) species isolated from bovine mastitis, through phenotypic and PCR-RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism-Polimerase Chain Reaction) methods and to compare both techniques to matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) technique. Among them, the PCR-RFLP method, using a partially conserved sequence of the groEL gene, is a promising alternative, because of its reproducibility and reliability. On the other hand, the proteomic technique MALDI-TOF MS provides an accurate and much faster diagnosis and has been increasingly employed in microbiological identification. The pheno-genotypic profiles of beta-lactam resistance were also investigated, this characterization is important, considering that the use of antimicrobials is a key element for mastitis control in dairy farms. The concordance of the phenotypic, PCR-RFLP and MALDI-TOF MS assays to identify CoNS species was 77,5% (31/40). S. chromogenes was the species most frequently isolated. Antibiotic resistance rate was relatively low, registering values of 25.5% to penicillin, 9.6% to oxacillin and 6.2% to cefoxitin. Resistance to imipenem, cephalotin and amoxicillin+clavulanate was not observed. The mecA gene and its variant were detected in 7.6% and 4,1% of the isolates respectively. The blaZ gene was found in 43.2% of the strains resistant to penicillin.(AU)


Este estudo teve como objetivo identificar isolados de Staphylococcus coagulase-negativa (SCN) isolados de mastite bovina, por meio de métodos fenotípicos e PCR-RFLP (reação em cadeia de polimerase - polimorfismo nos fragmentos de restrição), e compará-los com a técnica de tempo de voo de ionização/desorção por laser assistida por matriz de espectrofotometria de massa (MALDI-TOF MS). O método de PCR-RFLP, que utiliza uma parte conservada da sequência do gene groEL, é uma alternativa promissora, por ser reprodutível e confiável. Por outro lado, a técnica proteômica MALDI-TOF MS permite uma acurácia e um diagnóstico muito mais rápidos e tem sido cada vez mais empregada na identificação microbiológica. Os perfis fenogenotípicos de resistência aos beta-lactâmicos também foram investigados. Essa caracterização é importante, considerando-se que os antimicrobianos são os elementos-chave para o controle da mastite na produção leiteira. A concordância entre os testes fenotípicos, PCR-RFLP E MALDI-TOF MS na identificação foi de 77,5% (31/40). S. chromogenes foi a espécie mais frequentemente isolada. A resistência antimicrobiana foi relativamente baixa, apresentando valores de 25,5% para penicilina, 9,6% para oxacilina e 6,2% para cefoxitina. Resistência ao imipenem, à cefalotina e à amoxacilina + ácido clavulâncico não foi observada. O gene mecA e sua variante foram detectados em 7,6% e 4,1% dos isolados, respectivamente. O gene blaZ foi encontrado em 43,2% dos isolados resistentes à penicilina.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Resistência beta-Lactâmica/genética , Bovinos/anormalidades , Bovinos/genética , Staphylococcus/classificação
14.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 70(2): 368-374, mar.-abr. 2018. tab, graf
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-19180

Resumo

This study aimed to identify Coagulase-Negative Staphylococci (CoNS) species isolated from bovine mastitis, through phenotypic and PCR-RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism-Polimerase Chain Reaction) methods and to compare both techniques to matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) technique. Among them, the PCR-RFLP method, using a partially conserved sequence of the groEL gene, is a promising alternative, because of its reproducibility and reliability. On the other hand, the proteomic technique MALDI-TOF MS provides an accurate and much faster diagnosis and has been increasingly employed in microbiological identification. The pheno-genotypic profiles of beta-lactam resistance were also investigated, this characterization is important, considering that the use of antimicrobials is a key element for mastitis control in dairy farms. The concordance of the phenotypic, PCR-RFLP and MALDI-TOF MS assays to identify CoNS species was 77,5% (31/40). S. chromogenes was the species most frequently isolated. Antibiotic resistance rate was relatively low, registering values of 25.5% to penicillin, 9.6% to oxacillin and 6.2% to cefoxitin. Resistance to imipenem, cephalotin and amoxicillin+clavulanate was not observed. The mecA gene and its variant were detected in 7.6% and 4,1% of the isolates respectively. The blaZ gene was found in 43.2% of the strains resistant to penicillin.(AU)


