Amplified neurobehavioral and hormonal alterations following the combination of prenatal and postnatal stress in first-time rats

In the present work, we sought to determine the effects of an individual application of prenatal stress and postnatal stress and their combination on the anxious and locomotor behavior of first-time mother rats. Indeed, three batches of rats were exposed to three types of daily repeated stress: one batch exposed to prenatal restraint stress (SC): 01h a day from day 11 to day 19 of gestation, one batch exposed to postnatal mother prenatal stress (SS): 03h a day from the third to the fourteenth postnatal day (JPN), and one batch exposed to combined restraint stress: 01h from day 11 to day 19 of gestation followed by a postnatal mother separation of 03h a day from the third to fourteenth JPN (CSS); a fourth control batch (T) of female rats that did not undergo any type of stress was also part of our study. At postnatal days 15 and 20, the behavior of the female rats in the four batches was assessed using the Open field Test along with the Plus Maze, and at JPN 30, the female rats were decapitated, the blood of which was collected for plasma adrenocorticotropic hormone (ACTH) level evaluation. Our findings show that all studied behaviors were very highly affected relative to the results of the control batch after individually applying prenatal restraint stress and mother separation. We noticed an intensified anxious behavior in CSS with a significant increase in plasma levels of ACTH.(AU)

Amplified neurobehavioral and hormonal alterations following the combination of prenatal and postnatal stress in first-time rats

In the present work, we sought to determine the effects of an individual application of prenatal stress and postnatal stress and their combination on the anxious and locomotor behavior of first-time mother rats. Indeed, three batches of rats were exposed to three types of daily repeated stress: one batch exposed to prenatal restraint stress (SC): 01h a day from day 11 to day 19 of gestation, one batch exposed to postnatal mother prenatal stress (SS): 03h a day from the third to the fourteenth postnatal day (JPN), and one batch exposed to combined restraint stress: 01h from day 11 to day 19 of gestation followed by a postnatal mother separation of 03h a day from the third to fourteenth JPN (CSS); a fourth control batch (T) of female rats that did not undergo any type of stress was also part of our study. At postnatal days 15 and 20, the behavior of the female rats in the four batches was assessed using the Open field Test along with the Plus Maze, and at JPN 30, the female rats were decapitated, the blood of which was collected for plasma adrenocorticotropic hormone (ACTH) level evaluation. Our findings show that all studied behaviors were very highly affected relative to the results of the control batch after individually applying prenatal restraint stress and mother separation. We noticed an intensified anxious behavior in CSS with a significant increase in plasma levels of ACTH.

Tramadol induz efeito tipo-panicolítico em ratos, modulando os níveis hipotalâmicos de norepinefrina e periféricos de IL-1 beta; efeitos impedidos sob estresse

A síndrome do pânico apresenta alta incidência e não possui um modelo experimental integrativo. O objetivo deste trabalho foi estudar um modelo experimental de síndrome do pânico, fazendo o uso de ferramentas comportamentais e bioquímicas que preencheram algumas lacunas deixadas na literatura, como a influência do estresse, o estudo das vocalizações ultrassônicas, possíveis mecanismos periféricos e centrais, além de entender como o tramadol atua para exercer ação panicolítica. Ratos foram submetidos a modelo de indução de comportamento tipo-pânico pelo labirinto em T elevado. O tramadol foi administrado como tratamento (indução de comportamento tipo-panicolítico). Foi verificada a interação do comportamento com um modelo de estresse psicológico por contenção. As vocalizações ultrassônicas foram avaliadas na busca por padrões de comunicação tipo-pânico e de estresse. O teste claro-escuro avaliou comportamentos tipo-ansiedade e motor/exploratório. Por fim, foram estudados os níveis séricos de interleucina (IL) - 1 beta e centrais de serotonina e norepinefrina (hipotálamo e mesencéfalo). O tramadol induziu efeito tipo-panicolítico nos ratos. Porém, os parâmetros genéricos de ansiedade não foram afetados pelo tramadol, revelando que sua ação foi específica para o ataque de pânico. Esse efeito panicolítico foi associado à elevação nos níveis de norepinefrina hipotalâmica induzida pelo tramadol. Já o estresse não afetou parâmetros relacionados ao pânico e a ansiedade, mas induziu vocalizações relacionadas ao estresse. Embora o tramadol tenha conseguido evitar vocalizações de estresse e a elevação nos níveis de IL-1 beta, quando o rato esteve sob ação de estressor, o tramadol não induziu comportamento tipo-panicolítico. O efeito indesejável do estresse bloquear o efeito panicolítico parece ter ocorrido devido ao impedimento na elevação dos níveis de norepinefrina hipotalâmica. Concluindo, o tramadol induziu efeito tipo-panicolítico em ratos, com ação nos níveis hipotalâmicos de norepinefrina e periféricos de IL-1 beta. Porém, os efeitos benéficos do tramadol foram parcialmente suprimidos pelo estresse.

Panic disorder has a high incidence, but it does not have an integrative experimental model and the mechanisms involved are still not well understood. The objective of this study was to test an experimental model of panic syndrome, using behavioral and biochemical tools to answer some questions, such as the influence of stress, the ultrasonic vocalizations, possible peripheral and central mechanisms, as well as to understand how tramadol works as a panicolytic treatment. Panic-like behavior was induced in rats using an elevated T-maze model. Tramadol was administered as a treatment (to induce panicolytic-like behavior). The interaction of panic-like behaviors with a psychological (restraint) stress model was evaluated. Ultrasonic vocalizations were studied for panic-like and stress communication patterns. The light-dark test was used to evaluate anxiety-like and motor/exploratory behaviors. Finally, serum levels of interleukin (IL)-1 beta and central (hypothalamus and midbrain) levels of serotonin and norepinephrine were studied. Tramadol induced panicolytic-like effect in rats. However, generic parameters of anxiety were not affected by tramadol, revealing that tramadol acted specifically for panic-like behavior. The panicolytic effect appeared to be result of an increase in hypothalamic norepinephrine levels induced by tramadol. Stress did not affect parameters related to panic and anxiety, but induced stress-related vocalizations. Although tramadol blocked stress-related vocalizations and the elevation of IL-1 beta levels, when rats were under stress, tramadol did not induce panicolytic-like behavior. The adverse effect of stress blocking the panicolytic effect appeared to have occurred because it prevented the increase in the hypothalamic norepinephrine levels that tramadol induced. In conclusion, tramadol induced panicolytic-like effect in rats, modulating hypothalamic norepinephrine and peripheral IL-1 beta levels. However, the beneficial effects of tramadol were partially suppressed by stress.

USO DE CORANTES ARTIFICIAIS NAS RAÇÕES PARA CÃES E POTENCIAIS EFEITOS NO COMPORTAMENTO

Corantes artificiais tornam os alimentos mais atrativos para os humanos, mas parecem ter pouca influência nas escolhas dos cães. Há décadas esse tipo de aditivo é suspeito de causar problemas a saúde. Logo, o objetivo desde trabalho foi levantar informações sobre a percepção dos tutores e das empresas de alimentos para animais de companhia em relação ao uso de corantes; foi avaliado o efeito do azo corante vermelho ponceau 4R sobre o comportamento de cães, assim como a preferência alimentar desta espécie em relação ao aditivo. Informações foram coletadas através de questionários on-line, um destinado aos tutores brasileiros (n= 4111) e outro a empresas produtoras de alimento para animais de companhia (n= 34). As respostas foram analisadas por meio de estatística descritiva, qui-quadrado e análise de correspondência múltipla. Para o estudo comportamental, utilizou-se doze cães da raça Beagle. Foram compostas três dietas, (controle com 0% de corante, T1 com 0,05% e o T2 com 0,20% de corante), todas com a mesma formulação, diferindo apenas na dosagem do aditivo. Por 17 dias os cães consumiram apenas a dieta controle, e após, por 21 dias receberam os tratamentos (n=4), sendo filmados durante sete horas por dia nesse período. Para o estudo da preferência, foram utilizados 20 cães de diversas raças. Os tratamentos foram organizados em três desafios, nos quais anotou-se qual dieta o cão se aproximou com o focinho primeiro e qual foi ingerida primeiro, além da mais consumida. Empregou-se o teste de modelos lineares mistos generalizados para os dados comportamentais, e para o teste de preferência utilizou-se teste de Wilcoxon-Mann-Whitney e teste t de Student, todos a 5% de probabilidade. Os resultados dos questionários mostram que 92,56% dos tutores forneciam ração aos cães e o alimento ofertado era de boa qualidade (38,56% premium e 29,75% super premium). Em relação a embalagem, 87,67% compram o alimento de sacos lacrados, mas 68,24% não seguem as recomendações da embalagem ao arraçoar os cães. Apenas uma pequena porcentagem de pessoas prefere rações com corantes (0,97%) e correlacionam-se (P<0,05) aos tutores que não souberam informar a qualidade da ração. Quase a totalidade dos tutores (96,52%) acreditam que corantes artificiais prejudicam a saúde, por isso a maioria (93,99%) optaria por ração sem corante, se esta possuir preço similar a colorida e 37,90% disseram já ter adquirido rações mais coloridas que o padrão. Alguns tutores (34,86%) presumiram que seus cães apresentaram alterações na saúde, após o consumo de alimentos com corantes. Em relação as empresas, 47,06% produzem alimentos com corantes artificiais, porém 81,25% são favoráveis a redução de corantes no alimento para animais e 85,29% acreditam que esses aditivos não têm vantagens de uso, além de causarem efeitos colaterais no organismo. Os resultados do estudo comportamental mostram que o tratamento com 0,20% do corante apresentou maior frequência (P<0,05) do comportamento coçar, e o tratamento 0,05% mostrou aumento das vocalizações e comportamentos indicativos de ansiedade. O teste da cruz elevada mostrou resultados significativos (P<0,05) para o tratamento com 0,20% do aditivo, com menor número de entrada e menor tempo em braço aberto, comportamento relacionado a ansiedade. O teste de preferência apresentou maiores frequências de escolha pelos cães para ração controle (sem corante), seguida do tratamento com 0,05% de corante para primeira ingestão e consumo (P<0,05). Conclui-se que os tutores estão evitando alimentos com corantes artificiais, por acreditarem que não fazem bem a saúde de seus cães, e as empresas se mostraram dispostas a diminuir o uso de corantes artificiais em rações e petiscos. O corante vermelho ponceau 4R causou alterações no comportamento de cães, comprometendo o bem-estar dos animais, além de ser menos apreciado por eles, em comparação ao alimento sem o corante.

