Mecanismos epigenéticos nos espermatozoides e o impacto sobre a fertilidade masculina / Epigenetic mechanisms on sperm cells and the impact on male fertility

Por ser uma célula altamente especializada, o espermatozoide apresenta diferentes mecanismos epigenéticos, sendo os principais as metilações do DNA, o código de histonas, os ncRNAs (RNAs não codificadores), e a alta condensação da cromatina pela presença das protaminas. Estes mecanismos interagem entre si, contribuindo para a formação do epigenoma espermático, que modela a carga molecular espermática, que, por sua vez, pode impactar sobre as características do desenvolvimento embrionário e da progênie. Dessa forma, atualmente é consenso que o papel do espermatozoide ultrapassa a entrega de DNA de qualidade para o oócito no momento da fecundação. Pesquisas recentes de diversos grupos, incluindo o nosso, mostram que além da contribuição com DNA de qualidade, o espermatozoide entrega moléculas ao oócito no momento da fecundação que influenciam o desenvolvimento do embrião. Recentemente, essas moléculas de origem espermática (Em inglês: sperm-borne) também são associadas com alterações metabólicas e cognitivas da progênie. Embora ainda pouco se entenda como esses mecanismos podem persistir mesmo com o ciclo de reprogramação celular que ocorre logo após a fecundação, é evidente que estes podem impactar as características da progênie. Nesta revisão abordaremos sobre a modulação do epigenoma espermático e seus efeitos no desenvolvimento embrionário.(AU)

Since it is a highly specialized cell, the spermatozoa display different epigenetic mechanisms; the main ones are DNA methylation, histone code, ncRNAs (non-coding RNAs), and high chromatin condensation by the presence of protamines. These mechanisms act in synergy contributing to forming the sperm epigenome, which modulates the spermatic molecular cargo, and, may impact embryo and offspring development features. Thus, it is currently a consensus that the role of spermatozoa goes beyond delivering quality DNA to the oocyte at fertilization. Relevant findings from several research groups, including ours, have shown that sperm delivers several molecules to the oocyte at fertilization, beyond the contribution to DNA, which influences the development of the embryo. Recently, these sperm-borne molecules have also been associated with metabolic and cognitive changes in the offspring. Although the mechanism by which these changes can persist even after embryo reprogramming is not completely understood, evidence shows that sperm cell molecular content impacts embryo and offspring development. This review will mainly focus on the modulation of the sperm epigenome and its effects on embryo development.(AU)

The protective effect of Ganoderma lucidum on testicular torsion/detorsion-induced ischemia-reperfusion (I/R) injury

Purpose To investigate the protective effect of Ganoderma lucidum on testicular torsion/detorsion (T/D)-induced ischemia-reperfusion (I/R) injury. Methods Thirty male Wistar albino rats were randomly categorized into 3 groups: Group 1: sham, Group 2 ( T/D): 2,5 hours of ischemia and 7 days of reperfusion, Group 3 (T/D+ G. lucidum ): 2,5 hours of ischemia and 7 days of reperfusion and 7 days of 20 mg/kg via gastric gavage G. lucidum polysaccharides per day. Biochemical assays of Malondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD), Catalase (CAT), Glutathione (GSH) levels , histopathology and expression levels of VEGF and Bcl-2 with immunohistochemical methods were examined in testicular tissue. Results G. lucidum treatment was found to have prevented the T/D-induced I/R injury by decreasing MDA levels of the testis. SOD, CAT and GSH activities were decreased in group 2, while they were increased in group 3 (p<0.001) and significant improvement in the tube diameter was observed in group 3. Bcl-2-positive germinal cells were lowered in group 3 compared to the group 2. VEGF expression showed an increase in group 2, whereas it decreased in group 3. Conclusion The antioxidant G. lucidum is thought to induce angiogenesis by reducing the apoptotic effect in testicular torsion-detorsion.(AU)

Spermatogenesis in sheep supplemented with detoxified castor bean (Ricinus communis L. ) as a replacement for soybean meal / Espermatogênese de ovinos suplementados com torta de mamona (Ricinus communis L. ) destoxificada em substituição ao farelo de soja

The objective was to evaluate the effect of replacing soybean meal with the detoxified castor bean cake on testicular morphometry and spermatogenesis of sheep. Were used 24 uncastrated, 9-month old sheep weighing 29±0.8 kg they were randomly distributed among three treatments: T1 = 0%, T2 = 50%, and T3 = 100% substitution of soybean meal with detoxified castor bean cake. The animals were fed with Aruana grass pastage (Panicum maximum Aruana) and a ration for 90 days. After slaughtering, the testicles were collected and histological slides were prepared with tissue fragments. The data were evaluated for normality using the Shapiro-Wilk test, and analysis of variance was carried out at 5% level of significance. Substitution of soybean meal with detoxified castor bean cake had no effect on any of the assessed variables at the tested levels (P >0.05). The mean yield of spermatogenesis was 72.91 rounded spermatids per spermatogonium; the mean of total number of germ cells held by a Sertoli cell was 12.09; the mean of the testicular spermatic reserve was 31.82×109 and that per testicular gram was 238.28×106; the mean of daily spermatic production was 3.03×109 and that per testicular gram was 22.69×106; and the total number of Sertoli cells was 4.15×109 and that per testicular gram was 34.51×106. The results show that it is possible to replace 100% of the soybean meal with detoxified castor bean cake in sheep diet without any effects on spermatogenesis; however, it is important to perform seminal evaluations in future studies.(AU)

O objetivo com este estudo foi avaliar o efeito da substituição do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada sobre a espermatogênese em ovinos. Foram utilizados 24 ovinos, com peso médio de 29±0,8kg e 9 meses de idade, distribuídos aleatoriamente em três tratamentos: T1= 0%, T2= 50% e T3= 100% de substituição do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada. Os animais foram alimentados com pastagem de capim Aruana (Panicum maximum cv. Aruana) e ração durante 90 dias. Por ocasião do abate, coletou-se os testículos para mensurações e avaliação da espermatogênese. Os dados foram avaliados quanto à normalidade por meio do teste de Shapiro-Wilk e utilizou-se a Análise de Variância com 5% de significância. Não houve efeito da substituição do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada nos níveis testados (P>0,05) para nenhuma das variáveis avaliadas. O rendimento médio da espermatogênese foi de 72,91 espermátides arredondadas produzidas a partir de uma espermatogônia; a média do número total de células germinativas sustentadas por uma de célula de Sertoli foi 12,09; a média da reserva espermática testicular total foi de 31,82x109 e de 238,28x106 por grama de testículo; a média da produção espermática diária foi de 3,03x109 e de 22,69x106 por grama de testículo e o número total de células de Sertoli foi de 4,15x109 e de 34,51x106 por grama de testículo. Os resultados demonstram que é possível substituir 100% do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada na dieta de ovinos sem prejuízos no processo de espermatogênese.(AU)

Spermatogenesis in sheep supplemented with detoxified castor bean (Ricinus communis L. ) as a replacement for soybean meal / Espermatogênese de ovinos suplementados com torta de mamona (Ricinus communis L. ) destoxificada em substituição ao farelo de soja

The objective was to evaluate the effect of replacing soybean meal with the detoxified castor bean cake on testicular morphometry and spermatogenesis of sheep. Were used 24 uncastrated, 9-month old sheep weighing 29±0.8 kg they were randomly distributed among three treatments: T1 = 0%, T2 = 50%, and T3 = 100% substitution of soybean meal with detoxified castor bean cake. The animals were fed with Aruana grass pastage (Panicum maximum Aruana) and a ration for 90 days. After slaughtering, the testicles were collected and histological slides were prepared with tissue fragments. The data were evaluated for normality using the Shapiro-Wilk test, and analysis of variance was carried out at 5% level of significance. Substitution of soybean meal with detoxified castor bean cake had no effect on any of the assessed variables at the tested levels (P >0.05). The mean yield of spermatogenesis was 72.91 rounded spermatids per spermatogonium; the mean of total number of germ cells held by a Sertoli cell was 12.09; the mean of the testicular spermatic reserve was 31.82×109 and that per testicular gram was 238.28×106; the mean of daily spermatic production was 3.03×109 and that per testicular gram was 22.69×106; and the total number of Sertoli cells was 4.15×109 and that per testicular gram was 34.51×106. The results show that it is possible to replace 100% of the soybean meal with detoxified castor bean cake in sheep diet without any effects on spermatogenesis; however, it is important to perform seminal evaluations in future studies.

O objetivo com este estudo foi avaliar o efeito da substituição do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada sobre a espermatogênese em ovinos. Foram utilizados 24 ovinos, com peso médio de 29±0,8kg e 9 meses de idade, distribuídos aleatoriamente em três tratamentos: T1= 0%, T2= 50% e T3= 100% de substituição do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada. Os animais foram alimentados com pastagem de capim Aruana (Panicum maximum cv. Aruana) e ração durante 90 dias. Por ocasião do abate, coletou-se os testículos para mensurações e avaliação da espermatogênese. Os dados foram avaliados quanto à normalidade por meio do teste de Shapiro-Wilk e utilizou-se a Análise de Variância com 5% de significância. Não houve efeito da substituição do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada nos níveis testados (P>0,05) para nenhuma das variáveis avaliadas. O rendimento médio da espermatogênese foi de 72,91 espermátides arredondadas produzidas a partir de uma espermatogônia; a média do número total de células germinativas sustentadas por uma de célula de Sertoli foi 12,09; a média da reserva espermática testicular total foi de 31,82x109 e de 238,28x106 por grama de testículo; a média da produção espermática diária foi de 3,03x109 e de 22,69x106 por grama de testículo e o número total de células de Sertoli foi de 4,15x109 e de 34,51x106 por grama de testículo. Os resultados demonstram que é possível substituir 100% do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada na dieta de ovinos sem prejuízos no processo de espermatogênese.

