Effect of Mauritia flexuosa L. leaf extract on Staphylococcus aureus and Staphylococcus haemolyticus biofilms adhered to stainless steel surface / Efeito do extrato de folhas de Mauritia flexuosa L. sobre biofilmes de Staphylococcus aureus e Staphylococcus haemolyticus aderidos a superfície de aço inoxidável

Staphylococcus spp. represents the main mastitis agents in ruminants and contaminants of milk due to their expressive capacity to make biofilms. The aims in this study was evaluate evaluated the antimicrobial activity of Mauritia flexuosa L. extracts against Staphylococcus spp. adhered to a stainless steel surface. Two isolates from cows with clinical mastitis were evaluated; one was identified as Staphylococcus aureus, and the other Staphylococcus haemolyticus. Additionally the ATCC 25923 strain, S. aureus from human was evaluated. The chemical profile obtained from gas chromatography revealed the presence of carbohydrates, organic acids, and flavonoids. The minimum bactericidal concentrations of the ethanolic extract (EE) and aqueous extract (AE) were 4.4 and 5.82 mg/mL, respectively. After EE treatment at 4.4 mg/mL for 2.5 min, total removal of mature biofilms grown on stainless steel coupons was observed (reduction by 3.85-4.81 log units). This extract from M. flexuosa shows potential as an effective sanitizer and may represent a natural alternative against Staphylococcus spp.

Bactérias do gênero Staphylococcus spp. são os principais agentes da mastite em ruminantes e contaminantes do leite devido à expressiva capacidade de formação de biofilmes. Neste estudo o objetivo foi avaliar a atividade antimicrobiana de extratos de Mauritia flexuosa L. (Buritizeiro) contra Staphylococcus spp. aderidos à superfície de aço inoxidável. Foram avaliados dois isolados de vacas com mastite clínica; o um isolado foi identificado como Staphylococcus aureus e o outro como Staphylococcus haemolyticus. Adicionalmente foi também avaliada a e a cepa S. aureus ATCC 25923 de origem humana. O perfil químico obtido por cromatografia gasosa revelou a presença de carboidratos, ácidos orgânicos e flavonóides. As concentrações bactericidas mínimas do extrato etanólico (EE) e do extrato aquoso (AE) foram 4,4 e 5,82 mg / mL, respectivamente. Após o tratamento com EE a 4,4 mg / mL por 2,5 min, foi observada remoção total de biofilmes maduros cultivados em cupons de aço inoxidável (redução de 3,85-4,81 unidades log). O EE de folhas de M. flexuosa apresenta potencial como um desinfetante eficaz e pode representar uma alternativa natural contra Staphylococcus spp.

Perfil epidemiológico de Staphylococcus spp. isolados de hemoculturas de pacientes internados em um hospital de atenção terciária da rede pública do Ceará / Epidemiological profile of Staphylococcus spp. isolated from hemocultures of interned patients in a tertiary attention hospital of the Ceará public network

Staphylococcus spp. vem ganhando destaque em infecções na corrente sanguínea (ICS), apresentando alta prevalência, multirresistência e considerável poder de letalidade. O presente estudo teve como objetivo analisar a prevalência e traçar o perfil de sensibilidade das espécies de Staphylococcus spp. isoladas de amostras de hemoculturas positivas obtidas de um hospital de atenção terciária da rede pública do Ceará, no período de janeiro de 2015 a dezembro de 2018. Dos 3292 exames de hemocultura realizados, apenas 15,88% tiveram resultado positivo, dos quais 24,85% eram cocos Gram positivos. S. aureus representou 1,53% das hemoculturas positivas com 50% das cepas resistentes à oxacilina. Os isolados de Staphylococcus sp. coagulase negativo obtiveram prevalência de 10,89%, representados por: S. epidermidis (n=23), S. haemolyticus (n=17), S. hominis (n=13), S. saprophyticus (n=2) e S. warneri (n=2). Verificou-se multirresistência em diversos isolados analisados, apresentando variações intra e interespécies. Portanto, nossos achados melhoram o entendimento da epidemiologia das ICS causadas por Staphylococcus spp., na instituição de estudo, bem como seu perfil de sensibilidade. A identificação precoce do agente infeccioso auxilia na escolha adequada do tratamento, aumentando as chances de cura e reduzindo o tempo de internação do paciente. (AU)

Staphylococcus spp. has been highlighted among bloodstream infections (BI), presenting high prevalence, multidrug resistance and considerable lethality. The present study aimed to analyze the prevalence and the susceptibility profile of Staphylococcus spp. isolated from positive blood cultures from a tertiary care public hospital of Ceará, from January 2015 to December 2018. Of the 3292 blood cultures performed during this period, only 15.88% were positive, of which 24.85% were Gram positive cocci. S. aureus represented 1.53% of positive blood cultures, of which 50% were oxacilin resistant. Isolates of coagulase-negative Staphylococcus spp. showed a prevalence of 10.89%, represented by: S. epidermidis (n = 23), S. haemolyticus (n = 17), S. hominis (n = 13), S. saprophyticus (n = 2) and S. warneri (n = 2). Multiresistance occurrence was verified in several of the analyzed isolates, presenting intra and inters species variations. Therefore, our findings improve the understanding of the epidemiology of BI caused by Staphylococcus spp. in the studied institution, as well as its susceptibility profile. Early identification of the infectious agent might aid in the appropriate choice of treatment, increasing the chance of cure and reducing the patient length stay in hospital. (AU)

Microbial contamination and antimicrobial resistance profiles indicate potential risks of infection at the Veterinary Medical Teaching Hospital - UFRGS, Porto Alegre, Brazil

Background: This study aimed to assess the level of bacterial contamination in the Small Animals Sector of the VeterinaryMedical Teaching Hospital (HCV) of the Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS). Firstly, a committee wasinvited to complete a questionnaire and to list critical sample sites for collection. With the identification of the places to besampled, collections were made with sterile swabs on different surfaces of environments of the HCV. The identification ofimportant bacteria in the veterinary area, in the different sampled environments, raises the concern for hygiene proceduresin the veterinary hospital environment.Materials, Methods & Results: Sixteen samples were collected from these different areas, and microbiological analyses wereperformed. Standard counts of viable and strictly aerobic mesophilic microorganisms were realized. Collections were madeto assess ambient air quality. With the microbiological analysis performed, bacteria of clinical importance were identified.To assess the resistance profile of the bacteria, the susceptibility test to antimicrobials was performed. MALDI-TOF/MSmeasurement identified 29 bacteria at the genus level and 10 bacteria at the species level and the antimicrobial susceptibility test was realized. Most of the isolates identified (60%) were bacteria of the genus Staphylococcus spp. Regardingantimicrobial susceptibility analysis the 10 bacteria identified at the species level were assessed. Test results showed thatthe isolates S. aureus, S. epidermidis and S. haemolyticus - collected from treatment room 2 - and S. haemolyticus, whichhad been isolated from samples from treatment room 2 of the cattery, presented multiresistance. Pantoea ananatis isolatesfrom room 5 also showed a multiresistant profile for erythromycin, cephalothin, vancomycin and ampicillin. Micrococcusluteus isolates from the x-ray room and the kennel showed resistance to ceftazidime. Staphylococcus equorum isolates...

