Resumo
O objetivo deste trabalho foi identificar espécies de Staphylococcus coagulase negativa em leite de vacas leiteiras com mastite por testes fenotípicos e pela técnica de MALDI-TOF MS. Foram utilizadas 85 isolados de estafilococos provenientes de leite de vacas com mastite. Todos os isolados foram caracterizados fenotipicamente por avaliação da morfologia das colônias, coloração de Gram, testes de oxidase, catalase e coagulase. Posteriormente, foram analisados os espectros de proteínas gerados no MALDI-TOF MS, seguida pela separação e detecção de íons pelo tempo de voo (TOF).Foram identificadas sete espécies, sendo a de maior ocorrência S. chromogenes 65 (76%), seguida por, S. hyicus 5 (6%), S. epidermidis 4 (5%).A técnica de MALDI-TOF demonstrou-se efetiva na caracterização de espécies de Staphylococcus causadores de mastite bovina.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Leite/microbiologia , Mastite Bovina/etiologia , Mastite Bovina/genética , Staphylococcus/genética , Staphylococcus/isolamento & purificação , Staphylococcus/patogenicidade , Técnicas Bacteriológicas , Espectrometria de Massas por Ionização e Dessorção a Laser Assistida por Matriz/veterináriaResumo
O objetivo deste trabalho foi identificar espécies de Staphylococcus coagulase negativa em leite de vacas leiteiras com mastite por testes fenotípicos e pela técnica de MALDI-TOF MS. Foram utilizadas 85 isolados de estafilococos provenientes de leite de vacas com mastite. Todos os isolados foram caracterizados fenotipicamente por avaliação da morfologia das colônias, coloração de Gram, testes de oxidase, catalase e coagulase. Posteriormente, foram analisados os espectros de proteínas gerados no MALDI-TOF MS, seguida pela separação e detecção de íons pelo tempo de voo (TOF).Foram identificadas sete espécies, sendo a de maior ocorrência S. chromogenes 65 (76%), seguida por, S. hyicus 5 (6%), S. epidermidis 4 (5%).A técnica de MALDI-TOF demonstrou-se efetiva na caracterização de espécies de Staphylococcus causadores de mastite bovina.
Assuntos
Animais , Bovinos , Espectrometria de Massas por Ionização e Dessorção a Laser Assistida por Matriz , Leite/microbiologia , Mastite Bovina/etiologia , Mastite Bovina/genética , Staphylococcus/genética , Staphylococcus/isolamento & purificação , Staphylococcus/patogenicidade , Técnicas BacteriológicasResumo
Mammary disorders in mares are rare and usually only one animal per paddock is affected. In this report, two mares with 7 and 9 years old, were concomitantly diagnosis of chronic pyogranulomatous mastitis, associated with the Splendore-Hoeppli reaction, indicative of botryomycosis a rare, chronic suppurative disease with microabscess formation, characterized by in vivo formation of eosinophilic materials around microorganisms or biologically inert material. Various bacteria can cause botryomycosis in horses, and the most frequently isolated one is Staphylococcussp., particularly S. aureus. This report confirms the role of Staphylococcus sp.; however, specifically S. hyicus and S. cohnii that prior to the current report, had not been associated with cases of botryomycosis.(AU)
Enfermidades mamárias em éguas são raras e, normalmente, apenas um animal é afetado. Neste relato, duas éguas, de sete e nove anos, foram diagnosticadas concomitantemente com mastite crônica piogranulomatosa, associada com reação de Splendore - Hoeppli, indicativa de botriomicose, uma doença crônica supurativa rara, com formação de microabscessos caracterizados pela presença de material eosinofílico em torno dos microrganismos ou de material biologicamente inerte. Várias bactérias podem causar botriomicose em cavalos, sendo Staphylococcus sp., particularmente S. aureus, as mais frequentemente isoladas. Este relato confirma o papel do Staphylococcus sp, no entanto este é o primeiro relato em que S. hyicus e S. cohnii foram identificados em lesões relacionadas à botriomicose.(AU)
Assuntos
Animais , Doenças Mamárias/microbiologia , Mastite/microbiologia , Cavalos/anormalidades , Staphylococcus/patogenicidadeResumo
Mammary disorders in mares are rare and usually only one animal per paddock is affected. In this report, two mares with 7 and 9 years old, were concomitantly diagnosis of chronic pyogranulomatous mastitis, associated with the Splendore-Hoeppli reaction, indicative of botryomycosis a rare, chronic suppurative disease with microabscess formation, characterized by in vivo formation of eosinophilic materials around microorganisms or biologically inert material. Various bacteria can cause botryomycosis in horses, and the most frequently isolated one is Staphylococcussp., particularly S. aureus. This report confirms the role of Staphylococcus sp.; however, specifically S. hyicus and S. cohnii that prior to the current report, had not been associated with cases of botryomycosis.(AU)
Enfermidades mamárias em éguas são raras e, normalmente, apenas um animal é afetado. Neste relato, duas éguas, de sete e nove anos, foram diagnosticadas concomitantemente com mastite crônica piogranulomatosa, associada com reação de Splendore - Hoeppli, indicativa de botriomicose, uma doença crônica supurativa rara, com formação de microabscessos caracterizados pela presença de material eosinofílico em torno dos microrganismos ou de material biologicamente inerte. Várias bactérias podem causar botriomicose em cavalos, sendo Staphylococcus sp., particularmente S. aureus, as mais frequentemente isoladas. Este relato confirma o papel do Staphylococcus sp, no entanto este é o primeiro relato em que S. hyicus e S. cohnii foram identificados em lesões relacionadas à botriomicose.(AU)
Assuntos
Animais , Doenças Mamárias/microbiologia , Cavalos/anormalidades , Mastite/microbiologia , Staphylococcus/patogenicidadeResumo
This research aimed to detect coagulase-positive Staphylococcus (CPS) directly in samples of artificially contaminated milk, using multiplex PCR (mPCR). Standard and isolated bacterial strains of S. aureus, S. epidermidis, S. hyicus, S. intermedius, Listeria monocytogenes and Escherichia coli species were used, evaluating the specificity and detection limit of mPCR, for artificially contaminated UHT milk. Primers specific for the nuc gene (NUC1-NUC2 were used for S. aureus, NUC3-NUC4 for S. hyicus and NUC5-NUC6 for S. intermedius). It was possible to detect the three target species by mPCR, directly from bovine whole milk, with adequate specificity and acceptable detention limit for identification of coagulase-positive Staphylococcus (CPS) in foods. The specificity was determined by the amplification of species-specific fragments, and the detection limit was assessed by the detection thresholds obtained for the three species (103 CFU mL-1). From these results, the mPCR described, with the proposed set of primers, has the potential for use in precise identification and differentiation between CPSs in milk samples.(AU)
