Investigation of the histopathological level of Ki-67, caspase-3 expressions of the effects of hesperidin on wound healing in the rat esophagus

Purpose: The effects of hesperidin application on the wound caused by esophageal burns were investigated in this study. Methods: Wistar albino rats were divided into three groups: Control group: only 1 mL of 0.09% NaCl was administered i.p. for 28 days; Burn group: An alkaline esophageal burn model was created with 0.2 mL of 25% NaOH orally by gavage­1 mL of 0.09% NaCl was administered i.p. for 28 days; Burn+Hesperidin group: 1 mL of 50 mL/kg of hesperidin was given i.p. for 28 days to rats after burn injury. Blood samples were collected for biochemical analysis. Esophagus samples were processed for histochemical staining and immunohistochemistry. Results: Malondialdehyde (MDA) and myeloperoxidase (MPO) levels were significantly increased in Burn group. Glutathione (GSH) content and histological scores of epithelialization, collagen formation, neovascularization was decreased. After hesperidin treatment, these values were significantly improved in the Burn+Hesperidin group. In the Burn group, epithelial cells and muscular layers were degenerated. Hesperidin treatment restored these pathologies in Burn+Hesperidin group. Ki-67 and caspase-3 expressions were mainly negative in control group; however, the expression was increased in the Burn group. In the Burn+Hesperidin group, Ki-67 and caspase-3 immune activities were reduced. Conclusion: Hesperidin dosage and application methods can be developed as an alternative treatment for burn healing and treatment.

Protective effect of Mucuna pruriens (L) DC. var. pruriens seed extract on apoptotic germ cells in ethanolic male rats / Efeito protetor de Mucuna pruriens (L) DC. var. extrato de semente de pruriens, em células germinativas apoptóticas em ratos machos etanólicos

Thai Mucuna pruriens (L.) DC. var pruriens (T-MP) seed containing levodopa (L-DOPA) and antioxidant capacity has been shown to improve sexual behavior and male reproductive parameters in rats treated with ethanol (Eth). However, its protective effect on testicular apoptotic germ cells has never been reported. This study aimed to investigate the potential effects of T-MP seed extract on expressions of caspase, proliferating cell nuclear antigen (PCNA), and dopamine D2 receptor (D2R) proteins in Eth rats. Thirty-six male Wistar rats were divided into four groups (9 animals/group), including control, Eth, T-MP150+Eth, and T-MP300+Eth, respectively. Control rats received distilled water, and Eth rats received Eth (3g/kg BW; 40%v/v). The T-MP groups were treated with T-MP seed extract at a dose of 150 or 300 mg/kg before Eth administration for 56 consecutive days. The results showed that the seminiferous tubule diameter and epithelial height were significantly increased in both T-MP treated groups compared to the Eth group. Additionally, the caspase-9 and -3, and PCNA expressions were decreased, but D2R expression was markedly increased in T-MP groups. It was concluded that T-MP seed extract could protect testicular apoptosis induced by Eth via changes in caspase, PCNA, and D2R protein expressions.

Thai Mucuna pruriens (L.) DC. var pruriens (T-MP) contendo levodopa (L-DOPA) e capacidade antioxidante demonstrou melhorar o comportamento sexual e os parâmetros reprodutivos masculinos em ratos tratados com etanol (Eth). No entanto, seu efeito protetor sobre células germinativas apoptóticas testiculares nunca foi relatado. Este estudo teve como objetivo investigar os efeitos potenciais do extrato de semente de T-MP na expressão de proteínas de caspase, antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) e receptor de dopamina D2 (D2R) em ratos Eth. Trinta e seis ratos Wistar machos foram divididos em quatro grupos (9 animais/grupo), incluindo controle, Eth, T-MP150+Eth e T-MP300+Eth, respectivamente. Ratos controle receberam água destilada e ratos Eth receberam Eth (3g/kg PC; 40%v/v). Os grupos T-MP foram tratados com extrato de semente de T-MP na dose de 150 ou 300 mg/kg antes da administração de Eth por 56 dias consecutivos. Os resultados mostraram que o diâmetro dos túbulos seminíferos e a altura epitelial foram significativamente aumentados em ambos os grupos tratados com T-MP em comparação com o grupo Eth. Além disso, as expressões de caspase-9 e -3 e de PCNA diminuíram, mas a expressão de D2R aumentou acentuadamente nos grupos T-MP. Concluiu-se que o extrato de semente de T-MP pode proteger a apoptose testicular induzida por Eth através de alterações na expressão de proteínas caspase, PCNA e D2R.

Epizootiology of canine distemper in naturally infected dogs in Goiânia, Brazil / Epizootiologia da cinomose em cães naturalmente infectados em Goiânia, Brasil

Although the epizootiological profile of canine distemper in Goiânia is unknown, there is clinical evidence for a high incidence of canine distemper virus (CDV) infection among dogs. Therefore, this study determined the epizootiological characteristics of canine distemper in naturally infected dogs. Data of 46 dogs that tested positive for the CDV based on immunochromatography or reverse transcription-polymerase chain reaction were collected. Data on the sex, breed, age, and vaccination status were obtained from these dogs, and extraneural and neural sign analyses were performed. Although, the infected dogs belonged to both sexes, different breeds, and different age groups, a greater proportion of cases were seen in adults (1-6 years), undefined breeds, and unvaccinated dogs. Among the CDV-positive dogs, 10.87% had been vaccinated. In addition, 4.35% showed neural signs, 8.69% showed extraneural signs, and 86.96% showed both. High lethality was observed, with viral antigen and/or DNA detected in 82.61% dead dogs. Only 8.70% of the total CDV-infected dogs remained alive at the time of their assessment.

Embora o perfil epizootiológico da cinomose canina em Goiânia seja desconhecido, há evidencia clínica para alta incidência da infecção pelo vírus da cinomose (CDV) nos cães. Este estudo objetivou determinar as características epizootiológicas da cinomose em cães naturalmente infectados. Dados de 46 cães positivos por imunocromatografia ou reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa para o CDV foram coletados. Dados sobre sexo, raça, idade, estado vacinal foram obtidos desses cães, e os sinais extraneurais e neurais foram analisados. Animais de ambos os sexos, diferentes raças e idades foram acometidos. A maior proporção de casos foi vista em adultos (de um a seis anos), sem raça definida e não vacinados. Dentre os cães positivos, 10,87% haviam sido vacinados. Em adição, 4,35% apresentaram sinais neurais, 8,69% sinais extraneurais e 86,96% mostraram ambos. Alta letalidade foi observada, com o antígeno viral e/ou DNA identificado em 82,61% dos cães que foram a óbito. Apenas 8,7% dos cães infectados permaneceram vivos até o momento da avaliação.

