Genetic characterization of Toxocara vitulorum in turkey by mitochondrial gene markers (cox1)

Background: Toxocara vitulorum is a involved in the Ascaridoidea family and is a large roundworm with a semi translucent, soft body surface and pinkish color. Female worms measure 8-30cm in length, male worms 6-25cm. The major hosts of T.vitulorum are buffalo (Bubalus bubalis) and cattle (Bos species) in the humid tropics of Asia, Africa and South America. The diagnosis of T. vitulorum infections is usually made by observing characteristic eggs in routine fecal examination. Serological methods are also used to diagnose Toxocariasis. However, in recent years, PCR, a new generation molecular diagnostic method, has been used. The genetic structure of T. vitulorum is little known compared with data available from other parasites. The present sutudy was designed to determine the T. vitulorum isolates by the genetic characterization of the mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I (cox1) gene.Materials, Methods & Results: Adult worms were collected from the feces of two calves (East Anatolian Red) during visits to the clinic at the Department of Internal Medicine of Van Yuzuncu Yil University, Faculty of Veterinary Medicine. Worms were washed thoroughly in 0.85 % saline to remove any debris and fixed into 70 % ethanol. After repeated and thoroughly washing the specimens, total genomic DNA of parasite extraction was performed be employing DNA extraction reagent kit (Thermo, GeneJET Genomic DNA Purification Kit) according to manufacturer’s recommendations. After DNA amplification, a 446 bp fragment of cox1 of T. vitulorum were obtained in all three isolates. All generated sequences were registered in GenBank database with accession numbers including MG905159, MG911729 and MG911730. The cox1 of T. vitulorum examined differed from another two isolates extracted from Germany beef cattle (KY313642.1) and Sri Lanka buffalo calf (FJ664617.1) at NCBI database.[...]

Genetic characterization of Toxocara vitulorum in turkey by mitochondrial gene markers (cox1)

Background: Toxocara vitulorum is a involved in the Ascaridoidea family and is a large roundworm with a semi translucent, soft body surface and pinkish color. Female worms measure 8-30cm in length, male worms 6-25cm. The major hosts of T.vitulorum are buffalo (Bubalus bubalis) and cattle (Bos species) in the humid tropics of Asia, Africa and South America. The diagnosis of T. vitulorum infections is usually made by observing characteristic eggs in routine fecal examination. Serological methods are also used to diagnose Toxocariasis. However, in recent years, PCR, a new generation molecular diagnostic method, has been used. The genetic structure of T. vitulorum is little known compared with data available from other parasites. The present sutudy was designed to determine the T. vitulorum isolates by the genetic characterization of the mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I (cox1) gene.Materials, Methods & Results: Adult worms were collected from the feces of two calves (East Anatolian Red) during visits to the clinic at the Department of Internal Medicine of Van Yuzuncu Yil University, Faculty of Veterinary Medicine. Worms were washed thoroughly in 0.85 % saline to remove any debris and fixed into 70 % ethanol. After repeated and thoroughly washing the specimens, total genomic DNA of parasite extraction was performed be employing DNA extraction reagent kit (Thermo, GeneJET Genomic DNA Purification Kit) according to manufacturers recommendations. After DNA amplification, a 446 bp fragment of cox1 of T. vitulorum were obtained in all three isolates. All generated sequences were registered in GenBank database with accession numbers including MG905159, MG911729 and MG911730. The cox1 of T. vitulorum examined differed from another two isolates extracted from Germany beef cattle (KY313642.1) and Sri Lanka buffalo calf (FJ664617.1) at NCBI database.[...](AU)

Ocorrência dos principais agentes bacterianos e parasitários em fezes diarreicas de bezerros búfalos nos estados de São Paulo e Paraná

There are about 3 million buffalos in Brazil, spread through all of the Brazilian states; with mean annual growth of 12%. In spite of that, to the best of our knowledge few studies looking for advances in the industry have been done. Due to the etiological complexity of buffalo diarrhea and the lack of information in this area, this aimed at developing a clinical evaluation on the causes of buffalo calves bacterial and parasitical diarrhea in dairy farms of the states of São Paulo and Paraná. The survey was done in farms located in the cities of São João da Boa Vista, Dourado, Pirassununga, Registro, Pariquera Açu, Pilar do Sul (SP), and Santana do Itararé (PR). From March, 2010, to June, 2011, 53 diarrhea samples were collected and screened for endoparasite and bacteria; 45.28% (24) were positive for Eimeria spp.; 26.42% (14) had Strongyloidea; and 1.88% (1) had Toxocara vitulorum. In the bacteriological test, 97.83% (45) had E. coli, but only two were considered pathogenic (E. coli STEC); 2.17% had Klebsiella pneumonia and none presented Salmonella spp. In this study, the mainly causative agent of buffalo diarrhea was Eimeria spp., and the poor hygiene in installations and breeding failure are important factors on this diarrhea occurrence.

