Association of Kappa casein gene polymorphism with milk production traits in crossbred dairy cows / Associação do polimorfismo do gene Kappa-caseína com características de produção de leite em vacas leiteiras mestiças

Milk's qualitative and technological properties are greatly affected by genetic polymorphisms in the kappa-casein gene, and their polymorphisms may serve as informative markers of yield and composition. Thus, the objective of this study was to detect kappa-casein (kappa-CN) gene polymorphisms and their association with milk production traits in crossbred dairy cows. One hundred healthy crossbred (Friesian x Jenoubi) dairy animals between three and five years old were sampled for blood and milk during their first lactation. The genomic DNA was extracted from whole blood, and restriction fragment length polymorphism (RFLP-PCR) was used to determine the genotype of the kappa-CN gene. As a consequence of the restriction digestion of this fragment with Hind III, it showed three different restriction patterns: BB (453 base pairs uncut), AB (453, 206, and 225 base pairs), and AA (206 and 225 base pairs). Based on genetic diversity, the AB genotype was the most predominant (n = 67), with a frequency of 0.67. A variant genotype of the kappa-CN gene was associated with milk production traits in crossbred dairy cows. Animals with the AA variant produced a higher milk yield and a higher percentage of fat, casein, protein, and solids not fat (SNF) (P≤0.05) (1.397kg, 0.75%, 0.31%, 0.27%, and 0.68%, respectively) than those with the BB variant. A logistic regression analysis confirmed that the kappa-CN genotypes increase milk yield and casein content. Therefore, genetic variants of the kappa-CN gene could be used as genetic markers for improving milk production traits in dairy cattle.(AU)

As propriedades qualitativas e tecnológicas do leite são muito afetadas por polimorfismos genéticos no gene kappa-caseína e esses polimorfismos podem servir como marcadores informativos de rendimento e composição. Assim, o objetivo deste estudo foi detectar polimorfismos do gene kappa-caseína (kappa-CN) e sua associação com características de produção de leite em vacas leiteiras mestiças. Cem animais mestiços (Freisian x Jenoubi) saudáveis, entre três e cinco anos de idade, foram amostrados durante a primeira lactação para sangue e leite. O DNA genômico foi extraído do sangue total e o polimorfismo dos fragmentos de restrição do DNA genômico (RFLP-PCR) foi usado para determinar o genótipo do gene kappa-CN. Em consequência da digestão de restrição deste fragmento com Hind III, ele apresentou três padrões de restrição diferentes: BB (453 pares de bases não cortadas), AB (453,206 e 225 pares de bases) eAA (206 e 225 pares de bases). Com base na diversidade genética, o genótipo AB foi o mais predominante (n = 67), com frequência de 0,67. Genótipo variante do gene kappa-CN foi associado com características de produção de leite em vacas leiteiras mestiças. Animais com a variante AA tiveram maior produção de leite e maior percentual de gordura, caseína, proteína e sólidos não gordurosos (SNG) (P≤0,05) (l,397kg, 0,75%, 0,31%, 0,27% e 0,68%, respectivamente) do que aqueles com variante BB. Uma análise de regressão logística confirmou que os genótipos kappa-CN aumentam a produção de leite e o teor de caseína. Portanto, variantes genéticas do gene kappa-CN podem ser usadas como marcadores genéticos para melhorar as características de produção de leite em bovinos leiteiros.(AU)

A comparative analysis of anatomopathological features and COX-2 expression of mammary neoplasms with malignant mesenchymal components in female dogs / Análise comparativa das características anatomopatológicas e expressão de COX2 em neoplasias mamárias com componentes mesenquimais malignos em cadelas

ABSTRACT: Canine mammary neoplasms with malignant mesenchymal components, such as carcinosarcomas and sarcomas, belong to an uncommon and histologically heterogeneous group. Little is known about the biological behavior of these histogenic variants. This study aimed to compare the clinicopathological characteristics and the COX-2 immunohistochemical expression of different histologic subtypes of carcinosarcomas and sarcomas. Samples of 23 carcinosarcomas and 15 sarcomas from the mammary glands of female dogs were studied. Medical records were reviewed to obtain clinical data. Subsequently, histology microscope slides were analyzed to assess for mesenchymal subtypes, necrosis, vascular invasion, histologic grades, and lymph node metastasis. Immunohistochemistry was used to assess the COX-2 expression. The malignant mesenchymal proliferation was categorized into osteosarcomas (23/40), fibrosarcomas (5/40), liposarcomas (6/40) and chondrosarcomas (4/40). The osteosarcomatous differentiation was the most predominant type among the sarcomas and carcinosarcomas and was associated with vascular invasion (P=0.010) and lymph node metastases (P=0.014). High COX-2 expression was detected in 14.3% of the carcinosarcomas (carcinoma and/or sarcoma cells) and 27.3% of the sarcomas. The carcinosarcomas and sarcomas had similar clinical and pathological characteristics and developed as large tumors, with intratumoral necrosis and a predominance of high histologic grades, although the frequency of vascular invasion and lymph node metastasis was low. Osteosarcoma subtypes presented more aggressive characteristics than non-osteosarcoma subtypes.

RESUMO: Neoplasias mamárias caninas com componentes mesenquimais malignos, como carcinossarcomas e sarcomas, são um grupo de neoplasias pouco frequentes e histologicamente heterogêneas e pouco se sabe sobre o comportamento biológico das variantes histogênicas. O objetivo desse estudo é comparar as características anatomopatológicas e a expressão imunoistoquímica de COX-2 de diferentes subtipos histológicos de carcinossarcomas e sarcomas. Foram estudados 23 carcinosarcomas e 17 sarcomas da glândula mamária de cadelas. Os prontuários médicos foram revisados para obtenção de dados clínicos. Posteriormente, as lâminas histológicas foram avaliadas para acessar os subtipos mesenquimais, necrose, invasão vascular, grau histológico, metástase linfonodal. A imunoistoquímica foi realizada para avaliar a expressão de COX-2. Os tipos encontrados de proliferação mesenquimal maligna foram osteossarcoma (23/40), fibrossarcoma (7/40), lipossarcoma (6/40) e condrossarcoma (4/40). A diferenciação osteossarcomatosa foi predominante entre os sarcomas e carcinossarcomas e foi associado com invasão vascular (P=0,006) e metástase linfonodal (P=0,014). Uma expressão alta de COX-2 foi detectada em 14,3% dos carcinossarcomas (células carcinomatosas e/ou sarcomatosas) e 27,3% dos sarcomas. Os carcinossarcomas e sarcomas apresentaram características clínicas e patológicas semelhantes e se desenvolveram como tumores grandes, com necrose intratumoral e predomínio de alto grau histológico, mas com baixa frequência de invasão vascular e metástase distante. Os subtipos osteossarcomatosos apresentaram características mais agressivas quando comparados com subtipos não osteossarcomatosos.

The use of selenium for protective and stimulating effects on plants when soil is contaminated with cadmium / O uso de selênio para efeitos de proteção e estímulo nas plantas com o solo contaminado por cádimo

At the present time one of the tasks of modern agricultural industry consists in obtaining the ecologically safe and clean products. Contamination of soils with heavy metals due to an anthropogenic impact drives up their content in the composition of plant products. This shapes not only a reduction in crop yields, but also a deterioration in products quality. Within the terms of vegetation research in soil culture, there has been studied the protective and stimulating effect of sodium selenite upon the adaptive capacity of spring wheat plants of the variety Zlata under conditions of oxidative stress due to the soil contamination with cadmium. There has been studied the effect of different methods of sodium selenite application on the yield of spring wheat and the plants photosynthetic activity, depending on the level of soil contamination with cadmium. The object of research was a spring wheat variety Zlata. Plants have been cultivated in a greenhouse trial under soil culture conditions in Mitscherlich-vessels with a capacity of 6 kg of soil. Sod-podzolic soil has been used for research. Sodium selenite was introduced in three ways: pre-sowing seed treatment, foliar treatment of vegetative plants at the beginning of stage VI of organogenesis - the end of the tillering phase - the beginning of the stem-extension phase and the application of a salt solution into the soil when packing the vessels. The control samples represented variants without sodium selenite. To assess the plants photosynthetic productivity, there has been determined the chlorophyll content in plant leaves. The research results made it possible to determine the protective effect of sodium selenite on the adaptive capacity of plants under conditions of oxidative stress due to the soil contamination with cadmium. The increase in the adaptive capacity of plants manifested itself through the decrease in yield diminishing due to the improvement of conditions for fertile florets and ear initiations on the vegetative apex, as well as the development of flowers into grains, which contributed to increase in the grain content of the spike. The stimulating effect of selenium on the intensity of photosynthetic processes has been revealed, which showed not only the increase of chlorophylls content, but also the ratio changes of chlorophylls a and b.