Esta pesquisa teve como objetivo detectar diretamente em amostras de leite contaminado artificialmente Staphylococcus coagulase positiva (ECP) por multiplex PCR (mPCR). Cepas padrão e isolados de S. aureus, S. epidermidis, S. hyicus, S. intermedius, Listeria monocytogenes e Escherichia coli foram utilizados no estudo. Foram utilizados primers específicos para o gene nuc (NUC1-NUC2 para o S. aureus, NUC3-NUC4 para o S. hyicus e NUC5-NUC6 para o S. intermedius ). Foi possível detectar as três espécies-alvo por mPCR, formar diretamente nas amostras de leite integral bovino, com especificidade adequada e limite de detecção aceitável para identificação de espécies de Staphylococcus coagulase positiva (ECP) em alimentos. A especificidade foi determinada por meio da amplificação de fragmentos específicos das espécies e o limite de detecção foi avaliado pelos limiares de detecção obtidos para as três espécies (103 UFC mL-1 para as espécies presentes nas amostras de leite contaminadas artificialmente).(AU)
Assuntos
Leite/microbiologia , Staphylococcus aureus/patogenicidade , Staphylococcus epidermidis/patogenicidade , Staphylococcus hyicus/patogenicidade , Staphylococcus intermedius/patogenicidade , Listeria monocytogenes/patogenicidade , Escherichia coli/patogenicidade , Reação em Cadeia da Polimerase Multiplex/métodos , Contaminação de Alimentos/análise , Contaminação de Alimentos/prevenção & controleResumo
In addition to Staphylococcus aureus nowadays other coagulase-positive staphylococci (CoPS) and coagulase-negative staphylococci (CoNS), earlier considered of minor importance, are now accepted as relevant pathogens for humans and animals. The involvement of these microorganisms in bovine mastitis etiology and the possibility their transmission through milk to humans justify the requirement of developing reliable methods for identification of the most frequent species among them. The purpose of this study was to compare the phenotypic techniques with the genotypic method carried out by sequencing of the rpoB gene in identification of several species of the genus Staphylococcus isolated from bovine mastitis. A total of 300 staphylococci isolates of bovine mastitis cases from several Brazilian dairy herds were studied by phenotypic and genotypic techniques, respectively: 150 CoPS and 150 CoNS strains. A total of 18 CoNS different species and 4 CoPS species were identified. Among the CoNS the following species were recognized: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2.7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auricularis, 1(70%) S. saprophyticus subsp. bovis, 1(0.7%) S. capitis. And among the 150 CoPS were identified respectively: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%) S. intermedius e 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considering the 150 CoNS isolates, the identifications performed by phenotypic and genotypic tests presented 96.7% of concordance, kappa coefficient of agreement = 0.933, SE (standard error) of kappa=0.021 (95% confidence interval: 0.893 to 0.974), Pearson's correlation coefficient (r) = 0.9977, (confidence interval 95%: 0.9938 a 0.9992) and in relation to 150 CPS isolates it was detected an agreement of 98.7%, kappa = 0.960, SE of kappa = 0.016, (95% confidence interval: 0.929 to 0.992) Pearson's correlation coefficient (r) = 0.9994 (95% confidence interval: 0.9681 to 1.0000). The verified agreement strength between the identification methods can be considered as excellent. These results assure that according to laboratory resources any of them will be suitable to perform the staphylococci identification.(AU)
Além de Staphylococcus aureus atualmente outros estafilococos coagulase positiva (SCP) e estafilococos coagulase-negativos (SCN), anteriormente considerados de menor relevância, são reconhecidos como importantes patógenos para humanos e animais. O envolvimento desses micro-organismos na etiologia da mastite bovina e a possibilidade da sua transmissão através do leite aos humanos justifica a utilização de métodos confiáveis para a identificação das espécies mais frequentes. O objetivo deste estudo foi comparar as técnicas fenotípicas com o método genotípico realizada por sequenciamento do gene rpoB na identificação de espécies do gênero Staphylococcus spp. isolados de mastite bovina. Um total de 300 estafilococos isolados de casos de mastite bovina em diferentes rebanhos leiteiros brasileiros foram estudados por técnicas fenotípicas e genotípicas, respectivamente: 150 linhagens de SCP e 150 linhagens de SCN. Foram identificados um total de 18 espécies de SCN e 4 espécies SCP. Entre os SCN as seguintes espécies identificadas: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22 (15%) S. epidermidis, 20 (13%) S. hyicus, 10 (7%) S. xylosus, 7 (5%) S. haemolyticus, 6 (4%) S. simulans, 6 (4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6 (4%) S. hominis, 5 (3%) S. pasteuri, 4 (2,7%) S. cohnii, 3 (2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3 (2%) S. chromogenes, 3 (2%) S. sciuri, 2 (1%) S. saccharolyticus, 2 (1%) S. lugdunensi, 1 (0,7%) S. auricularis, 1 (70 %) S. saprophyticus subsp. bovis, 1 (0,7%) S. capitis. E entre as 150 SCP foram identificados, 105 (70%) S. aureus, 21 (14%), S. hyicus, 19 (13%) S. intermedius e 5 (3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considerando-se os 150 SCN isolados, as identificações realizadas por testes fenotípicos e genotípicos apresentaram 96,7% de concordância, coeficiente de concordância kappa = 0,933, SE (erro padrão) de kappa = 0,021 (95% intervalo de confiança: 0,893-0,974), coeficiente de correlação de Pearson (r) = 0,9977, (intervalo de confiança de 95%: 0,9938 a 0,9992) e em relação a 150 SCP isolados foi observado uma concordância de 98,7%, kappa = 0,960, sE de kappa = 0,016, (95% de intervalo de confiança: 0,929 a 0,992) coeficiente de correlação de Pearson (r) = 0,9994 (95% intervalo de confiança: 0,9681-1,0000). A correlação entre os métodos de identificação pode ser considerada como excelente. Esses resultados demonstraram que de acordo com os recursos disponíveis no laboratório, poderia ser utilizada qualquer uma das metodologias.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Bovinos , Sequência de Bases , Genótipo , Mastite Bovina/etiologia , Fenótipo , Staphylococcus/genéticaResumo