Este estudo teve como objetivo identificar isolados de Staphylococcus coagulase-negativa (SCN) isolados de mastite bovina, por meio de métodos fenotípicos e PCR-RFLP (reação em cadeia de polimerase - polimorfismo nos fragmentos de restrição), e compará-los com a técnica de tempo de voo de ionização/desorção por laser assistida por matriz de espectrofotometria de massa (MALDI-TOF MS). O método de PCR-RFLP, que utiliza uma parte conservada da sequência do gene groEL, é uma alternativa promissora, por ser reprodutível e confiável. Por outro lado, a técnica proteômica MALDI-TOF MS permite uma acurácia e um diagnóstico muito mais rápidos e tem sido cada vez mais empregada na identificação microbiológica. Os perfis fenogenotípicos de resistência aos beta-lactâmicos também foram investigados. Essa caracterização é importante, considerando-se que os antimicrobianos são os elementos-chave para o controle da mastite na produção leiteira. A concordância entre os testes fenotípicos, PCR-RFLP E MALDI-TOF MS na identificação foi de 77,5% (31/40). S. chromogenes foi a espécie mais frequentemente isolada. A resistência antimicrobiana foi relativamente baixa, apresentando valores de 25,5% para penicilina, 9,6% para oxacilina e 6,2% para cefoxitina. Resistência ao imipenem, à cefalotina e à amoxacilina + ácido clavulâncico não foi observada. O gene mecA e sua variante foram detectados em 7,6% e 4,1% dos isolados, respectivamente. O gene blaZ foi encontrado em 43,2% dos isolados resistentes à penicilina.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Bovinos/anormalidades , Bovinos/genética , Staphylococcus/classificação , Resistência beta-Lactâmica/genética
15.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-222022

Resumo

Objetivou-se com esta pesquisa realizar um estudo clínico-epidemiológico e avaliar o perfil de resistência antimicrobiana de isolados de Staphylococcus spp. em cães com otite externa procedentes do Hospital Veterinário da Universidade Federal Rural de Pernambuco. Foram coletadas 176 amostras do conduto auditivo de 88 caninos com diagnóstico clínico de otite externa. As amostras foram cultivadas em meio ágar base acrescido de sangue ovino, por 24-48 horas, os isolados que apresentaram características morfotintoriais para Staphylococcus spp. foram analisados através do sistema Matrix Assisted Laser Desorption Ionization - Time Of Flight (MALDI-TOF) para identificação das espécies. Os isolados de Staphylococcus spp. foram submetidos ao teste de sensibilidade fenotípica pelo método de difusão de discos e pesquisa de genes de resistência mecA e mecC, utilizando a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Das 176 amostras clínicas coletadas, foram obtidos 117 isolados a partir do cultivo microbiológico. Observou-se o crescimento de Staphylococcus spp. em 75,25% (88/117). 79,55% (70/88) desses isolados foram identificados a partir do MALDI-TOF. Das espécies identificadas através do MALDI-TOF, S. pseudintermedius apresentou maior frequência (48,57%; 34/70), seguida por S. chleiferi (30%; 21/70), S. simulans (10%; 7/70), S. intermedius (8,57%; 6/70), S. chromogenes e S delphini (1,42%; 1/70). Quanto à resistência fenotípica, a classe dos ß-lactâmicos foi a mais frequente (52,27%;46/88). 7,95% (7/88) dos isolados de Staphylococcus spp. foram positivos para o gene mecA. Não se observou associação significativa entre os fatores predisponentes e perpetuantes e a otite externa em cães. O presente estudo foi o primeiro da região Nordeste a identificar isolados de Staphylococcus spp. provenientes de otite externa canina a partir da técnica de MALDI-TOF. A alta frequência de isolados positivos para o gene mecA, demonstra a relevância do uso racional de antimicrobianos. É imprescindível a investigação dos fatores de risco, a não resolução da causa base implicará no insucesso da terapêutica e desenvolvimento de agentes multirresistentes.