Atualmente, uma das tarefas da indústria agrícola moderna consiste em obter produtos ecologicamente seguros e limpos. A contaminação dos solos com metais pesados devido ao impacto antrópico aumenta o seu conteúdo na composição dos produtos vegetais. Isto molda não apenas uma redução no rendimento das colheitas, mas a deterioração da qualidade dos produtos. No âmbito da investigação da vegetação em cultura do solo, estudou-se o efeito protetor e estimulante do selenito de sódio sobre a capacidade adaptativa de plantas de trigo de primavera da variedade Zlata em condições de stress oxidativo devido à contaminação do solo com cádmio. Tem sido estudado o efeito de diferentes métodos de aplicação de selenito de sódio na produtividade do trigo de primavera e na atividade fotossintética das plantas, dependendo do nível de contaminação do solo com cádmio. O objeto de pesquisa foi uma variedade de trigo de primavera Zlata. As plantas foram cultivadas em um teste de estufa sob condições de cultura do solo em vasos Mitscherlich com capacidade para 6 kg de solo. Solo sod-podzólico tem sido usado para pesquisa. O selenito de sódio foi introduzido de três maneiras: tratamento de sementes pré-semeadura, tratamento foliar de plantas vegetativas no início da fase VI da organogênese - final da fase de perfilhamento - início da fase de extensão do caule e aplicação de solução salina no solo ao embalar os vasos. As amostras de controle representaram variantes sem selenito de sódio. Para avaliar a produtividade fotossintética das plantas, determinou-se o teor de clorofila nas folhas das plantas. Os resultados da pesquisa permitiram determinar o efeito protetor do selenito de sódio sobre a capacidade adaptativa de plantas em condições de estresse oxidativo devido à contaminação do solo com cádmio. O aumento da capacidade adaptativa das plantas se manifestou pela diminuição do rendimento diminuindo devido à melhoria das condições para floretes férteis e iniciações de espigas no ápice vegetativo, bem como o desenvolvimento de flores em grãos, o que contribuiu para o aumento do grão conteúdo da espiga. O efeito estimulante do selênio na intensidade dos processos fotossintéticos foi revelado, o que mostrou não apenas o aumento do teor de clorofilas, mas também as mudanças na proporção de clorofilas a e b.

Genetic diversity of Mycoplasma hyopneumoniae in finishing pigs in Minas Gerais / Diversidade de cepas de Mycoplasma hyopneumoniae em suínos em terminação brasileiros

Mycoplasma hyopneumoniae is one of the most challenging respiratory pathogens involved with swine pneumonia worldwide, responsible for a chronic infection with high morbidity, which predisposes secondary bacterial infections in growing and finishing pigs. Advances in diagnostic techniques allowed identification of genetic characteristics associated with high antigenic and proteomic variability among bacterial strains. This study aimed to evaluate the genetic diversity of M. hyopneumoniae strains in lungs with pneumonic lesions obtained from 52 pig farms located in Minas Gerais, one of the largest swine production states in Brazil. Genotyping was performed using multilocus variable number of tandem repeat (VNTR) analysis (MLVA), targeting two loci encoding P97 and P146 adhesins VNTR. The results showed that this agent is widely disseminated in pig farms and there is a high polymorphism of M. hyopneumoniae variants circulating in the state of Minas Gerais. Different M. hyopneumoniae genotypes are randomly distributed in several regions of the state, with no specific geographic population structure pattern. M. hyopneumoniae association with viral agents was sporadic (3.17% with Influenza A and 1.9% with PCV2).

Mycoplasma hyopneumoniae é um dos patógenos respiratórios mais desafiadores envolvidos com pneumonia suína em todo o mundo. É responsável por uma infecção crônica de alta morbidade, que predispõe a infecções bacterianas secundárias nas fases de crescimento e terminação. Avanços nas técnicas diagnósticas permitiram a identificação de características genéticas do agente, associadas à alta variabilidade antigênica e proteômica entre cepas. Este estudo teve como objetivo examinar a ocorrência e diversidade genética de cepas de M. hyopneumoniae em pulmões com lesões pneumônicas em 52 granjas de suínos no estado de Minas Gerais, um dos maiores estados produtores de suínos do Brasil. A genotipagem foi realizada utilizando a técnica de "multilocus variable number of tandem repeat analysis" (VTNR/MLVA), usando dois loci que codificam VNTR das adesinas P97 e P146. Os resultados mostraram que esse agente está amplamente disseminado em granjas de suínos e que existe alto polimorfismo das variantes de M. hyopneumoniae circulando no estado de Minas Gerais. Diferentes genótipos de M. hyopneumoniae estão distribuídos aleatoriamente em várias regiões do estado, sem um padrão de estrutura populacional e geográfica específico. Associação de M. hyopneumoniae e agentes virais foi esporádica (3,17% com Influenza A e 1,9% com PCV2).

Molecular characterization of carnivore protoparvovirus strains circulating in cats in Turkey / Caracterização molecular de cepas de protoparvovírus carnívoros circulantes em gatos na Turquia

Cats are susceptible to feline panleukopenia virus (FPV) and canine parvovirus type 2 (CPV-2). Therefore, coinfection and superinfection with multiple parvovirus strains may occur, resulting in high heterogeneity and recombination. Considering the importance of cats as a potential source of genetic diversity for parvoviruses, we investigated the frequency of parvovirus infection in cats using their blood and fecal samples and performed molecular characterization of parvovirus strains circulating in cat populations. Accordingly, the fecal and blood samples of 60 cats with gastroenteritis symptoms were collected from Turkey's Burdur, Isparta, and Izmit provinces. Of these 15 fecal samples tested as parvovirus-positive by PCR, 14 were confirmed to have been infected with true FPV strains by sequencing analysis. Through the phylogeny analysis, those were located in the FPV cluster, closely related to CPV-2, and one was discriminated in the CPV-2b cluster. Additionally, sequence analysis of the VP2 gene of CPV and FPV revealed that the FPV strains detected in Turkey and the vaccine strains were highly related to each other, with a nucleotide identity of 97.7- 100%. Furthermore, 13 variable positions were detected in VP2 of the field and reference FPV strains. Three synonymous mutations were determined in the VP2 gene. Some amino acid mutations in the VP2 protein-affected sites were considered responsible for the virus's biological and antigenic properties. The partial sequence analysis of the VP2 gene revealed that four FPV strains detected in Turkey have a single nucleotide change from T to G at the amino acid position 384 between the nucleotides 3939-3941, which was reported for the first time. Therefore, these four isolates formed a different branch in the phylogenetic tree. The results suggest that both FPV and CPV-2b strains are circulating in domestic cats in Turkey and cats should be considered as potential sources of new parvovirus variants for cats, dogs and other animals.