In addition to Staphylococcus aureus nowadays other coagulase-positive staphylococci (CoPS) and coagulase-negative staphylococci (CoNS), earlier considered of minor importance, are now accepted as relevant pathogens for humans and animals. The involvement of these microorganisms in bovine mastitis etiology and the possibility their transmission through milk to humans justify the requirement of developing reliable methods for identification of the most frequent species among them. The purpose of this study was to compare the phenotypic techniques with the genotypic method carried out by sequencing of the rpoB gene in identification of several species of the genus Staphylococcus isolated from bovine mastitis. A total of 300 staphylococci isolates of bovine mastitis cases from several Brazilian dairy herds were studied by phenotypic and genotypic techniques, respectively: 150 CoPS and 150 CoNS strains. A total of 18 CoNS different species and 4 CoPS species were identified. Among the CoNS the following species were recognized: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2.7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auricularis, 1(70%) S. saprophyticus subsp. bovis, 1(0.7%) S. capitis. And among the 150 CoPS were identified respectively: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%) S. intermedius e 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considering the 150 CoNS isolates, the identifications performed by phenotypic and genotypic tests presented 96.7% of concordance, kappa coefficient of agreement = 0.933, SE (standard error) of kappa=0.021 (95% confidence interval: 0.893 to 0.974), Pearsons correlation coefficient (r) = 0.9977, (confidence interval 95%: 0.9938 a 0.9992) and [...](AU)
Além de Staphylococcus aureus atualmente outros estafilococos coagulase positiva (SCP) e estafilococos coagulase-negativos (SCN), anteriormente considerados de menor relevância, são reconhecidos como importantes patógenos para humanos e animais. O envolvimento desses micro-organismos na etiologia da mastite bovina e a possibilidade da sua transmissão através do leite aos humanos justifica a utilização de métodos confiáveis para a identificação das espécies mais frequentes. O objetivo deste estudo foi comparar as técnicas fenotípicas com o método genotípico realizada por sequenciamento do gene rpoB na identificação de espécies do gênero Staphylococcus spp. isolados de mastite bovina. Um total de 300 estafilococos isolados de casos de mastite bovina em diferentes rebanhos leiteiros brasileiros foram estudados por técnicas fenotípicas e genotípicas, respectivamente: 150 linhagens de SCP e 150 linhagens de SCN. Foram identificados um total de 18 espécies de SCN e 4 espécies SCP. Entre os SCN as seguintes espécies identificadas: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22 (15%) S. epidermidis, 20 (13%) S. hyicus, 10 (7%) S. xylosus, 7 (5%) S. haemolyticus, 6 (4%) S. simulans, 6 (4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6 (4%) S. hominis, 5 (3%) S. pasteuri, 4 (2,7%) S. cohnii, 3 (2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3 (2%) S. chromogenes, 3 (2%) S. sciuri, 2 (1%) S. saccharolyticus, 2 (1%) S. lugdunensi, 1 (0,7%) S. auricularis, 1 (70 %) S. saprophyticus subsp. bovis, 1 (0,7%) S. capitis. E entre as 150 SCP foram identificados, 105 (70%) S. aureus, 21 (14%), S. hyicus, 19 (13%) S. intermedius e 5 (3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considerando-se os 150 SCN isolados, as identificações realizadas por testes fenotípicos e genotípicos apresentaram 96,7% de concordância, coeficiente de concordância kappa = 0,933, SE (erro padrão) de [...](AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Bovinos , Staphylococcus/genética , Fenótipo , Genótipo , Mastite Bovina/etiologia , Sequência de BasesResumo
ABSTRACT:Staphylococcus hyicus is an important micro organism Veterinary Medicine and public health, because of its ability to cause disease in animals and humans. The present study aims to conduct a literature review to bring together the most current information about S. hyicus. Thus, the specie's characteristics, the pathogenicity factors and their occurrence in animals, food and humans were approached.
RESUMO:Staphylococcus hyicus é um micro-organismo de impor tância em Medicina Veterinária e saúde pública, tendo em vista sua capacidade de causar doenças em animais e seres humanos. O pre sente trabalho teve como objetivo realizar uma revisão de literatura a fim de reunir as informações mais atuais sobre o S. hyicus. Para tanto, foram abordados: características da espécie, fatores de pato- genicidade e sua ocorrência em animais, alimentos e seres humanos.
Resumo
ABSTRACT:Staphylococcus hyicus is an important micro organism Veterinary Medicine and public health, because of its ability to cause disease in animals and humans. The present study aims to conduct a literature review to bring together the most current information about S. hyicus. Thus, the specie's characteristics, the pathogenicity factors and their occurrence in animals, food and humans were approached.
RESUMO:Staphylococcus hyicus é um micro-organismo de impor tância em Medicina Veterinária e saúde pública, tendo em vista sua capacidade de causar doenças em animais e seres humanos. O pre sente trabalho teve como objetivo realizar uma revisão de literatura a fim de reunir as informações mais atuais sobre o S. hyicus. Para tanto, foram abordados: características da espécie, fatores de pato- genicidade e sua ocorrência em animais, alimentos e seres humanos.
Resumo
Staphylococcus hyicus é um micro-organismo de importância em Medicina Veterinária e saúde pública, tendo em vista sua capacidade de causar doenças em animais e seres humanos. O presente trabalho teve como objetivo realizar uma revisão de literatura a fim de reunir as informações mais atuais sobre o S. hyicus. Para tanto, foram abordados: características da espécie, fatores de patogenicidade e sua ocorrência em animais, alimentos e seres humanos.(AU)
Staphylococcus hyicus is an important micro organism Veterinary Medicine and public health, because of its ability to cause disease in animals and humans. The present study aims to conduct a literature review to bring together the most current information about S. hyicus. Thus, the specie's characteristics, the pathogenicity factors and their occurrence in animals, food and humans were approached.(AU)
Assuntos
Humanos , Animais , Virulência , Staphylococcus hyicus/patogenicidade , Microbiologia de Alimentos , Doenças Transmitidas por Alimentos/microbiologia , Doenças Transmitidas por Alimentos/virologia , InfecçõesResumo
Staphylococcus hyicus is an important microorganism Veterinary Medicine and public health, because of its ability to cause disease in animals and humans. The present study aims to conduct a literature review to bring together the most current information about S. hyicus. Thus, the species characteristics, the pathogenicity factors and their occurrence in animals, food and humans were approached.
Staphylococcus hyicus é um micro-organismo de importância em Medicina Veterinária e saúde pública, tendo em vista sua capacidade de causar doenças em animais e seres humanos. O presente trabalho teve como objetivo realizar uma revisão de literatura a fim de reunir as informações mais atuais sobre o S. hyicus. Para tanto, foram abordados: características da espécie, fatores de patogenicidade e sua ocorrência em animais, alimentos e seres humanos.