Artificial dyes make food more attractive to humans, but appear to have little influence on dog choices. This type of additive has been suspected of causing health problems for decades. Therefore, the objective of this study was to gather information about the perception of tutors and the pet food industry in relation to the use of dyes; it was evaluated the effect of the use of azo ponceau red 4R dye on the behavior of dogs, as well as the food preference of this specie in relation to the additive. Information was collected through on-line questionnaires, one for Brazilian tutors (n= 4111) and the other for pet food companies (n= 34). Responses were analyzed using descriptive statistics, chi-square and multiple correspondence analysis. For the behavioral study, twelve Beagle dogs were used. Three diets were composed (control with 0% dye, T1 with 0.05% and T2 with 0.20% dye), all with the same formulation, differing only in the dosage of the additive. For 17 days, the dogs consumed only the control diet, and then, for 21 days, they received the treatments (n=4), being recorded for seven hours a day during this period. For the preference study, 20 dogs of different breeds were used. Treatments were organized into three challenges, in which it was identified which diet the dog approached with the muzzle first and which was ingested first, in addition to the most consumed. Generalized mixed linear model test was used for the behavioral data, and Wilcoxon-Mann-Whitney test and Student t test were used for the preference test, all at 5% probability. The results of the questionnaires showed that 92.56% of the tutors provided dog food, and the food offered was of good quality (38.56% premium and 29.75% super premium). Regarding packaging, 87.67% buy pet food from sealed bags, but 68.24% do not follow the packaging recommendations when feeding dogs. Only a small percentage of people preferred diets with dyes (0.97%) and correlated (P<0.05) with tutors who did not know the quality of the food. Almost all tutors (96.52%) believed that artificial dyes harm health, so the majority (93.99%) would opt for food without dye, if it has a similar price to color, and 37.90% said they already had acquired more colorful food than the standard. Some tutors (34.86%) presumed that their dogs showed changes in health after consuming food with dyes. Regarding companies, 47.06% produce foods with artificial colors, however, 81.25% are favorable to the reduction of dyes in pet food, and 85.29% believe that these additives do not have advantages in use, besides causing side effects in the organism. The results of the behavioral study showed that animals consuming food with 0.20% of the dye showed a higher frequency (P<0.05) of scratching behavior, and animals on 0.05% treatment showed an increase in vocalizations and behaviors indicative of anxiety. The elevated plus-maze test showed significant results (P<0.05) for treatment, with those animals consuming 0.20% of the additive, with less number of entries and less time in the open arm, behavior related to anxiety. The preference test showed higher frequencies of choice for dogs consuming control diets, followed by treatment with 0.05% dye for the first intake and consumption (P<0.05). It is concluded that tutors are avoiding foods with artificial colors because they believe they are not good for the health of their dogs and companies were willing to decrease the use of artificial colors in pet food. The red dye ponceau 4R caused changes in the behavior of dogs, compromising the welfare of the animals, in addition to being less appreciated by them, compared to diets without dye.

Déficit de memória em ratos submetidos à indução a doença de alzheimer por infusão intracerebral de beta-amiloide1-42 / Memory deficit in rats submitted to induction alzheimer's disease in infusion of intracerebral beta-amiloide1-42

Alzheimer's disease (AD) was established as the neurodegenerative dementia, which leads to progressive and irreversible cognitive decline, memory loss, attention and judgment. It is characterized by molecular injuries resulting from the accumulation of charged neuritic plaques of β-amyloid and neurofibrillary tangles causing oxidative damage and inflammatory. Thus, the aim of this study was to evaluate the learning and memory of rats seven days after infusion of β-amiloide1-42. The β-amiloide1-42 was prepared in saline protein (1ug / uL) and incubated at 37 ° C for three days to form the aggregate. The animals were anesthetized with the combination of ketamine (100 mg / kg) and xylazine (10 mg / kg) intraperitoneally, and fixed in a stereotaxic route. The aggregate was infused directly in the hippocampus (5UL bilaterally) in the coordinates, AP: -3.5 mm; LL: ± 2.0 mm; DV: -3.5. The learning and memory was assessed using the Morris water maze. The apparatus consists of a circular water tank (120 cm diameter and 60 cm high) with an escape platform (12.5 cm in diameter and 38 cm high) positioned invisible to the mice 2 cm below the water level. The tank was divided by imaginary lines (N, S, L, and O) in four quadrants (1, 2, 3 and 4) and identified by the same geometrical symbols, which remained the same throughout the study. The animals were placed facing the geometric shapes and the exhaust time measured during four consecutive days (training). In the fifth and final day it was taken to the escape platform and computed the total residence time in the target quadrant (test). The maximum time for each step was 60s. This study was approved by Ethics Committee for Animal Use (CEUA) of the State University of Ceará (UECE) by the number 2542310/2015. To analyze the learning we used the ANOVA two way with Bonferroni post-test. To verify differences in memory between the groups we used the Student t test. P <0.05 significance level was adopted[...]

Déficit de memória em ratos submetidos à indução a doença de alzheimer por infusão intracerebral de beta-amiloide1-42 / Memory deficit in rats submitted to induction alzheimer's disease in infusion of intracerebral beta-amiloide1-42

Alzheimer's disease (AD) was established as the neurodegenerative dementia, which leads to progressive and irreversible cognitive decline, memory loss, attention and judgment. It is characterized by molecular injuries resulting from the accumulation of charged neuritic plaques of β-amyloid and neurofibrillary tangles causing oxidative damage and inflammatory. Thus, the aim of this study was to evaluate the learning and memory of rats seven days after infusion of β-amiloide1-42. The β-amiloide1-42 was prepared in saline protein (1ug / uL) and incubated at 37 ° C for three days to form the aggregate. The animals were anesthetized with the combination of ketamine (100 mg / kg) and xylazine (10 mg / kg) intraperitoneally, and fixed in a stereotaxic route. The aggregate was infused directly in the hippocampus (5UL bilaterally) in the coordinates, AP: -3.5 mm; LL: ± 2.0 mm; DV: -3.5. The learning and memory was assessed using the Morris water maze. The apparatus consists of a circular water tank (120 cm diameter and 60 cm high) with an escape platform (12.5 cm in diameter and 38 cm high) positioned invisible to the mice 2 cm below the water level. The tank was divided by imaginary lines (N, S, L, and O) in four quadrants (1, 2, 3 and 4) and identified by the same geometrical symbols, which remained the same throughout the study. The animals were placed facing the geometric shapes and the exhaust time measured during four consecutive days (training). In the fifth and final day it was taken to the escape platform and computed the total residence time in the target quadrant (test). The maximum time for each step was 60s. This study was approved by Ethics Committee for Animal Use (CEUA) of the State University of Ceará (UECE) by the number 2542310/2015. To analyze the learning we used the ANOVA two way with Bonferroni post-test. To verify differences in memory between the groups we used the Student t test. P <0.05 significance level was adopted[...](AU)

Comportamento e bem-estar de peixe beta (Betta splendens) em aquário.