Os gatos são suscetíveis ao vírus da panleucopenia felina (FPV) e ao parvovírus canino tipo 2 (CPV-2). Portanto, coinfecção e superinfecção com múltiplas cepas de parvovírus podem ocorrer, resultando em alta heterogeneidade e recombinação. Considerando a importância dos gatos como uma fonte potencial de diversidade genética para parvovírus, investigamos a frequência da infecção por parvovírus em gatos usando suas amostras de sangue e fezes e realizamos a caracterização molecular de cepas de parvovírus circulantes nas populações de gatos. Amostras fecais e de sangue de 60 gatos com sinais de gastroenterite foram coletadas nas províncias de Burdur, Isparta e Izmit, na Turquia. Destas, 15 amostras fecais testaram positivas para parvovírus por PCR e 14 foram confirmadas como infectadas com cepas verdadeiras de FPV por análise de sequenciamento. Através da análise filogenética, aqueles foram localizados no agrupamento FPV que está intimamente relacionado com o CPV-2, e um foi discriminado no agrupamento CPV-2b. Além disso, a análise da sequência do gene VP2 de CPV e FPV revelou que as cepas de FPV detectadas na Turquia e as cepas vacinais eram altamente relacionadas entre si, com uma identidade de nucleotídeos de 97,7-100%. Além disso, 13 posições variáveis foram detectadas em VP2 das cepas de campo e FPV de referência. Três mutações sinônimas foram determinadas no gene VP2. Algumas mutações de aminoácidos nos locais afetados pela proteína VP2 foram consideradas responsáveis pelas propriedades biológicas e antigênicas do vírus. A análise da sequência parcial do gene VP2 revelou que quatro cepas de FPV detectadas na Turquia têm uma única mudança de nucleotídeo de T para G na posição do aminoácido 384 entre os nucleotídeos 3939-3941, o que foi relatado pela primeira vez. Portanto, esses quatro isolados formaram um ramo diferente na árvore filogenética. Os resultados sugerem que ambas as cepas FPV e CPV-2b estão circulando em gatos domésticos na Turquia e os gatos devem ser considerados como fontes potenciais de novas variantes de parvovírus para gatos, cães e outros animais.

Ocurrence enzootic hematuria in buffaloes in Brazil: epidemiological, clinical, and pathological aspects

ABSTRACT: It is reported the occurrence of enzootic hematuria (EH) in buffaloes in Brazil after performing an epidemiological survey and clinicopathological analises. To date, EH caused by ingestion of Pteridium esculentum subsp. arachnoideum, a radiomimetic plant popularly known as bracken fern, has not been described in this species in Brazil. Bovine EH is responsible for high economic losses in Brazils Southeast Region not only because of the deaths it causes, but also owing to its negative effect on productivity. In São José do Barreiro County, São Paulo, some farmers in areas with a high incidence of bovine EH have been replacing cattle with buffaloes, based on the premise that the latter would be more resistant to poisoning by ingestion of Pteridium spp. However, even though initial observations indicated that buffaloes are indeed less sensitive than cattle to the toxic principle of Pteridium spp., cases of hematuria in this species have been reported. According to preliminary date, EH only occurs in buffaloes over six years of age. Macroscopic examination revealed a thickened urinary vesicle mucosa, along with multiple foci of ulcerated, exophytic, verrucous, and pedunculated lesions. In one of the buffaloes studied, the bladder wall was ruptured and exhibited marked secondary inflammation. Histologically, neoplastic and non-neoplastic changes similar to those described in cattle poisoned by Pteridium spp. were observed. The neoplasms found included papilloma, carcinoma in situ, urothelial carcinoma (low and high grade), inverted, microcystic, and trabecular variants, urothelial carcinoma with divergent differentiation (squamous and glandular), squamous cell carcinoma, lymphangioma, hemangioma, and hemangiosarcoma. There was also coexistence of epithelial and mesenchymal neoplasms. Bovine papillomavirus particles were not detected by polymerase chain reaction in the bladder samples analyzed.

RESUMO: Descreve-se, através de levantamento epidemiológico e avaliação clínico-patológica, a ocorrência de hematúria enzoótica (HE) em búfalos no Brasil. Essa condição, causada pela ingestão da planta radiomimética Pteridium esculentum subsp. arachnoideum, conhecida popularmente como samambaia ou samambaia do campo, até então não havia sido descrita nessa espécie no Brasil. Na Região Sudeste, a HE bovina é responsável por elevadas perdas econômicas, devidas não apenas aos óbitos, mas também em função da queda de produtividade. No município de São José do Barreiro/SP, alguns produtores de áreas com alta incidência de HE bovina, vêm substituindo os bovinos por búfalos, com base na premissa de que estes seriam mais resistentes à intoxicação. Embora, de acordo com observações iniciais, os búfalos realmente sejam menos sensíveis que os bovinos ao princípio tóxico de Pteridium spp., ainda assim, tem-se verificado a ocorrência de casos de hematúria nessa espécie. De acordo com o levantamento inicial, a HE só ocorre em búfalos com idade a partir de seis anos. Ao exame macroscópico, verificou-se a mucosa da bexiga espessa, com múltiplos focos de lesões ulceradas, exofíticas, papiliformes, verrucosas, pedunculadas. Histologicamente, foram observadas alterações neoplásicas e não neoplásicas semelhantes às descritas nos bovinos com HE. Entre as neoplasias foram encontrados papiloma, carcinoma in situ, carcinoma urotelial (baixo e alto grau), variantes invertida, microcística e trabecular, carcinoma urotelial com diferenciação divergente (escamosa e glandular), carcinoma de células escamosas, linfangioma, hemangioma e hemangiossarcoma. Ocorreu também coexistência entre neoplasias epiteliais e mesenquimais. Não foram detectadas partículas de papilomavírus bovino pelo teste PCR nas amostras de bexiga analisadas.

Identification of SCAR markers for genetic authentication of Dendrobium nobile Lindl / Identificação de marcadores SCAR para autenticação genética de Dendrobium nobile Lindl

Dendrobium nobile Lindl. is an orcid plant with important medicinal values. This is a colourful houseplant, and also a popular herb in traditional Chinese medicine (TCM). The variants of this plant from different geographic regions might be high, and in this study, we aimed to develop specific sequence characterized amplified region (SCAR) markers for the identification of specific variant of this plant. Different cultivars of D. nobile were collected from nine different places of China, and one cultivar from Myanmar. DNA materials were extracted from the plant samples, random amplified polymorphic DNA (RAPD) were developed, cloned and sequenced for the development of SCAR markers. We have developed four SCAR markers, which are specific to the cultivar from Luzhou China, and clearly distinguishable (genetically) from other cultivars. These SCAR markers are deposited in GenBank (accession number MZ417502, MZ484089, MZ417504 and MZ417505). Four SCAR markers for D. nobile are effective molecular technique to genetically identify the different cultivars or species, and this method is applicable for genetic characterization and identification of other plant species too.

Dendrobium nobile Lindl. é uma orquídea com importantes valores medicinais. Esta é uma colorida planta doméstica e também uma erva popular na Medicina Tradicional Chinesa (MTC). As variantes desta planta de diferentes regiões geográficas podem ser altas, e neste estudo, nosso objetivo foi desenvolver marcadores de região amplificada de sequência caracterizada (in English, Sequence Characterized Amplified Region (SCAR)) para a identificação de variante específica desta planta. Diferentes cultivares de D. nobile foram coletadas de nove locais diferentes da China e uma cultivar de Mianmar. Materiais de DNA foram extraídos das amostras de plantas, em que a Amplificação Aleatória de DNA Polimórfico (in English, Random Amplified Polymorphism DNA (RAPD)) foi desenvolvida, clonada e sequenciada para o desenvolvimento de marcadores SCAR. Desenvolvemos quatro marcadores SCAR, que são específicos para a cultivar de Luzhou na China e claramente distinguíveis (geneticamente) de outras cultivares. Esses marcadores SCAR estão depositados no GenBank (números de acesso MZ417502, MZ484089, MZ417504 e MZ417505). Quatro marcadores SCAR para D. nobile compreendem técnicas moleculares eficazes para identificar geneticamente as diferentes cultivares ou espécies, e este método é aplicável para caracterização genética e identificação de outras espécies de plantas também.