Assuntos
Humanos , Animais , Doenças Transmitidas por Alimentos/microbiologia , Doenças Transmitidas por Alimentos/virologia , Infecções , Microbiologia de Alimentos , Staphylococcus hyicus/patogenicidade , VirulênciaResumo
Staphylococcus hyicus is an important microorganism Veterinary Medicine and public health, because of its ability to cause disease in animals and humans. The present study aims to conduct a literature review to bring together the most current information about S. hyicus. Thus, the species characteristics, the pathogenicity factors and their occurrence in animals, food and humans were approached.(AU)
Staphylococcus hyicus é um micro-organismo de importância em Medicina Veterinária e saúde pública, tendo em vista sua capacidade de causar doenças em animais e seres humanos. O presente trabalho teve como objetivo realizar uma revisão de literatura a fim de reunir as informações mais atuais sobre o S. hyicus. Para tanto, foram abordados: características da espécie, fatores de patogenicidade e sua ocorrência em animais, alimentos e seres humanos.(AU)
Assuntos
Humanos , Animais , Virulência , Infecções , Staphylococcus hyicus/patogenicidade , Microbiologia de Alimentos , Doenças Transmitidas por Alimentos/microbiologia , Doenças Transmitidas por Alimentos/virologiaResumo
O status materno durante o período de transição pode ter efeitos na saúde e desempenho de bezerras da raça Holandesa. No entanto, o efeito do perfil materno ao final da gestação sobre o status apresentado pelas bezerras durante o período neonatal não estão bem estabelecidos. O objetivo geral deste estudo foi avaliar o impacto de variáveis maternas no momento do parto sobre o metabolismo, a saúde e a imunidade de bezerras leiteiras durante o período neonatal. Vacas da raça Holandesa (n = 28) tiveram amostras de sangue coletadas no parto. A média dos resultados para as variáveis maternas [ácidos graxos não esterificados (AGNES), -hidroxibutirato (BHB), glicose, proteína total, albumina, triglicerídeos, colesterol, haptoglobina (Hp), ferro, peso e escore de condição corporal (ECC)] foram calculados e utilizados como fatores maternos. Os bezerros foram posteriormente divididos em grupos de acordo com o alto ou baixo grau de cada fator materno. Além disso, foi avaliado o efeito da estação do nascimento, diferenciando os animais que nasceram no inverno e na primavera. As respostas dos bezerros em cada um desses grupos foram comparadas ao longo do primeiro mês de vida. Os bezerros tiveram amostras de sangue coletadas após o nascimento e em torno de 2, 7, 14 e 28 dias de vida, avaliando os níveis de IgG, parâmetros, estado e resposta imune inata. Nos mesmos momentos, os bezerros foram avaliados por parâmetros vitais, frequência de diarreia e doenças respiratórias e desempenho. Os bezerros nascidos de mães mais pesadas, com maior escore de condição corporal e nascidos na primavera, apresentaram maior frequência de diarreia. Vacas que pariram mais pesadas e com maior escore de condição corporal geraram bezerros com melhor desempenho desde a primeira semana de vida em relação à altura da cernelha e largura da garupa. Bezerros de mães com baixas concentrações de proteína apresentaram alta concentração de AGNES no D1. Vacas com alto nível de proteína também apresentaram alto nível de Hp e baixos níveis de albumina. Os filhos nascidos de vacas com alta concentração de ferro apresentaram altos valores de glicose. Em relação à resposta imune inata, embora não tenha ocorrido impacto de fatores maternos na contagem total de leucócitos, os bezerros de mães com baixa albumina materna, baixo colesterol materno e baixo ECC materno apresentaram altos níveis de produção de espécies reativas de oxigênio basal por células não estimuladas após 7 e 28 dias após o nascimento. A razão de resposta (RR) dos neutrófilos contra S. aureus e S. hyicus foi maior nos filhos nascidos da BCS materna baixa. Em conclusão, esses dados sugerem que a exposição pré-natal a diferentes fatores maternos pode afetar adversamente algumas respostas metabólicas, inflamatórias e da imunidade inata da prole que podem influenciar a suscetibilidade a doenças e o desempenho.
Maternal status during the transition period can have carryover effects on several health and performance variables of Holstein dairy calves. However, the effects of maternal late gestation status on profile presented by Holstein calves during the neonatal period are not well established. The general objective of this study was to evaluate the impact of maternal variables at the calving on the metabolism, health, and immunity of dairy calves during the neonatal period. Holstein cows (n = 28) were blood sampled at calving. The average of the results for the maternal variables [non-esterified fatty acids (NEFA), -hydroxybutyrate (BHB), glucose, total protein, albumin, triglycerides, cholesterol, haptoglobin (Hp), iron, weight and body condition score (BCS)] were calculated and used as maternal factors. Calves were subsequently divided into groups according to their dams high or low degree of each factor. In addition, the effect of the season at birth was evaluated, differentiating the animals that were born in winter and spring. The responses of calves in each of these groups were compared throughout their first month of life. Calves were blood sampled after birth and around 2, 7, 14 and 28 days of life by assessing IgG levels, biochemical parameters, inflammatory status and innate immunity response. In the same moments, the calves were evaluated by vital, frequency of diarrhea and respiratory disease and performance. Calves born to heavier mothers, with a higher body condition score and who were born in the spring showed a higher frequency of diarrhea. Cows that calved heavier and with greater body condition score generated calves with better performance from the first week of life regarding withers height and croup width. Calves from dams with low protein levels presented high concentration of NEFA in D1. Dams with a high level of protein also presented a high level of Hp and low levels of albumin. Offspring born from dams with high concentration of iron also presented high values of glucoses. Regarding the innate immune response, although there was no impact of maternal factors on the total white cell count, the offspring from dams with low maternal albumin, low maternal cholesterol and low maternal BCS presented high levels of basal reactive oxygen species (ROS) production by non-stimulated cells after 7 and 28 days after birth. The response ratio (RR) of neutrophils against S. aureus and S. hyicus also were higher in the offspring was born from the low maternal BCS. In conclusion, these data suggest that prenatal exposure to different maternal factors may adversely affect some metabolic and inflammatory responses of the offspring that could influence disease susceptibility and performance.