Effect of the addition of sodium caseinate on the viability of cryopreserved buffalo semen / Efeito da adição de caseinato de sódio sobre a viabilidade do sêmen bubalino criopreservado

The use of cooled semen in artificial insemination operations results in higher pregnancy rates than the use of frozen semen. This result seems to be related to the more severe damage triggered by the freezing process than that observed during refrigeration. Due to its ability to bind to sperm-binding proteins and calcium ions, sodium caseinate has been studied as a substance capable of preventing early sperm capacitation, a significant cause of the decreased pregnancy rate resulting from the use of frozen semen. The first objective of this study was to evaluate whether a commercial egg yolk diluent developed for frozen bovine semen could be used for buffalo semen cryopreservation; the second objective was to investigate the effect of this diluent in combination with sodium caseinate during the procedures of buffalo sperm cryopreservation using flow cytometry and computer-assisted sperm analysis. In the first part of the study, comparing the results of spermatic kinetics and plasma and acrosomal membrane integrity, it was observed that the freezing process resulted in more cell damage than the cooling process. In the second part of the study, no effects of the addition of sodium caseinate to the egg yolk diluent were observed. From the results of the present study, it was possible to conclude that the egg yolk-based diluent was suitable for buffalo semen cryopreservation and that the addition of sodium caseinate did not decrease the harmful effects related to seminal cryopreservation.

O uso de sêmen resfriado em operações de inseminação artificial resulta em taxas de prenhez mais altas do que o uso de sêmen congelado. Esse resultado parece estar relacionado aos danos mais severos desencadeados pelo processo de congelação, quando comparado com o de refrigeração. Devido à sua capacidade de se ligar às proteínas ligadoras de espermatozoides e íons cálcio, o caseinato de sódio foi estudado quanto a sua capacidade de prevenir a capacitação espermática precoce, uma causa significativa de diminuição da taxa de prenhez com o uso de sêmen congelado. O primeiro objetivo deste estudo foi avaliar se um diluidor comercial a base de gema de ovo, destinado à congelação de sêmen bovino, poderia ser usado para a criopreservação de sêmen bubalino; o segundo objetivo foi investigar o efeito da adição do caseinato de sódio ao diluidor estudado durante os procedimentos de criopreservação de espermatozoides bubalinos. Foram empregadas a citometria de fluxo e a análise computadorizada do movimento espermático como métodos de avaliação seminal. Na primeira fase do estudo, comparando-se os resultados da cinética espermática e da integridade das membranas plasmática e acrossomal, observou-se que o processo de congelação promoveu mais danos celulares que o processo de resfriamento. Na segunda fase do estudo, não foram observados efeitos benéficos da adição de caseinato de sódio ao diluente empregado. A partir dos resultados do presente estudo, foi possível concluir que o diluente à base de gema de ovo foi adequado para a criopreservação do sêmen de bubalino e que a adição do caseinato de sódio não diminuiu os efeitos deletérios desencadeados pelo processo de criopreservação seminal.

Effect of the addition of sodium caseinate on the viability of cryopreserved buffalo semen / Efeito da adição de caseinato de sódio sobre a viabilidade do sêmen bubalino criopreservado

The use of cooled semen in artificial insemination operations results in higher pregnancy rates than the use of frozen semen. This result seems to be related to the more severe damage triggered by the freezing process than that observed during refrigeration. Due to its ability to bind to sperm-binding proteins and calcium ions, sodium caseinate has been studied as a substance capable of preventing early sperm capacitation, a significant cause of the decreased pregnancy rate resulting from the use of frozen semen. The first objective of this study was to evaluate whether a commercial egg yolk diluent developed for frozen bovine semen could be used for buffalo semen cryopreservation; the second objective was to investigate the effect of this diluent in combination with sodium caseinate during the procedures of buffalo sperm cryopreservation using flow cytometry and computer-assisted sperm analysis. In the first part of the study, comparing the results of spermatic kinetics and plasma and acrosomal membrane integrity, it was observed that the freezing process resulted in more cell damage than the cooling process. In the second part of the study, no effects of the addition of sodium caseinate to the egg yolk diluent were observed. From the results of the present study, it was possible to conclude that the egg yolk-based diluent was suitable for buffalo semen cryopreservation and that the addition of sodium caseinate did not decrease the harmful effects related to seminal cryopreservation.(AU)

O uso de sêmen resfriado em operações de inseminação artificial resulta em taxas de prenhez mais altas do que o uso de sêmen congelado. Esse resultado parece estar relacionado aos danos mais severos desencadeados pelo processo de congelação, quando comparado com o de refrigeração. Devido à sua capacidade de se ligar às proteínas ligadoras de espermatozoides e íons cálcio, o caseinato de sódio foi estudado quanto a sua capacidade de prevenir a capacitação espermática precoce, uma causa significativa de diminuição da taxa de prenhez com o uso de sêmen congelado. O primeiro objetivo deste estudo foi avaliar se um diluidor comercial a base de gema de ovo, destinado à congelação de sêmen bovino, poderia ser usado para a criopreservação de sêmen bubalino; o segundo objetivo foi investigar o efeito da adição do caseinato de sódio ao diluidor estudado durante os procedimentos de criopreservação de espermatozoides bubalinos. Foram empregadas a citometria de fluxo e a análise computadorizada do movimento espermático como métodos de avaliação seminal. Na primeira fase do estudo, comparando-se os resultados da cinética espermática e da integridade das membranas plasmática e acrossomal, observou-se que o processo de congelação promoveu mais danos celulares que o processo de resfriamento. Na segunda fase do estudo, não foram observados efeitos benéficos da adição de caseinato de sódio ao diluente empregado. A partir dos resultados do presente estudo, foi possível concluir que o diluente à base de gema de ovo foi adequado para a criopreservação do sêmen de bubalino e que a adição do caseinato de sódio não diminuiu os efeitos deletérios desencadeados pelo processo de criopreservação seminal.(AU)

Diferentes protocolos de congelação de sêmen canino para melhoria de sua cinética e viabilidade / Different canine semen freesing protocols to improve kinetics and viability / Diferentes protocolos de congelación de semen canino para mejoría de su cinética y viabilidad

A maioria dos protocolos utilizados para a criopreservação de sêmen canino, se baseiam em metodologias descritas para outras espécies. Assim, este estudo tem como objetivo avaliar diferentes protocolos de congelação para sêmen desta espécie doméstica. Para tanto, foram utilizados 3 machos, adultos, da raça Buldogue Campeiro, com idades entre 2 a 5 anos e fertilidade comprovada. Foram realizadas 5 colheitas de sêmen de cada animal, pelo método de manipulação digital do bulbo peniano, priorizando a segunda fração do ejaculado. As amostras colhidas foram divididas em 2 grupos, com concentração de 100 x 106 espermatozoides por mL. No grupo 1, as amostras foram diluídas diretamente em meio de congelação comercial Botudog® (Botupharma Biotecnologia Animal). No grupo 2, as amostras foram centrifugadas a 600 g por 10 minutos e em seguida, o pellet foi ressuspendido em meio de congelação comercial Botudog®. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL com concentração de 50 x 106 espermatozoides viáveis. Em seguida, as amostras permaneceram por 1 hora em estabilização a 5ºC. Logo após, transferidas para o vapor de nitrogênio durante 10 minutos, e por fim, mergulhadas em nitrogênio e armazenadas em botijão criogênico. As palhetas foram descongeladas a 46ºC por 15 segundos. Foram avaliados os parâmetros de cinética espermática e integridade de membrana plasmática e acrossomal (IMPA, %). Verificou-se que os parâmetros de motilidade total (%), velocidade linear progressiva (VSL; µm/s), velocidade curvilínea (VCL; µm/s), linearidade (%), percentagem de espermatozoides rápidos (%) e integridade de membrana plasmática e acrossomal avaliados por citometria de fluxo foram superiores no grupo 1, em que as amostras não foram centrifugadas. Estes dados demonstram que, o protocolo para congelação de sêmen canino, utilizando o diluente Botudog®, não preconiza a centrifugação do ejaculado, previamente a congelação.(AU)

Most protocols used for canine semen cryopreservation are based on methodologies described for other species. Thus, this study aims at evaluating different freezing protocols for semen of this domestic species. To this end, 3 adult Bulldog Campeiro males aged 2 to 5 years and proven fertility were used. Five semen samples were collected from each animal using the digital manipulation of the penile bulb method, prioritizing the second fraction of the ejaculate. The collected samples were divided into 2 groups, with a concentration of 100 x 106 sperm per mL. In group 1, the samples were diluted directly into Botudog® commercial freezing medium (Botupharma Animal Biotechnology). In group 2, the samples were centrifuged at 600 g for 10 minutes and then the pellet was resuspended in commercial Botudog® freezing medium. The samples were packed in 0.5 mL straws with a concentration of 50 x 106 viable sperm. Then, the samples remained for 1 hour in stabilization at 5ºC. Afterwards, they were transferred to nitrogen vapor for 10 minutes, and finally, dipped in nitrogen and stored in cryogenic cylinder. The straws were thawed at 46ºC for 15 seconds. Parameters for spermatic kinetics, and plasma and acrosomal membrane integrity (IMPA, %) were evaluated. Total motility (%), progressive linear velocity (VSL; µm/s), curvilinear velocity (VCL; µm/s), linearity (%), percentage of rapid sperm (%) and membrane integrity were found. Plasma and acrosomal samples evaluated by flow cytometry were higher in group 1, where samples were not centrifuged. These data demonstrate that the protocol for canine semen freezing using Botudog® diluent does not recommend centrifugation of the ejaculate prior to freezing.(AU)