Comparative venomic profiles of three spiders of the genus Phoneutria

Spider venoms induce different physio-pharmacological effects by binding with high affinity on molecular targets, therefore being of biotechnological interest. Some of these toxins, acting on different types of ion channels, have been identified in the venom of spiders of the genus Phoneutria, mainly from P. nigriventer. In spite of the pharmaceutical potential demonstrated by P. nigriventer toxins, there is limited information on molecules from venoms of the same genus, as their toxins remain poorly characterized. Understanding this diversity and clarifying the differences in the mechanisms of action of spider toxins is of great importance for establishing their true biotechnological potential. This prompted us to compare three different venoms of the Phoneutria genus: P. nigriventer (Pn-V), P. eickstedtae (Pe-V) and P. pertyi (Pp-V). Methods: Biochemical and functional comparison of the venoms were carried out by SDS-PAGE, HPLC, mass spectrometry, enzymatic activities and electrophysiological assays (whole-cell patch clamp). Results: The employed approach revealed that all three venoms had an overall similarity in their components, with only minor differences. The presence of a high number of similar proteins was evident, particularly toxins in the mass range of ~6.0 kDa. Hyaluronidase and proteolytic activities were detected in all venoms, in addition to isoforms of the toxins Tx1 and Tx2-6. All Tx1 isoforms blocked Nav1.6 ion currents, with slight differences. Conclusion: Our findings showed that Pn-V, Pe-V and Pp-V are highly similar concerning protein composition and enzymatic activities, containing isoforms of the same toxins sharing high sequence homology, with minor modifications. However, these structural and functional variations are very important for venom diversity. In addition, our findings will contribute to the comprehension of the molecular diversity of the venoms of the other species from Phoneutria genus, exposing their biotechnological potential as a source for searching for new active molecules.(AU)

PCR-RFLP Based genetic diversity of Plasmodium vivax genotypes in district Mardan, Pakistan

Abstract Plasmodium vivax is the most common human malaria parasite in Asian countries including Pakistan. Present study was designed to explore the genetic diversity of plasmodium vivax genotypes based on Pvmsp-3 and Pvmsp-3genes using allelic specific nested PCR and RFLP assays markers from field isolates in district Mardan, Pakistan. Blood samples of 200 P. vivax malarial patients were collected after taking their written informed consent. Genetic diversity in nested PCR products was determined by Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) utilizing Alu1 and PstI restriction enzymes for alpha and beta gene products digestion, respectively. For analysis the genetic diversity of the sub allelic variants of Pvmsp3 and Pvmsp3 genes, Chi-Square test was performed by utilizing Minitab programming software 18. The P value 0.05 was considered as statistically significant. For Pvmsp-3 genes after gel electrophoresis of digested products, four distinct genotypes were obtained from total of 50 samples; type A: 35 (70%) (1.5-2.0 kb), 12 of type B (24%) (1.5-1.7 kb), 2 of type C (4%) (0.5-1.5) and one for type D (2%) (0.5-0.65 kb) which could be characterized into 9 allelic pattern (A1-A4, B1-B3, C1, D), in which A3 remained the most predominant. For Pvmsp-3genes, three distinct genotypes were obtained from 50 samples; 40(80%) of type A (1.5-2.5 kb), 9 (18%) of type B (1.0-1.5kb) and 1(2%) of type C (0.65 kb) which could be characterized into 6 allelic patterns (A1-A3, B1-B2, and C1). Most dominant one in Type A was A1 alleles which were noted (46%), while in Type B, the most dominant were B1 (10%).This study is the first ever report of molecular epidemiology and genetic variation in Pvmsp-3 and Pvmsp-3 genes of P. vivax isolates by using PCR/RFLP from District Mardan and showed a remarkable level of genetic diversity in the studied genes of circulating parasites in the study area. The results of this study will contribute in future studies about the genetic structure of parasite and vaccine development against the malaria.

Resumo O Plasmodium vivax é o parasita da malária humana mais comum nos países asiáticos, incluindo o Paquistão. O presente estudo foi desenhado para explorar a diversidade genética de genótipos de Plasmodium vivax baseados nos genes Pvmsp-3 e Pvmsp-3, usando marcadores de ensaios alélicos nested PCR e RFLP de isolados de campo no distrito de Mardan, Paquistão. Amostras de sangue de 200 pacientes com malária por P. vivax foram coletadas após assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido. A diversidade genética em produtos de PCR nested foi determinada por polimorfismo de fragmento de restrição (RFLP) utilizando as enzimas de restrição Alu1 e PstI para a digestão dos produtos dos genes alfa e beta, respectivamente. Para análise da diversidade genética das variantes subalélicas dos genes Pvmsp3 e Pvmsp3, o teste Qui-quadrado foi realizado utilizando o software de programação Minitab 18. O valor P = 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Para os genes Pvmsp-3, após eletroforese em gel de produtos digeridos, quatro genótipos distintos foram obtidos de um total de 50 amostras; tipo A: 35 (70%) (1,5-2,0 kb), 12 do tipo B (24%) (1,5-1,7 kb), 2 do tipo C (4%) (0,5-1,5) e um para o tipo D (2%) (0,5-0,65 kb), que podem ser caracterizados em nove padrões alélicos (A1-A4, B1-B3, C1, D), em que A3 permaneceu como o mais predominante. Para Pvmsp-3genes, três genótipos distintos foram obtidos a partir de 50 amostras; 40 (80%) do tipo A (1,5-2,5 kb), 9 (18%) do tipo B (1,0-1,5 kb) e 1 (2%) do tipo C (0,65 kb), que podem ser caracterizados em seis padrões alélicos (A1-A3, B1-B2 e C1). Os mais dominantes no tipo A foram o alelo A1, observados em 46%, enquanto, no tipo B, os mais dominantes foram B1 (10%). Este estudo é o primeiro relato de epidemiologia molecular e variação genética em Pvmsp-3. Os genes Pvmsp-3 de isolados de P. vivax utilizando PCR/RFLP do Distrito Mardan mostraram um nível notável de diversidade genética nos genes estudados de parasitas circulantes na área de estudo. Os resultados desse estudo contribuirão em estudos futuros sobre a estrutura genética do parasita e o desenvolvimento de vacinas contra a malária.

Expression of calpain system transcripts responds inversely to beef tenderization after vitamin D3 supplementation in Nellore cattle / Expressão de transcritos do sistema calpaína responde de forma inversa ao amaciamento após suplementação com vitamina D3 em bovinos Nelore

Uma vez que o sistema calpaína é central para o amaciamento da carne e dada a importância da atividade de calpastatina na determinação da maciez de bifes de bovinos Bos taurus indicus, o objetivo do presente estudo foi determinar se a expressão do gene de µ-calpaína (CAPN1), calpastatina total (CAST T), e suas variantes (CAST I e II) foi induzido pela inclusão de vitamina D3 na dieta. Os animais receberam nenhuma ou 2 × 106 UI dose de vitamina D3 por 2 ou 8 dias antes do abate, e foram submetidos a diferentes condições durante o confinamento: exposição solar ou sombreamento artificial. Bifes do Longissimus lumborum foram fabricados e submetidos a maturação por 1, 7, e 21 dias post-mortem e posteriormente usados para determinação da força de cisalhamento e do índice de fragmentação miofibrilar. Vitamina D3 não influenciou a abundância de RNAm, exceto para maior abundância de transcritos de CAST II em animais que foram suplementados por 8 dias antes do abate. Foi encontrada associação negativa entre a abundância de CAST II e a força de cisalhamento. Essa contradição revela uma importante modulação da expressão do sistema calpaína resultado da suplementação com vitamina D que pode ser importante na determinação de estratégias para melhorar a maciez da carne.(AU)