Resumo
A mastite subclínica em bovinos é a inflamação da glândula mamária, de caráter infeccioso ou não, que acarreta principalmente a redução na produção de leite. Bactérias do gênero Staphylococcus sp. multirresistentes têm sido frequentemente associadas com a doença. O objetivo do presente estudo foi identificar as espécies de Staphylococcus sp. e a existência do perfil de multirresistência entre as estripes encontradas em propriedades situadas em 5 municípios na região do baixo Acre associadas a mastite subclínica, e identificar possíveis fatores de risco que possam contribuir para o seu aparecimento. Foram selecionadas 23 propriedades por conveniência em uma amostragem não probabilística. Um total de 339 vacas mestiças foram testadas pelo CMT. Foram identificadas a presença de mastite subclínica em 108 animais, totalizando 229 tetos afetados. As amostras de leite foram semeadas em ágar sangue a 37 ° C, 24-48 horas para isolamento bacteriano. Os isolados sugestivos de Staphylococcus sp. foram submetidos à técnica de MALDI TOF (Dessorção- Ionização por Laser Associada à Matriz - Tempo de Voo - Espectrometria de Massa). Um total de 101 estirpes foram identificadas como pertencentes ao gênero Staphylococcus sp., distribuídas em oito espécies: S. chromogenes (58,4%), S. aureus (19,8%), S. hyicus (7,9%), S. saprophyticus (4,9%); S. haemolyticus (4%), S. epidermidis (3%); S. xylosus (1%) e S. kloosii (1%). O teste de suscetibilidade antimicrobiana foi realizado de acordo com o CLSI (Comitê Nacional para Padrões Clínicos e Laboratoriais) para as classes: beta-lactâmico, aminoglicosídeo, quinolona, lincosamida, macrolídeo, tetraciclina, rifamicina, cloranfenicol e oxazolidinona. Do total de isolados, 19 (18,8%) apresentaram perfil de multirresistência por apresentarem resistência a mais de três classes de antibióticos. Todas as amostras foram sensíveis a gentamicina (100%). Penicilina G foi o antibiótico com menor ação sobre as estirpes testadas (47,5%). Um questionário epidemiológico foi aplicado e constatou-se que fatores ligados a limpeza foram os que mais contribuíram para ordenar as propriedades. Diagnosticar e quantificar os agentes e fatores que levam a ocorrência de mastite permite a implantação e execução de medidas preventivas de modo mais efetivo. Adicionalmente é importante considerar o potencial de transmissão de genes de resistência entre patógenos, visto que o aparecimento de estirpes multirresistente representam um risco a saúde pública e veterinária.
Bovine subclinical mastitis is an inflammation of the mammary glands, caused or not by infections, which results mainly in a reduction on the milk production. Multiresistant bacteria which belong to the genus Staphylococcus sp. have been frequently associated to this disease. The objective of the present study was to identify the species of Staphylococcus sp. and the existence of the profile of multirresistance among the strains found in properties located on the countrified region of Acre associated to subclinical mastitis, and identify possible risk factors which can contribute to its forthcoming. 23 properties were selected by convenience in a non-probabilistic sampling. A total of 339 cows with mixed brands were tested by CMT. The presence of subclinical mastitis was identified in 108 animals, totalizing 229 affected teats. The milk samples were seeded in blood agar at 37 °C, 24-48 hours for bacteria isolation. Those which were suggestive of Staphylococcus sp. were submitted to the technique of MALDI TOF (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization - Time of Flight Mass Spectrometry). A total of 101 strains were identified as belonging to the genus Staphylococcus sp., separated in eight species: S. chromogenes (58,4%), S. aureus (19,8%), S. hyicus (7,9%), S. saprophyticus (4,9%); S. haemolyticus (4%), S. epidermidis (3%); S. xylosus (1%) and S. kloosii (1%). The antimicrobial susceptibility test was accomplished according with the CLSI (Clinical & Laboratory Standards Institute) to the classes: beta-lactam, aminoglycoside, quinolone, lincosamide, macrolide, tetracycline, rifamycin, chloramphenicol and oxazolidinone. Among the isolated strains, 19 (18,88%) presented profile of multirresistance by presenting resistance to more than three classes of antibiotics. All the samples were sensible to gentamicin (100%). Penicillin G was the antibiotic with the least effective action against the tested strains (47,5%). An epidemiologic quiz was applied and it was found that factors connected to the cleanup were the ones to contribute the most to order the properties. Diagnosing and quantifying the agents and factors which lead to the occurrence of mastitis allow the implantation and execution of prophylactic measures in a more effective way. Additionally, it is important to consider the potential of transmission of the genes of resistance among the pathogens, since the appearance of multirresistant strains represents a risk to both public health and veterinary health.
Resumo
A epidermite exsudativa (EE) é uma doença da pele causada pelo coco Gram-positivo Staphylococcus (S.) hyicus. Acomete suínos de diversas idades, sendo mais frequente em leitões de maternidade ou recém-desmamados. Para que a infecção se estabeleça e a doença se desenvolva é fundamental a ação de toxinas esfoliativas produzidas por cepas virulentas de S. hyicus, que são responsáveis por induzir as lesões da pele. O diagnóstico presuntivo da EE é realizado considerando variáveis como: a idade dos animais afetados, distribuição e progressão das lesões e sinais clínicos. O diagnóstico definitivo pode ser obtido pelo isolamento do S. hyicus. O controle da enfermidade depende da correção dos fatores predisponentes, incluindo o uso de terapia antimicrobiana que deve ser usada para animais nas fases iniciais da doença.
Resumo
Bovine mastitis is an important disease in dairy farming, not only by promoting direct economic losses, but also for indirect losses and the potential risk to public health. The main causes of intramammary infections include the bacteria of the genus Staphylococcus spp., Staphylococcus aureus being the predominant etiologic agent in subclinical mastitis. The aim of this study was to determine the frequency of subclinical mastitis in eight herds from southern Rio Grande do Sul (Brazil) and the relationship of the disease with the presence of S. aureus. In addition, we checked for the presence of S. intermedius and S. hyicus in the milk samples obtained. For identification of the disease, we used the California Mastitis Test (CMT). Identification of Staphylococcus spp. species was made in Barid-Parker agar culture medium, with subsequent confirmation of suspected colonies by way of Gram stain and catalase test along with free-coagulase and thermonuclease research. Subclinical mastitis was identified in 53.6% of animals tested. The presence of coagulase-positive Staphylococcus was identified in 12.6% of animals with subclinical mastitis. In these same animals, bacteria identified as S. aureus were the etiologic agent present in 17.6% of cases. Additionally, it was revealed that among the group identified as coagulase positive, 85.7% corresponded to S. aureus, while 8.5% had biochemical characteristics consistent with S. intermedius and 5.8% were considered S. hyicus.(AU)