O bem-estar na produção animal é bem aceito e entendido quando o objeto do assunto são os mamíferos, isso ocorre devido a maior semelhança comportamental ao ser humano. No entanto para trabalhar com o bem-estar na produção de peixes, a primeira questão que surge é se esses animais tem capacidade de sentir dor, desenvolver processos cognitivos e se tem consciência do que ocorre ao seu redor. Alguns trabalhos foram desenvolvidos e executados com o objetivo de responder esses questionamentos, porém são poucos e a demanda continua. O objetivo do presente estudo foi traçar perfil comportamental e bem-estar de peixe Betta splendens. Foram utilizados 40 exemplares machos de peixe beta com idade entre 90 e 120 dias. Dos quais 15 exemplares com aproximadamente 90 dias foram manejados em aquário tipo cruzeta com quatro pontas de mesmo comprimento e distância do centro. Onde foram realizados testes de preferência para quatro tipos de componente do ambiente; substrato, vegetações, abrigos e cores, com intervalo de três dias entre eles, para descanso dos animais utilizados. Em cada teste foi ofertado quatro tipos de preferências distribuídos aleatoriamente por sorteio no início de cada sessão experimental, de forma a não repetir a localização. Os animais foram filmados durante 20 minutos por dia por quatro dias para cada teste totalizando 16 dias. Ao final do último teste no aquário tipo cruzeta se iniciou o teste de preferência de profundidade. Os animais foram filmados durante 10 minutos por dia por dois dias. Foram analisados os comportamentos de frequência em cada preferência, permanência em cada preferência e tempo de latência (para o teste no aquário tipo cruzeta). Observou-se que o peixe beta confinado permaneceu mais tempo nos ambientes com predominância da cor azul (195,44 s), sem substrato (306,53 s) e no ambiente com abrigo de garrafa pet de 300 ml (264,7 s). As plantas aquáticas elódea (Egeria brasiliensis) e orelha (Salvinian auriculata) foram as mais visitadas (3,87 e 3,53 vezes) e onde os peixes betas permaneceram mais tempo. No segundo experimento foram utilizados 25 exemplares com aproximadamente 120 dias distribuídos aleatoriamente em cinco tipos de alojamento (tratamentos); (T1) copos de 0,3 litros, (T2) aquário 3 litros sem enriquecimento, (T3) aquário 3 litros enriquecidas, (T4) aquário 38 litros sem enriquecimento e (T5) aquário 38 litros enriquecidos. Foi utilizado um aquário tipo labirinto para análise do comportamento cognitivo. Localizado dentro do labirinto tinham quatro pontos estimuladores; fêmeas da mesma espécie, peixe carnívoro (Astronotus ocellatus), ambiente enriquecido e alimento vivo (Dendrocephalus brasiliensis). Comportamentos como lateralidade, latência, preferência, frequência de visitação e permanência de visitação foram gravados durante 15 minutos por dia. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado com cinco tratamentos e cinco repetições, sendo cada animal uma unidade experimental. Os dados obtidos da filmagem foram submetidos à análise de variância a 5% de confiabilidade e quando significativos foram analisados por teste de média t ao nível de 5% de probabilidade, utilizando o programa estatístico Bioestat. Não houve diferença entre as médias de tempo de latência dos peixes beta dos diferentes tratamentos (p=0,5138). Os peixes beta alojados em aquário 2 L sem enriquecimento (T2) apresentaram preferência direita ao sair do labirinto enquanto os beta do tratamento 2 L com enriquecimento (T3) apresentaram preferência de saída do labirinto pelo lado esquerdo. Os peixes do tratamento do copo de 0,3 L (T1) apresentaram preferência pelo lado esquerdo na saída do labirinto e frequentaram mais vezes (5,33) o ponto oscar.

Welfare in animal production is well accepted and understood when referring to mammals, this is due to the greater behavioral similarity to the human being. But when we refer to welfare in the production of fish and reptiles, the first question that arises is whether these animals have the capacity to feel pain, to develop cognitive processes and to be aware of what is happening around them. Some works were developed and executed with the purpose of answering these questions, but they are few and the demand continues. The objective of the present study was to outline the behavioral profile and welfare of Betta splendens fish. Were used 40 male specimens of beta fish specimens between 90 and 120 days old. Of which 15 specimens with approximately 90 days were handled in a cross-type aquarium with four tips of the same length and distance from the center. Where preference tests were performed for four types of environmental component; substrate, vegetation, shelters and colors, with interval of three days between them, to rest the animals used. In each test was offered four types of preferences randomly distributed by lot at the beginning of each experimental session, in order not to repeat the location. The animals were filmed for 20 minutes per day for four days for each test totaling 16 days. At the end of the last test in the crosshead aquarium the depth preference test was started. The animals were filmed for 10 minutes a day for two days. Frequency behaviors at each preference, permanence at each preference and latency time (for the test in the cross-type aquarium) were analyzed. Was observed that confined beta fish remained longer in environments with a predominance of blue color (195,44 s), without substrate (306,53 s) and in the environment with a 0,3 liters pet bottle shelter (264,7 s). The aquatic plants elódea (Egeria brasiliensis) and ear (Salvinia auriculata) were the most visited (3.87 and 3.53 times) and where the betas fish stayed longer. In the second experiment, 25 specimens with approximately 120 days were randomly distributed in five types of housing (treatments); (T1) cup 0,3 liters, (T2) aquarium 3 liters without enrichment, (T3) aquarium 3 liters enriched, (T4) aquarium 38 liters without enrichment and (T5) aquarium 38 liters enriched. A maze-type aquarium was used to analyze cognitive behavior. Located inside the labyrinth had four stimulating points; females of the same species, carnivorous fish (Astronotus ocellatus), enriched environment and live food (Dendrocephalus brasiliensis). Behaviors such as laterality, latency, preference, frequency of visitation and permanence of visitation were recorded for 15 minutes per day. The experiment was conducted in a completely randomized design with five treatments and five replicates, each animal being an experimental unit. The data obtained from the filming were submitted to analysis of variance at 5% of reliability and when significant were analyzed by means t test at the level of 5% of probability, using the statistical program Bioestat. There was no difference between the means of beta-latency time of the different treatments (p = 0.5138). The fish of aquarium 2L without enrichment (T2) presented a right preference when leaving the labyrinth while the fish treatment of aquarium 2L with enrichment (T3) showed left labyrinth preference. The fish from the treatment of the 0.3 L cup (T1) showed preference for the left side at the exit of the labyrinth and frequented the oscar point more frequently (5.33).

EFEITO DA COLORAÇÃO DO AMBIENTE SOBRE O COMPORTAMENTO E APRENDIZADO DE TILÁPIA DO NILO.

As características de um ambiente são capazes de modular a fisiologia e o comportamento dos indivíduos daquele meio. Objetivou-se investigar a influência da coloração do ambiente no comportamento e na capacidade de aprendizado de Tilápias do Nilo, Oreochromis niloticus, em labirinto T. Foram utilizadas oitenta e quatro tilápias com 12,81±0,38cm e 35,98±8,33g. Estas foram separadas em seis grupos com quatorze indivíduos cada e colocados em tanques azul, verde e preto e aclimatadas por 15 dias quando foram realizadas observações diárias quanto a distribuição na coluna dágua e confrontos agonísticos. Para o teste de aprendizagem, que durou mais 15 dias, foram montados três labirintos em T, correspondente a cada cor de ambiente, no qual foi avaliado o tempo para realização da tarefa de ingestão do alimento. Após este período foi realizada uma única troca de cor dos labirintos durante 5 dias consecutivos e feita a mesma avaliação do teste de aprendizado. Em tanques azuis e pretos os peixes permaneceram em sua maioria na parte superior. Em tanques verdes permaneceram distribuídos igualmente na coluna de água. Houve maior número de confrontos agonísticos em ambiente azul. Os peixes do labirinto preto precisaram de 9 dias para aprender a tarefa de sair da latência e se alimentar. Os do labirinto verde precisaram de 10 enquanto que os do labirinto azul não conseguiram aprender a tarefa. A troca de cores afetou o desempenho da tarefa aprendida pelos animais em todas as cores. O ambiente preto é o mais indicado para manutenção da espécie e testes de aprendizado espacial por garantir maior bem estar e melhor desempenho durante o teste de aprendizado. A coloração azul não é indicada uma vez que a mesma incitou o comportamento agonístico prejudicando o bem estar do animal e interferindo no desempenho da tarefa de aprendizado.

Environmental characteristics are capable of modulating the physiology and behavior of individuals. The objective of this study was to investigate the influence of environment color on the behavior and learning ability of Nile Tilapia, Oreochromis niloticus, in T maze. Eighty-four tilapias with 12.81 ± 0.38cm and 35.98 ± 8.33g were used in the experiment. They were separated into six groups of fourteen individuals and placed in blue, green and black tanks and acclimatized for 15 days prior to behavioral observations. For the learning test, which lasted 15 days, three T maze were set up, one of each environment color. After the learning test, the T maze color was changed for 5 days. At the blue and black tanks, fish remained mostly at the top of the tank. At the green tank, they remained equally distributed in the water column. There were more agonistic encounters at the blue environment. Fish trained in the lack maze needed nine days to learn the task of leaving latency and feed. Those trained in the green maze needed 10 days, while individuals at the blue maze failed to learn the task. The color change affected the performance of the task learned by the animals in all colors. It can be concluded that the blue color stimulated agonistic behavior and interfered in the performance of learning tasks. The black environment was best suited for maintenance and testing of learning in Nile tilapia.