The calpain system is the central player for meat tenderization and the calpastatin activity plays an important role in beef tenderness of Bos taurus indicus cattle. This study investigated whether dietary vitamin D3 induced gene expression of µ-calpain (CAPN1), total calpastatin (CAST T), and their variants (CAST I and II). Animals received none or 2 × 106 IU of vitamin D3 for either 2 or 8 days before slaughter and were submitted to different conditions during feedlot: sun exposure or artificial shade. Steaks from Longissimus lumborum were fabricated, aged for 1, 7, and 21 days post-mortem, and later used for the analyses of shear force and the myofibrillar fragmentation index. Vitamin D3 did not influence mRNA abundance; however, it induced a greater CAST II transcript in animals supplemented 8 days before slaughter. There was a negative association between CAST II abundance and the shear force, which revealed an important modulation of the calpain system expression due to vitamin D supplementation. This result is an important tool for strategies to improve beef tenderness.(AU)

Craniolateral forearm muscles of the crab-eating raccoon (Procyon cancrivorus) and a comparative review with other carnivorans / Músculos cráneo-laterales del antebrazo del mapache cangrejero (Procyon cancrivorus) y una revisión comparativa con otros carnívoros

The crab-eating raccoon Procyon cancrivorus (Cuvier, 1798) is a species of the order Carnivora and family Procyonidae with a geographical distribution in Central and South America. Although crab-eating raccoons use scansorial locomotion, they also have aquatic habits, displaying greatly developed skills when handling their food. This species can frequently be found in wildlife care centers due to injuries caused by domestic dogs, humans, and car collisions. Having knowledge of the species' gross anatomy and anatomical bases is imperative to perform the most appropriate medical and surgical procedures. Thus, the objective of this investigation was to analyze the interspecific and intraspecific differences of the craniolateral forearm muscles of Procyon cancrivorus. Gross dissections were performed in four specimens describing the origin, insertion, shape, innervation, and arterial supply of the craniolateral forearm muscles. There is a constant and well development of brachioradialis muscle comparatively to that described in strictly cursorial species; the extensor carpi radialis muscle has two bellies that are fused proximally; the extensor digitorum communis muscle can also extend the tendon to the digit I as an anatomical variant, and the extensor digiti I and II muscle also extends the tendon to digit III. All are innervated by the deep branch of the radial nerve, and their arterial supply is mainly by the radial collateral, cubital transverse, and cranial interosseous arteries. The anatomical characteristics observed in this study complement the previous descriptions for Procyon cancrivorus, and the anatomical variants found in this species can also be in other carnivorans. Thus, the intraspecific anatomical variations of the digital extensor muscles in P. cancrivorus are phylogenetic traits that can occur as a common pattern or as anatomical variants in other species of the order Carnivora.

El mapache cangrejero Procyon cancrivorus (Cuvier, 1798) es una especie del orden Carnivora y familia Procyonidae con distribución geográfica en América Central y del Sur. Esta especie tiene hábitos arbóreos y acuáticos. Tiene una alta frecuencia en los centros de rehabilitación de fauna silvestre debido a las lesiones causadas por perros, humanos y colisiones de automóviles, por esto, tener conocimiento de la anatomía macroscópica de la especie es imprescindible para realizar los procedimientos médicos y quirúrgicos más adecuados. Por lo tanto, el objetivo de esta investigación fue analizar las diferencias inter e intraespecíficas de los músculos cráneo-laterales del antebrazo de Procyon cancrivorus. Se realizaron disecciones macroscópicas en cuatro especímenes donde se describió el origen, inserción, forma, inervación y la irrigación arterial de la musculatura cráneo-lateral del antebrazo. Entre los principales hallazgos se pueden mencionar: el músculo braquiorradial es constante y bien desarrollado comparativamente a lo descrito en especies estrictamente cursoriales; el músculo extensor radial del carpo presenta dos vientres fusionados proximalmente; el músculo extensor común de los dedos también puede formar un tendón al dedo I como una variante anatómica, y el músculo extensor de los dedos I y II también extiende un tendón al dedo III. Todos están inervados por el ramo profundo del nervio radial y su irrigación arterial es principalmente por las arterias colateral radial, transversa cubital e interósea craneal. Las características anatómicas encontradas en este estudio complementan las descripciones anteriores para Procyon cancrivorus, y las variantes anatómicas encontradas en esta especie también pueden encontrarse en otros carnívoros. Así, las variaciones anatómicas intraespecíficas de los músculos extensores digitales en P. cancrivorus son rasgos filogenéticos que se puede presentar en el patrón común o como variante anatómica en otras especies del orden Carnivora.

Técnicas biomoleculares aplicadas em hospedeiros intermediários da esquistossomose / Biomolecular techniques applied to intermediate hosts of Schistosomiasis

A esquistossomose é uma doença parasitária acometida por milhões de pessoas no mundo. Essa parasitose é transmitida por caramujos que servem de hospedeiros intermediários de helmintos digenéticos. A identificação correta das espécies transmissoras pode auxiliar no conhecimento epidemiológico da doença. Contudo, métodos convencionais de classificação podem ter resultado duvidoso, devido à variação intraespecífica entre os espécimes. Em virtude disso, esta revisão teve como objetivo descrever as principais técnicas moleculares que podem ser aplicadas, assim como o aprimoramento dos métodos ao longo do tempo. A PCR é uma técnica desenvolvida através da polimerização de DNA em cadeia realizada in vitro, onde se amplifica o DNA em múltiplas cópias, por replicação enzimática, sem necessidade de um organismo vivo. Na PCR, em tempo real, as fases de amplificação, detecção e quantificação são totalmente automatizadas, ocorrendo em simultâneo. Com a evolução da técnica convencional, foi surgindo a Proteína C Reativa ­ Polimorfismo de Comprimento de Fragmento de Restrição (PCR-RFLP), os microssatélites, e a PCR-RAPD. Através dessas variantes foi possível classificar, com precisão, as espécies transmissoras, fazer as análises da variabilidade genética intraespecífica e ampliar os estudos filogenéticos das populações. O conhecimento da aplicação de técnicas moleculares pode auxiliar em pesquisas relacionadas à epidemiologia e ao controle populacional dos vetores transmissores da esquistossomose mansônica.

Schistosomiasis is a parasitic disease that affects millions of people worldwide. This parasitosis is transmitted by snails that serve as intermediate hosts for digenetic helminths. The correct identification of the transmitting species can help in the epidemiological knowledge of the disease. However, conventional methods of classification may present questionable results due to intraspecific variation between specimens. As a result, this review aimed to describe the main molecular techniques that can be applied, as well as describe the improvement of the methods over time. PCR is a technique developed through the polymerization of DNA strands carried out in vitro, where it amplifies the DNA in multiple copies by enzymatic replication, without needing a living organism. In real-time PCR, amplification, detection and quantification phases are fully automated, occurring simultaneous. The evolution of the conventional technique resulted in the advent of Protein C Reactive - Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP), microsatellites, and Protein C Reactive ­ Random Amplification of Polymorphic DNA (PCR-RAPD). Through these variants it was possible to accurately classify the transmitting species, perform the analysis of intraspecific genetic variability and expand the phylogenetic studies of the populations. Knowledge of the application of molecular techniques can assist in research related to the epidemiology and population control of these vectors that transmit schistosomiasis mansoni.