Sensitization with Eustrongylides sp. (Nematoda: Dioctophymatidae) antigens induce production of specific IgG and IgE in murine model / Sensibilização com antígenos de Eustrongylides sp. (Nematoda: Dioctophymatidae) induzindo a produção de IgG e IgE em modelo murino

Fish consumption plays an important role in human diet. Hoplias malabaricus, commonly known as traíra, is a freshwater fish widely appreciated in several Brazilian states and frequently infected by Eustrongylides sp. fourth-instar larvae (L4). The aim of the present study was to evaluate allergenic potential of Eustrongylides sp. L4 crude extract (CEE). BALB/c mice were immunized intraperitoneally (IP) by 10 g CEE with 2 mg of aluminum hydroxide on days 0 and 35. Specific IgG and IgE antibody levels were determined after immunization and cellular immunity was evaluated by assessing intradermal reaction in ear pavilion. Epicutaneous sensitization was performed in dorsal region by antigen exposure using a Finn-type chamber containing 50 g of CEE or saline solution, followed by evaluation of specific antibody levels. IP immunization resulted in a gradual increase in IgG antibody levels and transitory IgE production. Significant increase in ear thickness was observed in cellular hypersensitivity reaction. In case of antigen exposure by epicutaneous route, CEE was able to induce meaningfully increased levels of specific IgG and IgE antibodies as well as heightened cellular immunity. Both intraperitoneal immunization and epicutaneous contact with Eustrongylides sp. larval antigens were observed for first time to be capable of inducing immunological sensitization in mice.(AU)

Consumir peixe constitui papel importante na dieta humana. Hoplias malabaricus, comumente chamado de traíra, peixe de água doce largamente apreciado no Brasil, é frequentemente infectado com larvas de quarto estágio (L4) de Eustrongylides sp. O presente estudo objetivou avaliar o potencial alergênico do Extrato Bruto de L4 de Eustrongylides sp. (EBE). Camundongos BALB/c foram imunizados intraperitonealmente (IP) por 10 g de EBE com 2 mg de hidróxido de alumínio nos dias 0 e 35. Após imunização, determinaram-se níveis específicos de anticorpos IgG e IgE e avaliou-se a imunidade celular pela reação intradérmica no pavilhão auricular. Realizou-se sensibilização epicutânea na região dorsal pela exposição ao antígeno, utilizando-se câmara tipo Finn, contendo 50 g de CEE ou solução salina. Após exposições, foram avaliados níveis específicos de anticorpos. Na imunização via IP, houve aumento gradual nos níveis de anticorpos IgG e produção de IgE transitória. Foi observado aumento significativo na espessura do pavilhão auricular na reação de hipersensibilidade celular. Na exposição ao antígeno pela via epicutânea, o EBE induziu aumento significante nos níveis de anticorpos IgG e IgE específicos e induziu imunidade celular. Pela primeira vez, observou-se que a imunização intraperitoneal e contato epicutâneo com antígenos larvares de Eustrongylides sp. são capazes de induzir sensibilização imunológica em camundongos.(AU)

Dosagem sérica do marcador tumoral CA 15. 3 em cadelas portadoras de neoplasias mamárias pelo método de eletroquimioluminescência / Serum dosage of the tumor marker Ca 15. 3 in bitches presenting mammary neoplasia with the chemiluminescence method

The objective of the present study was to analyze the serum levels of the tumor marker Ca15.3 in healthy bitches and those with mammary neoplasms, correlating results with tumor type, clinical staging, time until presentation, and presence of ulceration and vascularization. For the study, 30 bitches with mammary tumors and 30 healthy bitches (control group) were selected. Histopathology was performed for identification of tumor type, and blood was collected for measurement of serum concentration of the marker via the chemiluminescence method using a commercial kit. A higher frequency of malignant neoplasms was observed (76.7%), with a higher quantity of carcinoma in mixed tumor (26.7%). Regarding serum concentration of the marker Ca15.3, there was no difference in serum values when comparing the means from bitches with neoplasia and healthy bitches, nor when comparing the other characteristics. The majority of results for serum concentration of Ca15.3, whether in bitches with neoplasia or in healthy bitches, was zero. It is concluded that the measurement of the marker Ca15.3 using the chemiluminescence method and commercial kits for humans did not offer significant results that would make this method or this marker a useful tool for patient monitoring and evaluation of the prognosis of bitches with mammary neoplasms.(AU)

Dosagem sérica do marcador tumoral CA 15. 3 em cadelas portadoras de neoplasias mamárias pelo método de eletroquimioluminescência / Serum dosage of the tumor marker Ca 15. 3 in bitches presenting mammary neoplasia with the chemiluminescence method

The objective of the present study was to analyze the serum levels of the tumor marker Ca15.3 in healthy bitches and those with mammary neoplasms, correlating results with tumor type, clinical staging, time until presentation, and presence of ulceration and vascularization. For the study, 30 bitches with mammary tumors and 30 healthy bitches (control group) were selected. Histopathology was performed for identification of tumor type, and blood was collected for measurement of serum concentration of the marker via the chemiluminescence method using a commercial kit. A higher frequency of malignant neoplasms was observed (76.7%), with a higher quantity of carcinoma in mixed tumor (26.7%). Regarding serum concentration of the marker Ca15.3, there was no difference in serum values when comparing the means from bitches with neoplasia and healthy bitches, nor when comparing the other characteristics. The majority of results for serum concentration of Ca15.3, whether in bitches with neoplasia or in healthy bitches, was zero. It is concluded that the measurement of the marker Ca15.3 using the chemiluminescence method and commercial kits for humans did not offer significant results that would make this method or this marker a useful tool for patient monitoring and evaluation of the prognosis of bitches with mammary neoplasms.(AU)

Production of glycosylphosphatidylinositol-anchored proteins for vaccines and directed binding of immunoliposomes to specific cell types