The objective of this research was to carry out a clinical-epidemiological study and evaluate the antimicrobial resistance profile of Staphylococcus spp. in dogs with external otitis from the Veterinary Hospital of the Federal Rural University of Pernambuco. A total of 176 samples were collected from the auditory meatus of 88 canines with clinical diagnosis of external otitis. The samples were cultivated in agar base medium added with sheep blood, for 24-48 hours, the isolates that showed morphotintorial characteristics for Staphylococcus spp. were analyzed using the Matrix Assisted Laser Desorption Ionization - Time Of Flight (MALDI-TOF) system for species identification. Staphylococcus spp. were submitted to the phenotypic sensitivity test by the disk diffusion method and search for mecA and mecC resistance genes, using the Polymerase Chain Reaction (PCR). Of the 176 clinical samples collected, 117 isolates were obtained from microbiological culture. The growth of Staphylococcus spp. in 75.25% (88/117). 79.55% (70/88) of these isolates were identified from MALDI-TOFOf the species identified through MALDI-TOF, S. pseudintermedius had the highest frequency (48.57%; 34/70), followed by S. chleiferi (30%; 21/70), S. simulans (10%; 7/70), S. intermedius (8.57%; 6/70), S. chromogenes and S delphini (1.42%; 1/70). As for phenotypic resistance, the ß-lactams class was the most frequent (52.27%;46/88). 7.95% (7/88) of Staphylococcus spp. were positive for the mecA gene. There was no significant association between predisposing and perpetuating factors and otitis externa in dogs The present study was the first in the Northeast region to identify Staphylococcus spp. from canine external otitis using the MALDI-TOF technique. The high frequency of positive isolates for the mecA gene demonstrates the relevance of the rational use of antimicrobials. It is essential to investigate the risk factors, failure to resolve the underlying cause will lead to failure of therapy and development of multidrug-resistant agents.

16.
Pesqui. vet. bras ; 36(12): 1160-1164, Dec. 2016. tab
Artigo em Inglês | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-842027

Resumo

In addition to Staphylococcus aureus nowadays other coagulase-positive staphylococci (CoPS) and coagulase-negative staphylococci (CoNS), earlier considered of minor importance, are now accepted as relevant pathogens for humans and animals. The involvement of these microorganisms in bovine mastitis etiology and the possibility their transmission through milk to humans justify the requirement of developing reliable methods for identification of the most frequent species among them. The purpose of this study was to compare the phenotypic techniques with the genotypic method carried out by sequencing of the rpoB gene in identification of several species of the genus Staphylococcus isolated from bovine mastitis. A total of 300 staphylococci isolates of bovine mastitis cases from several Brazilian dairy herds were studied by phenotypic and genotypic techniques, respectively: 150 CoPS and 150 CoNS strains. A total of 18 CoNS different species and 4 CoPS species were identified. Among the CoNS the following species were recognized: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2.7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auricularis, 1(70%) S. saprophyticus subsp. bovis, 1(0.7%) S. capitis. And among the 150 CoPS were identified respectively: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%) S. intermedius e 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considering the 150 CoNS isolates, the identifications performed by phenotypic and genotypic tests presented 96.7% of concordance, kappa coefficient of agreement = 0.933, SE (standard error) of kappa=0.021 (95% confidence interval: 0.893 to 0.974), Pearson's correlation coefficient (r) = 0.9977, (confidence interval 95%: 0.9938 a 0.9992) and in relation to 150 CPS isolates it was detected an agreement of 98.7%, kappa = 0.960, SE of kappa = 0.016, (95% confidence interval: 0.929 to 0.992) Pearson's correlation coefficient (r) = 0.9994 (95% confidence interval: 0.9681 to 1.0000). The verified agreement strength between the identification methods can be considered as excellent. These results assure that according to laboratory resources any of them will be suitable to perform the staphylococci identification.(AU)