PCR-RFLP Based genetic diversity of Plasmodium vivax genotypes in district Mardan, Pakistan / Diversidade genética baseada em PCR-RFLP de genótipos de Plasmodium vivax no distrito de Mardan, Paquistão

Plasmodium vivax is the most common human malaria parasite in Asian countries including Pakistan. Present study was designed to explore the genetic diversity of plasmodium vivax genotypes based on Pvmsp-3α and Pvmsp-3ßgenes using allelic specific nested PCR and RFLP assays markers from field isolates in district Mardan, Pakistan. Blood samples of 200 P. vivax malarial patients were collected after taking their written informed consent. Genetic diversity in nested PCR products was determined by Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) utilizing Alu1 and PstI restriction enzymes for alpha and beta gene products digestion, respectively. For analysis the genetic diversity of the sub allelic variants of Pvmsp3α and Pvmsp3ß genes, Chi-Square test was performed by utilizing Minitab programming software 18. The P value 0.05 was considered as statistically significant. For Pvmsp3α genes after gel electrophoresis of digested products, four distinct genotypes were obtained from total of 50 samples; type A: 35 (70%) (1.5-2.0 kb), 12 of type B (24%) (1.5-1.7 kb), 2 of type C (4%) (0.5-1.5) and one for type D (2%) (0.5-0.65 kb) which could be characterized into 9 allelic pattern (A1-A4, B1-B3, C1, D), in which A3 remained the most predominant. For Pvmsp-3ßgenes, three distinct genotypes were obtained from 50 samples; 40(80%) of type A (1.5-2.5 kb), 9 (18%) of type B (1.0-1.5kb) and 1(2%) of type C (0.65 kb) which could be characterized into 6 allelic patterns (A1-A3, B1-B2, and C1). Most dominant one in Type A was A1 alleles which were noted (46%), while in Type B, the most dominant were B1 (10%).This study is the first ever report of molecular epidemiology and genetic variation in Pvmsp-3α and Pvmsp-3ß genes of P. vivax isolates by using PCR/RFLP from District Mardan and showed a remarkable level of genetic diversity in the studied genes of circulating parasites in the study area. The results of this study will contribute in future studies about the genetic structure of parasite and vaccine development against the malaria.

O Plasmodium vivax é o parasita da malária humana mais comum nos países asiáticos, incluindo o Paquistão. O presente estudo foi desenhado para explorar a diversidade genética de genótipos de Plasmodium vivax baseados nos genes Pvmsp-3α e Pvmsp-3ß, usando marcadores de ensaios alélicos nested PCR e RFLP de isolados de campo no distrito de Mardan, Paquistão. Amostras de sangue de 200 pacientes com malária por P. vivax foram coletadas após assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido. A diversidade genética em produtos de PCR nested foi determinada por polimorfismo de fragmento de restrição (RFLP) utilizando as enzimas de restrição Alu1 e PstI para a digestão dos produtos dos genes alfa e beta, respectivamente. Para análise da diversidade genética das variantes subalélicas dos genes Pvmsp3α e Pvmsp3ß, o teste Qui-quadrado foi realizado utilizando o software de programação Minitab 18. O valor P = 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Para os genes Pvmsp3α, após eletroforese em gel de produtos digeridos, quatro genótipos distintos foram obtidos de um total de 50 amostras; tipo A: 35 (70%) (1,5-2,0 kb), 12 do tipo B (24%) (1,5-1,7 kb), 2 do tipo C (4%) (0,5-1,5) e um para o tipo D (2%) (0,5-0,65 kb), que podem ser caracterizados em nove padrões alélicos (A1-A4, B1-B3, C1, D), em que A3 permaneceu como o mais predominante. Para Pvmsp-3ßgenes, três genótipos distintos foram obtidos a partir de 50 amostras; 40 (80%) do tipo A (1,5-2,5 kb), 9 (18%) do tipo B (1,0-1,5 kb) e 1 (2%) do tipo C (0,65 kb), que podem ser caracterizados em seis padrões alélicos (A1-A3, B1-B2 e C1). Os mais dominantes no tipo A foram o alelo A1, observados em 46%, enquanto, no tipo B, os mais dominantes foram B1 (10%). Este estudo é o primeiro relato de epidemiologia molecular e variação genética em Pvmsp-3α. Os genes Pvmsp-3ß de isolados de P. vivax utilizando PCR/RFLP do Distrito Mardan mostraram um nível notável de diversidade genética nos genes estudados de parasitas circulantes na área de estudo. Os resultados desse estudo contribuirão em estudos futuros sobre a estrutura genética do parasita e o desenvolvimento de vacinas contra a malária.

Ocurrence enzootic hematuria in buffaloes in Brazil: epidemiological, clinical, and pathological aspects / Ocorrência de hematúria enzoótica em búfalos no Brasil: aspectos epidemiológicos, clínicos e patológicos

It is reported the occurrence of enzootic hematuria (EH) in buffaloes in Brazil after performing an epidemiological survey and clinicopathological analises. To date, EH caused by ingestion of Pteridium esculentum subsp. arachnoideum, a radiomimetic plant popularly known as "bracken fern", has not been described in this species in Brazil. Bovine EH is responsible for high economic losses in Brazil's Southeast Region not only because of the deaths it causes, but also owing to its negative effect on productivity. In São José do Barreiro County, São Paulo, some farmers in areas with a high incidence of bovine EH have been replacing cattle with buffaloes, based on the premise that the latter would be more resistant to poisoning by ingestion of Pteridium spp. However, even though initial observations indicated that buffaloes are indeed less sensitive than cattle to the toxic principle of Pteridium spp., cases of hematuria in this species have been reported. According to preliminary date, EH only occurs in buffaloes over six years of age. Macroscopic examination revealed a thickened urinary vesicle mucosa, along with multiple foci of ulcerated, exophytic, verrucous, and pedunculated lesions. In one of the buffaloes studied, the bladder wall was ruptured and exhibited marked secondary inflammation. Histologically, neoplastic and non-neoplastic changes similar to those described in cattle poisoned by Pteridium spp. were observed. The neoplasms found included papilloma, carcinoma in situ, urothelial carcinoma (low and high grade), inverted, microcystic, and trabecular variants, urothelial carcinoma with divergent differentiation (squamous and glandular), squamous cell carcinoma, lymphangioma, hemangioma, and hemangiosarcoma. There was also coexistence of epithelial and mesenchymal neoplasms. Bovine papillomavirus particles were not detected by polymerase chain reaction in the bladder samples analyzed.

Descreve-se, através de levantamento epidemiológico e avaliação clínico-patológica, a ocorrência de hematúria enzoótica (HE) em búfalos no Brasil. Essa condição, causada pela ingestão da planta radiomimética Pteridium esculentum subsp. arachnoideum, conhecida popularmente como "samambaia" ou "samambaia do campo", até então não havia sido descrita nessa espécie no Brasil. Na Região Sudeste, a HE bovina é responsável por elevadas perdas econômicas, devidas não apenas aos óbitos, mas também em função da queda de produtividade. No município de São José do Barreiro/SP, alguns produtores de áreas com alta incidência de HE bovina, vêm substituindo os bovinos por búfalos, com base na premissa de que estes seriam mais resistentes à intoxicação. Embora, de acordo com observações iniciais, os búfalos realmente sejam menos sensíveis que os bovinos ao princípio tóxico de Pteridium spp., ainda assim, tem-se verificado a ocorrência de casos de hematúria nessa espécie. De acordo com o levantamento inicial, a HE só ocorre em búfalos com idade a partir de seis anos. Ao exame macroscópico, verificou-se a mucosa da bexiga espessa, com múltiplos focos de lesões ulceradas, exofíticas, papiliformes, verrucosas, pedunculadas. Histologicamente, foram observadas alterações neoplásicas e não neoplásicas semelhantes às descritas nos bovinos com HE. Entre as neoplasias foram encontrados papiloma, carcinoma in situ, carcinoma urotelial (baixo e alto grau), variantes invertida, microcística e trabecular, carcinoma urotelial com diferenciação divergente (escamosa e glandular), carcinoma de células escamosas, linfangioma, hemangioma e hemangiossarcoma. Ocorreu também coexistência entre neoplasias epiteliais e mesenquimais. Não foram detectadas partículas de papilomavírus bovino pelo teste PCR nas amostras de bexiga analisadas.