La mayoría de los protocolos utilizados para la criopreservación de semen canino se basan en metodologías descritas para otras especies. Por lo tanto, esta investigación tiene como objetivo evaluar diferentes protocolos de congelación para el semen de esta especie doméstica. Con este fin, se utilizaron 3 machos, adultos, de la raza Bulldog Campero, con edades entre 2 a 5 años y fertilidad comprobada. Se realizaron cinco recolecciones de semen de cada animal mediante el método de manipulación digital del bulbo del pene, priorizando la segunda fracción de la eyaculación. Las muestras recolectadas se dividieron en 2 grupos, con una concentración de 100 x 106 espermatozoides por mL. En el grupo 1, las muestras se diluyeron directamente en medio de congelación comercial Botudog® (Botupharma Animal Biotechnology). En el grupo 2, las muestras fueron centrifugadas a 600 g durante 10 minutos y luego el pellet fue resuspendido en medio de congelación comercial Botudog®. Las muestras se envasaron en paletas de 0,5 mL con una concentración de 50 x 106 espermatozoides viables. Luego, las muestras permanecieron durante 1 hora en estabilización a 5ºC. Posteriormente, se transfirieron al vapor de nitrógeno durante 10 minutos y, finalmente, se sumergieron en nitrógeno y se almacenaron en un cilindro criogénico. Las paletas se descongelaron a 46ºC durante 15 segundos. Se han evaluado los parámetros de la cinética espermática y la integridad de la membrana plasmática acrosomal (IMPA, %). Se verificó que los parámetros de motilidad total (%), velocidad lineal progresiva (VSL; µm/s), velocidad curvilínea (VCL; µm/s), linealidad (%), porcentaje de espermatozoides rápidos (%) e integridad de la membrana plasmática y acrosomal evaluadas por citometría de flujo, fueron mayores en el grupo 1, donde las muestras no fueron centrifugadas. Estos datos demuestran que, el protocolo para la congelación de semen canino, usando el diluyente Botudog®, no preconiza la centrifugación del eyaculado, previamente a la congelación.(AU)

Diferentes protocolos de congelação de sêmen canino para melhoria de sua cinética e viabilidade / Different canine semen freesing protocols to improve kinetics and viability / Diferentes protocolos de congelación de semen canino para mejoría de su cinética y viabilidad

A maioria dos protocolos utilizados para a criopreservação de sêmen canino, se baseiam em metodologias descritas para outras espécies. Assim, este estudo tem como objetivo avaliar diferentes protocolos de congelação para sêmen desta espécie doméstica. Para tanto, foram utilizados 3 machos, adultos, da raça Buldogue Campeiro, com idades entre 2 a 5 anos e fertilidade comprovada. Foram realizadas 5 colheitas de sêmen de cada animal, pelo método de manipulação digital do bulbo peniano, priorizando a segunda fração do ejaculado. As amostras colhidas foram divididas em 2 grupos, com concentração de 100 x 106 espermatozoides por mL. No grupo 1, as amostras foram diluídas diretamente em meio de congelação comercial Botudog® (Botupharma Biotecnologia Animal). No grupo 2, as amostras foram centrifugadas a 600 g por 10 minutos e em seguida, o pellet foi ressuspendido em meio de congelação comercial Botudog®. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL com concentração de 50 x 106 espermatozoides viáveis. Em seguida, as amostras permaneceram por 1 hora em estabilização a 5ºC. Logo após, transferidas para o vapor de nitrogênio durante 10 minutos, e por fim, mergulhadas em nitrogênio e armazenadas em botijão criogênico. As palhetas foram descongeladas a 46ºC por 15 segundos. Foram avaliados os parâmetros de cinética espermática e integridade de membrana plasmática e acrossomal (IMPA, %). Verificou-se que os parâmetros de motilidade total (%), velocidade linear progressiva (VSL; µm/s), velocidade curvilínea (VCL; µm/s), linearidade (%), percentagem de espermatozoides rápidos (%) e integridade de membrana plasmática e acrossomal avaliados por citometria de fluxo foram superiores no grupo 1, em que as amostras não foram centrifugadas. Estes dados demonstram que, o protocolo para congelação de sêmen canino, utilizando o diluente Botudog®, não preconiza a centrifugação do ejaculado, previamente a congelação.(AU)

Most protocols used for canine semen cryopreservation are based on methodologies described for other species. Thus, this study aims at evaluating different freezing protocols for semen of this domestic species. To this end, 3 adult Bulldog Campeiro males aged 2 to 5 years and proven fertility were used. Five semen samples were collected from each animal using the digital manipulation of the penile bulb method, prioritizing the second fraction of the ejaculate. The collected samples were divided into 2 groups, with a concentration of 100 x 106 sperm per mL. In group 1, the samples were diluted directly into Botudog® commercial freezing medium (Botupharma Animal Biotechnology). In group 2, the samples were centrifuged at 600 g for 10 minutes and then the pellet was resuspended in commercial Botudog® freezing medium. The samples were packed in 0.5 mL straws with a concentration of 50 x 106 viable sperm. Then, the samples remained for 1 hour in stabilization at 5ºC. Afterwards, they were transferred to nitrogen vapor for 10 minutes, and finally, dipped in nitrogen and stored in cryogenic cylinder. The straws were thawed at 46ºC for 15 seconds. Parameters for spermatic kinetics, and plasma and acrosomal membrane integrity (IMPA, %) were evaluated. Total motility (%), progressive linear velocity (VSL; µm/s), curvilinear velocity (VCL; µm/s), linearity (%), percentage of rapid sperm (%) and membrane integrity were found. Plasma and acrosomal samples evaluated by flow cytometry were higher in group 1, where samples were not centrifuged. These data demonstrate that the protocol for canine semen freezing using Botudog® diluent does not recommend centrifugation of the ejaculate prior to freezing.(AU)

La mayoría de los protocolos utilizados para la criopreservación de semen canino se basan en metodologías descritas para otras especies. Por lo tanto, esta investigación tiene como objetivo evaluar diferentes protocolos de congelación para el semen de esta especie doméstica. Con este fin, se utilizaron 3 machos, adultos, de la raza Bulldog Campero, con edades entre 2 a 5 años y fertilidad comprobada. Se realizaron cinco recolecciones de semen de cada animal mediante el método de manipulación digital del bulbo del pene, priorizando la segunda fracción de la eyaculación. Las muestras recolectadas se dividieron en 2 grupos, con una concentración de 100 x 106 espermatozoides por mL. En el grupo 1, las muestras se diluyeron directamente en medio de congelación comercial Botudog® (Botupharma Animal Biotechnology). En el grupo 2, las muestras fueron centrifugadas a 600 g durante 10 minutos y luego el pellet fue resuspendido en medio de congelación comercial Botudog®. Las muestras se envasaron en paletas de 0,5 mL con una concentración de 50 x 106 espermatozoides viables. Luego, las muestras permanecieron durante 1 hora en estabilización a 5ºC. Posteriormente, se transfirieron al vapor de nitrógeno durante 10 minutos y, finalmente, se sumergieron en nitrógeno y se almacenaron en un cilindro criogénico. Las paletas se descongelaron a 46ºC durante 15 segundos. Se han evaluado los parámetros de la cinética espermática y la integridad de la membrana plasmática acrosomal (IMPA, %). Se verificó que los parámetros de motilidad total (%), velocidad lineal progresiva (VSL; µm/s), velocidad curvilínea (VCL; µm/s), linealidad (%), porcentaje de espermatozoides rápidos (%) e integridad de la membrana plasmática y acrosomal evaluadas por citometría de flujo, fueron mayores en el grupo 1, donde las muestras no fueron centrifugadas. Estos datos demuestran que, el protocolo para la congelación de semen canino, usando el diluyente Botudog®, no preconiza la centrifugación del eyaculado, previamente a la congelación.(AU)

Effects of treatment with quercetin on the quality of cryopreserved bovine semen

Background: Semen cryopreservation is one of the most common biotechnologies in the reproduction of animals ofagricultural interest, especially bulls. However, cryopreservation can be harmful to sperm cells, with susceptibility tooxidative stress being one of the causes. The addition of antioxidants such as quercetin may inhibit and/or reduce suchdamage, reducing fertility. Quercetin can increasing sperm motility and interaction capacity between spermatozoa-oocyte,to increase cellular metabolism and reduced DNA fragmentation and oxidation following thawing. Therefore, the objective of this study was to evaluate the protective effect of quercetin on the metabolism of bovine semen following thawing.Materials, Methods & Results: Three Brahman bulls in reproduction age and previously considered fit for reproductionwere used. The semen samples were collected via the electroejaculation method, and the samples were homogenized toform pooled semen from three ejaculates, which was diluted in Tris-yolk egg-glicerol diluent medium. Quercetin was addedto diluent, to final concentrations of 0, 5, 10, 15 and 20 μg.mL-1 in each group. The samples were kept frozen in strawsof 500 μL, with concentration of 40,000,000 spermatozoid / mL for 15 days and were thawed in water at 36°C for 30 s.All the tests was performed in five replicates. The cell metabolism status was evaluated by quantification of superoxideradical production with a nitroblue tetrazolium test (NBT) and scanning spectrophotometry. By spermatic evaluation, thefollowing parameters were evaluated via the computerized system of sperm analysis (CASA): total motility (TM, %),progressive motility (PM, %), velocity curved line (VCL, mm/s), velocity straight line (VSL, mm/s), velocity averagepath (VAP, mm/s), distance curved line (DCL, mm), distance straight line (DSL, mm), distance average path (DAP, mm),amplitude of lateral head displacement (ALH, mm), beat cross frequency (BCF, Hz), wobble...