Além de Staphylococcus aureus atualmente outros estafilococos coagulase positiva (SCP) e estafilococos coagulase-negativos (SCN), anteriormente considerados de menor relevância, são reconhecidos como importantes patógenos para humanos e animais. O envolvimento desses micro-organismos na etiologia da mastite bovina e a possibilidade da sua transmissão através do leite aos humanos justifica a utilização de métodos confiáveis para a identificação das espécies mais frequentes. O objetivo deste estudo foi comparar as técnicas fenotípicas com o método genotípico realizada por sequenciamento do gene rpoB na identificação de espécies do gênero Staphylococcus spp. isolados de mastite bovina. Um total de 300 estafilococos isolados de casos de mastite bovina em diferentes rebanhos leiteiros brasileiros foram estudados por técnicas fenotípicas e genotípicas, respectivamente: 150 linhagens de SCP e 150 linhagens de SCN. Foram identificados um total de 18 espécies de SCN e 4 espécies SCP. Entre os SCN as seguintes espécies identificadas: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22 (15%) S. epidermidis, 20 (13%) S. hyicus, 10 (7%) S. xylosus, 7 (5%) S. haemolyticus, 6 (4%) S. simulans, 6 (4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6 (4%) S. hominis, 5 (3%) S. pasteuri, 4 (2,7%) S. cohnii, 3 (2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3 (2%) S. chromogenes, 3 (2%) S. sciuri, 2 (1%) S. saccharolyticus, 2 (1%) S. lugdunensi, 1 (0,7%) S. auricularis, 1 (70 %) S. saprophyticus subsp. bovis, 1 (0,7%) S. capitis. E entre as 150 SCP foram identificados, 105 (70%) S. aureus, 21 (14%), S. hyicus, 19 (13%) S. intermedius e 5 (3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considerando-se os 150 SCN isolados, as identificações realizadas por testes fenotípicos e genotípicos apresentaram 96,7% de concordância, coeficiente de concordância kappa = 0,933, SE (erro padrão) de kappa = 0,021 (95% intervalo de confiança: 0,893-0,974), coeficiente de correlação de Pearson (r) = 0,9977, (intervalo de confiança de 95%: 0,9938 a 0,9992) e em relação a 150 SCP isolados foi observado uma concordância de 98,7%, kappa = 0,960, sE de kappa = 0,016, (95% de intervalo de confiança: 0,929 a 0,992) coeficiente de correlação de Pearson (r) = 0,9994 (95% intervalo de confiança: 0,9681-1,0000). A correlação entre os métodos de identificação pode ser considerada como excelente. Esses resultados demonstraram que de acordo com os recursos disponíveis no laboratório, poderia ser utilizada qualquer uma das metodologias.(AU)


Assuntos
Animais , Feminino , Bovinos , Sequência de Bases , Genótipo , Mastite Bovina/etiologia , Fenótipo , Staphylococcus/genética
17.
Pesqui. vet. bras ; 36(12): 1160-1164, dez. 2016. tab
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-684049

Resumo

In addition to Staphylococcus aureus nowadays other coagulase-positive staphylococci (CoPS) and coagulase-negative staphylococci (CoNS), earlier considered of minor importance, are now accepted as relevant pathogens for humans and animals. The involvement of these microorganisms in bovine mastitis etiology and the possibility their transmission through milk to humans justify the requirement of developing reliable methods for identification of the most frequent species among them. The purpose of this study was to compare the phenotypic techniques with the genotypic method carried out by sequencing of the rpoB gene in identification of several species of the genus Staphylococcus isolated from bovine mastitis. A total of 300 staphylococci isolates of bovine mastitis cases from several Brazilian dairy herds were studied by phenotypic and genotypic techniques, respectively: 150 CoPS and 150 CoNS strains. A total of 18 CoNS different species and 4 CoPS species were identified. Among the CoNS the following species were recognized: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2.7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auricularis, 1(70%) S. saprophyticus subsp. bovis, 1(0.7%) S. capitis. And among the 150 CoPS were identified respectively: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%) S. intermedius e 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considering the 150 CoNS isolates, the identifications performed by phenotypic and genotypic tests presented 96.7% of concordance, kappa coefficient of agreement = 0.933, SE (standard error) of kappa=0.021 (95% confidence interval: 0.893 to 0.974), Pearsons correlation coefficient (r) = 0.9977, (confidence interval 95%: 0.9938 a 0.9992) and [...](AU)