A população de bubalinos estimada no Brasil é de aproximadamente 3 milhões de animais, encontrando-se distribuídos em todos os Estados brasileiros, com crescimento médio anual de 12%. Apesar disso, os trabalhos realizados buscando os avanços na bubalinocultura são escassos. Em função da complexidade etiológica da diarreia em bubalinos e da falta de informações recentes nesta área, o presente estudo teve como objetivo avaliar a ocorrência dos principais agentes bacterianos e parasitários envolvidos na diarreia de bezerros búfalos lactentes, de explorações leiteiras semi-intensivas e intensivas em regiões dos estados de São Paulo e Paraná. De março de 2010 a junho de 2011, foram colhidas 53 amostras para exame coproparasitológico e 46 amostras para o exame bacteriológico de animais com quadro de diarreia nos municípios paulistas de São João da Boa Vista, Dourado, Pirassununga, Registro, Pariquera Açu, Pilar do Sul e uma propriedade no estado do Paraná, município de Santana do Itararé. No exame parasitológico, 45,28% (24) foram positivos para Eimeria spp., 26,42% (14) para Strongyloidea e 1,88 (1) para Toxocara vitulorum. No exame bacteriológico, 97,83%, (45) das amostras foram positivas para E. coli, contudo, somente duas foram consideradas patogênicas (E. coliSTEC). Em uma amostra (2,17%) isolou-se Klebsiella pneumoniae; já a presença de Salmonella spp. não foi constatada. Para o presente estudo, a presença de endoparasitas foi bastante relevante, principalmente os casos Eimeria spp., sendo a higiene das instalações e falhas de manejo fatores importantes na ocorrência de diarreia em bezerros búfalos no estado de São Paulo.

Ocorrência dos principais agentes bacterianos e parasitários em fezes diarreicas de bezerros búfalos nos estados de São Paulo e Paraná / Occurrence of the main bacterial and parasite agents on diarrhetic feces of buffalo calves in the states of São Paulo and Paraná

A população de bubalinos estimada no Brasil é de aproximadamente 3 milhões de animais, encontrando-se distribuídos em todos os Estados brasileiros, com crescimento médio anual de 12%. Apesar disso, os trabalhos realizados buscando os avanços na bubalinocultura são escassos. Em função da complexidade etiológica da diarreia em bubalinos e da falta de informações recentes nesta área, o presente estudo teve como objetivo avaliar a ocorrência dos principais agentes bacterianos e parasitários envolvidos na diarreia de bezerros búfalos lactentes, de explorações leiteiras semi-intensivas e intensivas em regiões dos estados de São Paulo e Paraná. De março de 2010 a junho de 2011, foram colhidas 53 amostras para exame coproparasitológico e 46 amostras para o exame bacteriológico de animais com quadro de diarreia nos municípios paulistas de São João da Boa Vista, Dourado, Pirassununga, Registro, Pariquera Açu, Pilar do Sul e uma propriedade no estado do Paraná, município de Santana do Itararé. No exame parasitológico, 45,28% (24) foram positivos para Eimeria spp., 26,42% (14) para Strongyloidea e 1,88 (1) para Toxocara vitulorum. No exame bacteriológico, 97,83%, (45) das amostras foram positivas para E. coli, contudo, somente duas foram consideradas patogênicas (E. coli STEC). Em uma amostra (2,17%) isolou-se Klebsiella pneumoniae; já a presença de Salmonella spp. não foi constatada. Para o presente estudo, a presença de endoparasitas foi bastante relevante, principalmente os casos Eimeria spp., sendo a higiene das instalações e falhas de manejo fatores importantes na ocorrência de diarreia em bezerros búfalos no estado de São Paulo.(AU)