PCR-RFLP Based genetic diversity of Plasmodium vivax genotypes in district Mardan, Pakistan / Diversidade genética baseada em PCR RFLP de genótipos de Plasmodium vivax no distrito de Mardan, Paquistão

Plasmodium vivax is the most common human malaria parasite in Asian countries including Pakistan. Present study was designed to explore the genetic diversity of plasmodium vivax genotypes based on Pvmsp-3α and Pvmsp-3βgenes using allelic specific nested PCR and RFLP assays markers from field isolates in district Mardan, Pakistan. Blood samples of 200 P. vivax malarial patients were collected after taking their written informed consent. Genetic diversity in nested PCR products was determined by Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) utilizing Alu1 and PstI restriction enzymes for alpha and beta gene products digestion, respectively. For analysis the genetic diversity of the sub allelic variants of Pvmsp3α and Pvmsp3β genes, Chi-Square test was performed by utilizing Minitab programming software 18. The P value 0.05 was considered as statistically significant. For Pvmsp 3α genes after gel electrophoresis of digested products, four distinct genotypes were obtained from total of 50 samples; type A: 35 (70%) (1.5-2.0 kb), 12 of type B (24%) (1.5-1.7 kb), 2 of type C (4%) (0.5-1.5) and one for type D (2%) (0.5-0.65 kb) which could be characterized into 9 allelic pattern (A1-A4, B1-B3, C1, D), in which A3 remained the most predominant. For Pvmsp-3βgenes, three distinct genotypes were obtained from 50 samples; 40(80%) of type A (1.5-2.5 kb), 9 (18%) of type B (1.0-1.5kb) and 1(2%) of type C (0.65 kb) which could be characterized into 6 allelic patterns (A1-A3, B1-B2, and C1). Most dominant one in Type A was A1 alleles which were noted (46%), while in Type B, the most dominant were B1 (10%).This study is the first ever report of molecular epidemiology and genetic variation in Pvmsp-3α and Pvmsp-3β genes of P. vivax isolates by using PCR/RFLP from District Mardan and [...].

O Plasmodium vivax é o parasita da malária humana mais comum nos países asiáticos, incluindo o Paquistão. O presente estudo foi desenhado para explorar a diversidade genética de genótipos de Plasmodium vivax baseados nos genes Pvmsp-3α e Pvmsp-3β, usando marcadores de ensaios alélicos nested PCR e RFLP de isolados de campo no distrito de Mardan, Paquistão. Amostras de sangue de 200 pacientes com malária por P. vivax foram coletadas após assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido. A diversidade genética em produtos de PCR nested foi determinada por polimorfismo de fragmento de restrição (RFLP) utilizando as enzimas de restrição Alu1 e PstI para a digestão dos produtos dos genes alfa e beta, respectivamente. Para análise da diversidade genética das variantes subalélicas dos genes Pvmsp3α e Pvmsp3β, o teste Qui-quadrado foi realizado utilizando o software de programação Minitab 18. O valor P = 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Para os genes Pvmsp 3α, após eletroforese em gel de produtos digeridos, quatro genótipos distintos foram obtidos de um total de 50 amostras; tipo A: 35 (70%) (1,5-2,0 kb), 12 do tipo B (24%) (1,5-1,7 kb), 2 do tipo C (4%) (0,5-1,5) e um para o tipo D (2%) (0,5-0,65 kb), que podem ser caracterizados em nove padrões alélicos (A1-A4, B1-B3, C1, D), em que A3 permaneceu como o mais predominante. Para Pvmsp-3βgenes, três genótipos distintos foram obtidos a partir de 50 amostras; 40 (80%) do tipo A (1,5-2,5 kb), 9 (18%) do tipo B (1,0-1,5 kb) e 1 (2%) do tipo C (0,65 kb), que podem ser caracterizados em seis padrões alélicos (A1-A3, B1-B2 e C1). Os mais dominantes no tipo A foram o alelo A1, observados em 46%, enquanto, no tipo B, os mais dominantes foram B1 (10%). Este estudo é o primeiro relato de epidemiologia molecular e variação genética em Pvmsp-3α. Os genes Pvmsp-3β de isolados de P. vivax utilizando PCR/RFLP do Distrito Mardan mostraram um nível notável de diversidade genética nos genes estudados [...].

PCR-RFLP Based genetic diversity of Plasmodium vivax genotypes in district Mardan, Pakistan / Diversidade genética baseada em PCR RFLP de genótipos de Plasmodium vivax no distrito de Mardan, Paquistão

Plasmodium vivax is the most common human malaria parasite in Asian countries including Pakistan. Present study was designed to explore the genetic diversity of plasmodium vivax genotypes based on Pvmsp-3α and Pvmsp-3βgenes using allelic specific nested PCR and RFLP assays markers from field isolates in district Mardan, Pakistan. Blood samples of 200 P. vivax malarial patients were collected after taking their written informed consent. Genetic diversity in nested PCR products was determined by Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) utilizing Alu1 and PstI restriction enzymes for alpha and beta gene products digestion, respectively. For analysis the genetic diversity of the sub allelic variants of Pvmsp3α and Pvmsp3β genes, Chi-Square test was performed by utilizing Minitab programming software 18. The P value 0.05 was considered as statistically significant. For Pvmsp 3α genes after gel electrophoresis of digested products, four distinct genotypes were obtained from total of 50 samples; type A: 35 (70%) (1.5-2.0 kb), 12 of type B (24%) (1.5-1.7 kb), 2 of type C (4%) (0.5-1.5) and one for type D (2%) (0.5-0.65 kb) which could be characterized into 9 allelic pattern (A1-A4, B1-B3, C1, D), in which A3 remained the most predominant. For Pvmsp-3βgenes, three distinct genotypes were obtained from 50 samples; 40(80%) of type A (1.5-2.5 kb), 9 (18%) of type B (1.0-1.5kb) and 1(2%) of type C (0.65 kb) which could be characterized into 6 allelic patterns (A1-A3, B1-B2, and C1). Most dominant one in Type A was A1 alleles which were noted (46%), while in Type B, the most dominant were B1 (10%).This study is the first ever report of molecular epidemiology and genetic variation in Pvmsp-3α and Pvmsp-3β genes of P. vivax isolates by using PCR/RFLP from District Mardan and [...].(AU)

O Plasmodium vivax é o parasita da malária humana mais comum nos países asiáticos, incluindo o Paquistão. O presente estudo foi desenhado para explorar a diversidade genética de genótipos de Plasmodium vivax baseados nos genes Pvmsp-3α e Pvmsp-3β, usando marcadores de ensaios alélicos nested PCR e RFLP de isolados de campo no distrito de Mardan, Paquistão. Amostras de sangue de 200 pacientes com malária por P. vivax foram coletadas após assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido. A diversidade genética em produtos de PCR nested foi determinada por polimorfismo de fragmento de restrição (RFLP) utilizando as enzimas de restrição Alu1 e PstI para a digestão dos produtos dos genes alfa e beta, respectivamente. Para análise da diversidade genética das variantes subalélicas dos genes Pvmsp3α e Pvmsp3β, o teste Qui-quadrado foi realizado utilizando o software de programação Minitab 18. O valor P = 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Para os genes Pvmsp 3α, após eletroforese em gel de produtos digeridos, quatro genótipos distintos foram obtidos de um total de 50 amostras; tipo A: 35 (70%) (1,5-2,0 kb), 12 do tipo B (24%) (1,5-1,7 kb), 2 do tipo C (4%) (0,5-1,5) e um para o tipo D (2%) (0,5-0,65 kb), que podem ser caracterizados em nove padrões alélicos (A1-A4, B1-B3, C1, D), em que A3 permaneceu como o mais predominante. Para Pvmsp-3βgenes, três genótipos distintos foram obtidos a partir de 50 amostras; 40 (80%) do tipo A (1,5-2,5 kb), 9 (18%) do tipo B (1,0-1,5 kb) e 1 (2%) do tipo C (0,65 kb), que podem ser caracterizados em seis padrões alélicos (A1-A3, B1-B2 e C1). Os mais dominantes no tipo A foram o alelo A1, observados em 46%, enquanto, no tipo B, os mais dominantes foram B1 (10%). Este estudo é o primeiro relato de epidemiologia molecular e variação genética em Pvmsp-3α. Os genes Pvmsp-3β de isolados de P. vivax utilizando PCR/RFLP do Distrito Mardan mostraram um nível notável de diversidade genética nos genes estudados [...].(AU)

Genética em gatos: O que eu preciso saber antes de acasalar? / Genetics in Cats: What I need to know before breeding?