Além de Staphylococcus aureus atualmente outros estafilococos coagulase positiva (SCP) e estafilococos coagulase-negativos (SCN), anteriormente considerados de menor relevância, são reconhecidos como importantes patógenos para humanos e animais. O envolvimento desses micro-organismos na etiologia da mastite bovina e a possibilidade da sua transmissão através do leite aos humanos justifica a utilização de métodos confiáveis para a identificação das espécies mais frequentes. O objetivo deste estudo foi comparar as técnicas fenotípicas com o método genotípico realizada por sequenciamento do gene rpoB na identificação de espécies do gênero Staphylococcus spp. isolados de mastite bovina. Um total de 300 estafilococos isolados de casos de mastite bovina em diferentes rebanhos leiteiros brasileiros foram estudados por técnicas fenotípicas e genotípicas, respectivamente: 150 linhagens de SCP e 150 linhagens de SCN. Foram identificados um total de 18 espécies de SCN e 4 espécies SCP. Entre os SCN as seguintes espécies identificadas: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22 (15%) S. epidermidis, 20 (13%) S. hyicus, 10 (7%) S. xylosus, 7 (5%) S. haemolyticus, 6 (4%) S. simulans, 6 (4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6 (4%) S. hominis, 5 (3%) S. pasteuri, 4 (2,7%) S. cohnii, 3 (2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3 (2%) S. chromogenes, 3 (2%) S. sciuri, 2 (1%) S. saccharolyticus, 2 (1%) S. lugdunensi, 1 (0,7%) S. auricularis, 1 (70 %) S. saprophyticus subsp. bovis, 1 (0,7%) S. capitis. E entre as 150 SCP foram identificados, 105 (70%) S. aureus, 21 (14%), S. hyicus, 19 (13%) S. intermedius e 5 (3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considerando-se os 150 SCN isolados, as identificações realizadas por testes fenotípicos e genotípicos apresentaram 96,7% de concordância, coeficiente de concordância kappa = 0,933, SE (erro padrão) de [...](AU)


Assuntos
Animais , Feminino , Bovinos , Staphylococcus/genética , Fenótipo , Genótipo , Mastite Bovina/etiologia , Sequência de Bases
18.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-220913

Resumo

A mastite é uma importante enfermidade de rebanhos bovinos leiteiros que acarreta prejuízos econômicos significativos. Espécies de estafilococos são frequentemente isoladas desse processo infeccioso. Bactérias podem produzir biofilme associado a uma maior capacidade de persistência tanto no organismo hospedeiro quanto no ambiente. A habilidade de produzir biofilme e suas possíveis implicações na disseminação e tratamento da doença são mais estudadas na espécie Staphylococcus aureus, mas para várias outras espécies os estudos são escassos. Desta forma, o presente estudo teve como objetivos investigar a ocorrência da mastite em rebanhos leiteiros de produção familiar no estado do Acre, Brasil, e analisar as espécies de estafilococos envolvidas com mastite bovina, a habilidade da produção de biofilme e a associação de sua produção com multiresistência e intensidade da reação no CMT. Amostras de leite foram coletadas em 23 propriedades leiteiras situadas em cinco municípios do estado do Acre. Um total de 339 vacas mestiças foram testadas pelo CMT, sendo detectados 109 animais (229 tetos) reagentes ao teste. Após isolamento em ágar sangue, os cocos Gram positivos produtores de catalase foram submetidos à identificação por MALDI TOF MS. Um total de 103 estirpes foram identificadas como estafilococos, sendo mais prevalentes as espécies Staphylococcus chromogenes (58,3%) e S. aureus (19,4%). A produção de biofilme foi avaliada quantitativamente pelo teste de aderência em microplaca. Dentre todas as amostras de estafilococos, 71,8% foram produtoras de biofilme. A maioria das amostras de S. chromogenes (68,3%) apresentou capacidade de produzir biofilme, variando de fraco (43.3%), moderado (13.3%) a forte (11,7%) produtor. Entre as amostras de S. aureus, 50% não foram produtoras e nenhuma foi produtora forte. Essa capacidade de produção de biofilme mostrou-se associada à multirresistência a antimicrobianos, além de diminuir a intensidade no teste CMT, podendo mascarar o diagnóstico. Adicionalmente, foi investigada a presença de genes relacionados com produção de biofilme (IcaD, cna, eno, ebpS) em 55 cepas de Staphylococcus spp. produtoras de biofilme. Todos os genes testados foram encontrados simultaneamente apenas na espécie S. chromogenes. Esses resultados podem estar associados à ampla distribuição de casos de mastite bovina por S. chromogenes nos rebanhos estudados, uma vez que a produção de biofilme tem importante papel na adesão e colonização do epitélio mamário, bem como em equipamentos de ordenha, o que favorece a transmissão e dispersão do patógeno e dificulta o controle e tratamento da mastite.