Effects of treatment with quercetin on the quality of cryopreserved bovine semen

Background: Semen cryopreservation is one of the most common biotechnologies in the reproduction of animals ofagricultural interest, especially bulls. However, cryopreservation can be harmful to sperm cells, with susceptibility tooxidative stress being one of the causes. The addition of antioxidants such as quercetin may inhibit and/or reduce suchdamage, reducing fertility. Quercetin can increasing sperm motility and interaction capacity between spermatozoa-oocyte,to increase cellular metabolism and reduced DNA fragmentation and oxidation following thawing. Therefore, the objective of this study was to evaluate the protective effect of quercetin on the metabolism of bovine semen following thawing.Materials, Methods & Results: Three Brahman bulls in reproduction age and previously considered fit for reproductionwere used. The semen samples were collected via the electroejaculation method, and the samples were homogenized toform pooled semen from three ejaculates, which was diluted in Tris-yolk egg-glicerol diluent medium. Quercetin was addedto diluent, to final concentrations of 0, 5, 10, 15 and 20 μg.mL-1 in each group. The samples were kept frozen in strawsof 500 μL, with concentration of 40,000,000 spermatozoid / mL for 15 days and were thawed in water at 36°C for 30 s.All the tests was performed in five replicates. The cell metabolism status was evaluated by quantification of superoxideradical production with a nitroblue tetrazolium test (NBT) and scanning spectrophotometry. By spermatic evaluation, thefollowing parameters were evaluated via the computerized system of sperm analysis (CASA): total motility (TM, %),progressive motility (PM, %), velocity curved line (VCL, mm/s), velocity straight line (VSL, mm/s), velocity averagepath (VAP, mm/s), distance curved line (DCL, mm), distance straight line (DSL, mm), distance average path (DAP, mm),amplitude of lateral head displacement (ALH, mm), beat cross frequency (BCF, Hz), wobble...(AU)

Utilização de pentoxifilina e antioxidantes na criopreservação do sêmen bovino: qualidade seminal e estresse oxidativo / Utilization of pentoxifylline and antioxidants in cryopreservation of bovine semen: semen quality and oxidative stress

O presente estudo avaliou a adição da pentoxifilina, tocoferol, ascorbato e suas combinações sobre a proteção da célula espermática bovina contra os efeitos deletérios da criopreservação. Foram utilizados 24 touros Nelores (Bos taurus indicus), criados em sistema semi-intensivo. Foi coletado um ejaculado de cada reprodutor, diluídos em TRIS-citratogema-glicerol e divididos em seis partes. Cada parte foi suplementada da seguinte maneira: sem aditivos (controle), tocoferol (10 mmol/mL), tocoferol (10 mmol/mL) + pentoxifilina (1mg/mL), ascorbato (0,45mg/mL), ascorbato (0,45mg/mL) + pentoxifilina (1mg/mL) ou pentoxifilina (1mg/mL). Após o descongelamento, as amostras foram avaliadas quanto à motilidade e características do movimento, integridade da membrana plasmática e de acrossomo e atividade mitocondrial. Os níveis de peroxidação lipídica espontânea e induzida foram avaliados pela produção de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). A suplementação com pentoxifilina, tocoferol, ascorbato e suas combinações, não alterou (P>0,05) a atividade mitocondrial, integridade acrossomal, e a concentração de TBARS espontâneo e induzido. A adição de tocoferol + pentoxifilina reduziu a motilidade progressiva quando comparado ao ascorbato e também a integridade da membrana espermática quando comparado ao controle e ao ascorbato (P˂0,05). Já a adição de ascorbato + pentoxifilina foi deletéria sobre linearidade em comparação ao tratamento ascorbato (P˂0,05). A adição de ascorbato, tocoferol e pentoxifilina individualmente ou em combinação, não foi eficiente em diminuir os danos causados pela criopreservação e estresse oxidativo em amostras pós descongelamento de sêmen bovino.

The present study evaluated the addition of pentoxifylline, tocopherol and ascorbate and their combinations on the protection of bovine spermatic cells against the deleterious effects of cryopreservation. A total of 24 Nelore bulls (Bos Taurus indicus) were included in this study, raised in a semi-intensive system. One ejaculation was collected from each bull and diluted in tris-citrate-yolk-glycerol, divided into six portions, and then supplemented with: no additives (control); tocopherol (10 mmol/ml), tocopherol (10 mmol/ml) + pentxoifylline (1 mg/ml), ascorbate (0.45 mg/ml), ascorbate (0.45 mg/ml) + pentoxifylline (1 mg/ml) and pentxoifylline (1 mg/ml). After thawing, the samples were evaluated for motility and characteristics of movement, acrosomal and plasma membrane integrity, and mitochondrial activity. Spontaneous and induced lipid peroxidation levels were evaluated by the production of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS). Supplementation with pentoxifylline, tocopherol and ascorbate and their combinations, did not alter mitochondrial activity, acrosomal integrity, or the spontaneous and induced TBARS concentration (P>0.05). The ascorbate, tocopherol and pentoxifylline additions, both individually and in combinations, were inefficient in decreasing the damage caused by cryopreservation and oxidative stress in post-thawed bovine semen samples.

Utilização de pentoxifilina e antioxidantes na criopreservação do sêmen bovino: qualidade seminal e estresse oxidativo / Utilization of pentoxifylline and antioxidants in cryopreservation of bovine semen: semen quality and oxidative stress

O presente estudo avaliou a adição da pentoxifilina, tocoferol, ascorbato e suas combinações sobre a proteção da célula espermática bovina contra os efeitos deletérios da criopreservação. Foram utilizados 24 touros Nelores (Bos taurus indicus), criados em sistema semi-intensivo. Foi coletado um ejaculado de cada reprodutor, diluídos em TRIS-citratogema-glicerol e divididos em seis partes. Cada parte foi suplementada da seguinte maneira: sem aditivos (controle), tocoferol (10 mmol/mL), tocoferol (10 mmol/mL) + pentoxifilina (1mg/mL), ascorbato (0,45mg/mL), ascorbato (0,45mg/mL) + pentoxifilina (1mg/mL) ou pentoxifilina (1mg/mL). Após o descongelamento, as amostras foram avaliadas quanto à motilidade e características do movimento, integridade da membrana plasmática e de acrossomo e atividade mitocondrial. Os níveis de peroxidação lipídica espontânea e induzida foram avaliados pela produção de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). A suplementação com pentoxifilina, tocoferol, ascorbato e suas combinações, não alterou (P>0,05) a atividade mitocondrial, integridade acrossomal, e a concentração de TBARS espontâneo e induzido. A adição de tocoferol + pentoxifilina reduziu a motilidade progressiva quando comparado ao ascorbato e também a integridade da membrana espermática quando comparado ao controle e ao ascorbato (P˂0,05). Já a adição de ascorbato + pentoxifilina foi deletéria sobre linearidade em comparação ao tratamento ascorbato (P˂0,05). A adição de ascorbato, tocoferol e pentoxifilina individualmente ou em combinação, não foi eficiente em diminuir os danos causados pela criopreservação e estresse oxidativo em amostras pós descongelamento de sêmen bovino.(AU)

The present study evaluated the addition of pentoxifylline, tocopherol and ascorbate and their combinations on the protection of bovine spermatic cells against the deleterious effects of cryopreservation. A total of 24 Nelore bulls (Bos Taurus indicus) were included in this study, raised in a semi-intensive system. One ejaculation was collected from each bull and diluted in tris-citrate-yolk-glycerol, divided into six portions, and then supplemented with: no additives (control); tocopherol (10 mmol/ml), tocopherol (10 mmol/ml) + pentxoifylline (1 mg/ml), ascorbate (0.45 mg/ml), ascorbate (0.45 mg/ml) + pentoxifylline (1 mg/ml) and pentxoifylline (1 mg/ml). After thawing, the samples were evaluated for motility and characteristics of movement, acrosomal and plasma membrane integrity, and mitochondrial activity. Spontaneous and induced lipid peroxidation levels were evaluated by the production of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS). Supplementation with pentoxifylline, tocopherol and ascorbate and their combinations, did not alter mitochondrial activity, acrosomal integrity, or the spontaneous and induced TBARS concentration (P>0.05). The ascorbate, tocopherol and pentoxifylline additions, both individually and in combinations, were inefficient in decreasing the damage caused by cryopreservation and oxidative stress in post-thawed bovine semen samples.(AU)

ADIÇÃO DE COLESTEROL LIGADO À CICLODEXTRINA NO PROCESSAMENTO DE ESPERMATOZOIDES EQUINOS CRIOPRESERVADOS E ADIÇÃO DE ESTIMULANTES DA MOTILIDADE NO PÓS DESCONGELAMENTO