Caracterização fenotípica do camundongo mutante bate palmas induzido pelo agente mutagênico químico ENU (N- Ethyl- N- Nitrosourea) como potencial modelo para a síndrome de Kabuki"

O camundongo mutante denominado bate palmas (BALB/cbapa) originou-se de mutagênese química induzida por N-ethyl-N-nitrosourea (ENU). Suas principais características fenotípicas são alterações posturais com movimentos anormais dos membros posteriores quando suspenso pela cauda, simulando o ato de bater palmas. A partir do padrão de herança a mutação foi identificada como autossômica recessiva. Os resultados do sequenciamento do exoma apontaram como forte candidato o gene lysine (K)-specific methyltransferase 2D (kmt2d, também conhecido como mll2 ou mll4), localizado no cromossomo 15 do camundongo. Essa mutação foi confirmada através de sequenciamento do DNA pelo método de Sanger. A perda da função do gene KMT2D, localizado no cromossomo 12 em humanos, foi descrita como responsável pela síndrome de Kabuki, que é uma anomalia congênita rara, autossômica dominante, também conhecida como síndrome Niikawa-Koruki. O fenótipo clínico da doença é variável, mas algumas características mais comuns são face dismórfica, anormalidades esqueléticas, alterações dermatoglíficas, leve a moderado retardo mental e retardo do crescimento pós-natal. O presente estudo teve como objetivo caracterizar o fenótipo do camundongo mutante bate palmas a partir da análise de parâmetros comportamentais. Para tanto, foram utilizados 30 camundongos mutantes bate palmas- sendo 15 machos e 15 fêmeas- e seus respectivos controles BALB/c, com oito semanas de idade no início dos experimentos. Os testes comportamentais foram realizados em ordem crescente de estresse e ordenados na seguinte sequência 1) observação direta em campo aberto dos parâmetros da atividade geral, sensoriais, psicomotores e os ligados ao sistema nervoso central e autônomo; 2) ansiedade e memória no teste do labirinto em cruz elevada; 3) memória operacional no teste do labirinto em T; 4) coordenação motora no teste da trave elevada e 5) comportamento do tipo depressivo nos testes de suspensão pela cauda e natação forçada. Os dados obtidos no presente estudo demostraram que o mutante bate palmas apresentou aumento na frequência de levantar em ambos os sexos, sugerindo comportamento estereotipado; no entanto, não houve alteração na atividade geral. Na avaliação do sistema sensorial houve redução no reflexo auricular e na resposta de aperto de cauda do mutante bate palmas. Em relação aos parâmetros psicomotores houve diminuição do reflexo de endireitamento e queda do trem posterior, sugerindo deficiência motora, como a hipotonia. Os resultados do teste de labirinto em cruz elevada identificaram menor nível de ansiedade nos mutantes em comparação aos controles. Ainda, as respostas 14 observadas no segundo dia do teste mostraram que não houve perda de memória dos bate palmas. Além disso, o teste do labirinto em T mostrou que não houve alteração na memória espacial dos camundongos mutantes em relação aos BALB/c. Já os resultados dos testes de suspensão pela cauda e de natação forçada foram semelhantes, indicando maior tempo de imobilidade dos mutantes em comparação aos BALB/c. Analisados em conjunto, os resultados desse estudo sugerem que o mutante bate palmas apresentou alterações nos parâmetros sensoriais e psicomotores e possível comportamento estereotipado, relacionadas à mutação do gene kmt2d.

The mutant mouse denominated bate palmas (BALB/cbapa) originated from chemical mutagenesis induced by N-ethyl-N-nitrosourea (ENU). Its main phenotypic characteristics are postural alterations with abnormal movements of the hind limbs when suspended by the tail, simulating the act of clap hands. The inheritance pattern of the mutation was identified as autosomal recessive. The potential candidate gene lysine (K) -specific methyltransferase 2D (kmt2d, also known as mll2 or mll4), located on chromosome 15 of the mouse, was identified by the exome sequencing. This mutation was confirmed by DNA sequencing by the Sanger method. The loss of function of KMT2D gene, located on chromosome 12 in humans, has been described as responsible for Kabuki syndrome, which is a rare congenital anomaly, autosomal dominant, also known as Niikawa-Koruki syndrome. The clinical phenotype of the disease is variable, but some common features are dysmorphic face, skeletal abnormalities, dermatoglyphic changes, mild to moderate mental retardation and postnatal growth retardation. The present study aimed to characterize the phenotype of the mutant mouse bate palmas from the analysis of behavioral parameters. Therefore, 30 mutant mice were used - 15 males and 15 females - and their respective BALB/c controls, at eight-wk-old at the beginning of the experiments. Behavioral tests were performed in increasing order of stress and ordered in the following sequence: 1) direct observation in the open field of the parameters linked to general activity, sensorial and psychomotor systems, and those connected to the central and autonomic nervous system; 2) anxiety and memory in the elevated plus maze test; 3) operating memory in the T-maze test; 4) motor coordination in the balance beam test, and 5) depressive-like behavior in the tail suspension and forced swimming tests. The data obtained in the present study demonstrated that the mutant bate palmas presented increase in the rearing frequency in both sexes, suggesting stereotyped behavior; however, there was no change in the general activity. The evaluation of the sensory system demonstrated reduction in the auricular reflex and the tail flick response of the mutant bate palmas. Regarding to the psychomotor parameters, there were observed impairments in the surface-righting reflex and hindquarter fall, suggesting motor deficiency, such as hypotonia. The results of the elevated plus maze test identified a lower level of anxiety in the mutants compared to controls. Still, the responses observed on the second day of the test showed that there was no loss of memory of the bate palmas. In addition, the T-maze test showed that there was no change in the spatial memory of the mutant mice in relation to BALB/c mice. Data of the tail suspension and forced 16 swimming tests were similar, indicating a longer immobilization time of the mutants compared to BALB/c mice. Taken together, the results of this study suggest that the mutant bate palmas showed impairments of the sensorial and psychomotor parameters, and possibly stereotyped behavior related to the mutation of the kmt2d gene.

Caracterização fenotípica e análise do sistema nervoso central dos camundongos mutantes equilíbrio e mergulhador induzidos pelo agente mutagênico n-ethyl-n-nitrosourea

O agente mutagênico N-ethyl-N-nitrosourea (ENU) é amplamente utilizado para produzir novas mutações em camundongos, dando origem aos mutantes recessivos equilíbrio (eqlb), que possui uma mutação pontual no gene NADPH oxidase 3 (Nox3), cromossomo 17 e mergulhador (mlh), no gene Otopetrin 1 (Otop1), cromossomo 5; sendo que ambos apresentam alterações vestibulares. Devido à semelhança da função do aparelho vestibular humano e do camundongo, a análise comportamental desses modelos pode ser uma valiosa contribuição para identificar alterações no controle do equilíbrio e do movimento. Deste modo, com o objetivo caracterizar o comportamento dos mutantes eqlb e mlh foram realizados os seguintes testes: avaliação da atividade geral por observação direta no campo aberto, coordenação motora na trave elevada, labirinto em cruz elevada (LCE), para avaliar o comportamento do tipo ansioso, labirinto em T e reconhecimento de objetos para avaliar a memória, além do teste de suspensão pela cauda para verificar o comportamento do tipo depressivo. Os resultados mostraram que em comparação aos camundongos BALB/c, os mutantes eqlb e mlh apresentaram redução do reflexo auricular, reflexo de endireitamento, resposta ao toque, na locomoção e na frequência de levantar. A redução do reflexo auricular, da resposta ao toque e do redução do reflexo de endireitamento mostrou um possível prejuízo do sistema psicomotor. A redução da frequência de levantar provavelmente foi consequência da dificuldade motora dos camundongos mutantes. Os resultados do teste da trave elevada indicaram que os mutantes eqlb e mlh apresentaram um prejuízo motor principalmente relacionado à coordenação motora. O tempo de imobilidade aumentado no teste de suspensão pela cauda e a incapacidade de nadar em camundongos eqlb e mlh reforçaram o papel do sistema vestibular na manutenção da percepção de gravidade, movimento e equilíbrio.

The mutagenic agent N-ethyl-N-nitrosourea (ENU) is widely used to produce new mutations in mice, giving origin to the equilíbrio (eqlb) which has a mutation in the NADPH oxidase 3 (Nox3) gene, chromosome 17 and mergulhador (mlh) in the gene Otopetrin 1 (Otop1), chromosome 5; both mutant strain showed vestibular impairment. Due to the similarity of the vestibular apparatus between human and mouse, the behavioral analysis of the mutant can be a valuable contribution to identify alterations involved in the control of balance and movement. This study aimed to characterize the behavior of eqlb and mlh mutant mice using the following behavioral tests: evaluation of the general activity by direct observation in the open field, motor coordination in the balance beam, elevated plus maze to evaluate the behavior of the anxious type, T-maze and recognition of objects to evaluate memory. In addition, tail suspension test was used to verify depressive like behavior. The results showed that in relation to the BALB/c mice, the mutants eqlb and mlh showed reduction of auricular reflex, surface-righting reflex, touch response, locomotion and rearing frequency. The reduction of the auricular reflex and the touch response pointed to the impairment of the psychomotor system, and the reduction of the surface-righting reflex showed a possible impairment of the psychomotor system. The reduction in the rearing frequency was, probably, a consequence of the motor impairment observed in the mutant strains. The results of the elevated plus maze test indicated that the mutants eqlb and mlh showed motor impairment mainly related to motor coordination. The increased immobility time in the tail suspension test and the inability to swim in eqlb and mlh mice reinforced the role of the vestibular system in maintaining the perception of gravity, movement, and balance.