Liposomes are highly useful carriers for delivering drugs or antigens. The association of glycosylphosphatidylinositol (GPI)-anchored proteins to liposomes potentially enhances the immunogenic effect of vaccine antigens by increasing their surface concentration. Furthermore, the introduction of a universal immunoglobulin-binding domain can make liposomes targetable to virtually any desired receptor for which antibodies exist. Methods: We developed a system for the production of recombinant proteins with GPI anchors and histidine tags and Strep-tags for simplified purification from cells. This system was applied to i) the green fluorescent protein (GFP) as a reporter, ii) the promising Plasmodium falciparum vaccine antigen PfRH5 and iii) a doubled immunoglobulin Fc-binding domain termed ZZ from protein A of Staphylococcus aureus. As the GPI-attachment domain, the C-terminus of murine CD14 was used. After the recovery of these three recombinant proteins from Chinese hamster ovary (CHO) cells and association with liposomes, their vaccine potential and ability to target the CD4 receptor on lymphocytes in ex vivo conditions were tested. Results: Upon immunization in mice, the PfRH5-GPI-loaded liposomes generated antibody titers of 103 to 104, and showed a 45% inhibitory effect on in vitro growth at an IgG concentration of 600 µg/mL in P. falciparum cultures. Using GPI-anchored ZZ to couple anti-CD4 antibodies to liposomes, we created immunoliposomes with a binding efficiency of 75% to CD4+ cells in splenocytes and minimal off-target binding. Conclusions: Proteins are very effectively associated with liposomes via a GPI-anchor to form proteoliposome particles and these are useful for a variety of applications including vaccines and antibody-mediated targeting of liposomes. Importantly, the CHO-cell and GPI-tagged produced PfRH5 elicited invasion-blocking antibodies qualitatively comparable to other approaches.(AU)

Production of glycosylphosphatidylinositol-anchored proteins for vaccines and directed binding of immunoliposomes to specific cell types

Liposomes are highly useful carriers for delivering drugs or antigens. The association of glycosylphosphatidylinositol (GPI)-anchored proteins to liposomes potentially enhances the immunogenic effect of vaccine antigens by increasing their surface concentration. Furthermore, the introduction of a universal immunoglobulin-binding domain can make liposomes targetable to virtually any desired receptor for which antibodies exist. Methods: We developed a system for the production of recombinant proteins with GPI anchors and histidine tags and Strep-tags for simplified purification from cells. This system was applied to i) the green fluorescent protein (GFP) as a reporter, ii) the promising Plasmodium falciparum vaccine antigen PfRH5 and iii) a doubled immunoglobulin Fc-binding domain termed ZZ from protein A of Staphylococcus aureus. As the GPI-attachment domain, the C-terminus of murine CD14 was used. After the recovery of these three recombinant proteins from Chinese hamster ovary (CHO) cells and association with liposomes, their vaccine potential and ability to target the CD4 receptor on lymphocytes in ex vivo conditions were tested. Results: Upon immunization in mice, the PfRH5-GPI-loaded liposomes generated antibody titers of 103 to 104, and showed a 45% inhibitory effect on in vitro growth at an IgG concentration of 600 µg/mL in P. falciparum cultures. Using GPI-anchored ZZ to couple anti-CD4 antibodies to liposomes, we created immunoliposomes with a binding efficiency of 75% to CD4+ cells in splenocytes and minimal off-target binding. Conclusions: Proteins are very effectively associated with liposomes via a GPI-anchor to form proteoliposome particles and these are useful for a variety of applications including vaccines and antibody-mediated targeting of liposomes. Importantly, the CHO-cell and GPI-tagged produced PfRH5 elicited invasion-blocking antibodies qualitatively comparable to other approaches.(AU)

Construction and characterization of a recombinant vaccine encoding the nucleocapsid protein gene of avian infectious bronchitis virus / Construção e caracterização de uma vacina recombinante codificando o gene da proteina do nucleocapsideo do virus da bronquite infecciosa das galinhas

A vacinação é a forma mais utilizada para prevenir a bronquite infecciosa causada pelo vírus da bronquite infecciosa das galinhas (IBV). Contudo, as vacinas convencionais são incapazes de diferenciar aves infectadas de vacinadas. No presente trabalho foi construído, caracterizado, e avaliado como candidato vacinal, um adenovírus recombinante expressando o gene N do IBV. O gene N foi clonado em um adenovírus humano tipo 5 defectivo e transfectado para as células HEK-293A para gerar rAd5_N. Após o vetor ser obtido como esperado e a confirmação da expressão da proteína N em HEK-293ª, foi realizada inoculação pela via oculo-nasal na dose de 10 7 TCID 50 /0,1mL para imunização de galinhas livres de patógenos específicos (SPF). A resposta imunológica do Ad5_N e a proteção contra o desafio ao IBV foram avaliadas e comparadas com uma vacina viva comercial. Não foram detectados anticorpos anti-IBV em aves vacinadas com o Ad5_N. A vacina comercial induziu anticorpos detectáveis a partir do 7º dia pós-vacinal. Em aves vacinadas com o Ad5_N não houve aumento na expressão de IFNγ. Neste estudo, o rAd5_N obtido não conferiu proteção contra desafio com IBV-M41. Os resultados indicam a necessidade de avaliar adenovírus recombinantes expressando outros genes do IBV.(AU)

Construction and characterization of a recombinant vaccine encoding the nucleocapsid protein gene of avian infectious bronchitis virus / Construção e caracterização de uma vacina recombinante codificando o gene da proteina do nucleocapsideo do virus da bronquite infecciosa das galinhas

A vacinação é a forma mais utilizada para prevenir a bronquite infecciosa causada pelo vírus da bronquite infecciosa das galinhas (IBV). Contudo, as vacinas convencionais são incapazes de diferenciar aves infectadas de vacinadas. No presente trabalho foi construído, caracterizado, e avaliado como candidato vacinal, um adenovírus recombinante expressando o gene N do IBV. O gene N foi clonado em um adenovírus humano tipo 5 defectivo e transfectado para as células HEK-293A para gerar rAd5_N. Após o vetor ser obtido como esperado e a confirmação da expressão da proteína N em HEK-293ª, foi realizada inoculação pela via oculo-nasal na dose de 10 7 TCID 50 /0,1mL para imunização de galinhas livres de patógenos específicos (SPF). A resposta imunológica do Ad5_N e a proteção contra o desafio ao IBV foram avaliadas e comparadas com uma vacina viva comercial. Não foram detectados anticorpos anti-IBV em aves vacinadas com o Ad5_N. A vacina comercial induziu anticorpos detectáveis a partir do 7º dia pós-vacinal. Em aves vacinadas com o Ad5_N não houve aumento na expressão de IFNγ. Neste estudo, o rAd5_N obtido não conferiu proteção contra desafio com IBV-M41. Os resultados indicam a necessidade de avaliar adenovírus recombinantes expressando outros genes do IBV.(AU)