Este estudo propôs avaliar o efeito da adição de colesterol ligado à ciclodextrina (CLC) antes do processo de criopreservação e estimulantes de motilidade após o descongelamento (Fert Talp - FT e Pentoxifilina - PTX), sobre a cinética espermática (MT, MP, RAP, VCL, VSL, VAP e LIN), integridade de membrana plasmática, produção de peróxido de hidrogênio intracelular, potencial mitocondrial, desestabilização da membrana plasmática e fertilidade in vivo. Foram criopreservados dois ejaculados de 12 garanhões e cada ejaculado foi subdividido em quatro grupos: G1 (sem CLC), G2 (1mg de CLC), G3 (1,5mg de CLC) e G4 (2mg de CLC). No experimento I o objetivo foi comparar os parâmetros espermáticos após a inclusão de CLC (G1-G4) e avaliar a longevidade celular pelo teste de Termorresitência - TTR após o descongelamento: imediatamente (T0), 40 minutos (T40), 80 minutos (T80) e 120 minutos (T120). Além disso, objetivou-se avaliar o potencial mitocondrial e a desestabilização da membrana. No experimento II o objetivo foi comparar os parâmetros espermáticos nos grupos anteriores (G1-G4), com e sem adição do estimulante FT (20% - v/v) após o descongelamento, quanto a longevidade celular (TTR - T0, T40, T80 e T120 minutos) e avaliar a produção de peróxido de hidrogênio intracelular. No experimento III o objetivo foi comparar os parâmetros espermáticos nos grupos anteriores (G1-G4), com e sem adição do estimulante PTX (20% - v/v) após o descongelamento, avaliar a longevidade celular (TTR - T0, T40, T80 e T120 minutos), avaliar a produção de peróxido de hidrogênio intracelular, o potencial mitocondrial e a desestabilização da membrana. Além disso, objetivou-se avaliar a fertilidade do sêmen criopreservado em três grupos: 1) Grupo controle (sem CLC); 2) Grupo 1,5mg de CLC; e 3) Grupo 1,5 mg de CLC + PTX. No experimento I, os grupos G3 e G4 apresentaram valores superiores de VCL, VSL e VAP. No T0 os parâmetros de MT e MP foram superiores no G3. Quanto ao potencial mitocondrial e a desestabilização da membrana não foram observadas diferenças significativas entre os grupos (p<0,05). No experimento II, a adição de FT foi benéfica à velocidade espermática (VCL, VSL e VAP) em alguns grupos experimentais e em tempos diferentes. O G2 com FT demonstrou maior percentual de células com membrana plasmática íntegra e sem peróxido de hidrogênio em comparação aos grupos sem adição do estimulante. No experimento III, a adição de PTX não foi benéfica aos parâmetros de cinética após o descongelamento ao decorrer do tempo em alguns grupos experimentais. No grupo G1 com PTX notou-se superioridade de células com membrana lesionada com peróxido de hidrogênio em comparação ao G4 com PTX e uma maior população celular com membranas íntegras sem peróxido de hidrogênio no grupo G4 com PTX em comparação ao G2 com PTX. A taxa de concepção nos grupos G1, G2 e G3 foram 50%, 66,7% e 66,7%, respectivamente. A adição de CLC melhorou os parâmetros cinéticos in vitro, sendo que as concentrações de 1,5 mg e 2 mg conferiram melhor resistência ao processo de criopreservação. A adição de FT conferiu longevidade e superioridade aos parâmetros de velocidade espermática. Em contrapartida, a adição do estimulante PTX, afetou a longevidade celular, demonstrando efeito prejudicial ao movimento espermático. Além disso, a inclusão de CLC não demostrou prejudicar a taxa de concepção em inseminações realizadas após a ovulação. Mediante os resultados encontrados no atual trabalho, pode-se concluir que as concentrações de CLC que melhor conferiram resistência aos espermatozoides ao processo de criopreservação com consequente incremento cinético às células espermáticas foram 1,5 mg e 2 mg. Os achados com a adição do estimulante FT, considerando-o estimulante de motilidade através do aumento no metabolismo celular, conferiu longevidade e superioridade aos parâmetros de velocidade espermática, sendo essa uma atribuição satisfatória além de conferir também maiores populações celulares com membrana plasmática íntegra sem a produção de peróxido de hidrogênio. Em contrapartida a adição do estimulante PTX, afetou a longevidade celular, demonstrando efeito prejudicial ao movimento espermático. E quanto a fertilidade do sêmen criopreservado, os resultados encontrados com a utilização de colesterol ligado a ciclodextrina não interferiu na fertilidade. Dessa forma, o colesterol ligado à ciclodextrina é benéfico à célula espermática ao processo de criopreservação, entretanto a adição de estimulante causou efeitos divergentes, aumentando os parâmetros e a longevidade celular (FT) ou diminuindo os parâmetros de cinética com o tempo (PTX).

The current study proposed to evaluate the effect of the addition of cholesterol bound to cyclodextrin (CLC) before the cryopreservation process and motility stimulants post thawed (fert talp FT and pentoxifylline PTX) on the spermatic kinetics (MT, MP, RAP, VCL, VSL, VAP and LIN), membrane integrity, production of intracellular hydrogen peroxide, mitochondrial potential, destabilization of the plasma membrane and in vivo fertility. Two ejaculates of 12 stallions were cryopreserved; subdivided into four experimental groups: G1 (no CLC); G2 (1 mg of CLC), G3 (1.5 mg of CLC) and G4 (2 mg of CLC). In experiment I, the objective was to compare spermatic parameters after the inclusion of CLC (G1-G4), to evaluate cell longevity through the thermoresistance test - TTR post thawed: immediately (T0), 40 minutes (T40), 80 minutes (T80) and 120 minutes (T120). In addition, mitochondrial potential and membrane destabilization were evaluated. In experiment II the objective was to compare spermatic parameters after the inclusion of CLC (G1-G4) and the addition of the stimulant FT, to evaluate cell longevity (TTR) post thawed (T0, T40, T80 and T120) and to evaluate the production of intracellular hydrogen peroxide. In experiment II the objective was to compare spermatic parameters in the groups (G1-G4), with and without the addition of the stimulant FT (20% - v/v) post thawed, as to the cellular longevity (TTR T0, T40, T80 and T120 minutes) and to evaluate the production of intracellular hydrogen peroxide. In experiment III the objective was to compare spermatic parameters in the groups (G1-G4), with and without the addition of the stimulant PTX (20% - v/v) post thawed, to evaluate cellular longevity (TTR - T0, T40, T80 and T120 minutes), to evaluate the production of intracellular hydrogen peroxide, the mitochondrial potential and the membrane destabilization. In addition, to evaluate the fertility of the cryopreserved semen in three groups: 1) Control group: no cholesterol addition; 2) Group cholesterol: 1.5 mg, and 3) Group cholesterol 1.5 mg + PTX. In experiment I, groups G3 and G4 presented superior values of VCL, VSL and VAP. In T0, the parameters of MT and MP were superior in G3. As to mitochondrial potential and membrane destabilization, no meaningful differences were observed between the groups (p<0.05). In experiment II, the addition of FT was beneficial to spermatic speed (VCL, VSL and VAP) in some experimental groups and in different times. G2 with FT has demonstrated higher percentage of cells with intact membrane and without hydrogen peroxide in comparison to groups without the addition of the stimulant. In experiment III, the addition of PTX was not beneficial to the kinetics parameters post thawed along time in some experimental groups. In the group G1 with PTX it was observed superiority in cells with injured membrane and with hydrogen peroxide in comparison to G4 with PTX and a higher cell population with intact membranes and without hydrogen peroxide in the group G4 with PTX in comparison to G2 with PTX. The conception rate in the groups G1, G2 and G3 was, respectively, 50%, 66.7% and 66.7%. In this way, it is possible to conclude that the addition of the cholesterol bounded to cyclodextrin is beneficial to the spermatic cell in the cryopreservation process, however, the addition of stimulants post thawed has caused divergent effect. The stimulant FT has provided longevity and superiority to the spermatic velocity parameters. In contrast, the addition of the stimulant PTX has compromised the cellular longevity. In addition, the inclusion of CLC has not affected the conception rate in inseminations carried out after the ovulation.

BIOLOGIA REPRODUTIVA DE HYPOPHTHALMUS MARGINATUS E ESTUDO COMPARATIVO DA ESPERMIOGÊNESE HYPOPHTHALMUS MARGINATUS, AGENEIOSUS UCAYALENSIS E AUCHENIPTERICHTHYS LONGIMANUS (TELEOSTEI: SILURIFORMES)

O presente estudo tem como objetivo analisar aspectos da biologia reprodutiva, proliferação das células germinativas no testículo de Hypophthalmus marginatus, bem como comparar a morfologia dos espermatozóides de Hypophthalmus marginatus, Ageneiosus ucayalensis e Auchenipterichthys longimanus baseado em análises ultraestruturais. Para isso o trabalho foi desenvolvido em três capítulos. O primeiro, verificou a proporção sexual entre fêmeas e machos de H. marginatus, estágios de maturação sexual; índice gonadossomático; período reprodutivo, tipo de desova; fator de condição e tamanho médio na primeira maturação sexual. A atividade reprodutiva ocorreu a jusante da barragem hidrelétrica de Tucuruí. Esta atividade reprodutiva coincidiu com o aumento da vazão e oxigênio dissolvido na água. O segundo, descreveu a estrutura testicular e a ultraestrutura de células germinativas de Hypophthalmus marginatus durante a espermatogênese. H. marginatus apresentaram testículos filiformes, o parênquima testicular era composto por células da linhagem espermatogênica e células de Sertoli. As células espermatogênicas estavam organizadas em cistos espermáticos. Durante a espermiogênese as espermatídes não apresentaram rotação nuclear, o centríolo proximal era perpendicular ao centríolo distal, característico da espermiogênese do tipo III. Morfologicamente os espermatozoides apresentaram cabeça ovóide sem acrossoma, um núcleo condensado e uma fossa nuclear rasa, peça central curta com um único longo flagelo, que exibia a estrutura do axonema clássico de nove pares de microtúbulos periféricos e um central. A peça final era fina com apenas microtúbulos periféricos. O terceiro capítulo analisou a morfologia dos espermatozóides de Hypophthalmus marginatus, Ageneiosus ucayalensis e Auchenipterichthys longimanus. Os resultados demostraram que algumas características evidenciadas nos espermatozoides de Hypophthalmus marginatus, Ageneiosus ucayalensis e Auchenipterichthys longimanus permaneceram conservadas, como a cabeça sem acrossoma, peça intermediária, uniflagelar e axonema clássico de 9+2 microtúbulos. Estas informações podem contribuir para a preservação da espécie, estudos filogenéticos entre os grupos de Siluriformes, bem como subsidiar o aproveitamento de H. marginatus na aquicultura.