Efeitos da sibutramina e do metilfenidato em modelo animal do Transtorno do Déficit de Atenção e Hiperatividade (TDAH) induzido em camundongos por etanol no período pós-natal

O transtorno do déficit de atenção e hiperatividade (TDAH) é uma condição que pode ser caracterizada pela falta de atenção, impulsividade e hiperatividade. A fisiopatologia do TDAH está relacionada, principalmente, a alterações no sistema dopaminérgico, noradrenérgico e serotoninérgico do sistema nervoso central. Dentre os tratamentos utilizados destaca-se a farmacoterapia com metilfenidato, potencial droga de abuso, que age como inibidor da recaptação de dopamina, noradrenalina e serotonina; por outro lado, o sal de sibutramina monoidratada, que possui mecanismo de ação farmacológico semelhante nestes sistemas de neurotransmissão central, ainda não teve sua utilização testada em um modelo do TDAH. Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos da administração prolongada (28 32 dias) de sibutramina e de metilfenidato em modelo animal do TDAH induzido pela exposição ao etanol no período pós-natal em camundongos, avaliando-se o ganho de peso semanal, o consumo de água e de ração, bem como o comportamento animal, por meio da avaliação geral no campo aberto e nos testes do labirinto em cruz elevado, da suspensão pela cauda, do reconhecimento de objetos e do labirinto em T. Foram avaliados também os níveis dos neurotransmissores e seus metabólitos em diferentes estruturas cerebrais. Os resultados mostraram que o modelo animal do TDAH induzido pela exposição ao etanol no período pós-natal apresentou hipoatividade no campo aberto seguida de aumento da atividade, não apresentou alterações nos níveis de ansiedade no labirinto em cruz elevado, como também mostrou comportamento tipo-depressivo no teste de suspensão pela cauda e marcante déficit na memória de trabalho e atenção no teste de reconhecimento de objetos e labirinto em T. Em relação ao tratamento prolongado com sibutramina e metilfenidato, não foram observadas alterações no ganho de peso semanal e consumo de água e ração. No campo aberto o metilfenidato normalizou a atividade dos camundongos, enquanto a sibutramina causou hiperatividade. No labirinto em cruz elevado não foram observadas alterações nos níveis de ansiedade. No teste de suspensão pela cauda o metilfenidato ocasionou comportamento tipo-depressivo nos camundongos salina, enquanto a sibutramina reverteu os efeitos depressivos dos etanol. O metilfenidato melhorou a memória de trabalho e atenção dos camundongos que receberam etanol tanto no teste de reconhecimento de objetos quanto no labirinto em T, já a sibutramina foi capaz de fazê-lo apenas no labirinto em T.

The attention deficit hyperactivity disorder (ADHD) is a condition that can be characterized by the lack of attention, impulsivity and hyperactivity. The pathophysiology of ADHD is related mainly to changes in the dopaminergic system, noradrenergic and serotoninergic of central nervous system. Among the treatments used stands out the pharmacotherapy with methylphenidate, potential drug of abuse, which acts as an inhibitor of the reuptake of dopamine, noradrenaline and serotonin; on the other hand, the salt of sibutramine monohydrate, which has a pharmacological mechanism of action similar in these systems of central neurotransmission, have not had their use tested in a model of ADHD. Thus, the objective of this work was to study the effects of prolonged administration (28 - 32 days) of sibutramine and methylphenidate in an animal model of ADHD induced by exposure to ethanol in the postnatal period in mice, evaluating the weight gain weekly, the consumption of water and feed, as well as animal behavior, through the general assessment in open field, and in the elevated plus maze, and in the tests of tail suspension, the recognition of objects and the T maze. We evaluated the levels of neurotransmitters and their metabolites in different brain structures. The results showed that the animal model of ADHD induced by exposure to ethanol in the postnatal period showed hypoactivity in the open field followed by increased activity, showed no changes in the levels of anxiety in the elevated plus maze, as also shown depressive-like behavior in the tail suspension test and striking deficit in working memory and attention in the test of recognition of objects and T maze. In relation to the prolonged treatment with sibutramine and methylphenidate, no alterations were observed in weight gain weekly, and consumption of water and food. In the open field, methylphenidate normalized the activity of mice, while sibutramine caused hyperactivity. In the elevated plus maze no changes were observed in anxiety levels. In the tail suspension test methylphenidate caused depressive-like behavior in mice salina, while sibutramine reversed the effects of depression of ethanol. Methylphenidate has improved the working memory and attention of mice that received ethanol both in the test of recognition of objects as the maze in T, since sibutramine was able to do it only in the maze in T.

TREINAMENTO E "OVERTRAINING" INDUZIRAM ALTERAÇÕES COMPORTAMENTAIS E BIOQUÍMICAS EM RATOS WISTAR

Investigar o comportamento, concentrações de corticosterona, lactato e glicose de ratos Wistar submetidos a um protocolo de "overtraining" (PO) para o desenvolvimento de "Functional" (FOR) ou "Nonfunctional Overreaching" (NFOR). Métodos: inicialmente a amostragem de indivíduos foi de 49. O grupo controle (C, n= 16) realizou um programa de condicionamento leve (1 sessão/dia/ 2x/sem./12 m.min-1). Os outros ratos (n= 33) foram submetidos ao PO, com duração de 12 sem., prescrito para produzir um desequilíbrio entre as sessões de exercício e o período de recuperação. Em 8 sem. foram realizadas sessões de treino diárias, por 5 d consecutivos seguidas por 2 d de recuperação. Nas 4 sem. subsequentes, houve aumento da frequência de treino (2, 3, 4 e 4 x/d) e redução do tempo de recuperação entre as sessões (4, 3, 2 e 2 h). Para avaliação da aptidão física, os ratos foram submetidos a sete testes de esforço máximo (T-máx) durante e dois testes após o PO. Dois grupos foram identificados pela diferença da inclinação () obtida a partir da regressão linear dos desempenhos individuais nos Tmáx-3, 4, 5, 6 e 7. Ratos NFOR (n= 14) tiveram = < -0.98. Analisou-se a recuperação passiva de 2 sem., sendo realizado testes de Campo Aberto (CA) e Labirinto em Cruz Elevado (LCE). Neste período, dois Tmáxs (8 e 9) foram realizados para verificação da continuidade das condições FOR e NFOR. Em Tmáx-2, Tmáx-6 e Tmáx-9 realizaram-se coletas sanguíneas para quantificação das concentrações plasmáticas de lactato ([lac]antes e [lac]após) e glicose ([glic]antes e [glic]após). Quantificou-se corticosterona durante o repouso e após os Tmáx-7 e 9, ([cort]repouso e [cort]após). Glândulas adrenais foram coletadas e pesadas. Para análise estatística aplicaram-se ANOVA de uma via e para medidas repetidas no tempo, testes t de Student pareado e não pareado e foi realizada correlação de Pearson (P< 0.05). Resultados: FOR e NFOR tiveram aumento de desempenho a partir do Tmáx-2 (303.8±13.8; 294.3±18.9 e 190.2±12.2 kg.m, respectivamente). O grupo NFOR teve o desempenho reduzido no Tmáx-7 (292.2±36.4 kg.m). No teste CA, ocorreu aumento da frequência de levantar para os grupos FOR e NFOR em relação ao grupo C. Houve redução da [lac]após para FOR e NFOR no Tmáx-6 em relação ao grupo C (3.61±0.38; 5.43±0.63; 7.64±0.43 mmol/L, respectivamente) sendo que NFOR obteve lactatemia maior que FOR. Ainda no Tmáx-6, a [glic]após foi menor em FOR em relação ao grupo C (5.66±0.17 vs. 6.52±0.21). Não houve diferença para as concentrações de corticosterona. Houve aumento do índice adrenosomático para o grupo NFOR no Tmáx-7 e redução deste após o Tmáx-9. Conclusões: "functional" ou "nonfunctional overreaching" provocou ansiedade e alterações nas concentrações de lactato e glicose em ambos os grupos bem como aumento do índice adrenosomático nos ratos que demonstraram a condição NFOR