Microbial contamination and antimicrobial resistance profiles indicate potential risks of infection at the Veterinary Medical Teaching Hospital - UFRGS, Porto Alegre, Brazil

Background: This study aimed to assess the level of bacterial contamination in the Small Animals Sector of the VeterinaryMedical Teaching Hospital (HCV) of the Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS). Firstly, a committee wasinvited to complete a questionnaire and to list critical sample sites for collection. With the identification of the places to besampled, collections were made with sterile swabs on different surfaces of environments of the HCV. The identification ofimportant bacteria in the veterinary area, in the different sampled environments, raises the concern for hygiene proceduresin the veterinary hospital environment.Materials, Methods & Results: Sixteen samples were collected from these different areas, and microbiological analyses wereperformed. Standard counts of viable and strictly aerobic mesophilic microorganisms were realized. Collections were madeto assess ambient air quality. With the microbiological analysis performed, bacteria of clinical importance were identified.To assess the resistance profile of the bacteria, the susceptibility test to antimicrobials was performed. MALDI-TOF/MSmeasurement identified 29 bacteria at the genus level and 10 bacteria at the species level and the antimicrobial susceptibility test was realized. Most of the isolates identified (60%) were bacteria of the genus Staphylococcus spp. Regardingantimicrobial susceptibility analysis the 10 bacteria identified at the species level were assessed. Test results showed thatthe isolates S. aureus, S. epidermidis and S. haemolyticus - collected from treatment room 2 - and S. haemolyticus, whichhad been isolated from samples from treatment room 2 of the cattery, presented multiresistance. Pantoea ananatis isolatesfrom room 5 also showed a multiresistant profile for erythromycin, cephalothin, vancomycin and ampicillin. Micrococcusluteus isolates from the x-ray room and the kennel showed resistance to ceftazidime. Staphylococcus equorum isolates...(AU)

Gangrenous mastitis in sheep caused by multidrug-resistant Staphylococcus haemolyticus / Mastite gangrenosa em ovinos causada por Staphylococcus haemolyticus multirresistente

Mastitis is a multifactorial disease and considered one of the most critical problems in the dairy industry worldwide. The condition is characterized by reduced milk and several abnormalities in the mammary gland. This study aimed to report an outbreak of gangrenous mastitis caused by multidrug-resistant Staphylococcus haemolyticus in a Santa Inês sheep herd. Eighteen sheep were affected, and five of them with severe clinical pictures were examined. The clinical and pathological picture were variable and characterized by apathy, anorexia, emaciation, opaque and brittle hair, apparent and congested episcleral vessels, and hyperthermia. These ewes had enlarged, firm, and painful mammary glands. Macroscopically, these lesions consisted of severe gangrenous mastitis, and microscopically, the primary lesions consisted of necrosis, thrombosis, and fibrosis of the mammary parenchyma. Milk samples from one of the five severely affected ewes were collected and cultured under aerobic or microaerophilic incubation at 37°C for 24 hours on sheep blood agar. The obtained colonies were then submitted to MALDI-TOF for speciation. The colonies were also submitted to an antimicrobial susceptibility test, genotyping of virulence factors and resistance genes were also performed. The isolates showed antimicrobial multiresistance since they were resistant to seven out of 13 tested antibiotics. The isolates were also positive for two staphylococcal enterotoxigenic genes (sec and see) and fibronectin-binding protein B (fnbB).(AU)

A mastite é uma doença multifatorial e é considerada um dos problemas mais importantes na indústria de laticínios no mundo todo. A condição é caracterizada pela redução de leite e várias anormalidades na glândula mamária. O objetivo deste estudo foi relatar um surto de mastite gangrenosa causada por Staphylococcus haemolyticus multirresistente em um rebanho ovino Santa Inês. Dezoito ovelhas foram afetadas e cinco delas com quadro clínico severo foram examinadas. O quadro clínico-patológico era variável quanto a severidade e consistia em apatia, anorexia, magreza, pelos opacos e quebradiços e vasos episclerais aparentes e ingurgitados. As ovelhas apresentavam glândulas aumentadas, firmes e dolorosas. Macroscopicamente, as principais lesões consistiam em mastite gangrenosa e microscopicamente havia necrose do parênquima glandular, trombose e fibrose. Amostras de leite de uma das cinco ovelhas severamente afetadas foram coletadas e cultivadas sob incubação aeróbica ou microaerofílica a 37°C por 24 horas em ágar sangue de ovelha. As colônias obtidas foram então submetidas ao MALDI-TOF para especiação. Além disso, as colônias foram submetidas a um teste de suscetibilidade antimicrobiana e foi realizada a genotipagem de fatores de virulência e genes de resistência. Os isolados apresentaram multirresistência antimicrobiana por serem resistentes a sete dos 13 antibióticos testados. Os isolados também foram positivos para dois genes enterotoxigênicos estafilocócicos (sec e see) e proteína B de ligação à fibronectina (fnbB).(AU)

Gangrenous mastitis in sheep caused by multidrug-resistant Staphylococcus haemolyticus / Mastite gangrenosa em ovinos causada por Staphylococcus haemolyticus multirresistente

Mastitis is a multifactorial disease and considered one of the most critical problems in the dairy industry worldwide. The condition is characterized by reduced milk and several abnormalities in the mammary gland. This study aimed to report an outbreak of gangrenous mastitis caused by multidrug-resistant Staphylococcus haemolyticus in a Santa Inês sheep herd. Eighteen sheep were affected, and five of them with severe clinical pictures were examined. The clinical and pathological picture were variable and characterized by apathy, anorexia, emaciation, opaque and brittle hair, apparent and congested episcleral vessels, and hyperthermia. These ewes had enlarged, firm, and painful mammary glands. Macroscopically, these lesions consisted of severe gangrenous mastitis, and microscopically, the primary lesions consisted of necrosis, thrombosis, and fibrosis of the mammary parenchyma. Milk samples from one of the five severely affected ewes were collected and cultured under aerobic or microaerophilic incubation at 37°C for 24 hours on sheep blood agar. The obtained colonies were then submitted to MALDI-TOF for speciation. The colonies were also submitted to an antimicrobial susceptibility test, genotyping of virulence factors and resistance genes were also performed. The isolates showed antimicrobial multiresistance since they were resistant to seven out of 13 tested antibiotics. The isolates were also positive for two staphylococcal enterotoxigenic genes (sec and see) and fibronectin-binding protein B (fnbB).(AU)

A mastite é uma doença multifatorial e é considerada um dos problemas mais importantes na indústria de laticínios no mundo todo. A condição é caracterizada pela redução de leite e várias anormalidades na glândula mamária. O objetivo deste estudo foi relatar um surto de mastite gangrenosa causada por Staphylococcus haemolyticus multirresistente em um rebanho ovino Santa Inês. Dezoito ovelhas foram afetadas e cinco delas com quadro clínico severo foram examinadas. O quadro clínico-patológico era variável quanto a severidade e consistia em apatia, anorexia, magreza, pelos opacos e quebradiços e vasos episclerais aparentes e ingurgitados. As ovelhas apresentavam glândulas aumentadas, firmes e dolorosas. Macroscopicamente, as principais lesões consistiam em mastite gangrenosa e microscopicamente havia necrose do parênquima glandular, trombose e fibrose. Amostras de leite de uma das cinco ovelhas severamente afetadas foram coletadas e cultivadas sob incubação aeróbica ou microaerofílica a 37°C por 24 horas em ágar sangue de ovelha. As colônias obtidas foram então submetidas ao MALDI-TOF para especiação. Além disso, as colônias foram submetidas a um teste de suscetibilidade antimicrobiana e foi realizada a genotipagem de fatores de virulência e genes de resistência. Os isolados apresentaram multirresistência antimicrobiana por serem resistentes a sete dos 13 antibióticos testados. Os isolados também foram positivos para dois genes enterotoxigênicos estafilocócicos (sec e see) e proteína B de ligação à fibronectina (fnbB).(AU)

Detection of virulence factors in coagulase-negative Staphylococcus spp. strains isolated from Emmental cheese / Detecção de fatores de virulência em cepas de Staphylococcus spp. coagulase negativos isoladas de queijo Emmental

Food prepared with products derived from animals are involved in most cases of staphylococcal poisoning; therefore, the research of Staphylococcus spp. in Emmental cheese is more applicable. The objective of this study was to identify coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) in cheese using biochemical and molecular techniques to detect the presence of nine genes responsible for the production of enterotoxins. From 180 samples analyzed, 204 CNS strains were obtained and identified as being 46 (22.6%) S. saprophyticus strains, 27 (13.2%) S. hominis spp. hominis strains, 22 (10.8%) S. sciuri strains, 21 (10.3%) S. xylosus strains, 19 (9.3%) S. epidermidis strains, 19 (9.3%) S. haemolyticus strains, 17 (8.3%) S. lentus strains, 17 (8.3%) S. warneri strains, 11 (5.4%) S. equorum strains and 5 (2.5%) S. cohnni . Using the PCRm protocol, 14 (6.9%) strains with the presence of the genes on the enterotoxin E (SEE)11 (78.6%), J (SEJ) 1 (7%), C (SEC) 1 (7%) and I (SEI) 1 (7%) were detected. Based on the results, the type of package is not interfered of growth and isolated that Staphylococcus spp. in cheese. It was observed that bacteria capacity to produce coagulase cannot be understood as an indicative of enterotoxigenicity; therefore, the CNS should be considered as a target of importance in the epidemiology of staphylococcal intoxications. It can be concluded that CNS need to be included in bacterial foodborne disease research, since the genes responsible for the production of toxins were detected and none of the studied samples presented Staphylococcus spp. counting above the limits allowed by legislation.(AU)