A mastite bovina é uma doença importante na exploração leiteira, não apenas pelas perdas econômicas diretas que promove, mas também pelas perdas indiretas e o potencial risco à saúde pública. Dentre as principais causas de infecções intramamárias, destacam-se as bactérias do gênero Staphylococcus spp., sendo que Staphylococcus aureus é o agente etiológico predominante em mastite subclínica. O objetivo desse trabalho foi verificar a frequência de mastite subclínica em oito rebanhos localizados na região Sul do Rio Grande do Sul (Brasil) e a relação da enfermidade com a presença de S. aureus. Adicionalmente, pesquisou-se a presença de S. intermedius e S. hyicus nas amostras de leite obtidas. Para identificação da doença, utilizou-se o California Mastitis Test (CMT). A identificação da espécie de Staphylococcus spp. foi feita em meio de cultura ágar Baird-Parker, com posterior confirmação das colônias suspeitas em coloração de gram, prova de catalase, pesquisa de coagulase livre e pesquisa de termonuclease. A mastite subclínica foi constatada em 53,6% dos animais testados. A presença de Staphylococcus coagulase positiva foi identificada em 12,6% dos animais com mastite subclínica. Nesses mesmos animais, a bactéria identificada como S. aureus foi o agente etiológico presente em 17,6% dos casos. Adicionalmente, pode-se perceber que, dentre o grupo identificado como coagulase positiva, 85,7% corresponderam a S. aureus, enquanto 8,5% mostraram características bioquímicas compatíveis com S. intermedius e 5,8% foram consideradas S. hyicus.(AU)
Assuntos
Animais , Mastite Bovina , Coagulase , Infecções Estafilocócicas , Staphylococcus aureus , Staphylococcus hyicus , Staphylococcus intermediusResumo
Dentre os grupos de microrganismos relacionados à infecções resistentes e de importância em saúde pública, destacam-se o Enterococcus spp. resistente à vancomicina (VRE), o Staphylococcus spp. resistente à Meticilina (MRS) e cepas de bactérias Gram-negativas resistentes a Carbapenêmicos (CR). O objetivo deste projeto foi detectar fenotipicamente a presença de bactérias multirresistentes de importância em saúde pública em 15 ambientes do Hospital Veterinário Universitário (HVU) da Universidade Estadual de Maringá (UEM), localizado no Campus Regional de Umuarama (CAU). As amostras ambientais foram coletadas de diferentes superfícies por swab, e posteriormente realizadas provas de triagem para isolamento, identificação bacteriana e detecção fenotípica de estirpes multirresistentes. Foram detectadas as cepas bacterianas estudadas em 73,33% (11/15) dos ambientes. No total, foram obtidos 23 isolados dos ambientes avaliados, sendo que Enterococcus spp. foram encontrados em 46,66%% dos ambientes, não foram encontrados VRE, MRS em 53,33%, e CR encontradas em 33,33% dos ambientes. Foram identificados fenotipicamente 4 clones bacterianos de Enterococcus spp., sendo o mais prevalente e também com maior resistência encontrado em três ambientes com índice de multirresistência (MAR) de 0,87. Todas as cepas foram consideradas produtoras de biofilme, sensíveis à vancomicina e a alta resistência à gentamicina foi encontrada em 85,71% das cepas. Foram identificados um Staphylococcus hyicus (MRSH), um Staphylococcus pseudointermedius, e 6 Staphylococcus intermedius (o S. pseudointermedius e os S. intermedius foram analisados em conjunto como Staphylococcus intermedius group - MRSIG). Dos MRSIG foram identificados fenotipicamente 4 clones . O índice MAR dos Staphylococcus spp. variou entre 0,84 e 0,58, todas as cepas foram consideradas produtoras de biofilme. Foram encontradas 7 bactérias Gram-negativas produtoras de metalo-beta-lactamase, sendo 5 identificadas como Acinetobacter baumannii classificadas fenotipicamente em três clones. Os índices de resistência variaram de 0,94 a 0,62. Também foram identificadas uma Burkholderia cepacia (MAR=0,75) e uma Pseudomonas fluorescens. Todas as metalo-beta-lactamases identificadas foram consideradas não produtoras de biofilme.Uma cepa de Burkholderia pseudomallei foi caracterizada como mutante deficiente de porina ou produtora de OXA-48, esta cepa foi resistente a todos os antimicrobianos testados e foi considerada produtora de biofilme.
Among the groups of microorganisms related to resistant infections and of importance in public health, stands out Vancomycin Resistant Enterococcus spp. (VRE), Methicillin Resistant Staphylococcus spp. (MRS) and Carbapenem Resistant Gram-negative (CR). The objective of this project was to detect phenotypically the presence of multiresistant bacteria of importance in public health in 15 environments of the University Veterinary Hospital (HVU) of the State University of Maringá (UEM), located in the Regional Campus of Umuarama (CAU). The environmental samples were collected from different surfaces by swab, and later tests were carried out for isolation, bacterial identification and phenotypic detection of multiresistant strains. The bacterial strains studied were detected in 73.33% (11/15) of environments. In total, 23 isolates from the evaluated environments were obtained, and Enterococcus spp. were found in 46.66 %% of environments, no VRE were found. MRS were detected in 53.33%, and CR were found in 33.33% of the environments. Four bacterial clones of Enterococcus spp. were identified phenotypically, being the most prevalent and also with the greatest resistance found in three environments with a multiresistance index (MAR) of 0.87. All strains were considered to be biofilm producers, sensitive to vancomycin and high resistance to gentamicin was found in 85.71% of the strains. There were identified a Staphylococcus hyicus (MRSH), a Staphylococcus pseudointermedius, and 6 Staphylococcus intermedius (S. pseudointermedius and S. intermedius were analyzed together as Staphylococcus intermedius group - MRSIG). Of the MRSIG, 4 clones were phenotypically identified. The MAR index of Staphylococcus spp. ranged from 0.84 to 0.58, all strains were considered biofilm producers. There were found 7 Gram-negative bacteria producing metallo-beta-lactamase, 5 identified as Acinetobacter baumannii classified phenotypically in three clones. Resistance rates ranged from 0.94 to 0.62. Burkholderia cepacia (MAR = 0.75) and a Pseudomonas fluorescens were also identified. All identified metallo-beta-lactamases were considered to be non-biofilm producers. A Burkholderia pseudomallei strain was characterized as a porcine deficient mutant or OXA-48 producer, this strain was resistant to all antimicrobials tested and was considered a biofilm producer.