To investigate the behavior, corticosterone and lactate concentrations of Wistar rats submitted to an overtraining protocol (OP) for the development of functional (FOR) or nonfunctional overreaching (NFOR). Methods: Sampling of rats was 49. The control group (C, n= 16) performed a mild conditioning program (1 session/day / 2x/wk/12 m.min-1). The other rats, n= 33, were submitted to 12-week OP prescribed to produce an imbalance between the exercise sessions and the recovery period. In 8 wks. daily training sessions were performed for 5 consecutive d followed by 2 d of recovery. In the following 4 wks. (2, 3, 4 and 4 x / d) there was an increase in training frequency and reduction of recovery time between sessions (4, 3, 2 and 2 h). To evaluate physical fitness, the rats were submitted to seven maximum tests (Tmax) during and two tests after the PO. Two groups were identified by the slope difference () obtained from the linear regression of individual performances at Tmax-3, 4, 5, 6 and 7. NFOR rats (n= 14) had = -0.98. Passive recovery of 2 wks was analyzed, and Open Field (OF) and Elevated Plus Maze (EPM) tests were performed. In this period, 2 Tmaxs (8 and 9) were performed to verify the continuity of FOR and NFOR conditions. Blood samples were collected for Tmax-2, Tmax-6 and Tmax-9 for the quantification of plasma lactate concentrations ([lac]before and [lac]after) and glucose ([glic]before and [glic]after). Corticosterone was measured at rest and after Tmax-7 and 9, ([cort]rest and [cort]after). Adrenal glands were collected and weighed. For statistical analysis one-way ANOVA and repeated measures ANOVA, paired and unpaired Student's t-tests and a Pearson correlation were performed (P < 0.05). Results: NFOR and FOR had an increase in performance from Tmax-2 (303.8±13.8, 294.3±18.9 and 190.2±12.2 kg.m, respectively). The NFOR group had reduced performance in Tmax-7 (292.2±36.4 kg.m). In the OF test, there was an increase in the frequency of rearing for the FOR and NFOR groups in relation to the C group. There was reduction of [lac]after for FOR and NFOR in Tmax-6 compared to group C (3.61±0.38, 5.43±0.63 , 7.64 ± 0.43 mmol/L, respectively) and NFOR obtained lactate concentrations greater than FOR. Still in Tmax-6, [glic]after was lower in FOR compared to group C (5.66±0.17 vs. 6.52±0.21). In Tmax-7, resting was lower for the NFOR group compared to C. There was no difference in corticosterone concentrations. There was an increase in the adrenosomatic index for the NFOR group in the Tmax-7 and a reduction in the latter after the Tmax-9. Conclusion: functional and nonfunctional overreaching caused anxiety and changes in lactate and glucose concentrations in both groups as well as increase in the adrenosomatic index in rats that demonstrated the NFOR condition.

Caracterização fenotípica do camundongo mutante espontâneo tremor utilizando uma bateria de testes comportamentais

A mutação espontânea tremor (tr), autossômica recessiva, foi identificada na colônia de camundongos Swiss no Biotério do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo. Os mutantes apresentaram como principais características fenotípicas tremores, ataxia e convulsões tônicas audiogênicas. Por meio de dez retrocruzamentos essa mutação foi transferida para a linhagem congênica C57BL/6 (N10). O mapeamento genético com marcadores microssatélites distribuídos pelo genoma do camundongo indicou que a mutação tr encontra-se no cromossomo 14, na região entre 33,21 e 38,21 cM, tendo como possível candidato o gene Egr3 (Early Growth Response 3). O presente estudo teve como objetivo caracterizar o fenótipo comportamental do camundongo mutante tremor. A caracterização do fenótipo dos camundongos mutantes Swiss foi realizada a partir do nascimento até a idade adulta. Os parâmetros do desenvolvimento físico analisados foram: desdobramento das orelhas, erupção dos dentes incisivos, abertura dos olhos, surgimento da pelagem completa, ganho de peso e comprimento dos filhotes e desenvolvimento sexual. No desenvolvimento reflexológico foram analisados: preensão palmar, geotaxia negativa, endireitamento de postura e sobressalto. No 21º dia de vida foi realizado o teste de campo aberto para analisar a atividade geral dos animais, e no 60º dia esse teste foi repetido, juntamente com testes para analisar parâmetros comportamentais. Os testes realizados em campo aberto foram ordenados por parâmetro avaliado; 1) atividade geral dos animais e sistema sensorial: frêmito vocal, irritabilidade, reflexo auricular, aperto de cauda, reflexo corneal e resposta ao toque; 2) testes psicomotores: trem posterior, reflexo de endireitamento, tônus corporal e força de agarrar; 3) avaliação do sistema nervoso central: tremores, cauda em pé, micção e defecação. Demais testes realizados analisaram: comportamento em labirinto em cruz elevada, coordenação motora em trave elevada, memória espacial no labirinto em T, e respostas comportamentais nos testes de natação forçada e de suspensão pela cauda. Exceto pelo menor peso no desmame, os parâmetros de desenvolvimento analisados não apresentaram diferenças significativas entre os mutantes e controles, o que confirmou a hipótese de que as alterações fenotípicas somente são perceptíveis a partir de 3 semanas de vida. A caracterização comportamental do fenótipo também foi realizada nos mutantes em fundo genético C57BL/6, de ambos os sexos, com 8 semanas de idade. Em relação aos camundongos controle, nos mutantes houve aumento da presença de cauda em pé, da ataxia e do tremor; menor frequência de levantar e de limpeza do corpo (grooming); redução da coordenação motora, indicando evidente prejuízo motor. Também foram observadas respostas negativas à ansiedade e hiperatividade, mas não houve alteração na memória espacial dos mutantes. Os resultados indicaram que o mutante tremor apresentou prejuízos de origem no sistema nervoso central; demostraram também que o fenótipo observado coincide com as alterações descritas na literatura, sugerindo o gene Egr3 como possível candidato para a mutação. A caracterização fenotípica desse animal é importante no entendimento das alterações causadas pela mutação e se essa apresenta potencial como modelo para doenças neurológicas.

The autosomal recessive spontaneous mutation tremor (tr) was identified in the Swiss mice colony of the laboratory animal facility of the Department of Pathology, from Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia - Universidade de São Paulo. The mutants presented tremors, ataxia and audiogenic tonic convulsions as the main expressive characteristics. This mutation was moved from Swiss onto C57BL/6 by ten backcrosses (N10). Genetic mapping with microsatellite markers distributed through the mouse genome showed that the mutation is on 14 chromosome, between 33.21 and 38.21 cM, making Egr3 (Early Growth Response 3) a candidate gene. This study aimed to characterize the behavior phenotype of the tremor mice. Phenotypic characterization of the Swiss mutant mice was performed from birth to adulthood. The physical development points analyzed were: unfolding of the ears, eruption of the incisor teeth, opening the eyes, complete fur, weight gain and length, and sexual development. The reflexology development ones were: palmar grip, negative geotaxia, posture straightening and reaction to sound. On the 21day-old the open field test was performed to analyze the activity of the animals, and on the 60-day-old this task was repeated along with tests to analyze behavioral parameters. The tests performed in the open field were evaluated by parameters; 1) general activity and sensory system: vocalization, irritability, auricular reflex, tail flick, corneal reflex and response to touch; 2) psychomotor tests: hindquarter fall, surface-righting reflex, body tone and grasping strength; 3) evaluation of the central nervous system: tremors, straub tail, micturition and defecation. Other tests analyzed: behavior in elevated plus maze, motor coordination in balance beam test, spatial memory in T maze alternation test, and behavioral responses in forced swing and tail suspension tests. Except for the lower weight at weaning, the development parameters analyzed did not show significant differences between the mutants and controls, which confirmed the hypothesis that phenotypic changes are only perceptible after 3weeksold. The behavioral characterization of the phenotype was also performed on 8- week-old C57BL/6 mutants of both sexes. In comparison to the control mice, in the mutants there were an increase in the presence of straub tail, ataxia and tremor; less frequent rearing and grooming; less motor coordination, indicating evident motor impairment. Negative responses to anxiety and hyperactivity were also observed, but there was no change in the spatial memory of the mutants. The results indicated that the tremor mutant presented damages in the central nervous system; also showed that the phenotype coincides with the changes described in the literature, suggesting the Egr3 gene as a possible candidate for the mutation. The phenotypic characterization of this animal is important to clarify impairments caused by the genetic mutation, and also identify if this potential model could be useful to study neurological diseases.

Evaluation of effects of photooxidized Vespa orientalis venom on memory and learning in rats

Wasp venom is mixture of complex proteins that have several physical and pharmacological properties. The photochemical detoxification of Vespa orientalis venom is expected to generate photooxidized venom sac extract (PVSE). Antigenically active PVSE is obtained by exposing the venom sac extract (VSE) of Vespa orientalis to ultraviolet radiation in the presence of methylene blue. The aim of the present work was to evaluate the effect of PVSE on learning and memory of rats. Detoxification of PVSE was evident since treated mice had longer survival time than the group of mice treated with VSE. Photooxidized VSE of V. orientalis revealed enhancement on learning and memory by shortening the time to reach food (TRF) in T-maze. In a 28-day study with rats, we observed that PVSE significantly decreased transfer latency (TL) in elevated plus maze (EPM), significantly increased step down latency (SDL), diminished step down errors (SDE) and time spent in shock zone (TSS) in step down avoidance test. Thus, we concluded that although there is a possibility of employing PVSE in the treatment of Alzheimer, dementia or neurodegenerative illness as a non-herbal and non-synthetic alternative for patients who do not respond to available therapy, further investigation is still required.(AU)

Evaluation of effects of photooxidized Vespa orientalis venom on memory and learning in rats