Os alimentos preparados com produtos de origem animal são os mais envolvidos em casos de intoxicação alimentar estafilocócica; portanto a pesquisa do Staphylococcus spp. em queijos tipo Emmental é relevante. O objetivo foi isolar e identificar espécies de Staphylococcus coagulase negativas (CNS)de queijo Emmental acondicionado em vários tipos de embalagem, por meio de técnicas bacteriológicas e bioquímicas e detectar, por PCR, a presença de nove genes responsáveis pela produção de enterotoxinas. Das 180 amostras, foram isoladas 204 cepas de CNS, que foram identificadas por provas bioquímicas como: 46 (22,6%) S. saprophyticus, 27 (13,2%) S. hominis spp. hominis, 22 (10,8%) S. sciuri, 21 (10,3%) S. xylosus, 19 (9,3%) S. epidermidis , 19 (9,3%) S. haemolyticus , 17 (8,3%) S. lentus , 17 (8,3%) S. warneri , 11(5,4%) S. equorum e 5 (2,5%) S. cohnii . Na PCR multiplex, em 14 (6,9%) isolados foi detectada a presença dos genes para enterotoxina E (SEE), em 11 (78,6%) J (SEJ), em 1 (7%) C (SEC) e em 1 (7%) I (SEI). Com base nos resultados, o tipo de embalagem não interferiu na multiplicação dos Staphylococcus spp. isolados dos queijos. Neste estudo, verificou-se que a capacidade para a produção de coagulase pela bactéria não pode ser concebida como indicativa de enterotoxigenicidade, portanto devem-se considerar os CNS como objeto de importância na epidemiologia das intoxicações estafilocócicas, fazendo-se necessária a atenção com relação à pesquisa dos CNS nos alimentos, uma vez que foram detectados genes responsáveis pela produção de toxinas, e nenhuma das amostras apresentou contagem para Staphylococcus spp. acima do limite permitido pela legislação.(AU)

Detection of virulence factors in coagulase-negative Staphylococcus spp. strains isolated from Emmental cheese / Detecção de fatores de virulência em cepas de Staphylococcus spp. coagulase negativos isoladas de queijo Emmental

Food prepared with products derived from animals are involved in most cases of staphylococcal poisoning; therefore, the research of Staphylococcus spp. in Emmental cheese is more applicable. The objective of this study was to identify coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) in cheese using biochemical and molecular techniques to detect the presence of nine genes responsible for the production of enterotoxins. From 180 samples analyzed, 204 CNS strains were obtained and identified as being 46 (22.6%) S. saprophyticus strains, 27 (13.2%) S. hominis spp. hominis strains, 22 (10.8%) S. sciuri strains, 21 (10.3%) S. xylosus strains, 19 (9.3%) S. epidermidis strains, 19 (9.3%) S. haemolyticus strains, 17 (8.3%) S. lentus strains, 17 (8.3%) S. warneri strains, 11 (5.4%) S. equorum strains and 5 (2.5%) S. cohnni . Using the PCRm protocol, 14 (6.9%) strains with the presence of the genes on the enterotoxin E (SEE)11 (78.6%), J (SEJ) 1 (7%), C (SEC) 1 (7%) and I (SEI) 1 (7%) were detected. Based on the results, the type of package is not interfered of growth and isolated that Staphylococcus spp. in cheese. It was observed that bacteria capacity to produce coagulase cannot be understood as an indicative of enterotoxigenicity; therefore, the CNS should be considered as a target of importance in the epidemiology of staphylococcal intoxications. It can be concluded that CNS need to be included in bacterial foodborne disease research, since the genes responsible for the production of toxins were detected and none of the studied samples presented Staphylococcus spp. counting above the limits allowed by legislation.(AU)

Os alimentos preparados com produtos de origem animal são os mais envolvidos em casos de intoxicação alimentar estafilocócica; portanto a pesquisa do Staphylococcus spp. em queijos tipo Emmental é relevante. O objetivo foi isolar e identificar espécies de Staphylococcus coagulase negativas (CNS)de queijo Emmental acondicionado em vários tipos de embalagem, por meio de técnicas bacteriológicas e bioquímicas e detectar, por PCR, a presença de nove genes responsáveis pela produção de enterotoxinas. Das 180 amostras, foram isoladas 204 cepas de CNS, que foram identificadas por provas bioquímicas como: 46 (22,6%) S. saprophyticus, 27 (13,2%) S. hominis spp. hominis, 22 (10,8%) S. sciuri, 21 (10,3%) S. xylosus, 19 (9,3%) S. epidermidis , 19 (9,3%) S. haemolyticus , 17 (8,3%) S. lentus , 17 (8,3%) S. warneri , 11(5,4%) S. equorum e 5 (2,5%) S. cohnii . Na PCR multiplex, em 14 (6,9%) isolados foi detectada a presença dos genes para enterotoxina E (SEE), em 11 (78,6%) J (SEJ), em 1 (7%) C (SEC) e em 1 (7%) I (SEI). Com base nos resultados, o tipo de embalagem não interferiu na multiplicação dos Staphylococcus spp. isolados dos queijos. Neste estudo, verificou-se que a capacidade para a produção de coagulase pela bactéria não pode ser concebida como indicativa de enterotoxigenicidade, portanto devem-se considerar os CNS como objeto de importância na epidemiologia das intoxicações estafilocócicas, fazendo-se necessária a atenção com relação à pesquisa dos CNS nos alimentos, uma vez que foram detectados genes responsáveis pela produção de toxinas, e nenhuma das amostras apresentou contagem para Staphylococcus spp. acima do limite permitido pela legislação.(AU)

Inhibition of the growth of major mastitis-causing pathogens by non-aureus Staphylococcus isolates using the cross-streaking method / Comunicação: Inibição do crescimento dos principais patógenos causadores de mastite por isolados de estafilococos não aureus pelo método cross-streaking

O objetivo do presente estudo foi avaliar a capacidade de estafilococos não aureus (NAS) isolados de diferentes nichos ecológicos (leite, ambiente e ápice do teto), associados a vacas leiteiras, de inibir os principais agentes etiológicos da mastite bovina (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus uberis e Escherichia coli). Neste estudo, 38 isolados NAS de diferentes nichos ecológicos foram avaliados quanto à capacidade de inibir o crescimento in vitro de importantes patógenos causadores de mastite pelo método cross-streaking. No total, 19 (50%) isolados de NAS (oito isolados de S. chromogenes, 10 de S. fleurettii e um de S. haemolyticus) apresentaram inibição contra os principais patógenos causadores de mastite. No entanto, a inibição dos patógenos causadores da mastite bovina por isolados de NAS foi maior contra bactérias Gram-positivas. Além disso, o presente estudo não sugeriu que os nichos ecológicos influenciam a capacidade do NAS de inibir os principais patógenos causadores da mastite bovina. Com base nesses resultados, concluiu-se que certos isolados de NAS apresentam potencial efeito protetor contra os principais patógenos da mastite, pelo menos in vitro.(AU)

Inhibition of the growth of major mastitis-causing pathogens by non-aureus Staphylococcus isolates using the cross-streaking method / Comunicação: Inibição do crescimento dos principais patógenos causadores de mastite por isolados de estafilococos não aureus pelo método cross-streaking

O objetivo do presente estudo foi avaliar a capacidade de estafilococos não aureus (NAS) isolados de diferentes nichos ecológicos (leite, ambiente e ápice do teto), associados a vacas leiteiras, de inibir os principais agentes etiológicos da mastite bovina (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus uberis e Escherichia coli). Neste estudo, 38 isolados NAS de diferentes nichos ecológicos foram avaliados quanto à capacidade de inibir o crescimento in vitro de importantes patógenos causadores de mastite pelo método cross-streaking. No total, 19 (50%) isolados de NAS (oito isolados de S. chromogenes, 10 de S. fleurettii e um de S. haemolyticus) apresentaram inibição contra os principais patógenos causadores de mastite. No entanto, a inibição dos patógenos causadores da mastite bovina por isolados de NAS foi maior contra bactérias Gram-positivas. Além disso, o presente estudo não sugeriu que os nichos ecológicos influenciam a capacidade do NAS de inibir os principais patógenos causadores da mastite bovina. Com base nesses resultados, concluiu-se que certos isolados de NAS apresentam potencial efeito protetor contra os principais patógenos da mastite, pelo menos in vitro.(AU)