The present study aimed to analyse aspects of the reproductive biology and germ cell proliferation on the testicles of Hypophthalmus marginatus, as well to compare the spermatozoid morphology of H. marginatus, Ageneiosus ucayalensis and Auchenipterichthys longimanus based on ultrastructural analyses. For this, the work was divided in three chapters. The first, chapter verified the sex ratio in H. marginatus, its gonadal maturing stages, gonadossomatic index, reproductive period, spawn type, condition factor and average size during the first maturation. Reproductive activity occurred downstream of the Tucuruí hydroelectric dam. This reproductive activity coincided with the increase in flow and dissolved oxygen in the water. The second, described the testicular structure and germ cell ultrastructure of H. marginatus during spermatogenesis. H. marginatus showed filiform testicles and its testicular parenchyma was formed by spermartogenic lineage cells and Sertoli cells. The spermatogenic cells were organized in spermatic cysts. During spermiogenesis, spermatids did not show nuclear rotation and the proximal centriole was perpendicular to the distal centriole, a characteristic of type III spermatogenesis. Morphologically, spermatozoids showed ovoid head without acrossome, a condensed nucleus and shallow nuclear fossa, short central piece and one long flagellum, wich exhibits the typical structure of axoneme in nine pairs of peripheral microtubules and one central pair. The final piece is thin and has only peripheral microtubules. The third, chapter analysed the morphology of spermatozoids in H. marginatus, Ageneiosus ucayalensis and Auchenipterichthys longimanus. The results demonstrated that some of the spermatozoids characteristics on the three species remain conserved, such as a head without acrossome, intermediary piece, uniflagellar and a classic axoneme of 9 + 2 microtubules. This information can contribute to the preservation of the species, phylogenetic studies among Siluriform groups, as well as subsidize the use of H. marginatus in aquaculture. Palavras-chave: Auchenipteridae. Pimelodidae. Reproduction. L50. Histology.

Morphology of the urogenital papilla and its component ducts in Astyanax altiparanae Garutti & Britski, 2000 (Characiformes: Characidae)

The histological description of the urogenital papilla is an important tool to comprehension of the reproductive mechanisms in fish, as well as a pre-requisite to germ cell transplantation in adult fish, besides to be a good biological indicator to environmental changes. Was performed the histological description of the urogenital papilla and its component ducts in the tetra Astyanax altiparanae. The genital and urinay ducts pass separately throughout most part of its extension, joining in a single duct before opening. In males this opening is asymmetric and seems to have double origin, being completely surrounded by striated muscle fibers, while in females it is symmetric and the muscle fibers does not surround it totally. Spermatic duct and oviduct undergo changes throughout their extension, mainly in the morphology of the surrounding epithelium. In the spermatic duct, squamous epithelial cells change to columnar and cuboid with possible secretory activity, close to testes. In the oviduct, anteriorly epithelial cells are also squamous, however, close to ovary there are lamellae composed by a pseudostratified epithelium with columnar and cuboid cells. The urinary duct is highly similar for both sexes presenting globoid cells, which description is known in mammals, however, rare in fish.(AU)

A descrição histológica da papila urogenital é uma importante ferramenta para a compreensão dos mecanismos reprodutivos em peixes, assim como um pré-requisito para a realização do transplante de células germinativas em peixes adultos, além de um bom indicador biológico de possíveis alterações ambientais. Foi realizada a investigação histológica da papila urogenital e seus ductos constituintes no lambari Astyanax altiparanae. Os ductos genital e urinário ocorrem separadamente ao longo de maior parte de sua extensão, entretanto, unem-se em um ducto simples antes de abrir para o meio externo. Nos machos esta abertura é assimétrica e parece ter dupla origem, sendo completamente envolvida por fibras musculares estriadas, enquanto nas fêmeas ela é simétrica e as fibras musculares não a envolve totalmente. O ducto espermático e oviducto sofrem alterações ao longo de sua extensão, principalmente na morfologia do epitélio que os envolve. No ducto espermático as células epiteliais passam de pavimentosas a colunares e cuboides, com possível atividade secretora, à medida que se aproxima dos testículos. No oviducto, anteriormente as células também são epiteliais pavimentosas, entretanto, próximo aos ovários, formam-se lamelas compostas por um epitélio pseudoestratificado composto por células cuboides e colunares. O ducto urinário é bastante similar em ambos os sexos apresentando células globosas, cuja descrição é conhecida em mamíferos, porém rara em peixes.(AU)

Efeito da adição de caseinato de sódio sobre a viabilidade do sêmen bubalino criopreservado

O uso do sêmen refrigerado proporciona maiores taxas de prenhez se comparado ao do sêmen congelado. Essa diferença parece estar relacionada às lesões mais severas das membranas espermáticas desencadeadas pelo processo de congelação. Por sua habilidade de se ligar às proteínas ligadoras de espermatozoides e ao íon cálcio, o caseinato de sódio vem sendo estudado como uma substância capaz de inibir a capacitação espermática precoce, uma importante causa de diminuição da taxa de prenhez quando do uso de sêmen congelado. O primeiro objetivo deste estudo foi avaliar a possibilidade de um diluente comercial a base de gema de ovo, destinado à congelação de sêmen bovino, ser empregado para a criopreservação de sêmen bubalino; o segundo objetivo foi investigar o efeito do uso desse diluente, suplementado com caseinato de sódio, na criopreservação de espermatozoides bubalinos, por meio da avaliação dos espermatozoides, por citometria de fluxo, e da cinética espermática, empregando-se o sistema CASA. Na primeira parte do estudo, quando comparados os resultados das avaliações da cinética espermática e integridade das membranas plasmática e acrossomal, observou-se que o processo de congelação seminal promoveu mais danos celulares que o processo de refrigeração. Na segunda parte do estudo, não foram observados efeitos da adição do caseinato de sódio ao diluente a base de gema de ovo. A partir dos resultados do presente estudo foi possível concluir que o diluente a base de gema de ovo testado foi adequado para a criopreservação de sêmen bubalino e que a adição do caseinato de sódio não diminuiu os efeitos deletérios relacionados à criopreservação seminal.

The use of cooled semen results in higher pregnancy rates compared than the use of frozen semen. This result seems to be related to the more severe damages triggered by the freezing process, when compared to those observed during the refrigeration. Due to its ability to bind to sperm-binding proteins and calcium ions, sodium caseinate has been studied as a ubstance capable to prevent early sperm capacitation, a major cause of decreased pregnancy rate after using frozen semen. The first objective of this study was to evaluate if a commercial egg yolk diluent developed for freezing bovine semen could be used for buffalo semen cryopreservation; the second objective was to investigate the effect of this diluent, added with sodium caseinate, during the procedures of buffalo sperm cryopreservation, using flow cytometry and computer-assisted sperm analysis. In the first part of the study, comparing the results of spermatic kinetics and plasma and acrosomal membranes integrity, it was observed that the freezing process resulted in more cell damage than the cooling process. In the second part of the study, no effects of the addition of sodium caseinate to the egg yolk diluent were observed. From the results of the present study it was possible to conclude that the egg yolk-based diluent was suitable for buffalo semen cryopreservation and that the addition of sodium caseinate did not decrease the deleterious effects related to seminal cryopreservation.