Wasp venom is mixture of complex proteins that have several physical and pharmacological properties. The photochemical detoxification of Vespa orientalis venom is expected to generate photooxidized venom sac extract (PVSE). Antigenically active PVSE is obtained by exposing the venom sac extract (VSE) of Vespa orientalis to ultraviolet radiation in the presence of methylene blue. The aim of the present work was to evaluate the effect of PVSE on learning and memory of rats. Detoxification of PVSE was evident since treated mice had longer survival time than the group of mice treated with VSE. Photooxidized VSE of V. orientalis revealed enhancement on learning and memory by shortening the time to reach food (TRF) in T-maze. In a 28-day study with rats, we observed that PVSE significantly decreased transfer latency (TL) in elevated plus maze (EPM), significantly increased step down latency (SDL), diminished step down errors (SDE) and time spent in shock zone (TSS) in step down avoidance test. Thus, we concluded that although there is a possibility of employing PVSE in the treatment of Alzheimer, dementia or neurodegenerative illness as a non-herbal and non-synthetic alternative for patients who do not respond to available therapy, further investigation is still required.(AU)

Zinco como terapia no modelo experimental de autismo induzido pré-natalmente pelo ácido valpróico

O autismo é um transtorno complexo do desenvolvimento caracterizado por inúmeros prejuízos comportamentais, tais como perdas na comunicação, socialização e indução da inflexibilidade cognitiva. A reprodução de modelos experimentais de autismo é bastante importante no estudo desse transtorno. A exposição pré-natal ao VPA reproduz sintomas similares àqueles encontrados na condição humana de autismo. Apesar de o VPA ser considerado um provável teratógeno em humanos, pouco se sabe sobre seus mecanismos de ação, ou até mesmo, como ele é capaz de induzir o autismo. O VPA parece influenciar o metabolismo do zinco durante o período pré-natal, podendo comprometer o desenvolvimento fetal normal. Esse estudo foi dividido em duas partes: (1) reproduzir um modelo de autismo induzido por VPA pré-natal (400 mg/kg no GD 12,5) e (2) avaliar se a administração de zinco pré-natal (2 mg/kg 1h após) previne ou ameniza os prejuízos comportamentais e a expressão de TH-estriatal associados ao autismo causados pela exposição pré-natal ao VPA em ratos. Foram avaliados parâmetros reprodutivos, anormalidades comportamentais na comunicação (vocalização ultrassônica), comportamentos repetitivos e na cognição (labirinto em T) e interação social (comportamento de brincar), além de verificar o sistema dopaminérgico por meio da expressão proteica de TH-estriatal na prole masculina e feminina de ratas. O VPA causou danos reprodutivos, prejuízos na vocalização ultrassônica, comportamento repetitivo/restrito, inflexibilidade cognitiva, comprometimento na socialização com diminuição da brincadeira e redução nos níveis de TH- estriatal na prole masculina. A administração de zinco não foi capaz de impedir os danos reprodutivos causados pelo VPA, porém amenizou a inflexibilidade cognitiva e atenuou a brincadeira social, sem reestabelecer os níveis de TH-estriatal. A prole feminina foi menos afetada que a masculina, apresentando apenas a vocalização ultrassônica alterada. O zinco reestabeleceu esse dano. A redução da TH-estriatal na prole masculina sugere que, possivelmente o fenótipo tipo-autista investigado no presente estudo, esteja relacionado a modificações funcionais no sistema dopaminérgico.

Autism is a complex developmental disorder characterized by numerous behavioral impairments, such as communication, socialization and induction of cognitive inflexibility. Reproduction of experimental models of autism is an important tool in the study of this disorder. Prenatal exposure to VPA reproduces symptoms similar to those found in the human condition of autism. The VPA is known as a potential teratogen in humans and its mechanisms of action is not well understood. VPA appears to influence the zinc metabolism during the prenatal period, compromising normal fetal development. This study was done into two parts: (1st) obtain an autism model induced by prenatal VPA (400 mg/kg 12.5 GD) and (2nd) evaluate whether prenatal administration of zinc (2 mg/kg after 1h) prevents or reverses the behavioral impairments and protein striatal TH-expression associated with autism caused by prenatal exposure to VPA in rats. It was evaluated the reproductive parameters, abnormal behavior in the communication (ultrasonic vocalization test), repetitive behavior and cognitive capacity (T-maze test) and social interaction (play behavior test), and the evaluation of the dopaminergic system by quantification of TH-striatal expression in male and female offspring of rats. The VPA was able to cause reproductive damage, impairment in ultrasonic vocalization, repetitive/restricted behavior and cognitive inflexibility, impairment in socialization with decreased play behavior and reduction in striatal TH levels in male offspring. The zinc administration has not been able to prevent reproductive damage caused by VPA, but ameliorates the cognitive inflexibility and attenuated the social play behavior, without restoring TH-striatal levels. The offspring females were less affected as males, with alterations into ultrasonic vocalization only and zinc reestablished this damage. The reduction in striatal TH-male offspring suggests that the autistic-like phenotype, investigated in this study is, may be is related to functional modifications in the dopaminergic system.

Estudo das alterações imunológicas e comportamentais provocadas pelo crack em ratos adultos expostos à droga por via pulmonar

O crack, uma droga de abuso constituída principalmente por cocaína, continua sendo um grande problema social e de saúde pública. Apesar de vários estudos em modelos animais com outras formas de cocaína, raros são os relatos sobre os efeitos da exposição pulmonar ao crack em roedores, devido à dificuldade de realizar a exposição dos mesmos à droga, o que seria de grande valia, uma vez que eliminaria variáveis encontradas em usuários, como o uso de outras drogas. Assim, o propósito do presente estudo foi avaliar os efeitos tóxicos, imunotóxicos e ainda, alterações comportamentais de ratos Wistar machos expostos ao crack pela via pulmonar. Inicialmente, foram realizadas determinações de cocaína nas pedras de crack utilizadas e também, a quantidade de crack e tempo de exposição dos animais para obtenção de níveis séricos de cocaína semelhantes àqueles encontrados na literatura, e os dados obtidos foram de: 67% de cocaína no crack e a queima de 250 mg de crack, com exposição dos animais por 10 minutos acarretou em níveis plasmáticos próximos de 170 ng/mL de cocaína. Assim, em cada experimento foram utilizados 30 ratos divididos em 3 grupos iguais, um controle, um experimental e um grupo pair-fed, já que a cocaína promove efeitos anorexígenos que poderiam interferir nas avaliações comportamentais e imunológicas aqui estudadas, e que foram expostos ou não à fumaça resultante de 250 mg de crack, por 10 minutos, duas vezes ao dia, durante 28 dias. Ao final do período experimental, os animais foram submetidos à eutanásia para realização de avaliações bíoquimicas, hematológicas, histopatológicas, análise de órgãos-linfóides, avaliação das respostas imune inata (inflamatória), humoral e a avaliação da reação de hipersensibilidade do tipo IV. Ainda, ao longo do período experimental, estes mesmos animais foram avaliados quanto a possíveis alterações comportamentais e para tal foram utilizados 3 métodos distintos: avaliação cognitiva em labirinto em T, avaliação geral do comportamento em campo aberto e ainda, a avaliação de preferência ou aversão ao odor da droga. A exposição ao crack não resultou em alterações que caracterizem toxicidade em parâmetros clínicos, bioquímicos, hematológicos e histopatológicos; não foram observadas alterações com significado clínico nas avaliações do peso relativo, celularidade, morfometria de órgãos linfoides e fenotipagem de linfócitos esplênicos de ratos expostos à droga. Não houve efeitos imunomodulatórios nas avaliações do burst oxidativo e fagocitose de macrófagos peritoneais e de neutrófilos circulantes, assim como nas avaliações da produção de anticorpos T-dependentes e na reação de hipersensibilidade do tipo IV. Quanto às avaliações comportamentais, os animais expostos à droga apresentaram aumento da atividade locomotora, e uma maior preferência ao odor característico do crack, aparentemente sem prejuízo cognitivo. Em conclusão, a exposição de ratos 2 vezes ao dia, por 28 dias ao crack não promoveu alterações imunotóxicas; por outro lado, comportamentos clássicos da exposição à cocaína foram observados nos animais expostos, evidenciando que o modelo aqui utilizado será de grande utilidade para outros estudos que envolvam drogas de abuso, como possíveis estratégias terapêuticas e o melhor entendimento da toxicocinética de drogas utilizadas pela via pulmonar.