Produção de biofilme por Staphylococcus chromogenes isolados de amostras de leite provenientes de rebanhos bovinos com mastite / Biofilme production by Staphylococcus chromogenes isolated from milk samples from bovine with mastitis

Foram estudadas 135 vacas mestiças, provenientes de 10 rebanhos leiteiros no estado do Acre. O objetivo foi identificar espécies de Staphylococcus isoladas dos quartos mamários de vacas com mastite e, posteriormente, avaliar a capacidade de produção de biofilme pela espécie Staphylococcus chromogenes. A caracterização dos isolados presentes nas amostras encontradas, correspondentes a Staphylococcus sp., foi realizada utilizando-se a técnica do MALDI TOF MS (Matrix Associated Laser Desorption-Ionization - Time of Flight - Mass Spectrometry). Foram identificados: S. chromogenes (36), Staphylococcus saprophyticus (5), S. chromogenes ou Staphylococcus hycus (5), Staphylococcus haemolyticus (4), Staphylococcus epidermidis (3), Staphylococcus hycus (3), Staphylococcus aureus (1), Staphylococcus auriculares (1), Staphylococcus kloosii (1) e Staphylococcus xylosus (1). A espécie S. chromogenes correspondeu a 60% dos isolados do gênero (17 isolados coagularam o plasma de coelho no teste da coagulase em tubo), sendo 83,3% dos isolados (30/36) produtores de biofilme, não estando esse fator de virulência associado ao fenótipo de coagulação do plasma. A identificação desses microrganismos é importante para a elucidação da etiologia da mastite bovina. O alto percentual de S. chromogenes, produtores de biofilme, isolados de vacas com mastite é um achado relevante e pode revelar uma mudança de perfil na colonização de agentes etiológicos causadores dessa enfermidade.(AU)

A total of 135 crossbred cows was studied, from ten dairy herds on the state of Acre. The purpose was to identify species of Staphylococcus isolated from the mammary quarters of cows with mastitis. Additionally, the capacity of biofilm production by the species Staphylococcus chromogenes was evaluated. The sample characterization of the isolates was performed using the MALDI TOF MS (Matrix Associated Laser Desorption-Ionization - Time of Flight - Mass Spectrometry). The following species were identified by MALDI TOFF MS: S. chromogenes (36), Staphylococcus saprophyticus (5), S. chromogenes or Staphylococcus hycus (5), Staphylococcus haemolyticus (4), Staphylococcus epidermidis (3), Staphylococcus hycus (3), Staphylococcus aureus (1), Staphylococcus auriculares (1), Staphylococcus kloosii (1) and Staphylococcus xylosus (1). S. chromogenes corresponded to 60% of the Staphylococcus isolates (17 isolates positive on tube coagulase test). From those, 83.33% (30/36) of them were biofilm producers. This virulence factor had no association with the plasma coagulation phenotype. The identification of these microorganisms is important for the elucidation of the bovine mastitis etiology. The high percentage of S. chromogenes, biofilm producers, isolated from cows with mastitis is an important finding. This may reveal a profile change on the colonization of etiologic agents that cause this disease.(AU)

Produção de biofilme por Staphylococcus chromogenes isolados de amostras de leite provenientes de rebanhos bovinos com mastite / Biofilme production by Staphylococcus chromogenes isolated from milk samples from bovine with mastitis

Foram estudadas 135 vacas mestiças, provenientes de 10 rebanhos leiteiros no estado do Acre. O objetivo foi identificar espécies de Staphylococcus isoladas dos quartos mamários de vacas com mastite e, posteriormente, avaliar a capacidade de produção de biofilme pela espécie Staphylococcus chromogenes. A caracterização dos isolados presentes nas amostras encontradas, correspondentes a Staphylococcus sp., foi realizada utilizando-se a técnica do MALDI TOF MS (Matrix Associated Laser Desorption-Ionization - Time of Flight - Mass Spectrometry). Foram identificados: S. chromogenes (36), Staphylococcus saprophyticus (5), S. chromogenes ou Staphylococcus hycus (5), Staphylococcus haemolyticus (4), Staphylococcus epidermidis (3), Staphylococcus hycus (3), Staphylococcus aureus (1), Staphylococcus auriculares (1), Staphylococcus kloosii (1) e Staphylococcus xylosus (1). A espécie S. chromogenes correspondeu a 60% dos isolados do gênero (17 isolados coagularam o plasma de coelho no teste da coagulase em tubo), sendo 83,3% dos isolados (30/36) produtores de biofilme, não estando esse fator de virulência associado ao fenótipo de coagulação do plasma. A identificação desses microrganismos é importante para a elucidação da etiologia da mastite bovina. O alto percentual de S. chromogenes, produtores de biofilme, isolados de vacas com mastite é um achado relevante e pode revelar uma mudança de perfil na colonização de agentes etiológicos causadores dessa enfermidade.(AU)

A total of 135 crossbred cows was studied, from ten dairy herds on the state of Acre. The purpose was to identify species of Staphylococcus isolated from the mammary quarters of cows with mastitis. Additionally, the capacity of biofilm production by the species Staphylococcus chromogenes was evaluated. The sample characterization of the isolates was performed using the MALDI TOF MS (Matrix Associated Laser Desorption-Ionization - Time of Flight - Mass Spectrometry). The following species were identified by MALDI TOFF MS: S. chromogenes (36), Staphylococcus saprophyticus (5), S. chromogenes or Staphylococcus hycus (5), Staphylococcus haemolyticus (4), Staphylococcus epidermidis (3), Staphylococcus hycus (3), Staphylococcus aureus (1), Staphylococcus auriculares (1), Staphylococcus kloosii (1) and Staphylococcus xylosus (1). S. chromogenes corresponded to 60% of the Staphylococcus isolates (17 isolates positive on tube coagulase test). From those, 83.33% (30/36) of them were biofilm producers. This virulence factor had no association with the plasma coagulation phenotype. The identification of these microorganisms is important for the elucidation of the bovine mastitis etiology. The high percentage of S. chromogenes, biofilm producers, isolated from cows with mastitis is an important finding. This may reveal a profile change on the colonization of etiologic agents that cause this disease.(AU)

Comparison phenotypic and genotypic identification of Staphylococcus species isolated from bovine mastitis / Comparação da identificação fenotípica e genotípica de espécies do gênero Staphylococcus isoladas de mastite bovina

In addition to Staphylococcus aureus nowadays other coagulase-positive staphylococci (CoPS) and coagulase-negative staphylococci (CoNS), earlier considered of minor importance, are now accepted as relevant pathogens for humans and animals. The involvement of these microorganisms in bovine mastitis etiology and the possibility their transmission through milk to humans justify the requirement of developing reliable methods for identification of the most frequent species among them. The purpose of this study was to compare the phenotypic techniques with the genotypic method carried out by sequencing of the rpoB gene in identification of several species of the genus Staphylococcus isolated from bovine mastitis. A total of 300 staphylococci isolates of bovine mastitis cases from several Brazilian dairy herds were studied by phenotypic and genotypic techniques, respectively: 150 CoPS and 150 CoNS strains. A total of 18 CoNS different species and 4 CoPS species were identified. Among the CoNS the following species were recognized: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2.7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auricularis, 1(70%) S. saprophyticus subsp. bovis, 1(0.7%) S. capitis. And among the 150 CoPS were identified respectively: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%) S. intermedius e 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considering the 150 CoNS isolates, the identifications performed by phenotypic and genotypic tests presented 96.7% of concordance, kappa coefficient of agreement = 0.933, SE (standard error) of kappa=0.021 (95% confidence interval: 0.893 to 0.974), Pearson's correlation coefficient (r) = 0.9977, (confidence interval 95%: 0.9938 a 0.9992) and in relation to 150 CPS isolates it was detected an agreement of 98.7%, kappa = 0.960, SE of kappa = 0.016, (95% confidence interval: 0.929 to 0.992) Pearson's correlation coefficient (r) = 0.9994 (95% confidence interval: 0.9681 to 1.0000). The verified agreement strength between the identification methods can be considered as excellent. These results assure that according to laboratory resources any of them will be suitable to perform the staphylococci identification.(AU)