Resumo
A pesquisa de Staphylococcus spp. coagulase negativa (CNS) em alimentos não é prevista na legislação, entretanto, estas bactérias têm emergido como patógenos oportunistas e sua capacidade enterotoxigênica já foi documentada. O queijo destaca-se entre os principais derivados lácteos associados a intoxicações alimentares e a presença de cepas enterotoxigênicas do gênero Staphylococcus neste alimento representa um risco ao consumidor. O queijo colonial, tradicionalmente consumido pelos gaúchos, não possui regulamento técnico específico e poucos são os estudos relacionados ao risco do consumo desse alimento, bem como, à identificação de micro-organismos presentes nessa matriz. Sendo assim, os objetivos do presente estudo foram: (i) identificar as espécies de Staphylococcus spp. coagulase negativa, presentes em queijo colonial inspecionado; (ii) pesquisar a presença de genes codificadores de enterotoxinas clássicas (SE), bem como de resistência à penicilina e à meticilina nas cepas isoladas desta matriz. Para tanto, no período de novembro de 2014 a maio de 2015, foram analisadas 205 amostras de queijos coloniais inspecionados, sendo 121 adquiridas em Feiras Modelo e 84 em bancas do Mercado Público de Porto Alegre, compreendendo 17 marcas distintas. O isolamento inicial de Staphylococcus spp. foi realizado de acordo com o protocolo ISO 6888-1:1999, adicionado da triagem fenotípica para CNS. A identificação genotípica dos isolados foi realizada pela amplificação da região V1-V2 do gene 16S rRNA, seguida de sequenciamento e comparação das sequências obtidas no GenBank. A pesquisa de genes de enterotoxinas clássicas foi realizada por amplificação dos genes sea, seb, sec, sed e see. A determinação de resistência à penicilina foi avaliada a partir da amplificação do gene blaZ. Para resistência à meticilina, foi realizado teste de triagem frente à cefoxitina, e confirmação pela pesquisa do gene mecA. O armazenamento sob refrigeração foi observado em quase 90% das amostras coletadas. Entre as 179 colônias retiradas do ágar Baird-Parker, 59 apresentaram-se fenotipicamente compatíveis com CNS e foram identificadas genotipicamente. Treze espécies foram identificadas, sendo Macrococcus caseolyticus (40%) a mais frequente. Das 35 cepas confirmadas como CNS, S. equorum e S. vitulinus foram as espécies predominantes seguidas de S. hyicus, S. saprophyticus e S. epidermidis. O gene blaZ foi detectado em cinco cepas de CNS e em uma cepa de M. caseolyticus, sendo relativamente mais frequente em S. hyicus e S. epidermidis. O gene mecA não foi detectado. Oito cepas de CNS amplificaram algum gene para SE, sendo seb o mais frequente, seguido por sed, sea e see. O gene para enterotoxina C não foi detectado. Onze cepas apresentaram pelo menos um dos genes investigados, das quais, seis cepas apresentaram genes para SE e blaZ, concomitantemente. Os perfis seb/blaZ (n=4) e blaZ (n=3) foram os mais frequentes. Foi possível confirmar a diversidade de Staphylococcus spp. coagulase negativa em queijos coloniais inspecionados, além da baixa frequência de cepas carreadoras de genes para enterotoxinas clássicas e resistência à penicilina e à meticilina.
The investigation of coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) is not included in food monitoring; although these bacteria have emerged as significant opportunistic pathogens and their toxigenic capacity has been documented. Among the dairy products, cheese features as one of the most involved in food poisoning outbreaks. The presence of enterotoxigenic strains of Staphylococcus in this food therefore represents a hazard for the consumers. Colonial cheese, which is a traditionally consumed cheese type in Rio Grande do Sul, does not have a specific technical regulation, and there are few studies targeting the risk for consumers, or aiming to identify its typical microbiota. Thus, the objectives of this study were: (i) to identify coagulase-negative Staphylococcus spp. species in inspected colonial cheese (ii) to investigate the presence of genes encoding classical enterotoxins (SE), and resistance to penicillin and methicillin in strains obtained from this food. For this purpose, from November 2014 to May 2015, 205 cheese samples were analyzed, 121 of which were acquired in street fairs and 84 in Central Market. The samples belonged to 17 different brands. The isolation of Staphylococcus spp. was performed according to the ISO 6888-1: 1999 protocol, followed by the phenotypic screening of CNS. The genotype identification of the isolates was performed by amplification of the V1-V2 region of the 16S rRNA gene, followed by sequencing and the sequences comparison with the GenBank database. Classical enterotoxin genes were investigated by amplification of sea, seb, sec, sed and see genes. The determination of penicillin resistance was evaluated by the amplification of blaZ gene. For methicillin resistance, a screening test with cefoxitin was conducted followed by confirmation through the mecA amplification. The majority (89.7%) of the collected samples were stored under refrigeration. Among the 179 atypical colonies obtained from Baird-Parker agar, 59 were phenotypically compatible with CNS and were further subjected to genotyping. Thirteen bacterial species were identified, being Macrococcus caseolyticus the most frequent (40%). Thirty-five strains were confirmed as CNS, being S. equorum and S. vitulinus the most prevalent followed by S. hyicus, S. saprophyticus and S. epidermidis. The gene blaZ was detected in five strains of CNS and in one strain of M. caseolyticus, being relatively more frequent in S. hyicus and S. warneri. The mecA gene was not detected. Eight CNS strains amplified SE gene: SEB was the most frequent, followed by SED, SEA and SEE. There was no enterotoxin C gene detected. Eleven strains carried at least one of the genes investigated; six strains presented genes for SE and blaZ, concomitantly. The profiles SEB/blaZ (n = 4) and blaZ (n = 3) were the most frequent. The diversity of CNS in inspected colonial cheeses was confirmed. In addition, the low frequency of strains carrying genes for enterotoxins and resistance to penicillin and methicillin was observed.
Resumo
A pesquisa de Staphylococcus spp. coagulase negativa (CNS) em alimentos não é prevista na legislação, entretanto, estas bactérias têm emergido como patógenos oportunistas e sua capacidade enterotoxigênica já foi documentada. O queijo destaca-se entre os principais derivados lácteos associados a intoxicações alimentares e a presença de cepas enterotoxigênicas do gênero Staphylococcus neste alimento representa um risco ao consumidor. O queijo colonial, tradicionalmente consumido pelos gaúchos, não possui regulamento técnico específico e poucos são os estudos relacionados ao risco do consumo desse alimento, bem como, à identificação de micro-organismos presentes nessa matriz. Sendo assim, os objetivos do presente estudo foram: (i) identificar as espécies de Staphylococcus spp. coagulase negativa, presentes em queijo colonial inspecionado; (ii) pesquisar a presença de genes codificadores de enterotoxinas clássicas (SE), bem como de resistência à penicilina e à meticilina nas cepas isoladas desta matriz. Para tanto, no período de novembro de 2014 a maio de 2015, foram analisadas 205 amostras de queijos coloniais inspecionados, sendo 121 adquiridas em Feiras Modelo e 84 em bancas do Mercado Público de Porto Alegre, compreendendo 17 marcas distintas. O isolamento inicial de Staphylococcus spp. foi realizado de acordo com o protocolo ISO 6888-1:1999, adicionado da triagem fenotípica para CNS. A identificação genotípica dos isolados foi realizada pela amplificação da região V1-V2 do gene 16S rRNA, seguida de sequenciamento e comparação das sequências obtidas no GenBank. A pesquisa de genes de enterotoxinas clássicas foi realizada por amplificação dos genes sea, seb, sec, sed e see. A determinação de resistência à penicilina foi avaliada a partir da amplificação do gene blaZ. Para resistência à meticilina, foi realizado teste de triagem frente à cefoxitina, e confirmação pela pesquisa do gene mecA. O armazenamento sob refrigeração foi observado em quase 90% das amostras coletadas. Entre as 179 colônias retiradas do ágar Baird-Parker, 59 apresentaram-se fenotipicamente compatíveis com CNS e foram identificadas genotipicamente. Treze espécies foram identificadas, sendo Macrococcus caseolyticus (40%) a mais frequente. Das 35 cepas confirmadas como CNS, S. equorum e S. vitulinus foram as espécies predominantes seguidas de S. hyicus, S. saprophyticus e S. epidermidis. O gene blaZ foi detectado em cinco cepas de CNS e em uma cepa de M. caseolyticus, sendo relativamente mais frequente em S. hyicus e S. epidermidis. O gene mecA não foi detectado. Oito cepas de CNS amplificaram algum gene para SE, sendo seb o mais frequente, seguido por sed, sea e see. O gene para enterotoxina C não foi detectado. Onze cepas apresentaram pelo menos um dos genes investigados, das quais, seis cepas apresentaram genes para SE e blaZ, concomitantemente. Os perfis seb/blaZ (n=4) e blaZ (n=3) foram os mais frequentes. Foi possível confirmar a diversidade de Staphylococcus spp. coagulase negativa em queijos coloniais inspecionados, além da baixa frequência de cepas carreadoras de genes para enterotoxinas clássicas e resistência à penicilina e à meticilina.