Experimental infection by Brucella ovis: changes in NTPDase, 5-nucleotidase and acetylcholinesterase associated cerebral oxidative stress

Background: Changes in purinergic and cholinergic signaling have been demonstrated in various pathologies associatedwith inflammation; however, the changes in brucellosis caused by the Gram-negative coccobacillus Brucella ovis are notknown. B. ovis is generally asymptomatic in ewes. Hepatosplenomegaly has been described in B. ovis, a non-zoonoticspecies, characterized by an extravascular inflammatory response. Purinergic system enzymes are closely involved withthe modulation of the immune system, pro- and anti-inflammatory events. The objective of this study was to investigatethe role of ectonucleotidases and cholinesterases in the brains of mice experimentally infected with B. ovis.Materials, Methods & Results: Forty-eight animals were divided into two groups: control (n = 24) and infected (n = 24).In group infected, 100 µL containing 1.3 x 107 UFC B. ovis /mL via intraperitoneal was used in inoculation. The brainswere collected from the animals on days 7, 15, 30 and 60 post-infection (PI). We measured levels of TBARS (substancesreactive to thiobarbituric acid) and ROS (reactive oxygen species) in the brain. The activity of NTPDase (using ATP andADP as substrate) and 5-nucleotidase (using AMP as substrate) were evaluated in brain in addition to histopathologicalanalysis. No histopathological lesions were observed in the control group nor the infected group at days 7, 15, and 30 PI.However, multifocal areas with moderate microgliosis in the cerebral cortex were observed at day 60 PI in the infectedanimals. B. ovis DNA was detected in brain. During the course of infection, B. ovis caused greater lipid peroxidation inthe brains of infected animals than in the control group at day 60 PI. No significant results were observed at 7, 15 or day30 PI. Similarly, there was significantly more reactive oxygen species at day 60 PI in brains of infected animals than inthe control group. NTPDase activity (using ATP ...(AU)

Ativação de células de memória na produção de anticorpos e na expressão de células IgM positivas no baço de tilápias-do-nilo / Activation of memory cells in the antibody production and the expression of IgM positive cells in Nile tilapia spleen

O presente trabalho avaliou o papel do baço no armazenamento e na reativação das linhagens de células B, representadas por células IgM positivas imunomarcadas no tecido esplênico, bem como a funcionalidade dessas células, sobre a cinética dos linfócitos e na produção sistêmica de anticorpos em tilápias-do-nilo (Oreochromis niloticus). Foram separados dois grupos: grupo memória, constituído por peixes previamente imunizados com hemácia de carneiro a 2,5%, para a geração da memória imune, e o grupo naive, que recebeu o mesmo volume de solução salina a 0,65%. Após 32 dias, os dois grupos foram submetidos a uma nova dose do antígeno na mesma concentração, volume e via de inoculação. A reativação dos clones de memória foi evidenciada pelo aumento do número de células IgM positivas no baço do grupo memória no dia zero/pré-imune. Além disso, o mesmo grupo apresentou aumento dos títulos de anticorpos séricos no 14º dia e no número absoluto de linfócitos no 21º dia em relação ao grupo naive. Esses resultados sugerem que o baço não seja apenas um local de armazenamento, mas também de reativação de células B de memória em tilápia-do-nilo.(AU)

This work aimed to evaluate the role of the spleen in storage and reactivation of the memory B cells, represented by IgM positive cells and the systemic production of sheep antibodies anti-red cell in Nile tilapia (Oreochromis niloticus). Two groups were established: the memory group, containing fish previously immunized with a 2,5% sheep anti-red cell, to generate the immune memory; and the naive group, containing fish that received a 0,65% saline solution. After 32 days, both groups were subjected to a new dose of the same antigen at the same concentration, volume, and inoculation via. The memory clones reactivation was correlated to the increase of the IgM positive cells in the spleen in the memory group at 0 day. The memory group showed an increase in the absolute number of lymphocytes at 21 days and an increase in the antibodies at 14 days after inoculation when compared to the naive group. The results suggest that the spleen may be a storage and reactivation place of memory B cells in Nile tilapia.(AU)

Ativação de células de memória na produção de anticorpos e na expressão de células IgM positivas no baço de tilápias-do-nilo / Activation of memory cells in the antibody production and the expression of IgM positive cells in Nile tilapia spleen

O presente trabalho avaliou o papel do baço no armazenamento e na reativação das linhagens de células B, representadas por células IgM positivas imunomarcadas no tecido esplênico, bem como a funcionalidade dessas células, sobre a cinética dos linfócitos e na produção sistêmica de anticorpos em tilápias-do-nilo (Oreochromis niloticus). Foram separados dois grupos: grupo memória, constituído por peixes previamente imunizados com hemácia de carneiro a 2,5%, para a geração da memória imune, e o grupo naive, que recebeu o mesmo volume de solução salina a 0,65%. Após 32 dias, os dois grupos foram submetidos a uma nova dose do antígeno na mesma concentração, volume e via de inoculação. A reativação dos clones de memória foi evidenciada pelo aumento do número de células IgM positivas no baço do grupo memória no dia zero/pré-imune. Além disso, o mesmo grupo apresentou aumento dos títulos de anticorpos séricos no 14º dia e no número absoluto de linfócitos no 21º dia em relação ao grupo naive. Esses resultados sugerem que o baço não seja apenas um local de armazenamento, mas também de reativação de células B de memória em tilápia-do-nilo.(AU)

This work aimed to evaluate the role of the spleen in storage and reactivation of the memory B cells, represented by IgM positive cells and the systemic production of sheep antibodies anti-red cell in Nile tilapia (Oreochromis niloticus). Two groups were established: the memory group, containing fish previously immunized with a 2,5% sheep anti-red cell, to generate the immune memory; and the naive group, containing fish that received a 0,65% saline solution. After 32 days, both groups were subjected to a new dose of the same antigen at the same concentration, volume, and inoculation via. The memory clones reactivation was correlated to the increase of the IgM positive cells in the spleen in the memory group at 0 day. The memory group showed an increase in the absolute number of lymphocytes at 21 days and an increase in the antibodies at 14 days after inoculation when compared to the naive group. The results suggest that the spleen may be a storage and reactivation place of memory B cells in Nile tilapia.(AU)