There are about 3 million buffalos in Brazil, spread through all of the Brazilian states; with mean annual growth of 12%. In spite of that, to the best of our knowledge few studies looking for advances in the industry have been done. Due to the etiological complexity of buffalo diarrhea and the lack of information in this area, this aimed at developing a clinical evaluation on the causes of buffalo calves bacterial and parasitical diarrhea in dairy farms of the states of São Paulo and Paraná. The survey was done in farms located in the cities of São João da Boa Vista, Dourado, Pirassununga, Registro, Pariquera Açu, Pilar do Sul (SP), and Santana do Itararé (PR). From March, 2010, to June, 2011, 53 diarrhea samples were collected and screened for endoparasite and bacteria; 45.28% (24) were positive for Eimeria spp.; 26.42% (14) had Strongyloidea; and 1.88% (1) had Toxocara vitulorum. In the bacteriological test, 97.83% (45) had E. coli, but only two were considered pathogenic (E. coli STEC); 2.17% had Klebsiella pneumonia and none presented Salmonella spp. In this study, the mainly causative agent of buffalo diarrhea was Eimeria spp., and the poor hygiene in installations and breeding failure are important factors on this diarrhea occurrence.(AU)

Ocorrência dos principais agentes bacterianos e parasitários em fezes diarreicas de bezerros búfalos nos estados de São Paulo e Paraná / Occurrence of the main bacterial and parasite agents on diarrhetic feces of buffalo calves in the states of São Paulo and Paraná

A população de bubalinos estimada no Brasil é de aproximadamente 3 milhões de animais, encontrando-se distribuídos em todos os Estados brasileiros, com crescimento médio anual de 12%. Apesar disso, os trabalhos realizados buscando os avanços na bubalinocultura são escassos. Em função da complexidade etiológica da diarreia em bubalinos e da falta de informações recentes nesta área, o presente estudo teve como objetivo avaliar a ocorrência dos principais agentes bacterianos e parasitários envolvidos na diarreia de bezerros búfalos lactentes, de explorações leiteiras semi-intensivas e intensivas em regiões dos estados de São Paulo e Paraná. De março de 2010 a junho de 2011, foram colhidas 53 amostras para exame coproparasitológico e 46 amostras para o exame bacteriológico de animais com quadro de diarreia nos municípios paulistas de São João da Boa Vista, Dourado, Pirassununga, Registro, Pariquera Açu, Pilar do Sul e uma propriedade no estado do Paraná, município de Santana do Itararé. No exame parasitológico, 45,28% (24) foram positivos para Eimeria spp., 26,42% (14) para Strongyloidea e 1,88 (1) para Toxocara vitulorum. No exame bacteriológico, 97,83%, (45) das amostras foram positivas para E. coli, contudo, somente duas foram consideradas patogênicas (E. coli STEC). Em uma amostra (2,17%) isolou-se Klebsiella pneumoniae; já a presença de Salmonella spp. não foi constatada. Para o presente estudo, a presença de endoparasitas foi bastante relevante, principalmente os casos Eimeria spp., sendo a higiene das instalações e falhas de manejo fatores importantes na ocorrência de diarreia em bezerros búfalos no estado de São Paulo.(AU)

There are about 3 million buffalos in Brazil, spread through all of the Brazilian states; with mean annual growth of 12%. In spite of that, to the best of our knowledge few studies looking for advances in the industry have been done. Due to the etiological complexity of buffalo diarrhea and the lack of information in this area, this aimed at developing a clinical evaluation on the causes of buffalo calves bacterial and parasitical diarrhea in dairy farms of the states of São Paulo and Paraná. The survey was done in farms located in the cities of São João da Boa Vista, Dourado, Pirassununga, Registro, Pariquera Açu, Pilar do Sul (SP), and Santana do Itararé (PR). From March, 2010, to June, 2011, 53 diarrhea samples were collected and screened for endoparasite and bacteria; 45.28% (24) were positive for Eimeria spp.; 26.42% (14) had Strongyloidea; and 1.88% (1) had Toxocara vitulorum. In the bacteriological test, 97.83% (45) had E. coli, but only two were considered pathogenic (E. coli STEC); 2.17% had Klebsiella pneumonia and none presented Salmonella spp. In this study, the mainly causative agent of buffalo diarrhea was Eimeria spp., and the poor hygiene in installations and breeding failure are important factors on this diarrhea occurrence.(AU)

Inibição da migração larval em tecidos de camundongos imunizados com antígenos de Toxocara vitulorum / Larval migration inhibition in tissues of mice immunized with Toxocara vitulorum antigens