Mastitis is an important disease of dairy herds that causes significant economic losses. Staphylococcus species are often isolated from this infectious process. The capacity to produce biofilm is related to a greater ability to persist in both the host organism and the environment. Biofilm production has been extensively studied in S. aureus, but little studied in other specie. Thus, the present study aimed to investigate staphylococcal species involved with bovine mastitis in dairy herds in northern Brazil, their ability to produce biofilm and the implications of this virulence factor. Milk samples were collected from 23 dairy farms located in 5 municipalities in the state of Acre. A total of 339 crossbred cows were tested by California Mastitis Test (CMT), with 109 animals (229 udder ceilings) been reactive to the test. After bacterial isolation in blood agar, the catalase-positive and Gram-positive cocci were submitted to identification by MALDI TOF MS. Of 103 strains identified as staphylococci, Staphylococcus chromogenes (58.3%) and S. aureus (19.4%) were the most prevalent species. Biofilm production was quantitatively evaluated by the microplate adherence test. Among all Staphylococcus strains, 71.8% were biofilm producers. Most strains of S. chromogenes (68.3%) had the capacity to produce biofilm, ranging from weak (43.3%), moderate (13.3%) to strong (11.7%) producer. Among S. aureus strains, 50% were non-biofilm producers and none were strong producers. Our data shows an association between biofilm production and multidrug resistance, and an association with the reduction in the response to CMT test, which can mask the diagnosis. Additionally, the presence of genes related to biofilm production (IcaD, cna, eno, ebpS) was investigated in 55 biofilm producers strains of Staphylococcus spp.. All the tested genes were found simultaneously only in the S. chromogenes specie. These results may be associated with the wide distribution of cases of bovine mastitis caused by S. chromogenes on the studied herds, since the production of biofilm has an important role in the adhesion and colonization of the mammary epithelium, as well as in milking equipment, which favors the transmission and dispersion pathogen and makes it difficult to control and treat mastitis.

19.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-221550

Resumo

Objetivou-se neste estudo desafiar leucócitos polimorfonucleares (PMNL) sanguíneos de ovelhas com espécies de Staphylococcus (S. aureus,S. haemolyticus,S. chromogenes,S. simulans,S. xylosus,S. sciuri eS. devriesi)isolados de diferentes nichos ecológicos de ovelhas. Para isso, foi coletado sangue de 14 ovelhas da Raça Santa Inês (7 primíparas e 7 multíparas) e 14 ovelhas da raça Lacaune (7 primíparas e 7 multíparas). Avaliamos a viabilidade, a produção intracelular de espécie reativa de oxigênio (ERO) dos PMNL, e a capacidade de resistir à fagocitose opsonizada e não opsonizada dos diferentes isolados deStaphylococcusspp. por citometria de fluxo. Inicialmente observamos as possíveis diferenças na viabilidade, nas respostas fagocíticas e na produção intracelular de espécies reativas de oxigênio por PMNL sanguíneos de ovelhas Santa Inês e Lacaune, primíparas e multíparas, desafiados com um isolado de Staphylococcus aureus. Posteriormente, avaliamos o comportamento de escape das defesas imunes dos isolados de estafilococos aureus e não aureus, considerando a fagocitose e a inibição da produção de ERO por PMNL do sangue de ovelhas da raça Santa Inês. Observamos maior intensidade de fagocitose de S. aureus por PMNL de ovelhas multíparas e nenhum efeito da paridade sobre a funcionalidade dos PMNL sanguíneos foi encontrado. O comportamento de fagocitose foi diferente entre as raças Santa Inês e Lacaune e a opsonização de S. aureus mediada por anticorpos foi associada a uma menor intensidade de fagocitose por ovelhas primíparas. Os PMNL de ovelhas Lacaune levaram a maior média geométrica de intensidade da fluorescência (GMFI) da produção de ERO intracelular quando estimulados com S. aureus, sugerindo que uma maior atividade microbicida e/ou inflamação poderia ser desencadeada nessas ovelhas. Nossos resultados mostram que ovelhas multíparas fagocitaram mais que as primíparas e que fagocitaram mais Staphylococcus não aureus (SNA) do que S. aureus. Entre os isolados de SNA, Staphylococcus chromogenes foi o que apresentou maior média geométrica da intensidade de fluorescência (GMFI) de fagocitose. Todas as espécies, exceto S. devriesi apresentaram maior porcentagem de fagocitose opsonizada do que não opsonizada. Pela primeira vez, demonstramos que ovelhas multíparas fagocitaram mais que ovelhas prímiparas, além de observarmos maior intensidade de fagocitose de S. chromogenes por PMNLs de ovelhas. Dessa forma, nosso estudo fornece novos insights sobre a funcionalidade dos PMNLs em ovelhas primíparas e multíparas, o que poderia afetar sua saúde, junto a outras possíveis variáveis como manejo e condições sanitárias do rebanho.