Epidemiological characterization and risk factors associated with lentiviral infection of small ruminants at animal fairs in the semiarid Sertão region of Pernambuco, Brazilian semiarid / Caracterização epidemiológica e fatores de risco associados às lentiviroses em pequenos ruminantes comercializados em feira de animais no Sertão de Pernambuco, semiárido brasileiro

Animal agglomerations at commercial events such as trade fairs represent an important facilitator in infectious disease transmission. Thus, it is crucial to understand the epidemiology of infectious diseases in small ruminants. The objective of this study was to examine lentiviral presence in goats and sheep traded at the animal fair of Tabira city (Sertão region of Pernambuco) and identify possible risk factors associated with infection. We collected serum samples from 233 crossbred goats and 119 crossbred sheep, belonging to 12 breeders, at the Tabira livestock fair from November 2014 to June 2015. An epidemiological questionnaire was used to analyze the risk factors. Agar gel immunodiffusion (AGID) and western blotting (WB) were performed to diagnose small ruminant lentivirus (SRLV) infection. In the AGID test, we used maedi-visna virus (MVV) antigens for sheep and caprine arthritis/encephalitis virus (strain Cork) (CAEV-Co) antigen for goats. The WB analysis used CAEV-Co antigen for both species. Variables from the questionnaire were analyzed with univariate and multivariate statistics. One seropositive goat but no sheep was identified via AGID. According to the WB results, 15/233 goats (6.44%; CI95% = 3.94 - 10.35%) and 8/119 sheep (6.72%; CI95% = 3.45 - 12.71%) were seropositive, totaling 23/352 reactive animals (6.53%; CI95% = 4.39 - 9.61%) from 12 herds. Annual vermifugation of the animals was a significantrisk factor (odds ratio = 5.9; CI95% = 1.7-19.8; p = 0.04) for disease in goats, but no variables associatedwith infection risks were identified in sheep. We concluded that SRLV was present in goats and sheep atthe animal fair. Western blots were more sensitive than AGID for SRLV diagnosis. Practices aiming toimprove sanitary management may reduce the risk of infection in goats. All studied herds included animalsidentified as seropositive for SRLV. Therefore, we recommend adopting measures that increase diseasediagnosis while intensifying...(AU)

Aglomerações de animais em eventos comerciais do tipo feiras de negócios representam um importante elo na transmissão de doenças infecciosas, resultando na importância do conhecimento acerca da epidemiologia das doenças de pequenos ruminantes. Desta forma, o objetivo desse estudo foi determinar a presença das lentiviroses em caprinos e ovinos comercializados na feira de animais da cidade de Tabira, Sertão de Pernambuco, bem como a identificação de possíveis fatores de risco associados à enfermidade. Foram coletadas amostras de soro de 233 caprinos e 119 ovinos, sem raça definida, pertencentes a doze proprietários, na feira de animais vivos do município no período de novembro de 2014 a junho de 2015. Foi aplicado questionário epidemiológico para análise dos fatores de risco. O diagnóstico da infecção por Lentivirus de Pequenos Ruminantes (LVPR) nas espécies foi realizado pela Imunodifusão em ágar-gel (IDGA) e Western Blotting (WB). Na IDGA foram utilizados antígenos de Vírus Maedi-visna (MVV) para ovinos e de vírus da Artrite-Encefalite Caprina (CAEV), cepa CAEV- Cork para caprinos, e no WB foi utilizado a cepa CAEV- Cork como antígeno para ambas espécies. As variáveis obtidas no questionário foram submetidas a análises estatísticas univariada e multivariada. Pela técnica de IDGA foi possível identificar um caprino soropositivo. Não foi detectada positividade nos ovinos. No WB 15/233 (6,44%; IC95% = 3,94 10,35%) caprinos e 8/119 (6,72%; IC95% = 3,45 12,71%) ovinosforam soropositivos, totalizando 23/352 (6,53%; IC95% = 4,39 9,61%) animais reagentes. Os dozerebanhos estudados apresentaram animais soropositivos. Vermifugar os animais anualmente (odds ratio= 5,9; IC 95% = 1,7 19,8; p = 0,04) foi identificado como fator de risco para enfermidade em caprinos.Não foram identificadas variáveis associadas ao risco de infecção em ovinos. Concluiu-se que os LVPRestão presentes em caprinos e ovinos comercializados na feira de animais. A técnica de WB...(AU)

AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DA VIA PD-1/PDL-1 E DAS PROTEÍNAS CTLA-4, RANK-RANK-L E IFN-y EM MASTOCITOMAS CUTÂNEOS DE ALTO GRAU EM CÃES: NOVAS PERSPECTIVAS DE USO DA IMUNOTERAPIA

Os mastócitos caninos são considerados os tumores malignos cutâneos mais frequentes. São potencialmente metastáticos. A escolha do tratamento dependerá da presença ou ausência dos fatores prognósticos negativos, incluindo metástases dos linfonodos regionais, entretanto, até o momento não existe um marcador prognóstico aplicado em linfonodos que pudesse estar associado aos demais fatores prognósticos. A imunoterapia em medicina veterinária está sendo desenvolvida recentemente. Os pontos de controle imunológicos (CTLA-4, PD-1 / PD-L1) desempenham um papel vital na inibição das respostas imunes e na promoção da auto-tolerância através da modulação da atividade das células T, ativando a apoptose de células T específicas do antígeno e inibindo a apoptose de células T regulatórias. Estratégias terapêuticas que modulam o microambiente tumoral e reforçam a migração de células T para o tumor são fundamentais no controle de diversos tipos de câncer. Uma dessas estratégias é o uso de moduladores da imunidade inata, como os agonistas do receptor toll-like (TLRs). Nesse cenário, a nanoimunoterapia Onco- Therad induz a via de sinalização do interferon mediada por TLR4, resultando em potentes efeitos antitumorais. Além disso, a inibição da via de sinalização RANK / RANK-L regulou negativamente a expressão de PD-1 / PD-L1 no microambiente tumoral. O objetivo deste estudo é avaliar a expressão dos checkpoints e anticorpos RANK - RANK-L e IFN- em MCT de alto grau e correlacionados com a expressão de PD-1 / PD-L1 em linfonodos associada a características clínicas.