Além de Staphylococcus aureus atualmente outros estafilococos coagulase positiva (SCP) e estafilococos coagulase-negativos (SCN), anteriormente considerados de menor relevância, são reconhecidos como importantes patógenos para humanos e animais. O envolvimento desses micro-organismos na etiologia da mastite bovina e a possibilidade da sua transmissão através do leite aos humanos justifica a utilização de métodos confiáveis para a identificação das espécies mais frequentes. O objetivo deste estudo foi comparar as técnicas fenotípicas com o método genotípico realizada por sequenciamento do gene rpoB na identificação de espécies do gênero Staphylococcus spp. isolados de mastite bovina. Um total de 300 estafilococos isolados de casos de mastite bovina em diferentes rebanhos leiteiros brasileiros foram estudados por técnicas fenotípicas e genotípicas, respectivamente: 150 linhagens de SCP e 150 linhagens de SCN. Foram identificados um total de 18 espécies de SCN e 4 espécies SCP. Entre os SCN as seguintes espécies identificadas: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22 (15%) S. epidermidis, 20 (13%) S. hyicus, 10 (7%) S. xylosus, 7 (5%) S. haemolyticus, 6 (4%) S. simulans, 6 (4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6 (4%) S. hominis, 5 (3%) S. pasteuri, 4 (2,7%) S. cohnii, 3 (2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3 (2%) S. chromogenes, 3 (2%) S. sciuri, 2 (1%) S. saccharolyticus, 2 (1%) S. lugdunensi, 1 (0,7%) S. auricularis, 1 (70 %) S. saprophyticus subsp. bovis, 1 (0,7%) S. capitis. E entre as 150 SCP foram identificados, 105 (70%) S. aureus, 21 (14%), S. hyicus, 19 (13%) S. intermedius e 5 (3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considerando-se os 150 SCN isolados, as identificações realizadas por testes fenotípicos e genotípicos apresentaram 96,7% de concordância, coeficiente de concordância kappa = 0,933, SE (erro padrão) de kappa = 0,021 (95% intervalo de confiança: 0,893-0,974), coeficiente de correlação de Pearson (r) = 0,9977, (intervalo de confiança de 95%: 0,9938 a 0,9992) e em relação a 150 SCP isolados foi observado uma concordância de 98,7%, kappa = 0,960, sE de kappa = 0,016, (95% de intervalo de confiança: 0,929 a 0,992) coeficiente de correlação de Pearson (r) = 0,9994 (95% intervalo de confiança: 0,9681-1,0000). A correlação entre os métodos de identificação pode ser considerada como excelente. Esses resultados demonstraram que de acordo com os recursos disponíveis no laboratório, poderia ser utilizada qualquer uma das metodologias.(AU)

Comparison phenotypic and genotypic identification of Staphylococcus species isolated from bovine mastitis / Comparação da identificação fenotípica e genotípica de espécies do gênero Staphylococcus isoladas de mastite bovina

In addition to Staphylococcus aureus nowadays other coagulase-positive staphylococci (CoPS) and coagulase-negative staphylococci (CoNS), earlier considered of minor importance, are now accepted as relevant pathogens for humans and animals. The involvement of these microorganisms in bovine mastitis etiology and the possibility their transmission through milk to humans justify the requirement of developing reliable methods for identification of the most frequent species among them. The purpose of this study was to compare the phenotypic techniques with the genotypic method carried out by sequencing of the rpoB gene in identification of several species of the genus Staphylococcus isolated from bovine mastitis. A total of 300 staphylococci isolates of bovine mastitis cases from several Brazilian dairy herds were studied by phenotypic and genotypic techniques, respectively: 150 CoPS and 150 CoNS strains. A total of 18 CoNS different species and 4 CoPS species were identified. Among the CoNS the following species were recognized: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2.7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auricularis, 1(70%) S. saprophyticus subsp. bovis, 1(0.7%) S. capitis. And among the 150 CoPS were identified respectively: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%) S. intermedius e 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considering the 150 CoNS isolates, the identifications performed by phenotypic and genotypic tests presented 96.7% of concordance, kappa coefficient of agreement = 0.933, SE (standard error) of kappa=0.021 (95% confidence interval: 0.893 to 0.974), Pearsons correlation coefficient (r) = 0.9977, (confidence interval 95%: 0.9938 a 0.9992) and [...](AU)

Além de Staphylococcus aureus atualmente outros estafilococos coagulase positiva (SCP) e estafilococos coagulase-negativos (SCN), anteriormente considerados de menor relevância, são reconhecidos como importantes patógenos para humanos e animais. O envolvimento desses micro-organismos na etiologia da mastite bovina e a possibilidade da sua transmissão através do leite aos humanos justifica a utilização de métodos confiáveis para a identificação das espécies mais frequentes. O objetivo deste estudo foi comparar as técnicas fenotípicas com o método genotípico realizada por sequenciamento do gene rpoB na identificação de espécies do gênero Staphylococcus spp. isolados de mastite bovina. Um total de 300 estafilococos isolados de casos de mastite bovina em diferentes rebanhos leiteiros brasileiros foram estudados por técnicas fenotípicas e genotípicas, respectivamente: 150 linhagens de SCP e 150 linhagens de SCN. Foram identificados um total de 18 espécies de SCN e 4 espécies SCP. Entre os SCN as seguintes espécies identificadas: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22 (15%) S. epidermidis, 20 (13%) S. hyicus, 10 (7%) S. xylosus, 7 (5%) S. haemolyticus, 6 (4%) S. simulans, 6 (4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6 (4%) S. hominis, 5 (3%) S. pasteuri, 4 (2,7%) S. cohnii, 3 (2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3 (2%) S. chromogenes, 3 (2%) S. sciuri, 2 (1%) S. saccharolyticus, 2 (1%) S. lugdunensi, 1 (0,7%) S. auricularis, 1 (70 %) S. saprophyticus subsp. bovis, 1 (0,7%) S. capitis. E entre as 150 SCP foram identificados, 105 (70%) S. aureus, 21 (14%), S. hyicus, 19 (13%) S. intermedius e 5 (3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considerando-se os 150 SCN isolados, as identificações realizadas por testes fenotípicos e genotípicos apresentaram 96,7% de concordância, coeficiente de concordância kappa = 0,933, SE (erro padrão) de [...](AU)

Characterization of mannitol-fermenting methicillin-resistant staphylococci isolated from pigs in Nigeria

This study was conducted to determine the species distribution, antimicrobial resistance pheno- and genotypes and virulence traits of mannitol-positive methicillin-resistant staphylococci (MRS) isolated from pigs in Nsukka agricultural zone, Nigeria. Twenty mannitol-positive methicillin-resistant coagulase-negative staphylococcal (MRCoNS) strains harboring the mecA gene were detected among the 64 Staphylococcus isolates from 291 pigs. A total of 4 species were identified among the MRCoNS isolates, namely, Staphylococcus sciuri (10 strains), Staphylococcus lentus (6 strains), Staphylococcus cohnii (3 strains) and Staphylococcus haemolyticus (one strain). All MRCoNS isolates were multidrug-resistant. In addition to β-lactams, the strains were resistant to fusidic acid (85%), tetracycline (75%), streptomycin (65%), ciprofloxacin (65%), and trimethoprim/sulphamethoxazole (60%). In addition to the mecA and blaZ genes, other antimicrobial resistance genes detected were tet(K), tet(M), tet(L), erm(B), erm(C), aacA-aphD, aphA3, str, dfrK, dfrG, cat_pC221, and cat_pC223. Thirteen isolates were found to be ciprofloxacin-resistant, and all harbored a Ser84Leu mutation within the QRDR of the GyrA protein, with 3 isolates showing 2 extra substitutions, Ser98Ile and Arg100Lys (one strain) and Glu88Asp and Asp96Thr (2 strains). A phylogenetic tree of the QRDR nucleotide sequences in the gyrA gene revealed a high nucleotide diversity, with several major clusters not associated with the bacterial species. Our study highlights the possibility of transfer of mecA ...(AU)