The aim of this study was to challenge blood polymorphonuclear leukocytes (PMNL) from sheep with Staphylococcus species (S. aureus, S. haemolyticus, S. chromogenes, S. simulans, S. xylosus, S. sciuri eS. Devriesi) isolated from different ecological niches of sheep. For this, blood was collected from 14 Santa Inês sheep (7 primiparous and 7 multiparous) and 14 Lacaune sheep (7 primiparous and 7 multiparous). We evaluated the viability, the intracellular production of reactive oxygen species (ROS) of PMNL, and the ability to resist opsonized and nonopsonized phagocytosis of the different Staphylococcusspp isolates. by flow cytometry. Initially, we observed the possible differences in viability, phagocytic responses and intracellular production of reactive oxygen species by blood PMNL from Santa Inês and Lacaune sheep, primiparous and multiparous, challenged with a Staphylococcus aureus isolate. Subsequently, we evaluated the escape behavior of the immune defenses of aureus and non-aureus staphylococcus isolates, considering phagocytosis and the inhibition of ROS production by PMNL from the blood of Santa Inês sheep.We observed a higher intensity of phagocytosis of S. aureus by PMNL from multiparous ewes and no effect of parity on the functionality of blood PMNL was found. The phagocytosis behavior was different between the Santa Inês and Lacaune breeds and the antibody mediated S. aureus opsonization was associated with a lower intensity of phagocytosis by primiparous sheep. The PMNL of Lacaune ewes led to the highest geometric mean fluorescence intensity (GMFI) of intracellular ROS production when stimulated with S. aureus, suggesting that greater microbicidal activity and / or inflammation could be triggered in these ewes. Our results show that multiparous sheep phagocytized more than primiparous ewes and that phagocytized more non-aureus Staphylococcus (ANS) than S. aureus. Among SNA isolates, Staphylococcus chromogenes was the one with the highest geometric mean fluorescence intensity (GMFI) of phagocytosis. All species, except S. devriesi, presented a higher percentage of opsonized phagocytosis than non-opsonized. For the first time, we demonstrated that multiparous ewes phagocytosed more than primiparous ewes, in addition to observing a higher intensity of phagocytosis of S. chromogenes by sheep PMNLs. Thus, our study provides new insights into the functionality of PMNLs in primiparous and multiparous ewes, which could affect their health, along with other possible variables such as herd management and health conditions.