SELEÇÃO ESPERMÁTICA EM AMOSTRAS EJACULADAS E EPIDIDIMÁRIAS DE CÃES DOMÉSTICOS E EFEITO DA ADIÇÃO DE FLUIDO PROSTÁTICO

Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar a eficiência da seleção espermática em amostras de ejaculados e epididimárias de cães domésticos, assim como verificar o efeito da adição de fluido prostático em amostras epididimárias, previamente ao resfriamento. Para tal, foram realizados três experimentos. No experimento 1, objetivou-se testar a eficiência da técnica de seleção espermática swimup modificado com adição de um coloide comercial (Androcoll-C) (SU-AC), quando realizada em diferentes formatos e grau de inclinação do tubo de migração, na tentativa de aumentar as taxas de recuperação e a qualidade espermática em sêmen canino fresco. Quinze amostras seminais obtidas de três cães foram submetidas aos tratamentos a seguir: T0-Controle: sêmen diluído em diluente comercial; T1: SU-AC em tubo Falcon, em posição vertical; T2: SU-AC em tubo de base arredondada, em posição vertical e T3: SU-AC em tubo de base arredondada, posicionado a 45°; após 3 minutos o T2 e T3 foram avaliados e outra alíquota de meio diluente foi reposta e avaliada 30 minutos depois, constituindo os tratamentos T2a e T3a, respectivamente. Não houve diferenças nas taxas de recuperação espermática, defeitos espermáticos totais, integridade de membrana plasmática e integridade de membrana acrossomal entre os tratamentos (P>0,05); houve uma diminuição dos parâmetros cinéticos, independente do formato do tubo de migração e sua inclinação em relação ao T0 (P<0,05); em posição vertical o formato do tubo não mostrou diferenças nas avaliações seminais (P>0,05); houve diminuição das patologias espermáticas quando usado o tubo de base arredondada inclinado, verificado na avaliação de 30 min após a renovação do meio. Conclui-se que não há melhora dos parâmetros cinéticos avaliados após a técnica de SU-AC; as taxas de recuperação espermática e a integridade celular, não são influenciadas pelo uso de tubos de migração de diferentes formatos e inclinação durante a realização da técnica de SU-AC; o SU-AC permite a obtenção de um número menor de patologias espermáticas, quando realizado em tubo de migração de base arredondada e inclinado com renovação do meio no tubo de migração, com recuperação e avaliação aos 30. No experimento 2, objetivou-se verificar o efeito da adição de 10 % de fluido prostático (FP) canino, em amostras espermáticas epididimárias (AEEs) prévio ao resfriamento por 24 horas entre 4 - 6 °C, obtidas por meio da técnica de fluxo retrógrado (FR) com uso de meio de manutenção comercial (MM) e soro fisiológico (SF). Foram obtidas AEEs a partir de oito pares de conjuntos testículo-epidídimo, pela técnica de FR com perfusão de MM ou SF com adição de ar. As AEEs foram padronizadas para 50 x 106 de espermatozoides / mL em MM (T1); as amostras coletadas com SF, foram subdivididas em três alíquotas, sendo uma ajustada para 50 x 106 de espermatozoides / mL em SF (T2); outra alíquota foi ajustada para 50 x 106 de espermatozoides / mL com MM acrescido de 10 % de SF (T3); a terceira alíquota foi ajustada para 50 x 106 de espermatozoides / mL com MM acrescido de 10 % de FP (T4). Durante 24 horas os tratamentos foram resfriados entre 4 6 °C e posteriormente avaliados quanto a motilidade espermática (MOT), vigor espermático (VIG), morfologia espermática, integridade funcional da membrana plasmática e teste de termorresistência (TTR). Não houve efeito (P>0,05) do MM ou do SF, na quantidade e qualidade dos espermatozoides recém coletados, porém, a preservação das amostras em presença de MM durante o resfriamento, influenciou favoravelmente na MOT, VIG e longevidade das amostras (P<0,05). A integridade funcional da membrana plasmática e as patologias espermáticas não mostraram diferenças (P>0,05) após resfriamento. Ao avaliar isoladamente a influência da adição 10 % de FP ao MM, não foram observadas diferenças nos parâmetros avaliados (P>0,05). Conclui-se que a técnica de fluxo retrógrado para recuperação de espermatozoides caninos pode ser realizada mediante perfusão de SF ou MM com adição de ar, sem alterar a qualidade imediata da amostra; para obtenção de características espermáticas desejáveis e duradouras, as amostras armazenadas em MM oferecem melhores resultados após 24 horas de resfriamento; o MM com acréscimo de 10 % de fluido prostático adicionado em AEEs submetidas à refrigeração por 24 horas entre 4 - 6 °C não melhora significativamente os parâmetros qualitativos cinéticos, de integridade de membrana plasmática e do percentual de células normais. Já no experimento 3, objetivou-se avaliar a qualidade de AEEs coletadas por FR, submetidas ao processo de seleção em camada única de coloide (SLC) e à adição de 10 % de FP canino, prévio ao resfriamento por até 72 horas entre 4 6 °C. Oito pares de conjuntos testículoepidídimo foram refrigerados durante 24 horas entre 4 6 °C (resfriamento in situ). As AEEs de ambos os epidídimos foram obtidas por FR usando para a perfusão MM e ar, sendo as AEEs associadas posteriormente em uma única amostra. Após avaliações espermáticas, as AEEs de cada animal foram subdivididas e submetidas a dois grupos de centrifugação: G1 AEEs submetidas à SLC, com o coloide Androcoll-C (AC), e G2 AEEs centrifugada com SF; as amostras obtidas em cada grupo foram ressuspendidas com ou sem FP, para preparação dos tratamentos: T1, AEE centrifugada com AC ressuspendida em MM acrescido de 10 % de FP; T2, AEE centrifugada com AC ressuspendida em MM acrescido de 10 % de SF; T3, AEE centrifugada com SF ressuspendida em MM acrescido de 10 % de FP e T4, AEE centrifugada com SF ressuspendida em MM acrescido de 10 % de SF. Após novas avaliações espermáticas os tratamentos foram refrigerados por até 72 horas entre 4 - 6 °C (resfriamento ex situ). Após 24 horas de resfriamento ex situ e após 48 horas adicionais (ou seja, 72 horas desde a coleta das AEEs), foram realizadas avaliações espermáticas nos diferentes tratamentos. As taxas de recuperação espermática foram de 18 e 38 % (para SLC e centrifugação convencional, respectivamente). Não houve diferenças (P>0,05) entre os parâmetros espermáticos antes e após centrifugações. Após 24 horas de resfriamento ex situ foi observada maior MOT no T4 em relação T2, e maior VIG no T3 em relação ao T2 (P<0,05). Após o TTR o T3 e T4 apresentaram performance superior daqueles submetidos à SLC. Após 72 horas de resfriamento ex situ o VIG no T3 foi superior comparado ao T1 e T2 (P<0,05). Os defeitos maiores, menores e totais foram menores em ao menos um dos tratamentos submetidos a SLC (P<0,05). Diante dos resultados obtidos, conclui-se que a perfusão por FR com adição de ar permite a obtenção de AEEs com características espermáticas aceitáveis; a taxa de recuperação é maior nas AEEs centrifugadas com SF do que a obtida após SLC, porém, a SLC previne o aumento de patologias espermáticas após 72 horas de resfriamento; já o acréscimo de 10 % de FP no MM não tem efeito sobre as AEEs nas condições amostradas; as AEEs resfriadas por 24 horas in situ e por até 72 horas ex situ entre 4 - 6 ° C apresentam parâmetros espermáticos compatíveis para utilização em programas de reprodução, com uso potencial em carnívoros silvestres.

This work was carried out to evaluate the efficiency of sperm selection in ejaculated and epididymal samples of domestic dogs and to verify the effect of the addition of prostatic fluid in epididymal samples, prior to cooling. Three experiments were carried out. In experiment 1, the objective was to test the efficiency of the modified swim-up sperm selection technique adding a commercial colloid (Androcoll-C) (SU-AC), performed in different formats and degree of slant of the migration tube, in an attempt to increase recovery rates and sperm quality in fresh canine semen. Fifteen seminal samples obtained from three different dogs were submitted to the following treatments: T0-Control: semen diluted in commercial diluent; T1: SU-AC in Falcon tube, vertically positioned; T2: SU-AC in round base tube, vertically positioned and T3: SUAC in round base tube, positioned at 45°; after 3' T2 and T3 were evaluated and another medium aliquot was replaced and evaluated 30 minutes later, constituting the treatments T2a and T3a, respectively. There were no differences in sperm recovery rates, total sperm defects, plasma membrane integrity and acrosomal membrane integrity between treatments (P>0.05); there was a decrease in kinetic parameters, regardless of the shape of the migration tube and its slope in relation to T0 (P<0.05); in a vertical position, the tube shape did not show differences in seminal evaluations (P>0.05); there was a decrease in the spermatic pathologies when the slant rounded base tube was used, verified in the 30 min evaluation after the renewal of the medium. It is concluded that there is no improvement of the kinetic parameters evaluated after the SU-AC technique; sperm recovery rates and cell integrity are not influenced by the use of migration tubes of different shapes and slope during the SU-AC technique; the SU-AC allows to obtain a smaller number of spermatic pathologies, when performed in a rounded and inclined base migration tube, with renewal of the medium in the migration tube with recovery and evaluation at 30 min. In the experiment 2, the objective was to verify the effect of the addition of prostatic fluid (PF) on epididymal sperm samples (ESS), cooled for 24 hours, at 4 - 6 ° C, obtained through a retrograde flow (RF) using a commercial maintenances medium (MM) and saline solution (SS). ESS were obtained from eight pairs of testis-epididymis sets by the RF technique with infusion of MM or SS with addition of air. The ESS were standardized to 50 x 106 spermatozoa / mL in MM (T1); the samples collected with SS were subdivided into three aliquots, witch one of them was adjusted to 50 x 106 spermatozoa / mL in SS (T2); another aliquot was adjusted to 50 x 106 spermatozoa / mL with MM plus 10 % SS (T3); and the third aliquot was adjusted to 50 x 106 spermatozoa / mL with MM plus 10 % PF (T4). During 24 hours the treatments were cooled at 4 - 6 ° C and later evaluated for sperm motility (MOT), sperm vigor (VIG), sperm morphology, functional integrity of the plasma membrane and thermoresistance test (TRT). There was no effect (P>0.05) of MM or SS, on the quantity and quality of newly collected spermatozoids; however, the preservation of the samples in the presence of MM during the cooling, favorably influenced (P<0.05) in the MOT, VIG and longevity of the samples. Functional integrity of the plasma membrane and spermatic pathologies did not show differences (P>0.05) after cooling. When evaluating the influence of the 10 % PF addition to the MM, no significant differences (P>0,05) were observed in the evaluated parameters. It is concluded that the RF technique for canine sperm retrieval can be performed by infusion of SS or MM with addition of air, without altering the immediate quality of the sample; to obtain desirable and long lasting sperm characteristics, samples stored in MM give better results after 24 hours of cooling; the MM with a PF 10% added in EES subjected to refrigeration for 24 hours between 4 - 6 ° C does not significantly improve the kinetic parameters, plasma membrane integrity and the percentage of normal cells. In the experiment 3, the objective was to evaluate the quality of ESS collected by RF, submitted to the single-layer centrifugation process through colloid (SLC) and sensitization with PF prior to cooling for up to 72 hours at 4 - 6 ° C. Eight pairs of testis-epididymis were refrigerated for 24 hours at 4 - 6 ° C (in situ). The ESS of both epididymis were obtained by RF using MM and air for perfusion and were later associated in a single sample. After sperm evaluation, the ESS of each animal were subdivided and submitted to two groups of centrifugation: G1 - ESS submitted to SLC with Androcoll-C (AC), and G2 - ESS centrifuged with SS; the samples obtained in each group were resuspended with or without PF to prepare the treatments: T1, ESS centrifuged with AC resuspended in MM plus 10 % PF; T2, ESS centrifuged with AC resuspended in MM plus 10 % SS; T3, ESS centrifuged with SS resuspended in MM plus 10 % PF and T4, ESS centrifuged with SS resuspended in MM plus 10 % SS. After further sperm evaluations, the treatments were refrigerated for up to 72 hours at 4 - 6 ° C (ex situ). After 24 hours of cooling and after an additional 48 hours (resulting in 72 hours from the collection of ESS), sperm evaluation of each treatment was performed. Sperm recovery rates were 18 and 38% (for SLC and conventional centrifugation, respectively). There were no differences (P>0.05) between the sperm parameters before and after centrifugations. After 24 hours of cooling, it was observed higher MOT in T4 in relation to T2, and higher VIG in T3 with respect to T2 (P <0.05). After TRT, T3 and T4 presented higher performance than those submitted to SLC. After 72 hours of cooling VIG at T3 was higher compared to T1 and T2 (P<0.05). The major, minor and total defects were lower in at least one of the treatments submitted to SLC (P<0.05). Thus, perfusion by RF with addition of air allow to obtain ESS with acceptable sperm characteristics; the recovery rate is higher in ESS centrifuged with SS than that obtained after SLC; however, SLC prevent the increase of sperm pathologies after 72 hours of cooling; yet, the increase of 10 % of PF in the MM has no effect on the ESS in this experimental conditions; the ESS cooled for 24 hours in situ and up to 72 hours ex situ between a 4 - 6 ° C have compatible sperm parameters for use in reproduction programs, with potential use in wild carnivores.