Dinâmica da infecção e caracterização molecular das mastites causadas por Staphylococcus spp. em ovelhas da raça Santa Inês

O presente trabalho traçou o perfil epidemiológico das infecções intramamárias (IIM) causadas por estafilococos em ovelhas Santa Inês através de ferramentas de biologia molecular contemplando os seguintes aspectos: 1) investigar a incidência de infecção intramamária (IIM) em ovelhas de corte no período pós-parto e a persistência da infecção durante a lactação, e seu efeito no crescimento de cordeiros. Neste estudo, 38 ovelhas e 44 cordeiros foram acompanhados do parto até o desmame aos 90 dias. Os cordeiros foram pesados ao nascimento e a cada 15 dias, e o exame microbiológico e identificação de Mycoplasma agalactiae pela reação da cadeia da polimerase (PCR) das amostras de leite das ovelhas foram realizados nos respectivos momentos. Observou-se que 14 (36,8%; 5 por Mycoplasma agalactiae; 5 por Staphylococcus sciuri, 2 por Staphylococcus aureus e 2 por Staphylococcus simulans) e 20 (31,6%) ovelhas apresentam IIM persistente e transiente, respectivamente. Portanto, 63,26% das IIM, todas por estafilococos não aureus, não persistiram durante a lactação, sugerindo perfil oportunistas de algumas espécies. A taxa de sobrevivência de cordeiros de ovelhas com IIM persistente (33,3%) foi bem menor que dos animais sadios (100%) ou com IIM transiente (91,7%). Além disto, houve diferença no ganho de peso para cordeiros de ovelhas persistentemente infectadas os 90 dias em relação aos demais grupos. Apesar do impacto negativo da mastite nas ovelhas Santa Inês sobre o desempenho e a morte de cordeiros, o agente etiológico e seu potencial para causar IIM persistente devem ser considerados. 2) relatar um caso esporádico de mastite gangrenosa causada por Staphylococcus haemolyticus multirresistente em ovelha Santa Inês. O exame microbiológico, o perfil de resistência a antimicrobianos e presença de fatores de virulência foram investigados. Os isolados de Staphylococcus haemolyticus apresentaram multirresistência a antimicrobianos, e foram positivos para dois genes enterotoxigênicos estafilocócicos e proteína B de ligação à fibronectina (fnbA). 3) investigar se os estafilococos isolados de mastite clínica e subclínica, do ápice das ovelhas e tonsilas de cordeiros são geneticamente distintos, e possuem genes relacionados à produção de enterotoxinas e resistência a meticilina e penicilina. Foram utilizados 78 isolados de estafilococos proveniente de ovelhas Santa Inês (Estudo 1). Os isolados de estafilococos foram identificados por MALDI-TOF MS, e a PCR foi realizada para identificação dos genes de virulência e resistência a antimicrobianos. Além disso, os isolados foram genotipados através de amplificação aleatória de DNA polimórfico - RAPD. Observou-se que S. aureus isolados de amostras de leite diferem daqueles isolados de nichos extramamários, diferentemente das espécies de estafilococos não-aureus. S. aureus hospedou a maioria dos genes de virulência e resistência. Detectou-se um isolado de S. aureus e um Staphylococcus sciuri isolados do ápice do teto resistente a meticilina. Portanto, o presente estudo forneceu informações mais detalhadas da epidemiologia dos estafilococos associados à ovelha. 4) relatar a presença de Staphylococcus sciuri portadores do gene de resistência a meticilina mecC, sendo, portanto, o primeiro relato no Brasil. A resistência a cefoxitina e oxacilina foram determinadas pela concentração inibitória mínima, e os genes de resistência foram confirmados por PCR, e sequenciamento dos produtos da PCR.

The present work traced the epidemiological profile of intramammary infections (IMI) caused by staphylococci in Santa Inês sheep using molecular biology tools covering the following aspects: 1) to investigate the incidence of intramammary infection (IMI) in meat ewes in the post-partum and the persistence of infection during lactation, and its effect on lamb growth. In this study, 38 ewes and 44 lambs were followed from birth until weaning at 90 days. The lambs were weighed at birth and every 15 days, and the microbiological examination and identification of Mycoplasma agalactiae by polymerase chain reaction (PCR) of the sheep's milk samples were performed at respective times. It was observed that 14 (36.8%; 5 by Mycoplasma agalactiae; 5 by Staphylococcus sciuri, 2 by Staphylococcus aureus and 2 by Staphylococcus simulans) and 20 (31.6%) sheep present persistent and transient IIM, respectively. Therefore, 63.26% of IMIs, all due to non-aureus staphylococci, did not persist during lactation, suggesting opportunistic profiles of some species. The survival rate of lambs from sheep with persistent IMI (33.3%) was much lower than healthy animals (100%) or with transient IMI (91.7%). In addition, there was a difference in weight gain for lambs from sheep persistently infected at 90 days in relation to the other groups. Despite the negative impact of mastitis on Santa Inês sheep on lamb performance and death, the etiologic agent and its potential to cause persistent IMI should be considered. 2) to report a sporadic case of gangrenous mastitis caused by multi-resistant Staphylococcus haemolyticus in Santa Inês sheep. The microbiological examination, the antimicrobial resistance profile and the presence of virulence factors were investigated. Staphylococcus haemolyticus isolates showed multidrug resistance to antimicrobials and were positive for two staphylococcal enterotoxygenic genes and fibronectin-binding protein (fnbA). 3) investigate whether the staphylococci isolated from clinical and subclinical mastitis, from apex of sheep and lambs' tonsils are genetically distinct, and have genes related to the production of enterotoxins and resistance to methicillin and penicillin. 78 staphylococcus isolates from Santa Inês sheep were used (Study 1). Staphylococcus isolates were identified by MALDI-TOF MS, and PCR was performed to identify the virulence and antimicrobial resistance genes. In addition, the isolates were genotyped by random amplification of polymorphic DNA (RAPD). It was observed that S. aureus isolated from milk samples differ from those isolated from extra-mammary niches, differently from non-aureus staphylococcus species. S. aureus hosted most virulence and resistance genes. An isolate of S. aureus and other of Staphylococcus sciuri shown methicillin-resistance. Therefore, the present study provided more detailed information on the epidemiology of staphylococci associated with sheep. 4) to report the presence of Staphylococcus sciuri carrying the methicillin resistance gene mecC, being, therefore, the first report in Brazil. Resistance to cefoxitin and oxacillin was determined by the minimum inhibitory concentration, and the resistance genes were confirmed by PCR, and sequencing of PCR products.

Avaliação da resposta imune celular de ovelhas ao desafio por Staphylococcus spp.

Objetivou-se neste estudo desafiar leucócitos polimorfonucleares (PMNL) sanguíneos de ovelhas com espécies de Staphylococcus (S. aureus,S. haemolyticus,S. chromogenes,S. simulans,S. xylosus,S. sciuri eS. devriesi)isolados de diferentes nichos ecológicos de ovelhas. Para isso, foi coletado sangue de 14 ovelhas da Raça Santa Inês (7 primíparas e 7 multíparas) e 14 ovelhas da raça Lacaune (7 primíparas e 7 multíparas). Avaliamos a viabilidade, a produção intracelular de espécie reativa de oxigênio (ERO) dos PMNL, e a capacidade de resistir à fagocitose opsonizada e não opsonizada dos diferentes isolados deStaphylococcusspp. por citometria de fluxo. Inicialmente observamos as possíveis diferenças na viabilidade, nas respostas fagocíticas e na produção intracelular de espécies reativas de oxigênio por PMNL sanguíneos de ovelhas Santa Inês e Lacaune, primíparas e multíparas, desafiados com um isolado de Staphylococcus aureus. Posteriormente, avaliamos o comportamento de escape das defesas imunes dos isolados de estafilococos aureus e não aureus, considerando a fagocitose e a inibição da produção de ERO por PMNL do sangue de ovelhas da raça Santa Inês. Observamos maior intensidade de fagocitose de S. aureus por PMNL de ovelhas multíparas e nenhum efeito da paridade sobre a funcionalidade dos PMNL sanguíneos foi encontrado. O comportamento de fagocitose foi diferente entre as raças Santa Inês e Lacaune e a opsonização de S. aureus mediada por anticorpos foi associada a uma menor intensidade de fagocitose por ovelhas primíparas. Os PMNL de ovelhas Lacaune levaram a maior média geométrica de intensidade da fluorescência (GMFI) da produção de ERO intracelular quando estimulados com S. aureus, sugerindo que uma maior atividade microbicida e/ou inflamação poderia ser desencadeada nessas ovelhas. Nossos resultados mostram que ovelhas multíparas fagocitaram mais que as primíparas e que fagocitaram mais Staphylococcus não aureus (SNA) do que S. aureus. Entre os isolados de SNA, Staphylococcus chromogenes foi o que apresentou maior média geométrica da intensidade de fluorescência (GMFI) de fagocitose. Todas as espécies, exceto S. devriesi apresentaram maior porcentagem de fagocitose opsonizada do que não opsonizada. Pela primeira vez, demonstramos que ovelhas multíparas fagocitaram mais que ovelhas prímiparas, além de observarmos maior intensidade de fagocitose de S. chromogenes por PMNLs de ovelhas. Dessa forma, nosso estudo fornece novos insights sobre a funcionalidade dos PMNLs em ovelhas primíparas e multíparas, o que poderia afetar sua saúde, junto a outras possíveis variáveis como manejo e condições sanitárias do rebanho.