Canine mast cell tumors (MCTs) being considered the most frequent cutaneous malignant tumor. Are potentially metastatic. The choice of treatment will depend of the presence or absence of negative prognostic factors, including regional lymph nodes metastasis, however, until now does not exist a prognostic marker applied in lymph nodes that could be associated with the others prognostic factors. Immunotherapy in veterinary medicine recently being developed. The immune checkpoints (CTLA-4 , PD-1/PD-L1) plays a vital role in inhibiting immune responses and promoting self-tolerance through modulating the activity of T-cells, activating apoptosis of antigen-specific T cells and inhibiting apoptosis of regulatory T cells. Therapeutic strategies that modulate the tumor microenvironment and reinforce the migration of T cells to the tumor are fundamental in the control of several types of cancers. One of these strategies is the use of innate immunity modulators, such as agonists of toll-like receptor (TLRs). In this scenario, OncoTherad nano-immunotherapy induces TLR4-mediated interferon signaling pathway, resulting in potent antitumor effects. Also, inhibition of RANK/ RANK-L signaling pathway downregulated PD-1/PD-L1 expression on tumor microenvironment. The main of this study is evaluate the expression of checkpoints and antibodies RANK - RANK-L and IFN- in MCT high grade and correlated with the expression of PD-1/PD-L1 in lymph nodes associated with clinical characteristics.

Safety and immunogenicity of a glycoprotein E gene-deleted bovine herpesvirus 1 strain as a candidate vaccine strain / Atenuação e imunogenicidade de uma cepa recombinante do herpesvírus bovino tipo 1 defectiva na glicoproteína E

A glycoprotein E-deleted Brazilian bovine herpesvirus 1 (BoHV-1gE) was tested regarding to safety and immunogenicity. Intramuscular inoculation of young calves with a high virus dose did not result in clinical signs or virus shedding during acute infection or after dexamethasone administration. Calves vaccinated once IM (group I) or subcutaneously (group II) with live BoHV-1gE or twice with inactivated virus plus aluminum hydroxide (group IV) or Montanide (group V) developed VN titers of 2 to 8 (GMT:2); 2 to 4 (GMT:1.65); 2 to 16 (GMT:2.45) and 2 to 128 (GMT:3.9), respectively. All BoHV-1gE vaccinated calves remained negative in an anti-gE ELISA. Lastly, six young calves vaccinated with live BoHV-1gE and subsequently challenged with a virulent BoHV-1 strain shed less virus and developed only mild and transient nasal signs comparing to unvaccinated calves. Thus, the recombinant BoHV-1gE is safe and immunogenic for calves and allows for serological differentiation by a gE-ELISA test.(AU)

Um isolado brasileiro de herpesvírus bovino tipo 1, contendo uma deleção na glicoproteína E (gE - BoHV-1gE) foi submetido a testes para avaliar a sua segurança e imunogenicidade em bovinos. Bezerros foram submetidos à inoculação intramuscular com uma alta dose viral e não demonstraram sinais clínicos ou excreção viral durante a fase aguda ou após tentativa de reativação viral pela administração de dexametasona. Bezerros que receberam uma dose do vírus vivo, contendo a deleção na gE, pela via intramuscular (grupo I) ou pela via subcutânea (grupo II) ou duas doses do vírus inativado utilizando o adjuvante hidróxido de alumínio (grupo IV) ou Montanide (grupo V), desenvolveram títulos de anticorpos neutralizantes de 2 a 8 (GMT: 2); 2 a 4 (GMT: 1,65); 2 a 16 (GMT: 2,25) e de 2 a 128 (GMT: 3,9), respectivamente. Todos os bezerros vacinados se mantiveram soronegativos quando utilizado um kit ELISA específico para a gE. Para o teste de segurança, seis bezerros foram vacinados com o vírus vivo BoHV-1gE, sendo estes posteriormente desafiados com uma cepa virulenta de BoHV-1. Estes bezerros excretaram menos vírus e desenvolveram apenas sinais clínicos moderados e transitórios quando comparados com dados coletados de quatro animais não-vacinados. Com base nestes resultados, podemos confirmar que o vírus do BoHV-1 que contém a deleção na gE (BoHV-1gE) é seguro e suficientemente imunogênico para bezerros e permite a diferenciação sorológica entre os animais vacinados e infectados perante a a um teste ELISA commercial específico para a gE.(AU)

Safety and immunogenicity of a glycoprotein E gene-deleted bovine herpesvirus 1 strain as a candidate vaccine strain / Atenuação e imunogenicidade de uma cepa recombinante do herpesvírus bovino tipo 1 defectiva na glicoproteína E

A glycoprotein E-deleted Brazilian bovine herpesvirus 1 (BoHV-1gEΔ) was tested regarding to safety and immunogenicity. Intramuscular inoculation of young calves with a high virus dose did not result in clinical signs or virus shedding during acute infection or after dexamethasone administration. Calves vaccinated once IM (group I) or subcutaneously (group II) with live BoHV-1gEΔ or twice with inactivated virus plus aluminum hydroxide (group IV) or Montanide™ (group V) developed VN titers of 2 to 8 (GMT:2); 2 to 4 (GMT:1.65); 2 to 16 (GMT:2.45) and 2 to 128 (GMT:3.9), respectively. All BoHV-1gEΔ vaccinated calves remained negative in an anti-gE ELISA. Lastly, six young calves vaccinated with live BoHV-1gEΔ and subsequently challenged with a virulent BoHV-1 strain shed less virus and developed only mild and transient nasal signs comparing to unvaccinated calves. Thus, the recombinant BoHV-1gEΔ is safe and immunogenic for calves and allows for serological differentiation by a gE-ELISA test.(AU)