Sperm characteristics as additional evidence of close relationship between Lebiasina and Piabucina (Characiformes: Lebiasinidae: Lebiasininae)

Spermiogenesis and spermatozoa of representatives of the genera Lebiasina and Piabucina are described. Spermiogenesis is quite similar among all analyzed species of these genera and is identified as Type II. In this type of spermiogenesis, the flagellum of earliest spermatids lies lateral to the nucleus. A slight movement of the nucleus towards the centriolar complex is observed. In late spermatids, the nucleus slightly elongates towards the flagellum. The formation of two striated rootlets apparently occurs in early/intermediate spermatids. The spermatozoa of species of Lebiasina and Piabucina share (1) a drop-shaped slightly elongated nucleus that is laterally positioned relative to the flagellum; (2) a superolateral centriolar complex; (3) two striated rootlets; (4) a basolateral midpiece; (5) oblong mitochondria and (6) a few spherical vesicles. The spermatic characteristics of Lebiasina and Piabucina indicate that spermiogenesis is a homologous process among all species of both genera examined to date and can be considered, along with the spermatozoa morphology, additional evidence indicating a close relationship between Lebiasina and Piabucina. .(AU)

A espermiogênese e os espermatozoides de representantes dos gêneros Lebiasina e Piabucina são descritos. O processo de espermiogênese é muito semelhante entre todas as espécies analisadas, sendo descrita como do Tipo II. Nesta variação de espermiogênese o flagelo das espermátides iniciais localiza-se lateralmente ao núcleo. O núcleo movimenta-se ligeiramente sobre o complexo centriolar. Nas espermátides finais, o núcleo alonga-se ligeiramente em direção ao eixo flagelar. A formação de duas raízes estriadas ocorre nas espermátides iniciais/intermediárias. Os espermatozoides das espécies de Lebiasiana e Piabucina compartilham principalmente (1) o núcleo em forma de gota, lateralmente posicionado em relação ao eixo flagelar, e ligeiramente alongado em direção ao flagelo, (2) o complexo centriolar superolateral, (3) duas raízes estriadas surgindo a partir do centríolo distal, (4) peça intermediária basolateral, (5) mitocôndrias oblongas e (6) algumas vesículas esféricas. As características espermáticas de Lebiasina e Piabucina foram observadas comparativamente e permitem concluir que o processo de espermiogênese é homólogo em todas as espécies destes dois gêneros examinadas até o momento. Os espermatozoides e principalmente os dados de espermiogênese são apresentados aqui como evidências adicionais que indicam uma relação estreita entre os gêneros Lebiasina e Piabucina. .(AU)

Desempenho zootécnico, qualidade espermática e hematológica de machos de tainha, Mugil liza, submetidos a diferentes concentrações de ácido ascórbico dietético durante a primeira maturação em cativeiro

O presente estudo objetivou avaliar a influência da suplementação dietética de vitamina C no desempenho zootécnico, hematológico e qualidade espermática de machos de tainha, Mugil liza, na primeira maturação sexual. Foram testadas seis dietas com diferentes níveis de vitamina C (0; 53; 107; 216; 482 e 708 mg Kg-1), em triplicata, num experimento com duração de 75 dias. Foram utilizados 144 indivíduos (299,2 ± 10,8 g; 25,4 ± 0,4 cm) em 18 tanques circulares de 500 L, com densidade de 8 peixes por tanque em fluxo continuo de água. No final do experimento todos os peixes foram amostrados para avaliação de peso e comprimento. O sangue foi coletado (9 peixes por tratamento) para análise de glicose, proteína total e contagem de eritrócitos. Doze peixes de cada tratamento foram sacrificados para determinar os índices gonadossomático (IGS) e hepatossomático (IHS). O sêmen foi coletado (9 peixes por tratamento) para avaliação de motilidade, concentração espermática e integridade da membrana. Não houve diferença significativa (P > 0,05) no desempenho zootécnico. Os resultados de IGS, IHS e proteína total também não apresentaram diferença significativa entre os tratamentos. Mas o número de eritrócitos foi menor no tratamento controle (sem vitamina C). Além disso, a qualidade espermática foi influenciada pela suplementação de vitamina C, pois os valores mais altos para o tempo de motilidade foram com 53 e 107 mg kg1, para a taxa de motilidade foram com 107, 216 e 708 mg kg-1, e para a integridade da membrana celular foram com 107 e 216 mg kg-1, enquanto que o menor valor de densidade espermática foi no controle. Conclui-se que a suplementação de vitamina C na dieta não afetou o desempenho zootécnico, mas níveis entre 107 e 216 mg kg-1 melhoraram a qualidade espermática de machos de tainha na primeira maturação sexual.

The aim of the present study was to evaluate the influence of the ascorbic acid on growth parameters and sperm quality of Lebranche mullet, Mugil liza. Six diets with different levels of ascorbic acid (0; 53; 107; 216; 482 and 708 mg Kg-1) were provided before the breeding period, during 75 days. At the end of the experiment weight and total length measurements were taken for each fish. Blood samples were collected for glucose and total protein analyses, and red blood cells counting. Twelve fish from each treatment were euthanized for hepatosomatic (HSI) and gonadosomatic index (GSI) determination. Semen was collected from nine fish per treatment for analyses (sperm motility, sperm cell concentration and plasma membrane integrity). Growth parameters, total protein, HSI and GSI did not differ significantly (P > 0,05) among groups. However, red blood cell level was significantly lower in the control (without vitamin C). Further, semen quality was influenced by vitamin C concentration, as the highest levels were found for motility time with 53 and 107 mg kg-1, for percentage of motility with 107, 216 and 708 mg kg-1, and for membrane integrity with 107 and 216 mg kg-1, while the lowest level of sperm concentration was in the control. Considering these results, this study suggests that vitamin C supplementation didnt affect growth performance, but dietary levels of ascorbic acid between 107 and 216 mg kg-1 increased most spermatic parameters of M. liza.

Características espermáticas do sêmen criopreservado bovino submetido a desafio térmico pelo calor

A criopreservação de sêmen de touros superiores é uma poderosa biotécnica reprodutiva, que impacta no melhoramento genético dos rebanhos. O ambiente térmico enfrentado pelos espermatozoides após a descongelação é de grande importância biológica, pois situações extremas podem reduzir a eficiência de sua utilização. No entanto, não se sabe ao certo qual a resistência térmica do espermatozoide criopreservado bovino. Por isso, o trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos de três ambientes térmicos in vitro ao longo do tempo nas características do movimento espermático, funcionalidade de compartimentos celulares e fertilidade in vitro de espermatozoides bovinos criopreservados. Foram utilizadas 20 partidas de sêmen criopreservado provenientes de cinco touros da raça Canchim, que corresponderam a um total de quatro partidas por touro. O sêmen foi descongelado e submetido a três tratamentos térmicos distintos: 36,0 °C (T36,0 temperatura de descongelação), 38,0 °C (T38,0 temperatura fisiológica corpórea) e 39,5 °C (T39,5 temperatura inicial de estresse térmico). O sêmen foi avaliado após a descongelação (0 h) e incubado por 4 horas, sendo reavaliado a cada hora (1 h, 2 h, 3 h e 4 h). Na análise estatística foi utilizado um modelo linear misto e modelo linear misto generalizado e teste de Tukey para a comparação de médias. Os tratamentos a 38,0 °C e 39,5 °C prejudicaram a motilidade das células a partir da segunda hora de incubação, assim como o padrão de movimentação espermática, com mais de 50% de células estáticas a partir da terceira hora. A movimentação espermática foi mais prejudicada a 38,0 °C, a partir da segunda hora. Houve incremento nas lesões de membrana nas células mantidas a 39,5 °C. O potencial mitocondrial reduziu com o passar do tempo. Os espermatozoides submetidos a 36,0 °C apresentaram maior fertilidade in vitro. A motilidade total, motilidade progressiva e padrão de movimentação das células foram características relacionadas à produção de embriões in vitro.

Cryopreservation of the sperm of bulls is a reproductive biotechnology, which impacts on the genetic improvement of the herds. The warm environment faced by spermatozoa after thawing is of great biological importance, the extreme situations can reduce the efficiency of their use. However, it is not known which is a thermal tolerance of bovine cryopreserved sperm. The objective of this work was to evaluate the in vitro thermal effects on the characteristics of sperm movement, the cellular compartment function and the in vitro fertility of cryopreserved bovine spermatozoa. Twenty straws of cryopreserved semen from five Canchim bulls were used, which corresponded to a total of four departures per bull. The semen was thawed and subjected to three different heat treatments: 36.0 ° C (T36.0 defrosting temperature), 38.0 ° C (T38.0 body physiological temperature) and 39.5 ° C (T39.5 temperature initial thermal stress). The semen was evaluated after thawing (0 h) and incubated for 4 hours, being reevaluated every hour (1 h, 2 h, 3 h and 4 h). The statistical analysis was used for a linear mixed model and generalized linear model and Tukey's test for a comparison of averages. Treatments at 38.0 ° C and 39.5 ° C impaired cell motility after the second hour of incubation, as well as the sperm movement pattern, with more than 50% static cells from the third hour. The spermatic movement was more impaired at 38.0 ° C, from the second hour. There was an increase in membrane lesions in cells maintained at 39.5 ° C. Mitochondrial potential decreased with time. Spermatozoa submitted to 36.0 ° C presented higher fertility in vitro. Total motility, progressive motility and movement pattern were related to the in vitro production of embryos.