O gato doméstico foi o segundo carnívoro a passar pelo processo de domesticação. Este evento foi um marco muito importante para os gatos, mas também houve grande impacto para nossa sociedade, pois os gatos auxiliaram fortemente no controle de roedores. Após uma longa interação entre humanos e gatos, a seleção artificial para formação de raças e fenótipos de interesse gerou um aumento de acasalamentos entre indivíduos aparentados, e consequentemente, aumento de variantes deletérias nos gatos modernos. Atualmente, pesquisa e dados genômicos permitem a avaliação e detecção destas variantes, de modo a auxiliar a reprodução e saúde dos gatos domésticos.

The domestic cat was the second carnivore to go through the domestication process. This event was a very important milestone for cats, but it also had a great impact on our society, as cats strongly helped in rodent control. After a long interaction between humans and cats, artificial selection to form breeds and phenotypes of interest generated an increase in matings among related individuals, and consequently, an increase in deleterious variants in modern cats. Currently, research and genomic data allow the evaluation and detection of these variants, in order to help the reproduction and health of domestic felines.

Fluorescent polarization assay, two versions of indirect and competitive enzyme- linked immunoassay for brucellosis diagnosis in vaccinated buffaloes (Bubalus bubalis) / Teste de polarização fluorescente, duas versões de imunoensaio enzimático indireto e imunoensaio competitivo para diagnóstico de brucelose em búfalos vacinados (Bubalus bubalis)

ABSTRACT: The fluorescence polarization assay (FPA), two variants (V) of the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (I-ELISA) and the competitive enzyme-linked immunosorbent assay (C-ELISA) were evaluated in buffaloes to detect antibodies against Brucella spp. The V1 of I-ELISA identifies them through the monoclonal (M23) anti-bovine IgG (I-ELISAM23) and the V2 through the ProteinA / G (I-ELISA-A/G). Serum samples of 862 buffaloes (Bubalus bubalis) from the Northeast of Argentina (NEA) were analyzed using the complement fixation test (CFT) as the reference. Receiving Operator Characteristic (ROC) analysis defined for the area under the curve (AUC) determined the cutoff points, sensitivity (Se) and specificity (Sp) for each test. CFT identified 107 positive and 755 negative sera. The best AUC (0.986), Concordance with CFT (96.3%) and kappa value (0.843) was obtained by I-ELISA A/G test. This assay showed the highest Se (95.33%) and C-ELISA the highest Sp (97%). FPA failed to measure the antibodies in 23 (2.65%) serum samples due to unsuccessful reading. I-ELISA M23 proved to be ineffective to diagnose brucellosis in bubaline sera. The four serological tests showed cutoff points lower than those standardized for bovines. As conclusion, I-ELISA A/G, C-ELISA and FPA with its limitations would be effective techniques for the diagnosis of brucellosis in buffaloes in the NEA, requiring an appropriate cut-off point to guarantee their maximum performance in this species.

RESUMO: O ensaio de polarização de fluorescência (FPA), duas variantes (V) do ensaio imunoenzimático indireto (I-ELISA) e o ensaio imunoenzimático competitivo (C-ELISA), foram avaliados em búfalos para detectar anticorpos contra Brucella spp. O V1 do I-ELISA os identifica através do IgG monoclonal (M23) anti-bovino (I-ELISAM23) e o V2 ​​através da Proteína A / G (I-ELISA-A / G). Amostras de soro de 862 búfalos (Bubalus bubalis) do Nordeste da Argentina (NEA) foram analisadas usando o teste de fixação do complemento (CFT) como referência. A análise Receiving Operator Characteristic (ROC) definida pela área sob a curva (AUC) determinou os pontos de corte, sensibilidade (Se) e especificidade (Sp) de cada teste. A CFT identificou 107 soros positivos e 755 soros negativos. Os melhores valores de AUC (0.986), concordância com CFT (96.3%) e kappa (0.843) foram obtidos pelo teste I-ELISA A / G. Este ensaio mostrou a maior Se (95.33%) e C-ELISA a maior Sp (97%). O FPA falhou em medir os anticorpos em 23 (2,65%) amostras de soro devido à falha na leitura. O I-ELISA M23 provou ser ineficaz para o diagnóstico de brucelose em soros bubalinos. Os quatro testes sorológicos mostraram pontos de corte inferiores aos padronizados para bovinos. Em conclusão, I-ELISA A / G, C-ELISA e FPA com suas limitações seriam técnicas eficazes para o diagnóstico de brucelose em búfalos no NEA, exigindo um ponto de corte adequado para garantir seu desempenho máximo nesta espécie.

Computational classification of animals for a highway detection system / Classificação computacional de animais para sistema de detecção nas rodovias

Vehicle-animal collisions represent a serious problem in roadway infrastructure. To avoid these roadway collisions, different mitigation systems have been applied in various regions of the world. In this article, a system for detecting animals on highways is presented using computer vision and machine learning algorithms. The models were trained to classify two groups of animals: capybaras and donkeys. Two variants of the convolutional neural network called Yolo (You only look once) were used, Yolov4 and Yolov4-tiny (a lighter version of the network). The training was carried out using pre-trained models. Detection tests were performed on 147 images. The accuracy results obtained were 84.87% and 79.87% for Yolov4 and Yolov4-tiny, respectively. The proposed system has the potential to improve road safety by reducing or preventing accidents with animals.(AU)

As colisões entre veículos e animais representam um sério problema na infraestrutura rodoviária. Para evitar tais acidentes, medidas mitigatórias têm sido aplicadas em diferentes regiões do mundo. Neste projeto é apresentado um sistema de detecção de animais em rodovias utilizando visão computacional e algoritmo de aprendizado de máquina. Os modelos foram treinados para classificar dois grupos de animais: capivaras e equídeos. Foram utilizadas duas variantes da rede neural convolucional chamada Yolo (você só vê uma vez) ­ Yolov4 e Yolov4-tiny (versão mais leve da rede) ­ e o treinamento foi realizado a partir de modelos pré-treinados. Testes de detecção foram realizados em 147 imagens e os resultados de precisão obtidos foram de 84,87% e 79,87% para Yolov4 e Yolov4-tiny, respectivamente. O sistema proposto tem o potencial de melhorar a segurança rodoviária reduzindo ou prevenindo acidentes com animais.(AU)

Computational classification of animals for a highway detection system / Classificação computacional de animais para sistema de detecção nas rodovias

Vehicle-animal collisions represent a serious problem in roadway infrastructure. To avoid these roadway collisions, different mitigation systems have been applied in various regions of the world. In this article, a system for detecting animals on highways is presented using computer vision and machine learning algorithms. The models were trained to classify two groups of animals: capybaras and donkeys. Two variants of the convolutional neural network called Yolo (You only look once) were used, Yolov4 and Yolov4-tiny (a lighter version of the network). The training was carried out using pre-trained models. Detection tests were performed on 147 images. The accuracy results obtained were 84.87% and 79.87% for Yolov4 and Yolov4-tiny, respectively. The proposed system has the potential to improve road safety by reducing or preventing accidents with animals.(AU)

As colisões entre veículos e animais representam um sério problema na infraestrutura rodoviária. Para evitar tais acidentes, medidas mitigatórias têm sido aplicadas em diferentes regiões do mundo. Neste projeto é apresentado um sistema de detecção de animais em rodovias utilizando visão computacional e algoritmo de aprendizado de máquina. Os modelos foram treinados para classificar dois grupos de animais: capivaras e equídeos. Foram utilizadas duas variantes da rede neural convolucional chamada Yolo (você só vê uma vez) ­ Yolov4 e Yolov4-tiny (versão mais leve da rede) ­ e o treinamento foi realizado a partir de modelos pré-treinados. Testes de detecção foram realizados em 147 imagens e os resultados de precisão obtidos foram de 84,87% e 79,87% para Yolov4 e Yolov4-tiny, respectivamente. O sistema proposto tem o potencial de melhorar a segurança rodoviária reduzindo ou prevenindo acidentes com animais.(AU)