20.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-222118

Resumo

Objetivou-se caracterizar e comparar a formação de biofilme, suscetibilidade a antimicrobianos in vitro, presença e distribuição de genes de virulência e de resistência antimicrobiana, além de determinar a diversidade clonal de estirpes de Staphylococcus spp. isoladas em leite de vacas tratadas e não tratadas com homeopatia. Os isolados de Staphylococcus spp. foram identificados por reação em cadeia da polimerase-espaço transcrito interno (ITS-PCR) e foram investigados quanto a presença dos genes sea, seb, sec, sed, see, tsst-1, pvl e eta codificadores de toxinas, dos genes icaABCD, bap, aap, atlE e bhp relacionados com a produção de biofilme e dos genes blaZ e mecA associados com a resistência antimicrobiana. Amostras mecA positivas foram tipadas para o tipo SCCmec por Multiplex Polymerase Chain Reaction (PCR Multiplex), enquanto a pesquisa de produção in vitro de bioflme ocorreu pelo método de aderência em placas de poliestireno. O perfil de resistência antimicrobiana foi determinado pelo método de disco-difusão em ágar e o perfil de restrição enzimática por Pulsed-Field Gel Electroforesis (PFGE). Clusters de S. aureus e S. epidermidis com três ou mais isolados tiveram uma linhagem selecionada para tipagem por Multilocus Sequence Typing (MLST), cujas sequências foram analisadas por banco de dados (http://www.mlst.net). Verificou-se prevalência de S. aureus (50,5%), que apresentou distribuição semelhante nos dois grupos, enquanto Staphylococcus spp. coagulase-negativos (CoNS) (70,8%) foram frequentes em vacas tratadas (p=0,036). O gene sec ocorreu apenas em S. chromogenes, com maior frequência em animais tratados (p=0,004) e o gene pvl foi encontrado em 66,7% de S. aureus. O operon icaADBC e os genes icaA e icaD associados prevaleceram em S. aureus, porém o gene icaD foi predominante no grupo de vacas tratadas (p=0,012). Os genes atlE e aap foram carreados apenas por S. epidermidis. Entre as estirpes com produção de biofilme in vitro, 76,8% continham pelo menos um gene relacionado com esta característica. Os genes mecA e Blaz apresentaram distribuição similar em vacas tratadas e não tratadas, porém mecA foi identificado apenas em S. epidermidis (12,1%), todos tipados como SCCmec tipo I. A susceptibilidade antimicrobiana revelou um perfil de multirresistência em 29,3% das estirpes. Houve predominância de um cluster majoritário em S. epidermidis e S. chromogenes, o que não ocorreu para S. aureus. A sequência do tipo (ST) 81 foi predominante em S. epidermidis, enquanto as STs 1, 5 e 126 em S. aureus. A presença de genes de toxinas, resistência antimicrobiana e biofilme, bem como a produção in vitro deste fator de patogenicidade, aliados à persistência de perfis clonais bacterianos, demonstram que sistemas em transição para manejos orgânicos podem representar risco à saúde pública pela circulação de patógenos zoonóticos em leite bovino. Medidas eficazes devem ser tomadas no controle dos produtos lácteos e manejo dos animais.


The present study aimed to characterize and compare biofilm formation, in vitro antimicrobial susceptibility, and the presence and distribution of virulence and antimicrobial resistance genes, as well as to determine the clonal diversity of Staphylococcus spp. strains isolated in milk from cows treated or not with homeopathy. The Staphylococcus spp. isolates were identified by polymerase chain reaction targeting the internal transcribed spacer (ITS-PCR) and were investigated regarding the presence of the sea, seb, sec, sed, see, tsst-1, pvl, and eta toxin-encoding genes, the icaABCD, bap, aap, atlE, and bhp genes, related to the production of biofilm, and the blaZ and mecA genes, which are associated with antimicrobial resistance. mecA-positive samples were typed for SCCmec by Multiplex Polymerase Chain Reaction (Multiplex PCR), while the assessment of in vitro biofilm production was carried out using the polystyrene plate adhesion method. The antimicrobial resistance profile was determined using the agar disc diffusion method, and the enzyme restriction profile, by Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE). Clusters of S. aureus and S. epidermidis with three or more isolates had one strain selected for typing by Multilocus Sequence Typing (MLST), and the sequences were analyzed on an online database (http://www.mlst.net). A 50.5% prevalence of S. aureus was observed, with similar distribution in both groups, while coagulase-negative Staphylococcus spp. (CoNS) were frequent (70.8%) in treated cows (p=0.036). The sec gene was found only in S. chromogenes and more frequently in treated animals (p=0.004), while the pvl gene was observed in 66.7% of the S. aureus. The icaADBC operon and the associated icaA and icaD genes prevailed in S. aureus, although the icaD gene was predominant in the treated cows group (p=0.012). The atlE and aap genes were carried only by S. epidermidis. Among the strains presenting in vitro biofilm production, 76.8% had at least one gene related to this trait. The mecA and Blaz genes exhibited similar distribution in treated and untreated cows, although mecA was identified only in S. epidermidis (12.1%), all of which were typed as SCCmec type I. The antimicrobial susceptibility assay revealed a multiresistance profile in 29.3% of the strains. There was a predominance of a major cluster in S. epidermidis and S. chromogenes, which did not occur for S. aureus. Sequence type (ST) 81 was predominant in S. epidermidis, while STs 1, 5, and 126 were prevalent in S. aureus. The presence of genes related to toxin production, antimicrobial resistance, and biofilm formation, as well as the in vitro production of this pathogenicity factor, combined with the persistence of bacterial clonal profiles, demonstrate that systems in transition to organic management can represent a risk to public health due to the circulation of zoonotic pathogens in bovine milk. Effective measures must be taken to control dairy products and animal management.

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