Crack cocaine, a drug of abuse that consists mainly of cocaine, remains as a major social and public health problem. Although several studies in animal models with other forms of cocaine, there are few scientific reports on the effects of pulmonary exposure to crack in rodents, this is due to the difficulty of performing their exposure, which would be of great value, since would eliminate variables observed in users, such as the use of other drugs. Initially, the concentration of cocaine in crack samples, as the amount of crack and time of exposure of the animals to obtain serum levels of cocaine similar to those found in the literature were determined, and the data obtained were: 67% of cocaine in crack, and 250 mg of crack, exposing the animals for 10 minutes resulted in plasma levels close to 170 ng/mL of cocaine. Thus, the purpose of this study was to evaluate the toxic effects, immunotoxic and behavioral changes of male Wistar rats exposed to crack cocaine. Thus, in each experiment were used 30 rats divided into three groups, one control, one experimental and one pair-fed, since it is known that cocaine promotes anorexic effects that may interfere with behavioral and immunological assessments that will be studied here, and who were exposed or not to the burning of 250 mg of crack, for 10 minutes, twice daily for 28 days. At the end of the experiment, the animals were euthanized to perform biochemical evaluation, hematological, histopathological, analysis of lymphoid organs, evaluation of innate immune responses (inflammatory), humoral and the assessment of the type IV hypersensitivity reaction. Still, throughout the experimental period, these same animals were evaluated for possible behavioral changes and were used three different methods: cognitive assessment in T-maze, overall assessment on open field behavior and the evaluation of preference or aversion to the odor of the drug. Exposure to crack cocaine, did not result in changes that characterize toxicity in clinical, biochemical, hematological and histopathological parameters; were not observed clinically meaningful changes in the relative weight ratings, cellularity, morphology of lymphoid organs and phenotyping of splenic lymphocytes from rats exposed to the drug. There was no immunomodulatory effect in the evaluations of oxidative burst and phagocytosis of peritoneal macrophages and in circulating neutrophils, and the assessments of the production of T-dependent antibodies and the type IV hypersensitivity reaction. With regard to behavioral assessments, the animals exposed to the drug showed increased locomotor activity, and greater preference to the characteristic odor of crack cocaine, apparently without cognitive impairment. In conclusion, in the exposure model to crack cocaine used here, immunotoxic changes were not evident; by contrast, classic behavior of cocaine exposure were observed in the animals exposed, indicating that the model used herein will be useful for the study of other parameters involving drugs of abuse, in evaluation of therapeutic strategies and a better understanding of drugs toxicokinetics used by the pulmonary route.

Behavior of rats after perinatal exposure to plastic collar impregnated with dichlorvos / Comportamento de ratos após exposição perinatal à coleira plástica impregnada com diclorvós

The use of plastic collars impregnated with the organophosphate dichlorvos is a measure taken in veterinary medicine to control ectoparasites in dogs and cats.  The aim of this study was to determine the effects of the use of plastic collars impregnated with this product (8.37%) in Wistar rats during the periods of pregnancy and lactation, as a cause of behavioral alterations in the offspring. No statistically significant differences were detected in the variables examined in open-field behavior for pups whose mothers were exposed to dichlorvos during pregnancy.  However, when exposure to the pesticide was during the lactation period, the pups showed prolonged immobility and decrease in the frequencies of grooming and urination, suggesting alterations in behavior. Although tests with the elevated T maze did not demonstrate any alteration suggesting an effect of the treatments on the anxiety of the animals, the results obtained in the evaluation of learning and memory, in the Morris water maze, revealed alterations in the female pups whose mothers were exposed to dichlorvos during the periods of pregnancy and lactation. This study showed that perinatal exposure of mothers to dichlorvos caused alterations in the behavior of offspring in open field and Morris water maze tests.   KEY WORDS: 2,2 - Dichlorovinyl dimethyl phosphate. Flea collar. Open field.

O organofosforado diclorvós impregnado em coleiras plásticas é um recurso utilizado em medicina veterinária para o controle de ectoparasitas de cães e gatos. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do uso de coleiras plásticas impregnadas com este produto (8,37%) em ratas Wistar durante os períodos de gestação ou lactação, como fonte de alterações comportamentais nos filhotes. Não se detectou diferenças estatisticamente significativas nas variáveis avaliadas no campo aberto, quando se analisou filhotes cujas mães foram expostas ao diclorvós durante o período de gestação. No entanto, quando a exposição ao praguicida ocorreu durante a fase de lactação, observou-se nos filhotes aumento do tempo de imobilidade e diminuição nas freqüências de auto-limpeza e micção, sugerindo alterações de caráter emocional. Embora a avaliação realizada com o labirinto em cruz elevado não ter demonstrado qualquer alteração que sugerisse efeito dos tratamentos sobre a ansied

Lipopolissacarídeo no início do período pré-natal como modelo experimental de autismo e prejuízos dopaminérgicos estriatais / Early prenatal lipopolysaccharide as a rat model of autism and striatal dopaminergic impairments

O transtorno do espectro autista atinge uma em cada 150 crianças. Sua etiologia ainda é desconhecida, apesar de fortes evidências de fatores genéticos e recentes achados de interferências ambientais, particularmente a ativação imune materna durante a gestação. Em nossos estudos prévios expusemos ratas Wistar no início da gestação ao lipopolissacarídeo (LPS), que mimetiza uma infecção bacteriana (100 µg/kg, intraperitoneal [i.p.], no dia gestacional [GD] 9,5) e observamos prejuízos no comportamento de brincar da prole masculina. Sabendo que esse teste é classicamente usado para avaliação de modelos animais de autismo e da ligação do autismo com fatores ambientais, propusemos que nosso modelo seria um modelo animal de autismo. Para avaliar essa possibilidade, foi objetivo do presente trabalho estudar se nosso modelo de LPS pré-natal (100 µg/kg, i.p., no GD 9,5) causaria os outros sintomas típicos de autistas: anormalidades na comunicação (avaliado pelo teste da vocalização ultrassônica), comportamentos repetitivos e inflexibilidade cognitiva (teste de alternação espontânea no labirinto em T), ausência de demonstração de medo em situações potencialmente perigosas (estímulo olfativo aversivo do odor de gato) e hiperatividade (atividade geral em campo aberto).

One child in about 150 children has autism spectrum disorder. Despite strong evidence of genetic factors and recent findings of environmental interferences, particularly maternal immune activation during pregnancy, autism etiology is still unknown. In our previous study, we exposed Wistar rats in the beginning of the gestation to lipopolysaccharide (LPS, 100 µg/kg, intraperitoneally [i.p.], on gestational day [GD] 9.5), which mimics a bacterial infection and observed impairments in the play behavior of male offspring. Knowing that play behavior is classically used to evaluate autism animal models and the link between autism and environmental factors, we proposed that our model would be an autism animal model. To evaluate this possibility, the aim of this study was to know whether our prenatal LPS model (100 µg/kg, i.p., on GD 9.5) causes other autism typical symptoms: communication abnormalities (evaluated by the ultrasonic vocalization test), repetitive behavior and cognitive inflexibility (T-maze spontaneous alternation test), absence of fear demonstration in potentially dangerous situations (aversive exposure to cat odor test) and hyperactivity (open field general activity). Because some autistic patients presents high levels of proinflammatory cytokines and cortisol as well as neuroinflammation, we quantified IL-1β, TNF-α and corticosterone serum levels, and studied astrocytes and microglia of striatum and olfactory bulb.

Lipopolissacarídeo no início do período pré-natal como modelo experimental de autismo e prejuízos dopaminérgicos estriatais / Early prenatal lipopolysaccharide as a rat model of autism and striatal dopaminergic impairments

O transtorno do espectro autista atinge uma em cada 150 crianças. Sua etiologia ainda é desconhecida, apesar de fortes evidências de fatores genéticos e recentes achados de interferências ambientais, particularmente a ativação imune materna durante a gestação. Em nossos estudos prévios expusemos ratas Wistar no início da gestação ao lipopolissacarídeo (LPS), que mimetiza uma infecção bacteriana (100 µg/kg, intraperitoneal [i.p.], no dia gestacional [GD] 9,5) e observamos prejuízos no comportamento de brincar da prole masculina. Sabendo que esse teste é classicamente usado para avaliação de modelos animais de autismo e da ligação do autismo com fatores ambientais, propusemos que nosso modelo seria um modelo animal de autismo. Para avaliar essa possibilidade, foi objetivo do presente trabalho estudar se nosso modelo de LPS pré-natal (100 µg/kg, i.p., no GD 9,5) causaria os outros sintomas típicos de autistas: anormalidades na comunicação (avaliado pelo teste da vocalização ultrassônica), comportamentos repetitivos e inflexibilidade cognitiva (teste de alternação espontânea no labirinto em T), ausência de demonstração de medo em situações potencialmente perigosas (estímulo olfativo aversivo do odor de gato) e hiperatividade (atividade geral em campo aberto). (AU)

One child in about 150 children has autism spectrum disorder. Despite strong evidence of genetic factors and recent findings of environmental interferences, particularly maternal immune activation during pregnancy, autism etiology is still unknown. In our previous study, we exposed Wistar rats in the beginning of the gestation to lipopolysaccharide (LPS, 100 µg/kg, intraperitoneally [i.p.], on gestational day [GD] 9.5), which mimics a bacterial infection and observed impairments in the play behavior of male offspring. Knowing that play behavior is classically used to evaluate autism animal models and the link between autism and environmental factors, we proposed that our model would be an autism animal model. To evaluate this possibility, the aim of this study was to know whether our prenatal LPS model (100 µg/kg, i.p., on GD 9.5) causes other autism typical symptoms: communication abnormalities (evaluated by the ultrasonic vocalization test), repetitive behavior and cognitive inflexibility (T-maze spontaneous alternation test), absence of fear demonstration in potentially dangerous situations (aversive exposure to cat odor test) and hyperactivity (open field general activity). Because some autistic patients presents high levels of proinflammatory cytokines and cortisol as well as neuroinflammation, we quantified IL-1β, TNF-α and corticosterone serum levels, and studied astrocytes and microglia of striatum and olfactory bulb. (AU)