Três grupos de camundongos foram imunizados com os seguintes antígenos de Toxocara vitulorum: fluido perientérico (pe) do parasita adulto, antígenos extrato solúvel bruto (Ex) e excretor/ secretor (ES) de larvas infectantes. Estes três grupos foram comparados com o grupo controle, não imunizado. Todos os grupos foram desafiados uma semana após a imunização com ovos infectantes deste parasita e necropsiados em três períodos diferentes após o desafio: sete horas, quatro dias e 30 dias pós-infecção. Realizou-se a contagem de ovos e de larvas nas fezes dos camundongos e o grupo imunizado com antígeno do fluído perientérico (Pe) foi o que eliminou a maior quantidade de larvas. Após a necropsia, realizou-se a retirada do intestino delgado, intestino grosso, fígado, pulmão, coração, cérebro e músculos (diafragma, língua e quadríceps femoral). Estes tecidos sofrearam digestão péptica e as larvas foram identificadas e contadas em cada um deles. O maior número de larvas foi encontrado no intestino grosso no período de sete horas após o desafio, em todos os grupos examinados, porém, este número foi significativamente inferior nos grupos imunizados. Com quatro dias após o desafio, as larvas concentravam-se, preferencialmente, no fígado e pulmões, e os grupos imunizados apresentaram uma quantidade muito menor de larvas, significativo para o fígado e pulmão em relação ao grupo controle. No período de 30 dias após o desafio, as larvas recuperadas no cérebro e no músculo, mesmo que em pequena quantidade, demonstraram capacidade de alcançar estes tecidos. A efetividade destaimunização baseou-se na redução do número de larvas de T. vitulorum no fígado no quarto dia pós-infecção em relação ao controle, que foi de 86%, 79% e 58% para o antígeno Ex, Pe e ES, respectivamente. O camundongo foi considerado um modelo apropriado para estudar a relação parasita-hospedeiro das infecções por T. vitulorum.(AU)

Detection of IgG antibodies to Toxocara vitulorum soluble larval extract (Ex) by Western Blotting in the colostrum and serum of buffalo cows and calves / Detecção de anticorpos IgG aos antígenos extratos solúveis (Ex) de larvas de Toxocara vitulorum pelo Western Blotting no colostro e no soro de vacas e bezerros búfalos

Toxacara vitulorum é um nematódeo que acomete principalmente bezerros búfalos na faixa etária de um a três meses de vida, causando grande morbidade ou mortalidade quando não tratados. A pesquisa objetivou a obtenção do antígeno extrato larval solúvel bruto(Ex) de larvas infectantes de T. vitulorum, bem como a separação das frações antigênicas pelo SDS-PAGE e pelo "Western blotting" (WB), utilizando-se soros imunes e colostros de búfalos naturalmente infectados com T. vitulorum. O acompanhamento do quadro parasitário dos bezerros búfalos.também foi realizado. Pôde-se verificar que o antígeno revelou 11 (11, 13, 16,22,25, 32, 43, 53, 68, 82 e 96 kDa) bandas protéicas. Quando analisadas pelo WB, cinco dessas bandas (43, 53, 68, 82 e 96 kDa) foram reconhecidas pelos anticorpos presentes nas amostras de soros e de colostros das búfalas e de soros dos bezerros búfalos com um de vida após mamarem o colostro. No entanto, somente as bandas de 53 a 96 kDa que foram as mais evidentes persistiram nos grupos de bezerros búfalos que se encontravam tanto no pico da infecção como no período de expulsão ou pós-expulsão dos helmintos adultos do intestino. As bandas antigênicas de 68 e de 92 kDa, por serem as mais proeminentes podem ser consideradas componentes para futuras vacinas contra T. vitulorum em búfalos.(AU)

Identification of enteropathogens from buffalo calves with and without diarrhoea in the Ribeira Valley, State of São Paulo, Brazil / Identificação de enteropatógenos em bezerros búfalos, com e sem diarréia, do Vale do Ribeira, Estado de São Paulo, Brasil

Faecal samples of 106 buffalo calves aged 3 to 45 days were collected sequentially, once a week, during six weeks for parasitologic examination. For bacteriologic and virologic exams, faecal samples were collected from all diarrhoeic and the same amount on non-diarrhoeic calves. Blood samples from calves were collected at 3 to 10 days of age for serum IgG determination. Eimeria spp, Strongyloides papillosus and Toxocara vitulorum were the most common parasites. E. coli, Enterobacter cloacae and Klebsiella pneumoniae were the enteropathogens most frequently found (alone or in association with other microrganisms). Heat-stable (STa) enterotoxin was detected in 5 out of 34 samples of E. coli isolated from diarrhoeic calves. Among the antimicrobials tested susceptibilities to norphloxacin, chloramphenicol and gentamycin were the most common. None of the samples had characteristic rotavirus RNA bands in PAGE-electrophoresis. No association was observed between low levels of IgG and diarrhoea.