The aim of this study was to challenge blood polymorphonuclear leukocytes (PMNL) from sheep with Staphylococcus species (S. aureus, S. haemolyticus, S. chromogenes, S. simulans, S. xylosus, S. sciuri eS. Devriesi) isolated from different ecological niches of sheep. For this, blood was collected from 14 Santa Inês sheep (7 primiparous and 7 multiparous) and 14 Lacaune sheep (7 primiparous and 7 multiparous). We evaluated the viability, the intracellular production of reactive oxygen species (ROS) of PMNL, and the ability to resist opsonized and nonopsonized phagocytosis of the different Staphylococcusspp isolates. by flow cytometry. Initially, we observed the possible differences in viability, phagocytic responses and intracellular production of reactive oxygen species by blood PMNL from Santa Inês and Lacaune sheep, primiparous and multiparous, challenged with a Staphylococcus aureus isolate. Subsequently, we evaluated the escape behavior of the immune defenses of aureus and non-aureus staphylococcus isolates, considering phagocytosis and the inhibition of ROS production by PMNL from the blood of Santa Inês sheep.We observed a higher intensity of phagocytosis of S. aureus by PMNL from multiparous ewes and no effect of parity on the functionality of blood PMNL was found. The phagocytosis behavior was different between the Santa Inês and Lacaune breeds and the antibody mediated S. aureus opsonization was associated with a lower intensity of phagocytosis by primiparous sheep. The PMNL of Lacaune ewes led to the highest geometric mean fluorescence intensity (GMFI) of intracellular ROS production when stimulated with S. aureus, suggesting that greater microbicidal activity and / or inflammation could be triggered in these ewes. Our results show that multiparous sheep phagocytized more than primiparous ewes and that phagocytized more non-aureus Staphylococcus (ANS) than S. aureus. Among SNA isolates, Staphylococcus chromogenes was the one with the highest geometric mean fluorescence intensity (GMFI) of phagocytosis. All species, except S. devriesi, presented a higher percentage of opsonized phagocytosis than non-opsonized. For the first time, we demonstrated that multiparous ewes phagocytosed more than primiparous ewes, in addition to observing a higher intensity of phagocytosis of S. chromogenes by sheep PMNLs. Thus, our study provides new insights into the functionality of PMNLs in primiparous and multiparous ewes, which could affect their health, along with other possible variables such as herd management and health conditions.

Investigação anatomopatológica e microbiológica de fascites necrotizantes letais em cães: há implicações em saúde pública

Fascite necrotizante (FN) é um processo infeccioso raro de pele e tecidos moles, que afeta fáscias do ser humano e de animais e pode apresentar desfecho fatal. Geralmente, as bactérias envolvidas podem apresentar implicações em saúde pública, como estafilococos meticilina resistente (MARS). O objetivo deste estudo foi caracterizar o perfil epidemiológico, clínico, laboratorial e anatomopatológico de FN letal em cães, investigar as bactérias envolvidas e verificar suas implicações em saúde pública. O estudo foi baseado na análise de 13 cães, de qualquer raça, idade, sexo e porte selecionados entre 2015 e 2019. Os dados epidemiológicos, clínicos e laboratoriais foram analisados a partir dos prontuários. As lesões macro e microscópicas foram utilizadas para definir a causa e condição de morte, bem como para caracterizar as lesões cutâneas, de tecidos moles e dos órgãos. Os fragmentos de pele, tecidos moles e órgãos foram processados para isolamento, identificação bacteriana e realização de antibiograma por disco difusão. Fêmea, adulta, 7 ± 4 anos, de raça definida, porte grande e em condição corpórea adequada foi o perfil dos cães. A manifestação clínica apresentou início agudo de dor associada à prostração, taquipneia, taquicardia, febre e necrose cutânea, que evoluiu em 5,85 ± 3,74 dias para choque séptico (4/13) ou eutanásia devido ao mau prognóstico (9/13). Leucocitose por neutrofilia, monocitose, trombocitopenia e redução do fibrinogênio foram as principais alterações hematológicas e de coagulação, que somadas a alterações de baixo bicarbonato plasmático, elevação da ureia, creatinina, enzimas hepáticas, bilirrubinas e hipoglicemia caracterizaram sepse com comprometimento sistêmico da função renal e hepática. As lesões macroscópicas tegumentares, subcutâneas, de fáscias e musculatura foram caracterizadas por áreas ulceradas, edema; máculas purpúricas, petéquias, equimoses, sufusões, necrose e exsudação serossanguinolenta de distribuição dorso ventral e maior acometimento dos membros torácicos, região torácica, membros pélvicos e cabeça. Microscopicamente, as lesões de pele e tecidos moles foram necrose profunda difusa associada a processo inflamatório neutrofílico, edema, hemorragia, trombose e presença de êmbolos ou colônias bacterianas intralesionais. Lesão necrótica e/ou hemorrágica pulmonar, hepática, renal, esplênica, no linfonodo, trato gastrointestinal e em glândulas endócrinas caracterizaram o processo sistêmico infeccioso. Os principais agentes bacterianos envolvidos nas lesões de pele e tecidos moles foram principalmente estafilococos, dos quais três foram classificados como MARS e seis cepas, incluindo Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus haemolyticus, Streptococcus canis, Acinetobacter radioresistens e Escherichia coli foram classificadas como bactérias multirresistentes. A participação desses agentes nas infecções cutâneas e de tecidos moles de cães chama atenção para a necessidade de identificação precisa destes e realização de antibiogramas de forma a estabelecer condutas terapêuticas eficazes e definir condutas de prevenção ambiental e dos possíveis contactantes. Assim, as FN em cães são exemplos de doenças que requerem envolvimento multidisciplinar na condução clínico-cirúrgica de emergência, internação do paciente de maneira a propiciar agilidade no diagnóstico inicial, pronto tratamento cirúrgico e terapia antimicrobiana sistêmica específica com o intuito de evitar o óbito por choque séptico. Destaca-se que esse foi o primeiro estudo a caracterizar o perfil epidemiológico, clínico, laboratorial, microbiológico e anatomopatológico de FN letal em cães.