Um isolado brasileiro de herpesvírus bovino tipo 1, contendo uma deleção na glicoproteína E (gE - BoHV-1gEΔ) foi submetido a testes para avaliar a sua segurança e imunogenicidade em bovinos. Bezerros foram submetidos à inoculação intramuscular com uma alta dose viral e não demonstraram sinais clínicos ou excreção viral durante a fase aguda ou após tentativa de reativação viral pela administração de dexametasona. Bezerros que receberam uma dose do vírus vivo, contendo a deleção na gE, pela via intramuscular (grupo I) ou pela via subcutânea (grupo II) ou duas doses do vírus inativado utilizando o adjuvante hidróxido de alumínio (grupo IV) ou Montanide™ (grupo V), desenvolveram títulos de anticorpos neutralizantes de 2 a 8 (GMT: 2); 2 a 4 (GMT: 1,65); 2 a 16 (GMT: 2,25) e de 2 a 128 (GMT: 3,9), respectivamente. Todos os bezerros vacinados se mantiveram soronegativos quando utilizado um kit ELISA específico para a gE. Para o teste de segurança, seis bezerros foram vacinados com o vírus vivo BoHV-1gEΔ, sendo estes posteriormente desafiados com uma cepa virulenta de BoHV-1. Estes bezerros excretaram menos vírus e desenvolveram apenas sinais clínicos moderados e transitórios quando comparados com dados coletados de quatro animais não-vacinados. Com base nestes resultados, podemos confirmar que o vírus do BoHV-1 que contém a deleção na gE (BoHV-1gEΔ) é seguro e suficientemente imunogênico para bezerros e permite a diferenciação sorológica entre os animais vacinados e infectados perante a a um teste ELISA commercial específico para a gE.(AU)

Influence of apoptosis on liver and spleen resistance in dogs with visceral leishmaniosis / Influência da apoptose na resistência hepática e esplênica de cães com leishmaniose visceral

Abstract The aim of this study was to evaluate apoptosis and parasite load in the liver and spleen of dogs with visceral leishmaniosis (VL), using immunohistochemistry. Liver and spleen samples from 71 dogs with VL were used. The parasite load in the spleen and liver showed significant difference between organs in infected group (P=0.0219). The density of the parasite load in the spleen (median=2.4) was higher than liver (median=0.8). Immunodetection of apoptotic cells was predominant in lymphocytes and differ between the infected and control group in spleen (P=0.0307) and liver (P=0.0346). There was a significant correlation between apoptosis and parasite load (P = 0.0084; r=0.3104) only in the spleen of the infected group, where it was observed that, when increasing the number of apoptotic cells increases the parasitic load. It was concluded that the liver and spleen of infected dogs presented greater numbers of cells undergoing apoptosis (lymphocytes) than the control group, thus suggesting that this process may be contributing towards the survival of Leishmania in these organs, because lymphocyte in apoptosis did not have the ability to present and recognize the antigen, allowing the survival of the parasite.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a apoptose e a carga parasitária no fígado e baço de cães com leishmaniose visceral (LV), pela técnica de imuno-histoquímica. Foram utilizadas amostras de fígado e baço de 71 cães com LV. A carga parasitária no baço e fígado mostrou diferença significativa entre os órgãos no grupo infectado (P=0,0219). A densidade da carga de parasita no baço (média=2,4) foi maior do que no fígado (média=0,8). A imunodetecção de células em apoptose foi predominante nos linfócitos, com diferenças entre o grupo infectado e controle no baço (P=0,0307) e fígado (P=0,0346). Houve uma correlação positiva fraca entre apoptose e carga parasitária (P=0,0084; r=0,3104) apenas no baço do grupo infectado, onde observou-se que quando aumentava o número de células em apoptose aumentava a carga parasitária. Concluiu-se que o fígado e o baço de cães infectados apresentam um maior número de células que sofrem apoptose (linfócitos) do que o grupo controle, sugerindo que este processo possa contribuir para a sobrevivência de Leishmania nestes órgãos, pois os linfócitos em apoptose não tiveram a capacidade de apresentar e reconhecer o antígeno, permitindo a sobrevivência do parasita.

Influence of apoptosis on liver and spleen resistance in dogs with visceral leishmaniosis / Influência da apoptose na resistência hepática e esplênica de cães com leishmaniose visceral

Abstract The aim of this study was to evaluate apoptosis and parasite load in the liver and spleen of dogs with visceral leishmaniosis (VL), using immunohistochemistry. Liver and spleen samples from 71 dogs with VL were used. The parasite load in the spleen and liver showed significant difference between organs in infected group (P=0.0219). The density of the parasite load in the spleen (median=2.4) was higher than liver (median=0.8). Immunodetection of apoptotic cells was predominant in lymphocytes and differ between the infected and control group in spleen (P=0.0307) and liver (P=0.0346). There was a significant correlation between apoptosis and parasite load (P = 0.0084; r=0.3104) only in the spleen of the infected group, where it was observed that, when increasing the number of apoptotic cells increases the parasitic load. It was concluded that the liver and spleen of infected dogs presented greater numbers of cells undergoing apoptosis (lymphocytes) than the control group, thus suggesting that this process may be contributing towards the survival of Leishmania in these organs, because lymphocyte in apoptosis did not have the ability to present and recognize the antigen, allowing the survival of the parasite.(AU)

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a apoptose e a carga parasitária no fígado e baço de cães com leishmaniose visceral (LV), pela técnica de imuno-histoquímica. Foram utilizadas amostras de fígado e baço de 71 cães com LV. A carga parasitária no baço e fígado mostrou diferença significativa entre os órgãos no grupo infectado (P=0,0219). A densidade da carga de parasita no baço (média=2,4) foi maior do que no fígado (média=0,8). A imunodetecção de células em apoptose foi predominante nos linfócitos, com diferenças entre o grupo infectado e controle no baço (P=0,0307) e fígado (P=0,0346). Houve uma correlação positiva fraca entre apoptose e carga parasitária (P=0,0084; r=0,3104) apenas no baço do grupo infectado, onde observou-se que quando aumentava o número de células em apoptose aumentava a carga parasitária. Concluiu-se que o fígado e o baço de cães infectados apresentam um maior número de células que sofrem apoptose (linfócitos) do que o grupo controle, sugerindo que este processo possa contribuir para a sobrevivência de Leishmania nestes órgãos, pois os linfócitos em apoptose não tiveram a capacidade de apresentar e reconhecer o antígeno, permitindo a sobrevivência do parasita.(AU)

Desenvolvimento e imunogenicidade de uma vacina de aplicação intravaginal contra o alphaherpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5) associada a subunidade B recombinante da enterotoxina termolábil de Escherichia coli (rLTB)