The investigation of coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) is not included in food monitoring; although these bacteria have emerged as significant opportunistic pathogens and their toxigenic capacity has been documented. Among the dairy products, cheese features as one of the most involved in food poisoning outbreaks. The presence of enterotoxigenic strains of Staphylococcus in this food therefore represents a hazard for the consumers. Colonial cheese, which is a traditionally consumed cheese type in Rio Grande do Sul, does not have a specific technical regulation, and there are few studies targeting the risk for consumers, or aiming to identify its typical microbiota. Thus, the objectives of this study were: (i) to identify coagulase-negative Staphylococcus spp. species in inspected colonial cheese (ii) to investigate the presence of genes encoding classical enterotoxins (SE), and resistance to penicillin and methicillin in strains obtained from this food. For this purpose, from November 2014 to May 2015, 205 cheese samples were analyzed, 121 of which were acquired in street fairs and 84 in Central Market. The samples belonged to 17 different brands. The isolation of Staphylococcus spp. was performed according to the ISO 6888-1: 1999 protocol, followed by the phenotypic screening of CNS. The genotype identification of the isolates was performed by amplification of the V1-V2 region of the 16S rRNA gene, followed by sequencing and the sequences comparison with the GenBank database. Classical enterotoxin genes were investigated by amplification of sea, seb, sec, sed and see genes. The determination of penicillin resistance was evaluated by the amplification of blaZ gene. For methicillin resistance, a screening test with cefoxitin was conducted followed by confirmation through the mecA amplification. The majority (89.7%) of the collected samples were stored under refrigeration. Among the 179 atypical colonies obtained from Baird-Parker agar, 59 were phenotypically compatible with CNS and were further subjected to genotyping. Thirteen bacterial species were identified, being Macrococcus caseolyticus the most frequent (40%). Thirty-five strains were confirmed as CNS, being S. equorum and S. vitulinus the most prevalent followed by S. hyicus, S. saprophyticus and S. epidermidis. The gene blaZ was detected in five strains of CNS and in one strain of M. caseolyticus, being relatively more frequent in S. hyicus and S. warneri. The mecA gene was not detected. Eight CNS strains amplified SE gene: SEB was the most frequent, followed by SED, SEA and SEE. There was no enterotoxin C gene detected. Eleven strains carried at least one of the genes investigated; six strains presented genes for SE and blaZ, concomitantly. The profiles SEB/blaZ (n = 4) and blaZ (n = 3) were the most frequent. The diversity of CNS in inspected colonial cheeses was confirmed. In addition, the low frequency of strains carrying genes for enterotoxins and resistance to penicillin and methicillin was observed.
Resumo
O objetivo deste trabalho foi identificar espécies de Staphylococcus (n=100) isoladas de mastite em rebanhos bovinos do Estado de Minas Gerais. Para esta finalidade foram utilizadas reações de PCR empregando oligonucleotídeos iniciadores descritos anteriormente para amplificar genes específicos de S. aureus (femA), S. intermedius (rDNA 16S) e S. hyicus (rDNA 16S-23S) e o sequenciamento do rDNA 16S. De acordo com as reações de PCR, 83 isolados foram identificados como S. aureus, 13 isolados como S. intermedius, dois como S. hyicus e dois isolados não foram identificados. Foram submetidos ao sequenciamento do rDNA 16S seis isolados identificados como S. aureus e os 17 restantes. Os seis isolados identificados como S. aureus confirmaram essa identificação. Dos outros 17 isolados, 13 foram identificados como S. chromogenes e quatro como S. hyicus, com similaridade igual ou superior a 99%. Baseando-se nos resultados da reação de PCR do gene femA e do sequenciamento do rDNA 16S, foram identificados 83 S. aureus, 13 S. chromogenes e quatro S. hyicus. Neste estudo os oligonucleotídeos iniciadores empregados na reação de PCR para S. intermedius não foram específicos, pois amplificaram também S. chromogenes; e os empregados na reação de PCR para S. hyicus não foram sensíveis, pois falharam na identificação de dois isolados de S. hyicus. A identificação definitiva das duas últimas espécies somente foi possível pelo sequenciamento do rDNA 16S.(AU)
The objective of this study was to identify the species of 100 isolates of Staphylococcus from mastitis in dairy cows from herds located in the state of Minas Gerais, Brazil. PCR reactions were carried out using specific primers described previously for S. aureus (femA gene), S. intermedius (16S rDNA) and S. hyicus (16S-23S rDNA spacer region). In addition, products of amplification of variable regions of the 16S rDNA gene of the strains were sequenced. According to the results of the PCR, 83 strains were identified as S. aureus, 13 as S. intermedius, two as S. hyicus and two isolates were not identified. The sequencing of 16S rDNA was applied to 23 strains identified by PCR amplifications: six S. aureus and the strains identified as S. intermedius (n=13), S. hyicus (n=2) or not identified (n=2). The sequencing of 16S rDNA confirmed the six strains as S. aureus. The others 17 strains were identified as S. chromogenes (13 isolates) and S. hyicus (four isolates). Each sample was related to a specie according to the smallest E-value and highest similarity (≥ 99%). The identification of S. hyicus and S. chromogenes was accomplished only by 16S rDNA sequencing.(AU)