Necrotizing fasciitis (NF) is a rare infectious process of the skin and soft tissues, which affects humans and animal fasciae and can present a fatal outcome. Generally, the bacteria involved can have public health implications, such as methicillin-resistant staphylococci (MARS). The aim of this study was to characterize the epidemiological, clinical, laboratory and anatomopathological profile of lethal FN in dogs, to investigate the bacteria involved and to verify its implications for public health. The study was based on the analysis of 13 dogs, of any breed, age, sex and size selected between 2015 and 2019. Epidemiological, clinical and laboratory data were analyzed from medical records. Macro and microscopic lesions were used to define the cause and condition of death, as well as to characterize skin, soft tissue and organ lesions. The fragments of skin, soft tissues and organs were processed for isolation, bacterial identification, and antibiogram by diffusion disk. Female, adult, 7 ± 4 years old, of the defined breed, large size and in adequate body condition was the profile of the dogs. The clinical manifestation showed acute onset of pain associated with prostration, tachypnea, tachycardia, fever and skin necrosis, which evolved in 5.85 ± 3.74 days for septic shock (4/13) or euthanasia due to poor prognosis (9/13). Neutrophilia leukocytosis, monocytosis, thrombocytopenia and fibrinogen reduction were the main hematological and coagulation changes, which, together with changes in low plasma bicarbonate, elevated urea, creatinine, liver enzymes, bilirubins, and hypoglycemia characterized sepsis with systemic impairment of renal function and hepatic. Macroscopic cutaneous, subcutaneous, fascia and musculature injuries were characterized by ulcerated areas, edema; purple macules, petechiae, ecchymoses, suffusions, necrosis and serosanguinous exudation of ventral dorsal distribution and greater involvement of the thoracic limbs, thoracic region, pelvic limbs, and head. Microscopically, skin and soft tissue lesions were diffuse deep necrosis associated with the neutrophilic inflammatory process, edema, hemorrhage, thrombosis, and presence of emboli or intralesional bacterial colonies. Pulmonary, hepatic, renal, splenic necrotic and/or hemorrhagic lesions in the lymph node, gastrointestinal tract and endocrine glands characterized the infectious systemic process. The main bacterial agents involved in skin and soft tissue injuries were mainly staphylococci, of which three were classified as MARS and six strains, including Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus haemolyticus, Streptococcus canis, Acinetobacter radioresistens e Escherichia coli. The participation of these agents in skin and soft tissue infections in dogs draws attention to the need for accurate identification of these and antibiograms in order to establish effective therapeutic approaches and define behaviors for environmental prevention and possible contacts. Thus, FN in dogs are examples of diseases that require multidisciplinary involvement in emergency clinicalsurgical management, hospitalization of the patient in order to provide agility in the initial diagnosis, prompt surgical treatment, and specific systemic antimicrobial therapy in order to prevent death by septic shock. It is noteworthy that this was the first study to characterize the epidemiological, clinical, laboratory, microbiological and anatomopathological profile of lethal FN in dogs.

OCORRÊNCIA DE ESTIRPES MULTIRRESISTENTES DE STAPHYLOCOCCUS SP. ASSOCIADAS A PREVALÊNCIA DE MASTITE SUBCLINICA BOVINA EM PROPRIEDADES DO ACRE

A mastite subclínica em bovinos é a inflamação da glândula mamária, de caráter infeccioso ou não, que acarreta principalmente a redução na produção de leite. Bactérias do gênero Staphylococcus sp. multirresistentes têm sido frequentemente associadas com a doença. O objetivo do presente estudo foi identificar as espécies de Staphylococcus sp. e a existência do perfil de multirresistência entre as estripes encontradas em propriedades situadas em 5 municípios na região do baixo Acre associadas a mastite subclínica, e identificar possíveis fatores de risco que possam contribuir para o seu aparecimento. Foram selecionadas 23 propriedades por conveniência em uma amostragem não probabilística. Um total de 339 vacas mestiças foram testadas pelo CMT. Foram identificadas a presença de mastite subclínica em 108 animais, totalizando 229 tetos afetados. As amostras de leite foram semeadas em ágar sangue a 37 ° C, 24-48 horas para isolamento bacteriano. Os isolados sugestivos de Staphylococcus sp. foram submetidos à técnica de MALDI TOF (Dessorção- Ionização por Laser Associada à Matriz - Tempo de Voo - Espectrometria de Massa). Um total de 101 estirpes foram identificadas como pertencentes ao gênero Staphylococcus sp., distribuídas em oito espécies: S. chromogenes (58,4%), S. aureus (19,8%), S. hyicus (7,9%), S. saprophyticus (4,9%); S. haemolyticus (4%), S. epidermidis (3%); S. xylosus (1%) e S. kloosii (1%). O teste de suscetibilidade antimicrobiana foi realizado de acordo com o CLSI (Comitê Nacional para Padrões Clínicos e Laboratoriais) para as classes: beta-lactâmico, aminoglicosídeo, quinolona, lincosamida, macrolídeo, tetraciclina, rifamicina, cloranfenicol e oxazolidinona. Do total de isolados, 19 (18,8%) apresentaram perfil de multirresistência por apresentarem resistência a mais de três classes de antibióticos. Todas as amostras foram sensíveis a gentamicina (100%). Penicilina G foi o antibiótico com menor ação sobre as estirpes testadas (47,5%). Um questionário epidemiológico foi aplicado e constatou-se que fatores ligados a limpeza foram os que mais contribuíram para ordenar as propriedades. Diagnosticar e quantificar os agentes e fatores que levam a ocorrência de mastite permite a implantação e execução de medidas preventivas de modo mais efetivo. Adicionalmente é importante considerar o potencial de transmissão de genes de resistência entre patógenos, visto que o aparecimento de estirpes multirresistente representam um risco a saúde pública e veterinária.

Bovine subclinical mastitis is an inflammation of the mammary glands, caused or not by infections, which results mainly in a reduction on the milk production. Multiresistant bacteria which belong to the genus Staphylococcus sp. have been frequently associated to this disease. The objective of the present study was to identify the species of Staphylococcus sp. and the existence of the profile of multirresistance among the strains found in properties located on the countrified region of Acre associated to subclinical mastitis, and identify possible risk factors which can contribute to its forthcoming. 23 properties were selected by convenience in a non-probabilistic sampling. A total of 339 cows with mixed brands were tested by CMT. The presence of subclinical mastitis was identified in 108 animals, totalizing 229 affected teats. The milk samples were seeded in blood agar at 37 °C, 24-48 hours for bacteria isolation. Those which were suggestive of Staphylococcus sp. were submitted to the technique of MALDI TOF (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization - Time of Flight Mass Spectrometry). A total of 101 strains were identified as belonging to the genus Staphylococcus sp., separated in eight species: S. chromogenes (58,4%), S. aureus (19,8%), S. hyicus (7,9%), S. saprophyticus (4,9%); S. haemolyticus (4%), S. epidermidis (3%); S. xylosus (1%) and S. kloosii (1%). The antimicrobial susceptibility test was accomplished according with the CLSI (Clinical & Laboratory Standards Institute) to the classes: beta-lactam, aminoglycoside, quinolone, lincosamide, macrolide, tetracycline, rifamycin, chloramphenicol and oxazolidinone. Among the isolated strains, 19 (18,88%) presented profile of multirresistance by presenting resistance to more than three classes of antibiotics. All the samples were sensible to gentamicin (100%). Penicillin G was the antibiotic with the least effective action against the tested strains (47,5%). An epidemiologic quiz was applied and it was found that factors connected to the cleanup were the ones to contribute the most to order the properties. Diagnosing and quantifying the agents and factors which lead to the occurrence of mastitis allow the implantation and execution of prophylactic measures in a more effective way. Additionally, it is important to consider the potential of transmission of the genes of resistance among the pathogens, since the appearance of multirresistant strains represents a risk to both public health and veterinary health.

Methicillin-resistant coagulase-negative staphylococci from healthy dogs in Nsukka, Nigeria

The occurrence, resistance phenotype and molecular mechanisms of resistance of methicillin-resistant staphylococci from groin swabs of 109 clinically healthy dogs in Nsukka, Nigeria were investigated. The groin swab samples were cultured on mannitol salt agar supplemented with 10 µgof cloxacillin. Sixteen methicillin-resistant coagulase negative staphylococci (MRCoNS), all harbouring the mecA gene were isolated from 14 (12.8%) of the 109 dogs studied. The MRCoNS isolated were: S. sciuri subspecies rodentium, S. lentus, S. haemolyticus, and S. simulans with S. sciuri subspecies rodentium (62.5%) being the predominant species. Thirteen (81.3%) of the MRCoNS were resistant to tetracycline while 12 (75%) and 10 (62.5%) were resistant to kanamycin and trimthoprim-sulphamethoxazole respectively. None of the isolates was resistant to fusidic acid, linezolid and vancomycin. Thirteen (81.3%) of the MRCoNS were multi-drug resistance (MDR). Other antimicrobial genes detected were: blaZ, tet(K), tet(M), tet(L), erm(B), lnu(A), aacA-aphD, aphA3, str, dfr(G), cat pC221,and cat pC223. Methicillin-resistant staphylococci are common colonizers of healthy dogs in Nigeria with a major species detected being S. sciuri subsp. rodentium.(AU)