O sistema imune de mucosa representa a barreira inicial frente a diversos patógenos 13 que utilizam estas superfícies como porta de entrada no organismo, como é o caso 14 dos alphaherpesvírus bovinos (BoHV). Estes vírus utilizam as mucosas, 15 principalmente nasal e genital, como ponto inicial de replicação, seguido de 16 disseminação local, viremia sistêmica e disseminação neuronal. Devido à grande 17 importância das vias mucosas na transmissão dos BoHV, torna-se evidenciado o 18 interesse no desenvolvimento de vacinas que propiciem imunidade de mucosa 19 contra estes vírus. No presente estudo, 63 fêmeas bovinas da raça Braford foram 20 divididas em sete grupos de nove animais e foram inoculadas por via intravaginal 21 com BoHV-5 inativado, associado à subunidade B recombinante da enterotoxina 22 termolábil de E. coli (rLTB) como segue: G1 (2-hidroxietilcelulose + BoHV-5 + rLTB), 23 G2 (2-hidroxietilcelulose + BoHV-5), G3 (Poloxâmero 407 + BoHV-5 + rLTB), G4 24 (Poloxâmero 407 + BoHV-5), G5 (BoHV-5 + rLTB), G6 (Controle negativo) e G7 25 (Controle positivo). A resposta humoral local e sistêmica induzida nos animais 26 inoculados foi mensurada por meio do teste ELISA indireto (IgA e IgG) e de 27 soroneutralização, e a resposta celular por Elisa direto quantitativo (IL-2 e IFN-28 Gama). Como resultados, na mucosa vaginal, apesar do grupo G5 proporcionar os 29 maiores níveis de IgG, os grupos experimentais com polímeros (G1 e G3) 30 demonstraram-se superiores estatisticamente em relação ao grupo controle positivo 31 (G7), assim como, com relação aos níveis de IgA observados na mucosa vaginal 32 aos 30, 60 e 90 dias após a primeira inoculação. Os grupos G1 e G3 também 33 proporcionaram títulos superiores de anticorpos neutralizantes (log2) em relação aos 34 demais tratamentos (p<0,01) 90 dias pós inoculação, evidenciando a eficiência dos 35 polímeros testados como sistema de entrega do antígeno. Já na mucosa nasal, 36 houve incremento dos níveis de IgA e IgG com o uso das vacinas dos grupos G1 e 37 G3, em relação ao controle positivo, G7 (p<0,05) aos 60 e 90 dias após a primeira 38 inoculação, o que enfatiza a forte relação entre os sistemas de mucosa. A 39 inoculação das vacinas experimentais também resultou em aumento nos níveis de 40 IgA e IgG no soro dos animais, mensurado por ELISA indireto, além de 41 apresentarem títulos de anticorpos neutralizantes aos 60 e 90 dias, detectados 42 através de soroneutralização. Os maiores títulos de anticorpos neutralizantes foram 43 proporcionados pelo grupo G5 (sem polímeros e intramuscular), entretanto, os níveis 44 de IL-2 e IFN-Gama obtidos com o uso dos polímeros foram superiores aos demais 1 grupos aos 30, 60 e 90 dias após primeira inoculação. A vacina intravaginal 2 demonstrou-se capaz de incrementar os níveis de IgA e IgG e de interleucinas no 3 soro e nas mucosas nasal e vaginal dos bovinos imunizados. Estes dados 4 comprovam a capacidade da vacina de aplicação intravaginal em bovinos em 5 estimular uma resposta imune local e sistêmica, além de corroborar a atividade 6 imunoestimulante, em mucosas, da rLTB. Deste modo, esta via de administração de 7 vacinas torna-se uma alternativa interessante, principalmente quando se objetiva 8 gerar proteção local contra patógenos que utilizam as superfícies mucosas como 9 porta de entrada no organismo.

The mucosal immune system represents the initial barrier against several pathogens 13 that use these surfaces as a gateway to the organism, such as bovine 14 alphaherpesviruses (BoHV). These viruses use mucous membranes, mainly nasal 15 and genital, as the initial point of replication, followed by local dissemination, 16 systemic viremia and neuronal dissemination. Due to the great importance of the 17 mucous pathways in the transmission of BoHV, the interest in the development of 18 vaccines that provide mucosal immunity against these viruses becomes evident. In 19 the present study, 63 Braford bovine females were divided into seven groups of nine 20 animals and were inoculated intravaginally with inactivated BoHV-5, associated with 21 the recombinant B subunit of the E. coli thermolabile enterotoxin (rLTB) as follows: 22 G1 (2-hydroxyethylcellulose + BoHV-5 + rLTB), G2 (2-hydroxyethylcellulose + BoHV-23 5), G3 (Poloxamer 407 + BoHV-5 + rLTB), G4 (Poloxamer 407 + BoHV-5), G5 24 (BoHV-5 + rLTB), G6 (Negative control) and G7 (Positive control). The local and 25 systemic humoral response induced in the inoculated animals were measured using 26 the indirect ELISA test (IgA and IgG) and serum neutralization, and the cellular 27 response, direct quantitative Elisa (IL-2 and IFN-Gamma). As a result, in the vaginal 28 mucosa, despite the G5 group providing the highest levels of IgG, the experimental 29 groups with polymers (G1 and G3) showed to be statistically superior in relation to 30 the positive control group (G7), as well as, in relation to the levels of IgA observed in 31 the vaginal mucosa at 30, 60 and 90 days after the first inoculation. Groups G1 and 32 G3 also provided superior titers of neutralizing antibodies (log2) in relation to the 33 other treatments (p <0.01) 90 days after inoculation, showing the efficiency of the 34 tested polymers as an antigen delivery system. In the nasal mucosa, there was an 35 increase in IgA and IgG levels with the use of vaccines in groups G1 and G3, in 36 relation to the positive control, G7 (p<0.05) at 60 and 90 days after the first 37 inoculation, which emphasizes the strong relationship between mucosal systems. 38 The inoculation of experimental vaccines also resulted in increased levels of IgA and 39 IgG in the animals' serum, measured by indirect ELISA, in addition to presenting 40 neutralizing antibody titers at 60 and 90 days, detected through serum neutralization. 41 The highest titers of neutralizing antibodies were provided by the G5 group (without 42 polymers and intramuscular), however, the levels of IL-2 and IFN-Gamma obtained 43 with the use of polymers were higher than the other groups at 30, 60 and 90 days 44 after first inoculation. The intravaginal vaccine has been shown to increase the levels 45 of IgA and IgG and interleukins in the serum and in the nasal and vaginal mucosa of 46 immunized cattle. These data prove the capacity of the vaccine for intravaginal 1 application in cattle to stimulate a local and systemic immune response, in addition to 2 corroborating the immunostimulating activity in mucous membranes of rLTB. Thus, 3 this route of administration of vaccines becomes an interesting alternative, especially 4 when the objective is to generate local protection against pathogens that use mucous 5 surfaces as a gateway into the body.