Foram avaliados semanalmente, por um período de seis semanas, os exames parasitológicos de amostras fecais, diarréicas e não-diarréicas, de 106 bezerros búfalos, com 3 a 45 dias de idade, provenientes do Vale do Ribeira-SP. Para os exames bacteriológicos e virológicos, foram colhidas amostras fecais de todos os búfalos diarréicos, e igual amostragem de animais sem diarréia. Amostras de sangue foram colhidas dos búfalos neonatos, entre o terceiro e décimo dias de idade, para determinação dos níveis de imunoglobulina G (IgG). Nos exames parasitológicos, verificou-se a maior ocorrência de Eimeria spp, Strongyloides papillosus e Toxocara vitulorum. Dentre os agentes bacterianos, observou-se maior freqüência da Escherichia coli (E. coli), Enterobacter cloacae e Klebsiella pneumoniae (isolados ou em associação). Detectou-se a enterotoxina STa em 5 das 34 amostras de E. coli isoladas de búfalos com diarréia. A norfloxacina, cloranfenicol e gentamicina foram os antimicrobianos mais efetivos frente aos microrganismos isolados. Nenhuma das amostras apresentou bandeamento característico para rotavírus, a partir da técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida. Não foi constatada nos animais examinados a associação entre a ocorrência de diarréia e baixos níveis de IgG sérica.

Resposta celular imune-inflamatória e de células caliciformes no intestino delgado de bezerros búfalos naturalmente infectados por Toxocara vitulorum

Para estudar a cinética populacional de células imune/inflamatórias na infecção natural por Toxocara vitulorum em bezerros búfalos, realizou-se a quantificação de mastócitos, eosinófilos, linfócitos intraepiteliais (LIE) e células caliciformes na camada intraepitelial e de macrófagos na parede do intestino delgado. Para isto, amostras de tecidos foram retiradas do duodeno, jejuno e íleo de seis grupos de animais, de acordo com o resultado do exame coprológico, ou seja: animais que estavam no início ou ascensão (1), no pico (2) do parasitismo, durante as fases de declínio ou expulsão (3), e de pós-expulsão dos parasitas (4), além de dois grupos controles de animais não parasitados por T. vitulorum com idades médias entre 30 (C30) e 50 (C50) dias. Pelo estudo morfológico, feito através de mensurações de todas as camadas da parede do intestino delgado, constatou-se somente uma significativa atrofia vilosa no duodeno, durante as fases de ascensão, de pico e de expulsão do parasita, mas a hipertrofia muscular não foi observada. Concluiu-se que a infecção pelo nematódeo T. vitulorum em bezerros búfalos foi responsável pela hiperplasia celular (LIEs, células caliciformes, eosinófilos e mastócitos) na camada intraepitelial e pela interação entre mastócitos e processos nervosos na mucosa, nos plexos submucoso e mioentérico. Como estas alterações celulares predomindando no pico da infecção normalizaram-se após a expulsão, concluiu-se também que elastiveram participação no mecanismo imunológico celular de controle e expulsão do parasita pelo hospedeiro. O macrófago presente em maior quantidade na fase da pós-expulsão sugeriu uma importante participação destas células na recuperação das lesões inflamatórias nesta infecção

The populational kinetics of immune/inflammatory cells was studied in the wall of the small intestine from buffalo calves naturally infected with Toxocara vitulorum. Samples of tissues were removed from duodenum, jejunum and ileum of four groups of animals during the beginning of the infection, at the peak of egg output, during the period of expulsion and post-expulsion of the worms, as well as from uninfected calves. Cells (mast cells, eosinophils, intraepithelial lymphocytes - IEL and goblet cells) present in the epithelial layer (intraepithelial) of the small intestine were counted. In the duodenum, jejunum and ileum, the population of mast cells, eosinophils and lymphocytes increased significantly during the peak of the infection. Goblet cell numbers increased also during the beginning and at the peak of the infection. The decline of the number of these cells occurred during the periods of expulsion of the worms reaching to uninfected control counts at the post-expulsion period indicated a role of these cells in the process of expulsion of T. vitulorum by the buffalo calves. Morphological examinations showed a significant vilar atrophy, particularly in the duodenum during the beginning, peak and during the phase of expulsion of the worms, but smooth muscle hypertrophy or other alteration was not observed in any phase of the infection. In conclusion, the infection by T. vitulorum in buffalo calves elicited cellular hyperplasy of LIEs, goblet cells, eosinophils and mast cells in the intraepithelial layer of the small intestines and association between mast cells and nervous process in the mucosa and in the submucosal and mioentérico plexa, these cellular changes might be important for the worm expulsion. The macrophages presents in high numbers in the post-expulsion phase might have important role in the recovery of the infection

Inibição da migração de larvas para os tecidos de camundongos pela imunização com antígenos de Toxocara vitulorum e o estudo da histopatologia das lesões

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